应用文章 气相色谱质谱联用仪 作者 Padmaja Prabhu PerkinElmer, Inc. Shelton, CT USA 五氟苄羟胺衍生静态顶空 GC/MS 法定量测定药物辅料中的甲醛 图 1 甲醛分子结构图 简介 虽然认为药物是惰性的, 但有研究表明药 物辅料与活性物质之间的相互作用仍

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1 应用文章 气相色谱质谱联用仪 作者 Padmaja Prabhu PerkinElmer, Inc. Shelton, CT USA 五氟苄羟胺衍生静态顶空 GC/MS 法定量测定药物辅料中的甲醛 图 1 甲醛分子结构图 简介 虽然认为药物是惰性的, 但有研究表明药 物辅料与活性物质之间的相互作用仍明显 的影响了药品的安全和效用, 因此人们了 解最终药物剂量中辅料和活性成分 (API) 之间相互作用的意识不断加强 主要关注 领域之一是辅料中的杂质与药物分子之间 潜在化学反应导致反应物的产生, 即使痕 量的反应杂质也能够引起药物明显的稳定性问题, 因为就重 量和摩尔质量而言, 辅料远超过 API 痕量的反应产物也很 容易超过多数药品关于降解产物低于.2 的限量要求 辅 料中的甲醛能够与药品降解产物中的初级和 / 或二级胺基团 形成聚合物 也有报道指出, 甲醛能够导致胶囊凝胶键合, 从而引起药物体外分解的不利效果 由于醛类物质极高的活 性, 在药物的配方设计过程中, 及时评估辅料中醛类物质的 存在, 对避免后续药物研发过程发生无法预料的稳定性问题 至关重要

2 本应用文献建立了辅料中甲醛定量测定方法, 为药物配方的设计提供了独特的见解 本文基于 PFBHA 的衍生, 使用静态顶空气相色谱 (SHS-GC) 电子轰击 (EI) 质谱联用仪, 采用全扫描和选择离子扫描 (SIM) 同时监测 该方法可用于筛查辅料中的甲醛 甲醛是无色具有刺激性气味的气体 ( 图 1), 具有挥发性, 分子量为 3amu, 沸点低 ((-21 ) 由于甲醛的易挥发性, 各种基体样品中的甲醛可采用顶空方法很容易的测定, 且准确度高 表 1 GC 分析条件仪器 PE Clarus 68 气相色谱仪分析色谱柱 PE Elite -5 MS (3 m,.25 mm 内径,.25 μm 膜厚 ) 气体流速 1.2mL/min,He 恒流模式进样口温度 19 分流比 5:1 炉温 5 保持 3min,7 /min 到 15 保持 5min,4 /min 升至 28 保持 5min, 运行时间为 2min 试验本应用文献使用 PerkinElmer Clarus 68 气相色谱仪, Clarus 质谱仪和 TurboMatrix 顶空 4 系统 表 1,2,3 提供了 GC/MS 顶空的仪器操作参数, 仪器的联接 数据分析和报告由 PerkinElmer TurboMatrix 数据系统完成 储备溶液 : 称取 2mg 的甲醛置于 ml 的容量瓶中, 用瓶装水定容至刻度, 制备 2µg/mL 的甲醛储备溶液 溶液 A: 取 5mL 的储备溶液用瓶装水稀释至 ml, 得到浓度为 1µg/mL 的溶液 溶液 B:5mL 的溶液 A 用瓶装水稀释至 ml, 得到浓度为.5µg/mL 的溶液 内标物质 (I.S.): 称取 5mg 环己酮于 5mL 的容量瓶中, 用瓶装水稀释至刻度, 得到浓度 µg/ml 的溶液 取 1mL 的 µg/ml 的环己酮溶液用瓶装水稀释至 25mL 后, 再移取 2mL 用瓶装水稀释至 ml 该 I.S. 溶液用于稀释校准溶液和制备样品溶液 PFBHA 溶液 :mgpfbha 使用瓶装水溶解, 并且分别移取 1mL 与顶空瓶中, 用于衍生样品和标准溶液中的甲醛 校准曲线 : 改变移取.5µg/mL 甲醛溶液 ( 溶液 B) 的体积, 用瓶装水稀释, 得校准溶液, 见表 4 所示 每一个样品瓶中加入 1mL 的 PFBHA 衍生, 然后在每个样品瓶中加入 1g 的 NaCl, 降低甲醛和水的混溶性, 并增加顶空的平衡 表 2 HS 分析条件 仪器 TurboMatrix HS-4 温度 加热器 6 针 传输线 13 时间 进样.2min 加压.5min Withdrawal.2 min 平衡 2min 循环 2min Options 顶空瓶放空 ON 振摇 ON 操作模式 Constant 进样模式 Hi psi injection ON PPC 进样 25psi 柱 / 顶空压力 25psi 表 3 MS 条件 仪器 PE Clarus 质谱仪 离子源温度 2 传输线温度 2 扫描范围 m/z4-38 SIM 模式 : 监测离子 178,181,197 扫描时间 7.5-3min 倍增电压 55 2

3 表 4 校准曲线的浓度梯度 校准梯度 甲醛浓度 ppb 加入标准溶液的体积 ml 最终体积 ml 1 1 2( 溶液 B) 2 2 4( 溶液 B) 3 3.6( 溶液 A) 4 4.8( 溶液 A) ( 溶液 A) 每个顶空瓶中加入 1gNaCl Figure 图 2 甲醛校准曲线 2. Calibration curve for formaldehyde : SIR of 4 Channels EI+ 1.38e PFBOA m/z e e7 Fragments for formaldehyde m/z Figure 图 3 甲醛标准品色谱及质谱图 3. Example chromatogram and MS spectrum for formaldehyde in standard. 3

4 校准 : 以浓度范围为 1.-5ppb 的甲醛作为校准溶液, 每个校准点运行 3 次, 以计算系统精密度 甲醛校准曲线见图 2, 甲醛线性相关系数的平方为.998 在线性范围内, 方法精密度很好, 相对标准偏差见表 5 所示 标准溶液的分析色谱图见图 3 所示, 保留时间 8.41min 的化合物是甲醛肟, 未反应的 PFBOA 出峰时间为 1.82min 结果与讨论应用文献建立的 SHS-GC/MS 法可用于测定 6 种普通的药物辅料样品, 有报道指出该 6 种辅料中含有醛类物质 检测结果显示,PEG-4 中含有最高浓度的甲醛, 为 3.5ppm 表 7 为样品测定结果, 样品分析的代表色谱和质谱图见图 4 所示 表 5 3 个线性点的 RSD 甲醛浓度 ppb 峰面积比平均数 (n=3) RSD 试验采用 5ppb 的标准溶液测定方法精密度, 该方法的检 测限约为 5ppb,RSD19.3 表 7 药物辅料测定结果 样品 样品 测定甲醛的 回收率 序号 名称 含量 (ppm) 1 Plasdone Pregelatinised starch Povidone PEG Microcrystalline cellulose (MCC) 6 Lactose monohydrate 样品制备 从当地的制药公司 (Getz Pharma, India) 获得 Plasdone, pregelatinised starch, povidone, polyethlene glycol (PEG- 4), microcrystalline cellulose 和 lactose 样品 顶空样品制备非常简单, 分别称取上述样品各 (.5g-2g) 于不同的顶空瓶中, 再分别加入 1mL 的 I.S. 溶液,1gNaCl 和 1mLPFBOA 溶液 样品瓶在顶空条件下加热并分析 所有的样品现用现配, 并立刻进行分析 方法确认通过 1,2,3ppb 三个浓度水平的加标来测定该方法的回收率 回收率值见表 6 所示, 结果表明顶空技术可定量的分析溶液基质中的甲醛 表 6 方法确证试验总结线性 : 1.ppb-5ppb 甲醛 RSD: 1ppb 为 9.23 检测限 : 5.ppb 定量限 : 1.ppb 回收率试验 : 3 个浓度水平为 8-12 在选择辅料中低分子量甲醛的分析技术之前, 已经考虑到了方法灵敏度 ( 检测限 ) 的目标水平, 该灵敏度与辅料的反应有关 由于醛类化合物种类及与之反应药品之间的确切关系未知, 并且两者在药物配方中的具体关系未知, 所以假定希望检测限是非常好糟糕的事情 在药品配方中辅料和 API 的重量比超过 :1 是不寻常的, 对分子质量为 5 的小分子 API, 辅料中醛类物质的含量为 1µg/g 就可导致甲醛产物的含量超过 ICH 指南.2 的最低限量值 因此辅料中低分子量的醛类物质总量为 1µg/g 作为阈值是合理的 PFBHA 衍生的一个主要优势是可以在溶液中完成, 符合顶空分析的要求, 且使用水作为基质通常具有非常干净的背景 4

5 8.42 3: SIR of 4 Channels EI+ 5.59e6 结论该应用文献建立了使用 SHS-GC/MS 简单有效分析药物辅料中甲醛的方法, 方法快速 可靠, 可用于分析大多数常规药用辅料中低分子量的 醛类物质的定量分析 在 1-5ppb 浓度范围内 甲醛具有很好的线性 该方法使用从当地药厂 获得的一些实际样品进行确证, 加标回收率在 8-12 之间 通过 GC 和 MS 联用, 甲醛肟不 仅通过保留时间匹配进行鉴定, 且通过质谱棒 PFBOA m/z 213 图的谱库搜索确证 参考文献 1. Excipient Toxicity and Safety, M.L. Weiner, L.A. Kotkoskie, Marcel Dekker, New York, e7 2. Journal of Chromatography, Volume A 114, Issues 1-2, Pages (February 26), Detection and Quantification of Low-molecular Weight Aldehydes in Pharmaceutical Excipients by Headspace Gas Chromatography, Zhong Li, Laura K. Jacobus, W. Peter Wuelfing, Mary Golden, Gregory P. Martin and Robert A. Reed. 3. ICH Harmonized Tripartite Guidelines, Q3B, Impurities in New Drug Products m/z 图 4 样品色谱及质谱图 PerkinElmer, Inc. 珀金埃尔默仪器 ( 上海 ) 有限公司地址 : 上海张江高科园区李冰路 67 弄 4 号邮编 : 2123 电话 : 或 传真 : 要获取全球办事处的完整列表, 请访问 版权所有 212, PerkinElmer, Inc. 保留所有权利 PerkinElmer 是 PerkinElmer, Inc. 的注册商标 其它所有商标均为其各自持有者或所有者的财产 14A_1_CN

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