中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 15 期 2015 年 8 月 2239 and ng/g. The standard addition recoveries were in the range of 88.4% 11

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1 2238 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 15 期 2015 年 8 月 UPLC-MS/MS 法测定抗疲劳类保健食品中非法添加的 9 种壮阳类化学药物蒋丽萍 1, 屠婕红 2, 徐宏祥 1, 傅应华 1. 嘉兴市食品药品检验检测院, 浙江嘉兴嘉兴学院医学院, 浙江嘉兴 * 摘要 : 目的建立一种用于快速准确检测抗疲劳类保健食品中非法添加 9 种壮阳类化学药物 ( 甲磺酸酚妥拉明甲睾酮司坦唑醇达那唑他达拉非枸橼酸西地那非爱地那非伐地那非硫代艾地那非 ) 的方法方法采用 UPLC-MS/MS 法, 以 Waters Acquity BEH-C 18 柱 (100 mm 2.1 mm,1.7 μm) 为色谱柱, 以 0.1% 甲酸甲醇溶液 (A)-0.1% 甲酸水溶液 (B) 为流动相, 梯度洗脱 :0~5 min,50% A;5~7 min,50%~90% A;7~9 min,90%~100% A;9~10 min,100%~50% A; 体积流量 0.2 ml/min, 进样量 5 μl, 柱温 40 选择 ESI 离子源正离子扫描多反应监测 (MRM) 模式测定 9 种临床常用的化学药物, 通过比较 MRM 通道中样品峰与对照品峰的分子离子峰二级碎片离子峰色谱保留时间等信息确定添加的化学药物, 并根据外标法以质谱峰面积计算添加药物的准确量结果在相应色谱及质谱条件下,9 种化学药物甲磺酸酚妥拉明甲睾酮司坦唑醇达那唑他达拉非枸橼酸西地那非爱地那非伐地那非硫代艾地那非的分离度良好, 方法检测限 (LOD) 均在 0.1~0.3 ng/g, 定量限 (LOQ) 均在 0.3~0.9 ng/g, 标准加样回收率均在 88.4%~116.3% 68 批抗疲劳类保健食品中检出 41 批添加了化学药, 阳性率为 60.3%; 样品中检出了枸橼酸西地那非他达拉非爱地那非硫代艾地那非结论本法简便准确, 灵敏度高, 可作为抗疲劳类保健食品中非法添加化学药物的定性定量检测方法关键词 :UPLC-MS/MS; 化学药物 ; 保健食品 ; 非法添加 ; 甲磺酸酚妥拉明 ; 甲睾酮 ; 司坦唑醇 ; 达那唑 ; 他达拉非 ; 枸橼酸西地那非 ; 爱地那非 ; 伐地那非 ; 硫代艾地那非中图分类号 :R 文献标志码 :A 文章编号 : (2015) DOI: /j.issn Determination of nine chemicals illegally added into antifatigue health foods by UPLC-MS/MS JIANG Li-ping 1, TU Jie-hong 2, XU Hong-xiang 1, FU Ying-hua 2 1. Jiaxing Institute for Food and Drug Control, Jiaxing , China 2. Medical College of Jiaxing University, Jiaxing , China Abstract: Objective To establish an accurate method for the determination of nine chemical drugs (phentolamine mesylate, methyltestosterone, stanozolol, danazol, tadalafil, sildenafil citrate, aildenafil, vardenafil, and thioaildenafil) which were illegally added into the antifatigue health foods. Methods The UPLC-MS/MS method was adopted. The samples were extracted with methanol by ultrasonic processing and separated on a Waters Acquity BEH-C 18 (100 mm 2.1 mm, 1.7 μm) column with 0.1% formic acid methanol (A) and 0.1% formic acid water (B) as the mobile phase by gradient elution (0 5 min, 50% A; 5 7 min, 50% 90% A; 7 9 min, 90% 100% A; 9 10 min, 100% 50% A) at a flow rate of 0.2 ml/min. The injection volume was 5 μl. The column temperature was 40. The positive-ion (ESI + ) source and MRM mode were used to separate and quantitatively determine the chemicals. The obtained molecular ions, fragment ions, and retention time for MRM channels were used to identify the nine kinds of drugs by comparing with those of reference substances. The obtained peak areas were used to determine the accurate content of the nine chemicals in the antifatigue health foods. Results A good resolution of the nine kinds of chemical drugs, including phentolamine mesylate, methyltestosterone, stanozolol, danazol, tadalafil, sildenafil citrate, aildenafil, vardenafil, and thioaildenafil, was obtained under this UPLC and MS/MS conditions. The limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) were in the ranges of ng/g 收稿日期 : 基金项目 : 浙江省公益性技术应用研究计划资助项目 (2013C37103); 十二五浙江省高校重点学科 ( 药理学 ) 资助项目作者简介 : 蒋丽萍 (1981 ), 女, 主管药师, 研究方向为药物分析 Tel: (0573) @qq.com * 通信作者傅应华, 教授, 研究方向为药物制剂与质量控制 Tel: (0573) yaoji6217@sohu.com

2 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 15 期 2015 年 8 月 2239 and ng/g. The standard addition recoveries were in the range of 88.4% 116.3%. There were 68 batches of antifatigue health foods, among which 41 batches were added with the chemicals with positive rate of 60.3%. The sildenafil citrate, tadalafil, aildenafil, and hioaildenafil were detected in samples. Conclusion The method is simple, accurate, and has high sensitivity, which can be used for the qualitative and quantitative determination of illegally added chemical drugs in the antifatigue health foods. Key words: UPLC-MS/MS; chemical drugs; health foods; illegally added; phentolamine mesylate; methyltestosterone; stanozolol; danazol; tadalafil; sildenafil citrate; aildenafil; vardenafil; thioaildenafil 近年来, 人们对自身的保健越来越重视, 市场上标示各种功能的保健食品鱼龙混杂, 不法分子公然制假售假, 为了使原本不具有治疗作用的保健品达到某一种疗效, 在保健食品中添加各种化学药物, 欺骗消费者, 以获取高额利润 [1] 在标示具有抗疲劳功能的保健食品中常添加的壮阳类化学药物有 2 大类, 一类是环磷酸鸟苷 (cgmp) 特异性磷酸二酯酶 5(PDE5) 型抑制剂, 它是一种治疗男性性功能障碍 (ED) 的药物, 代表性药物主要有枸橼酸西地那非 ( 品牌名 : 万艾可, 俗称伟哥 ) 他达拉非( 品牌名 : 西力士 cialis) 伐地那非( 品牌名 : 艾力达 ) 爱地那非硫代艾地那非等 ; 另一类是蛋白同化制剂, 是合成代谢类药物, 具有促进蛋白质合成和减少氨基酸分解的特征, 可促进肌肉增生, 提高动作力度和增强男性的性特征, 代表性药物主要有甲睾酮司坦唑醇达那唑等在保健食品中非法添加化学药物随意性大, 剂量不准确, 标签上又未作说明, 往往导致消费者长期超量服用引起毒性反应, 严重甚至危及生命国家食品药品监督管理局曾颁布了一个针对补肾壮阳类中成药中非法添加西药的药品检验补充方法和检验项目批准件 ( 批准件编号 ), 适用于补肾壮阳类中成药及抗疲劳类免疫调节类保健食品中测定非法添加那红地那非等 11 种 PDE5 型抑制剂及其衍生物, 初筛方法包括传统的物理化学鉴别和 TLC 定性鉴别 ; 确证方法包括 HPLC 的初步确证和液相色谱 - 质谱 (LC-MS) 联用技术的最终确证 [2-4] 随着仪器的快速更新和发展, 需要不断研究并建立一种高灵敏度高准确度高通量和低成本检测非法添加壮阳类化学药物的方法目前对抗疲劳类保健食品中非法添加化学药物 [5-6] 的检测方法主要是 HPLC 法和液质联用法 [7-14] 本实验收集了临床上最常用的 9 种壮阳类化学药物, 采用 UPLC-MS/MS 方法, 建立了以多离子反应监测 (MRM) 模式定性定量测定抗疲劳类保健食品中非法添加化学药物的方法, 该方法将非标检测中的初筛与确证方法结合起来, 可大大提高初筛的广泛性和确证的准确性, 并可同时进行添加物的定性和定量, 一次进样可在 10 min 内同时准确检测出胶囊剂片剂丸剂等 3 种剂型中添加的 9 种壮阳类化学药物, 为进一步规范保健食品市场提供强大的技术支撑 1 仪器与材料 Acquity UPLC 型超高效液相色谱仪 Quattro Premiere XE 型三重四极杆串联质谱仪电喷雾离子化源 (ESI) MassLynx 数据处理系统, 美国 Waters 公司 ;XS105DU 型电子天平, 梅特 - 托利多有限公司 ;USC-502 型超声波清洗器, 上海波龙电子有限公司 ;Mili-Q 超纯水器, 美国密理搏公司甲磺酸酚妥拉明 ( 批号 , 质量分数 99.9%) 甲睾酮( 批号 , 质量分数 >99.0%) 司坦唑醇( 批号 , 质量分数 >99.0%) 达那唑( 批号 , 质量分数 >99.0%), 他达拉非 ( 批号 , 质量分数 >99.0%) 以上对照品均购自中国食品药品检定研究院 ; 枸橼酸西地那非 ( 批号 A1, 质量分数 >99.0% ) 与硫代艾地那非 ( 批号 A3, 质量分数 >99.0%) 均购自加拿大 TLC 公司 ; 爱地那非 ( 批号 s0269c, 质量分数 >99.0%) 与伐地那非 ( 批号 s0270c, 质量分数 >99.0%) 均购自美国 Sigma 公司以上对照品均为供定量测定用试剂甲醇 ( 德国 Merck 公司 ) 甲酸( 美国 Tedia 公司 ) 均为色谱纯, 其余试剂均为国产分析纯, 水为超纯水实测样品主要来自嘉兴市县食品药品监督管理局及公安机关抽检的办案样品 2 方法与结果 2.1 UPLC 色谱条件 Waters BEH-C 18 柱 (50 mm 2.1 mm,1.7 μm) 为色谱柱 ; 以 0.1% 甲酸甲醇溶液为流动相 A, 以 0.1% 甲酸水溶液为流动相 B, 梯度洗脱程序 :0~5 min,50% A;5~7 min,50%~90% A;7~9 min, 90%~100% A;9~10 min,100%~50% A 体积流量 0.2 ml/min; 进样量 5 μl; 柱温为 40

3 2240 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 15 期 2015 年 8 月 2.2 MS/MS 条件电喷雾离子化 (ESI) 正离子模式检测 ; 毛细管电压 3.0 kv; 二级锥孔电压 (extractor)3 V; 六级杆透镜电压 (RF Len):0 V; 离子源温度 110 ; 脱溶剂气温度 (desolvation temp)350 ; 脱溶剂气流量 600 L/h; 锥孔反吹气流量 50 L/h; 碰撞气流量 0.18 ml/min; 碰撞室压力为 Pa; 选择 MRM 采集碎片离子信号各物质的色谱保留时间准分子离子质量数定性定量离子碎片质量数及其采集参数见表 1 表 1 9 种壮阳类化学药物的质谱采集参数 Table 1 LC-MS/MS parameters for nine kinds of antifatigue chemicals t R /min 药品成分电离模式母离子 (m/z) 定量离子 (m/z) 定性离子 (m/z) 锥孔电压 /V 碰撞能量 /ev 2.18 甲磺酸酚妥拉明 ESI , 伐地那非 ESI , 枸橼酸西地那非 ESI , 爱地那非 ESI , 他达拉非 ESI 硫代艾地那非 ESI , 甲睾酮 ESI , 司坦唑醇 ESI , 达那唑 ESI , 溶液的制备混合对照品溶液的制备精密称取上述 9 种对照品各 10 mg 分别置于 10 ml 棕色量瓶中, 用含 0.1% 甲酸的甲醇 6 ml 超声溶解, 放冷后加甲醇定容至 10 ml, 配制成质量浓度均为 1 mg/ml 的贮备液, 置 4 冷藏备用取上述贮备液适量, 分别用初始流动相稀释成含甲磺酸酚妥拉明甲睾酮司坦唑醇达那唑爱地那非硫代艾地那非质量浓度分别为 mg/ml; 他达拉非枸橼酸西地那非伐地那非质量浓度分别为 mg/ml 的混合对照品溶液其中甲磺酸酚妥拉明与枸橼酸西地那非为与酸成盐的形态, 定量计算以甲磺酸或枸橼酸盐计供试品溶液的制备每个品种取 10 个胶囊样品的内容物, 混匀 ; 或取 10 片片剂及丸剂样品, 置研钵中碾磨均匀成粉末状再分别精密称取 1 次服用量, 置 50 ml 量瓶中, 加 0.1% 甲酸的甲醇 30 ml, 超声溶解 20 min, 放冷至室温, 用同一溶剂稀释至刻度, 摇匀后初滤, 再经 0.22 μm 微孔滤膜滤过, 作为供试品贮备液精密量取贮备液适量, 用初始流动相逐步稀释至使待测物质量浓度与对照品溶液质量浓度相近的溶液, 作为供试品溶液阴性样品溶液取具有代表性的胶囊剂 ( 海狗肾宝胶囊康富来脑轻松胶囊 ) 片剂 ( 汤臣倍健螺旋藻片雄博牌玛咖片 ) 和丸剂 ( 源生堂牌海狗人参丸三十六味帝皇丸 )3 种剂型阴性样品各 2 份, 按上述方法分别制成胶囊剂片剂和丸剂的混合空白基质粉末, 分别精密称取 1.0 g, 置于 50 ml 量瓶中与供试品溶液同法制成 3 种剂型的阴性样品溶液种化学药物的色谱及质谱特性在 MRM 模式下测定 9 种化学药物的定性和定量离子对色谱图, 共 18 个离子监测通道各物质采集的总离子流图见图 1,MRM 定量离子对色谱图见 t/min 1- 甲磺酸酚妥拉明 2- 伐地那非 3- 枸橼酸西地那非 4- 爱地那非 5- 他达拉非 6- 硫代艾地那非 7- 甲睾酮 8- 司坦唑醇 9- 达那唑 1-phentolamine mesylate 2-vardenafil 3-sildenafil citrate 4-aildenafil 5-tadalafil 6-thioaildenafil 7-methyltestosterone 8-stanozolol 9-danazol 图 1 9 种壮阳类化学药物的总离子流色谱图 Fig. 1 TIC of nine chemical drugs 9

4 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 15 期 2015 年 8 月 2241 图 2 从图 1 可看出, 在给定的色谱质谱条件下,9 种壮阳类化学药物的总离子流分离良好从图 2 可以看出,9 个 MRM 定量离子对通道内色谱峰峰形对称, 通道之间互不干扰, 定量准确度好为了保证定量分析的准确度, 对质谱扫描条件达那唑司坦唑醇甲睾酮硫代艾地那非他达拉非爱地那非枸橼酸西地那非伐地那非甲磺酸酚妥拉明 t/min 图 2 9 种化学药对照品定量离子对的 MRM 色谱图 Fig. 2 MRM chromatograms of quantitative ion pairs of reference substances of nine chemicals 进行了优化, 满足质谱定量对色谱流出峰采集 15 个点以上的要求 2.5 专属性考察取项下阴性样品溶液各 5 μl, 按 2.1 项下色谱条件进样, 按 2.2 项下质谱条件采集图谱, 得到 3 种阴性样品溶液的 MRM 色谱图,18 个通道中均未见有干扰 9 种目标物成分的色谱峰结果表明, 上述 3 种剂型中所含的中药成分均不干扰目标物的测定, 方法专属性好 2.6 线性关系考察与检测限 (LOD) 和定量限 (LOQ) 试验取项下混合对照品溶液, 按 2.1 和 2.2 项下色谱质谱条件进样测定, 以各组分定量离子对的峰面积 (v) 对质量浓度 (u) 绘制标准曲线, 得回归方程和相关系数 (r), 见表 2 结果表明,9 种化学药物在 5~400 ng/ml 或者 10~400 ng/ml 线性关系良好,r 均在 ~1.000 取阴性样品 ( 海狗肾宝胶囊 ) 适量, 置 50 ml 量瓶中, 按 1.0 mg/g 的添加量加入混合对照品溶液, 按项下供试品溶液同法经逐步稀释后进样, 以信噪比为 3 时计算各化学药的 LOD 和信噪比为 10 时计算各化学药的 LOQ, 结果见表 2, 结果表明表 2 9 种壮阳类化学药的线性方程相关系数回收率及 LOD LOQ Table 2 Linear equation, r, linear range, recovery rates, LOD, and LOQ for nine kinds of antifatigue chemicals 药品线性方程 r 线性范围 /(ng ml 1 ) 回收率 /% LOD/(ng g 1 ) LOQ/(ng g 1 ) 甲磺酸酚妥拉明 v= u ~ ~ 伐地那非 v=141.8 u ~ ~ 枸橼酸西地那非 v=679.4 u ~ ~ 爱地那非 v=284.9 u ~ ~ 他达拉非 v=607.2 u ~ ~ 硫代艾地那非 v= u ~ ~ 甲睾酮 v= u ~ ~ 司坦唑醇 v= u ~ ~ 达那唑 v=539.8 u ~ ~ LOQ 均在 0.5 ng/g 以下, 表明方法具有较高的灵敏度, 完全能满足非法添加的检测要求 2.7 进样精密度试验取质量浓度均为 200 ng/ml 的混合对照品溶液 5 μl, 按 2.1 和 2.2 项下色谱质谱条件进样测定, 连续测定 6 次, 计算甲磺酸酚妥拉明伐地那非枸橼酸西地那非爱地那非他达拉非硫代艾地那非甲睾酮司坦唑醇达那唑定量离子对质谱峰面积的 RSD 分别为 2.3% 6.7% 2.8% 2.3% 7.2% 2.5% 3.2% 1.7% 4.6%, 均在 1.7%~ 7.2%, 表明方法的精密度良好 2.8 重复性试验精密称取未检出 9 种化学药的阴性胶囊剂样品 ( 海狗肾宝胶囊 )1 次服用量, 共 6 份, 分别精密加入对照品贮备液适量, 使含各种化学药质量浓度均为 1.0 mg/g, 按项下方法进行提取制成质

5 2242 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 15 期 2015 年 8 月量浓度均为 200 ng/ml 的溶液, 作为供试品溶液, 按 2.1 和 2.2 项下色谱质谱条件进样测定, 计算各成分的量及其 RSD 结果甲磺酸酚妥拉明甲睾酮司坦唑醇达那唑爱地那非硫代艾地那非他达拉非枸橼酸西地那非伐地那非的平均质量分数分别为 mg/g;rsd 分别为 3.8% 4.1% 2.9% 5.2% 3.3% 3.0% 6.2% 2.6% 5.8%, 表明该方法重复性较好 2.9 溶液稳定性试验取 2.8 项下供试品溶液, 在配制后避光放置 h, 依法测定根据上述 9 种化学药的定量离子对色谱峰面积计算其 RSD 分别为 2.8% 5.6% 2.95% 3.2% 5.7% 2.4% 3.8% 1.6% 5.5%, 表明供试品溶液在 12 h 内稳定 2.10 加样回收率试验精密称取不含 9 种化学药的阴性胶囊剂样品 ( 海狗肾宝胶囊金日牌美国洋参胶囊 ) 片剂样品 ( 雄博牌玛咖片汤臣倍健螺旋藻片 ) 和丸剂样品 ( 源生堂牌海狗人参丸 ) 的混合样品各 9 份, 每份称取 0.5 g, 各分 3 组, 分别置于 100 ml 量瓶中, 同项下方法制备供试品溶液, 分别进行 mg/g 3 个添加水平的回收率试验, 结果见表 2 结果表明,9 种化学药的加样回收率中各质量浓度的 I-A1 平均回收率均在 88.4%~116.3%, 符合测定要求 2.11 精密度试验日内精密度和日间精密度均采用添加水平为 1.0 mg/g 的空白样品, 日内精密度由重复试验 6 次测定得到, 日间精密度连续 3 d 重复取样测定得到结果, 日内精密度 RSD 控制在 2.1%~5.2%; 日间精密度 RSD 控制在 2.8%~6.9%, 表明方法精密度良好 2.12 样品测定本次研究共收集抗疲劳类保健食品 68 批次, 取各品种样品, 按项下方法制备供试品溶液, 按 2.1 和 2.2 项下色谱质谱条件分别进样测定, 根据定量监测离子对的色谱峰面积, 采用外标法计算样品中各化学药的量共检测抗疲劳类保健食品 68 批次 ( 包括胶囊片剂丸剂等不同基质类型 ) 结果表明,68 批抗疲劳类保健食品中检出 41 批添加了化学药, 阳性率为 60.3%, 典型样品的 MRM 色谱图见图 3 样品中检出了枸橼酸西地那非他达拉非爱地那非硫代艾地那非样品信息及检出成分见表 3 3 讨论 3.1 色谱质谱条件优化在 Waters Acquity UPLC BEH 的 C 8 C 18 T 3 3 种色谱柱上, 采用 0.1% 甲酸甲醇溶液 -0.1% 甲酸水 I-A2 I-B1 I-B2 I-C1 I-C2 I-D1 II-A1 I-D2 II-A2 II-B1 II-B2 II-C1 II-C2 II-D t/min A A B B C C D D 图 3 对照品 (I) 及样品 (II) 溶液中枸橼酸西地那非 (A) 他达拉非 (B) 爱地那非 (C) 硫代艾地那非 (D) 的 MRM 定量 (1) 定性 (2) 离子对色谱图 Fig. 3 Ion pairs chromatograms of MRM quantitative (1) and qualitative (2) for sildenafil citrate (A), tadalafil (B), aildenafil (C), and thioaildenafil (D) in solution of reference substances (I) and samples (II) II-D2

6 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 15 期 2015 年 8 月 2243 表 3 样品信息及检出成分 (n = 3) Table 3 Sample information and detected components (n = 3) 样品名称规格批准文号批号或生产日期标示生产厂家检出药物量雄博牌玛咖片 0.1 g 无安徽福来生物医药有限公司未检出黄金海岸玛咖压片糖果无无广东省阳春市信德生物科技发展有限公司未检出康雀玛咖片 0.5 g 无 C078/062/A13 cantrust life cience crop 未检出三十六味帝皇丸无藏卫食健字 (2007) 第 068 号西藏康丽生物工程有限公司未检出金奥力牌辅酶 Q10 软胶囊 0.3 g 国食健字 G 委托方 : 威海紫光科技园有限公司 ; 受托方 : 威海紫光生物科技开发有限公司未检出源生堂牌海狗人参丸 0.32 g 国食健字 G 委托生产单位 : 海南正康药业有限公司 ; 受未检出托生产商 : 荣成百合生物技术有限公司斯特龙牌西洋参胶囊 500 mg 国食健字 G 福建斯特龙生物药业有限公司未检出海狗肾宝胶囊 0.6 g 港商标注号 :1998/0795 无美国 STRONG LIFE 国际集团有限公司授权未检出香港宝福堂生物医药有限公司生产铁皮石斛西洋参颗粒 3 g 国食健字 G KD001 香港康富来国际企业有限公司属下广东康富未检出来药业有限公司金日牌美国洋参胶囊 0.5 g 卫食健字 [1997] 第 535 号 A 金日制药 ( 中国 ) 有限公司未检出汤臣倍健螺旋藻片 600 mg 国食健字 G A 汤臣倍健股份有限公司未检出百合康牌蛋白粉无国食健字 G 荣成百合生物技术有限公司未检出百合康牌苦瓜洋参软胶囊 0.5 g 国食健字 G 荣成百合生物技术有限公司未检出康富来脑轻松胶囊 20 mg 卫食健字 (1998) 第 388 号 KD003 香港康富来国际企业有限公司属下广东康富未检出来药业有限公司二度春片 980 mg 港卫食准字 (2011) 第 028 号北京春运通科技发展有限责任公司枸橼酸西地那非 mg/ 片二度春软胶囊 0.5 g 卫食健字 [2001] 第 0284 号北京春运通科技发展有限责任公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒肾白金精制软胶囊 800 mg 藏卫食准字 (2004) 第 26 号拉萨雪域保健品有限公司枸橼酸西地那非 62.0 mg/ 粒虫草肾肽胶囊 0.5 g 冀卫食字 (2007) 第河北邯郸滏荣制药有限公司枸橼酸西地那非 82.9 mg/ 粒美国红牛王片无藏卫食字 :2003 第 026 号西藏拉萨市力龙生物制品公司枸橼酸西地那非 226.1mg/ 片鹿茸肾宝胶囊 mg 无香港凯旋门生物有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒鹿血片 980 mg 未标示西藏恒康生物工程有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 片金功夫胶囊 mg 国食健字 G 香港天仕力生物科技有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒虫草王胶囊 580 mg 港卫食准字 (2008) 第号香港康力保健品有限公司枸橼酸西地那非 98.4 mg/ 粒速勃延时 999 胶囊 500 mg 无香港天龙生物科技 ( 国际 ) 集团公司枸橼酸西地那非 48.2 mg/ 粒虫草补肾王胶囊 990 mg 无无西藏天龙生物科技有限公司枸橼酸西地那非 82.4 mg/ 粒德国黑蚂蚁生精片 mg 无香港天龙生物科技 ( 国际 ) 集团公司枸橼酸西地那非 mg/ 片万爱可胶囊 mg 食健字 (2004) 第 0468 号杜邦香港生物有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒, 他达拉非 41.9 mg/ 粒美国奥康复胶囊无无杜邦香港生物有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒鹿茸肾宝胶囊 mg 无香港凯旋门生物有限公司枸橼酸西地那非 48.9 mg/ 粒金牌伟哥胶囊 800 mg 无中国西藏宏泰生物保健品有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒极品袋鼠精胶囊 880 mg 无香港新马生物科技 ( 国际 ) 集团公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒金虎鞭片 584 mg 粤卫特食准字 (2010) 第号无广州梦之美生物保健有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 片男根宝胶囊 450 mg 藏卫食准字 (2005) 第 0018 号西藏威龙生物工程有限公司枸橼酸西地那非 96.4 mg/ 粒极品海狗胶囊 300 mg 港卫食进字 (2008) 第香港威信生物技术公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒, 他达拉非 20.6 mg/ 粒

7 2244 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 15 期 2015 年 8 月续表 3 样品名称规格批准文号批号或生产日期标示生产厂家检出药物量极品海狗胶囊 300 mg 港卫食进字 (2008) 第 0178 号香港威信生物技术公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒, 他达拉非 29.8 mg/ 粒德国黑蚂蚁生精片 250 mg 无香港天龙生物科技 ( 国际 ) 集团公司枸橼酸西地那非 mg/ 片艾力达胶囊 200 mg 无无中美合资威尔康制药有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒金枪不倒胶囊 980 mg 藏卫食准字 (2009) 第 015 号西藏顺昌保健品有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒 Vigour800 片 800 mg 无 03R012A 美国辉瑞生物研究所枸橼酸西地那非 mg/ 片神力源酒 500 ml 无烟台鑫达酒业有限责任公司枸橼酸西地那非 0.4 mg/ml, 爱地那非 0.3 mg/ml 剑圣养生酒 250 ml 无西藏剑圣生物制药制品开发有限公司授权四川省东圣酒业股份有限公司生产硫代爱地那非 0.3 mg/ml, 爱地那非 0.1 mg/ml 海狗肾宝丸无无贵州鸿康生物技术有限公司枸橼酸西地那非 0.5 mg/g, 他达拉非 0.04 mg/g 金秋葵牌黄秋葵咀嚼片 500 mg 无湖北汇丰医药科技有限公司未检出极品海狗胶囊 300 mg 港卫食进字 (2008) 第 0178 号香港威信生物技术公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒, 他达拉非 15.0 mg/ 粒速效金伟哥胶囊 250 mg 港卫食准字 (2011) 第 038 号香港人和堂生物有限公司枸橼酸西地那非 84.6 mg/ 粒蚁力神胶囊 250 mg 无美国蚁力神生物工程经贸公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒强肾海狗胶囊无无香港和生源生物科技有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒强肾海狗胶囊无无香港和生源生物科技有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒强力肾雄康泰胶囊 400 mg 无成都市博康生物药业有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒脑白金胶囊口服液 0.25 g 250 ml 卫食健字 (1997) 第 723 号无锡健特药业有限公司未检出绿色经典牌螺旋藻片 0.25 g 国食健字 G 委托生产商 : 西哥玛 ( 福建 ) 生物科技有限公司未检出受托生产商 : 荣成百合生物技术有限公司乳尔牌牛初乳冻干粉胶囊 100 mg 国食健字 G 委托企业 : 哈尔滨康普乳品有限公司 ; 受托企未检出业 : 黑龙江康普生物科技有限公司威士雅虫草菌丝体胶囊 300 mg 卫食健字 (1998) 第 478 号广东威士雅保健品有限公司未检出虫草藏鞭宝胶囊 250 mg 藏卫食准字 (2009) 第 065 号西藏力龙生物科技有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒蚁力神生精胶囊 mg 无香港瑞达生物科技有限公司枸橼酸西地那非 94.4 mg/ 粒速硬 100 持久胶囊 mg 港卫食准字 (2009) 第 156 号香港起龙生物科技有限公司枸橼酸西地那非 62.7 mg/ 粒虫草养生酒 500 ml 卫食健字 [1998] 第 272 号出品企业 : 海口天方天然保健品有限公司 ; 受委托未检出生产企业 : 三九企业集团兰考葡萄酒业有限公司硬到底胶囊 mg 国食健字 G 香港金康国际生物药业科技有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒威士雅牌氨基酸胶囊 0.4 g 卫食健字 (2002) 第 0594 号广东威士雅保健品有限公司未检出森山铁皮枫斗 0.4 g 卫食健字 [2002] 第 0082 号浙江森宇药业有限公司未检出虫草藏鞭宝胶囊 990 mg 藏卫食准字 (2009) 第 065 号西藏力龙生物科技有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒鸿春酒 38% 无江苏鸿春酒业有限公司硫代爱地那非 0.5 mg/ml, 爱地那非 0.2 mg/ml 斯特龙牌西洋参胶囊 500 mg 国食健字 G 福建斯特龙生物药业有限公司未检出玛咖片 ( 玛咖粉压片糖果 ) 0.5 g 无广州市雅博生物科技有限公司未检出雪域藏宝胶囊 mg 无西藏唐古拉巨龙生物科技有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒金伟 VGA 胶囊 mg 无无上海端姿生物科技有限公司枸橼酸西地那非 mg/ 粒维妥立螺旋藻咀嚼片 0.28 g 国食健字 G GJ 广东仙乐制药有限公司未检出鹿鞭牡蛎复合片 ( 压片糖果 ) 715 mg SB/T 东营倍康生物科技有限公司未检出

8 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 15 期 2015 年 8 月 2245 溶液甲醇溶液 -10 mmol/l 乙酸铵溶液 0.1% 甲酸乙腈溶液 -0.1% 甲酸水溶液乙腈溶液 -10 mmol/l 乙酸铵溶液等 4 个流动相体系, 分别考察了对 9 种壮阳类化学药物的色谱分离效果和质谱响应的因素试验结果表明,C 18 柱显著优于 C 8 与 T 3 柱 ; 甲醇比乙腈更有利于各组分之间的分离, 添加甲酸可提高质谱的响应值和各组分的分离度, 结果以 0.1% 甲酸甲醇溶液 -0.1% 甲酸水溶液的流动相体系为佳在有机相与水相中均添加甲酸为佳, 添加量均以 0.1% 为宜, 可保证 9 种壮阳类化学药物具有最佳的色谱分离度和最高的质谱响应值对梯度洗脱程序进行了优化, 分 3 个时间段使有机相从初始的 50% 变为 100%, 保证各组分得到良好的分离 3.2 测定模式选择上述 9 种药物的分子结构中均含有 N 基团, 采用 ESI 电离, 在正离子模式下, 通过对一级锥孔电压的调谐, 可获得各组分最佳的 [M+H] + 分子离子峰响应值再分别对二级质谱碰撞室能量的调谐优化, 选择丰度比最大且稳定的 2 个碎片离子, 构成一组定性和定量离子对采用 MRM 测定, 具有极高的灵敏度和选择性而且 MRM 具有再次分离功能, 对色谱不能完全分离的 2 个色谱峰, 在 MRM 下可以达到完全分离, 通道之间不干扰, 定量结果准确, 可满足具有较复杂基质的中成药及保健品的快速检测 3.3 加样回收率结果分析本法采用胶囊剂片剂丸剂 3 种剂型阴性样品加标进行回收率试验以考察方法准确性考虑到不同剂型的基质对本底以及回收率可能造成不同的影响, 选取具有代表性的未检出上述 9 种化学药的保健品配制混合空白基质, 分别制成胶囊剂片剂丸剂 3 种剂型的空白基质, 分别进行加样回收率试验结果表明, 胶囊剂片剂丸剂 3 种剂型的加样回收率没有明显差别, 各成分回收率均在 80%~ 120%, 表明方法准确性好 3.4 小结选择 9 种壮阳类药物作为目标物, 采用 UPLC- MS/MS 多离子反应监测模式建立了一个操作简便适用范围广灵敏度高准确快速的高通量检测平台一次进样即可获得 18 个通道采集的质谱信息, 方法将快速初筛和准确定量统一结合, 提高了抗疲劳类保健食品中非法添加物检测工作的效率该方法不仅适用于胶囊剂片剂丸剂样品中 9 种壮阳类化学药物的准确检测, 也适用于其他剂型保健食品和中成药样品的快速初筛参考文献 [1] 符江, 荆文光, 章军, 等. 中药中非法添加问题研究现状与分析 [J]. 中草药, 2014, 45(3): [2] 丁宝月, 屠婕红, 薛磊冰, 等. UPLC-MS/MS 法快速测定降压类中成药及保健食品中非法添加 34 种化学药的研究 [J]. 中草药, 2015, 46(5): [3] 黄宝斌, 许明哲, 杨青云, 等. 中成药和中药材添加化学物质补充检验方法分析 [J]. 药物分析杂志, 2014, 34(9): [4] 朱健, 裘一婧, 沈国芳. UPLC-MS/MS 法快速检测减肥类保健品中 13 种非法添加化学成分 [J]. 中草药, 2014, 45(4): [5] 邓鲲鹏, 罗卓雅, 雷毅. 补肾壮阳类健康产品中艾地那非的检测方法研究 [J]. 中国药学杂志, 2011, 46(18): [6] 戚亮, 崔琳. HPLC 法测定枸橼酸西地那非的含量 [J]. 黑龙江医药, 2013, 26(5): [7] 邢俊波, 曹红, 张炯, 等. 高效液相色谱法同时测定补肾壮阳类中成药及保健食品中非法添加 7 种化药成分 [J]. 时珍国医国药, 2014, 25(2): [8] 曲晓宇, 董雷, 张四喜, 等. HPLC-MS/MS 法同时检测抗疲劳药物及保健品中非法添加的 7 种壮阳类化学药物 [J]. 中国药房, 2013, 24(33): [9] 刘畅, 夏晶, 胡青, 等. LC/MS n 法检测补肾壮阳类中成药和保健食品中非法添加 5 种性功能类化学 [J]. 中成药, 2009, 31(9): [10] 高咏莉, 邬晓鸥, 肖丽和, 等. HPLC-MS/MS 法测定补肾壮阳类药品或保健品中非法添加羟基豪莫西地那非的研究 [J]. 中成药, 2009, 31(7): [11] 陈安珍, 王尊文, 杨钊, 等. UPLC-MS/MS 检测补肾壮阳类中成药及保健品中添加的化学药 [J]. 中成药, 2009, 31(11): [12] 刘莉, 周世玉, 程龙琼. 补肾壮阳类中成药中西地那非等的快速检测 [J]. 医药导报, 2012, 4(31): [13] 于泓, 胡青, 张延, 等. 补肾壮阳类中药及保健食品中 31 种 5 型磷酸二酯酶抑制剂的高分辨四级杆飞行时间质谱定性定量检测方法 [J]. 中国药学杂志, 2013, 48(15): [14] 来国防, 程宾, 王梅. 补肾壮阳类中药制剂中非法添加化学药物成分的检测 [J]. 中国药业, 2010, 19(22):

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Microsoft Word - 4期中文目次.doc 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷第 4 期 2014 年 2 月 509 UPLC-MS/MS 法快速检测减肥类保健品中 13 种非法添加化学成分朱健, 裘一婧, 沈国芳杭州市食品药品检验研究院, 浙江杭州 310017 摘要 : 目的建立保