吉林省科技发展计划项目申报书7175

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1 计划类别 : 项目类别 : 支持方向 : 管理处室 : 基础研究计划自然科学基金项目重点项目基础处项目名称 : 申报主持单位 ( 盖章 ): 项目负责人 : 猪口蹄疫病毒猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒抗体高通量液相芯片检测系统的建立中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所夏志平通讯地址 : 吉林省长春市净月经济开发区柳莺西路 666 号固定电话 : 移动电话 : 传真 : 邮编 : 电子邮箱 : zipxia@126.com 填报日期 : 吉林省科学技术厅二 O 一二年八月制

2 一申报项目基础信息项目名称猪口蹄疫病毒猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒抗体高通量液相芯片检测系统的建立项目所属学科畜牧兽医科学技术项目所属专业疫病防控经费预算总额 15.0 万元, 其中申请经费 15.0 万元起止年限至申报主持单位项目负责人申报参加单位 1 申报参加单位 2 申报参加单位 3 申报参加单位 4 申报参加单位 5 名称中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所所在宽城区地通讯地址吉林省长春市净月经济开发区柳莺西路 666 号邮编单位类别企业科研机构高等院校事业单位其它隶属中直省直其它帐号开户银行工行净月支行姓名夏志平性别男出生年月学历研究生学位博士身份证号职务副所长职称正高级电话工作单位中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所邮箱 zipxia@126.c 名称吉林省动物疫病预防控制中心所在地市辖区联系人于钦磊电话帐号开户银行名称所在地联系人帐号电话开户银行名称所在地联系人帐号电话开户银行名称所在地联系人帐号电话开户银行名称所在地联系人帐号电话开户银行中国银行长春皓月大路支行项目简介 ( 研永吉免疫无口蹄疫区建设 2012 年通过国家验收, 但免疫监测任务繁重猪瘟猪繁殖与呼发内容拟解吸障碍综合征猪伪狂犬病猪口蹄疫等 4 种重大猪病毒病是我国动物免疫监测的重点病种, 目前主要采用 ELISA 方法进行检测, 存在血清样品消耗量大检测难度大等不足本决关键技术项目拟采和生物信息学与现代免疫学方法, 对 4 种猪病毒的 B 细胞抗原表位进行预测验证预期技术经及制备, 优化液相蛋白芯片检测系统反应条件, 建立 4 种抗猪病毒血清抗体的高通量检测济指标等技术, 并完成其敏感性特异性及标准化研究, 申报临床试验通过本项目研究拟建立一 )(400 字以内种新型液相蛋白芯片技术, 利用少量血清样品 1 次完成针对 4 种重大猪病毒病抗体的高通量 ) 检测, 为进一步提升我省猪病免疫监测能力, 促进我省养猪业的发展提供技术支撑预期成果新产品新品种新工艺新装置新材料技术标准 ( 国际标准国家标准行业标准企业标准 ) 专利计算机软件论文论著研究报告其它预期专利授权获得国外发明专利 0 项, 国内专利 0 项, 其中发明专利 0 项第 1 页

3 成果预期作用形成自主研发能力突破关键技术试点示范规模生产推广应用提高经济效益其它第 2 页

4 二申报项目内容概况 (1) ( 一 ) 立项的必要性 (150 字以内 ) 口蹄疫猪瘟猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病均为目前我省猪群主要疫病, 对养猪业造成了巨大的经济损失为了及时掌握猪群对病原的抵抗力水平, 免疫监测是必要的手段液相蛋白芯片能够高通量同时监测多种病原的抗体水平, 具有检测快速, 特异性强, 检测限低, 检测范围广等特点 ( 二 ) 相关技术国内外发展现状与趋势 (150 字以内 ) 我国用于免疫监测的技术手段主要有酶联免疫吸附试验, 血凝抑制试验, 免疫荧光试验等, 这些方法都无法实现高通量同时监测多种病原抗体液相蛋白芯片在我国人医方面应用很广泛, 但是在动物医学方面尚处于起步阶段 ( 三 ) 前期工作基础 1 申报单位和项目负责人前期所开展的相关研究工作 (200 字以内 ); 本实验室十二五期间承担一项 863 课题的分课题 - 犬四种病毒的高通量检测方法的建立, 现已成功建立了犬血清中犬瘟热病毒抗体液相蛋白芯片检测系统 2 前期研究所取得的进展和阶段性成果 (200 字以内 ) 现在, 本实验室已完成了对猪口蹄疫病毒猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒猪伪狂犬病病毒 B 细胞抗原表位的预测, 正在合成相关多肽 ( 四 ) 研究 ( 开发 ) 内容和拟解决的关键技术问题 1 研究 ( 开发 ) 内容 (400 字以内 ) 研究的主要内容是建立一种高通量的液相芯片检测系统, 能够利用少量血清样品 1 次完成口蹄疫猪繁殖与呼吸综合征猪瘟和猪伪狂犬四种病原抗体的高通量检测, 可以实现对猪群的实时免疫监测及时掌握猪群对病原的抗体水平 (1) 液态芯片检测方法的建立包括四种病原的抗原多肽的预测, 合成和验证 ; 优化多肽与微球的偶联过程及检测过程 (2) 液态芯片检测方法标准化评价包括敏感性特异性检测限检测范围和对比试验 (3) 申报临床实验 2 拟解决的关键技术 (400 字以内 ) (1) 四种病原抗原多肽的预测, 合成和验证 ; (2) 液相蛋白芯片的建立第 3 页

5 二申报项目内容概况 (2) ( 五 ) 实施方案 1 技术路线(600 字以内 ) (1) 从口蹄疫病毒 VP1 蛋白猪繁殖与呼吸综合征病毒 E 蛋白猪瘟病毒 E2 蛋白和猪伪狂犬病病毒 ge 蛋白的生物信息学信息并结合单克隆抗体的分析, 推导出蛋白质免疫主要抗原表位的氨基酸序列, 然后合成这一段多肽作为抗原 (2) 抗原多肽是通过 sulfo-smcc 共价偶联于微球之上 sulfo-smcc 包含一个 -NHS 残基亚胺基团, 能够同伯氨基和巯基反应微球表面带有巯基, 抗原多肽具有伯氨基 sulfo-smcc 用量的多少及孵育时间直接影响偶联的效果, 需要通过不断地试验来确定 sulfo-smcc 的用量及孵育时间 (3) 功能微球抗体和荧光二抗形成三明治样复合物在反应过程中血清的稀释倍数荧光二抗稀释倍数和孵育时间都会影响实验结果我们通过棋盘法检测同一个样本, 比较实验结果, 从而对液相蛋白芯片进行优化 (4) 对新建的液相蛋白芯片进行评价, 包括特异性, 敏感性, 检测限, 检测范围和比对试验 2 实施方案( 组织方式产学研合作机制等 )(200 字以内 ) 联合省内种猪场进行液相芯片高通量抗体检测的评价工作, 并对该方法进行推广, 已达到无疫病地区标准 ( 六 ) 预期成果及指标 1 预期技术指标(200 字以内 ) (1) 得到四种病原具有抗原性的多肽 (2) 成功建立四种病原的液相蛋白芯片 2 预期经济指标(100 字以内 ) 建立口蹄疫猪瘟猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病抗体水平检测体系, 即液相芯片系统预防疫病的爆发, 促进我省养猪业的发展, 减少免疫不当和免疫空白对养殖业经济损失 3 预期产业应用前景和社会生态效益 (100 字以内 ) 目前我省多数种猪场及规模化猪场均接种口蹄疫猪瘟猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病疫苗, 但却没有标准化高通量的抗体检测方法因此该方法的应用前景广阔, 具有社会和生态效益 4 成果提供形式( 授权专利技术标准新技术新产品新装置论文专著的数量等 )(100 字以内 (1) 撰写技术标准 1 份 (2) 发表论文 2 篇, 其中 sci 论文 1 篇 5 人才队伍建设( 培养博士硕士数等 )(100 字以内 ) 培养硕士研究生 1 名第 4 页

6 三项目团队构成项目负责人简介 ( 参与过的主要研究开发和成果转化项目及任务分工, 授权发明专利, 在国内外核心期刊上发表的代表性学术论文等研究成果情况 )(350 字以内 ): 夏志平, 研究员, 军事医学院军事兽医研究所工作, 主要从事动物病理诊断与预警研究主要论著 ( 通讯作者 ): (1) Aerosolized avian influenza virus by laboratory (2) Laboratory-attenuated vesicular stomatitis virus profile in BHK cells.arch Virol. Journal. Volume; P1 项目负责人姓名性别年龄夏志平男 45 主要参加人李志萍女 30 曲晗女 26 参加人员于钦磊男 30 王晓锋男 46 所在单位及部门军事医学科学院军事兽医研究所军事医学科学院军事兽医研究所军事医学科学院军事兽医研究所吉林省动物疫病预防控制中心吉林省动物疫病预防控制中心职称现从事专业在本项目中承担的主要工作副所长动物病理诊断项目组织科研助理动物病理学建立液态芯片检测方法科研助理预防兽医学特异性敏感性评价兽医师流行病学调查提供血清兽医师流行病学调查血清采集第 5 页

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8 四经费预算表单位 : 万元序号科目名称合计申请经费自筹经费申报单位参加单位 1 一经费支出合计 ( 一 ) 直接费用设备费 (1) 购置设备费用 (2) 原设备升级改造费用 (3) 设备租赁费 (4) 非标设备 ( 试验装置 ) 试制费材料费测试化验检验试验加工费燃料动力费差旅费会议费国际合作与交流费出版/ 文献 / 信息传播 / 知识产权事务费劳务费专家咨询费其它支出 ( 二 ) 间接费用房屋租赁费水电费暖消耗费绩效支出其它支出二经费来源合计申请专项经费资助 / / 26 2 自筹经费来源 0.0 / (1) 其它财政拨款 0.0 / (2) 单位自有资金 0.0 / (3) 其它资金 0.0 / 第 7 页

9 五年度计划安排 (1) 年月项目计划完成的内容及目标 1 内容: 分析口蹄疫病毒 VP1 蛋白猪繁殖与呼吸综合征病毒 E 蛋白猪瘟病毒 E2 蛋白和猪伪狂犬病病毒 ge 蛋白序列, 利用 Blast 选出在所有序列中相似度中最高的序列, 采用相关生物信息学软件, 根据其理化性质, 二级结构, 亲水性, 表面可及性, 柔韧性, 抗原指数, 跨膜螺旋, 蛋白相互作用位点, 蛋白功能位点等特性, 预测其抗原表位目标 : 合成四种病原具有抗原性的多肽 2014 年 01 月至 2014 年 06 月 2014 年 07 月至 2014 年 12 月 1 内容: 对合成的多肽进行配对验证目标 : 按照预测的氨基酸序列合成多肽, 利用自建的 ELISA 方法, 验证这些多肽的抗原性 1 内容: 抗原多肽通过 sulfo-smcc 共价偶联于微球之上, 并与抗体和荧光二抗形成三明治样复合物, 通过流式细胞仪对 PE 荧光强度的检测, 显示阴阳性结果在三者反应的过程中对其用量的配比关系, 孵育时间进行优化目标 : 多肽与微球偶联及验证 2015 年 01 月至 2015 年 06 月第 8 页

10 五年度计划安排 (2) 年月项目计划完成的内容及目标 1 内容: 利用四种病原的阳性血清, 在流式细胞仪上进行检测, 绘制标准曲线目标 : 建立四种病原的液相蛋白芯片检测方法 2015 年 07 月至 2015 年 12 月 1 内容: 新建的液相蛋白芯片进行评价, 包括特异性, 敏感性, 检测限, 检测范围和比对试验, 并且申请临床试验目标 : 评价四种病原液相芯片检测法, 申请临床试验 2016 年 01 月至 2016 年 06 月 1 内容: 对研究内容进行整理, 撰写技术标准 1 份, 发表论文 2 篇, 并整理结题报告目标 : 整理结题报告及发表文章 2016 年 07 月至 2016 年 12 月第 9 页

11 六任务分工及申请经费分配项目申报形式 : 独立合作产学研合作申报主持单位单位中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所任务申请经费 ( 万元 ) 参与方式 (1) 抗原性多肽预测合成 (2). 微球偶联多肽 (3) 液态芯片方法的建立 (4) 液态芯片特异性敏感性评价 10.5 万元 / 申报参加单位品吉林省动物疫病预防控制中心 (1) 提供阳性血清标准品和相关血清样 (2) 临床试验 4.5 万元合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托第 10 页

12 七申报单位与推荐部门意见申报主持单位意见 : 盖章年月日申报参加单位意见 : 盖章年月日盖章年月日盖章年月日盖章年月日盖章年月日推荐部门意见 : 盖章盖章年月日年月日第 11 页

吉林省科技发展计划项目申报书21847

吉林省科技发展计划项目申报书21847 计划类别 : 项目类别 : 管理处室 : 自然科学基金自然科学基金基础处项目名称 : 申报主持单位 ( 盖章 ): 项目负责人 : 通讯地址 : 三焦辨证法对过敏性紫癜兔模型的 IgA T 细胞及 TNF-a 表达水平影响的研究 ( 白求恩专项 ) 长春中医药大学原晓风吉林长春市长春市工农大路 1478 号固定电话 : 0431-81953837 移动电话 : 15948000812 传真