二试剂盒组成和储存组成内容 DK (50 次 ) DK (200 次 ) 原理与用途 Proteinase K * 1 ml 1 ml 4 降解蛋白 Buffer SLA 30 ml 120 ml 分散裂解细胞释放 DNA Buffer GD2 20 ml 80 ml

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1 上海莱枫生物科技有限公司网址 : 订货电话 : 传真 : 技术解答技术支持 : ( 上海 ) 通用型基因组 DNA 快速提取试剂盒一产品简介本试剂盒采用独特的裂解液, 配合 proteinase K 裂解细胞释放基因组 DNA, 释放的基因组 DNA 被选择性吸附到硅胶膜上获得的 DNA 包括基因组 DNA 线粒体和病毒 DNA, 可直接应用于于酶切 PCR 基因芯片 NGS 等后续实验适合处理以下几类来源的非液体类样品 : A. 人和动物组织 :1-25 mg 动物组织或穿刺组织福尔马林浸泡的组织石蜡包埋切片鼠尾毛囊指甲等 B. 干燥的人和动物体液 : 滤纸纸巾或样品采集卡上的干血点和唾液香烟过滤嘴等 C. 可离心收集的 ~ 动物细胞 D. 可离心收集的 ~ 细菌 E. 可离心收集的 ~ 酵母或真菌细胞 F mg 真菌菌块或菌丝方法简便, 具备以下特点 : 处理人和动物组织无需研磨处理人和动物组织分散细胞和释放 DNA 为同一个步骤, 无需使用两个温度分两个步骤操作处理离心收集的细菌和细胞在悬浮样品后直接进行裂解, 无需再添加裂解试剂处理石蜡包埋切片无需脱蜡处理部分样品需用户自备或购买的试剂和耗材 : 从石蜡包埋切片中提取 DNA, 需用户购买过滤柱 -F(Cat#NC412) 从干燥于纸巾或滤纸的体液中提取 DNA, 需用户购买过滤柱 -N(NC414) 从革兰氏阳性细菌中提取基因组 DNA, 需用户自备或者购买 Lysozyme 裂解缓冲液 (Cat#RE103) 从金黄色葡萄球菌中提取基因组 DNA, 需用户自备或者购买 Lysostaphin(Cat#RE104) 从酵母中提取基因组 DNA, 需用户自备或者购买 Lyticase 裂解缓冲液 (Cat#RE102) 相关产品信息 : 目录号产品名处理样品产品特点 DK803 痕量 DNA 提取试剂盒痕量细胞体液和组织 ( 详见说明书 ) 更高的回收率对 DNA 片段大小无选择性 DK805 口腔拭子 DNA 快速提取试剂盒口腔拭子有效去除食物残渣 DNA 上海莱枫生物科技有限公司通用型基因组 DNA 快速提取试剂盒 9-1

2 二试剂盒组成和储存组成内容 DK (50 次 ) DK (200 次 ) 原理与用途 Proteinase K * 1 ml 1 ml 4 降解蛋白 Buffer SLA 30 ml 120 ml 分散裂解细胞释放 DNA Buffer GD2 20 ml 80 ml 调整 DNA 结合条件 Buffer WDA 30 ml 120 ml 洗涤去除蛋白 Buffer WB1 16 ml 65 ml 洗涤去除盐 DNA 吸附柱 -C15 50 个 200 个选择性吸附 DNA 收集管 50 个个 2 接收废液 1.5 ml 离心管 ( 用于洗脱 ) 50 个 200 个接收洗脱的 DNA TE 15 ml 30 ml 洗脱 DNA 说明书 1 份 1 份 * Proteinase K: 20 mg/ml, 室温保存 ; 如析出不溶物, 使用前摇晃混合均匀 Buffer WB1: 第一次使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇, 混合均匀 TE:10 mm Tris-HCl, 0.1 mm EDTA, ph 8.0(25 C) 所有试剂盒组成成分可于室温储存三注意事项 1. Proteinase K Buffer SLA Buffer GD2 和 Buffer EDA 含刺激性化合物, 避免沾染皮肤眼睛和衣服谨防吸入口鼻若沾染皮肤眼睛, 立即使用大量水或生理盐水冲洗沾染处, 必要时寻求医疗咨询 2. 使用后应及时盖紧试剂瓶盖子, 以免影响下次使用效果四样品处理方法索引处理样品方法页码五从 1-25 mg 动物组织或穿刺组织鼠尾毛囊指甲等样品中提取 DNA 3 六从石蜡包埋组织和切片中提取 DNA 4 七从福尔马林浸泡的组织中提取 DNA 5 八从干燥的体液中提取 DNA 6 九从动物细胞和革兰氏阴性菌中提取 DNA 7 十革兰阳性菌和真菌破壁方法 8-9 上海莱枫生物科技有限公司通用型基因组 DNA 快速提取试剂盒 9-2

3 五从 1-25 mg 动物组织或穿刺组织鼠尾毛囊指甲等样品中提取 DNA 56 水浴金属浴或温箱, 推荐使用恒温震荡仪 1. 称取 1-25 mg 动物组织或穿刺组织鼠尾毛囊指甲样品, 尽可能切碎或剪碎样品, 放入干净 1.5ml 离心管 ( 自备 ) 切碎或剪碎动物组织可以减少 2 的温育时间肌肉和内脏等组织可以切为肉泥状, 鼠尾可以剪切为薄片 2. 加入 400 μl Buffer SLA 和 20 μl Proteinase K,56 温育, 间断混合, 直至组织块完全被消化延长温育时间不影响效果, 可温浴过夜温浴时间因组织类型和大小而异, 例如切碎的肌肉组织约 30 min 即可消化完全, 鼠尾 1-2 小时可消化完全 ; 毛发骨组织和某些致密结缔组织等不能被完全消化, 不影响后续实验可选步骤 : 鼠尾含大量细毛, 可在温浴结束后离心 1 min, 将上清转移至干净的离心管, 以提高纯度 3. 加入 300 μl Buffer GD2, 翻转离心管 5 次或移液器吹打 3 次, 转入 DNA 吸附柱 -C15( 置于收集管 )------! 勿将未消化的组织转入 DNA 吸附柱 4. 离心 1 min, 将 DNA 吸附柱 -C15 放入另外一个干净的收集管中 5. 加入 500 μl Buffer WDA, 离心 1 min, 弃废液, 将 DNA 吸附柱 -C15 放回收集管中 6. 加入 500 μl Buffer WB1, 离心 1 min, 弃废液, 将 DNA 吸附柱 -C15 放回收集管中 7. 重复步骤 6 8. 离心 2 min 9. 将 DNA 吸附柱 -C15 转入试剂盒携带的 1.5 ml 离心管, 向硅胶膜的中央加 μl TE 或去离子水 (ph 7.0), 离心 1 min 上海莱枫生物科技有限公司通用型基因组 DNA 快速提取试剂盒 9-3

4 六从石蜡包埋组织和切片中提取 DNA 65 和 90 水浴金属浴或温箱, 推荐使用恒温震荡仪需单独订购过滤柱 -F(Cat#NC412) 1. 石蜡切片 : 刮取 1-8 张切片, 转入干净的 1.5ml 离心管 ( 自备 ), 无需脱蜡石蜡包埋组织 : 尽可能切碎组织, 称取 <25 mg 组织转入转入干净的 1.5ml 离心管 ( 自备 ), 无需脱蜡 2. 加入 400 μl Buffer SLA 和 20 μl Proteinase K,65 温育 ; 温浴 10 分钟后石蜡开始融化, 混合均匀, 继续温浴 1 小时, 间断混合, 延长温育时间不影响效果, 可温浴过夜温育 1 小时 ! 此步骤为去除 DNA 交联, 延长温浴时间会导致 DNA 更严重的片段化 4. 将步骤 3 的溶液连同石蜡转入过滤柱 -F( 置于 2 ml 离心管 ), 室温放置 5 min,1,000-2,000 g 离心 10 秒, 丢弃过滤柱 -F 室温放置, 溶液温度降低, 石蜡析出, 过滤柱 -F 可截留析出的石蜡 ! 请勿使用更高离心力或更长离心时间, 避免石蜡穿透过滤柱 5. 在步骤 4 的滤液中加入 350 μl Buffer GD2, 翻转离心管 5 次或移液器吹打 3 次, 转入 DNA 吸附柱 -C15( 置于收集管 ) 6. 离心 1 min, 将 DNA 吸附柱 -C15 放入另外一个干净的收集管中 7. 加入 500 μl Buffer WDA, 离心 1 min, 弃废液, 将 DNA 吸附柱 -C15 放回收集管中 8. 加入 500 μl Buffer WB1, 离心 1 min, 弃废液, 将 DNA 吸附柱 -C15 放回收集管中 9. 重复步骤离心 2 min 11. 将 DNA 吸附柱 -C15 转入试剂盒携带的 1.5 ml 离心管, 向硅胶膜的中央加 μl TE 或去离子水 (ph 7.0), 离心 1 min 上海莱枫生物科技有限公司通用型基因组 DNA 快速提取试剂盒 9-4

5 七从福尔马林浸泡的组织中提取 DNA 56 和 90 水浴金属浴或温箱, 推荐使用恒温震荡仪 1. 将组织从固定液中取出, 用去离子水 PBS 或 TE 洗涤 2 次, 尽可能去除洗涤液 2. 称取 1-25 mg 组织, 尽可能切碎组织, 转入干净的 1.5 ml 离心管 ( 自备 ) 3. 加入 400 μl Buffer SLA 和 20 μl Proteinase K,56 温育 1 小时, 间断混合, 延长温育时间不影响效果, 可温浴过夜温育 1 小时 ! 此步骤为去除 DNA 交联, 延长温浴时间会导致 DNA 更严重的片段化 5. 加入 350 μl Buffer GD2, 翻转离心管 5 次或移液器吹打 3 次, 转入 DNA 吸附柱 -C15( 置于收集管 ) 6. 离心 1 min, 将 DNA 吸附柱 -C15 放入另外一个干净的收集管中 7. 加入 500 μl Buffer WDA, 离心 1 min, 弃废液, 将 DNA 吸附柱 -C15 放回收集管中 8. 加入 500 μl Buffer WB1, 离心 1 min, 弃废液, 将 DNA 吸附柱 -C15 放回收集管中 9. 重复步骤离心 2 min 11. 将 DNA 吸附柱 -C15 转入试剂盒携带的 1.5 ml 离心管, 向硅胶膜的中央加 μl TE 或去离子水 (ph 7.0), 离心 1 min 上海莱枫生物科技有限公司通用型基因组 DNA 快速提取试剂盒 9-5

6 八从干燥的体液中提取 DNA 65 水浴金属浴或温箱, 推荐使用恒温震荡仪体液干燥于滤纸或纸巾等介质, 后者在水溶液中易分散而无法离心去除, 需单独订购过滤柱 -N(NC414) 2 ml 离心管, 避免样品卡在离心管内壁 1. 样品裁剪与收集裁剪 mm 2 包含血液唾液痰液或精液等体液的滤纸 / 纸巾 / 衣物等介质, 置于 2 ml 离心管 ( 自备 ); 裁剪香烟过滤嘴 ( 近嘴端 2-6 mm), 置于 2 ml 离心管 ( 自备 ); 3. 加入 400 μl Buffer SLA 和 20 μl Proteinase K,65 温育 1 小时, 间断混合, 延长温育时间不影响效果, 可温浴过夜 4. 耗材组装 : 将收集管置于离心管架将 DNA 吸附柱置于收集管处理滤纸 / 纸巾等介质, 需单独订购过滤柱 -N, 将过滤柱 -N 置于 DNA 吸附柱上 5. 在步骤 3 的溶液中加入 350 μl Buffer GD2, 翻转离心管 5 次或移液器吹打 3 次混合均匀 ; 将溶液转入 DNA 吸附柱 -C15( 置于收集管 ), 继续 6; 处理滤纸 / 纸巾等介质, 将溶液转入步骤 4 准备的过滤柱 -N, 室温放置 5 min, 溶液自然滤过滴入 DNA 吸附柱, 丢弃过滤柱 -N, 继续 6 6. 离心 1 min, 将 DNA 吸附柱 -C15 放入另外一个干净的收集管中 7. 加入 500 μl Buffer WDA, 离心 1 min, 弃废液, 将 DNA 吸附柱 -C15 放回收集管中 8. 加入 500 μl Buffer WB1, 离心 1 min, 弃废液, 将 DNA 吸附柱 -C15 放回收集管中 9. 重复步骤离心 2 min 11. 将 DNA 吸附柱 -C15 转入试剂盒携带的 1.5 ml 离心管, 向硅胶膜的中央加 μl TE 或去离子水 (ph 7.0), 离心 1 min 上海莱枫生物科技有限公司通用型基因组 DNA 快速提取试剂盒 9-6

7 九从动物细胞和革兰氏阴性菌中提取 DNA 65 水浴金属浴或温箱, 推荐使用恒温震荡仪 1. 样品收集 a. 悬浮培养的动物细胞 : 离心 1 min, 收集细胞, 弃尽上清 b. 贴壁培养的细胞 : 用温和方法 ( 例如胰蛋白酶消化 ) 处理成细胞悬液, 离心 1 min, 收集细胞弃尽上清 c. 已分离的淋巴细胞和分散的动物组织细胞等 : 估计细胞数量 ( 细胞 ), 彻底去除残留的分离液 d. 液体培养的细菌 : 培养至 OD600 为 1-1.5, 约细胞 /ml 菌液 ; 离心 1 min, 收集细菌 e. 固体培养的细菌 : 刮取固体培养基表面的菌落, 收集细菌到干净的 1.5 ml 离心管 2. 加入 400 μl Buffer SLA 和 20 μl Proteinase K,vortex 或用 1 ml 枪头吹打悬浮沉淀物 ; 65 温育 30 min, 间断混合, 延长温育时间不影响效果, 可温浴过夜可选步骤 : 部分革兰氏阳性菌或真菌未充分破壁, 可在温浴结束后离心 1 min, 将上清转移至干净的离心管, 以提高纯度 3. 加入 300 μl Buffer GD2, 翻转离心管 5 次或移液器吹打 3 次, 转入 DNA 吸附柱 -C15( 置于收集管 ) 4. 离心 1 min, 将 DNA 吸附柱 -C15 放入另外一个干净的收集管中 5. 加入 500 μl Buffer WDA, 离心 1 min, 弃废液, 将 DNA 吸附柱 -C15 放回收集管中 6. 加入 500 μl Buffer WB1, 离心 1 min, 弃废液, 将 DNA 吸附柱 -C15 放回收集管中 7. 重复步骤 6 8. 离心 2 min 9. 将 DNA 吸附柱 -C15 转入试剂盒携带的 1.5 ml 离心管, 向硅胶膜的中央加 μl TE 或去离子水 (ph 7.0), 离心 1 min 上海莱枫生物科技有限公司通用型基因组 DNA 快速提取试剂盒 9-7

8 十革兰阳性菌和真菌破壁方法革兰氏阳性菌和真菌需使用特异性酶或机械力破壁,DNA 产量与破壁效率有关 A. 大多数革兰氏阳性细菌破壁方法已知下列革兰氏阳性菌的细胞壁能被 Lysozyme 破坏 : Clostridia butyricum ( 丁酸棱状芽胞杆菌 ) Clostridia Spotogenes ( 孢子棱状芽胞杆菌 ) Clostridia tyrobutyricum ( 干酪丁酸棱状胞杆菌 ) Listeria monocytogenes Scott A ( 单核细胞增多李氏菌 ) 用户需自备或购买 Lysozyme 裂解缓冲液 (Cat#RE103): 组成内容 RE103 (50 次 ) 成分与储存条件 Lysozyme 1.5 ml 150 mg/ml, -20 长期保存 1.25xLysozyme Buffer 10 ml 25mM Tris, ph8.0(25 C), 2.5mM EDTA, 1.5% Triton; 室温储存 A1. 样品收集 a. 液体培养的细菌 : 培养至 OD600 为 1-1.5, 约含细胞 /ml 菌液室温 5,000 g 离心 10 min, 收集细菌 b. 固体培养的细菌 : 刮取固体培养基表面的菌落, 收集细菌到干净的 1.5 ml 离心管 A2. 加入 120 μl 1.25xLysozyme Buffer 和 30 μl Lysozyme (150 mg/ml), 充分悬浮沉淀,37 温浴 30 min A3. 加入 280 μl Buffer SLA 和 20 μl Proteinase K, 翻转离心管 5 次混合均匀 ; 65 温育 30 min, 间断混合, 延长温育时间不影响效果, 可温浴过夜可选步骤 : 部分革兰氏阳性菌或真菌未充分破壁, 可在温浴结束后离心 1 min, 将上清转移至干净的离心管, 以提高纯度继续 page7, 九从动物细胞和革兰氏阴性菌中提取 DNA B. 金黄色葡萄球菌破壁方法 Lysostaphin 能有效裂解金黄色葡萄球菌细胞的细胞壁, 用户需自备或购买 Lysostaphin(1.2U/μl)(Cat#RE104,500 μl) B1. 样品收集 a. 液体培养的细菌 : 培养至 OD600 为 1-1.5, 约细胞 /ml 菌液室温 5,000 g 离心 10 min, 收集细菌 b. 固体培养的细菌 : 刮取固体培养基表面的菌落, 收集细菌到干净的 1.5 ml 离心管 D2. 加入 140 μl Buffer TE, 充分悬浮沉淀 D3. 处理金黄色葡萄球菌, 加入 10 μl Lysostaphin(1.2U/μl); 混合均匀,37 温育 30 min 处理表皮葡萄球菌加入 20 μl Lysostaphin(1.2U/μl); 混合均匀,37 温育 30 min D4. 加入 260 μl Buffer SLA 和 20 μl Proteinase K, 翻转离心管 5 次混合均匀 ; 65 温育 30 min, 间断混合, 延长温育时间不影响效果, 可温浴过夜可选步骤 : 部分革兰氏阳性菌或真菌未充分破壁, 可在温浴结束后离心 1 min, 将上清转移至干净的离心管, 以提高纯度继续 page7, 九从动物细胞和革兰氏阴性菌中提取 DNA 上海莱枫生物科技有限公司通用型基因组 DNA 快速提取试剂盒 9-8

9 C. 酵母细胞破壁方法液体培养的酵母细胞分散性较好,Lyticase 能有效裂解酵母细胞的细胞壁, 用户需自备或购买 Lyticase 裂解缓冲液 (Cat# RE102): 组成内容 RE102 (50 次 ) 成分与储存条件 Lyticase 250μl 12 U/μl, -20 长期保存山梨醇 Buffer 25 ml 1M 山梨醇, 10 mm EDTA ph7.5(25 C), 14mM β- 巯基乙醇 ; 室温储存 C1. 培养酵母菌至 OD600 为 1-1.5, 约细胞 /ml 菌液用干净的 1.5 ml 离心管,12,000 g 离心 1 min, 收集酵母细胞, 弃上清 C2. 加入 495 μl 山梨醇 Buffer 和 5 μl Lyticase (12 U/μl), 充分悬浮沉淀固定在摇床上,30,220 rpm 震荡 1 小时 ; 5000 g 离心 5 min, 弃尽上清继续 page7, 九从动物细胞和革兰氏阴性菌中提取 DNA D. 霉菌破壁方法细胞壁裂解酶能有效裂解霉菌细胞的细胞壁, 用户需自备细胞壁裂解酶和裂解缓冲液 : a. 配制裂解缓冲液 Bufffer KC: 0.64 M KCl, 0.2 M CaCl 2; b. 准备细胞壁裂解酶 :Driselase (Sigma Pro.No. D9515 ),Lysing enzyme (Sigma Pro.No. L1412 ); c. 用 Buffer KC 配制 5 细胞壁裂解酶 : 称取 Driselase 和 Lysing enzyme 各 300mg, 加入 6ml Buffer KC 充分溶解 ( 可能有不溶的成分, 不影响使用 ), 再加入 4ml 甘油混合均匀,-20 或 -70 保存 D1. 取 1 mm 1 mm 的菌丝块或霉菌细胞, 转入 1.5 ml 离心管中 D2. 加 1ml Buffer KC 剧烈摇晃,12,000 g 离心 20 秒, 弃上清 ; 重复此步骤 2 次 D3. 加 800 μl Buffer KC 和 200 μl 5 细胞壁裂解酶, 将 1.5ml 离心管固定在摇床上,30,60 rpm 震荡 3 小时 ;700 g 离心 4 min, 弃尽上清继续 page7, 九从动物细胞和革兰氏阴性菌中提取 DNA E. 液氮研磨破壁 E1. 称取 mg 真菌菌块或菌丝, 或收集真菌细胞, 转入研钵中 E2. 加入少量液氮, 迅速研磨, 待样品变软, 再加少量液氮, 再研磨, 如此三次 ; 加入 400 μl Buffer SLA, 迅速研磨至样品融化 E3. 将融化的样品转入干净的 1.5 ml 离心管中, 在研钵中加入 50 μl Buffer SLA 清洗研钵和研磨棒, 合并入 1.5ml 离心管中加入 20 μl Proteinase K, 翻转离心管 5 次混合均匀 ;65 温育 30 min, 间断混合, 延长温育时间不影响效果, 可温浴过夜可选步骤 : 部分革兰氏阳性菌或真菌未充分破壁, 可在温浴结束后离心 1 min, 将上清转移至干净的离心管, 以提高纯度继续 page7, 九从动物细胞和革兰氏阴性菌中提取 DNA 上海莱枫生物科技有限公司通用型基因组 DNA 快速提取试剂盒 9-9

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<4D F736F F D20D7DC524E41D0A1C1BFD6C6B1B8CAD4BCC1BAD02E646F63> AxyPrep 总 RNA 小量制备试剂盒本试剂盒用于从各种动物组织植物组织细胞细菌酵母和丝状真菌中提取总 RNA 提取的总 RNA 分子完整纯度高, 适用于 Northern Blot RT-PCR 体外翻译 Primer Extension S1 核酸酶作图 RNase 保护测定构建 cdna 文库等各种分子生物学实验一试剂盒组成贮存稳定性 Cat. No. AP-MN-MS-RNA-4

二 试剂盒组成和储存组成内容 DK (50 次 ) DK (200 次 ) 原理与用途 Proteinase K * 1 ml 1 ml 4 降解蛋白 Buffer SLA 30 ml 120 ml 分散 裂解细胞 释放 DNA Buffer GD2 20 ml 80 ml

二试剂盒组成和储存组成内容 DK (50 次 ) DK (200 次 ) 原理与用途 Proteinase K * 1 ml 1 ml 4 降解蛋白 Buffer SLA 30 ml 120 ml 分散裂解细胞释放 DNA Buffer GD2 20 ml 80 ml