Inorganic arsenic compounds cause oxidative damage to DNA and protein by inducing ROS and RNS generation in human keratinocytes
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- 娘 安
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1 傳統與現代的結合 : 中醫藥與幹細胞生物學結合為中風治療帶來曙光 沈劍剛教授 香港大學李嘉誠醫學院中醫藥學院教授及助理院長 ( 科研 ) 1990 至 2040 年的中國人口統計 中國屬於 高齡化社會 Caution: Aging China!!! 預估 預估
2 香港人口金字塔 Hong Kong Population Pyramid 年齡組別 Age Group 年齡組別 年齡組別 2033 男姓 Male Thousand Persons 千人 女姓 Female Age Group 男姓 Male Thousand Persons 千人 女姓 Female Age Group 85+ 男姓 Male Thousand Persons 千人 女姓 Female 一 中風與老年病 中風是增齡性疾病, 為人類致死病因的第 2 位 中風在中國位列第一位殺手, 致死率和致殘率高, 中國每年的發病患者達 200 萬, 每年約有 120 萬人死於腦中風 大多數 (60-80%) 患者遺留不同程度的後遺症,¼ - ¾ 的腦卒中患者可能在 2-5 年內復發
3 一組全球數字 : 每 2 秒鐘就有 1 人發生腦卒中 每 6 秒鐘就有 1 人因為腦卒中而致殘 每 6 秒鐘就有 1 人因為腦卒中而死亡 每 6 人中就有 1 人一生中會罹患腦卒中 1. 中風診斷現況 醫學成像技術用於中風診斷和監測療效
4 Cerebral Haemorrhage Ischaemic stroke Ischaemic Stroke CT Image
5 Haemorrhage Stroke CT Image 多種電腦成像技術為診斷與治療中風提供有力的工具 Patient imaged with multimodal CT at 3.5 hours after stroke. M1 occlusion on CT angiography (CTA) (lower left). Small area of reduced cerebral blood volume (CBV) in lentiform nucleus and deep white matter but surrounded by much larger areas of reduced cerebral blood flow (CBF)/prolonged mean transit time (MTT) consistent with ischemic penumbra. Minimal change seen on non-contrast CT (NCCT). Patient treated with intravenous (IV) thrombolysis and had major early neurologic improvement, complete recanalisation on follow-up magnetic resonance angiography (MRA) (lower right), and only a small amount of infarction on follow-up diffusion-weighted imaging (DWI) (corresponding to pre-treatment areas of reduced CBV).
6 發展腦氧分佈地形圖技術檢測腦氧供應 EPR po2 imaging and diffusion weight MR image show the site of the ischemic lesion (hyper intense region). The permeability coefficient color map demonstrates regions of high and low permeability with regions of high permeability corresponding to BBB breakdown Shen JG, et al. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism 2009; 29(10): 時間就是腦細胞! PET/CT Top: 18F-fluoromisonidazole (FMISO) PET scan performed 7 hours after stroke onset. The PET scan is co-registered to the delayed CT scan outlining final infarct at 7 days. At 7 hours after stroke onset, a significant volume of penumbral tissue that is potentially viable is observed surrounding the infarct core. Middle: Construction of the penumbragram. Central (yellow), peripheral (red), and external (blue) zones of the infarcted volume are shown. In the penumbragram, superior and inferior halves of the infarcted volume are defined by the horizontal plane. The inner, middle, and outer circles represent the central, peripheral, and external zones. Lowest: Temporal evolution of the penumbragram. Composite penumbragram for each time epoch (< 6, 6-16, 16-24, and hours) after stroke onset are shown. The number in each region refers to the percentage of hypoxic volume. Higher volume of hypoxic tissue is observed in the central region within 6 hours. Ebinger M,et al. J Clin Neurosci Feb;16(2):178-87
7 1996 年美國 FDA 批准 tpa 治療急性缺血性腦卒中 纖溶酶原 tpa 纖溶酶 血栓 腦動脈 挽救缺血腦組織 tpa 溶栓治療腦卒中 : 兩難選擇 tpa 經 tpa 及時治療的腦 卒中病人, 致殘率降 低 30% 嚴重腦出血風險增加 10 倍 嚴重腦出血的死亡率高達 61% 迄今無法準確預測腦出血風險
8 延遲 tpa 再灌顯著增加卒中死亡率 生理鹽水或 tpa 5 小時缺血 19 小時再灌 MCA ICA ECA CCA 生理鹽水 tpa (Liu W et al, Stroke. 2009) 延遲 tpa 再灌導致腦出血 生理鹽水或 tpa 5 小時缺血 19 小時再灌 生理鹽水治療組 tpa 治療組 (Liu W et al, Stroke. 2009)
9 神經保護藥 : 可望而不可及 >1000 個化合物在動物卒中模型上被證明治療卒中有效 114 個化合物進入了臨床實驗 0 個化合物有效 Neuroprotection: the end of an era? (Lancet 2006) 手術治療對出血性中風的療效也不肯定 Early surgery versus initial conservative treatment (STICH Trial) 1033 primary ICH patients ICH onset within 72 hrs Favourable outcome at months Early surgery: 26% Initial conservative: 24% (p=0.414) A large RCT 1033 patients from 83 centers in 27 countries failed to show a benefit of surgery over conservative treatment in acute hemorrhagic stroke. (Mendelow AD, et al. Lancet 2005;365(9457): )
10 DCX+ cells per hippocampus 幹細胞生物學的發展為中風後腦修復帶來希望 Neurogenesis mainly occurs in the two areas of adult brains. (Zaal K and Olle L, Current Opinion in Neurobiology, 2003) A Day 1 Sham operation Ipsilateral side 缺血腦神經幹細胞有潛在自發性神經再生能力, 但是再生是短暫的 Day 7 B 3600 ## ** Day 14 Day ## * Ischemia Sham control ## ** ** ** Day 1 Day 7 Day 14 Day 21 Day 28 *, p<0.05 Day 28 **, ## p<0.01
11 目前促神經再生療法存在的問題 神經幹細胞移植是今後發展方向, 但是短期無法用於臨床 藥物治療以促進內生的神經幹細胞有無可能? 如何能找到一種 神藥 治療中風引起的多系統信號網絡紊亂達到神經再生? 中醫藥與幹細胞生物學結合是再生醫學新方向
12 中醫與西醫 Western Medicine Bridge?? TCM Experiments Knowledge & Theory Drugs Clinical Symptoms Error & Trials Herbs Knowledge & Theory Drugs and Formula Bench to Bedside Direct clinical trials 神農嚐百草, 日遇七十毒 陰陽平衡是健康之本! 病理因素 陽盛陰虛 陰陽平衡 陰盛陽虛
13 治療目的 : 平衡陰陽 整合療法 : 草藥 針灸 太極 氣功 平衡陰陽 草藥也分陰陽之性 : 四氣五味 涼藥 瀉藥 金銀花 菊花 薄荷 熱藥 補藥 細辛 荊芥 黃芪
14 中醫對中風病機的認識 中醫學對 中風 的臨床表現早有記載, 黃帝內經 中記載 : 血之與氣, 並走於上, 則為大厥, 厥則暴死, 氣復返則生, 不返則死, 此為典型的出血性中風的臨床表現 基本病機 : 陰陽失調, 氣血逆亂 病理性質 : 本虛標實 肝腎陰虛, 氣血衰少為致病之本, 風 火 痰 氣 瘀為發病之標, 兩者可互為因果 輕者中經絡, 重者中臟腑 恢復期因氣血失調, 血脈不暢而後遺經絡病證 因肝腎陰虛, 氣血虧損未復, 風 火 痰 瘀之邪留滯經絡, 氣血運行不暢 半身不遂 口歪或不語等後遺症 中風病證的中醫辨證 如病人表現為手足麻木 肢體輕度運動失調, 或口眼歪斜 語言不利等證, 多屬於 中經絡, 治療上採用袪風活血通絡之中藥 ; 如用大秦艽湯祛風通絡, 治療絡脈空虛 風邪入侵所致的中風病證 ; 用鎮肝熄風湯治療肝腎陰虛 風陽上亢的中風病證 ; 用溫膽湯治療痰涎壅盛的中風病證 如病人表現為昏迷不醒, 則屬於 中臟腑 的病證, 雖然目前對這一類病人多經西醫治療, 但也有一些中藥可配合西醫治療, 如安宮牛黃丸 參附湯 蘇合香丸等 中風後遺症的治療方面, 半身不遂者可用補陽還五湯加減以益氣活血, 兼補益肝腎, 如加水蛭 桑枝 桑寄生 川斷 地黃 山萸肉 雞血藤等 語言不利者, 以解語丹加減
15 生物活性指導的草藥新藥研究策略 單味藥 提取 中藥複方 提取 質量控制活性 / 毒性再評價加減 & 改良 提取物 提取物 生物活性篩選 有效原理 生物活性篩選 生物活性篩選 有效組分 活性複方 結構解析 有效結構 先導化合物 結構修飾機制研究 臨床前研究臨床研究 新藥 質量控制臨床前研究臨床研究 細胞體外實驗中已經證實對神經再生有效的中藥單體化合物 化合物名植物來源對神經再生的影響細胞模型可能的機制 丹酚酸 B 黃芩苷 丹參 黃芩 細胞增殖 神經小球形成 大鼠胚胎神經幹細胞 神經元分化 大鼠胚胎神經幹細胞星形膠質細胞分化 PI3K/Akt p-stat3 Hes1, NeuroD1 Mash 1 薑黃素薑黃幹細胞增殖 C17.2 神經組細胞系 perk p-p38 川芎嗪 川芎 幹細胞增殖 低氧模型下的大鼠胚胎神經神經小球形成 幹細胞神經元分化 星形膠質細胞分化 Gentisides C-K 龍膽草神經軸突生長 PC12 細胞系 perk 人參皂苷 Rg5 人參神經元分化 小鼠胚胎神經幹細胞 [Ca 2+ ] 白果內酯和槲皮素銀杏 遠志皂苷 遠志 幹細胞增殖 神經元分化 幹細胞增殖 神經小球形成 神經元分化 膠質形成 大鼠海馬神經祖細胞 大鼠胚胎神經幹細胞 BDNF pcreb Shen J.,Chen X. Drug Discovery from Traditional Chinese Medicine for Neurogenesis: Implications for Stroke and Neurodegenerative Diseases. In: James D., Adams, Jr.Traditional Chinese Medicine - Scientific Basis for its Use,Royal Society of Chemistry Publishing Group, London, , 2013.
16 細胞體外實驗中已經證實對神經再生有效的單味藥提取物 名稱植物來源對神經再生的影響細胞模型可能的機制 三七皂苷 三七 幹細胞增殖 神經元分化 大鼠海馬神經祖細胞 EGb 761 銀杏幹細胞增殖 胚胎幹細胞 pcreb 遠志根提取物遠志神經元分化 神經前體細胞 (HiB5) 枸杞多糖枸杞幹細胞增殖 C17.2 神經組細胞系 淫羊藿黃酮 淫羊藿 幹細胞增殖 神經小球形成 神經元分化 大鼠海馬神經幹細胞 Shen J., Chen X. Drug Discovery from Traditional Chinese Medicine for Neurogenesis: Implications for Stroke and Neurodegenerative Diseases. In: James D., Adams, Jr. Traditional Chinese Medicine - Scientific Basis for its Use, Royal Society of Chemistry Publishing Group, London, , 細胞體外實驗中已經證實對神經再生有效的中藥複方 複方方名植物來源對神經再生的影響細胞模型 MLC901 黃芪, 丹參, 赤芍, 川芎, 當歸, 紅花, 桃仁, 遠志, 石菖蒲 補陽還五湯黃芪, 當歸尾, 赤芍, 川芎, 紅花, 桃仁, 地龍 幹細胞增殖 神經軸突生長 神經元分化 人胚胎幹細胞分化的神經祖細胞 大鼠胚胎幹細胞模型 Shen J., Chen X. Drug Discovery from Traditional Chinese Medicine for Neurogenesis: Implications for Stroke and Neurodegenerative Diseases. In: James D., Adams, Jr. Traditional Chinese Medicine - Scientific Basis for its Use, Royal Society of Chemistry Publishing Group, London, , 2013.
17 動物實驗中已經證實對神經再生有效的中藥單體化合物 化合物名 植物來源 動物模型 對神經再生的影響 對功能恢復的作用 薑黃素 薑黃 小鼠 DG 和 SVZ 區幹細胞增殖 淫羊藿苷 淫羊藿 衰老大鼠 DG 區幹細胞增殖和分化 學習記憶能力增強 槲皮素 多種藥用植物大鼠腦缺血模型 SVZ 區幹細胞增殖 丹酚酸 B 丹參 大鼠腦缺血模型海馬區幹細胞增殖 學習記憶能力增強 Shen J., Chen X. Drug Discovery from Traditional Chinese Medicine for Neurogenesis: Implications for Stroke and Neurodegenerative Diseases. In: James D., Adams, Jr. Traditional Chinese Medicine - Scientific Basis for its Use, Royal Society of Chemistry Publishing Group, London, , 動物實驗中已經證實對神經再生有效的單味藥提取物 提取物名植物來源動物模型對神經再生的影響 附子多糖烏頭小鼠 棗醇提取物棗小鼠 檸檬香草提取物 檸檬香草小鼠 桔梗水提物桔梗小鼠 銀杏提取物銀杏小鼠 標準銀杏提取物 EGb 761 銀杏 遠志根提取物遠志 阿爾茨海默氏模型小鼠 大鼠 蓮藕提取物睡蓮大鼠 山茱萸環烯醚萜苷 山茱萸 大鼠腦缺血模型 DG 區幹細胞增殖 新生成熟神經元 DG 區幹細胞增殖 新生未成熟神經元 DG 區幹細胞增殖 新生未成熟神經元 DG 區幹細胞增殖 新生未成熟神經元 DG 區幹細胞增殖 新生未成熟神經元 DG 區幹細胞增殖 新生成熟神經元 海馬 CA1 區幹細胞增殖 神經元分化 DG 區幹細胞增殖 新生未成熟神經元 SVZ 區幹細胞增殖 新生成熟神經元 對功能恢復的作用 運動和學習能力增強 認知能力增強 運動和學習記憶能力增強 可能的機制 BDNF GABA level Aβ pcreb VEGF Flk-1 Shen J., Chen X. Drug Discovery from Traditional Chinese Medicine for Neurogenesis: Implications for Stroke and Neurodegenerative Diseases. In: James D., Adams, Jr. Traditional Chinese Medicine - Scientific Basis for its Use, Royal Society of Chemistry Publishing Group, London, , 2013.
18 動物實驗中已經證實對神經再生有效的中藥複方 複方方名植物來源動物模型對神經再生的影響 加味溫膽湯 六味地黃湯 複智散 MLC 601 MLC901 補陽還五湯 半夏, 竹茹, 枳實, 豬苓, 陳皮, 甘草, 玄參, 人參, 地小鼠黃, 酸棗仁, 枸杞, 乾薑 地黃, 赤芍, 山茱萸, 澤瀉, 大鼠牡丹皮, 茯苓, 五味子 人參, 黃芩, 石菖蒲, 甘草 SAMP-8 小鼠 海馬區新生神經元 DG 區幹細胞增殖 DG 和 SVZ 區幹細胞增殖 黃芪, 丹參, 赤芍, 川芎, 當歸, 紅花, 桃仁, 遠志, 小鼠腦缺血幹細胞增殖 石菖蒲, 水蛭, 土鼈蟲, 牛模型神經元分化 黃, 全蝎, 羚羊角 黃芪, 丹參, 赤芍, 川芎, 當歸, 紅花, 桃仁, 遠志, 石菖蒲 大鼠四血管栓塞模型 黃芪, 當歸尾, 赤芍, 川芎, 大鼠腦缺血紅花, 桃仁, 地龍模型 DG 區幹細胞增殖 神經元分化 DG 和 SVZ 區幹細胞增殖 對功能恢復的作用 學習能力增強 認知學習能力增強 學習記憶能力增強 運動能力增強 學習記憶能力增強 神經功能評分好轉 可能的機制 pakt BDNF pcreb BDNF VEGF Flk-1 Shen J., Chen X. Drug Discovery from Traditional Chinese Medicine for Neurogenesis: Implications for Stroke and Neurodegenerative Diseases. In: James D., Adams, Jr. Traditional Chinese Medicine - Scientific Basis for its Use, Royal Society of Chemistry Publishing Group, London, , 補陽還五湯清代王清任 醫林改錯 組方 : 黃芪 120g 當歸 6g 赤芍 4.5g 川芎 3g 地龍 3g 桃仁 3g 红花 3g 功效 : 補中益氣 活血通經 為益氣活血的代表性名方, 其配伍在中醫傳統名方中相當獨特 重用黃蓍為君藥, 其餘活血通絡的藥物為臣藥或佐使之藥 適應症 : 用於治療氣虛血瘀之中風後遺症, 出現口眼歪斜 半身不遂 語言不利等症狀 醫林改錯 : 此方治半身不遂 口眼歪斜 語言蹇澀 口角流涎 大便乾燥 小便頻數 遺尿不禁
19 基因組學研究顯示該方能調節多種神經生長及神經保護因素且質量控制可靠 Selection of candidate marker genes and TaqMan qrt-pcr determination of marker genes in different batch HPLC chromatographic profiles recorded at (1) 295 nm, (2) 235 nm and (3) 205 nm Rong J,Cheung CY, Lau AS, Shen J et al. J Ethnopharmacol Aug 15;113(1): 該方能通過調節多信號通路促神經再生 調節神經幹細胞增殖 分化 神經網路形成 細胞死亡和能量代謝相關基因
20 全方促神經再生研究 ( 中風動物模型 ) Proliferation (BrdU/NeuN dual) Differentiation (DCX/NeuN dual) Effects of BHD-01 on improving neurogenesis in hippocampus area in experimental ischemic stroke rat models at day 14 活性組分的研究 Ctr F12 F13 F18
21 61.2 鑒定活性成份及單體化合物的研究策略 Intens. x MS, 3.6min #223, 100%= Intens. x MS, 28.6min #1959, 100%= m/z m/z Intens. x MS, 19.9min #1355, 100%= Intens. x MS, 30.2min #2070, 100%= m/z m/z 有效成份促幹細胞生長有效 細胞學證據 動物實驗證據
22 我們的實驗研究結論 對該方的促進神經再生作用進行了系統研究, 證明該方能調控多種神經再生相關的細胞信號, 並促進中風後神經功能的修復 臨床治療中風是否有效? 集萃分析方法評價該方臨床療效 Hao CZ, Wu F, Shen JG, et al. Evid Based Complement Alternat Med. 2012; 2012:
23 集萃分析發現該方臨床治療中風促神經功能改善有效 Meta-analyses of the total effective rate of BHD therapy for acute ischaemic stroke. Hao CZ, Wu F, Shen JG, et al. Evid Based Complement Alternat Med. 2012; 2012: F 集萃分析方法顯示臨床療效評價存在偏見 Funnel plot of the total effective rate of BHD therapy for acute ischaemic stroke. Hao CZ, Wu F, Shen JG, et al. Evid Based Complement Alternat Med. 2012; 2012:
24 結論 中醫藥以其多成份和多靶點的治療策略在促進中風後神經再生腦修復有獨到的優勢 運用多學科技術和方法研究中藥複方, 不僅為闡明中藥複方的治療原理提供希望, 而且為中風新藥研究奠定基礎 Acknowledgements: Funds: The study was supported by RGC GRF grant (No M, M, M, M) Seed Fund for Basic Research, HKU Send Fund for Applied Research, HKU Dr Wong BL Family Donation Ms Kan SY Stem Cell Research Fund
香港大學與中醫藥有關的中風及腦血管病研究工作
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在 线 投 稿 : http://www.baishideng.com/wcjd/ch/index.aspx 帮 助 平 台 : http://www.wjgnet.com/esps/helpdesk.aspx DOI: 10.11569/wcjd.v23.i28.4568 世 界 华 人 消 化 杂 志 2015 年 10 月 8 日 ; 23(28): 4568-4573 ISSN 1009-3079
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