药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2011, 46 (6): 695 700 695 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 的 突 变 对 瑞 舒 伐 他 汀 在 中 国 健 康 人 体 内 药 代 动 力 学 特 征 的 影 响 隋 双 明 1, 温 金 华 2, 李 新 华 3, 熊 玉 卿 1* ( 南 昌 大 学 1. 医 学 院 临 床 药 理 研 究 所, 2. 第 一 附 属 医 院, 3. 医 学 院 卫 生 科, 江 西 南 昌 330006) 摘 要 : 研 究 中 国 健 康 人 体 内 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 的 突 变 对 瑞 舒 伐 他 汀 药 代 动 力 学 的 影 响, 为 临 床 参 考 遗 传 多 态 性 特 征 来 确 立 瑞 舒 伐 他 汀 正 确 合 理 的 给 药 方 案 提 供 依 据 血 浆 样 品 应 用 LC-MS 方 法 测 定 : 采 用 电 喷 雾 电 离 源 (ESI), 选 择 性 监 测 瑞 舒 伐 他 汀 (m/z 480.0), 内 标 匹 伐 他 汀 (m/z 420.0) 利 用 ARMS-PCR 方 法 对 40 名 健 康 受 试 者 OATP1B1 的 521T C 位 点 的 基 因 分 型, 结 果 显 示 有 7 名 为 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 突 变 者, 占 全 部 健 康 受 试 者 的 17.5%, 其 余 OATP1B1 基 因 野 生 型 纯 合 子 占 全 部 健 康 受 试 者 的 82.5% 首 次 发 现 中 国 人 体 内 的 瑞 舒 伐 他 汀 药 代 动 力 学 特 征 在 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 突 变 组 与 基 因 野 生 型 组 间 存 在 显 著 差 异 中 国 人 体 内 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 突 变 对 瑞 舒 伐 他 汀 的 药 代 动 力 学 过 程 有 显 著 影 响 瑞 舒 伐 他 汀 OATP1B1 基 因 突 变 组 与 野 生 型 组 相 比 较, 其 在 人 体 内 的 吸 收 程 度 增 加, 消 除 过 程 减 慢, 故 在 临 床 应 用 中 应 参 考 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 的 突 变 情 况 来 指 导 瑞 舒 伐 他 汀 的 合 理 用 药 关 键 词 : 瑞 舒 伐 他 汀 ; 药 代 动 力 学 ; 遗 传 多 态 性 ; HPLC-MS; OATP1B1; ARMS-PCR 中 图 分 类 号 : R969 文 献 标 识 码 : A 文 章 编 号 : 0513-4870 (2011) 06-0695-06 Effect of OATP1B1 521T C heterogenesis on pharmacokinetic characterstics of rosuvastatin in Chinese volunteers SUI Shuang-ming 1, WEN Jin-hua 2, LI Xin-hua 3, XIONG Yu-qing 1* (1. Institute of Clinical Pharmacology, Medical College of Nanchang University; 2. The First Affiliated Hospital of Nanchang University; 3. Department of Health, Medical College of Nanchang University, Nanchang 330006, China) Abstract: This study is to report the effect of OATP1B1 gene mutation in the 521T C in Chinese human on the pharmacokinetics of rosuvastatin and guide the reasonable clinical application of rosuvastatin by the feature of genetic polymorphism of OATP1B1. Plasma samples were determined with LC-MS: the analyte and internal standard pitavastatin were both analyzed by MS in the ESI, m/z was 480.0 for rosuvastatin and 420.0 for the IS, separately. Genotyping of OATP1B1 was determined with the method of polymerase chain reaction - amplification refractory mutation system targeted at 40 healthy volunteers and showed that there were 7 subjects with 521T C mutant, accounting to 17.5% of total and wild type homozygote accounted to 82.5%. It was found that there were significant differences between OATP1B1 mutation in the 521T C and wild type homozygote for rosuvastatin pharmacokinetic process in Chinese human. In contrast to OATP1B1 wild type group, OATP1B1 mutation group s absorption degree increased, elimination process decreased. The OATP1B1 mutation should be noted for guiding the reasonable application of rosuvastatin during its clinical use. 收 稿 日 期 : 2011-01-10. 基 金 项 目 : 国 家 十 一 五 重 大 专 项 建 立 新 药 研 发 安 全 监 测 信 息 化 技 术 平 台 子 课 题 构 建 I 期 临 床 试 验 研 究 和 风 险 监 测 的 信 息 化 监 管 技 术 平 台 资 助 项 目 (2009ZX09309-003); 江 西 省 重 大 科 技 支 撑 计 划 重 点 项 目 (2007BS12804). * 通 讯 作 者 Tel / Fax: 86-791-6361195, E-mail: xyq2011@yahoo.cn
696 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2011, 46 (6): 695 700 Key words: rosuvastatin; pharmacokinetics; genetic polymorphism; HPLC-MS; OATP1B1; ARMS-PCR 瑞 舒 伐 他 汀 是 新 一 代 安 全 高 效 的 HMG-CoA 还 原 酶 抑 制 剂, 主 要 由 有 机 阴 离 子 转 运 多 肽 (organic anion transporting polypeptide, OATP1B1) 转 运 进 入 肝 细 胞 内 发 挥 药 效 和 代 谢 转 化 作 用 OATP1B1 特 异 性 表 达 于 人 肝 细 胞 基 底 外 侧 膜 上, 对 肝 细 胞 从 肝 门 静 脉 摄 取 内 源 性 物 质 和 药 物 起 着 关 键 作 用 由 于 OATP1B1 参 与 大 多 数 他 汀 类 药 物 进 入 肝 细 胞 的 过 程, 故 OATP1B1 遗 传 多 态 性 引 起 的 对 药 物 转 运 能 力 的 改 变 可 能 会 直 接 影 响 他 汀 类 药 物 进 入 肝 细 胞 的 量, 然 而 OATP1B1 基 因 突 变 是 否 影 响 瑞 舒 伐 他 汀 在 国 人 体 内 的 药 代 动 力 学 尚 属 未 知 因 此, 探 索 OATP1B1 基 因 位 点 多 态 性 对 瑞 舒 伐 他 汀 的 药 代 动 力 学 特 征 的 影 响, 对 指 导 个 体 化 用 药 具 有 十 分 重 要 的 临 床 意 义 材 料 与 方 法 材 料 与 方 法 瑞 舒 伐 他 汀 钙 片 (20 mg; 批 号 : 081108) 由 鲁 南 贝 特 制 药 有 限 公 司 提 供 瑞 舒 伐 他 汀 钙 原 料 药 ( 含 量 : 99.8%) 由 鲁 南 贝 特 制 药 有 限 公 司 (147098-20-2) 提 供 用 甲 醇 配 制 成 相 当 于 0.952 mg ml 1 瑞 舒 伐 他 汀 贮 备 液, 临 用 时 稀 释 至 相 应 的 浓 度 ; 匹 伐 他 汀 ( 内 标 ) 原 料 药 ( 含 量 : 99.9%) 由 宜 昌 长 江 药 业 有 限 公 司 提 供 (147526-32-7), 用 甲 醇 配 制 成 相 当 于 0.868 mg ml 1 贮 备 液, 临 用 时 稀 释 至 0.6 µg ml 1 岛 津 LCMS-2010EV 高 效 液 相 色 谱 - 质 谱 联 用 仪 ( 日 本 岛 津 公 司 ); CBM-20A 系 统 控 制 器 ; LC-20AB 双 泵 ; SIL-20A 自 动 进 样 器 ; CTO-20A 柱 温 箱 PCR 扩 增 仪 ( 杭 州 朗 基 公 司 ) 色 谱 和 质 谱 条 件 色 谱 柱 : Shimadzu Pack VP-ODS C 18 (150 mm 2.0 mm, 5 µm) 柱 ; 流 动 相 : 甲 醇 - 水 ( 含 0.02% 三 乙 胺 和 0.5 mmol ml 1 乙 酸 胺 ; 40 60); 流 速 : 0.2 ml min 1 ; 柱 温 : 35 梯 度 洗 脱 : 0~0.2 min, B ( 水 相 ): 60%; 0.2~4.50 min, B: 60%~5%; 4.50~6.0 min, B: 5%; 6.0~6.50 min, B: 5%~60%; 6.50~12.00 min, B: 60% 电 喷 雾 离 子 化 (ESI); 采 集 方 式 : 选 择 性 离 子 监 测 (selected ion monitoring, SIM); 曲 型 脱 溶 剂 装 置 (CDL) 温 度 : 250 ; 加 热 块 温 度 : 200 ; CDL 电 压 : 25 V; 检 测 电 压 : 1.65 kv; 检 测 离 子 [M H] : 瑞 舒 伐 他 汀 m/z 480.0, 内 标 ( 匹 伐 他 汀 ) m/z 420.0 血 浆 样 品 处 理 取 血 浆 样 品 0.980 ml, 精 密 加 入 内 标 ( 匹 伐 他 汀 0.6 μg ml 1 ) 60 μl, 加 入 30% 冰 乙 酸 200 μl 振 荡 混 匀 后 加 乙 酸 乙 酯 5.0 ml, 加 入 异 丙 醇 1 ml, 振 荡 4 min, 3 000 r min 1 离 心 10 min, 取 上 层 液 5 ml 于 另 一 试 管 中, 置 50 干 浴 锅 中 氮 气 吹 干, 以 70% 甲 醇 0.12 ml 溶 解 残 渣, 经 7 10 4 g 离 心 10 min 后 取 上 清 液 0.05 ml, 取 10 μl 进 样, 用 峰 面 积 进 行 定 量 分 析 [1] 全 血 DNA 抽 提 取 新 鲜 冷 冻 或 加 入 各 种 抗 凝 剂 的 血 液 200 μl, 放 入 1.5 ml 离 心 管 中, 加 入 蛋 白 酶 K ( 丝 氨 酸 蛋 白 酶 ) 溶 液 20 μl, 充 分 混 匀, 加 入 LB3 ( 裂 解 缓 冲 液 ) 220 μl, 混 匀, 56 放 置 10 min ( 溶 液 应 变 为 清 亮, 否 则 延 长 裂 解 时 间 至 溶 液 清 亮 为 止, 加 入 LB3 时 可 能 会 产 生 白 色 沉 淀, 一 般 56 放 置 时 会 消 失, 不 会 影 响 后 续 实 验 ) 加 入 无 水 乙 醇 220 μl, 混 匀, 此 时 可 能 会 出 现 絮 状 沉 淀 将 上 一 步 所 得 溶 液 和 絮 状 沉 淀 都 加 入 一 个 吸 附 柱 中, 12 000 r min 1 离 心 30 s, 弃 废 液 加 入 CB3 (DNA 降 解 粉 末 ) 500 μl, 12 000 r min 1 离 心 30 s, 弃 废 液 加 入 WB1 ( 漂 洗 液 ) 500 μl, 12 000 r min 1 离 心 30 s, 弃 废 液 重 复 漂 洗 操 作 1 次 将 吸 附 柱 放 回 收 集 管 中, 12 000 r min 1 离 心 2 min, 彻 底 去 除 吸 附 柱 中 残 留 的 WB1 将 吸 附 柱 置 于 离 心 管 中, 在 柱 的 中 央 加 入 洗 脱 缓 冲 液 EB (EB 在 60~70 水 浴 中 预 热 ) 150 μl, 室 温 静 置 1 min, 12 000 r min 1 离 心 2 min 将 得 到 的 溶 液 重 新 加 入 离 心 吸 附 柱 中, 室 温 放 置 1 min, 12 000 r min 1 离 心 2 min 洗 脱 出 的 DNA 于 20 保 存 ARMS-PCR 方 法 对 OATP1B1 第 5 外 显 子 521T [1] C 的 分 型 反 应 体 积 约 50 μl: 10 PCR 缓 冲 液 5 μl ( 含 MgCl 2 ), 2.5 mmol L 1 dntp 4 μl, Taq DNA 聚 合 酶 0.5 μl, 各 引 物 均 为 10 μmo1 L 1, 各 加 入 1 μl, DNA 模 板 200 ng, 剩 余 体 积 用 纯 水 补 足 所 用 引 物 : ( 向 前 外 引 物 ) OuterP1: 5-AAGTAGTTAAATTTGTAA TAGAAATGC-3, ( 反 向 外 引 物 ) OuterP2: 5-GTAGACA AAGGGAAAGTGATCATA-3, ( 前 向 内 引 物 ) InnerP1: 5-GGGTCATACATGTGGATATAAGT-3, ( 反 向 内 引 物 ) InnerP2: 5-AAGCATATTACCCATGAACG-3 PCR 反 应 条 件 : 94 预 变 性 5 min, 94 变 性 30 s, 48 退 火 30 s, 72 延 伸 30 s, 38 个 循 环, 72 再 延 伸 5 min PCR 扩 增 产 物 用 2.5% 的 琼 脂 糖 凝 胶 直 接 进 行 电 泳 分
隋 双 明 等 : OATP1B1 基 因 位 点 521T C 的 突 变 对 瑞 舒 伐 他 汀 在 中 国 健 康 人 体 内 药 代 动 力 学 特 征 的 影 响 697 型 : 1 称 取 1.25 g 琼 脂 糖 粉 置 于 含 有 50 ml 电 泳 缓 冲 液 (0.5 TBE) 的 锥 形 瓶 中 ; 2 将 悬 浮 液 微 波 加 热 至 琼 脂 糖 溶 解, 约 需 2 min; 3 将 溶 液 冷 却 至 约 60, 加 入 溴 化 乙 锭 ( 用 水 配 成 l0 mg ml 1 的 溶 液 ) 2.5 μl, 充 分 混 匀 ; 4 将 溶 液 倒 入 封 固 的 胶 膜 中, 插 入 梳 子, 以 形 成 加 样 孔 ; 5 移 去 梳 子, 根 据 需 要 切 割 凝 胶 ; 6 将 凝 胶 片 放 入 电 泳 槽 中, 在 电 泳 槽 中 加 入 TBE 缓 冲 液, 液 面 过 胶 面 ; 7 10 μl DNA 样 品 与 上 样 缓 冲 液 混 合 后, 用 一 次 性 微 量 移 液 器 将 混 合 物 加 至 样 品 槽 中 ; 8 盖 上 电 泳 槽 并 通 电, 使 DNA 向 阳 极 移 动, 直 至 溴 酚 蓝 和 二 甲 苯 青 在 凝 胶 中 迁 移 出 适 当 的 距 离, 约 需 40 min; 9 切 断 电 源, 将 凝 胶 从 电 泳 槽 中 取 出, 在 紫 外 灯 下 检 查 并 照 相 人 体 药 代 动 力 学 试 验 筛 选 受 试 者 临 床 试 验 方 案 等 获 医 院 伦 理 委 员 会 批 准 本 试 验 利 用 ARMS-PCR 方 法 对 40 名 健 康 男 性 受 试 者 OATP1B1 的 521T C 位 点 的 基 因 分 型, 结 果 显 示 有 7 名 为 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 突 变 者, 33 名 为 OATP1B1 基 因 野 生 型 纯 合 子 然 后 根 据 ARMS-PCR 方 法 分 型 结 果, 选 择 符 合 药 代 动 力 学 试 验 入 选 标 准 的 7 名 OATP1B1 基 因 的 521T C 突 变 型 和 7 名 野 生 型 的 受 试 者 进 入 药 代 动 力 学 研 究, 全 部 受 试 者 均 签 署 知 情 同 意 书 生 物 样 本 采 集 给 药 采 血 时 间 点 : 7 名 OATP1B1 突 变 受 试 者 作 为 突 变 组 与 7 名 野 生 型 纯 合 子 受 试 者 作 为 野 生 型 组, 分 别 口 服 瑞 舒 伐 他 汀 钙 片 20 mg, 于 服 药 前 即 刻 和 服 药 后 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 12.0 15.0 24.0 48.0 和 72.0 h 采 集 上 肢 静 脉 血 5 ml 置 入 肝 素 抗 凝 管 内, 离 心 分 离 血 浆, 置 于 20 保 存 待 测 统 计 分 析 绘 制 药 时 曲 线, 选 用 DAS2.0 软 件 包 对 所 测 的 血 液 浓 度 进 行 数 据 处 理, 计 算 主 要 药 代 动 力 学 参 数 其 中 t max C max 为 实 测 值, 以 梯 形 面 积 法 计 算 AUC; 采 用 独 立 样 本 t 检 验 比 较 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 突 变 组 与 野 生 型 纯 合 子 组 的 药 代 动 力 学 参 数 的 差 异 双 侧 P < 0.05 为 具 有 统 计 学 差 异 结 果 1 色 谱 行 为 瑞 舒 伐 他 汀 在 血 浆 中 的 色 谱 图 如 图 1, 由 图 可 见 瑞 舒 伐 他 汀 保 留 时 间 约 为 6.5 min, 内 标 匹 伐 他 汀 保 留 时 间 约 为 7.5 min, 在 本 试 验 条 件 下, 瑞 舒 伐 他 汀 及 内 标 峰 形 良 好, 分 离 完 全, 人 血 浆 中 内 源 性 杂 质 不 干 扰 样 品 峰 的 测 定, 基 线 噪 音 小 2 方 法 考 察 2.1 标 准 曲 线 与 定 量 下 限 取 空 白 血 浆 0.98 ml, 加 不 同 量 的 瑞 舒 伐 他 汀 溶 液, 使 分 别 为 0 0.50 1.0 2.0 4.0 8.0 16.0 32.0 和 64.0 ng ml 1, 按 血 浆 样 品 的 处 理 过 程 项 下 操 作, 记 录 样 品 和 内 标 峰 面 积, 利 用 样 品 浓 度 (x) 对 样 品 与 内 标 峰 面 积 比 (y) 作 直 线 回 归 瑞 舒 伐 他 汀 得 回 归 方 程 y = 0.067 7 x + 0.050 6, r 2 = 0.999 8, (n = 7), 线 性 范 围 0.5~64.0 ng ml 1, 定 量 下 限 为 0.5 ng ml 1 定 量 下 限 精 密 度 和 准 确 度 考 察 结 果 分 别 为 14.25% 和 110.48% 2.2 精 密 度 与 准 确 度 取 空 白 血 浆 0.98 ml, 加 入 不 同 浓 度 的 瑞 舒 伐 他 汀 溶 液 20 μl, 按 血 浆 样 品 处 理 项 下 操 作, 记 录 样 品 与 内 标 峰 面 积 比 值, 代 入 同 一 条 工 作 曲 线, 算 得 药 物 浓 度, 以 此 作 为 精 密 度 指 标 测 得 批 内 变 异 和 连 续 3 天 内 的 批 间 变 异 (n = 5), 见 表 1 2.3 提 取 回 收 率 与 介 质 效 应 精 密 配 制 含 瑞 舒 伐 他 汀 1.0 4.0 和 16.0 ng ml 1 的 系 列 血 浆 样 品 各 5 份, 依 前 述 血 样 处 理 方 法 处 理, 记 录 瑞 舒 伐 他 汀 的 峰 面 积 S1; 用 流 动 相 配 制 含 瑞 舒 伐 他 汀 1.0 4.0 和 16.0 ng ml 1 ( 含 内 标 ) 的 系 列 样 品, 不 经 处 理 直 接 进 样 分 析, 记 录 瑞 舒 伐 他 汀 与 内 标 峰 面 积 (S2); 同 时 另 取 空 白 血 浆 0.98 ml, 除 不 加 标 准 溶 液 和 内 标 外, 按 血 浆 样 品 处 理 项 下 操 作 后 加 入 相 应 浓 度 的 瑞 舒 伐 他 汀 和 内 标, 涡 流 混 合 进 样 分 析, 获 得 相 应 峰 面 积 S3 以 上 述 两 种 处 理 方 法 的 峰 面 积 比 值 即 S1/S2 6/5 100% 计 算 提 取 回 收 率, S3/S2 100% 计 算 介 质 效 应 结 果 表 明 该 法 的 提 取 回 收 率 大 于 84%, 精 密 度 符 合 要 求, 无 介 质 效 应, 符 合 生 物 样 品 分 析 要 求 Table 1 Accuracy and precision of rosuvastatin in human plasma (n = 5, x ± s) Added Within-day Between-day /ng ml 1 Found/ng ml 1 RSD/% Accuracy /% Found/ng ml 1 RSD/% Accuracy /% 1.0 1.02 ± 0.10 9.66 101.92 0.99 ± 0.11 11.11 99.00 4.0 4.12 ± 0.17 4.06 102.91 4.24 ± 0.42 9.91 106.00 32.0 32.20 ± 0.31 0.96 100.63 32.96 ± 0.78 2.37 103.00
698 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2011, 46 (6): 695 700 Figure 1 Chromatograms of rosuvastatin (m/z 480) and pitavastatin (internal standard, m/z 420) in human plasma. A: Blank plasma; B: Blank plasma + rosuvastatin (16.0 ng ml 1 ) + internal standard (20.0 ng ml 1 ); C: Volunteer sample 2.4 稳 定 性 考 察 对 低 (1 ng ml 1 ) 中 (4.0 ng ml 1 ) 高 (32.0 ng ml 1 ) 血 浆 样 本 室 温 放 置 稳 定 性 反 复 冻 融 稳 定 性 血 浆 样 本 长 期 冷 冻 稳 定 性 储 备 液 于 4 长 期 保 存 的 稳 定 性 进 行 考 察 ; 对 提 取 后 样 本 在 自 动 进 样 器 中 稳 定 性 考 察 考 察 结 果 显 示 精 密 度 与 准 确 度 均 符 合 生 物 样 本 测 试 的 要 求 3 OATP1B1 第 5 外 显 子 521T C 进 行 分 型 OATP1B1 第 5 外 显 子 521T C 位 点 电 泳 结 果 见 图 2 和 图 3, 部 分 受 试 者 DNA 电 泳 结 果 如 图 4 所 示, 野 生 型 纯 合 子 在 260 bp 和 179 bp 处 显 示 两 条 带, 突 变 型 纯 合 子 在 260 bp 和 123 bp 处 显 示 两 条 带, 突 变 型 杂 合 子 在 260 bp 179 bp 和 123 bp 处 显 示 3 条 带 在 40 名 健 康 受 试 者 中, 有 1 名 为 突 变 型 纯 合 子, 6 名 为 突 变 型 杂 合 子, 占 全 部 健 康 受 试 者 的 17.5%; 33 名 野 生 型 纯 合 子, 占 全 部 健 康 受 试 者 的 82.5% 4 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 突 变 型 和 野 生 型 的 药 代 动 力 学 特 征 绘 制 14 名 受 试 者 的 血 浆 药 - 时 曲 线, 见 图 5 口 服 瑞 舒 伐 他 汀 钙 片 20 mg 后, 突 变 和 野 生 型 纯 合 子 受 试 者 主 要 药 代 动 力 学 参 数 C max 分 别 为 31.507 ± 8.572 和 18.620 ± 6.669 ng ml 1 ; AUC 0 72 h 分 别 为 313.445 ± 101.913 和 164.859 ± 64.484 ng h ml 1 ; AUC 0 分 别 为 Figure 2 The result of OATP1B1 521T C electrophoretogram. Straps 1 and 2 are 521TT wild type homozygote: 260 bp + 179 bp; straps 3 and 4 are 521TC heterogenesis: 260 bp + 179 bp +123 bp; strap 5 is DNA 2 000 bp marker
隋 双 明 等 : OATP1B1 基 因 位 点 521T C 的 突 变 对 瑞 舒 伐 他 汀 在 中 国 健 康 人 体 内 药 代 动 力 学 特 征 的 影 响 699 因 野 生 组 在 口 服 20 mg 瑞 舒 伐 他 汀 钙 片 后, 利 用 DAS2.0 软 件 统 计 分 析, 结 果 显 示 药 代 动 力 学 参 数 C max AUC 0 72 h AUC 0 CL/F 具 有 显 著 性 差 异, 并 具 有 统 计 意 义 ; 基 因 突 变 组 相 对 基 因 野 生 组 瑞 舒 伐 他 汀 的 吸 收 程 度 增 加, 清 除 率 减 少 t max t 1/2 则 无 差 异, 如 表 2 所 示 Table 2 The relation between pharmacokinetic parameters of rosuvastatin and OATP1B1 genotype after a single oral dose of 20 mg in 14 healthy volunteers Parameter Heterogenesis Wild type P Figure 3 The result of OATP1B1 521T C electrophoretogram. Strap 1 is DNA 2000bp marker; straps 2 and 3 and 5 are 521 TT wild type homozygote: 260 bp + 179 bp; strap 4 is 521CC heterogenesis: 260 bp + 123 bp t max /h 2.857 ± 0.378 2.714 ± 0.488 0.552 C max /ng ml 1 31.507 ± 8.572 18.620 ± 6.669 0.009 AUC 0 72 h /ng h ml 1 313.445 ± 101.913 164.859 ± 64.484 0.007 AUC 0 /ng h ml 1 324.831 ± 101.050 174.676 ± 67.876 0.007 t 1/2 /h 10.877 ± 4.124 8.399 ± 4.157 0.285 CL/F /L h 1 68.295 ± 26.369 128.898 ± 44.928 0.010 Figure 4 The result of volunteers DNA electrophoresis (straps 2 to 9). Strap 1 is DNA 2 000 bp marker Figure 5 The concentration-time curve of rosuvastatin after a single oral dose of 20 mg rosuvastatin calcium tablets 324.831 ± 101.050 和 174.676 ± 67.876 ng h ml 1 ; CL/F 分 别 为 68.295 ± 26.369 和 128.898 ± 44.928 L h 1 ; t max 分 别 为 2.857 ± 0.378 和 2.714 ± 0.488 h; t 1/2 分 别 为 10.877 ± 4.124 和 8.399 ± 4.157 h 基 因 突 变 组 与 基 讨 论 瑞 舒 伐 他 汀 能 显 著 降 低 低 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇 (LDL-C) 甘 油 三 酯 (TG) 及 升 高 高 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇 (HDL-C) 水 平 国 内 外 研 究 表 明, 与 同 类 药 物 相 比, 其 改 善 高 脂 血 症 的 作 用, 优 于 其 他 同 等 剂 量 的 他 汀 类 药 物 [2], 并 具 有 优 良 的 药 物 代 谢 动 力 学 特 征 和 药 物 相 互 作 用 少 等 优 点 [3], 这 说 明 瑞 舒 伐 他 汀 是 一 种 更 为 有 效 安 全 的 新 型 他 汀 类 药 物 [4], 但 是 瑞 舒 伐 他 汀 在 人 体 药 代 动 力 学 和 药 效 学 方 面 存 在 明 显 的 个 体 差 异 遗 传 药 理 学 的 研 究 发 现 药 物 代 谢 酶 药 物 转 运 体 和 受 体 的 遗 传 多 态 性 是 造 成 药 物 体 内 处 置 和 清 除 个 体 差 异 的 决 定 性 因 素 OATP 是 摄 入 型 转 运 体 中 的 一 大 类, OATP 在 体 内 广 泛 分 布 于 肝 脏 肾 脏 脑 和 小 肠 中 [5], 该 转 运 体 的 遗 传 多 态 性 可 对 由 其 所 转 运 的 药 物 在 体 内 的 药 代 动 力 学 过 程 产 生 影 响 由 于 瑞 舒 伐 他 汀 结 构 中 极 性 的 甲 磺 酰 胺 基 的 存 在, 使 其 被 动 扩 散 能 力 较 低, 从 而 难 于 进 入 非 肝 细 胞, 但 它 却 可 通 过 OATP 被 肝 细 胞 大 量 摄 入 [6] 通 过 对 筛 选 出 的 14 名 健 康 受 试 者 进 行 人 体 药 代 动 力 学 研 究, 本 试 验 首 次 发 现 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 的 突 变 可 明 显 影 响 瑞 舒 伐 他 汀 在 我 国 健 康 人 体 内 的 药 代 动 力 学 特 征 结 果 显 示, OATP1B1 基 因 位 点 521T C 突 变 组 的 瑞 舒 伐 他 汀 吸 收 程 度 显 著 高 于 野 生 组, 而 其 清 除 率 则 明 显 低 于 野 生 组 上 述 试 验 结 果 提 示 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 的 突 变 可 能 是 影 响 瑞 舒 伐 他 汀 的 药 代 动 力 学 特 性 的 重 要 原 因 之 一
700 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2011, 46 (6): 695 700 瑞 舒 伐 他 汀 主 要 通 过 胆 汁 分 泌, 以 原 形 排 出 体 外, 约 10% 的 药 物 经 CYP2C9 代 谢, 由 于 代 谢 量 少, CYP2C9 功 能 的 影 响 对 瑞 舒 伐 他 汀 的 药 代 动 力 学 无 明 显 影 响 [7] 另 外, 国 内 有 学 者 报 道 BCRP421C > A [8, 对 瑞 舒 伐 他 汀 的 药 代 动 力 学 有 影 响 9] 因 此, 瑞 舒 伐 他 汀 的 药 代 动 力 学 个 体 差 异 并 非 单 个 转 运 体 功 能 改 变 导 致, 因 此, 有 必 要 将 多 个 因 素 综 合 考 虑 到 目 前 为 止, 他 汀 类 药 物 治 疗 疗 效 毒 副 反 应 和 [10, 基 因 多 态 性 之 间 的 相 关 研 究 还 很 缺 乏 11], 本 试 验 作 为 尝 试 性 研 究 只 选 取 了 14 名 受 试 者, 样 本 量 较 小, 今 后 的 研 究 应 在 更 大 的 样 本 人 群 中 进 一 步 证 实 瑞 舒 伐 他 汀 药 代 动 力 学 与 OATP1B1 基 因 位 点 521T C 突 变 的 关 系, 并 观 察 该 基 因 突 变 对 高 脂 血 症 患 者 在 接 受 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 后 降 脂 疗 效 的 影 响 References [1] Zhang W. Pharmacogenetics Study of OATP1B1 ( 有 机 阴 离 子 多 肽 OATP1B1 的 遗 传 药 理 学 研 究 ) [D]. Changsha: Central South University, 2006. [2] Davidson M, Ma P, Stein EA, et al. Comparison of effects on low-density lipoprotein cholesterol and high-density lipoprotein cholesterol with rosuvastatin versus atorvastatin in patients with type IIa or IIb hypercholesterolemia [J]. Am J Cardiol, 2002, 89: 268 275. [3] Bernini F, Catapano AL. Rosuvastatin: pharmacologic features [J]. Ital Heart J, 2003, 4 Suppl 7: 22S 32S. [4] Olsson AG, Pears J, McKellar J, et al. Effect of rosuvastatin on low-density lipoprotein cholesterol in patients with hypercholesterolemia [J]. Am J Cardiol, 2001, 88: 504 508. [5] Kim RB. Organic anion-transporting polypeptide (OATP) transporter family and drug disposition [J]. Eur J Clin Invest, 2003, 33 Suppl 2: 1 5. [6] Kitamura S, Maeda K, Wang Y, et al. Involvement of multiple transporters in the hepatobiliary transport of rosuvastatin [J]. Drug Metab Dispos, 2008, 36: 2014 2023. [7] Lee E, Ryan S, Birmingham B, et al. Rosuvastatin pharmacokinetics and pharmacogenetics in white and Asian subjects residing in the same environment [J]. Clin Pharmacol Ther, 2005, 78: 330 341. [8] Zhang W, Yu BN, He YJ, et al. Role of BCRP 421C>A polymorphism on rosuvastatin pharmacokinetics in healthy Chinese males [J]. Clin Chim Acta, 2006, 373: 99 103. [9] Pasanen MK, Fredrikson H, Neuvonen PJ, et al. Different effects of SLCO1B1 polymorphism on the pharmacokinetics of atorvastatin and rosuvastatin [J]. Clin Pharmacol Ther, 2007, 82: 726 733. [10] Schmitz G, Drobnik W. Pharmacogenomics and pharmacogenetics of cholesterol-lowering therapy [J]. Clin Chem Lab Med, 2003, 41: 581 589. [11] Dornbrook-Lavender KA, Pieper JA. Genetic polymorphisms in emerging cardiovascular risk factors and response to statin therapy [J]. Cardiovasc Drugs Ther, 2003, 17: 75 82.