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1 中 国 科 技 论 文 在 线 # 台 湾 独 蒜 兰 无 菌 萌 发 与 植 株 再 生 研 究 卓 孝 康 1,2, 兰 思 仁 1,2, 彭 东 辉 1,2, 吴 沙 沙 1,2, 陈 潇 1,2, 江 鸣 涛 1,2 1,2**, 张 林 瀛 (1. 福 建 农 林 大 学 园 林 学 院, 福 建 福 州 ; 2. 福 建 农 林 大 学 海 峡 兰 花 保 育 研 究 中 心, 福 建 福 州 ) 摘 要 : 以 台 湾 独 蒜 兰 (Pleione formosana) 种 胚 为 材 料, 研 究 不 同 基 础 培 养 基 不 同 种 类 激 素 和 添 加 物 的 浓 度 配 比 对 种 胚 萌 发 和 植 株 再 生 的 影 响 结 果 表 明 : 台 湾 独 蒜 兰 种 胚 萌 发 的 最 佳 配 方 为 MS + NAA 0.5 mg L -1 + 蛋 白 胨 2%, 萌 发 率 最 高, 达 88.20%, 种 苗 生 长 健 壮 ; 壮 苗 培 养 的 配 方 为 TH + NAA 0.5 mg L BA 1.0 mg L -1 + 蛋 白 胨 2%; 丛 生 芽 增 殖 和 假 鳞 茎 膨 大 的 最 佳 培 养 基 为 MS + 6-BA 0.2 mg L -1 + NAA 1.0 mg L -1 + 土 豆 100 g L -1, 其 增 殖 系 数 高, 达 4.17, 假 鳞 茎 饱 满, 直 径 达 0.33 cm; 生 根 培 养 的 最 佳 配 方 为 MS + 6-BA 1.0 mg L -1 + NAA 1.0 mg L -1 + 香 蕉 泥 50 g L -1 + 土 豆 50 g L -1, 根 诱 导 率 达 78%, 平 均 每 株 根 数 为 4.67 条 关 键 词 : 台 湾 独 蒜 兰 ; 胚 培 养 ; 增 殖 ; 生 根 中 图 分 类 号 :S Aseptic Budding and Plant Regeneration from Mature Embryos of Pleione formosana ZHUO Xiaokang 1,2, LAN Siren 1,2, PENG Donghui 1,2, WU Shasha 1,2, CHEN Xiao 1,2, JIANG Mingtao 1,2, ZHANG Linying 1,2 (1. College of Landscape, Fujian Agriculture and Forestry University, FuZhou 35002,China; 2. Fujian Agriculture and Forestry University Cross-Straits Orchids Conservation Research Center,Fuzhou,Fujian ,China) Abstract: In order to find the most suitable formulation for each growth stage, and establish the rapid propagation system, Pleione formosana embryoes were used to study the effects of different basic culture medium, plant growth regulators and additives in orthogonal experimental design.. Results indicated that: the optimum medium for the embryo germination and later growth was MS + NAA 0.5 mg L-1 + peptone 2%. The germination rate reached 88.20%, and the plants grew strong. The optimum medium for cultivating strong plant was TH + NAA 0.5 mg L BA 1.0 mg L -1 + peptone 2%. The optimum medium for proliferation of cluster buds and pseudobulb expanding was MS + 6-BA 0.2 mg L -1 + NAA 1.0 mg L -1 + mashed potato 100 g L -1. The average proliferation rate was 4.17,and the diameter of pseudobulb reached 0.33 cm. The optimum medium for rooting was MS + 6-BA 1.0 mg L -1 + NAA 1.0 mg L -1 + banana mud 50 g L -1 + mashed potato 50 g L -1. The rooting rate was 78%,and the number of roots was 4.67 per plant. Key words: Pleione formosana; embryo culture; proliferation; rooting 0 引 言 40 台 湾 独 蒜 兰 (Pleione formosana) 为 兰 科 (Orchidaceae) 独 蒜 兰 属 多 年 生 草 本 植 物, 花 期 3-4 月, 花 后 或 花 期 长 出 一 枚 叶 片, 又 被 称 为 一 叶 兰 [1] 喜 温 暖 湿 润 半 阴 环 境, 生 于 林 下 或 林 缘 腐 殖 质 丰 富 的 土 壤 和 岩 石 上, 主 要 分 布 于 台 湾 福 建 西 部 至 北 部 浙 江 南 部 和 江 西 东 南 部 [2] 台 湾 独 蒜 兰 具 有 极 高 的 观 赏 价 值 和 药 用 价 值, 为 兰 科 濒 危 种, 属 野 生 动 植 物 濒 危 物 种 国 际 贸 易 公 约 应 保 护 植 物 [3] 近 年 来 由 于 自 然 灾 害 和 人 为 干 扰, 其 生 存 与 发 展 已 受 基 金 项 目 : 教 育 部 博 士 点 基 金 ( ), 福 建 省 自 然 科 学 基 金 (2011J01081), 国 家 林 业 局 林 业 公 益 性 行 业 科 研 专 项 ( ) 作 者 简 介 : 卓 孝 康 (1988-), 男, 硕 士 研 究 生, 兰 科 植 物 种 质 资 源 与 应 用 通 信 联 系 人 : 彭 东 辉 (1971-), 男, 教 授, 园 林 植 物 种 质 资 源 与 育 种

2 45 到 极 大 威 胁, 种 群 数 量 日 趋 下 降, 许 多 原 有 记 载 的 分 布 地 已 经 找 不 到 台 湾 独 蒜 兰 的 踪 影 另 外, 台 湾 独 蒜 兰 种 子 细 小, 自 然 条 件 下 不 易 萌 发, 有 性 繁 殖 率 低, 主 要 靠 假 鳞 茎 的 无 性 繁 殖 来 延 续 后 代, 繁 殖 速 度 慢 目 前, 独 蒜 兰 属 植 物 的 组 培 繁 殖 已 有 一 些 报 道 [4-7], 但 仍 缺 乏 系 统 性 的 研 究 国 内 外 对 台 湾 独 蒜 兰 组 培 快 繁 研 究 报 道 很 少,Lu M-C [8] 利 用 2,4-D 和 TDZ 诱 导 台 湾 独 蒜 兰 愈 伤 组 织, 并 成 功 的 培 育 出 植 株 本 研 究 通 过 胚 培 养 的 方 法, 对 台 湾 独 蒜 兰 进 行 离 体 快 速 繁 殖, 希 望 对 野 生 台 湾 独 蒜 兰 种 质 资 源 的 保 护 和 可 持 续 开 发 利 用 提 供 有 效 途 径 1 材 料 与 方 法 试 验 材 料 于 2013 年 3 月 21 日 对 福 建 省 德 化 县 戴 云 山 国 家 自 然 保 护 区 内 的 野 生 台 湾 独 蒜 兰 进 行 人 工 授 粉 ( 异 株 异 花 ), 于 2013 年 8 月 29 日 采 回 未 开 裂 的 蒴 果 为 试 验 材 料, 种 子 发 育 约 160 d 植 株 再 生 材 料 来 源 于 播 种 100 d 的 无 根 种 胚 苗 1.2 试 验 方 法 灭 菌 与 无 菌 播 种 方 法 将 采 来 的 蒴 果 用 洗 衣 粉 浸 洗 10 min, 再 用 自 来 水 冲 洗 2 h, 在 无 菌 条 件 下 用 75% 的 酒 精 表 面 消 毒 30 s 后, 无 菌 水 冲 洗 3 次, 再 用 0.1% 的 升 汞 消 毒 15 min, 无 菌 水 冲 洗 5 次, 每 次 5 min 在 超 净 工 作 台 接 种 盘 上, 用 灭 菌 滤 纸 将 果 荚 表 面 水 分 吸 干, 切 开 蒴 果, 将 种 子 均 匀 的 撒 落 于 培 养 基 表 面 每 组 处 理 接 种 30 瓶, 每 个 处 理 3 个 重 复 种 子 萌 发 诱 导 培 养 基 设 计 方 案 如 下 : 30.0 g L -1 蔗 糖,7 g L -1 琼 脂,2 g L -1 活 性 炭,pH 值 为 5.8, 培 养 温 度 为 23 ± 2, 光 照 强 度 为 µmol (m 2 s) -1, 光 照 时 间 为 12 h d -1 采 用 L 9 (3 4 ) 正 交 试 验 [9], 研 究 6-BA NAA 外 源 添 加 物 对 种 子 萌 发 的 影 响 ( 表 1) 播 种 后 每 2 d 观 察 一 次 种 子 萌 发 情 况,45 d 统 计 萌 发 率, 以 种 子 突 破 种 皮 为 萌 发 标 准 ;90 d 测 量 种 子 萌 发 后 的 生 长 状 况 表 1 台 湾 独 蒜 兰 无 菌 萌 发 配 方 正 交 设 计 L 9 (3 4 ) Table 1 The orthogonal design scheme L 9 (3 4 ) of the formulation for the embryo culture of Pleione formosana 水 平 因 素 基 础 培 养 基 6-BA/mg L -1 NAA/mg L -1 添 加 物 /g L 植 株 再 生 培 养 1 TH 香 蕉 5% 2 MS 椰 子 10% 3 1/2MS 蛋 白 胨 0.2% 以 无 菌 播 种 90 d 后, 叶 芽 长 约 为 0.5 cm, 球 茎 约 为 0.3mm, 尚 未 生 根 的 种 苗 为 材 料, 以 MS 为 基 础 培 养 基, 采 用 L 9 (3 4 ) 正 交 试 验 研 究 6-BA NAA 外 源 添 加 物 ( 香 蕉 和 马 铃 薯 ) 对 增 殖 和 生 根 的 影 响 ( 表 2), 培 养 条 件 ( 同 上 ) 每 个 处 理 接 种 30 瓶, 每 瓶 5 株,3 次 重 复 90 d 后 统 计 增 殖 数 生 根 数, 测 量 株 高 根 长 和 假 鳞 茎 大 小, 筛 选 出 适 合 台 湾 独 蒜 兰 丛 生 芽 增 殖 和 生 根 的 培 养 基 - 2 -

3 80 85 表 2 台 湾 独 蒜 兰 丛 生 芽 的 增 殖 与 生 根 培 养 基 配 方 正 交 设 计 L 9 (3 4 ) Table 2 The orthogonal design scheme L 9 (3 4 ) of the formulation for the proliferation and rooting culture of Pleione formosana 水 平 因 素 6-BA/mg L -1 NAA/mg L -1 添 加 物 /g L 数 据 统 计 与 分 析 香 蕉 10% 香 蕉 5%+ 土 豆 5% 土 豆 10% 用 SPSS 13.0 统 计 分 析 软 件 对 数 据 进 行 方 差 分 析 (general linear model procedures) 和 多 重 比 较 (Student-Newman-Keuls), 各 指 标 计 算 公 式 为 : 萌 发 率 = 萌 发 种 子 数 / 种 子 总 数 100 %; 增 值 系 数 = 增 殖 后 芽 数 / 接 种 外 植 体 数 100%; 根 诱 导 率 = 生 根 株 数 / 接 种 株 数 ; 生 根 数 = 生 根 根 数 / 生 根 不 定 芽 数 100% [10-11] 2 结 果 分 析 2.1 种 子 萌 发 种 子 萌 发 率 台 湾 独 蒜 兰 种 子 播 种 45 d 后, 种 子 已 完 全 突 破 种 皮, 少 数 长 出 叶 芽 从 表 3 各 因 素 R 值 分 析 可 知 对 种 胚 萌 发 的 影 响 主 次 关 系 为 基 础 培 养 基 > 添 加 物 >6-BA>NAA 经 方 差 分 析 ( 表 4) 可 知, 基 础 培 养 基 和 添 加 物 对 种 子 萌 发 均 有 显 著 影 响,6-BA 对 种 子 萌 发 有 一 定 影 响, 台 湾 独 蒜 兰 种 子 萌 发 的 最 优 水 平 组 合 为 处 理 4: MS + NAA 0.5 mg L -1 + 蛋 白 胨 2%, 萌 发 率 最 高, 达 88.20%, 原 球 茎 大 小 均 一, 饱 满 健 壮, 长 势 最 好, 少 数 已 分 化 出 叶 芽 表 3 不 同 激 素 种 类 和 添 加 物 的 浓 度 配 比 对 种 胚 萌 发 的 影 响 Table 3 Effect of the different kinds and concentration of hormones and additives on the germination of Pleione formosana 处 理 号 基 础 培 养 基 6-BA/mg L -1 NAA/mg L -1 添 加 物 / g L -1 萌 发 率 (%) x=arcsin 1 TH 香 蕉 5% TH 椰 子 10% TH 蛋 白 胨 2% MS 蛋 白 胨 2% MS 香 蕉 5% MS 椰 子 10% /2MS 椰 子 10% /2MS 蛋 白 胨 2% /2MS 香 蕉 5% K K K T= k k k R

4 方 差 来 源 表 4 各 培 养 因 素 方 差 分 析 Table 4 Variance analysis of each factor F 值 萌 发 率 鳞 茎 增 殖 生 根 率 鳞 茎 膨 大 基 础 培 养 基 * BA * ** NAA * 添 加 物 * ** * 注 :F 0.01 =29.5;F 0.05 =9.28;F 0.1 =5.93 ** 极 显 著 ;* 显 著 种 子 萌 发 后 期 生 长 状 况 台 湾 独 蒜 兰 萌 发 后 不 同 处 理 组 合 在 不 同 时 间 段 的 生 长 状 况 如 表 5 所 示, 无 菌 播 种 30 d 后, 各 处 理 组 合 种 子 均 变 绿, 处 理 2 未 突 破 种 皮, 其 余 各 处 理 均 不 同 程 度 的 突 破 种 皮, 处 理 5 出 现 少 量 原 球 茎 褐 化 播 种 60 d 后, 处 理 1 处 理 4 处 理 8 处 理 9 长 势 较 好, 原 球 茎 大, 已 分 化 出 叶 芽 其 中, 以 处 理 4 表 现 最 好, 生 长 健 壮, 鳞 茎 大 小 可 达 mm, 叶 芽 长 达 mm, 其 余 各 处 理 出 现 不 同 程 度 的 褐 化 播 种 90 d 后, 处 理 1 幼 苗 生 长 细 弱, 处 理 3 处 理 4 后 期 幼 苗 生 长 迅 速, 鳞 茎 大 小 可 达 mm, 植 株 高 达 cm, 生 长 旺 盛, 均 超 过 其 余 各 组 综 述 所 述, 处 理 4:MS + NAA 0.5 mg L -1 + 蛋 白 胨 2%, 适 合 种 子 萌 发 及 后 期 的 生 长 ; 处 理 3:TH + NAA 0.5 mg L BA 1.0 mg L -1 + 蛋 白 胨 2%, 不 利 于 萌 发, 但 有 利 于 后 期 壮 苗 培 养, 其 假 鳞 茎 大 小 要 超 过 处 理 处 理 号 1 种 子 变 绿, 突 破 种 皮 表 5 不 同 阶 段 生 长 状 况 比 较 Table 5 the growth condition of different stages 植 株 生 长 状 况 30 d 60 d 90 d 萌 发 后, 大 部 已 分 化 出 叶 芽, 长 势 均 匀, 原 球 茎 mm, 叶 芽 长 mm 平 均 高 度 达 0.5cm, 原 球 茎 为 1mm, 苗 细 弱, 无 褐 化 综 合 评 价 萌 发 良 好, 长 苗 一 般 2 种 子 变 绿, 未 突 破 种 皮 萌 发 后, 原 球 茎 细 小, 约 为 0.1mm, 长 势 不 齐, 且 出 现 大 量 褐 化, 无 叶 芽 分 化 平 均 高 度 1.2cm, 球 茎 为 1.3mm, 原 球 茎 阶 段 褐 化 严 重, 长 芽 后, 植 株 生 长 迅 速, 球 茎 大, 但 长 势 不 均 匀 不 利 于 萌 发, 长 苗 较 好 3 种 子 变 绿, 突 破 种 皮 4 种 子 变 绿, 突 破 种 皮, 原 球 茎 大 萌 发 后, 原 球 茎 细 小, 约 为 mm, 且 出 现 褐 化, 无 叶 芽 分 化 萌 发 后, 原 球 茎 大, 少 数 分 化 出 叶 芽, 原 球 茎 mm, 叶 芽 长 mm 平 均 高 度 2cm, 球 茎 为 2.0mm 萌 发 阶 段 褐 化 严 重, 在 生 长 阶 段 表 现 良 好, 生 长 迅 速 平 均 高 度 1.5cm, 球 茎 大 小 1.5mm, 无 褐 化, 长 势 均 匀 不 利 于 萌 发, 长 苗 良 好, 植 株 健 壮 利 于 萌 发 和 后 期 生 长 健 壮, 长 势 均 匀 5 种 子 变 绿, 突 破 种 皮, 出 现 褐 化 萌 发 后, 原 球 茎 大, 但 部 分 出 现 褐 化, 无 叶 芽 分 化 平 均 高 度 0.1cm, 球 茎 0.6mm, 褐 化 严 重 不 利 于 萌 发 和 长 苗 6 种 子 变 绿, 突 破 种 皮, 原 球 茎 小 萌 发 后, 原 球 茎 细 小, 约 为 mm, 少 量 出 现 褐 化 平 均 高 度 0.1cm, 球 茎 0.5mm, 褐 化 严 重 不 利 于 萌 发 和 长 苗 7 种 子 变 绿, 突 破 种 皮, 原 球 茎 小 萌 发 后, 原 球 茎 细 小, 约 mm, 部 分 出 现 褐 化 完 全 褐 化 不 利 于 萌 发 和 长 苗 - 4 -

5 8 种 子 变 绿, 突 破 种 皮, 原 球 茎 小 萌 发 后, 原 球 茎 较 大, 约 为 mm, 部 分 分 化 出 叶 芽, 芽 长 约 mm, 长 势 不 均 匀 平 均 高 度 0.8cm, 球 茎 1.2mm, 长 势 较 均 匀, 无 褐 化 萌 发 和 长 苗 较 好 9 种 子 变 绿, 突 破 种 皮, 原 球 茎 大 萌 发 后, 原 球 茎 较 大, 约 为 mm, 少 数 分 化 出 叶 芽, 芽 长 约 mm, 长 势 较 均 匀 平 均 高 度 0.5cm, 球 茎 大 小 1.0mm, 后 期 长 势 不 均, 少 量 褐 化 萌 发 和 长 苗 一 般 2.2 植 株 再 生 培 养 不 同 处 理 对 丛 生 芽 增 殖 的 影 响 由 表 6 可 知,6-BA 对 大 苞 鞘 石 斛 增 殖 系 数 的 影 响 较 大, 外 源 添 加 物 和 NAA 对 大 苞 鞘 石 斛 增 殖 系 数 的 影 响 小 当 6-BA 质 量 浓 度 达 到 0.2 mg L -1 NAA 质 量 浓 度 达 到 1.0 mg L -1 时, 增 殖 系 数 达 到 最 高 水 平, 且 植 株 生 长 健 壮 整 齐 根 据 各 因 素 R 值 大 小 可 知,4 种 因 素 对 增 殖 系 数 的 影 响 强 弱 表 现 为 6-BA>NAA= 添 加 物, 方 差 结 果 表 明 ( 表 4),6-BA(F=14.465) 对 台 湾 独 蒜 兰 丛 生 芽 增 殖 的 影 响 显 著 丛 生 芽 增 殖 培 养 的 最 佳 培 养 配 方 为 处 理 3: MS + 6-BA 0.2 mg L -1 + NAA 1.0 mg L -1 + 土 豆 100 g L -1, 其 增 殖 系 数 最 高, 达 4.17, 长 势 整 齐, 植 株 生 长 健 壮, 新 生 芽 多 表 6 不 同 激 素 种 类 和 添 加 物 的 浓 度 配 比 对 丛 生 芽 增 殖 的 影 响 Table 8 Effect of the different kinds and concentration of hormones and additives on the proliferation of Pleione formosana 处 理 号 6-BA/mg L -1 NAA/mg L -1 添 加 物 /g L -1 空 列 增 殖 系 数 香 蕉 10% 香 蕉 5%+ 土 豆 5% 土 豆 10% 香 蕉 5%+ 土 豆 5% 土 豆 10% 香 蕉 10% 土 豆 10% 香 蕉 10% 香 蕉 5%+ 土 豆 5% K K K T=23.25 k k k R 不 同 处 理 对 生 根 的 影 响 135 试 验 结 果 如 表 7 所 示, 通 过 表 中 R 值 可 知, 添 加 物 的 R 值 最 大, 为 30.37,6-B 次 之, NAA 最 小, 为 5.00, 可 见 3 个 因 子 对 台 湾 独 蒜 兰 生 根 诱 导 率 影 响 的 主 次 关 系 为 : 添 加 物 > 6-BA>NAA 方 差 分 析 表 明 ( 表 4), 添 加 物 (F=56.149) 和 6-BA(F=40.438) 对 台 湾 独 蒜 兰 根 诱 导 均 有 极 显 著 影 响, 其 中 香 蕉 泥 和 土 豆 泥 混 合 使 用 的 生 根 效 果 要 优 于 各 自 单 独 加 入 台 湾 独 蒜 兰 生 根 培 养 的 最 佳 配 方 为 处 理 9:MS + 6-BA 1.0 mg L -1 + NAA 1.0 mg L -1 + 香 - 5 -

6 蕉 泥 50 g L -1 + 土 豆 50 g L -1, 培 养 60 天 根 诱 导 率 达 78%, 平 均 根 数 可 达 4.67 条 株 -1, 根 粗 壮, 植 株 生 长 良 好 140 表 7 不 同 激 素 种 类 和 添 加 物 的 浓 度 配 比 对 生 根 的 影 响 Table 7 Effect of the different kinds and concentration of hormones and additives on the rooting of Pleione formosana 处 理 号 6-BA/mg L -1 NAA/mg L -1 添 加 物 /g L -1 空 列 根 诱 导 率 (%) x=arcsin 平 均 根 数 香 蕉 10% 香 蕉 5%+ 土 豆 5% 土 豆 10% 香 蕉 5%+ 土 豆 5% 土 豆 10% 香 蕉 10% 土 豆 10% 香 蕉 10% 香 蕉 5%+ 土 豆 5% K K K T= k k k R 不 同 处 理 对 假 鳞 茎 膨 大 的 影 响 不 同 激 素 种 类 和 添 加 物 的 浓 度 配 比 对 假 鳞 茎 膨 大 的 影 响 结 果 如 表 5 所 示, 比 较 ( 表 5) 各 因 素 R 值 大 小 可 知,4 个 因 素 对 原 球 茎 膨 大 影 响 的 重 要 次 序 为 添 加 物 =NAA>6-BA 经 方 差 分 析 表 明 ( 表 4),NAA(F=17.33) 和 添 加 物 (F=16.33) 对 假 鳞 茎 膨 大 的 影 响 显 著, 6-BA 对 假 鳞 茎 膨 大 有 一 定 的 作 用 适 合 假 鳞 茎 膨 大 的 最 优 组 合 为 处 理 3:MS + 6-BA 0.2 mg L -1 + NAA 1.0 mg L -1 + 土 豆 100 g L -1, 假 鳞 茎 最 大, 达 0.33cm 表 8 不 同 激 素 种 类 和 添 加 物 的 浓 度 配 比 对 假 鳞 茎 膨 大 的 影 响 Table 8 Effect of the different kinds and concentration of hormones and additives on pseudobulb development of Pleione formosana 处 理 号 6-BA/mg L -1 NAA/mg L -1 添 加 物 /g L -1 空 列 鳞 茎 大 小 (cm) 香 蕉 10% 香 蕉 5%+ 土 豆 5% 土 豆 10% 香 蕉 5%+ 土 豆 5% 土 豆 10% 香 蕉 10% 土 豆 10% 香 蕉 10% 香 蕉 5%+ 土 豆 5% K K K

7 k T=2.31 k k R 结 论 与 讨 论 台 湾 独 蒜 兰 种 子 萌 发 的 最 适 培 养 基 为 MS + NAA 0.5 mg L -1 + 蛋 白 胨 2%, 壮 苗 培 养 最 适 培 养 基 为 TH + NAA 0.5 mg L BA 1.0 mg L -1 + 蛋 白 胨 2% 激 素 对 种 子 萌 发 阶 段 无 显 著 影 响, 基 础 培 养 基 和 添 加 物 对 种 子 萌 发 影 响 显 著,MS 适 合 作 为 台 湾 独 蒜 兰 种 子 萌 发 的 基 础 培 养 基,TH 可 作 为 壮 苗 培 养 的 基 础 培 养 基 [12], 添 加 物 以 香 蕉 泥 和 蛋 白 胨 的 效 果 较 好 种 子 突 破 种 皮 后, 低 浓 度 的 激 素 对 其 分 化 生 长 有 重 要 作 用,6-BA 适 合 浓 度 为 0.5 mg L -1,NAA 适 合 浓 度 为 mg L -1, 适 合 浓 度 的 生 长 素 和 细 胞 分 裂 素 的 共 同 调 节, 有 利 于 促 进 植 株 健 壮 生 长 和 假 鳞 茎 的 膨 大 丛 生 芽 增 殖 和 假 鳞 茎 膨 大 的 最 佳 培 养 配 方 为 MS + 6-BA 0.2 mg L -1 + NAA 1.0 mg L -1 + 土 豆 100 g L -1 在 丛 生 芽 的 增 殖 阶 段,6-BA 起 主 导 作 用, 其 适 合 浓 度 为 0.2 mg L -1, 当 随 着 浓 度 的 升 高, 增 殖 系 数 逐 渐 减 小, 植 株 生 长 缓 慢, 出 现 畸 形 苗 适 宜 浓 度 的 NAA 和 添 加 物 对 植 株 生 长 和 假 鳞 茎 膨 大 有 辅 助 作 用 丛 生 芽 生 根 的 最 佳 培 养 基 为 MS + 6-BA 1.0 mg L -1 + NAA 1.0 mg L -1 + 香 蕉 泥 50 g L -1 + 土 豆 50 g L -1 添 加 物 和 6-BA 对 根 的 诱 导 和 生 长 具 有 极 显 著 影 响, 其 中 两 种 不 同 的 添 加 物 混 合 加 入 比 单 独 加 入 的 效 果 要 好 生 长 素 对 根 的 诱 导 有 重 要 影 响, 但 在 试 验 中 并 没 有 达 到 显 著 水 平, 可 能 是 生 长 素 浓 度 过 高, 抑 制 了 根 的 诱 导 和 伸 长 适 合 浓 度 的 外 源 激 素 NAA 6-BA 可 明 显 的 促 进 外 植 体 的 增 殖 和 分 化, 提 高 种 苗 的 整 齐 度, 浓 度 过 高 时 会 对 生 长 起 到 抑 制 作 用, 且 不 同 植 物 在 不 同 的 生 长 阶 段 对 激 素 的 种 类 和 浓 度 的 需 求 不 同 [13-15] 在 整 个 试 验 过 程 中,NAA 对 台 湾 独 蒜 兰 对 种 子 萌 发 增 殖 生 根 和 假 鳞 茎 膨 大 的 影 响 均 很 小, 可 能 是 独 蒜 兰 对 NAA 比 较 敏 感, 在 组 培 过 程 中 可 以 不 加 或 在 生 根 阶 段 加 入 较 低 浓 度 的 NAA 成 倩 等 在 秋 花 独 蒜 兰 (Pleion maculate) 的 培 养 过 程 中, 只 加 入 BA, 在 生 根 培 养 时 加 入 0.2 mg L -1 的 NAA, 与 本 试 验 研 究 的 结 果 相 似 [16] [ 参 考 文 献 ] (References) [1] William Tai, Wu Zhengyi, Yu Dejun. Flora of China. Beijing [M]: Science Press,2009. [2] 周 育 真 台 湾 独 蒜 兰 (Pleione formosana) 传 粉 与 生 殖 策 略 研 究 [D]. 福 州 : 福 州 福 建 农 大 学, [3] 赵 勇, 邵 伟 丽, 刘 志 高, 等. 福 建 虎 伯 寮 自 然 保 护 区 兰 科 植 物 多 样 性 与 保 育 研 究 [J]. 福 建 林 业 科 技, 2009,36(2): [4] 陈 之 林, 叶 秀 麟, 粱 承 邺, 等. 白 花 独 蒜 兰 的 组 织 培 养 和 快 速 繁 殖 [J]. 植 物 生 理 学 通 讯, 2004,40(4): [5] 黄 家 林, 胡 虹, 李 树 云. 云 南 独 蒜 兰 的 种 子 无 菌 萌 发 研 究 [J]. 园 艺 学 报, 2005,32(2): [6] 李 洪 林, 付 志 惠, 杨 波. 独 蒜 兰 的 离 体 快 速 繁 殖 [J]. 植 物 生 理 学 通 讯, 2006,41(5): [7] 杨 友 联, 刘 作 易, 朱 国 胜. 独 蒜 兰 种 子 共 生 萌 发 研 究 [J]. 微 生 物 学 通 报, 2008, 35(6): [8] 刘 瑞 江, 张 业 旺, 闻 崇 炜, 等. 正 交 试 验 设 计 和 分 析 方 法 研 究 [J]. 试 验 技 术 与 管 理,2010, 27(9): [9] Lu M-C. High frequency plant regeneration from callus culture of Pleione formosana Hayata[J]. Plant Cell,Tissueand organ culture, 2004, 78(1): [10] 李 媛, 朱 丹 红, 潘 会 堂, 等. 3 种 石 斛 兰 以 茎 段 为 外 植 体 的 离 体 快 繁 技 术 [J]. 东 北 林 业 大 学 学 报, 2013,41(8): [11] 王 瑞 霞, 何 明 高, 宋 松 泉. 培 养 基 与 光 照 对 沼 兰 种 子 非 共 生 萌 发 的 影 响 [J]. 植 物 生 态 学 报,2010,34(4): [12] 夏 鸿 西, 朱 利 泉, 张 明, 等. 植 物 生 长 调 节 剂 对 石 斛 生 长 的 影 响 [J]. 园 艺 学 报, 1999, 26(4):

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13期

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