4 藥物食品檢驗局調查研究年報 Ann. 藥物食品檢驗局調查研究年報. 5 :Rept. 4-45BFDA 7 Ann Rept. BFDA Taiwan R.O.C. 5 : 4-45 7 市售化粧品微生物之調查 張洳楣 林宜蓉 管麗珍 周秀冠 中部檢驗站 摘 要 化粧品成份複雜且富含營養 若加上環境因素 如氧氣 水份及溫度等有利微生物生長條件 容易造成微生物污染繁殖及產品變質而影響健康 為確保化粧品之品質及消費者使用之安全 94年9 月日衛生署公告 化粧品中微生物容許量基準 自95年4月日起 凡製造或輸入販售之化粧品 應符合本公告基準規定 違反者 則依化粧品衛生管理條例之有關規定處辦 為瞭解市售化粧品微生 物品質概況及背景調查 本局委由各縣市衛生局於95年至5月間自藥局 美容美髮行及 等地 共抽樣化粧品5件 其中包括眼部用品8件 9件 面膜9件 面霜乳液類7件及唇膏8 件 進行微生物品質檢測 結果發現5件化粧品均未檢出大腸桿菌 綠膿桿菌及 其 中雖有件及件護唇膏之生菌數含量超出該公告基準 惟其製造或輸入日期均為95年4月日 之前 因此尚符合規定 本調查結果已於95年月5日發布新聞在案 關鍵詞 化粧品 生菌數 大腸桿菌 綠膿桿菌 前 言 愛美是人的天性 化粧品工業因此蓬勃發展 化 粧品是一種獨一無二的產品 unique products 成分 如食品般複雜且富含營養 如油脂 多醣類 酒精 蛋白質 氨基酸 糖苷類 膽固醇類 胜肽及維他命 等 惟其保存期 shelf life 不似食品般嚴格執行 化 粧品通常被歸屬在藥品類 卻尚未實施近乎無菌製造 系統 near-sterile manufacture systems 之規範() 若 加上環境因子 如氧氣 水份 ph值 溫度 表面活 性 香料及精油等有利微生物生長條件() 容易造成微 生物污染繁殖及產品變質 影響消費者健康 化粧品 中微生物污染問題在工業界亦備受關注 因可能使產 品及經濟蒙受重大損失() 在美國 有品質問題之化粧品通常由製造廠商主 動且自願將產品回收下架 政府機構則站在 監督 之立場來管理(4) 美國藥物食品管理局曾有報告指出 於994-998年間 美國因微生物污染而回收化粧品多 達56件 檢出的細菌有Burkholderia cepacia; Pseudomonas aeruginosa; Klebsiella oxytoca; Enterobacter gergoviae及mold/yeast/fungi等 以污染綠膿桿菌 P. aeruginosa 為回收化粧品的主要原因 45% (5) 這些調查 結果顯示市售化粧品中潛伏污染微生物之風險 化粧 品及其原料中微生物的檢測流程乃採用傳統菌落計數 及增菌分離培養法 然而 有關化粧品產品或化粧品 工廠環境中微生物生理與代謝機制 metabolic state of microorganisms 可供參考文獻資料不多() 國際上 可依據的檢驗方法有美國藥典 美國FDA細菌分析手 冊 ISO標準檢驗法及日本衛生試驗法等數種 近年來 研究報告指出 以核酸為基礎的PCR Polymerase chain reaction 快速檢測法可應用在藥品及化妝品中微生物 的檢測(6-8) 為確保化粧品之品質及消費者使用之安全 先 進國家如美國 歐盟及日本對於 眼部化粧 品 口腔用品及其他化粧品都設有微生物容許量基準 為化妝品品質之參考 表一 一般而言 國際間化 粧品之生菌數容許量基準介於 CFU/g~ CFU/g 之間 病原性微生物及特定指標菌則不得檢出 國內 於94年9月日公告化粧品中微生物容許量基準 從 95年4月日開始 凡製造或輸入販售之化粧品 應符 合公告基準規定 嬰兒用及使用於接觸黏膜部位之化 粧品其生菌數均應在 CFU/g以下 其他類化粧品其 生菌數均應在 CFU/g以下 且不得檢出大腸桿菌 Escherichia coli 綠膿桿菌 P. aeruginosa 或金黃 色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 等 表二 違 反者 則依化粧品衛生管理條例之有關規定處辦 台灣溫暖潮濕的氣候 是適合各種微生物滋生繁 殖的溫床 化粧品污染微生物機率較溫帶或寒帶國家 為高 本研究目的在於調查市售化粧品於 化粧品中 微生物容許量 新基準施行前微生物含量之背景值 作為衛生署日後加強輔導與監控之重點 委由國內各 衛生局抽樣眼部用品 面膜 面霜乳液類 及唇膏等共5件化粧品送至本局進行生菌數 大腸桿 菌 綠膿桿菌及污染之檢測 材料與方法 一 檢體來源
4 市售化粧品微生物之調查 表一 世界衛生組織及各國化粧品微生物容許基準(9,) 生 菌 數 (CFU/g)以下 國 別 對 象 美 國 5 (CTFA Guide Line) 眼部用品 5 口腔用品 大腸桿菌 其他化粧品 綠膿桿菌 WHO 一般製劑 日 本 眼部化粧品 英 國 不得檢出之特定菌 病原性微生物 細菌 大腸桿菌 綠膿桿菌 真菌 病原性微生物 (TPE Guide Line) 病原性微生物 眼部用品 其他化粧品 表二 衛生署公告化粧品中微生物容許量基準 生菌數 其他規定 () 嬰兒用 眼部周圍用 及使用於接觸黏膜 部位之化粧品 CFU/g或mL以下 () 其他類化粧品 CFU/g或mL以下 不得檢出大腸桿菌 Escherichia coli 綠膿桿菌 Pseudomonas aeruginosa 或 Staphylococcus aureus 等 自民國95年月至民國95年5月委由台北市政府衛 生局等縣市衛生局 自藥局 美容美髮材料行 百 貨公司 大賣場 超級市場 藥粧店及 等 抽樣化粧品共5件 其中包括眼部用品8件 嬰兒 用品9件 面膜9件 面霜乳液類7件及唇膏8件 各縣 市抽樣地點及件數詳如表三 國產及進口之眼部化粧 品 面膜 面霜乳液類及唇膏抽樣件數詳 如表四 二 材料與器具. 高壓滅菌釜 Tomy, SS-5, Japan. 振盪器 Vortex, U.S.A.. 吸管 已滅菌 ml吸管有. ml之刻度 4. 冰箱 -8 Sanyo MED-UV, Japan 低溫冷 凍櫃 4 冷藏櫃 Sanyo MPR-4F, Japan 5. 培養箱 與5 Memmert, Germany 6. 不銹鋼藥杓 剪刀 小刀 曲玻棒與鑷子 可 滅菌 7. 接種環 鎳鉻合金 8. 電子天平 Mettler PB6, Swizerland 9. 無菌塑膠離心管 PE材質 5 ml 附有螺 旋蓋. 無菌培養皿平板 5 mm 表三 各縣市化粧品抽驗件數 調查地點 抽樣地點 件數 台北市 藥局 美容美髮材料行 高雄市 基隆市 百貨公司 美容美髮材料行 台北縣 大賣場 美容美髮材料行 桃園縣 新竹市 藥局 新竹縣 藥粧店 苗栗縣 藥局 台中縣 藥局 美容美髮材料行 台中市 百貨公司 彰化縣 美容美髮材料行 南投縣 雲林縣 藥局 嘉義縣 嘉義市 藥局 台南縣 藥局 藥粧店 台南市 美容美髮材料行 高雄縣 藥局 屏東縣 宜蘭縣 美容美髮材料行 花蓮縣 臺東縣 超級市場 澎湖縣 超級市場 藥粧店 合 計 5
4 藥物食品檢驗局調查研究年報 Ann. Rept. BFDA 表四 國產及進口之眼部化粧品 面膜 面霜乳液類及唇膏抽樣件數 進口 種類 國產 眼部化粧品 5 面膜 面霜乳液類 7 5 唇膏 5 進口件數 總件數 日本 美國 韓國 印尼 大陸 9. 微生物自動鑑定儀Vitek biomerieux, Inc., U.S.A. 三 檢驗方法(8,9) 依據美國FDA細菌分析手冊及本局相關文獻資 料 義大利 泰國 德國 6 粉 之調製方法 稱取檢體 g加入無菌tween 8 ml 及MLB 8 ml混合均勻成倍稀釋液 面霜及唇膏等油 脂類檢體之調製方法 稱取檢體 g加入無菌tween 8 ml 5-7顆5 mm玻璃珠 或-5顆 mm玻璃珠 與 MLB 8 ml混合均勻成倍稀釋液 八 生菌數檢驗法 四 實驗菌株 E. coli ATCC 59 S. aureus ATCC 658p及P. aeruginosa ATCC 785等菌株購自食品工業研究所 生物資源保存及研究中心 所有實驗菌種均冷凍保存 -8 於細菌保存管中 使用時先接種於Trypticase soy broth TSB 培養液 5 培養4小時復育後 再 將活化後的菌液取一白金耳接種於Trypticase soy agar TSA 5 培養4小時 挑取單一菌落於TSA斜面 培養基4 儲存備用 五 培養基及藥品 Modified letheen broth MLB Modified letheen agar MLA 木糖離胺酸去氧膽酸鹽培養基 Xylose lysine deoxycholate agar, XLD 及Cetrimide agar購自 Difco Lab Detroit, Michigan, U.S.A. 伊紅亞甲藍培 養基 Levine s eosin-methylene blue agar, L EMB 胰化酪蛋白大豆培養基 Trypticase soy agar, TSA 三糖鐵培養基 Triple sugar iron agar, TSI 馬鈴薯葡 萄糖培養基 Potato dextrose agar, PDA 麥芽培養基 Malt extract agar, MEA 巴德派克培養基 BairdParker, BP 氯四環素 Chlortetracycline 及Tween 8購自Merck Darmstadt, Germany 六 培養基製備 依據購買培養基所附說明配製 七 樣品製備方法 化粧品檢體收到後儘快分析樣品 室溫方式儲 存 開封前先檢查外包裝是否完整 量取液體類檢體 如乳液 ml置入9 ml modified letheen broth MLB 無菌離心管中混合均勻成 倍稀釋液 固體及粉狀類檢體 如面膜 眼影及爽身 灱 好氣性生菌數之檢測 檢體取約 g加mlb 9 ml 混合均勻成倍稀釋 液依序做成-~-6倍稀釋液 取-~-6倍稀釋 液. ml至mla以曲玻棒塗抹均勻 均為二重 覆 MLA於 培養48小時計算並記錄菌落數 CFU/g 牞 黴菌及酵母菌生菌數之檢測 檢體取約 g 加MLB 9 ml 混合均勻成倍稀 釋液依序做成 - ~ -6 倍稀釋液 取 - ~ -6 倍 稀釋液. ml至添加4 ppm Chlortetracycline之 PDA 以曲玻棒塗抹均勻 均為二重覆 PDA於 培養7天後 計算並記錄菌落數 CFU/g 犴 增菌試驗 若上述MLA培養基上無任何菌落時進 行本試驗 MLB -~-6倍 各稀釋液 增菌培養7天後 每天觀察 若有混濁生長現象 取一接種環量 至MLA及MacConkey培養基 培養48小時 觀察MLA及MacConkey培養基上有無菌落生長 記錄有菌落之平板 犵 篩選試驗 檢測生菌數前之預試驗 檢體取約 g加mlb 9 ml 混合均勻成倍稀釋 液 取倍稀釋液之 ml以傾注平板技術 Pour plate technique 置於MLA及PDA培養基上或取 倍稀釋液之. ml以曲玻棒塗抹均勻 Spread plate technique 於MLA及PDA培養基上 均做二 重覆 MLA培養基置於 培養48小時 PDA培 養基置於 培養7天後估算檢體生菌數小於 或小於 CFU/g 九 大腸桿菌檢驗法 檢體取約 g依上述製備方式混合均勻成倍稀釋 液 並依序做成 -~ -倍稀釋液 取 -~ -倍稀釋
4 市售化粧品微生物之調查 液. ml至mla上以曲玻棒塗抹均勻 均為二重覆 經 培養48小時後將所有生長菌落接種於MacConkey 及EMB培養基上 經5 培養4小時鉤取可疑菌落 TSA及TSI培養基上中 置於5 培養8-4小時後進行 微生物自動鑑定儀Vitek biomerieux, Inc., U.S.A. 生化鑑別試驗 記錄結果 十 綠膿桿菌檢驗法 檢體取約 g依上述製備方式混合均勻成倍稀釋 液 依序做成 -~ -6倍稀釋液 取 -~ -6倍稀釋液. ml至mla上以曲玻棒塗抹均勻 均為二重覆 培養48小時所有生長菌落接種於MacConkey 及Cetrimide培養基 經5 培養4小時鉤取可疑菌落至TSA及 TSI培養基中 置於5 培養8-4小時後進行微生物自 動鑑定儀Vitek biomerieux, Inc., U.S.A. 生化鑑別 試驗 記錄結果 十一 檢驗法 檢體取約 g加mlb 9 ml 混合均勻成倍稀釋 液 並依序做成-~-倍稀釋液 取. ml -~- 倍稀釋液至巴德派克培養基 Baird-Parker agar, BP 上 以曲玻棒塗抹均勻 均為二重覆 於5 培養48小時 後 計算並記錄可疑菌落數 由BP上鉤取可疑菌落接 種於TSA培養基及BHI培養液上中 經5 培養4小時 後進行凝固酶試驗及微生物自動鑑定儀Vitek biomerieux, Inc., U.S.A. 生化鑑別試驗 記錄結果 十二 接種標準菌株試驗 自冰箱中取出E. coli ATCC 59; S. aureus ATCC 658p; P. aeruginosa ATCC 785等株標準菌 取一 白金耳菌接種至TSA plate 於5 經4小時培養後 調菌液至MacFarland. 分別自三株標準菌取~4 CFU/mL菌液. ml分別接種至 g化粧品檢體中 加入 MLB 8-9 ml 混合均勻成為~ CFU/mL菌數 各 取. ml塗抹於mla, BP, CT, EMB上經5 4小時 培養後觀察各選擇性培養基上典型菌落型態及計算菌 數 結果與討論 化粧品並非要求無菌 not expected to be aseptic 唯不得檢出病原性微生物 生菌數愈低表示品 質愈佳 目前為止 尚無一套可廣泛被接受的生菌數 標準 美國暫訂容許量標準為 及眼部化粧 品之生菌數須小於5 CFU/g 口腔及其他化粧品之生 菌數須小於 CFU/g(9) 95年國內衛生署新公告基準 規定 嬰兒用及使用於接觸黏膜部位之化粧品其生菌 數均應在 CFU/g以下 其他類化粧品其生菌數均應 在 CFU/g以下 相較之下 國內的公告基準規定甚 至比美國容許量標準更能保護消費者的健康 衛生局共送驗5件化粧品檢體 均為95年4月日 前生產製造之化粧品 屬於國產之化粧品佔9件 分 別為眼部化粧品件 5件 面膜件 面霜 乳液類7件及唇膏件 進口之化粧品佔件 分別為 眼部化粧品6件 自美國及日本進口各件 印尼及韓 國進口各件 4件分別為韓國件 德國及 印尼進口各件 面膜7件分別為日本進口件 韓國 及大陸進口各件 面霜乳液類件分別為日本進口5 件 美國 韓國 印尼 義大利及泰國進口各件 唇 膏5件分別為美國及日本進口各件及大陸進口件 表 四 抽樣之化粧品檢體均送到本局進行微生物檢 驗 結果並未檢出可能致病的大腸桿菌 綠膿桿菌及 僅件及件唇膏之生菌數 含量超出 CFU/g 表五 件為國產嬰兒爽身粉 件標示成分為 青小豆 玉米澱粉 綠薄荷及天然精油 另件標示 成分為甘草粉 綠豆粉 白芷根油 松花粉 硬脂酸 鋅 薄荷腦 冰片及保存劑 Methyl Paraben 可 能因天然植物性成份富有養份 適合微生物繁殖 因 此生菌數含量偏高. CFU/g及9.4 4 CFU/ g 件護唇膏為進口化粧品 檢驗結果生菌數為7 CFU/g 依新基準使用於接觸黏膜部位之化粧品其生菌 數均應在 CFU/g以下 本案是否因運送過程或儲存 環境溫度不當 造成生菌數偏高仍待探討 應標示品 項方面 除件唇膏未標示批號及製造 或有效 日期 外 其餘化粧品包裝上均依化粧品衛生管理條例標示 製造廠名等相關資訊 本局7及8年度 曾針對國內市售化粧品微生物 含量進行探討及調查 結果7年度件送驗化粧品檢 表五 眼部化粧品 面膜 面霜乳液類及唇膏之檢驗結果 種類 送驗 件數 眼部化粧品 陽性件數 生菌數 (> CFU/g) 大腸桿菌群 綠膿桿菌 8 9 面膜 9 面霜乳液類 7 唇膏 8 5 總件數
44 藥物食品檢驗局調查研究年報 Ann. Rept. BFDA 5 總件數 件數 不合格件數 5 5 參考文獻 5 7年度 8年度 檢出可能引起人類疾病的大腸桿菌 綠膿桿菌及金黃 色葡萄球菌 為確保化粧品之品質及消費者使用之安 全 有關單位似應更積極輔導業者儘速推動化粧品優 良製造規範 Good Manufacture Practice, GMP 以保 障消費者使用安全與健康 95年度 圖一 歷年化粧品中生菌數調查檢驗結果分析 體中有件霜劑 % 含有酵母菌和黴菌總生菌數 Yeast and Mold Plate Count, YMPC 達.5 4 CFU/ g 經進一步鑑定結果 得知其含有一種可能引起全身 性病症的婆娑狀黴菌 Paecilomyces sp. 屬 () 8年 度件中有件 % 好氣性生菌數 APC 超出 新公告基準 及件眼部化粧品 眼線液 檢出可能引 起人類疾病的 () 95年本調查結果顯 示 5件送驗化粧品中有件 6% 生菌數超出微生物 容許量基準 整體而言 生菌數超出公告基準的比率 有逐年降低的趨勢 顯示政府及業者均關注化粧品中 微生物品質與安全問題 圖四 FDA 989 調查 百貨公司專櫃化粧品污染情形 結果發現有超過5%污 染黴菌及病原菌 () 相關研究報告指出 微生物污染 化粧品通常因添加不適當防腐劑或產品製造儲存環境 不當所致(,,) 依據 化粧品衛生管理條例 第二十六條所述 直轄市或縣 市 衛生及工業主管機關 應派員赴 各化妝品及化粧品色素製造 加工之場所 倉庫 販 賣處所 實地檢查其設備 裝置 製造程序 環境衛 生及其成品 半成品 原料 配料 包裝 容器 標 籤 仿單等 廠商不得無故拒絕 () 本次調查所 發現生菌數偏高的件化粧品除由轄區衛生局輔導業者 主動下架 本局並會同衛生局稽查員赴國內製造廠查 核相關設備 原料及製程 輔導及督促業者落實品管 制度 綜言之 化粧品的原料成份複雜並富有養份 容易被微生物污染繁殖甚至產品變質 影響消費者健 康 本調查結果發現5件化粧品中有件及 件唇膏之生菌數含量超出公告基準 惟其製造或輸 入日期均為95年4月日之前 因此尚符合規定 均未. Geis, P. A. 6. Cosmetic Microbiology. A practical microbiology. CRC press. Taylor & Francis Group. U.S.A.. Herrera, A. G. 4. Microbiological analysis of cosmetics. Methods Mol. Biol. 68: 9-5.. Orus, P. and Leranoz, S. 5. Current trends in cosmetic microbiology. Int. Microbiol. 8: 77-79. 4. CFSAN/Office of Cosmetics and Colors. 5. FDA Authority Over Cosmetics. [http://www.cfsan.fda. gov/~dms/cos-6.html]. 5. Wong, S., Street, D., Delgado, S. I. and Klontz, K. C.. Recalls of foods and cosmetics due to microbial contamination reported to the U.S. Food and Drug Administration. J. Food Prot. 6: -6. 6. Jimenez, L.. Molecular Diagnosis of Microbial contamination in cosmetic and pharmaceutical products: A review. J. AOAC Int. 84: 67-675. 7. 川村邦夫 佐佐木次雄 棚元憲一 GMP微 生物試驗法 講談社 東京 日本 8. ISO Standards. 6. Technical committees. TC7. Cosmetics. 9. Hitchin, A. D., Tran, T. T. and McCarron, J. E.. Microbiological methods for cosmetics. In Bacteriological Analytical manual online Food and Drug Administration. [http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/bammm.html].. 張洳楣 管麗珍 王森永 995 市售眼部化粧 品 乳液及面霜生菌數及金黃色葡萄球 菌污染之調查 藥物食品檢驗局調查研究年報 : 4-47. 李志恆 游祥榮 98 化粧品中微生物之探討 藥物食品檢驗局調查研究年報 : 66-69. Stehlin, D. 995. Cosmetic safety: more complex than at first blush. [www.cfsan.fda.gov/~dms/cos-safe.html].. 行政院衛生署 5 化粧品衛生管理條例 化粧 品衛生管理條例暨有關法規 第7-8頁
45 Microbiological Survey of Marketed Cosmetics in Taiwan JU-MEI CHANG, YI-RONG LIN, LI-CHEN KUAN AND HSIU-KUAN CHOU Central Regional Laboratory ABSTRACT Cosmetic products contain complex ingredients with nutrients, such as lipids, polysaccharides, alcohol, proteins, amino acids, glycosides, esteroids, peptides and vitamins. Additionally, the environmental factors including oxygen, humidity and temperature facilitate the growth of microorganisms. The microbial contamination of cosmetics can be health hazards for consumers. To assure the quality of cosmetics and protect the health of consumers, the Department of Health (DOH) announced Microbial guideline of cosmetics on Sept., 5. Either domestic or imported cosmetics, manufactured after the date of April, 6, enforce the Microbial guideline of cosmetics established by DOH. Therefore, a total of 5 cosmetic products including 8 samples of eye-area cosmetics, 9 of baby cosmetics, 9 of masks, 7 of creams and lotions and 8 of lipsticks were collected by local bureaus of health in Taiwan in 6. These samples were examined for aerobic plate count (APC) for Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus. Although the aerobic plate counts of baby power and lipstick were higher than the announced regulation limit ( CFU/g) in this investigation, the cosmetic products still meet the regulation limit for their manufacture dates earlier than the official April, 6. Besides, none of the pathogens of E. coli, P. aeruginosa and S. aureus were detected in all cosmetic products. The results of this survey were announced by Department of Health on Dec. 5, 6. Key words: cosmetic, aerobic plate count, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus