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1 :79;9#97#;$)27$&, 葡萄糖 磷酸异构酶水平测定与类风湿关节炎早期诊断 徐 婧 刘 婧 朱 雷 张学武 栗占国 论著 北京大学人民医院风湿免疫科 风湿病机制及免疫诊断北京市重点实验室 北大清华生命科学联合中心 北京 北京大学国际医院风湿免疫科 北京 摘 要 目的 探索葡萄糖 磷酸异构酶 ),$!&'$!'&!$(&%!&:19 水平测定对于日常门诊中类风湿关节炎 %&($ %%! 早期诊断的意义 及其与 疾病活动度的相关性 方法 选择 年至 年北京大学人民医院风湿免疫科门诊中有多关节肿痛表现的关节炎患者 例 选取健康人 例作为对照 9 法检测其血清 :19 水平 根据临床特点及辅助检查 符合类风湿关节炎分类标准的 患者 例 其余患者包括骨关节炎 $!&$%%! 6 患者 例 血清阴性脊柱关节病!&%$"&<&!' "&$"!&!& ' 患者 例 系统性红斑狼疮!*!&(,)'!&%*&($!! 患者 例 原发性干燥综合征 '%(%*H%&"!*"%$(& ' 患者 例 痛风 $%%!: 患者 例 其他结缔组织病 包括风湿性多肌痛 皮肌炎 系统性硬化症 成人 ) 病等 患者 例 其他疾病 包括骨质疏松 股骨头坏死 骨髓炎 外伤所致骨和关节疾病 幼年类风湿关节炎 肿瘤等 患者 例 评估 :19 的诊断价值 分析 :19 阳性与阴性组 患者在临床特点 疾病活动性 严重程度及炎性指标的差别 结果 患者中血清 :19 的阳性率达 3 而其他自身免疫病为 3 健康对照组为 23E 相较于 6 及 ' 患者 患者组滴度显著升高 差异具有统计学意义 E 单独应用 :19 诊断 的最佳界值为 ( 敏感性 3 特异性 23 0 阴性患者中 :19 阳性率为 3 抗环瓜氨酸肽,*,),,% )"& '&'& ##1 抗体阴性患者中 :19 阳性率 3 0 和抗 ##1 抗体双阴性患者中 :19 阳性率为 3 :19 水平与 0 抗 ##1 抗体及 09: 滴度呈正相关 E 结论 :19 在 患者中有较高的敏感性 抗 ##1 抗体和 或 0 阴性患者中 :19 阳性对 有一定的诊断意义 :19 滴度与 的疾病活动度可能有关 关键词 关节炎 类风湿 自身抗体 葡萄糖 磷酸异构酶 中图分类号 文献标志码 文章编号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基金项目 国家自然科学基金 22 和北京市自然科学基金 资助 ''$%& *&7$")7%),&",& 0$"$" $/# " 22 " &"7%),&,&0$"$" #$%&!'$" "&%!&() )+(&," 网络出版时间 网络出版地址 ' ---,". "&.,(!&)()

2 徐 婧 等 葡萄糖 磷酸异构酶水平测定与类风湿关节炎早期诊断!&%(:19" &'&"!- -!3,$"%!"$$&%$(("&!&!&!3 " &)*,$"%$)!23E#$('%& - &6" ''&"! &%$' -!",%&!& ($%&!" /,")* " & /&%&",&-!!!,)*!" /," E& "$!, <)&$/:19)$"&/$%-! ( &!&"!<*-!3 "!'&,/,*-!23& '$!<&%&$/:19" 0"&<&'&"!-!3 &'$!<&%&$/:19" "##1"$* "&<&'&"!-!3 &'$!<&%&$/:19" 0" "##1"$*"&<&'&"!-! 3&)&<&)$/:19 '$!<&,$%&)$" E - 0 "##1"$*" 09:,"$&" :19!!&"!<& " &'&"!- :19'$!<&!('$%"" & "$!!$/- "##1"$*" $%0"&<&'&"!&&%$/:19!%&)& -!&!&, <*$/ 01- %%! %&($ $"$ &! :),$!&'$!'&!$(&%!& 葡萄糖 磷酸异构酶 ),$!&'$!'&!$(&%!&:19 是一种相对分子质量为 的多功能蛋白质 亦可称为磷酸己糖异构酶或磷酸葡萄糖异构酶 :19 由 细胞分泌 它除了酶活性外还具有细胞因子及生长因子样活性 其存在于各种细胞的细胞外液及细胞质 尤其是关节腔内 特别是软骨表面 近年来人们逐渐认识到 :19 可作为自身抗原与自身免疫病尤其是类风湿关节炎 %&( $ %%! 密切相关 早期即可产生不可逆的骨侵蚀和关节破坏 甚至多系统均可累及 因此 的早期诊断及规范化治疗极为重要 本研究针对 :19 在 中的临床意义做了研究调查 通过更特异的酶联免疫吸附测定检测大样本血清中 :19 水平 并进行非干预性回顾分析 探讨 患者血清中 :19 水平与临床和实验室指标的相关性 为 临床诊疗提供指导 资料与方法 病例资料选择 年至 年北京大学人民医院门诊或住院存在关节肿痛表现的关节炎患者病历资料 根据 2 年美国风湿病学会 (&%," #$)&&$/ &($)$*# 或 年 # 分类标准确诊 年国际脊柱关节炎评价工作组 &!&!(&"" '$"*)$%%!9"&%"$")$,&* 分类标准确诊血清阴性脊柱关节病!&%$"&<&!' "&$"!&!&'2 年修订的 纽约分类标准确诊 年 #6!&$% %! 分类标准确诊骨关节炎 $!&$%%! 6 年或 年 # 修订的分类标准确诊系统性红斑狼疮!*!&(,)'!&%*&($!! 干燥综合征国际分类标准确诊原发性干燥综合征 '% (%*H%&"!*"%$(& ' 年 # 分类标准或 2 年 $)(&! 标准确诊痛风 $%%! :2 年 # 分类标准确诊儿童类风湿关节炎 <&" )&%&($ %%!5 回顾性分析 :19 水平及临床 实验室特点 入组患者包括 例 患者 平均年龄为 C 岁 平均病程为 C 年 其余有关节肿痛表现的 例脊柱关节炎患者 例系统性红斑狼疮患者 例原发性干燥综合征患者 例痛风性关节炎 :$*%%!: 患者 例儿童类风湿关节炎 <&" )&%&($ %%! 5 患者 例其他结缔组织病,$""&,<&!&!&!&!# 包括 7# 相关小血管炎 7#!!$,&!*!&(,<!,)! ; 风湿性多肌痛 '$)*(*)%&(,1= 皮肌炎 &%($(*$!!= 系统性硬化!*!&(,!,)&%$!!, 成人型 ) 病 )$"!&$/)!!&!&6 混合性结缔组织病 (?&,$""&,<&!&!&!& =# 炎症性肠病 "/)(($%*$-&)!&!& 9 及自身免疫性肝病 $(("&)<&%!&!& 9 患者 例骨关节炎患者 例骨质疏松症 $!&$'$%$!!61 患者 例其他骨和关节疾病 $"&" $"!&!&5 包括股骨头坏死 骨髓炎 软骨损伤 骨先天性发育不良 骨折 患者 例心血管疾病,% $<!,)%!&!& #; 患者 例慢性肺病,%$",')($"%*!&!&#1 患者 例神经系统疾病 "&%$'* 患者 例恶性肿瘤 ()""($% 患者 2 例感染性疾病 "/&,$!!&!&!9 患者 例代谢综合征 (&$),!*" %$(&= 患者血清标本作为疾病对照 留取 例健康人血清作为健康对照 &)*,$"%$)!# 本研究开始前经北京大学人民医院伦理委员会审查批准 研究方法 实验室指标 血沉 &%*%$,*&!& (&" $" %& 魏式法检测 (( 为异常 # 反应蛋白 #%&,<&'%$&"#1 免疫比浊法检测 ( 为异常 类风湿因子 %&($ /,$%!0 免疫比浊法检测 9( 判定为阳性 9: 类风湿因子 09: 采用 9 试剂

3 :79;9#97#;$)27$&, 盒 上海德波生物技术有限公司 定量法检测 9( 判定为阳性 抗环瓜氨酸肽,*,),,% )" & '&'&##1 抗体 采用第二代 9 试剂盒 德国欧蒙医学实验诊断股份公司 定量法检测 ( 判定为阳性 抗角蛋白抗体 ".&%" "$*8 和抗核周因子抗体 "'&%",)&% '%$&"10 间接免疫荧光法检测 滴度 判定为阳性 抗核抗体 间接免疫荧光法检测 滴度 时判定为阳性 球蛋白 )$)" 醋酸纤维素薄膜电泳法 3 时判定为异常 免疫球蛋白 9:9=9 采用美国 &,.(" #$)&% 有限公司蛋白分析仪测定 葡萄糖 磷酸异构酶测定 血清 :19 水平检测应用商品化的 9 试剂盒 上海北加生化试剂有限公司 ( 判定为阳性 按试剂说明书进行操作 孔聚苯乙烯微孔板应用抗 :19 抗体包被 将血清标本加到酶标板中 孵育 洗板后将酶标抗体加入板中 孵育 洗板后加入底物显色液孵育 (" 反应结束后应用终止液终止反应 酶标仪检测 波长 "( 统计学分析采用 1 软件 数据根据情况以均数 C 标准差 中位数和四分位数及百分数形式表达 计数资料组间比较采用 1&%!$"! 卡方检验 对于正态分布的计量资料 两组组间比较采用 检验 多组组间比较采用方差分析及多重比较 对于非正态分布的计量资料 或有序分类资料的组间比较采用独立样本 ="" "&* 检验或 8%!.))! 秩和检验 两变量间的相关性分析采用 '&%(" 等级相关分析法 E 认为差异有统计学意义 统计学意义 E 相较于 6 及 ' 患者 组滴度升高更为显著 差异具有统计学意义 E 提示对 诊断可能有一定帮助 图 不同分组患者中 :19 阳性率差别应用卡方检验比较不同分组患者血清 :19 阳性率分布 组 有关节肿痛表现的其他疾病组及健康组 :19 阳性率有差异 其中 患者阳性率最高 其他疾病组其次 健康人最低 其差异具有统计学意义 E 图 同样方法比较 ': 6619 和其他疾病组患者 :19 阳性率 差异具有统计学意义 E 图 %&($ %%! '!'$"*)$%%! : $%%! 6 $!&$%%! 61 $!&$'$%$!! 9 "/)(($%*%%! # &)*,$"%$)! 图 分组后各组血清 :19 浓度!&%$' $/!&%(:19,$",&"%$" 结果 患者血清 :19 滴度升高通过 9 法检测以下血清 :19 浓度 包括 ': 其他炎性关节炎 包括 ' 其他结缔组织病等 661 其他关节疾病 包括其他骨关节疾病 其他非骨关节疾病等 及健康人 血清 :19 滴度分别为 ( 应用 8%!.))! 检验比较各组患者 :19 水平 发现各组间 :19 水平不同 差异具有统计学意义 E 应用 7&(&"* 法进行组间多重比较 组 :19 滴度显著高于其他各疾病组及健康人 差异具有 :19 ),$!&'$!'&!$(&%!& %&($ %%! 7 "$"!&!& '!'$"*)$%%! : $%%! 6 $!&$ %%! 61 $!&$'$%$!! 9 "/)(($%*%%! # &)*,$" %$)!7 " &)&/%&/&%!$$&%!&!&!-!-&)"'&%/$%(",& "$%&($ %%!9 " &%",) " ' " $&% #'&"! $&%! ",)&,%,)$" %&!' %$" (&$)!( "&% <$!!*!&(!&!&!,%$", "/&,$" " ($% 图 分组后各组血清 :19 阳性率!&%$' $/!&%(:19,$",&"%$" :19 的诊断意义为探讨 :19 在 诊断中的价值 将上述大样本做 6# 曲线分析 图 血清 :19 诊断 的最佳诊断界值,$/ 为 ( 曲线下面积 3 置信区间 4 单独应用诊断敏感性 3 特异性 23

4 徐 婧 等 葡萄糖 磷酸异构酶水平测定与类风湿关节炎早期诊断 :19 对 患者的补充诊断意义为明确 :19 在 补充诊断中的意义 检测了 例 患者血清 0##1:19 发现 例患者 0 阴性 0 阴性患者中 :19 阳性率为 32 例患者抗 ##1 抗体阴性 抗 ##1 阴性患者中 :19 阳性率 3 例患者 0 和抗 ##1 阴性 双阴性患者中 :19 阳性率为 3 表 提示 :19 与其他自身抗体联合检测有助于 的诊断 & ",&",&$/)&!&,)",)!*('$(!-&%&!" /,&")* &% " $/:19"&<&%$'! 图 :19 与 患者临床表现的关系!:19" '&"!-,)",)(" /&!$"! 表 $!, 回归分析 +%$!,%&%&!$" ")*!!!. /,$%! +3)* 5$"&/$%(* 2 图 6# 曲线分析!6#,%<&")*!! 表 :19 在 联合诊断中的意义 +%:19" &$" "$!!$/!" /,",& 9&(! 0"&<& ##1"&<&0##1"&<& :19'$!<&"(&% 2 :19'$!<&%&3 D 患者血清 :19 与关节畸形 血管炎等临床表现相关 患者血清 :19 水平明显高于其他风湿病及健康对照组 为探讨 :19 是否和 临床表现相关 将 患者分为 :19 阳性组和 :19 阴性组 比较两组间临床特点 并进行非参数检验 :19 阳性的 患者畸形关节数高于阴性组 关节畸形发生率高于阴性组 且皮下结节 淋巴结肿大 血管炎等关节外表现的发生率高于阴性组 E 而晨僵 关节疼痛 关节肿胀 合并肺间质病变及合并其他自身免疫病等发生率 差异无统计学意义 图 为了进一步探究 患者出现 :19 阳性结果的独立影响因素 采用 $!, 回归分析 发生关节畸形 + 4 及血管炎 + 42 会影响 :19 阳性率 并使其更高 而关节肿胀 关节疼痛 合并肺间质纤维化及较高的 #109 球蛋白和 09: 水平并非 患者 :19 阳性的独立影响因素 表 ;!,)! 2 患者血清 :19 与疾病活动指标及多种自身抗体相关血清 :19 阳性组 患者 9009: 球蛋白均明显升高 E 血清 :19 与 无关 表 相关性分析显示 :19 水平与 0 抗 ##1 抗体及 09: 滴度正相关 E 图 #)",) (" /&!$" 表 患者血清 :19 与多种实验室指标相关 +%'&"!&%(:19!$,& - <%&*$/)$%$%*'%(&&%! :1) (& " (" (? :1) (& " (" (? 9 D 0 09: D D )$)" 2 2 D 讨论 的早期诊断 早期治疗对于延缓骨关节破坏至关重要 目前 在临床的误诊率据统计可达 到 3 抗体阴性的 患者占 3 左右 尚需新的诊断生物标志物指导临床诊疗 本研究发现 3 的 患者 :19 阳性 阳性率显著高于有关节肿痛表现的非 疾病组及健康对照组 且 患者血清 :19 滴度显著高于健康人

5 :79;9#97#;$)27$&, 而如 '69 等其他各组疾病患者 :19 水平与 健康人相当 这一结果与,)&% 等最早的报道结果类似 提示 :19 可能在 的病理过程中起作 用 具有一定的诊断价值 也有助于鉴别 6 及 ' 等疾病 而本研究 :19 阳性率高于国内报道水平 2 这可能与阳性界值选取不同有关 "##1 # 0 09: 图 :19 滴度与多种炎症指标 自身抗体相关性!:19&%- <%&*$/"/)(($%*(%.&%! $"$*,$%&)$" 进行 6# 曲线分析显示 :19 独立诊断 的敏感性 3 特异性 23 其特异性结果与国 内报道结果类似 而敏感性略低 可能与入组患者标准及样本量不同相关 本研究还发现 在 0 阴性 抗 ##1 阴性及双阴性的 患者中 :19 也有较高的阳性率 这进一步说明 :19 对 有一定的诊断及补充诊断价值 可作为联合诊断指标应用于临床 但本研究仅对于 0 抗 ##1 抗体阴性的 患者进行了联合诊断意义的研究 未来可进一步明确其与抗角蛋白抗体 抗核周因子抗体 抗波形蛋白抗体等 特异性抗体联合诊断中的意义 探索多种自身抗体联合检测可能提高 诊断的敏感性及特异性 本研究在较大样本量下进行单因素及多因素分析 发现血清 :19 和皮下结节 血管炎 淋巴结肿大 畸形关节数及手平片分期相关 与多种自身抗体及急性时相反应物 如 0"##1#1 和血小板计数等 显著相关 但与患者的年龄 病程 肿胀关节数 疼痛关节数等指标无相关性 这些结果 提示 :19 可能与关节外表现相关 并能反映 的骨破坏严重程度及疾病活动度 等研究发现 :19 可能调节基质金属蛋白酶 使 患者内皮细胞及滑膜细胞表达上述酶增加 从而导致骨破坏 :19 与 0 及抗 ##1 部分重叠 提示 患者 :19 的出现可能与 9: 的变性和瓜氨酸化有关 综上所述 :19 在 患者中阳性率高 患者血清 :19 滴度高于其他疾病患者 可能反映 的疾病严重程度及活动度 在 的联合诊断及病情评估中可作为重要的生物标记物 参考文献 =!($$9 =,,$" = &&= &)$-"$ $!,*$')!(,&">*(&(*'%$<$.&$"!'&,/,$( ("&!&!&579(("$) 王友莲 尚可 刘燕鸣 等 :19 抗原及抗 ##1 抗体对类风湿关节炎诊断研究 5 江西医药 栗占国 类风湿关节炎在我国的低认知度和高致残率不容忽视 5 中华医学杂志 :%&"&% 1)!,.& 8&)"&% &)!$,$" $/",*,),,% )"& '&'&"$ &! ",% )"&"$ &!" 9= " 9%&($ /,$%!-!&%$)$,)'%(&&%!$/! &!&,<* " %&($ %%! 5"" 7,, &! 8%!)".!%*1%&,<&<)&$/"$ &!$,*,),,% )"& '&'&" '&"!- &%)*%%!5#)" &($) )&?&*;#%$< &" 8 &)=,%$7! " %&($ %%! )&%& &?'%&!$" " "$!,'$&")5$( (" *&<&-!,)&%= %$" >&)5$"$ &!$:19" %& ($ %%! )".&&-&&" " " ()($&)" ("!&!&579(("$) 2 2 鲍春德 叶萍 陈晓翔 等 血清中 磷酸葡萄糖异构酶抗原升高在类风湿关节炎中的意义探讨 5 中华风湿病学杂志 张炯 邹和建 陈宇明 等 抗环瓜氨酸肽抗体和葡萄糖 磷酸 异构酶抗原对类风湿关节炎诊断价值的比较 5 中华风湿病学杂志 2 董建玲 杨南萍 张杰 等 葡萄糖 磷酸异构酶抗原对类风湿关节炎诊断的意义 5 中华风湿病学杂志 赵冠飞 齐福华 王清涛 等 葡萄糖 磷酸异构酶在诊断类风湿关节炎中的意义 5 中华检验医学杂志 <" :)&" 0 $&! >&)5 &)!$,$" $/ $"$ &!$),$!&'$!'&!$(&%!&- &?%%,)%,$('),$"!" %&($ %%!5%%!&( *! =!($$9 =%. &)#)",),%,&%!,! $/"),$!&'$!'&!$(&%!&"$*'$!<&5'"&!& '&"!- %&($ %%!5=$ &($) 2 0 $= &&5 &)9",$" $/&'$(,&)!( %$" * '$!'$),$!&!$(&%!&$,%"& ($)* /,$% %$ &'%&)$" $/(%?(&)$'%$&"!& 5$,&($'*!&!#$((" 2 收稿 本文编辑 王 蕾

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