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- 豌尼 宫
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1 3 3 抗 核 抗 体 荧 光 模 型 与 特 异 性 自 身 抗 体 关 系 # 研 究 武 永 康, 杨 滨, 黄 卓 春, 彭 晓 东, 胡 静, 王 兰 兰 ( 四 川 大 学 华 西 医 院 实 验 医 学 科, 成 都 6) 摘 要 : 目 的 : 探 讨 抗 核 抗 体 (ANA) 荧 光 模 型 与 特 异 性 自 身 抗 体 之 间 的 关 系, 为 临 床 医 生 检 验 申 请 与 检 验 工 作 者 报 告 审 核 提 供 实 验 依 据 方 法 : 检 测 例 ANA 及 8 种 特 异 自 身 抗 体 ( 包 括 抗 dsdna RNP Sm SSa/Ro6 SSb Scl-7 Jo- 和 rib-p),ana 采 用 HEp- 细 胞 为 底 物 的 间 接 免 疫 荧 光 法 (IFA) 检 测, 抗 dsdna 采 用 绿 绳 短 膜 虫 为 底 物 的 IFA, 另 7 种 自 身 抗 体 采 用 纯 化 抗 原 的 免 疫 条 带 法 检 测 结 果 : 颗 粒 型 均 质 型 胞 浆 型 及 复 合 荧 光 模 型 时 上 述 8 种 自 身 抗 体 均 可 出 现 阳 性, 而 核 仁 型 着 丝 点 型 高 尔 基 体 型 核 点 型 周 边 型 肌 动 蛋 白 型 原 肌 球 蛋 白 型 抗 增 殖 细 胞 核 抗 原 型 (PCNA) 波 形 蛋 白 型 8 种 抗 体 阳 性 率 较 低 ; 单 纯 抗 dsdna 阳 性 时 包 含 均 质 型 的 荧 光 模 型 高 达 77.%, 单 纯 抗 RNP 单 纯 抗 SSa 单 纯 抗 Sm 时 包 含 颗 粒 型 的 荧 光 模 型 分 别 为 6.8%,.% 和 7.%, 单 纯 抗 SCL-7 阳 性 以 均 质 型 与 核 仁 型 两 种 复 合 荧 光 模 型 为 主 达 3.3%; 抗 rib-p 和 Jo- 阳 性 时 包 含 胞 浆 型 的 荧 光 模 型 分 别 为.% 和 6.%, 单 纯 抗 SSb 抗 体 阳 性 ANA 可 疑 达 6.% 结 论 :ANA 荧 光 模 型 与 特 异 性 自 身 抗 体 之 间 具 有 相 关 关 系, 核 仁 型 着 丝 点 型 高 尔 基 体 型 核 点 型 周 边 型 肌 动 蛋 白 型 原 肌 球 蛋 白 型 PCNA 型 波 形 蛋 白 型 荧 光 模 型 时 8 种 抗 体 常 为 阴 性, 没 必 要 申 请 检 测 ; 而 颗 粒 型 均 质 型 胞 浆 型 及 复 合 型 荧 光 模 型 时 需 进 行 特 异 性 抗 体 检 测 ; 抗 dsdna 主 要 对 应 均 质 型, 抗 RNP 抗 SSa 抗 Sm 主 要 对 应 颗 粒 型, 抗 SCL-7 主 要 对 应 均 质 与 核 仁 的 复 合 模 型, 抗 rib-p 和 抗 Jo- 主 要 对 应 胞 浆 型, 单 纯 抗 SSb 抗 体 对 应 ANA 为 可 疑, 其 临 床 价 值 需 进 一 步 探 讨 关 键 词 : 风 湿 病 ; 抗 核 抗 体 ; 自 身 抗 体 ; 对 比 研 究 中 图 分 类 号 :R3. Analysis of relationship between fluorescence pattern of antinuclear antibody and specific autoantibodies WU Yongkang, YANG Bing, HUANG Zhuochun, PENG Xiaodong, HU Jing, WANG Lanlan (Department of Laboratory Medicine, West China Hospital affiliated Sichuan University, ChengDu 6) Abstract: Objective: To investigate the relationship between antinuclear antibody (ANA)fluorescence pattern and different autoantibodies and provide experimental basis for further test application and report check. Methods: A retrospective analysis carried out for patient tested for ANA and other autoantibodies (including anti-dsdna,rnp, Sm, SSa/Ro6, SSb, Scl-7, Jo- and rib-p).ana was detected by indirect immunity fluorescence assay(ifa) using HEp- cells as antigen substrate and anti-dsdna done by same method using crithidia luciliae substrate, the other 7 autoantibodies done by enzyme immunospot with purified antigen. Results: total of 8 autoantibodies can present in granular, homogeneous,cytoplasm and mix pattern, But rarely in nucleolus,centromere, Golgi, dots, peripheral, actin, actotropomyosin, PCNA and vementin pattern; Anti-dsDNA was mainly present in homogeneous or mix with homogeneous pattern(77.%); anti-rnp or SSa or Sm was mainly present in granular or mix with granular pattern(6.8%,.%, 7.% respectively); Homogeneous and nucleolus mix pattern to 3.3% in only anti-scl-7 positive; Cytoplasm or including cytoplasm mix pattern were.%, 6.% respectively in only anti-rib-p or Jo- positive. But borderline ANA result were up to ** 基 金 项 目 : 校 青 基 金 (83); 国 家 自 然 基 金 (83); 四 川 省 科 技 厅 基 金 (SZ) 作 者 简 介 : 武 永 康,(7-), 男, 副 主 任 技 师, 主 要 研 究 方 向 : 自 身 免 疫 性 疾 病 发 病 机 制 研 究 通 信 联 系 人 : 王 兰 兰,(3-), 女, 主 任 技 师, 主 要 研 究 方 向 : 自 身 免 疫 性 疾 病 发 病 机 制 研 究 vipwllhx@63.com - -
2 6 6 6.% in only anti-ssb positive. Conclusion: Relevant relationship was found between ANA pattern and special autoantibodies.no necessary is needed for further 8 autoantibody testing if ANA pattern are nucleolus,centromere, Golgi, dots, peripheral, actin, actotropomyosin, PCNA and vementin, but granular, homogeneous, cytoplasm and mix pattern were needed.anti-dsdna largely correspond to corresponding homogeneous pattern; anti-rnp, anti-ssa and anti-sm correspond to granular; anti-scl-7 correspond to homogeneous and nucleolus mix pattern; anti-rib-p and anti-jo- correspond to cytoplasm pattern; but for anti-ssb correspond to borderline, it needs to further study. Keywords: rheumatic disease; antinuclear antibodies; autoantibodies; comparative study 引 言 抗 核 抗 体 (antinuclear antibody,ana) 检 测 是 指 针 对 包 括 抗 核 酸 和 核 蛋 白 抗 体 的 总 称, 靶 抗 原 包 括 细 胞 核 细 胞 浆 细 胞 骨 架 细 胞 分 裂 周 期 蛋 白 等 细 胞 内 所 有 抗 原 成 分 目 前 ANA 通 常 是 以 HEp- 细 胞 为 底 物 的 间 接 免 疫 荧 光 法 作 为 检 测 ANA 的 筛 选 性 试 验, 而 对 ANA 阳 性 者 需 进 一 步 检 测 各 亚 类 ANA 抗 体, 目 前 临 床 常 规 开 展 抗 双 链 DNA 抗 体 (double stranded DNA, dsdna) 和 抗 核 抗 体 谱 (antinuclear antibody spectrum,anas) 检 测, 其 对 于 自 身 免 疫 性 疾 病 诊 断 与 鉴 别 诊 断 具 有 重 要 应 用 价 值 [], 鉴 于 ANA 荧 光 模 型 对 于 抗 dsdna 及 ANA 谱 指 标 具 有 提 示 作 用 [], 因 此, 临 床 医 生 常 通 过 ANA 荧 光 模 型 辅 助 诊 断 自 身 免 疫 性 疾 病, 本 文 通 过 对 近 3 年 在 我 院 就 诊 的 部 分 病 例 进 行 ANA 抗 dsdna 和 ANA 谱 检 测 结 果 进 行 对 比 分 析, 探 讨 三 者 之 间 的 关 系, 为 临 床 疾 病 诊 断 提 供 依 据 材 料 与 方 法. 研 究 资 料 7 例 ANA 检 测 结 果 为 阳 性 或 可 疑 的 无 重 复 病 例 标 本 均 来 自 ~ 年 华 西 医 院 门 诊 和 住 院 病 例, 男 女 =.7, 年 龄 -3 岁, 平 均 年 龄 为. 岁 男 患 者 发 病 年 龄 - 岁, 平 均 年 龄 为 8.37 岁 ; 女 患 者 发 病 年 龄 -3 岁, 其 平 均 年 龄 为. 岁. 检 测 方 法.. ANA 检 测 方 法 7 采 用 HEp-( 人 喉 癌 上 皮 细 胞 株 ) 为 抗 原 底 物 的 间 接 免 疫 荧 光 法 检 测, 将 血 清 : 稀 释, 按 试 剂 说 明 书 操 作, 荧 光 显 微 镜 下 观 察 特 异 性 的 荧 光 模 型, 具 有 较 强 荧 光 但 无 法 辨 别 荧 光 模 型 判 断 可 疑, 阳 性 血 清 再 按 :3,:,:3,: 继 续 稀 释 测 得 抗 体 最 终 滴 度 荧 光 模 型 主 要 为 : 颗 粒 型 ( 颗 粒 型 ) 均 质 型 核 仁 型 着 丝 点 型 高 尔 基 体 型 核 点 型 周 边 型 等 及 不 同 荧 光 模 型 的 复 合 型 试 剂 盒 购 自 德 国 欧 蒙 公 司 检 测 显 微 镜 为 日 本 Nikon E6 型.. 抗 dsdna 检 测 方 法 8 采 用 绿 绳 短 膜 虫 为 底 物 的 间 接 免 疫 荧 光 法 检 测, 将 血 清 : 稀 释, 按 试 剂 说 明 书 操 作, 绿 绳 短 膜 虫 动 基 体 不 发 荧 光 为 阴 性, 隐 约 可 见 为 可 疑, 发 出 亮 绿 色 特 异 性 荧 光 为 阳 性, 阳 性 血 清 再 按 :3,:,:3,: 继 续 稀 释 测 得 抗 体 最 终 滴 度 试 剂 盒 购 自 德 国 欧 蒙 公 司 检 测 显 微 镜 为 日 本 Nikon E6 型 - -
3 ..3 ANA 抗 体 谱 检 测 8 采 用 纯 化 抗 原 的 酶 免 疫 条 带 法 将 血 清 : 稀 释, 按 试 剂 说 明 书 操 作, 该 试 剂 盒 可 同 时 检 测 抗 RNP Sm SSa(Ro6) SSb Scl-7 Jo- 和 rib-p 抗 体 7 种 抗 体, 显 色 条 带 通 过 EUROscan 描 扫 软 件 进 行 灰 度 分 析, 依 灰 度 深 浅 自 动 判 为 - ± 个 级 别, 检 测 试 剂 盒 (Euroline 膜 条 ) 购 自 德 国 欧 蒙 公 司, 检 测 描 扫 仪 为 EPSON 6 型.. 结 果 判 断 方 法 ANA 抗 dsdna 抗 体 ANA 抗 体 谱 检 测 采 用 双 盲 方 法.3 统 计 方 法 SPSS7. 统 计 软 件, 两 样 本 率 的 X 检 验,fisher 确 切 概 率 计 算, 检 验 水 准 α=. 结 果. ANA 荧 光 模 型 与 8 种 特 异 自 身 抗 体 关 系 例 ANA 为 阳 性 或 可 疑 病 例 全 部 进 行 抗 dsdna 检 测, 其 中 736 例 进 行 ANA 抗 体 谱 的 检 测,ANA 荧 光 模 型 结 果 与 抗 dsdna 抗 体 ANA 抗 体 谱 结 果 关 系 见 表 表 ANA 荧 光 模 型 对 应 8 种 特 异 自 身 抗 体 关 系 Tab. ANA pattern correspond to 8 autoantibodies anti-dsdna (n=) ANAs(n=736) ANA pattern anti-dsdna anti-ssa anti-rnp anti-ssb anti-sm anti-rib-p positive positive positive positive positive positive granular /368 8/37 6/37 3/37 6/37 8/37 (.8) (.) (3.) (.) (3.) (6.8) homogeneous 3/ 8/8 3/8 6/8 7/8 3/8 (.7) (3.) (.3) (7.3) (3.33) (.3) nucleolus /37 /8 /8 8/8 /8 /8 (.) (7.) (.7) (6.) (3.6) centromere 3/377 3/ / / / / (.8) (.88) (.) (.) (.) Golgi /7 /38 /38 3/38 /38 /38 (.3) (7.8) (.63) (.63) dots /6 /3 /3 /3 /3 /3 (.7) (8.7) peripheral /3 / / / / / (.33) (6.) actin / /7 /7 /7 /7 /7 (3.) (.88) actotropomyosin / /6 /6 /6 /6 /6 PCNA / /8 /8 /8 /8 /8 (.) (.) vementin / / / / / / cytoplasm 8/63 8/6 6/6 /6 /6 7/6 (.8) (.7) (.8) (.3) (.) (.8) borderline 6/ /33 3/33 3/33 /33 8/33 (.8) (7.6) (.) (.7) (.) (.6) others /368 3/68 3/68 3/68 3/68 /68 (.) (3.3) (.68) (6.37) (8.) (.) 注 :PCNA: 为 抗 增 殖 细 胞 核 抗 原 型 others: 包 括 上 述 两 种 或 多 种 荧 光 模 型 的 复 合 型 anti-scl-7 positive 37/37 (.8) 7/8 (.) /8 (.7) / (.) /38 (.63) /3 / (3.) /7 /6 /8 / 6/6 (.8) 8/33 (.6) /68 (.) anti-jo- positive /37 (.) /8 (.) 3/8 (.7) / /38 /3 / /7 /6 /8 / 8/6 (.7) /33 (.3) 7/68 (.3) - 3 -
4 . 单 纯 特 异 自 身 抗 体 对 应 ANA 荧 光 模 型 的 关 系 736 例 ANA 为 阳 性 或 可 疑 病 例 均 进 行 抗 dsdna 和 ANA 抗 体 谱 共 8 项 指 标 检 测, 其 中 均 出 现 不 同 数 量 单 纯 抗 体 阳 性, 而 另 外 其 余 7 项 抗 体 检 测 结 果 均 为 阴 性, 单 纯 抗 体 检 测 结 果 与 ANA 荧 光 模 型 结 果 关 系 见 表 antibodies dsdna (n=86) SSa (n=8) RNP (n=8) Sm (n=7) Scl-7 (n=) rib-p (n=36) Jo- (n=3) SSb (n=6) 表 8 种 特 异 自 身 抗 体 对 应 ANA 荧 光 模 型 的 关 系 Tab. 8 autoantibodies correspond to ANA patterns ANA pattern or mixed with others(%) granular homogeneous cytoplasm nucleolus centromere peripheral dots PCNA Golgi borderline (.) 8 (.*) 3 (6.8*) (7.*) 67 (77.*) 7 (3.66) (.7) (.) (.) 8 (6.) 8 (.3) (.7) (7.3) (.63) (.) (.33) 3 (6.3) (.3) (.) (.33) 8 (.6) 6 (.) (.7) (.8) (3.6) 66 (6.7*) 7 (7.37) 36 (37.8) (.) (.) 8 3 (3.8) (.) (.*) (.) (8.33) 3 8 (3.8) (.38) (6.*) (7.6) (7.6) 6 (.3) (.3) (3.8) (3.8) 注 : Scl-7 出 现 均 质 型 和 核 仁 型 两 种 荧 光 复 合 模 型 为 例, 占 /(3.3%) (.73) (.) (7.6) (3.8) 3 (3.) 7 (3.) 8 (8.) (.) (.38) (6.*) *compare with other pattern X >7. P=. X >. P=. X >8.8 P=. P<.6 (fisher test) X >.3 P=. X >.7 P<.8 X >3. P<.7 X >3. P< 讨 论 ANA 是 诊 断 自 身 免 疫 性 疾 病 最 重 要 的 检 查 指 标 之 一, 以 HEp- 细 胞 为 底 物 的 间 接 免 疫 荧 光 法 是 ANA 检 测 的 经 典 方 法 [3], 但 由 于 ANA 特 异 性 较 差, 须 进 一 步 检 测 其 亚 类 以 提 高 诊 断 自 身 免 疫 性 疾 病 的 特 异 性 本 研 究 采 用 大 样 本 分 析, 探 索 ANA 与 其 亚 类 抗 体 之 间 的 关 系, 从 表 结 果 可 以 看 出,ANA 荧 光 模 型 以 颗 粒 型 均 质 型 胞 浆 型 及 两 种 或 以 上 荧 光 复 合 型 为 主 [], 但 这 些 荧 光 模 型 对 应 抗 dsdna 及 ANA 抗 体 谱 8 种 抗 体 均 可 出 现 阳 性, 并 均 以 抗 SSa 抗 体 阳 性 为 多, 其 次 为 抗 RNP 抗 体 抗 dsdna 抗 体, 即 荧 光 模 型 与 抗 dsdna 抗 体 与 ANA 抗 体 谱 间 没 有 固 定 的 对 应 关 系, 这 些 荧 光 模 型 对 于 特 异 性 自 身 抗 体 提 示 缺 乏 特 异 性, 必 须 进 一 步 检 测 才 能 确 定 特 异 性 抗 体 ; 另 值 得 注 意 的 是 其 它 荧 光 模 型 如 核 仁 型 着 丝 点 型 高 尔 基 体 型 核 点 型 周 边 型 肌 动 蛋 白 型 原 肌 球 蛋 白 型 PCNA 型 波 形 蛋 白 型 荧 光 模 型, 对 应 的 dsdna 抗 体 与 ANA 抗 体 谱 阳 性 率 均 较 低, 部 分 阳 性 也 主 要 为 抗 SSa 抗 体, 此 外 这 些 荧 光 模 型 针 对 的 抗 原 类 型 清 楚, 部 分 模 型 临 床 意 义 明 确, 如 核 仁 型 与 着 丝 点 型 主 要 对 硬 皮 病 具 有 诊 断 价 值 [-6], 因 此 ANA 出 现 上 述 荧 光 模 型 时, 为 节 约 医 疗 成 本, 没 必 要 再 申 请 抗 dsdna 与 抗 ENA 抗 体 检 测 为 了 研 究 单 纯 一 种 抗 体 与 荧 光 模 型 之 间 的 关 系, 本 研 究 ANA 亚 类 抗 体 包 括 抗 dsdna 与 ANA 抗 体 谱 的 8 种 抗 体 检 测 中, 为 排 除 其 它 自 身 抗 体 对 荧 光 模 型 的 影 响, 采 用 只 有 一 种 抗 体 阳 性 时, 确 定 单 纯 抗 体 与 荧 光 模 型 之 间 的 关 系, 为 不 同 检 测 项 目 间 结 果 对 应 核 查 减 少 差 错 提 供 理 论 基 础, 表 的 结 果 显 示, 当 抗 dsdna 抗 体 阳 性 时, 主 要 以 均 质 型 或 包 含 均 质 型 的 复 合 荧 光 模 型 为 主, 其 高 达 77.%, 显 著 高 于 其 它 荧 光 模 型 (P=.), 即 抗 dsdna 抗 体 与 均 质 荧 光 模 型 相 关 ; 抗 RNP 和 SSa 主 要 以 颗 粒 型 或 包 含 颗 粒 型 的 复 合 荧 光 模 型 为 主, 上 述 二 种 抗 - -
5 3 体 与 颗 粒 型 相 关, 特 别 是 抗 RNP 抗 体 其 包 含 颗 粒 型 的 荧 光 模 型 高 达 6.8%; 这 与 Tonuttia E [7] 的 观 点 一 致, 而 抗 Sm 抗 体 颗 粒 型 阳 性 率 高 于 其 它 荧 光 模 型, 但 没 有 统 计 学 差 别 (P<.6), 这 与 标 本 数 量 较 少 有 关 ; 抗 Scl-7 抗 体 阳 性 主 要 以 均 质 型 为 主, 同 时 合 并 核 仁 型 及 / 或 颗 粒 型 的 复 合 荧 光 模 型, 其 中 均 质 型 和 核 仁 型 两 种 复 合 荧 光 模 型 达 3.3%; 抗 rib-p 和 Jo- 抗 体 以 胞 浆 型 或 包 含 胞 浆 型 的 复 合 荧 光 模 型 为 主, 显 著 高 于 其 它 荧 光 模 型 (P<.7); 单 纯 抗 SSb 抗 体 达 6 例, 其 荧 光 模 型 主 要 以 可 疑 为 主, 另 外 也 会 出 现 均 质 斑 点 或 胞 浆 型, 这 可 能 主 要 与 两 种 [8] 检 测 方 法 对 抗 SSb 抗 体 检 测 敏 感 度 不 同 及 抗 原 分 布 分 散 所 致 单 纯 出 现 抗 SSb 抗 体 与 文 献 抗 SSb 抗 体 阳 性 随 抗 SSa 抗 体 而 出 现 有 悖, 本 研 究 单 纯 抗 SSb 抗 体 是 否 为 假 阳 性 及 其 临 床 意 义 尚 需 进 一 步 观 察 在 我 们 的 研 究 中, 其 荧 光 模 型 出 现 某 种 或 几 种 复 合 荧 光 模 型, 从 理 论 上 讲, 单 纯 一 种 抗 体 是 针 对 同 一 种 抗 原 的 自 身 抗 体, 如, 抗 dsdna 靶 抗 原 为 双 螺 旋 DNA, 抗 SSa 为 6KD 及 KD 的 小 核 糖 蛋 白, 抗 RNP 和 抗 Sm 均 为 U 族 小 分 子 RNA 与 核 糖 核 蛋 白, 但 两 者 抗 原 位 点 不 同, 抗 Scl-7 为 位 于 核 仁 及 核 浆 中 的 拓 扑 异 构 酶 I, 抗 rib-p 为 位 于 浆 内 的 核 糖 体 大 亚 基 上 的 磷 酸 蛋 白, 抗 Jo- 为 位 于 细 胞 浆 中 的 组 氨 酰 -trna 合 成 酶, 抗 SSb 为 位 于 核 内 的 RNA 多 聚 转 录 酶 中 的 小 RNA 磷 酸 蛋 白, 因 此 单 纯 抗 体 模 式 应 该 具 有 固 定 的 荧 光 模 型, 出 现 与 理 论 不 一 致 情 况 的 原 因 可 能 是 患 者 体 内 存 在 检 测 目 标 抗 体 外 其 它 自 身 抗 体, 其 可 能 是 本 研 究 尚 未 检 测 的 抗 组 蛋 白 抗 体 或 其 它 的 ENA 抗 体 等, 也 可 能 是 本 研 究 已 检 测, 但 由 于 灵 敏 度 太 低 无 法 测 出, 而 对 于 ANA 检 测 敏 感 度 较 高 而 呈 现 相 应 的 荧 光 模 型 总 之, 在 临 床 实 践 中,ANA 荧 光 模 型 与 抗 dsdna 和 ANA 抗 体 谱 之 间 具 有 一 定 的 规 律, ANA 检 测 结 果 为 核 仁 型 着 丝 点 型 高 尔 基 体 型 核 点 型 周 边 型 肌 动 蛋 白 型 原 肌 球 蛋 白 型 PCNA 型 波 形 蛋 白 型 荧 光 模 型 时 抗 dsdna 和 ANA 抗 体 谱 结 果 常 为 阴 性, 没 必 要 申 请 检 测, 以 节 约 患 者 医 疗 成 本 及 待 诊 时 间 ;ANA 检 测 结 果 为 颗 粒 型 均 质 型 胞 浆 型 及 复 合 型 荧 光 模 型 时 需 进 一 步 进 行 抗 dsdna 和 ANA 抗 体 谱 检 测 ; 抗 dsdna 和 ANA 抗 体 谱 出 现 阳 性 时,ANA 荧 光 模 型 也 有 一 定 的 规 律, 为 实 验 室 进 行 结 果 核 对 提 供 依 据, 但 由 于 自 身 免 疫 性 疾 病 患 者 体 内 自 身 抗 体 复 杂, 不 同 实 验 结 果 核 对 时 应 结 合 规 律 综 合 考 虑, 为 临 床 提 供 准 确 可 靠 的 检 测 结 果 [ 参 考 文 献 ] (References) [] Mahler M, Fritzler MJ.The clinical significance of the dense fine speckled immunofluorescence pattern on HEp- cells for the diagnosis of systemic autoimmune diseases[j].clin Dev Immunol. ():36. [] Lothar Thomas. 临 床 实 验 诊 断 学 [M]. 第 版, 上 海 : 上 海 科 学 技 术 出 版 社,. [3] Copple SS, Giles SR, Jaskowski TD,et al.screening for IgG antinuclear autoantibodies by HEp- indirect fluorescent antibody assays and the need for standardization[j]. Am J Clin Pathol. May;37():8-3. [] Kidd K, Cusi K, Mueller R,etc.Detection and identification of significant ANAs in previously determined ANA negative samples[j]. Clin Lab. ;(-):7-. [] Hamaguchi Y.Autoantibody profiles in systemic sclerosis: predictive value for clinical evaluation and prognosis[j]. J Dermatol. Jan;37():-3. [6] Hesselstrand R, Scheja A, Shen GQ,et al.the association of antinuclear antibodies with organ involvement and survival in systemic sclerosis[j]. Rheumatology (Oxford). 3 Apr;():3-. [7] Tonuttia E, Bassetti D, Piazza A, etc. Diagnostic accuracy of ELISA methods as an alternative screening test to indirect immunofluorescence for the detection of antinuclear antibodies. Evaluation of five commercial kits[j]. Autoimmunity. ;37():7-76. [8] 韩 建 华, 李 永 哲, 佟 大 伟, 等. 系 统 性 硬 皮 病 抗 核 抗 体 谱 的 检 测 分 析 [J]. 中 国 实 验 诊 断 学, 7,(6):
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