吉林省科技发展计划项目申报书8637

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锄甘
7 years ago
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1 计划类别 : 项目类别 : 支持方向 : 管理处室 : 科技攻关计划重点科技攻关项目中药生物药和药品食品检测仪器与制药设备医药办项目名称 : 申报主持单位 ( 盖章 ): 项目负责人 : 通讯地址 : 肺炎常见病原体的高效分子诊断试剂开发吉林大学孙亚娟吉林省长春市南关区自强街 218 号医院吉林大学第二固定电话 : 移动电话 : 传真 : 邮编 : 电子邮箱 : sunyajuan_2008@sina.com 填报日期 : 吉林省科学技术厅二 O 一二年八月制

2 一申报项目基础信息项目名称肺炎常见病原体的高效分子诊断试剂开发项目所属学科生物学项目所属专业生物化学与分子生物学经费预算总额 40.0 万元, 其中申请经费 20.0 万元起止年限至申报主持单位项目负责人申报参加单位 1 申报参加单位 2 申报参加单位 3 申报参加单位 4 申报参加单位 5 名称吉林大学所在市辖区地通讯地址吉林省长春市南关区自强街 218 号邮编单位类别企业科研机构高等院校事业单位其它隶属中直省直其它帐号开户银行中国银行长春前进大街支行姓名孙亚娟性别女出生年月学历研究生学位博士身份证号职务主治医师职称中级电话工作单位吉林大学邮箱名称所在地联系人帐号电话开户银行名称所在地联系人帐号电话开户银行名称所在地联系人帐号电话开户银行名称所在地联系人帐号电话开户银行名称所在地联系人帐号电话开户银行项目简介 ( 研应用 NASBA 技术结合微孔板液相杂交法 (NASBA-MP) 针对肺炎这种临床常见感染性疾病发内容拟解, 研究并开发出灵敏度高特异性强, 操作简便的病原体早期筛查诊断系统, 用于临床诊决关键技术断及筛查针对每个病原体设计基因特异引物和探针, 优化核酸扩增的最佳反应条件, 最终确定试剂预期技术经盒的最佳反应条件 ; 进行多重化实验研究, 使检测试剂盒能一次性检测多种肺炎相关病原济指标等体在降低检测成本, 提高检测效率的同时改进该技术所需的设备, 使用便携化一体化 )(400 字以内的仪器, 便于各级医疗机构开展临床检测, 提高传染病的监控水平, 确保人民健康 ) 预期成果新产品新品种新工艺新装置新材料技术标准 ( 国际标准国家标准行业标准企业标准 ) 专利计算机软件论文论著研究报告其它预期专利授权获得国外发明专利 0 项, 国内专利 1 项, 其中发明专利 1 项成果预期形成自主研发能力突破关键技术试点示范规模生产推广应用提高经济效益第 1 页

3 作用其它第 2 页

4 二申报项目内容概况 (1) ( 一 ) 立项的必要性 (150 字以内 ) 肺炎是呼吸系统常见感染性疾病之一, 目前国内外对肺炎相关病原体的临床分子生物学诊断还不普及, 而根据临床表现往往无法准确判断病原体从而选择特异的抗生素, 故明确病原学诊断可以为抗生素治疗提供可靠的依据, 在为患者选择最佳治疗方案避免滥用抗生素方面具有重大意义 ( 二 ) 相关技术国内外发展现状与趋势 (150 字以内 ) 病原体核酸检测目前是一项应用广泛的技术, 但 PCR 技术本身存在假阳性率高等局限, 依赖核酸序列扩增技术 (NASBA 技术 ) 已成功应用于病毒细菌等检测, 具低成本高灵敏度及特异性等优势, 将该技术结合微孔板液相杂交法建立的 NASBA-ELISA 方法在肺炎相关病原体的筛查方面具有广阔的市场前景 ( 三 ) 前期工作基础 1 申报单位和项目负责人前期所开展的相关研究工作(200 字内 ); 项目负责人在病原微生物检测研究方面曾获得校青年基金项目项目的支持 ; 在以上基金的资助下建立了人免疫缺陷病毒 -1 NASBA-ELISA 检测方法, 相关研究将于国际检验医学 2014 年第 35 卷 2 月发表, 作为第三发明人申请国家发明专利一项, 专利名称人免疫缺陷病毒 -1 NASBA-ELISA 检测试剂盒请号 : 前期研究所取得的进展和阶段性成果 (200 字以内 ) 本课题组已完成肺炎链球菌流感嗜血杆菌支原体衣原体单纯疱疹病毒柯萨奇病毒 EB 病毒流感病毒核酸提取, 完成引物及探针的设计及合成 ( 四 ) 研究 ( 开发 ) 内容和拟解决的关键技术问题 1 研究( 开发 ) 内容 (400 字以内 ) 1) 确定引起肺炎的病原体种类和范围, 搜集所涉及的病原体有关最新临床信息和生物信息 2) 肺炎病原体的分类研究针对引发肺炎所涉及的病原体, 依据其临床上的重要性临床表现治疗措施等方面进行合理组合分类, 实现在一个反应管中一次性检测多种相关病原体, 方便临床应用 3)NASBA 多重病原体检测试剂盒的开发 1 在得到可引起人肺炎病原体的信息基础上, 我们将针对每一种病原体进行引物和探针的设计, 建立引物数据库 2 利用 PCR 或 RT-PCR 检测技术方法对上述设计的每一对引物进行验证, 以保证引物可以在实际反应中使用 3 按照上述病原体初步的相关性组合, 我们将验证这些病原体的扩增引物是否可在同一反应管中对各自的目标序列进行特异性扩增 4 对试剂盒的反应条件和操作步骤进行优化, 主要包括核酸样本的制备方法的研究改进, 反应条件的调整以期望提高检测的稳定性和灵敏度 4) 完成检测试剂盒的临床试验研究 2 拟解决的关键技术 (400 字以内 ) 1)NASBA-MP 检测试剂盒的多重化问题目前, 市场上还没有多重筛查的检测试剂盒面市因此在课题实施过程中我们将进行大量的引物优化和验证实验当然目前已有大量多重核酸扩增的研究报道, 因而实现检测试剂盒的多重化在理论和技术上都是切实可行的 2) 为了能够更好的实地应用该技术, 改进此技术所需的设备, 尽可能将此技术所使用的仪器便携化一体化也是我们应该研究的第 3 页

5 二申报项目内容概况 (2) ( 五 ) 实施方案 1 技术路线(600 字以内 ) 1) 建立肺炎病原体样本库 2) 将侯选病原体按照临床上的重要性和相关性的情况进行合理分类组合, 实现在一个反应管中一次性检测多个病原体的目的经多方面优化, 若不能解决每组内多对引物之间的干扰问题, 需根据具体情况考虑适当调整病原体的分组情况, 以达到最佳的检测效果病原体分组如下 : 第一组, 肺炎链球菌流感嗜血杆菌 EB 病毒流感病毒第二组 : 支原体衣原体单纯疱疹病毒柯萨奇病毒核 3) 设计特异的引物和探针, 在引物避免形成引物二聚体同时使组内各对引物的 G+C 含量大致相近 4) 反应特异性验证 : 提取每个病原体的基因组 DNA 或 RNA, 对以上设计的 NASBA-MP 的引物, 利用常规 PCR 或逆转录 PCR 技术分别验证每对引物的特异性 5)NASBA-MP 检测条件的优化 : 包括用 NASBA-MP 技术多重扩增时各条引物酶 NTP dntp 捕获探针检测探针的浓度杂交缓冲液和检测缓冲液中各成分的浓度 6) 反应灵敏度的验证 : 利用设计的引物和探针检测 NASBA-MP 技术对病原体的最低检出限 7) 进行 NASBA-MP 检测病原体的多重化研究 : 将每组内所有病原体的引物都放在同一管内进行扩增, 以保证每个病原体都能得到有效的检出 8) 设立检测过程的阳性对照 : 将每个病原体引物对的靶基因克隆化, 并经体外转录得到 RNA, 用作试剂盒检测的阳性对照 2 实施方案( 组织方式产学研合作机制等 )(200 字以内 ) 项目由承担主要从事临床样本的采集生物信息分类病原微生物的核酸提取引物及探针设计最佳反应条件确立及临床实验 ( 六 ) 预期成果及指标 1 预期技术指标 (200 字以内 ) 1)NASBA 能够灵敏并特异的完成对病原体的扩增 1)NASBA-MP 病原体检测试剂盒能一次性检测多种相关病原体, 实现多重化筛查这将极大的提高检测效率并降低成本 2) 改进此技术所需的设备, 将此技术使用的便携化一体化的仪器完成 4) 试剂盒保存期在 6 个月以上 2 预期经济指标 (100 字以内 ) 开发的 NASBA 检测试剂盒是一种高效的多重检测试剂盒, 能对 4 种病原体同时进行检测, 极大地节约了时间和劳动力, 预计每个病原体检测费用为 15 元可以广泛各级医疗机构对肺炎的实验室确诊 3 预期产业应用前景和社会生态效益 (100 字以内 ) 第 4 页

6 NASBA 检测试剂盒投资小操作简单灵敏度和特异性高基层临床医疗机构只需要一台酶标仪和水浴锅等简单设备就可以病原体检测, 从根本上提高我国肺炎病原体的检测水平 4 成果提供形式 ( 授权专利技术标准新技术新产品新装置论文专著的数量等 )(100 字以内 ) 申请国家发明专利一项, 发表核心期刊论文 2 篇, 开发新产品一项 5 人才队伍建设 ( 培养博士硕士数等 )(100 字以内 ) 计划培养临床医学博士研究生 1-2 人第 5 页

7 三项目团队构成项目负责人简介 ( 参与过的主要研究开发和成果转化项目及任务分工, 授权发明专利, 在国内外核心期刊上发表的代表性学术论文等研究成果情况 )(350 字以内 ): 项目负责人做为主要参加人参加国家自然科学基金项目帕金森病蛋白质组学研究, 目前已经结题作为第三发明人申请国家发明专利一项, 专利名称人免疫缺陷病毒 -1 NASBA-ELISA 检测试剂盒申请 : 发表核心期刊论文 5 篇项目负责人姓名性别年龄孙亚娟女 32 主要参加人陈秋惠女 49 胡国华男 60 参加人员徐阳春女 32 张海娜女 34 刘孝菊女 34 所在单位及部门职称现从事专业在本项目中承担的主要工作主治医师临床医学总体实验方案设计副主任医师临床医学临床样品核酸提取主任医师临床医学引物及探针设计及其验证反应多重化研究主治医师临床医学反应灵敏度及特异性研究主治医师临床医学临床试验研究主治医师生物化学与分子生物学试剂保存期研究张颖女 34 主治医师临床医学试剂反应条件优化第 6 页

8 第 7 页

9 四经费预算表单位 : 万元序号科目名称合计申请经费自筹经费申报单位参加单位 1 一经费支出合计 ( 一 ) 直接费用设备费 (1) 购置设备费用 (2) 原设备升级改造费用 (3) 设备租赁费 (4) 非标设备 ( 试验装置 ) 试制费材料费测试化验检验试验加工费燃料动力费差旅费会议费国际合作与交流费出版/ 文献 / 信息传播 / 知识产权事务费劳务费专家咨询费其它支出 ( 二 ) 间接费用房屋租赁费水电费暖消耗费绩效支出其它支出二经费来源合计申请专项经费资助 / / 26 2 自筹经费来源 20.0 / (1) 其它财政拨款 0.0 / (2) 单位自有资金 0.0 / (3) 其它资金 20.0 / 第 8 页

10 五年度计划安排 (1) 年月项目计划完成的内容及目标 1 内容: 用 PCR 及 RT-PCR 方法验证引物及探针的特异性目标 : 获得特异性高的引物及探针 2014 年 01 月至 2014 年 06 月 1 内容: 反应条件的优化研究及反应灵敏度测定目标 : 确定试剂组成及配方 2014 年 07 月至 2014 年 12 月 1 内容: 反应多重化研究目标 : 简化反应程序降低成本 2015 年 01 月至 2015 年 06 月第 9 页

11 五年度计划安排 (2) 年月项目计划完成的内容及目标 1 内容: 试剂盒保存期验证及重复性验证目标 : 确定试剂盒最佳保存时间及质量的重复性 2015 年 07 月至 2015 年 12 月 2016 年 01 月至 2016 年 06 月 1 内容: 试剂盒的临床试验研究目标 : 获取临床研究资料 1 内容: 整理研究资料, 发表研究论文, 撰写结题报告目标 : 获得试剂盒最优的实验方案, 准备结题 2016 年 07 月至 2016 年 12 月第 10 页

12 六任务分工及申请经费分配项目申报形式 : 独立合作产学研合作申报主持单位单位吉林大学任务申请经费 ( 万元 ) 参与方式完成肺炎常见病原体获得样品核酸提取及生物学分类试剂反应条件优化灵敏度及特异性实验反应多重化实验试剂保存期实验临床试验研究 20.0 万元 / 0.0 万元合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托申报参加单位合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托第 11 页

13 七申报单位与推荐部门意见申报主持单位意见 : 申报参加单位意见 : 盖章年月日盖章盖章年月日年月日盖章年月日盖章年月日盖章年月日推荐部门意见 : 盖章盖章年月日年月日第 12 页

福建农业学报材料与方法试验菌株引物主要仪器主要试剂细菌培养模板的制备反应条件扩增产物的检测特异性试验敏感性试验分离菌株检测产物的克隆及序列测定结果与分析

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