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1 Detection and analysis of Anti-SARS-CoV Immunoglobulin G and associated risk factor among healthcare workers in Taiwan 1

2 2 Lab meeting

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5 Abstract Severe acute respiratory syndrome (SARS) is an emerging infectious disease that first manifested in humans in China in November 2002 and has subsequently spread worldwide. According to the World Health Organization, 8098 cases occurred during the outbreak, and healthcare workers accounted for 1707 (21%) of the cases. To determine the prevalence of SARS infection of healthcare workers in Taiwan, we performed a serosurvey by the recombinant protein-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to test for immunoglobulin (Ig) G antibodies to the SARS coronavirus (SARS-CoV) among 1525 healthcare workers in 26 hospitals that admitted SARS patients in mid-may, Then, a case-control study was carried out to evaluate the risk factors of SARS infection among the healthcare workers. A total of 52 infected staffs and 78 hospital and age matched non-infected controls were recruited. The seroprevalence rate was 3.68% (58/1525) for healthcare workers. Univariate analysis showed that with the habit of drinking coffee or tea, taking care of fever patients more than 8 days, ever practice of CPR, suction of sputum, taking patient s temperature, use of P100 mask, use of N95 mask, use of face cover, use of goggles, use of gown, removing gloves after work, working in isolation area or fever screen station were significantly protective factors. In addition, eating jujube was a risk factor for SARS infection. Then, the multivariate analysis showed that use of P100 OR: 0.056, 95%CI: , p value: <0.001and working in isolation area OR: 0.153, 95%CI: , p value: 0.027or fever screen stationor: 0.103, 95%CI: , p value: 0.046were the most important protective factors for SARS infection. These findings suggest that nosocomial infection of SARS can be prevented effectively by use of P100 and the triage screening in emergency departments. Key wordssevere acute respiratory syndromecase-control study healthcare workerssars coronavirusseroprevalence 5

6 6

7 7

8 8

9 SARS-CoV 9

10 WHO Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS) Ho and Su, 2004 Twu et al., 2003 ; Hui et al., 2004 SARS-CoV SARS-CoV VERO E6 Peiris et al., 2004SARS-CoV 10

11 Peiris et al., 2004; Peiris et al., 2003 Peiris et al., 2003 Ho and Su 2004; Hui et al., 2004; Leung et al., 2004; Lau et al., 2004 Leung et al., 2004; Xu et al., 2004 Poutanen et al., 2003 Anderson et al., 2004; Chen et al.,

12 Moira et al., 2004 high risk population McDonald et al.,

13 13

14 SARS SARS SARS World Health Organization, WHO SARS Peiris et al. 2004; Chen et al.,

15 15 (Severe Acute Respiratory Syndrome SARS) WHO 21 (emerging infectiousdisease) SARS

16 / SARS SARS Hui et al., 2004 E (diarrhea) SARS SARS 69 SARS Lau et al., 2004; Tomlinson and Cockram 2003; Lee et al., 2003) 16

17 17 SARS (Carlo Urbani) (57) SARS SARS SARS SARS SARS SARS SARS (McDonald et al., 2004

18 18 80 SARS Ho et al.,2004 SARS SARS SARS SARS Tambyah 2004 Chen et al., SARS

19 Chen et al., 2004 SARS Hsieh et al., 2005SARS Ho and Su 20 probable cases Esswein et al., 2004 WHO 19

20 SARS Ksiazek et al., 2003; Update MMWR 2003 Drosten et al., 2003 SARS Coronaviridae Marra et al.,2003 SARS Rota et al., 2003 SARS-CoV nm (1nm RNA RNA glycoprotein RNA Membrane protein, M Envelope protein, E Spike protein, S Haemagglutinin-esterase, HE 20

21 SARS-CoV RNA base pair, bp) SARS-CoV SARS-CoV Vero E6 SARS-CoV RNA SARS SARS MMWR 21 Mar,

22 SARS RT-PCR Real-time PCR ELISA IFA NT SARS Severe Acute Respiratory Syndrome Taiwan, MMWR SARS SARS Peiris et al., 2003 SARS 22

23 WHO SARS Suspect Case Probable Case Respiratory Distress Syndrome 23

24 24

25 25 McDonald et al., 2004 Personal protective equipment, PPE

26 SARS 26

27 SARS Chang et al., 2004 SARS World Health Organization 2003 Peiris et al., 2003; James et al., 2003 SARS McDonald et al., 2004 SARS nebulizer Lau et al., 2003; Lee et al., 2003; Tomlinason and Cockram 2003; Lau et al.,

28 and Sung 2004 et al., 2003 Yu Yen et al., 2006 Lau e al., 2004; Yu and Sung 2004 Shaw

29 SARS 29

30 30

31 31

32 32

33 33

34 34

35 Chang et al., 2004; Chen et al., 2005 SARS 35

36 36

37 37

38 38 Institutional Review BoardIRB

39 Enzyme-linked immunosorbent assayelisa Indirect Immunofluorescence assay Seroconversion Definitive criterion Serosurveillance Hsueh PR, Kao CL et al., 2004 ELISA Enzyme-linked immunosorbent assayelisa conjugate TMB AB Substrate A +Substrate B 39

40 100µl Stop solution2n H 2 SO 4 Immunofluorescence assayifa Indirect Immunofluorescence assayifa coated SARS-coronavirusSARS-CoV EUROIMMUN Co. reagent tray field SARS-CoV infected cells non-infected cells 2 BIOCHIP slideincubate BIOCHIP slide PBS-Tween Wash buffer fluorescein-labelled anti-human globulin conjugate BIOCHIP slide BIOCHIP slide PBS-Tween Wash buffer BIOCHIP slide glycerol/pbsbiochip slide 40

41 Logistic regression analysis Odd ratio, OR 41

42 Lin et al.,

43 ELISA IFA B8 B6 ICU 43

44 mean±sd mean±sd 44

45 45 SARS-CoV SARS-CoV SARS-CoV

46 OR: 2.40, 95%CI: , p : OR: 0.41, 95%CI: , p :

47 CPROR: 0.31, 95%CI: , p : OR: 0.48, 95%CI: , p : OR: 0.32, 95%CI: , p : P100OR: 0.06, 95%CI: , p : <0.001 N95OR: 0.35, 95%CI: , p : 0.006N95 OR: 0.38, 95%CI: , p : OR: 0.23, 95%CI: , p : 0.001OR: 0.26, 95%CI: , p : OR: 0.10, 95%CI: , p : <

48 SARS-CoV OR: 0.40, 95%CI: , p : X OR: 0.33, 95%CI: , p : OR: 0.05, 95%CI: , p : OR: 0.25, 95%CI: , p :

49 49

50 Chen et al., 2005) Fung asymptomatic infection Lee H.K.K, Tso E Y.K et al., 2003 IP M et al., 2004 Chen et al.,

51 ELISA OD IFA 1:8 Chang et al., 2004; Smith et al., 2005 OR: 0.22, 95%CI: , p : <0.001 OR: 0.29, 95%CI: , p : caffeine 51

52 Candurra and Damonte OR: 2.40, 95%CI: , p : OR:, 95%CI:, p : 52

53 SARS-CoV Loeb M P100OR: 0.05, 95%CI: , p : <0.05 OR: 0.597, 95%CI: , p : OR: 0.052, 95%CI: , p : <0.05 OR: 0.063, 95%CI: , p : <0.05 Lau et al., 2004; Teleman et al., 2004; Chia et al.,

54 Chen et al., 2004) 54

55 55

56 Duan SM Duan et al., 2003 recall bias Yu and Sung. 2004; Lau et al., 2004; Teleman et al.,

57 57

58 Anderson RM, Fraser C, Ghani AC, et al. Epidemiology, transmission dynamics and control of SARS: the epidemic. Philos trans R Soc Lond B Biol Sci 2004; 359(1447): Candurra NA, Damonte EB. Inhibition of Junin virus multiplication by caffeine. Rev Argent Microbiol Jul-Sep; 31(3) : Chang SC, Wang JT, Huang LM, et al. Longitudinal Analysis of Severe Acute Respirastory Syndrome(SARS) Coronavirus-Specific Antibody in SARS Patients.Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology.2005;12: Chang WT, Kao CL, Chung MY, et al. SARS exposure and emergency deparement workers. Emerging Infectious Diseases. 2004; 10(6): Chen WK, Cheng YC, Chung YT, Lin CC. The impact of the SARS outbreak on an urban emergency department in Taiwan. Med Care 2005; 43(2): Chen YC, Chen PJ, Chang SC, et al. Infection control and SARS Transmission among Healthcare Workers, Taiwan. Emerging Infectious Diseases 2004; 10(5): Chen YC, Huang LM, Chan CC, et al. SARS in Hospital Emergency Room. Emerging Infectious Diseases. 2004; 10(5):

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65 65

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68 68

69 69

70 70

71 71

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75 Cumulative number of cases Areas Female Male Total Median age (range) Number of deaths a Case fatality ratio (%) Number of imported cases (%) Number of HCW affected (%) Date onset first probable case Date onset last probable case Australia Canada (1-45) 49 (1-98) (100) 0 (0) 26-Feb-03 1-Apr (2) 109 (43) 23-Feb Jun-03 China b Not available Not Applicable 1002 (19) 16-Nov-02 3-Jun-03 China, Hong Kong Special Administrative Region (0-100) Not Applicable 386 (22) 15-Feb May-03 China, Macao Special Administrative Region (100) 0 (0) 5-May-03 5-May-03 China, Taiwan c 42 (0-93) (6) 68 (20) 25-Feb Jun-03 France Germany India Indonesia Italy (26-61) 44 (4-73) 25 (25-30) 56 (47-65) 30.5 (25-54) (100) 2 (29) d 21-Mar-03 3-May (100) 1 (11) 9-Mar-03 6-May (100) 0 (0) 25-Apr-03 6-May (100) 0 (0) 6-Apr Apr (100) 0 (0) 12-Mar Apr-03 Kuwait (100) 0 (0) 9-Apr-03 9-Apr-03 Malaysia Mongolia (26-84) 32 (17-63) (100) 0 (0) 14-Mar Apr (89) 0 (0) 31-Mar-03 6-May-03 New Zealand (100) 0 (0) 20-Apr Apr-03 75

76 Philippines (29-73) (50) 4 (29) 25-Feb-03 5-May-03 Republic of Ireland (100) 0 (0) 27-Feb Feb-03 Republic of Korea (20-80) (100) 0 (0) 25-Apr May-03 Romania (100) 0 (0) 19-Mar Mar-03 Russian Federation Not Available 0 (0) 5-May-03 5-May-03 Singapore (1-90) (3) 97 (41) 25-Feb-03 5-May-03 South Africa (100) 0 (0) 3-Apr-03 3-Apr-03 Spain (100) 0 (0) 26-Mar Mar-03 Sweden (33-55) (100) 0 (0) 28-Mar Apr-03 Switzerland (100) 0 (0) 9-Mar-03 9-Mar-03 Thailand (2-79) (100) 1 (11) d 11-Mar May-03 United Kingdom (28-74) (100) 0 (0) 1-Mar-03 1-Apr-03 United States Viet Nam (0-83) 43 (20-76) (100) 0 (0) 24-Feb Jul-03 e (2) 36 (57) 23-Feb Apr-03 Total

77 SARS probable cases n = 664* Virus PCR or Ab (+) n = 346 (52.1%) survival n = 273 deceased (n = 73) CFR = 21.1% Both negative n = 317 (47.8%) survival n = 210 directly due to SARS n = 37 CFR = 10.7% SARS related n = 36 CFR = 10.4% Deceased (n = 107) CFR = 33.8% 77

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