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1 AOAC Performance Tested Methods

2 X-Gal) 926VRB FDA-BAMAOACI Method Committee Guidelines for Validation of Qualitative and Quantitative Food Microbiological OMA y=1.04x-0.13 (yx FDABAM)(r 2 )= y=0.95x+0.15r 2 =0.94 FDA-BAM PTM

3 Principle The Sanita-kun Coliforms device is a cultural medium for the enumeration of coliform bacteria. The device consists of a non-woven fabric to which a layer of microbial nutrients is deposited in a film. The nutrient film also contains 5-bromo-4-chloro-3-indolyl--Dgalactopyranoside, or X-gal, which is hydrolyzed by-galactosidase from coliforms to produce a visible blue dye. The non-woven fabric and nutrient film are constructed on a base film. The basic device (fabric, nutrient and base film) is then inserted between an adhesive backing to stabilize the basic device, and a transparent film. The adhesive backing and the transparent top film serve to deter evaporation, and facilitate inspection of the inoculated device. Sample solutions containing bacteria are deposited on the fabric portion of the device. Then, the sample solution diffuses throughout the entire pad to dissolve and release the nutrient compound film forming a highly viscous solution. Bacteria migrate to the surface of the fabric where coliforms metabolize the nutrients and X-gal to produce a visible blue dye after incubation, while growth of non-coliforms is inhibited with selective reagents.

4 X- Gal 1mL + X- Gal

5 1mL Sanita-kun Coliforms 35 24hours mL /

6 Inclusivity Exclusivity BGLB BGLB Cedecea lapagei Bacillus cereus Citrobacter Bacillus megaterium Citrobacter diversus Bacillus subtilis Citrobacter freundii Corynebacterium pyrogenes Citrobacter sp. from a Corynebacterium xerosis food Enterobacter Enterobacter gergoviae Enterobacter cloacae Enterococcus hirae Enterobacter Lactic acid bacteria isolated from intermedium Enterobacter sp. from a foods Lactobacillus acidophilus food Escherichia coli Lactobacillus delbruedkii Escherichia sp. from a Leuconostoc mesenteroides food Klebsiella oxytoca Proteus mirabilis Klebsiella planticola Proteus vulgaris Klebsiella pneumoniae Providencia alcalifaciens Klebsiella terrigena Pseudomonas aeruginosa Klebsiella sp. from foods Rahnella aquatilis : Salmonella Enteritidis Salmonella Typhymurium Serratia marcescens Serratia rubidaea Staphylococcus aureus Staphylococcus sp Streptococcus sp Yersinia aldovae 1 - -

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9 FDA FDA-BAM a)significantly higher than FDA-BAM (p<0.05) b)significantly higher than FDA-BAM (p<0.01) 1.00

10 FDA-BAM BAM

11 FDA-BAM (cfu/ml) RSD Klebsiella sp. strain No2 Klebsiella oxytoca JCM 1665 Klebsiella sp. strain No53 Klebsiella sp. strain No172 Enterobacter sp. strain No8 Klebsiella pneumoniae IID 5209 Enterobacter aerogenes IFO Klebsiella sp. strain No2 Klebsiella sp. strain No171 Klebsiella sp. strain No52 Citrobacter sp. strain No202 Escherichia sp. strain No41 Klebsiella sp. strain No172 Klebsiella pneumoniae IID 5209 Klebsiella oxytoca JCM 1665 Klebsiella sp. strain No52 Klebsiella pneumoniae IID 5209 (cfu/ml) RSD FDA-BAM FDA-BAM FDA-BAM FDA-BAM Enterobacter aerogenes IFO Klebsiella pneumoniae JCM Klebsiella sp strain No Klebsiella sp strain No Klebsiella sp strain No Escherichia coli IID Enterobacter aerogenes IFO Enterobacter sp. strain No Klebsiella oxytoca JCM Blue letter:significantly higher than FDA-BAM(P<0.05) Red letter:significantly higher than FDA-BAM(P<0.01)

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16 3

102 6 3 1020046146 102 8 15 NIEA E101.03C 1. 2. 70% 75% 1 1. 1 0.5 2 3 16 27 2 4 2. 170 10 Bacillus atrophaeus 3. 2 121 Geobacillus stearothermophilus 4. class II 1 20 2 70% 75% 3 90 mm 30 35 ± 1 48 HEPA

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