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彰川李
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1 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2015, 50 (4): 齐墩果酸衍生物的合成及抗肿瘤活性研究孟艳秋 *, 冯楚侨, 张良锋, 张萌, 赵娜 ( 沈阳化工大学制药工程教研室, 辽宁沈阳 ) 摘要 : 以天然产物齐墩果酸为起始原料, 对其 C-3 位羟基 C-12 位双键 C-28 位羧基进行结构改造, 合成了 13 个新的齐墩果酸衍生物目标化合物结构经 MS 1 H NMR 及元素分析确证采用 MTT 法, 选用高表达人癌细胞 (SGC7901 MCF-7 和 A549) 对目标化合物进行初步的体外抗肿瘤活性研究结果表明, 所测化合物对 3 种肿瘤细胞的抑制活性均明显强于齐墩果酸, 其中化合物 II 2 和 II 3 对 MCF-7 和 A549 细胞表现出很强的抑制活性, 明显高于已上市药物吉非替尼, 值得进一步研究关键词 : 齐墩果酸 ; 五环三萜类化合物 ; 抗肿瘤活性中图分类号 : R916 文献标识码 : A 文章编号 : (2015) Synthesis and anti-tumor activity of oleanolic acid derivatives MENG Yan-qiu *, FENG Chu-qiao, ZHANG Liang-feng, ZHANG Meng, ZHAO Na (Department of Pharmaceutical Engineering, Shenyang University of Chemical Technology, Shenyang , China ) Abstract: Thirteen novel oleanolic acid (OA) derivatives were designed and synthesized with modification at positions of C-3, C-12 and C-28 of OA. Their structures were confirmed by MS, 1 H NMR and elemental analysis. Their in vitro cytotoxicities against various cancer cell lines (SGC7901, MCF-7 and A549) were evaluated by MTT assay. The results indicated that the tested derivatives were found to have stronger cell growth inhibitory activity than OA. Among them, compounds II 2 and II 3 showed more potent cytotoxicity on MCF-7 and A549 tumor cells than gefitinib (positive control). They are worthy to be studied further. Key words: oleanolic acid; pentacyclic triterpenoid; anti-tumor activity 齐墩果酸 (oleanolic acid, OA) 又名士当归酸, 是从女贞子青叶胆等天然植物中分离得到的一种具有齐墩果烷型骨架的五环三萜类天然产物 [1] 研究表明, 齐墩果酸具有多种重要的生物活性, 如 : 保肝抗炎抗肿瘤降血糖及抗溃疡等作用 [2 6] Finlay [7] 等将齐墩果酸 C-3 位羟基氧化成酮羰基得到 3- 氧代齐墩果酸衍生物, 通过对前列腺细胞 NRP152 抑制增长作用的研究, 表明齐墩果酸及其 3- 氧代产物的收稿日期 : ; 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 ( ); 辽宁省教育厅高等学校优秀人才支持计划资助项目 (LR ); 沈阳市科技计划资助项目 (F ). * 通讯作者 Tel: , Fax: , mengyanqiu@hotmail.com IC 50 均大于 5.0 μmol L 1 [8, 9] Kashiwada 等将齐墩果酸 C-3 位羟基酰化 C-12 位双键还原加氢, 得到的 3- 烷酰氧基 C-12 位饱和的齐墩果酸衍生物, 具有很强的抗 HIV 作用在五环三萜类化合物结构修饰的过程中, 对羧基的修饰主要为羧基成酯和成酰胺的反应 [10 14] 本文以齐墩果酸 (OA) 为先导化合物, 在本课题组前期对五环三萜类化合物结构改造以及构效关系研究的基础上 [15 19], 保留五环三萜骨架, 对其 C-3 C-12 C-28 位进行结构修饰, 合成了 13 个新的齐墩果酸衍生物, 并对化合物进行了体外抗肿瘤活性的研究以 OA 为原料, 将 C-3 位羟基与对氯苯甲酸或呋喃甲酸反应成酯, 同时 C-28 位羧基与相应的醇反应

2 470 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2015, 50 (4): 成酯, 得到 3 个 I 系列 3-O- 对氯苯甲酰 ( 或呋喃甲酰 )- 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸酯类化合物 C-12 位双键被间氯过氧苯甲酸氧化生成环氧化合物, 然后在酸性条件下水解开环引入羟基, 同时 C-28 位羧基与醇反应成酯, 得到 3 个 II 系列 3β, 12α, 13β- 三羟基齐墩果烷 -28- 羧酸酯类化合物将 C-3 位羟基氧化成羰基, 然后与盐酸羟胺反应成肟, 再与烟酸反应, 同时将 C-28 位羧基与醇反应成酯或与胺反应成酰胺, 得到 7 个 III 系列 3-(N- 烟酰氧基 ) 亚氨基 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸酯类化合物目标化合物的合成见合成路线 1 结果与讨论 1 化学合成以齐墩果酸 (OA) 为起始原料, 经过酰化氧化水解酯化或酰胺化等反应得到 13 个目标化合物, 目标化合物的结构经 1 H NMR 元素分析和 MS 确定, 均为新化合物, 数据见表 1 和表 2 2 抗肿瘤活性测试以吉非替尼为阳性对照药, 采用 MTT 法测试目标化合物体外抗肿瘤活性, 活性数据见表 3 结果表明 : 所测试的目标化合物对 SGC7901 MCF-7 和 A549 三种细胞生长均具有一定的抑制作用, 其中化合物 II 2 和 II 3 对 SGC7901 MCF-7 和 A549 三种细胞表现出很好的抑制活性, II 2 对 SGC7901 MCF-7 和 A549 细胞的抑制率分别为 16.7% 32.7% 和 42.4%; II 3 对 SGC7901 MCF-7 和 A549 细胞的抑制率分别为 20.1% 38.2% 和 53.8%, 明显高于母体化合物 OA, 对 MCF-7 和 A549 细胞的抑制活性高于临床常用药物吉非替尼化合物 III 5 对 A549 细胞的抑制率为 49.7%, 高于 OA 和吉非替尼 III 3 对 SGC7901 和 A549 细胞的抑制率分别为 25.3% 和 30.4%, 高于母体化合物 OA, 对 A549 细胞的抑制活性与吉非替尼相当可以看出, 在 C-3 位羟基酯化, C-12 位双键氧化, 同时在 C-28 位羧基成酯可以提高其抗肿瘤活性 Scheme 1 Synthetic routes of target compounds

3 孟艳秋等 : 齐墩果酸衍生物的合成及抗肿瘤活性研究 471 Table 1 MS and elemental analysis data of target compounds Compd. ESI-MS (m/z) Elemental analysis/found (Calcd.) C H N O I [M+H] (75.15) 8.63 (8.89) (10.27) I [M+H] (76.78) 9.37 (9.25) (14.52) I [M+H] (76.99) 9.47 (9.52) (13.49) II [M+H] (74.68) (10.69) (14.63) II [M+H] (74.95) (10.78) (14.26) II [M+H] (74.95) (10.78) (14.26) III [M+H] (75.71) 9.21 (9.03) 4.82 (4.65) (10.62) III [M+H] (77.67) 8.33 (8.49) 4.40 (4.21) 9.87 (9.62) III [M+H] (75.93) 9.40 (9.15) 4.37 (4.54) (10.37) III [M+H] (76.15) 9.45 (9.27) 4.10 (4.44) (10.14) III [M+H] (76.36) 9.53 (9.38) 4.49 (4.34) 9.75 (9.92) III [M+H] (74.96) 8.57 (8.39) 8.51 (8.97) 7.70 (7.68) III [M+H] (77.62) 8.85 (8.53) 6.73 (6.47) 7.16 (7.39) Table 2 1 H NMR data of target compounds Compd. 1 H NMR (CDCl 3, 500 MHz) I 1 δ (m, 4H, Ph-H), 5.32 (t, J = 7.8 Hz, 1H, H-12), 4.10 (m, 2H, COOCH 2), 2.86 (m, 1H, H-3), 2.70 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-18), 1.98 (t, J = 11.7 Hz, 3H, COOCH 2CH 3), 1.78, 1.64, 1.48 (s, 9H, CH 3 3), 1.20, 1.13 (s, 6H, CH 3 2), 1.08 (t, J = 7.5 Hz, 1H, H-9), 0.96 (s, 3H, CH 3), 0.91 (t, J = 7.5 Hz, 1H, H-5), 0.87 (s, 3H, CH 3) I 2 δ (m, 3H, Ar-H), 5.57 (m, 1H, H-12), 3.86 (m, 2H, COOCH 2), 3.45 (t, J = 12.0 Hz, 1H, H-3), 2.67 (t, J = 7.2 Hz, 1H, H-18), 2.01 (s, 3H, COOCH 2CH 3), 1.86, 1.71, 1.52 (s, 9H, CH 3 3), 1.38, 1.25, 1.09 (s, 9H, CH 3 3), 1.05 (t, J = 7.5 Hz, 1H, H-9), 0.86 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-5), 0.75 (s, H, CH 3) I 3 δ (m, 3H, Ar-H), 5.43 (t, J = 7.8 Hz, 1H, H-12), 4.21 (t, J = 12.0 Hz, 2H, COOCH 2), 3.37 (t, J = 12.0 Hz, 1H, H-3), 2.59 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-18), 2.00 (m, 2H, COOCH 2CH 2CH 3), 1.85 (t, J = 11.7 Hz, 3H, COOCH 2CH 2CH 3), 1.63, 1.48, 1.30 (s, 9H, CH 3 3), 1.19 (s, 3H, CH 3), 1.10 (m, 1H, H-9), 1.03, 0.89 (s, 6H, CH 3 2), 0.81 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-5), 0.72 (s, 3H, CH 3) II 1 δ 5.21 (br s, 1H, 12-OH), 4.93 (br s, 1H, 13-OH), 4.65 (br s, 1H, 3-OH), 4.17 (t, J = 7.0 Hz, 2H, OCH 2(CH 2) 2CH 3), 3.25 (m, 1H, H-3), 1.89, 1.70 (m, 3H, OCH 2(CH 2) 2CH 3), 1.68 (t, J = 7.5 Hz, 1H, H-18), 1.56 (t, J = 7.2 Hz, 3H, O(CH 2) 2CH 3), 1.45, 1.28, 1.13 (s, 9H, CH 3 3), 1.06 (s, 3H, CH 3), 0.98, 0.93 (t, J = 7.3 Hz, 2H, H-5/9), 0.91, 0.80, 0.72 (s, 9H, CH 3 9) II 2 δ 5.20 (br s, 1H, 12-OH), 4.91 (br s, 1H, 13-OH), 4.66 (br s, 1H, 3-OH), 4.12 (t, J = 7.0 Hz, 2H, OCH 2(CH 2) 3CH 3), 3.28 (m, 1H, H-3), 1.90, 1.83, 1.64 (m, 6H, OCH 2(CH 2) 3CH 3), 1.60 (t, J = 7.5 Hz, 1H, H-18), 1.51 (t, J = 6.5 Hz, 3H, O(CH 2) 3CH 3), 1.47, 1.32, 1.25 (s, 9H, CH 3 3), 1.09 (s, 3H, CH 3), 0.97 (m, 2H, H-5/9), 0.92, 0.83, 0.75 (s, 9H, CH 3 3) II 3 δ 5.20 (br s, 1H, 12-OH), 4.92 (br s, 1H, 13-OH), 4.65 (br s, 1H, 3-OH), 4.15 (t, J = 7.5 Hz, 2H, OCH 2CH 2CH(CH 3) 2), 3.26 (m, 1H, H-3), 1.85 (m, 2H, OCH 2CH 2CH(CH 3) 2), 1.78 (t, J = 7.2 Hz, 1H, H-18), 1.73 (m, 1H, OCH 2CH 2CH(CH 3) 2), 1.60, 1.47 (d, J = 7.0 Hz, 6H, OCH 2CH 2CH(CH 3) 2), 1.39, 1.30, 1.21 (s, 9H, CH 3 3), 1.13 (s, 3H, CH 3), 0.98 (m, 2H, H-5/9), 0.95, 0.80, 0.71 (s, 9H, CH 3 3) III 1 δ 9.25 (s, 1H, Py-H), (m, 2H, Py-H), 7.43 (d, J = 6.5 Hz, 1H, Py-H), 5.30 (m, 1H, H-12), 4.11 (m, 2H, COOCH 2), 1.96 (t, J = 9.3 Hz, 3H, COOCH 2CH 3), 1.77 (t, J = 7.2 Hz, 1H, H-18), 1.53, 1.25, 1.07 (s, 9H, CH 3 3), 1.01 (t, J = 6.5 Hz, 1H, H-5), 0.94 (s, 3H, CH 3), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-9), 0.85, 0.72, 0.61 (s, 9H, CH 3 3) III 2 δ 9.27 (s, 1H, Py-H), (m, 2H, Py-H), 7.45 (d, J = 7.0 Hz, 1H, Py-H), (m, 5H, Ph-H), 5.30 (m, 1H, H-12), 4.80 (s, 2H, PhCH 2), 1.85 (s, 3H, CH 3), 1.75 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-18), 1.64, 1.32, 1.16, (s, 9H, CH 3 3), 1.09 (t, J = 6.5 Hz, 1H, H-5), 1.01, 0.94 (s, 6H, CH 3 2), 0.86 (t, J = 7.3 Hz, 1H, H-9), 0.78 (s, 3H, CH 3) III 3 δ 9.25 (s, 1H, Py-H), (m, 2H, Py-H), 7.45 (d, J = 7.0 Hz, 1H, Py-H), 5.31 (t, 1H, J = 6.5 Hz, H-12), 4.97 (m, 1H, OCH(CH 3) 2), 1.96, 1.83 (d, J = 8.5 Hz, 6H, OCH(CH 3) 2), 1.77 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-18), 1.34, 1.20 (s, 6H, CH 3 2), 1.12, 1.10 (s, 6H, CH 3 2), 1.05 (t, J = 6.5 Hz, 1H, H-5), 0.96, 0.93 (s, 6H, CH 3 2), 0.85 (t, J = 7.5 Hz, 1H, H-9), 0.80 (s, 3H, CH 3) III 4 δ 9.24 (s, 1H, Py-H), (m, 2H, Py-H), 7.44 (t, J = 5.2 Hz, 1H, Py-H), 5.30 (m, 1H, H-12), 3.81 (d, J = 6.5 Hz, 2H, OCH 2CH(CH 3) 2), 1.87 (m, 1H, OCH 2CH(CH 3) 2), 1.79, 1.68 (d, J = 8.5 Hz, 6H, OCH(CH 3) 2), 1.60 (m, 1H, H-18), 1.31, 1.19, 1.10 (s, 9H, CH 3 3), 1.02 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-5), 0.98, 0.91 (s, 6H, CH 3 2), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-9), 0.83, 0.75 (s, 6H, CH 3 2) III 5 δ 9.24 (s, 1H, Py-H), (m, 2H, Py-H), 7.44 (t, J = 5.0 Hz, 1H, Py-H), 5.28 (s, 1H, H-12), 4.03 (t, J = 7.0 Hz, 2H, OCH 2(CH 2) 3CH 3), 1.92, 1.87, 1.70 (m, 6H, OCH 2(CH 2) 3CH 3), 1.68 (t, J = 8.0 Hz, 3H, O(CH 2) 4CH 3), 1.63 (m, 1H, H-18), 1.45, 1.30, 1.15, 1.07 (s, 12H, CH 3 4), 0.98 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-5), 0.89 (s, 3H, CH 3), 0.82 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-9), 0.73, 0.65 (s, 6H, CH 3 2) III 6 δ 9.25 (s, 1H, Py-H), (m, 3H, Py-H), (m, 3H, Ar-H), 5.38 (t, J = 6.5 Hz, H-12), 1.80 (t, J = 7.3 Hz, 1H, H-18),1.31, 1.20, 1.14 (s, 9H, CH 3 3), 1.10 (m, 1H, H-5), 0.98, 0.86 (s, 6H, CH 3 2), 0.82 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-9), 0.73, 0.69 (s, 6H, CH 3 2) III 7 δ 9.24 (s, 1H, Py-H), (m, 3H, Py-H), (m, 5H, Ar-H), 7.06 (br s, 1H, NH), 5.42 (s, 1H, H-12), 1.77 (t, J = 7.0 Hz, 1H, H-18), 1.28, 1.13, 0.06 (s, 9H, CH 3 3), 0.97 (t, J = 7.2 Hz, 1H, H-5), 0.93, 0.86 (s, 6H, CH 3 2), 0.80 (t, J = 6.5 Hz, 1H, H-9), 0.74, 0.66 (s, 6H, CH 3 2) 3 小结实验结果说明, 齐墩果酸 C-3 位羟基成酯所引入基团的结构与 C-28 位羧基所连接酯或胺的结构对抑制活性具有较大影响 C-12 位双键氧化水解引入羟基, 可能提高其抗肿瘤活性, 这对进一步开展齐墩果酸的结构改造和抗肿瘤活性研究具有一定的指导意义

4 472 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2015, 50 (4): Table 3 Inhibitory activity of the target compounds on the SGC7901, MCF-7 and A549 cells proliferation. *The concentration of the target compounds is mol L 1 and processtime is 72 h; nt: Not tested Compd. Inhibition rate*/% IC 50/μmol L 1 SGC7901 MCF-7 A549 SGC7901 MCF-7 A549 OA > I nt nt 17.2 I nt 7.95 >50 nt >50 I nt nt >50 II > II II III nt nt 42.7 nt nt III nt nt 36.1 nt nt III III 4 nt nt 39.5 nt nt 8.20 III 5 nt nt 49.7 nt nt 7.75 III 6 nt nt > III 7 nt nt > Gefitinib Doxorubicin 实验部分 Büchi B-540 熔点测定仪 ( 温度未校正 ); Bruker- ARX-500 型核磁共振分析仪, CDCl 3 为溶剂, TMS 为内标 ; 热电菲尼根 LCQ 型质谱仪 ; SPECTRA MAX plus 型酶标仪 ; XDS-1B 倒置显微镜 ; TGL-16B 低速台式离心机齐墩果酸 ( 质量分数 > 98%) 购于西安小草天然产物有限公司 ; 薄层色谱硅胶 GF254 (100~200 目, 青岛海洋化工厂 ), 显色剂为 10% 硫酸乙醇溶液 ; RPMI-1640 培养基 ( 含 10% 胎牛血清, 100 u ml 1 青霉素, 100 μg ml 1 链霉素 ) 溴化四氮唑盐 (MTT) 胰蛋白酶 (Trypsin) 和标准胎牛血清 (FBS) SGC7901 细胞 MCF-7 细胞和 A549 细胞由沈阳药科大学药理教研室提供所有试剂均为分析纯或化学纯 1 化学合成 1.1 3β, 12α, 13β- 三羟基 - 齐墩果烷 -28- 酸 (OA-2) 将 OA (100 mg, mmol) 与间氯过氧苯甲酸 (74.8 mg, mmol) 溶于 10 ml 二氯甲烷中, 室温搅拌过夜减压蒸除溶剂, 加入 10 ml 水, 用二氯甲烷萃取 (10 ml 2) 合并有机相, 用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤 2 次, 然后水洗至中性, 无水硫酸镁干燥, 减压蒸除溶剂, 得到白色固体将其溶于 10 ml 氯仿中, 加入 2 ml 浓盐酸, 室温搅拌 6 h 加入 10 ml 水, 用氯仿萃取 (10 ml 3), 合并有机相, 用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤 3 次, 然后水洗至中性, 无水硫酸镁干燥, 过滤, 加压蒸除溶剂粗品经柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 =5 1, 得到白色固体 68.1 mg, 产率 63.4%, mp 153.2~154.6 ; ESI-MS (m/z): [M+H] 氧代 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸 (OA-3) 参照文献 [15] 方法制备 3- 氧代 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸 (OA-3), 白色固体 90.5 mg, 产率 90.5%, mp 220.3~222.1 ; ESI-MS (m/z): [M+H] 肟基 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸 (OA-4) 参照文献 [15] 方法制备 3- 肟基 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸 (OA-4), 白色固体 88.1 mg, 产率 87.3%, mp 188.4~ ; ESI-MS (m/z): [M+H] [N- 烟酰氧基 ] 亚氨基 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸 (OA-5) 参照文献 [15] 方法通过烟酸 (163 mg, 1.32 mmol) 制备 3-[N- 烟酰氧基 ] 亚氨基 - 齐墩果烷型烯 -28- 羧酸 (OA-5), 白色粉末状固体 60.7 mg, 产率 62.1%, mp 144.6~146.6 ; ESI-MS (m/z): [M+H] O- 对氯苯甲酰 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 乙酯 (I 1 ) 将 OA (50.0 mg, mmol) 和无水碳酸钾 (30.0 mg, mmol) 加入到 5 ml DMF 中, 缓慢滴加 3 滴溴乙烷, 室温下反应, TLC 监测终点, 反应完毕后, 加入 5 ml 水, 用乙酸乙酯萃取 3 次, 合并有机相, 无水硫酸镁干燥, 减压蒸除溶剂得白色固体将其溶解于 5 ml 二氯甲烷溶液中, 加入少量 DMAP DCC 和对氯苯甲酸 (20 mg, mmol), 室温搅拌, TLC 监测反应终点, 反应完毕后, 浓缩得到粗品, 经硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (10 1), 得白色固体 40.7 mg, 产率 59.7%, mp 146.3~ O- 呋喃甲酰 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 乙酯 (I 2 ) 按照化合物 I 1 的合成方法, 与呋喃甲酸 (23 mg, mmol) 在室温条件下反应, 粗品经硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (12 1), 得白色固体 44.8 mg, 产率 70.7%, mp 172.6~ O- 呋喃甲酰 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 正丙酯 (I 3 ) 按照化合物 I 1 的合成方法, 将得到的呋喃甲酰化合物与溴代正丙烷在室温下反应, 粗品经硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (10 1), 得白色固体 36.5 mg, 产率 56.2%, mp 167.0~ β, 12α, 13β- 三羟基 - 齐墩果烷 -28- 正丁酯 (II 1 ) 将 OA-2 (100 mg, mmol) 和无水碳酸钾 (60 mg, mmol) 加入到 5 ml DMF 中, 缓慢滴加 3 滴溴正丁烷, 室温反应 5 h 浓缩, 加入 5 ml 水, 用乙酸乙酯萃取 (4 ml 3), 合并有机相, 饱和 NaCl 水洗 3 次, 无水硫酸镁干燥, 抽滤, 减压蒸除溶剂, 粗品经硅

5 孟艳秋等 : 齐墩果酸衍生物的合成及抗肿瘤活性研究 473 胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (7 1), 得白色晶体 58.7 mg, 产率 52.7%, mp 186.0~ β, 12α, 13β- 三羟基 - 齐墩果烷 -28- 正戊酯 (II 2 ) 按照制备 II 1 的方法, 由中间体 OA-2 (100 mg, mmol) 与 1 ml 溴正戊烷反应, 经硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (8 1), 得白色晶体 60.2 mg, 产率 52.7%, mp 146.6~ β, 12α, 13β- 三羟基 - 齐墩果烷 -28- 异戊酯 (II 3 ) 按照制备 II 1 的方法, 由中间体 OA-2 (100 mg, mmol) 与 1 ml 溴异戊烷反应, 经硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (6 1), 得白色晶体 59.8 mg, 产率 52.3%, mp 161.1~ (N- 烟酰氧基 ) 亚氨基 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸乙酯 (III 1 ) 将 OA-5 (100 mg, mmol) 和无水碳酸钾 (57.0 mg, mmol) 加入到 5 ml DMF 中, 缓慢滴加 3 滴溴乙烷, 室温反应 5 h 浓缩, 然后加入 5 ml 水, 用乙酸乙酯萃取 3 次, 合并有机相, 饱和 NaCl 水洗 3 次, 无水硫酸镁干燥, 抽滤, 浓缩, 得白色固体, 粗品用硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (7 1), 得白色粉末状固体 74.3 mg, 产率 72.5%, mp 80.6~ (N- 烟酰氧基 ) 亚氨基 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸苄酯 (III 2 ) 按照化合物 III 1 的合成方法, 由化合物 OA-5 (100 mg, mmol) 与溴化苄 (116 mg, mmol) 反应得到粗品, 用硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (7 1), 得白色粉末状固体 42.1 mg, 产率 37.2%, mp 83.7~ (N- 烟酰氧基 ) 亚氨基 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸异丙酯 (III 3 ) 按照化合物 III 1 的合成方法, 由化合物 OA-5 (100 mg, mmol) 与溴代异丙烷 (103 mg, mmol) 反应得到粗品, 用硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (7 1), 得白色粉末状固体 77.8 mg, 产率 74.2%, mp 90.8~ (N- 烟酰氧基 ) 亚氨基 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸异丁酯 (III 4 ) 按照化合物 III 1 的合成方法, 由化合物 OA-5 (100 mg, mmol) 与溴代异丁烷 (93.2 mg, mmol) 反应得到粗品, 用硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (7 1), 得白色粉末状固体 72.5 mg, 产率 67.6%, mp 84.1~ (N- 烟酰氧基 ) 亚氨基 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羧酸正戊酯 (III 5 ) 按照化合物 III 1 的合成方法, 由化合物 OA-5 (100 mg, mmol) 与溴代正戊烷 (103 mg, mmol) 反应得到粗品, 用硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (7 1), 得白色粉末状固体 77.9 mg, 产率 71.1%, mp 80.5~ N-[3-(N- 烟酰氧基 )- 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 羰基 ] 咪唑 (III 6 ) 将 OA-5 (100 mg, mmol) 溶解于 10 ml 二氯甲烷中, 加入适量草酰氯, 室温搅拌 20 h, 生成 3-(N- 烟酰氧基 ) 亚氨基 - 齐墩果烷型 -12- 烯 -28- 酰氯, 减压蒸除溶剂, 加入 2 ml 环己烷, 减压蒸除环己烷, 反复操作 2 次将得到的酰氯溶于 5 ml 二氯甲烷, 加三乙胺调 ph 9~10, 搅拌 5 min 后, 加入咪唑 (46.3 mg, mmol), 室温下反应, TLC 监测反应终点反应结束后, 减压蒸除溶剂, 然后加入 3 ml 水, 以 2 mol L 1 盐酸调 ph 3~4, 析出白色固体, 抽滤, 水洗滤饼至中性得白色固体, 粗品用硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (2 1), 得白色粉末状固体 68.7 mg, 产率 64.7%, mp 158.1~ N- 苯基 -3-(N- 烟酰氧基 ) 亚氨基 - 齐墩果烷型烯 -28- 酰胺 (III 7 ) 按照化合物 III 6 的合成方法, 由化合物 OA-5 (100 mg, mmol) 与苯胺 (63.3 mg, mmol) 反应得到粗品, 用硅胶柱色谱纯化, 洗脱剂为石油醚乙酸乙酯 (6 1), 得白色粉末状固体 27.1 mg, 产率 24.5%, mp 106.8~ 初步体外细胞毒活性测试以阿霉素和吉非替尼为阳性对照药, 采用 MTT 法对合成的目标化合物进行体外抗肿瘤活性测试, 所选用的肿瘤细胞为人胃癌细胞 (SGC7901) 人乳腺癌细胞 (MCF-7) 和人非小细胞肺癌细胞 (A549) 对数生长期肿瘤细胞培养于 96 孔培养板内, 每孔 100 μl ( 大约含个细胞 ), 置 37 5% CO 2 温箱中培养, 培养 24 h 后, 给药组加入含有浓度为 mol L 1 的测试物, 至少设 3 个平行孔, 阴性对照组加入与给药组等体积的溶剂, 并设只加培养基的空白对照组, 置 37 5% CO 2 温箱中培养, 48 h 后弃培养液, 每孔加入 MTT 溶液 (5 mg ml 1 ) 20 μl, 37 孵育 3 h, 弃上清液, 每孔加入 100 μl DMSO 溶解甲臜颗粒, 轻度振荡溶解在酶标仪波长 490 nm 条件下测定光密度值 (OD), 计算所测化合物对细胞的抑制率和 IC 50 值试验重复 3 次, 结果取平均值 References [1] Zhang SY, Li Z. Progress in oleanolic acid research [J]. Food Ferm Tech ( 食品与发酵科技 ), 2010, 46: [2] Ma XH, Zhao YC, Yin L, et al. Studies on the effect of oleanolic acid on experimental liver injury [J]. Acta Pharm Sin ( 药学学报 ), 1982, 17:

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Microsoft Word - 120333.doc 有机化学 DI: 10.6023/cjoc1108081 Chinese Journal of rganic Chemistry 新型一枝蒿酮酸异噁唑衍生物的合成及其抗 A, B 型流感病毒活性研究赵江瑜 a,b 阿吉艾克拜尔艾萨 *,a ( a 中国科学院新疆理化技术研究所干旱区植物