27 例血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤的免疫表型分析陈丽霞, 等 1547 Keywords center. Application of CXCL13, PD-1, CD10 and bcl-6 immunostains offers a reasonable marker for diagno

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溜李
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1 1546 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 2016, 36(10) doi: /j.issn View this article at: 27 例血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤的免疫表型分析陈丽霞, 常青 ( 湖北省黄石市第二医院病理科, 湖北黄石 ) [ 摘要 ] 目的 : 分析 27 例血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤 (angioimmunoblastic T-cell lymphoma,aitl) 的免疫表型, 重点探讨 CXCL-13 PD-1 CD10 bcl-6 在其诊断中的作用, 其中 3 例 CD30 阳性病理的诊断意义及问题方法 : 收集黄石市第二医院病理科 2009 年 1 月至 2015 年 7 月间诊断的 27 例血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤, 对其进行常规形态学和免疫学表型分析, 观察对预后的影响结果 :27 例血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤中, 免疫组织化学表达阳性 :CD3(27/27) CXCL13(27/27) PD-1(27/27) CD10(20/27) bcl-6(23/27) 其中有 3 例 CD30 散在阳性 (3/27), CD20(0/27), CD4 和 CD8 阳性细胞混合组中,20 例 CD4 阳性细胞占优势,5 例 CD8 阳性细胞占优势,1 例 CD4 CD8 全阴性, 1 例 CD4 CD8 全阳性 CD21 滤泡树突细胞阳性, 并显示明显的围绕血管特征, 同时也提示在肿瘤中均存在滤泡树突网结论 :AITL 是一种来源生发中心辅助性 T 细胞的高度侵袭性肿瘤 CXCL13PD-1CD10bcl-6 在诊断中为有用标记物, 四种联合应用更能提示诊断本组 3 例 AITL 中存在 CD30 阳性细胞除鉴别诊断外, 其临床意义有待研究 [ 关键词 ] 血管免疫母细胞 ;T 淋巴细胞 ; 淋巴瘤 Angioimmunoblastic T cell lymphoma: immunohistochemical analysis of 27 cases CHEN Lixia, CHANG Qing (Department of Pathology, the Second Hospital of Huangshi, Huangshi Hubei , China) Abstract Objective: To detect the meaning of CXCL13, PD-1, CD10 and bcl-6 on the diagnosis of angioimmunoblastic T cell lymphoma (AITL). Methods: 27 cases of AITL retrieved from in-house and consultation files (from January 2009 to July 2015) were reviewed with emphasis on the clinicopathologic characteristics, immunophenotypes and the prognostic impact. Results: Immunophenotypes: CD3 (27/27), CXCL13 (27/27), PD-1 (27/27), CD10 (20/27), bcl-6 (23/27), CD30 focal positive in 3 cases (3/27), CD20 (0/27). In CD4 and CD8 positive AITL cases: 20 cases were CD4 dominantly expressed, 5 cases were CD8 dominantly expressed, one case was both CD4 and CD8 positive. The staining of CD21 showed follicular dendritic cell positive, and reveal the pattern with the cells arranged around the blood vessel, which prompting the exist of follicular dendritic in tumor cells. Conclusion: AITL is the type of highly invasive tumor and derived from helper T cells of germinal 收稿日期 (Date of reception): 通信作者 (Corresponding author): 陈丽霞, @qq.com

2 27 例血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤的免疫表型分析陈丽霞, 等 1547 Keywords center. Application of CXCL13, PD-1, CD10 and bcl-6 immunostains offers a reasonable marker for diagnosis, and combination of the four antibodies can improve the standard of diagnosis. Moreover, the role of CD30 immunoreactivity can give a differentiation diagnosis in AITL, besides the clinical significance needs more research. T lymphocyte; lymphoma; angiommunoblastic 血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤 (angioimmunoblastic T-cell lymphoma,aitl) 是一种外周 T 细胞淋巴瘤的少见类型, 占非霍奇金淋巴瘤 (NHL)1%~2%, 占外周 T 细胞淋巴瘤 15%~20% [1-2] 该病临床呈高度侵袭性, 但易与许多非典型性淋巴增生性疾病相混淆, 现收集本院 27 例 AITL, 从临床病理及免疫组化特征进行整理分析 1 资料与方法 1.1 资料查阅 2009 年 1 月至 2015 年 7 月间黄石市第二医院病理科档案资料及会诊病例, 共有 27 例 AITL, 复习所有病例的 HE 形态学免疫组化结果, 依据 WHO 2014 年造血与淋巴组织肿瘤分类标准进行诊断 27 例 AITL 的所有患者均经切除淋巴结病理确诊男性 19 例, 女性 8 例, 男女之比发病年龄 26~70 岁, 平均年龄 55.9 岁 27 例 AITL 均取于浅表淋巴结颈部 (17/27) 腋窝 (4/27) 腹股沟(2/27) 颌下(2/27) 腮腺区 (1/27) 前胸壁皮下(1/27) 在 27 例中有 20 例为浅表多处淋巴结肿大,7 例伴有深部淋巴结肿大 ( 腹部纵膈 ) 2 结果病理观察 :HE 光镜示 : 淋巴结的结构大部分破坏, 部分病例可见残存或萎缩的滤泡 ( 图 1), 肿瘤细胞在副皮质区弥漫性浸润 ( 图 2), 瘤细胞小至中等大小, 胞质淡染, 包膜清楚, 胞核一般呈圆形或椭圆形 ( 图 3), 增生的小血管呈树枝状, 常伴血管内皮细胞肿胀 ( 图 4), 滤泡树突细胞不规则增生, 增生的滤泡树突细胞常围绕在高内皮血管周围背景细胞多样, 可出现免疫母细胞嗜酸性粒细胞浆细胞小淋巴细胞组织细胞, 部分病例可见少量坏死 [3] 本组 27 例中,CD3 均阳性 ( 图 5), 提示为 T 细胞淋巴瘤,CD20 均阴性, 排除了 B 细胞起源的淋巴瘤在 CD4 和 CD8 阳性细胞混合组中,20 例 CD4 阳性细胞占优势,5 例 CD8 阳性细胞占优势,1 例 CD4 CD8 全阴性,1 例 CD4 CD8 全阳性 CD21 滤泡树突细胞阳性, 并显示明显的围绕血管的特征, 同时也提示在肿瘤中均存在滤泡树突网 20 例 CD10 弥漫阳性,23 例 bcl-6 弥漫阳性 ( 图 6), 3 例 CD30 灶性阳性 ( 图 7), CXCL13 ( 图 8) 和 PD-1( 图 9) 均全阳性并作为诊断肿瘤的重要依据性的抗体 1.2 方法手术切除标本经 10% 中性福尔马林固定, 常规脱水, 石蜡包埋,4 μm 厚切片,HE 染色及免疫组化染色趋化因子配体 CXCL13 免疫标记采用 Envision 三步法, 其余免疫标记物采用 Envision 两步法所用免疫组化试剂 :CXCL13 PD-1 CD10 CD3 CD5 CD4 CD8 CD20 CD15 CD30 CD21 Pax-5 Ki-67 bcl-6 CD34 均购自基因科技 ( 上海 ) 有限公司操作按照说明书进行 CXCL13 阳性定位在胞质, 常伴核旁高尔基区点状强阳性 [3] 阳性判读标准:1) 干净的背景上见点状胞质为主的阳性信号 ;2) 阳性细胞一定具有异型性, 体积偏大, 核染色较浅且不均匀 [3] 图 1 可见残存的或萎缩的淋巴滤泡 (HE, 200) Figure 1 Residual or atrophy of lymphoid follides (HE staining, 200)

临床与病理杂志, 2016, 36(10) http://lcbl.amegroups.

200) Figure 2 Diﬀuse infiltration of tumor cells in the sub cortical

positive) (Envision staining, 200) 图3 瘤细胞小至中等大小胞质淡染胞核呈圆形或椭圆图6

Immunohistologic staining: bcl-6 (nucleus positive) Figure 3 Tumor

400) of cytopathic, with round or oval nuclei (HE, 400) 图4 增生的小血管呈树枝状

Proliferation of blood vessels shown dendritic, Figure 7

3 临床与病理杂志, 2016, 36(10) 图2 肿瘤细胞在副皮质区弥漫浸润(HE, 200) 图5 CD3阳性肿瘤细胞阳性定位细胞膜(Envision法, 200) Figure 2 Diﬀuse infiltration of tumor cells in the sub cortical Figure 5 Immunohistologic staining: CD3 (cytomembrane area (HE, 200) positive) (Envision staining, 200) 图3 瘤细胞小至中等大小胞质淡染胞核呈圆形或椭圆图6 Bcl-6阳性肿瘤细胞阳性定位细胞核(Envision法, 400) 形(HE, 400) Figure 6 Immunohistologic staining: bcl-6 (nucleus positive) Figure 3 Tumor cells were small to medium size, light staining (Envision staining, 400) of cytopathic, with round or oval nuclei (HE, 400) 图4 增生的小血管呈树枝状常伴血管内皮细胞肿胀(HE, 图7 CD30灶性阳性: 肿瘤细胞阳性定位细胞膜(Envision法, 400) 400) Figure 4 Proliferation of blood vessels shown dendritic, Figure 7 Immunohistologic staining: CD30 (cytomembrane accompanied by the swelling of endothelial cell (HE, 200) positive) (Envision staining, 400)

27 例血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤的免疫表型分析陈丽霞, 等 1549 图 8 IHC:CXCL-13 阳性肿瘤细胞阳性定位核旁高尔基区点状强阳性 (Envision 法 400) Figure 8 Immunohistologic staining: CXCL-13 (dot positive of Golgi in tumor cells)(envision staining

等首先报道, 命名为血管免疫母细胞淋巴结病伴异常蛋白血症 (angioimmunoblastic lymphadenopathy with dysproteinemia,ld) 该病多见于中老年人, 主要表现为全身病变本组 27 例平均年龄 55.

4 27 例血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤的免疫表型分析陈丽霞, 等 1549 图 8 IHC:CXCL-13 阳性肿瘤细胞阳性定位核旁高尔基区点状强阳性 (Envision 法 400) Figure 8 Immunohistologic staining: CXCL-13 (dot positive of Golgi in tumor cells)(envision staining 400) 图 9 IHC:PD-1 阳性, 肿瘤细胞阳性定位细胞核 (Envision 法, 200) Figure 9 Immunohistologic staining: PD-1 (nucleus positive) (Envision staining, 200) 3 讨论 AITL 是一种少见的侵袭性淋巴瘤, 呈中高度恶性 [4] [5], 1974 年由 Frizzera 等首先报道, 命名为血管免疫母细胞淋巴结病伴异常蛋白血症 (angioimmunoblastic lymphadenopathy with dysproteinemia,ld) 该病多见于中老年人, 主要表现为全身病变本组 27 例平均年龄 55.9 岁, 均见于浅表淋巴结肿大与文献报道相符本组 27 例中的组织学形态均具有典型 AITL 的特征 ;1) 淋巴结结构部分或全部破坏, 有的可有残存或萎缩的淋巴滤泡 ;2) 副皮质区灶性或弥漫的肿瘤细胞浸润, 瘤细胞中等大小为主, 其中杂有个别大细胞, 胞质淡染, 透明的细胞, 核仁清楚 ;3) 血管增生, 呈树枝状常伴血管内皮细胞肿胀, 周围出现成簇的肿瘤细胞浸润 ;4) 背景细胞有 : 小淋巴细胞浆细胞 B 免疫母细胞嗜酸性粒细胞嗜中性粒细胞在 AITL 的诊断中, 免疫组化起到了关键的作用 CXCL13 PD-1 CD10 bcl-6 在诊断 AITL 中可谓是金指标 [6-15] CXCL13 在 AITL 及外周 T 细胞淋巴瘤中的表达 [16] 差异很大, 文献报道 CXCL13 在 AITL 中为 100% 及高表达, 而在外周 T 细胞淋巴瘤则为低表达或不表达 [6-7] 因此该抗体可以将这两者区分开来 CD10 和 bcl-6 在 AITL 中肿瘤细胞表达较早, CD10 的阳性率在 70% 以上 Bcl-6 的阳性率在 60% 以上, 而在外周 T 细胞淋巴瘤中几乎没有表达 [8,10-15] 本组中的 CD10 阳性 74%(20/27),bcl-6 阳性 85%(23/27) 与文献报道相同 PD-1 也是一生发中心 T 细胞的标记物, 据报道在血管免疫母 T 细胞淋巴瘤中的表达为 100%, 而在外周 T 细胞非特指中不表达 [17] 本组 27 例 PD-1 均为阳性表达, 也与文献报道一致本组中有 3 例 CD30 灶性阳性査阅文献, 未见有 CD30 的报道, 这 3 例 CD30 阳性细胞均较大, 散在分布于肿瘤细胞间对于 CD30 阳性表达, 文献中,AITL 有 10% 可转变成弥漫大 B 细胞淋巴瘤 [18], 而 CD30 阳性是否是有向弥漫大 B 细胞淋巴瘤 ( 间变型 ) 转化的一个提示的可能, 有待研究而 AITL 是淋巴结原发外周 T 细胞淋巴瘤中的一种类型, 是来源于滤泡辅助 T 细胞的淋巴瘤 [6-7,19], 在 CD30 阳性中的 T 细胞淋巴瘤只有间变大细胞淋巴瘤, 而在 AITL 中 CD30 阳性, 是否又与 T 细胞淋巴瘤间变大细胞存在某种关联呢? 目前来说还不得而知因本组中病例较少, 在此只能提出这种可能与假设为了搞清楚此点对临床治疗及用药方面有绝对方向性指导及重大突破因此目前提出该观点及疑问仅供病理工作者加以关注和研究 CD30 在有些文献中提出 AITL 作为与间变大 T 细胞淋巴瘤及弥漫大 B 细胞淋巴瘤 ( 间变型 ) 的鉴别诊断抗体 [20],CD30 在上述二种淋巴瘤的阳性是成片阳性, 而本组 3 例中是灶性及散在阳性因此提出 AITL 是否存在某种亚型或与上述二种淋巴瘤有某种潜在联系需今后密切关注及进一步研究 CD30 灶性阳性需要与霍奇金氏淋巴瘤 (Hodgkin s lymphoma, HL) 鉴别,HL 中可见 sternberg-reed 细胞, 该细胞 CD30 阳性, 但是 PD-1 CXCL13 均为阴性因此可与 AITL 相鉴别而 AITL 亦可转变为经典的霍奇金淋巴瘤

5 1550 临床与病理杂志, 2016, 36(10) 治疗及预后 :AITL 是高度侵袭性淋巴瘤, 化疗敏感性虽然尚可, 但是随着病情迁延, 容易复发, 因此预后较差, 中位生存率少于 3 年, 5 年生存率仅为 30%~35% 关于 AITL 的治疗, 目前还是用 CHOP 方案为一线用药加局部放疗, 此方案是根据美国国立综合癌症网络 (National Comprehensive Cancer Network,NCCN) 最新版的关于 NHL 的治疗指南目前自体干细胞移植是一个治疗研究方面热点, 根据报道可以使患者完全缓解率达到 90% [21-22], 但移植后患者有高感染率免疫抑制剂毒副作用, 可能发生移植后淋巴瘤等诸多风险, 因此该方法仍然列为尝试性治疗方法问题与展望 :1)AITL 一直缺乏治疗标准, 目前所用 CHOP 方案化疗后复发率很高, 但是目前又没有更好的方法来替代它 ;2) 本组 27 例中有 3 例 CD30 灶性阳性细胞, 此点对 AITL 的诊断及分型有何意义, 是否与间变有关联或是 AITL 存在某种亚型? 对临床预后是否有影响等问题有待更多病例进一步观察 AITL 在病理诊断中有一定难度, 形态特点为肿瘤细胞数量不占优势, 但仍可见成簇胞质淡染或透明的瘤细胞及多形性瘤细胞有时瘤细胞异型较小反应性背景较显著, 几乎总可见到转化的 EBV(+) 的 B 免疫母细胞 ; 显著的高内皮分支的小静脉副皮质可见包绕血管增生的滤泡树突细胞网 [CD10(+)] 免疫组织化学中, 除 T 细胞标记外, 联合应用 CD10 Bcl-6 CXCL-13 及 PD-1 的标记有很大的帮助此外,CD4 及 CXCR5 的表达亦有一定的价值参考文献 1. Dogan A, Jaffe ES, Ralfkiaer E, et al. Angioimmunoblastic T-cell lymphoma, World Health Organization classification of tumors of haematopoietic and lymphoid tissue[m]. IARC: Lyon, 2008: Swerdlow SH, Campo E, Harris NL, et al. World Health Organization classification of tumors of Haematopoietic and Lymphoid Tissues[M]. 4th edition. IARC: Lyon, 2008: 唐雪峰, 李甘地, 李亚林, 等. CXCL13 CD10 bcl-6 在血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤的诊断及鉴别诊断中的作用 [ J]. 中华病理学杂志, 2009, 38(4): TANG Xuefeng, Lu Gandi, LI Yalin, et al. Expressions of CXCL13, CD10 and bcl-6 in angioimmunoblastic T-cell lymphoma and peripheral T- cell lymphoma, not otherwise specified[ J]. Chinese Journal of Pathology, 2009, 38 (4): Isaacson PG. The current status of lymphoma classification[ J]. Br J Haematol, 2000, 109(2): Frizzera G, Moran EM, Rappaport H. Angio-immunoblastic lymphadenopathy with dysproteinaemia[ J]. Lancet, 1974, 1(7866): Dupuis J, Boye K, Martin N, et al. Expression of CXCL13 by neoplastic cells in angioimmunoblastic T-cell lymphoma (AITL): a new diagnostic marker providing evidence that AITL derives from follicular helper T cells[ J]. Am J Surg Pathol, 2006, 30(4): Grogg KL, Attygalle AD, Macon WR, et al. Expression of CXCL13, a chemokine highly upregulated in germinal center T-helper cells, distinguishes angioimmunoblastic T-cell lymphoma from peripheral T-cell lymphoma, unspecified[ J]. Mod Pathol, 2006, 19(8): Attygalle A, Al-Jehani R, Diss TC, et al. Neoplastic T cells in angioimmunoblastic T-cell lymphoma express CD10[ J]. Blood, 2002, 99(2): Chen W, Kesler MV, Karandikar NJ, et al. Flow cytometric features of angioimmunoblastic T-cell lymphoma[ J]. Cytometry B Clin Cytom, 2006, 70(3): Baseggio L, Berger F, Morel D, et al. Identification of circulating CD10 positive T cells in angioimmunoblastic T-cell lymphoma[ J]. Leukemia, 2006, 20(2): Attygalle AD, Diss TC, Munson P, et al. CD10 expression in extranodal dissemination of angioimmunoblastic T-cell lymphoma[ J]. Am J Surg Pathol, 2004, 28(1): Lee PS, Lin CN, Chuang SS. Immunophenotyping of angioimmunoblastic T-cell lymphomas by multiparameter flow cytometry[ J]. Pathol Res Pract, 2003, 199(8): Baseggio L, Berger F, Morel D, et al. Identification of circulating CD10 positive T cells in angioimmunoblastic T-cell lymphoma[ J]. Leukemia, 2006, 20(2): Cutrona G, Leanza N, Ulivi M, et al. Expression of CD10 by human T cells that undergo apoptosis both in vitro and in vivo[ J]. Blood, 1999, 94(9): Ortonne N, Dupuis J, Plonquet A, et al. Characterization of CXCL13+ neoplastic t cells in cutaneous lesions of angioimmunoblastic T-cell lymphoma (AITL)[ J]. Am J Surg Pathol, 2007, 31(7): Kim CH, Lim HW, Kim JR, et al. Unique gene expression program of human germinal center T helper cells[ J]. Blood, 2004, 104(7): Dorfman DM, Brown JA, Shahsafaei A, et al. Programmed death-1 (PD-1) is a marker of germinal center-associated T cells and angioimmunoblastic T-cell lymphoma[ J]. Am J Surg Pathol, 2006, 30(7):

6 27 例血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤的免疫表型分析陈丽霞, 等 Dunleavy K, Wilson WH, Jaffe ES. Angioimmunoblastic T cell lymphoma: pathobiological insights and clinical implications[ J]. Curr Opin Hematol, 2007, 14(4): Swerdlow SH, Campo E, Harria NL, et al. World Health Organization classification of turnouts, WHO classification of turnouts of haematopoietic and lymphoid tissues[m]. IARC: Lyon, 2008: 唐雪峰, 李甘地, 李玉林, 等. 血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤临床病理研究进展 [ J]. 临床与实践病理学杂志, 2008, 24(5): TANG Xuefeng, LI Gandi, LI Yulin, et al. Research progression of clinincopathology in angioimmunoblastic Tcell lymphoma[ J]. Chinese Journal of Clinical and Experimental Pathology, 2008, 24(5): Rodríguez J, Conde E, Gutiérrez A, et al. Prolonged survival of patients with angioimmunoblastic T-cell lymphoma after highdose chemotherapy and autologous stem cell transplantation: the GELTAMO experience[ J]. Eur J Haematol, 2007, 78(4): Kim MK, Kim S, Lee SS, et al. High-dose chemotherapy and autologous stem cell transplantation for peripheral T-cell lymphoma: complete response at transplant predicts survival[ J]. Ann Hematol, 2007, 86(6): 本文引用 : 陈丽霞, 常青. 27 例血管免疫母细胞性 T 细胞淋巴瘤的免疫表型分析 [ J]. 临床与病理杂志, 2016, 36(10): doi: /j.issn Cite this article as: CHEN Lixia, CHANG Qing. Angioimmunoblastic T cell lymphoma: immunohistochemical analysis of 27 cases[ J]. Journal of Clinical and Pathological Research, 2016, 36(10): doi: /j.issn

113 ( 1) (+) /L( 4.5~ /L), /L( /L) /L( /L) 125 g L -1 ( g L -1 ) 81.1% (

113 ( 1) (+) /L( 4.5~ /L), /L( /L) /L( /L) 125 g L -1 ( g L -1 ) 81.1% ( 112 ( 1 2 3 200040) ( 1) 634 64 1 2010 1 8 ( ) 2009 12 12 12 0.5~4 cm 12 16 12 30 39.6 ( ) 37.5 100 7=93 93 7=? 0.6 1979 2009 9 5 mm 2009 11 19 ( ) 37.8 98 20 138/ 70 mmhg( 1 mmhg=0.133 kpa) 4 3 3 2 2