882 李 冬, 等. 香 烟 烟 雾 激 活 肺 癌 细 胞 Wnt/β-catenin 信 号 途 径 的 机 制 研 究 This positive rate had a relationship with smoking status and tumor stage, there was s
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1 中 国 癌 症 杂 志 2014 年 第 24 卷 第 12 期 CHINA ONCOLOGY 2014 Vol.24 No 香 烟 烟 雾 激 活 肺 癌 细 胞 Wnt/β-catenin 信 号 途 径 的 机 制 研 究 李 冬 万 海 英 姚 懿 雯 吴 军 录 权 文 强 周 宏 张 宇 同 济 大 学 附 属 同 济 医 院 检 验 科, 上 海 [ 摘 要 ] 背 景 与 目 的 : 香 烟 烟 雾 诱 导 的 炎 性 反 应 可 显 著 促 进 肺 肿 瘤 的 生 长, 本 研 究 通 过 体 内 外 实 验 明 确 香 烟 烟 雾 激 活 肺 癌 细 胞 Wnt/β-catenin 信 号 途 径 的 机 制 方 法 : 利 用 尾 静 脉 注 射 鼠 Lewis 肺 癌 细 胞 方 法 建 立 小 鼠 肺 癌 模 型, 然 后 采 用 香 烟 烟 雾 对 其 进 行 刺 激, 诱 发 炎 性 反 应 免 疫 组 化 方 法 检 测 小 鼠 和 人 肺 肿 瘤 组 织 中 CD68 肿 瘤 坏 死 因 子 α(tumor necrosis factor alpha,tnf-α) 和 无 磷 酸 化 β-catenin 的 表 达 采 用 Transwell 插 入 式 细 胞 培 养 皿 共 培 养 人 巨 噬 细 胞 和 人 肺 癌 细 胞 株 A549 细 胞 采 用 蛋 白 质 印 迹 法 (Western blot) 检 测 A549 细 胞 中 无 磷 酸 化 β-catenin 的 表 达 及 磷 酸 化 的 GSK-3β 和 Akt 蛋 白 的 表 达 结 果 : 免 疫 组 化 结 果 显 示, 香 烟 烟 雾 刺 激 肺 肿 瘤 负 荷 小 鼠 后, 其 肿 瘤 组 织 中 巨 噬 细 胞 CD68 + TNF-α 和 无 磷 酸 化 β-catenin 的 表 达 均 明 显 高 于 对 照 组 肺 癌 患 者 肿 瘤 组 织 中,CD68 和 TNF-α 的 阳 性 表 达 均 明 显 高 于 正 常 组 织 肺 腺 癌 和 鳞 癌 的 无 磷 酸 化 β-catenin 的 染 色 阳 性 率 分 别 为 68.9% 和 62.2%, 其 阳 性 率 与 患 者 吸 烟 与 否 及 肿 瘤 分 期 有 关, 差 异 有 统 计 学 意 义 (P 均 <0.05), 并 且 CD68 + 的 细 胞 数 在 无 磷 酸 化 β-catenin 染 色 阳 性 的 标 本 中 显 著 升 高 (P<0.01) Western blot 检 测 结 果 显 示, 不 同 浓 度 香 烟 抽 提 物 (cigarette smoke extract,cse) 刺 激 共 培 养 细 胞 后,A549 细 胞 中 无 磷 酸 化 β-catenin 的 表 达 随 着 CSE 浓 度 的 增 加 而 显 著 上 升 在 加 入 TNF-α 中 和 抗 体 后,A549 细 胞 中 无 磷 酸 化 β-catenin 的 表 达 被 抑 制 用 TNF-α 处 理 A549 细 胞 后, 磷 酸 化 的 GSK-3β 和 Akt 蛋 白 在 2 h 后 表 达 增 加,4 h 后 无 磷 酸 化 β-catenin 蛋 白 表 达 也 开 始 上 调 结 论 : 香 烟 烟 雾 诱 导 肺 肿 瘤 组 织 中 巨 噬 细 胞 释 放 炎 性 反 应 因 子 TNF-α, 进 而 通 过 Akt/GSK-3β 途 径 激 活 肿 瘤 细 胞 中 Wnt/β-catenin 信 号 通 路 [ 关 键 词 ] 巨 噬 细 胞 ; 肺 癌 ; 肿 瘤 坏 死 因 子 α;wnt/β-catenin 信 号 通 路 DOI: /j.issn 中 图 分 类 号 :R734.2 文 献 标 志 码 :A 文 章 编 号 : (2014) The study on mechanisms of Wnt/β-catenin signaling activation by smoke from cigarette in lung cancer cell LI Dong, WAN Hai-ying, YAO Yi-wen, WU Jun-lu, QUAN Wen-qiang, ZHOU Hong, ZHANG Yu (Department of Clinical Laboratory, Tongji Hospital, Tongji University, Shanghai , China) Correspondence to: LI Dong 186ld@163.com [Abstract] Background and purpose: Cigarette smoke-induced inflammatory response remarkably promotes lung tumor growth. This study aimed to elucidate the mechanism of Wnt/β-catenin signaling activation by cigarette smoke in lung cancer cells. Methods: To understand the effect of cigarette smoke on mice, a kind of metastatic lung cancer mouse model which was established by intravenous injection of Lewis lung carcinoma cells. By immunohistochemical analysis, we analyzed the expression of CD68 (macrophage marker), TNF-α and unphosphorylated β-catenin in mice and human lung cancer samples. To coculture human lung adenocarcinoma cell line A549 cells with macrophages, the Transwell Inserts system was used in coculturing model. The expressions of unphosphorylated β-catenin, phosphorylated GSK-3β and Akt in A549 cells were detected by Western blot assay. Results: The immunohistochemical results showed positive staining for CD68, TNF-α and unphosphorylated β-catenin increased significantly in smoke-exposed mice compared to air exposure mice. In human lung cancer samples, CD68 and TNF-α expressions were significantly higher than in healthy lung tissue. The positive staining rates of unphosphorylated β-catenin in lung adenocarcinoma and squamous cell carcinoma were 68.9% and 62.2%, respectively. 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 ( ); 上 海 市 浦 江 人 才 计 划 (13PJ ); 上 海 申 康 医 院 发 展 中 心 课 题 (SHDC ) 通 信 作 者 : 李 冬 186ld@163.com
2 882 李 冬, 等. 香 烟 烟 雾 激 活 肺 癌 细 胞 Wnt/β-catenin 信 号 途 径 的 机 制 研 究 This positive rate had a relationship with smoking status and tumor stage, there was statistical significance (both P<0.05). It also showed the number of CD68 + cells had a significant increase in tumors positive for unphosphorylated β-catenin (P<0.01). Western blot results showed that the expression of unphosphorylated β-catenin in A549 cells had a significant concentration-dependent increase of CSE after coculturing with macrophages. The neutralizing antibody against TNF-α could significantly suppressed unphosphorylated β-catenin in A549 cells. TNF-α exposure resulted in phosphorylation of GSK-3β and Akt in A549 cells after 2 h and the expression of unphosphorylated β-catenin increased 4 h later. Conclusion: Cigarette smoke induces TNF-α release from macrophages in lung tumor tissue, which could activate the Wnt/β-catenin pathway of tumor cells through Akt/GSK-3β. [Key words] Macrophages; Lung cancer; Tumor necrosis factor alpha; Wnt/β-catenin pathway 近 年 来, 慢 性 感 染 和 炎 症 导 致 肿 瘤 的 形 成 和 发 展 已 受 到 广 泛 关 注 临 床 研 究 的 结 果 显 示, 巨 噬 细 胞 的 数 量 与 肺 癌 的 预 后 关 系 紧 密 [1-2] 侵 入 肿 瘤 的 巨 噬 细 胞 及 其 释 放 的 大 量 可 溶 性 的 炎 症 介 质 如 TNF-α IL-6 等 促 进 了 肿 瘤 细 胞 的 增 殖 浸 润 和 转 移 [3] 我 们 前 期 的 体 内 外 试 验 研 究 结 果 显 示, 香 烟 烟 雾 诱 导 的 炎 性 反 应 不 仅 对 人 类 肺 癌 细 胞 的 生 长 具 有 明 显 的 促 进 作 用, 而 且 显 著 地 促 进 肺 癌 小 鼠 模 型 的 肿 瘤 生 长, 增 加 了 小 鼠 肺 肿 瘤 的 数 目, 缩 短 了 肿 瘤 负 荷 小 鼠 的 生 存 期 [4] 然 而, 迄 今 为 止, 有 关 炎 性 反 应 促 进 肿 瘤 发 展 的 分 子 机 制 尚 未 完 全 阐 明 Wnt 家 族 是 由 19 个 富 含 半 胱 氨 酸 的 糖 蛋 白 组 成 的 蛋 白 家 族, 它 们 不 仅 在 胚 胎 发 育 和 维 持 机 体 的 自 稳 态 中 起 关 键 作 用, 而 且 在 细 胞 的 增 殖 分 化 运 动 以 及 抗 凋 亡 过 程 中 也 起 着 重 要 作 用 [5] Wnt/β-catenin 信 号 通 路 是 Wnt 家 族 信 号 网 络 的 经 典 途 径, 前 期 研 究 结 果 显 示, 异 常 激 活 的 Wnt/β-catenin 信 号 通 路 由 于 受 其 调 控 的 相 关 基 因 和 蛋 白 水 平 的 改 变, 导 致 细 胞 无 限 制 增 殖 生 长, 从 而 促 使 肿 瘤 发 生 [6] 本 研 究 拟 从 香 烟 烟 雾 与 肺 肿 瘤 细 胞 Wnt/ β-catenin 信 号 的 关 系 入 手, 进 一 步 揭 示 香 烟 烟 雾 诱 导 的 炎 性 反 应 发 挥 肿 瘤 促 进 作 用 的 分 子 机 制 1 材 料 和 方 法 1.1 材 料 临 床 标 本 收 集 同 济 大 学 附 属 同 济 医 院 82 例 手 术 切 除 的 患 者 肺 肿 瘤 标 本, 其 中 37 例 鳞 癌 标 本,45 例 腺 癌 标 本, 对 所 有 肿 瘤 标 本 做 免 疫 组 化 检 测 另 外 获 取 30 例 健 康 人 肺 组 织 标 本 作 为 阴 性 对 照 在 获 取 肺 肿 瘤 标 本 时, 患 者 均 未 接 受 过 任 何 治 疗 实 验 设 计 通 过 医 院 伦 理 委 员 会 批 准, 患 者 均 签 署 知 情 同 意 书 细 胞 株 和 小 鼠 人 肺 腺 癌 细 胞 A549 细 胞 和 鼠 Lewis 肺 癌 细 胞 购 自 中 国 科 学 院 上 海 生 命 科 学 研 究 院 生 物 化 学 与 细 胞 生 物 学 研 究 所 细 胞 库 C57BL/6 小 鼠 购 自 上 海 西 普 尔 - 必 凯 实 验 动 物 有 限 公 司 主 要 试 剂 DMEM 培 养 基 胎 牛 血 清 巨 噬 细 胞 集 落 刺 激 因 子 (macrophage colony-stimulating factor,m-csf) 购 自 美 国 Invitrogen 公 司, 青 霉 素 链 霉 素 购 自 澳 大 利 亚 PAA Laboratories 公 司,Transwell 插 入 式 细 胞 培 养 皿 购 自 美 国 BD 公 司, 总 蛋 白 裂 解 液 兔 抗 GSK-3β(pSer9) Akt(pSer473) total β-catenin 抗 体 购 自 美 国 Cell Signalling Technology 公 司, 肿 瘤 坏 死 因 子 a(tumor necrosis factor alpha,tnf-a) 中 和 抗 体 购 自 美 国 R&D Systems 公 司, 免 疫 球 蛋 白 IgG 购 自 美 国 Santa Cruz 公 司, 鼠 抗 无 磷 酸 化 β-catenin 抗 体 购 自 美 国 Millipore 公 司, 辣 根 过 氧 化 物 酶 标 记 的 山 羊 抗 兔 抗 体 兔 抗 -TNF-a 抗 体 购 自 英 国 Abcam 公 司, 兔 抗 鼠 抗 体 鼠 抗 人 -CD68 购 自 丹 麦 Dako 公 司, 兔 抗 鼠 -CD68 购 自 美 国 Abbiotec 公 司,β-actin 购 自 美 国 Sigma 公 司, EnVision +System HRP(AEC) 试 剂 盒 购 自 丹 麦 Dako 公 司 1.2 方 法 细 胞 培 养 细 胞 株 以 DMEM 完 全 培 养 基 ( 添 加 10% 胎 牛
3 中 国 癌 症 杂 志 2014 年 第 24 卷 第 12 期 883 血 清 100 U/mL 青 霉 素 100 U/mL 链 霉 素 ) 常 规 培 养 人 巨 噬 细 胞 的 采 集 分 离 和 培 养 按 照 参 考 文 献 [5-6] 的 方 法, 用 淋 巴 细 胞 分 离 液 收 集 人 外 周 血 中 的 单 个 核 细 胞 经 过 PBS 洗 涤 后, 将 细 胞 培 养 在 含 10% 胎 牛 血 清 的 DMEM 培 养 液 中, 加 50 ng/ml M-CSF 培 养 7 d, 使 其 分 化 为 巨 噬 细 胞, 经 形 态 学 和 巨 噬 细 胞 表 面 标 志 分 子 CD14 CD68 鉴 定 后 用 于 随 后 实 验 动 物 模 型 的 建 立 及 香 烟 烟 雾 刺 激 方 法 按 照 参 考 文 献 [1,7] 的 方 法, 将 个 Lewis 肺 癌 细 胞 通 过 尾 静 脉 法 注 射 到 C57BL/6 小 鼠 体 内 (n=30) 7 d 后, 小 鼠 被 随 机 平 均 分 为 2 组,1 组 为 吸 烟 组,1 组 为 空 气 组 吸 烟 组 中, 小 鼠 暴 露 于 香 烟 烟 雾 的 环 境 中 7 d, 每 天 5 次 每 次 20 min 进 行 香 烟 烟 雾 刺 激, 小 鼠 在 最 后 1 次 香 烟 烟 雾 刺 激 后 24 h 内 被 处 死, 进 行 小 鼠 肺 肿 瘤 组 织 中 巨 噬 细 胞 的 浸 润 TNF-a 及 无 磷 酸 化 β-catenin 的 表 达 检 测 ; 空 气 组 小 鼠 置 于 过 滤 空 气 环 境 中, 作 为 对 照 小 鼠 香 烟 烟 雾 暴 露 使 用 意 大 利 Comerio VA 公 司 吸 烟 机 器 (Ugo Basile 7025 rodent ventilator), 将 香 烟 点 燃 后, 仪 器 恒 定 地 以 270 ml/min 的 固 定 速 度 产 生 烟 雾 并 用 ml/min 的 新 鲜 空 气 稀 释 后, 直 接 释 放 入 安 置 小 鼠 的 有 机 玻 璃 盒 内 该 盒 内 的 平 均 总 悬 浮 颗 粒 物 质 浓 度 在 400~425 mg/m 3 之 间 香 烟 提 取 物 (cigarette smoke extract,cse) 的 制 备 按 照 参 考 文 献 [1,8] 的 方 法,2 支 香 烟 点 燃 后, 烟 雾 通 过 负 压 泵 抽 入 20 ml 无 血 浆 的 DMEM 培 养 液 中, 燃 烧 速 度 为 1 支 /min 然 后 将 培 养 液 ph 值 调 至 7.4, 经 0.2 mm 的 滤 菌 器 消 毒, 分 装 后 -80 保 存 待 用 以 此 浓 度 的 CSE 为 100% 0.1% 0.25% 和 0.5% 浓 度 的 CSE 是 按 体 积 比 用 无 血 浆 的 DMEM 培 养 液 稀 释 而 成 的 肺 癌 细 胞 与 巨 噬 细 胞 共 培 养 并 用 CSE 处 理 按 照 参 考 文 献 [1,5,8] 的 共 培 养 方 法, 共 培 养 使 用 孔 径 为 0.4 μm 的 Transwell 插 入 式 细 胞 培 养 皿, 将 对 数 生 长 期 的 A549 细 胞 与 巨 噬 细 胞 共 培 养 在 含 10% 胎 牛 血 清 的 DMEM 培 养 液 中, 常 规 培 养 72 h 具 体 方 法 :1CSE 直 接 处 理 A549 细 胞, 将 A549 细 胞 培 养 在 6 孔 细 胞 培 养 板 中, 过 夜 后, 将 培 养 基 弃 去,PBS 清 洗 1 次, 加 入 含 不 同 浓 度 CSE 的 完 全 培 养 基, 常 规 培 养 72 h 后 收 集 A549 细 胞 总 蛋 白 待 测 ;2CSE 处 理 共 培 养 条 件 下 的 A549 细 胞 与 巨 噬 细 胞, 将 A549 细 胞 培 养 在 6 孔 细 胞 培 养 板 中, 巨 噬 细 胞 培 养 在 Transwell 培 养 皿 中, 过 夜 后 将 培 养 基 弃 去, PBS 清 洗 1 次, 加 入 含 不 同 浓 度 CSE 的 完 全 培 养 基, 常 规 培 养 72 h 后 集 收 集 A549 细 胞 总 蛋 白 待 测 ;3TNF-a 中 和 实 验 中, 在 CSE 处 理 共 培 养 条 件 下 的 A549 细 胞 与 巨 噬 细 胞 的 同 时, 在 培 养 基 中 加 入 10 μg/ml 的 TNF-a 中 和 抗 体 或 10 μg/ml 对 照 免 疫 球 蛋 白 IgG 细 胞 总 蛋 白 的 提 取 及 蛋 白 质 印 迹 法 (Western blot) 检 测 按 照 参 考 文 献 [5-6] 的 方 法,A549 细 胞 经 PBS 清 洗 后, 用 50~100 μl 的 总 蛋 白 裂 解 液 裂 解 细 胞, 冰 上 放 置 1 h 4, r/min 离 心 15 min, 上 清 液 即 为 抽 提 的 总 蛋 白 经 BCA 方 法 定 量 后, 取 40 μg 总 蛋 白 与 等 体 积 2 上 样 缓 冲 液 混 合,100 煮 沸 3~5 min 变 性, 上 样 于 10%SDS 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 上 电 泳 常 规 转 膜, 用 含 5% 脱 脂 奶 粉 的 TBS 室 温 封 闭 1 h 加 入 用 含 5% 脱 脂 奶 粉 的 TBS-T 稀 释 的 一 抗,4 温 育 过 夜 经 TBS-T 充 分 洗 涤, 加 入 用 含 5% 脱 脂 奶 粉 的 TBS-T 稀 释 的 HRP- 兔 抗 鼠 抗 体 ( ) 以 及 HRP- 羊 抗 兔 抗 体 ( ) 室 温 反 应 1 h,tbs 洗 涤, 用 美 国 Cell Signalling Technology 公 司 ECL 化 学 发 光 试 剂 盒 显 影 免 疫 组 化 检 测 用 4% 的 甲 醛 溶 液 将 肺 肿 瘤 组 织 固 定 后, 石 蜡 包 埋 切 片 切 片 经 60 温 育 过 夜 后 脱 蜡, 再 将 其 放 于 0.01 mol/l 柠 檬 酸 缓 冲 液 (ph=6.0) 中, 用 微 波 炉 于 100 加 热 20 min 进 行 抗 原 修 复 切 片 用 3% 的 H 2 O 2 抑 制 非 特 异 性 氧 化 酶 后, 在 2% 封 闭 液 中 温 育 60 min, 然 后 加 一 抗 4 温 育 过 夜, 根 据 EnVision +System HRP(AEC) 试 剂 盒 说 明 书 进 行 二 抗 的 温 育 和 染 色, 复 染 使
4 884 李冬 等. 香烟烟雾激活肺癌细胞Wnt/β-catenin信号途径的机制研究 用苏木精 这期间应用以下抗体 兔抗-CD68 (应用于鼠 1 200) 鼠抗-CD68(应用于人 1 100) 兔抗-TNF- a (1 100)和鼠抗-无磷酸 化β-catenin(1 50) CD68 +细胞统计方法 在 肿瘤组织中随机选取6个显微镜高倍视野 计数 CD68+细胞总数 然后除以6取得平均值 即为 每高倍视野CD68+细胞数目 1.3 统计学处理 使用SPSS 17.0统计软件进行分析 数据 采用x±s 表示 2组比较采用t检验 免疫组化检 测采用四格表χ 2检验 P<0.05为差异有统计学 意义 2 结 果 2.1 小鼠肺肿瘤组织中巨噬细胞的浸润 TNF-α及无磷酸化β-catenin的表达 免疫组化染色结果表明 在香烟烟雾的刺 激下 在肿瘤负荷小鼠的肺肿瘤组织中显示 浸润到肿瘤组织中的巨噬细胞CD68+的数量显著 高于空气对照组(图1 2) 肿瘤组织中TNF-a的 表达在吸烟组和空气对照组中的差异有统计学 意义(P<0.05) 吸烟组肺肿瘤中表达TNF-a的炎 性反应细胞明显多于空气对照组 在吸烟组的 图 1 空气对照组与吸烟组小鼠肺肿瘤组织CD68 TNF-α及无磷酸化β-catenin免疫组化染色结果 Fig. 1 Immunohistochemical analysis of CD68, TNF-α and unphosphorylated β-catenin in smoke or air treated lung tumors of mice (EnVision, 200) 小鼠肺肿瘤细胞中无磷酸化b-catenin的表达显 著高于空气对照组(图1) 2.2 肺癌患者肿瘤组织CD68 TNF-α和无磷 酸化β-catenin的表达 免疫组化检测结果显示 在全部检测的82 例肺腺癌和鳞癌肿瘤组织中 CD68 +的巨噬细 胞以及TNF-a表达阳性的炎性反应细胞数显著 多于正常肺组织(图3) 无磷酸化b-catenin在肺 腺癌和鳞癌肿瘤组织中的表达也显著高于正 + 图 2 CD68 细胞在空气组和吸烟组肺肿瘤组织中的计数 Fig. 2 Numbers of CD68+ cells in lung tumor tissues of air group and smoke group ***: P< 常组织(图3) 在肺腺癌肿瘤组织中 有31例 (68.9%)标本无磷酸化b-catenin染色阳性 在肺 鳞癌肿瘤组织中 有23例(62.2%)标本无磷酸化 b -catenin染色阳性(表1) 无磷酸化 b -catenin的
5 885 中国癌症杂志 2014年第24卷第12期 阳性率与患者的吸烟状态和肿瘤的分期有关 表1) 同时结果也发现 在无磷酸化b-catenin染 在吸烟患者癌组织中 无磷酸化b-catenin阳性 色阳性的标本中 CD68染色阳性的细胞数明显 率高于不吸烟患者(P<0.05) Ⅲ~Ⅳ期癌组织中 高于无磷酸化b-catenin染色阴性肺癌标本的细 无磷酸化b-catenin阳性率高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05 胞数(P<0.01 图4) 图 3 NSCLC组织CD68 TNF-α及无磷酸化β-catenin的表达 Fig. 3 Immunohistochemical analysis of CD68, TNF-α and unphosphorylated β-catenin in NSCLC tissues CD68: EnVision, 100; TNF-a: EnVision, 200; Unphosphorylated β-catenin: EnVision, 200. 表 1 在82例NSCLC组织中无磷酸化β-catenin组化检测及其临床病理特征关系 Tab. 1 The correlation of unphosphorylated β-catenin staining and clinicopathological features in 82 NSCLS tissues Clinicopathologic feature Gender Male Female Age/year <60 60 Smoking status Yes No Histological type Adenocarcinoma Squamous carcinoma Stage Ⅰ-Ⅱ Ⅲ-Ⅳ Case Unphosphorylated β-catenin P value (63.0%) 17(60.7%) > (65.5%) 36(67.9%) > (89.3%) 11(42.3%) < (68.9%) 23(62.2%) > (39.6%) 28(82.4%) <0.05
6 886 李 冬, 等. 香 烟 烟 雾 激 活 肺 癌 细 胞 Wnt/β-catenin 信 号 途 径 的 机 制 研 究 图 4 CD68 + 细 胞 在 无 磷 酸 化 β-catenin 染 色 阳 性 和 阴 性 的 肺 腺 癌 和 肺 鳞 癌 肿 瘤 组 织 中 的 计 数 Fig. 4 CD68 + cells counting in adenocarcinoma or squamous cell carcinoma with positive or negative unphosphorylated β-catenin staining ***: P< 巨 噬 细 胞 释 放 的 TNF-α 激 活 肿 瘤 细 胞 Wnt/β-catenin 途 径 Western blot 检 测 结 果 显 示, 不 同 浓 度 (0%~0.5%) 的 CSE 直 接 处 理 A549 细 胞 72 h 后, 无 磷 酸 化 b-catenin 的 表 达 无 显 著 变 化, 但 是 当 A549 细 胞 与 巨 噬 细 胞 共 培 养 后, 随 着 CSE 浓 度 的 增 加,A549 细 胞 中 无 磷 酸 化 b-catenin 的 表 达 显 著 上 调, 并 显 示 出 部 分 CSE 剂 量 依 赖 性 表 达 ( 图 5A) 在 巨 噬 细 胞 和 A549 细 胞 共 培 养 条 件 下, 与 对 照 组 相 比, 加 入 10 μg/ml 的 TNF-a 中 和 抗 体 后 显 著 抑 制 A549 细 胞 无 磷 酸 化 b-catenin 的 表 达 ( 图 5B) 用 100 ng/ml 的 TNF-a 处 理 A549 细 胞, 磷 酸 化 的 GSK-3β 和 Akt 蛋 白 在 TNF-a 处 理 2 h 后 就 表 达 增 加,4 h 后 无 磷 酸 化 b-catenin 蛋 白 表 达 也 开 始 上 调 ( 图 5C) 图 5 TNF-α 激 活 Wnt/β-catenin 途 径 Fig. 5 TNF-α activated Wnt/β-catenin signaling pathway A: A549 cells were cocultured with macrophages and were exposed to 0%-0.5% CSE for 72 h; A549 cell lysates were analyzed by immunoblotting for the abundance of unphosphorylated b-catenin. B: TNF-a blocking antibody was applied to CSE-exposed A549 cells in cocultures with macrophages; After 72 h, the indicated proteins in A549 cells were analyzed by immunoblotting. C: A549 cells were treated by 100 ng/ml TNF-a for the indicated times; Expressions of the indicated proteins were detected by immunoblotting analysis. 3 讨 论 香 烟 作 为 导 致 肺 癌 的 重 要 因 素 已 被 人 们 熟 知, 而 其 具 有 的 促 进 肿 瘤 生 长 的 特 性, 目 前 也 已 被 包 括 多 项 研 究 证 实 [1-2,8-9] 前 期 研 究 表 明 在 采 用 注 射 肿 瘤 细 胞 化 学 致 癌 物 NNK 或
7 中 国 癌 症 杂 志 2014 年 第 24 卷 第 12 期 887 K-ras 转 基 因 小 鼠 等 方 法 导 致 的 肺 癌 小 鼠 模 型 中, 香 烟 烟 雾 的 刺 激 显 著 增 加 了 肺 肿 瘤 的 生 长 [1,9] 有 研 究 显 示, 香 烟 烟 雾 刺 激 产 生 的 炎 性 反 应 被 认 为 可 能 关 联 到 肺 肿 瘤 的 生 长 [1,9] 通 过 敲 除 小 鼠 髓 系 细 胞 p65 或 IKKb 阻 断 炎 性 反 应 免 疫 细 胞 的 NF-kB 信 号 途 径, 显 著 抑 制 香 烟 烟 雾 诱 发 的 小 鼠 肺 部 炎 性 反 应, 导 致 小 鼠 肺 肿 瘤 生 长 阻 滞 [2,9] 本 研 究 结 果 发 现, 大 量 的 巨 噬 细 胞 浸 润 到 小 鼠 肺 肿 瘤 组 织 中, 并 且 浸 润 到 肿 瘤 组 织 的 炎 性 反 应 细 胞 表 达 高 浓 度 的 TNF-a, 特 别 是 当 小 鼠 经 过 香 烟 烟 雾 刺 激 后, TNF-a 的 表 达 进 一 步 增 加 在 巨 噬 细 胞 中, TNF-a 表 达 主 要 由 NF-kB 途 径 控 制, 是 巨 噬 细 胞 分 泌 的 主 要 炎 性 细 胞 因 子 [10] Wnt/b-catenin 是 胚 胎 肺 组 织 发 育 的 重 要 信 号 途 径, 是 Wnt 蛋 白 家 族 的 经 典 信 号 途 径, 它 的 激 活 需 要 依 赖 细 胞 质 中 b-catenin 蛋 白 的 磷 酸 化 [11] 当 Wnt 未 与 细 胞 膜 上 的 配 基 结 合 时, 细 胞 质 中 的 b-catenin 被 由 GSK-3b 酪 蛋 白 激 酶 1 Axin 和 腺 瘤 结 肠 息 肉 病 组 成 的 破 坏 复 合 物 磷 酸 化, 进 而 通 过 泛 素 - 蛋 白 酶 体 途 径 被 降 解 而 当 Wnt 与 其 配 体 Frizzled 和 低 密 度 脂 蛋 白 受 体 相 关 蛋 白 受 体 结 合 后, 通 过 激 活 磷 酸 化 蛋 白 散 乱 蛋 白, 进 而 破 坏 复 合 物 的 功 能, 使 其 b-catenin 蛋 白 不 能 被 磷 酸 化 这 样 非 磷 酸 化 的 b-catenin 蛋 白 进 入 细 胞 核 与 相 应 的 靶 基 因 如 Cyclin D1 c-myc 等 结 合, 进 而 启 动 这 些 基 因 的 转 录 表 达 近 年 的 研 究 表 明 Wnt/b-catenin 信 号 途 径 的 激 活 同 样 涉 及 肺 肿 瘤 的 发 生 发 展 [12] 相 关 临 床 研 究 显 示, 异 常 的 Wnt/b-catenin 表 达 可 能 是 非 小 细 胞 肺 癌 预 后 较 差 的 一 个 独 立 的 标 志 [13] 香 烟 烟 雾 可 以 通 过 激 活 Wnt/b-catenin 途 径, 导 致 人 正 常 支 气 管 表 皮 细 胞 的 恶 性 转 变 [14] 本 研 究 表 明, 人 或 小 鼠 的 肺 肿 瘤 组 织 均 有 非 磷 酸 化 b-catenin 表 达, 特 别 是 经 过 香 烟 烟 雾 的 刺 激 后, 无 磷 酸 化 b-catenin 的 表 达 显 著 增 加, 提 示 Wnt/b-catenin 信 号 途 径 可 能 参 与 吸 烟 者 肺 癌 的 发 病 在 本 研 究 中,CSE 诱 导 的 A549 细 胞 Wnt/ b -catenin 信 号 激 活 需 要 巨 噬 细 胞 的 存 在, 说 明 经 香 烟 烟 雾 刺 激 后, 巨 噬 细 胞 释 放 的 某 些 可 溶 性 的 因 子 可 能 参 与 肺 癌 细 胞 Wnt/ b-catenin 信 号 的 激 活 已 有 研 究 显 示,Wnt/ b-catenin 信 号 的 激 活 涉 及 TNF-a 诱 导 的 胃 癌 形 成 过 程 [4] 本 研 究 结 果 显 示,TNF-a 的 刺 激 显 著 激 活 肺 腺 癌 A549 细 胞 的 Wnt/b-catenin 信 号 途 径 在 巨 噬 细 胞 与 A549 细 胞 共 培 养 体 系 中 加 入 TNF-a 中 和 抗 体 能 显 著 地 抑 制 无 磷 酸 化 b-catenin 表 达, 提 示 TNF-a 具 有 上 调 Wnt/b-catenin 信 号 的 功 能 GSK-3b 是 Wnt/ b-catenin 信 号 途 径 的 主 要 抑 制 因 子, 它 通 过 磷 酸 化 b-catenin 上 一 系 列 保 守 的 丝 氨 酸 和 苏 氨 酸 残 基, 致 使 b-catenin 蛋 白 降 解 [15] Akt 能 够 通 过 磷 酸 化 GSK-3b 激 活 b-catenin 的 转 录 活 性 [4] 本 研 究 通 过 Western blot 检 测 证 明, TNF-a 通 过 激 活 Akt 信 号 途 径, 致 使 GSK-3b 磷 酸 化 并 抑 制 GSK-3b 功 能, 从 而 上 调 无 磷 酸 化 b-catenin 的 表 达, 激 活 Wnt/b-catenin 信 号 途 径 综 上 所 述, 本 研 究 结 果 显 示, 香 烟 烟 雾 诱 导 了 巨 噬 细 胞 的 肿 瘤 浸 润 并 激 活 其 炎 性 反 应 因 子 如 TNF-a 的 表 达 和 释 放, 进 而 通 过 Akt/GSK- 3b 途 径 激 活 肺 肿 瘤 细 胞 Wnt/b-catenin 信 号 通 路, 初 步 阐 明 香 烟 烟 雾 促 进 肺 肿 瘤 发 展 的 分 子 机 制 [ 参 考 文 献 ] [1] LI D, BEISSWENGER C, HERR C, et al. Expression of the antimicrobial peptide cathelicidin in myeloid cells is required for lung tumor growth [J]. Oncogene, 2014, 33(21): [2] LI D, BEISSWENGER C, HERR C, et al. Myeloid cell RelA/p65 promotes lung cancer proliferation through Wnt/ β-catenin signaling in murine and human tumor cells [J]. Oncogene, 2014, 33(10): [3] TAKAHASHI-YANAGA F, KAHN M. Targeting Wnt signaling: can we safely eradicate cancer stem cells [J]. Clin Cancer Res, 2010, 16(12): [4] OGUMA K, OSHIMA H, AOKI M, et al. Activated macrophages promote Wnt signalling through tumour necrosis factor-alpha in gastric tumour cells [J]. EMBO J, 2008, 27(12): [5] LI D, WANG X, WU J L, et al. Tumor-produced versican V1 enhances hcap18/ll-37 expression in macrophages through activation of TLR2 and vitamin D3 signaling to promote
8 888 李 冬, 等. 香 烟 烟 雾 激 活 肺 癌 细 胞 Wnt/β-catenin 信 号 途 径 的 机 制 研 究 ovarian cancer progression in vitro [J]. PLoS One, 2013, 8(2): e [6] 李 冬, 王 旋, 戴 燕, 等. 抗 菌 肽 LL-37 在 巨 噬 细 胞 促 卵 巢 癌 细 胞 增 殖 中 的 作 用 [J]. 中 华 肿 瘤 杂 志, 2013, 35(9): [7] KIM S, TAKAHASHI H, LIN W W, et al. Carcinomaproduced factors activate myeloid cells through TLR2 to stimulate metastasis [J]. Nature, 2009, 457(7225): [8] 李 冬, 王 旋, 周 宏, 等. 阻 断 巨 噬 细 胞 NFkB-p65 通 路 对 香 烟 促 进 非 小 细 胞 肺 癌 NCI-H520 细 胞 株 增 殖 的 影 响 [J]. 肿 瘤 研 究 与 临 床, 2012, 24(9): [9] TAKAHASHI H, OGATA H, NISHIGAKI R, et al. Tobacco smoke promotes lung tumorigenesis by triggering IKKbetaand JNK1-dependent inflammation [J]. Cancer Cell, 2010, 17(1): [10] GRIVENNIKOV S I, KARIN M. Inflammation and oncogenesis: a vicious connection [J]. Curr Opin Genet Dev, 2010, 20(1): [11] NEUMANN J, SCHAALE K, FARHAT K, et al. Frizzled1 is a marker of inflammatory macrophages, and its ligand Wnt3a is involved in reprogramming mycobacterium tuberculosisinfected macrophages [J]. FASEB J, 2010, 24(11): [12] KONIGSHOFF M, EICHELBERG O. WNT signaling in lung disease: a failure or a regeneration signal? [J]. Am J Respir Cell Mol Biol, 2010, 42(1): [13] XU X, SUN P L, LI J Z, et al. Aberrant Wnt1/β-catenin expression is an independent poor prognostic marker of nonsmall cell lung cancer after surgery [J]. J Thorac Oncol, 2011, 6(4): [14] LEMJABBAR-ALAOUI H, DASARI V, SIDHU S S, et al. Wnt and Hedgehog are critical mediators of cigarette smokeinduced lung cancer [J]. PLoS One, 2006, 1: e93. [15] ANASTAS J N, MOON R T. WNT signalling pathways as therapeutic targets in cancer[j]. Nat Rev Cancer, 2013, 13(1): ( 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ) 中 国 癌 症 杂 志 2015 年 征 订 启 事 中 国 癌 症 杂 志 是 由 国 家 教 育 部 主 管 复 旦 大 学 附 属 肿 瘤 医 院 主 办 的 全 国 性 肿 瘤 学 术 期 刊, 读 者 对 象 为 从 事 肿 瘤 基 础 临 床 防 治 研 究 的 中 高 级 工 作 者 主 要 报 道 内 容 : 国 内 外 研 究 前 沿 的 快 速 报 道 专 家 述 评 肿 瘤 临 床 研 究 基 础 研 究 文 献 综 述 学 术 讨 论 临 床 病 理 讨 论 病 例 报 道 讲 座 和 简 讯 等 中 国 癌 症 杂 志 已 入 选 中 文 核 心 期 刊 中 国 科 技 核 心 期 刊 及 全 国 肿 瘤 类 核 心 期 刊, 并 为 中 国 科 技 论 文 统 计 源 期 刊, 先 后 被 中 国 期 刊 网 万 方 数 据 数 字 化 期 刊 群 和 解 放 军 医 学 图 书 馆 数 据 库 (CMCC) 等 收 录 中 国 癌 症 杂 志 为 月 刊, 大 16 开,80 页 铜 版 纸 ( 随 文 彩 图 ), 每 月 30 日 出 版, 单 价 10 元, 全 年 120 元 国 际 标 准 刊 号 , 国 内 统 一 标 准 刊 号 CN /R, 邮 发 代 号 读 者 可 在 当 地 邮 局 订 阅, 漏 订 者 可 直 接 向 本 刊 编 辑 部 订 阅 也 欢 迎 广 大 作 者 来 稿 主 编 : 沈 镇 宙 联 系 地 址 : 上 海 市 东 安 路 270 号 复 旦 大 学 附 属 肿 瘤 医 院 内 中 国 癌 症 杂 志 编 辑 部 邮 编 : 电 话 : ; 网 址 : 电 子 邮 件 :zgazzz@163.com
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第 24 卷 第 5 期 2015 年 5 月 碘 131 doi:10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 Chinese Journal of General Surgery, 2015, 24(5):643 647. Chinese Journal of
instillation therapy combined with Western medicine can reduce the levels of ALT, TBA, ALP, TBIL, DBIL and GGT, and improve the anti-cmv-igm negative
在 线 投 稿 : http://www.baishideng.com/wcjd/ch/index.aspx 帮 助 平 台 : http://www.wjgnet.com/esps/helpdesk.aspx DOI: 10.11569/wcjd.v23.i28.4568 世 界 华 人 消 化 杂 志 2015 年 10 月 8 日 ; 23(28): 4568-4573 ISSN 1009-3079
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2013 绎 Vol.15 No.4 阴 元元 450002 Ki-6772 Wistar 6 5 mg kg -1 30 0.8 mg kg -1 7.5 15.0 22.5 g kg -1 1 30 Ki-67 TUNEL Ki-67 P
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21 13 D / 2 10 ig ig 10 d 1. 0 g kg /2 2 β- 5 g kg g kg mg kg - 1 ig ig 24 h 5% 1 2% CMC-Na 2. 5 ml 30
21 13 1 2 1* 2 1. 430065 2. 445000 20 10 5 g kg - 1 5 mg kg - 1 ig 10 d ig HE 1 TFF1 TFF1 P < 0. 01 P < 0. 01 P < 0. 01 P < 0. 05 R285. 5 doi 10. 13422 /j. cnki. syfjx. 2015130100 A 1005-9903 2015 13-0100-05
分 级 和 气 管 是 否 受 侵 是 影 响 预 后 的 独 立 危 险 因 素 关 键 词 状 腺 肿 瘤 ; 癌, 乳 头 状 ; 预 后 Clinical outcomes of 600 papillary thyroid carcinoma patients ZHANG Zong-min,
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: 307, [], [2],,,, [3] (Response Surface Methodology, RSA),,, [4,5] Design-Expert 6.0,,,, [6] VPJ33 ph 3,, ph, OD, Design-Expert 6.0 Box-Behnken, VPJ3
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微 生 物 学 通 报 FEB 20, 2008, 35(2) 306~30 Microbiology 2008 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@im.ac.cn 生 物 实 验 室 响 应 面 分 析 法 优 化 副 溶 血 性 弧 菌 生 长 条 件 刘 代 新 宁 喜 斌 * 张 继 伦 2 (. 200090) (2. 20202) 摘 要
357 P <. 5. TCD findings revealed that the contralateral vertebral artery systolic blood flow velocities in patients with phase Ⅰ Ⅱ and Ⅲ steal groups
356 TCD 212 3 215 4 TCD 45 TCD 8 Ⅰ 21 Ⅱ 11 Ⅲ 5 4 45 6 2 Ⅰ 12 9 Ⅱ 3 7 1 Ⅲ 3 2 r =. 78 P
by mild (22.7%). Inhaled corticosteroids, systemic corticosteroids, and antibiotics were applied to 94.8% (292 cases), 74.7% (230 cases), and 90.9% (2
论 著 临 床 研 究 doi: 0.7499/j.issn.008-8830.204.2.007 郑 州 市 城 区 儿 童 哮 喘 的 流 行 病 学 调 查 及 发 病 相 关 因 素 分 析 赵 坤 宋 桂 华 古 华 倩 2 刘 爽 3 张 岩 郭 彦 荣 (. 河 南 中 医 学 院 第 一 附 属 医 院 儿 科 医 院, 河 南 郑 州 450000; 2. 杭 州 市 余 杭 区
ADR ADR ADR : 2
8 2000 10 2001 5 ADR ADR 415 ADR44 ADR 10.6% 2661 ADR105 ADR 3.9% P
绎 阴 元元 510515 Caco-2 Caco-2 P ment group was more effective than that of the control group OR = % CI = Conclusion The clinical efficacy of Chinese medic
33 243 HAART Meta * 1 1 1 1 1 2 3 3 3 1. 530001 2. 538000 3. 530011 highly active anti-retroviral therapy HAART Pubmed HAART randomized controlled trials RCT Jadad RevMan5. 3 Meta 5 RCT 761 Meta HAART
168 任 峰, 等. 培 美 曲 塞 联 合 奥 沙 利 铂 对 人 胃 癌 BGC-823 细 胞 生 长 的 影 响 培 美 曲 塞 是 一 种 结 构 上 含 有 核 心 为 吡 咯 嘧 啶 基 团 的 抗 叶 酸 制 剂, 通 过 破 坏 细 胞 内 叶 酸 依 赖 性 的 正 常 代 谢
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/ 410007 HBV DCs DCs HBV PBMCs DCs DCs HLA-DR CD80 CD86 CD83 CD1 琢 DCs IFN- 琢 IL-4 HBV HBV DCs HLA-DR CD1 琢 CD83 CD80 CD86 P
405 急 性 心 肌 梗 死 是 临 床 较 为 常 见 的 心 血 管 疾 病, 病 情 危 急, 病 死 率 高 [1] 随 着 经 皮 冠 状 动 脉 介 入 治 疗 (percutaneous coronary intervention,pci) 技 术 在 急 性 心 肌 梗 死 急 诊
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404 冠 心 舒 通 胶 囊 预 防 急 性 心 肌 梗 死 PCI 术 后 再 狭 窄 的 临 床 研 究 李 静, 王 建 榜, 王 西 辉 西 安 医 学 院 第 二 附 属 医 院 心 内 科, 陕 西 西 安 710038 摘 要 : 目 的 研 究 冠 心 舒 通 胶 囊 预 防 急 性 心 肌 梗 死 经 皮 冠 状 动 脉 介 入 治 疗 (PCI) 术 后 再 狭 窄 的 临 床
<46495420446F63756D656E7428442D2D796E2DD6D0D2BDD2A92DB5DA3132C6DA2DB7E2C3E6CDC6BDE9A3A8323031342D3132A3A9CCE6BBBB2E6D6469>
2014 第十六卷 第十二期 绎Vol.16 No.12 清热利湿化瘀汤联合针灸治疗慢性盆腔炎 湿热瘀结证临床研究 周 萍 1 曾志华 1元元 向阳红 2 1. 重庆医科大学中医药学院 摘 重庆 401331 2. 重庆市中医研究院 重庆 400020 要 目的 观察清热利湿化瘀汤联合针灸治疗慢性盆腔炎湿热瘀结证的临床疗效 方法 将 120 例病例随机分为 每组各 40 例 给予口服清热利湿化瘀汤
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绎 1 援 401331 2. 400030 3. 400020 4. 400080 5. 400012 88 44 44 猿 孕 约 0.05 ESR 悦 CRP RF 孕 约 0.05 doi: 10.11842/wst.2014.04.018 R593.22 A Rheumatoid Arthritis RA 44 19 25 32 耀 75 47.71 依 8.53 5 耀 28 4.39
马 丽 媛, 等. 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 及 其 可 能 机 制 1073 力 争 将 茶 油 作 为 食 用 油 的 主 流 品 种 [5] 茶 麸 系 油 茶 果 实 榨 除 茶 油 后 的 废 弃 残 渣, 药 用 名 为 茶 子 饼,
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1072 基 础 研 究 Basic Research www.tumorsci.org 肿 瘤 2011 年 12 月 第 31 卷 第 12 期 TUMOR Vol. 31, December, 2011 DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2011.12. 004 Copyright 2011 by TUMOR 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat
- 14 - Drug Evaluation Research 第 36 卷 第 1 期 2013 年 2 月 料 ), 山 西 皇 城 相 府 药 业 有 限 公 司, 批 号 20111003 ( 人 口 服 推 荐 剂 量 为 每 日 3 次, 每 次 4 粒, 成 人 体 质 量 按 60
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55 doi:10.3969j.issn.1000-3606.2014.01.01 论 著 不 同 围 生 因 素 对 妊 娠 的 影 响 赵 玉 祥 岳 虹 霓 杨 占 华 江 苏 省 淮 安 市 保 健 院 新 生 儿 科 ( 江 苏 淮 安 223002) 摘 要 : 目 的 探 讨 妊 娠 期 高 血 压 疾 病 胎 膜 早 破 等 围 生 因 素 对 妊 娠 的 影 响 方 法 回 顾 性
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PCA+LDA 14 1 PEN mL mL mL 16 DJX-AB DJ X AB DJ2 -YS % PEN
21 11 2011 11 COMPUTER TECHNOLOGY AND DEVELOPMENT Vol. 21 No. 11 Nov. 2011 510006 PEN3 5 PCA + PCA+LDA 5 5 100% TP301 A 1673-629X 2011 11-0177-05 Application of Electronic Nose in Discrimination of Different
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硕 士 专 业 学 位 论 文 论 文 题 目 鲍 温 病 临 床 病 理 特 征 和 几 种 治 疗 方 法 比 较 的 分 析 研 究 研 究 生 姓 名 指 导 教 师 姓 名 禚 欣 欣 康 定 华 专 业 名 称 皮 肤 性 病 学 研 究 方 向 皮 肤 肿 瘤 与 皮 肤 病 理 论 文 提 交 日 期 2013 年 4 月 I 鲍 温 病 临 床 病 理 特 征 和 几 种 治 疗
fried granules group Less than normal control group on TNF-α, IL-1β in synovial fluid (P<0.01):There was no group and normal control group on TNF-α, I
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: - S99017212 O O 1 1 ABSTRACT 3 5 13 14 14 15 15 16 17 18 18 18 18-21 28 33 34 46 47 53 54 2 - A L Aeq CNE 463 3-5 L Aeq L Aeq CNE WHO/ISH 1999 [49] 18.6kPa / 12.0kPa EpiInfo6.04 SPSS10.0 Logistic 10
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240 生 异 性 相 吸 的 异 性 效 应 [6] 虽 然, 心 理 学 基 础 研 [7-8] 究 已 经 证 实 存 在 异 性 相 吸 异 性 相 吸 是 否 存 在 于 名 字 认 知 识 别 尚 无 报 道 本 实 验 选 取 不 同 性 别 的 名 字 作 为 刺 激 材 料, 通
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227 ELISA 刘 沙 洲 1,2, 桑 小 雪 1, 欧 阳 华 学 3, 雷 绍 荣 3, 白 林 含 1, * (1. 四 川 大 学 生 命 科 学 学 院, 四 川 成 都 610065;2. 成 都 市 食 品 药 品 检 测 中 心, 四 川 成 都 610045; 3. 四 川 省 农 业 科 学 院 分 析 测 试 中 心, 四 川 成 都 610066) 目 的 : 比 较
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2014年1月A 1期 排版.FIT)
第 26 卷 第 15 期 中 国 现 代 医 学 杂 志 Vol. 26 No.15 2016 年 8 月 China Journal of Modern Medicine Aug. 2016 DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.022 文 章 编 号 : 1005-8982(2016)15-0114-05 声 检 查 对 产 前 出 血 病 因 诊 断 的
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分 类 号 :R2 单 位 代 码 :10315 密 级 : 学 号 :20031044 2006 届 硕 士 研 究 生 毕 业 论 文 玄 麦 止 咳 颗 粒 对 阴 虚 风 燥 型 临 床 疗 效 和 气 道 阻 力 的 影 响 学 科 专 业 学 位 类 型 研 究 方 向 研 究 生 中 医 内 科 临 床 临 床 医 学 专 业 学 位 呼 吸 病 学 陈 昌 华 导 师 朱 佳 南 京
金 鹏 等 体 育 锻 炼 缓 解 公 务 员 心 理 压 力 相 关 量 表 的 编 制 及 常 模 的 建 立 89 此, 本 文 从 探 索 性 研 究 入 手, 对 体 育 锻 炼 缓 解 公 务 员 心 理 压 力 展 开 研 究, 尝 试 编 制 一 个 基 于 本 土 化, 具 有 良
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研 发 前 沿, 相 关 报 道, Key Words: Laparoscopy; Early enteral nutrition; Colorectal cancer surgery Niu WB, Li ZY, Zhou CX, Wang GY, Yu YM. Clinical effects
: http://www.baishideng.com/wcjd/ch/index.aspx : http://www.wjgnet.com/esps/helpdesk.aspx DOI: 10.11569/wcjd.v23.i5.857 2015 2 18 ; 23(5): 857-861 ISSN 1009-3079 (print) ISSN 2219-2859 (online) 2015. CLINICAL
2001,30(1):1-4
Subtropical Plant Science 2015,44(3): 188~192. 三 种 植 物 生 长 调 节 剂 对 楝 叶 吴 茱 萸 光 合 作 用 的 影 响 董 奇 妤 1, 张 亮 2, 张 亨 3, 王 婧 1, 陈 红 跃 (1. 华 南 农 业 大 学 林 学 与 风 景 园 林 学 院, 广 东 广 州 510642;2. 广 东 省 林 业 调 查 规 划 院,
2015医学版第六期
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绎 1 2 1. 8300112 援 830000 CNKI 1979-20121989-2013 PubMed/MEDLINE Jadad Cochrane RevMan 5.2.0 Meta 4 360 Meta OS WMD 95%-0.48-0.81-0.160.04-0.150.22 RR 95% 1.671.292.151.220.354.20 doi: 10.11842/wst.2014.08.030
<30302DB7E2C3E6CDC6BDE9A3A D34A3A92E6D6469>
212 绎 Vol.14 No.5 ScienceDirect 阴 元元 元元 / 99978 5 doi: 1.3969/j.issn.1674-3849.212.5.3 2 1 29 72.7% 21 27.1% 24.26% 1 [1] 1 2 21 7.85 [2] 1 29 21% 662 26 9.38 211 3.8 27.2% 1 212-3-26 212-1-19 元 UL16/9-Y4/CMS/WYT1/ICMS
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项 目 批 准 号 81273814 归 口 管 理 部 门 申 请 代 码 收 件 日 期 H2716 360145 y 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 资 助 项 目 计 划 书 资 助 类 别 : 面 上 项 目 亚 类 说 明 : 非 连 续 资 助 类 项 目 附 注 说 明 : 项 目 名 称 : 益 气 养 肺 法 拮 抗 bfgf 对 肺 癌 微 环 境 介 导 化 疗
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16 李 莹 莹 1, 吴 彩 娥 1, *, 杨 剑 婷 2, 范 龚 健 1 (1. 南 京 林 业 大 学 森 林 资 源 与 环 境 学 院, 江 苏 南 京 210037;2. 安 徽 科 技 学 院 食 品 药 品 学 院, 安 徽 凤 阳 233100) 对 白 果 的 主 要 过 敏 蛋 白 进 行 鉴 定, 并 对 其 过 敏 原 性 进 行 分 析 以 SDS-PAGE 和 Western-Blotting
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5 10 15 中 国 科 技 论 文 在 线 # 台 湾 独 蒜 兰 无 菌 萌 发 与 植 株 再 生 研 究 卓 孝 康 1,2, 兰 思 仁 1,2, 彭 东 辉 1,2, 吴 沙 沙 1,2, 陈 潇 1,2, 江 鸣 涛 1,2 1,2**, 张 林 瀛 (1. 福 建 农 林 大 学 园 林 学 院, 福 建 福 州 350002; 2. 福 建 农 林 大 学 海 峡 兰 花 保 育
第二部分
中 国 农 通 报 0,7(04):478-48 Chinese Agricultural Science Bulletin 基 于 网 络 平 台 的 生 物 统 计 改 革 及 实 践 效 果 分 析 袁 文, 彭 惠 茹, 张 洪 亮, 刘 文 欣, 华 金 平, 苏 胜 宝, 孔 繁 玲 ( 中 国 农 大 科 技 术 发 展 研 究 院, 北 京 0093; 中 国 农 大 农 与 生 物
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绎 阴 元元 / 100102 MCAT MCAO 84~333 mg kg -1 167 333 mg kg -1 MCAT 84 167 mg kg -1 MCAT 27% 37% 84~333 mg kg -1 MCAT 21%~ 32% MCAO LDH 10%~ 12% MDA 28%~38% SOD 15%~36% GSH 14%~36% doi: 10.3969/j.issn.1674-3849.2013.01.016
米 诺 地 尔 酊 联 合 复 方 甘 草 酸 苷 治 疗 斑 秃 疗 效 评 价 及 对 血 清 TNF-α TGF-β1 和 IL-12 的 影 响 陈 玉 华 1039 Keywords group was significantly lower than the research group
1038 临 床 与 病 理 杂 志 J Clin Pathol Res 2015, 35(6) http://www.lcbl.net doi: 10.3978/j.issn.2095-6959.2015.06.032 View this article at: http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.2095-6959.2015.06.032 米 诺 地 尔 酊 联 合
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R2 10315 20042008 2004 CLINICAL RESEARCH OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE THEORY & TREATMENT TO RELIEVE PAIN OF BREAST CANCER PATIENTS 2007 5 -----------------------------------------------------------------------------------------------
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MMPs B00017140 2003 6 i 1 2 3 ED 3 ED 3 ED 5 5 6 9 10 12 12 13 13 14 14 15 16 16 16 ED 17 ED 17 CIEF-5 21 23 27 MMPs 28 29 31 31 31 31 34 MMPs 34 MMP 34 MMP 35 MMP 36 MMP 38 MMP 39 43 43 44 44 46 ii 50
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中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 4 期 2014 年 2 月 509 UPLC-MS/MS 法 快 速 检 测 减 肥 类 保 健 品 中 13 种 非 法 添 加 化 学 成 分 朱 健, 裘 一 婧, 沈 国 芳 杭 州 市 食 品 药 品 检 验 研 究 院, 浙 江 杭 州 310017 摘 要 : 目 的 建 立 保
408 临 床 与 病 理 杂 志, 2016, 36(4) http://lcbl.amegroups.com Keywords CA199 elevated group (628.343±114.383) pg/ml and acute pancreatitis patients (515.07
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1120 基 础 研 究 Basic Research www.tumorsci.org 肿 瘤 2014 年 12 月 第 34 卷 第 12 期 TUMOR Vol. 34, December 2014 DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2014.11. 508 Copyright 2014 by TUMOR 果 王 素 对 提 高 吉 西 他 滨 联 合 顺 铂 治
上 皮 细 胞 黏 附 分 子 表 达 与 乳 腺 癌 的 分 子 分 型 及 预 后 李 新 军, 等 259 48.9%, 72.2%, and 62.1%, in Luminal A, Luminal B (HER2 ), Luminal B(HER2+), HER2+, and triple
258 中 南 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 2016, 41(3) http://www.csumed.org DOI:10.11817/j.issn.1672-7347.2016.03.006 www.csumed.org/xbwk/fileup/pdf/201603258.pdf 上 皮 细 胞 黏 附 分 子 表 达 与 乳 腺
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36 4 2015 385 ~ 397 The Chinese Journal for the History of Science and Technology Vol. 36 No. 4 2015 1951 ~ 1956 100049 100190 1951 ~ 1966 1951 ~ 1956 N092 P62-092 A 1673-1441 2015 04-0385-13 1951 ~ 1966
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60 2 2016 2 RAILWAY STANDARD DESIGN Vol. 60 No. 2 Feb. 2016 1004-2954201602-0071-06 BIM 1 1 2 2 1 1. 7140992. 710054 BIM BIM 3D 4D nd BIM 1 3D 4D Revit BIM BIM U442. 5TP391. 72 A DOI10. 13238 /j. issn.
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512 Chinese Medical Journal of Metallurgical Industry,October 2005,Vol122 No1 5 3 1 1 1 2 1 ( 300020) 2 : : (5 mg/ kg), 3 7 28 : 3, ; 7 :,, ; 28 :,,, :, R 563 A 1005-5495 (2005) 05-0512 - 03 Ultrastructural
度 身 體 活 動 量 ; 芬 蘭 幼 兒 呈 現 中 度 身 體 活 動 量 之 比 例 高 於 臺 灣 幼 兒 (5) 幼 兒 在 投 入 度 方 面 亦 達 顯 著 差 異 (χ²=185.35, p <.001), 芬 蘭 與 臺 灣 幼 兒 多 半 表 現 出 中 度 投 入 與 高 度
臺 灣 與 芬 蘭 幼 兒 園 室 內 自 由 遊 戲 內 涵 之 探 討 林 昭 溶 毛 萬 儀 經 國 管 理 暨 健 康 學 院 幼 兒 保 育 系 副 教 授 joyce@ems.cku.edu.tw 吳 敏 而 國 家 教 育 研 究 院 研 究 員 rozwu@mail.naer.edu.tw wanyi@ems.cku.edu.tw 摘 要 自 由 遊 戲 被 視 為 是 幼 兒 的
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第 14 卷 第 3 期 中 南 大 学 学 报 ( 社 会 科 学 版 ) Vol.14 No3 2008 年 6 月 J. CENT. SOUTH UNIV. (SOCIAL SCIENCE) Jun 2008 肺 病 隐 喻 与 性 别 身 份 建 构 中 国 现 代 文 学 中 的 肺 病 意 象 分 析 王 冬 梅 ( 枣 庄 学 院 中 文 系, 山 东 枣 庄,277160) 摘 要