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1 第 39 卷第 5 期 2018 年 9 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) JunaX anjangunvy ( MdaSn) V.39N.5 Sp.2018 基础研究 mr-134-3p 通过靶向调节 ADAM9/EGR/AKT 抑制结肠癌细胞的活性和迁移 付立芳 1, 孙杰 2 ( 临沂市中医医院, 山东临沂 ; 山东医学高等专科学校中医学教研室, 山东临沂 ) 摘要 : 目的探究 mr-134-3p 是否通过靶向调控 ADAM9/EGR/AKT 通路影响结肠癌细胞的存活和迁移 方法实时定量 PCR 检测正常结肠上皮细胞 NCM460 和结肠癌细胞 SW480,HCT6 和 RKO 中 mr-134-3p 的表达, Wn 免疫印迹检测上述细胞中 ADAM9 EGR 和 AKT 的蛋白表达 ;mr-134-3p mm/mr-134-3p 转染 SW480 细胞后,CCK-8 试剂盒 流式细胞术和 Tanw 迁移分析法分别用来检测各组细胞的增殖 凋亡 迁移能力 ;Wn 免疫印迹检测各组细胞 ADAM9/EGR/AKT 通路蛋白表达和其磷酸化水平 ; 荧光素酶报告分析实验用于验证 mr-134-3p 和 ADAM9 的靶向关系 结果与 NCM460 细胞系相比,mR-134-3p 在 3 种人结肠癌细胞系中低表达, 差异具有统计学意义 (P <05), 而 ADAM9 EGR 和 AKT 在结肠癌细胞系中表达升高 2~3 倍 (P < 05) mr-134-3pmm 转染后 SW480 细胞的增殖能力降低, 迁移细胞数目减少 mr-134-3pmm 转染后细胞凋亡率升高至 (15.0±1)%, 与对照组 (9.0±7)% 相比差异有统计学意义 (P<05) 与对照组相比,mR-134-3pmm 转染后 ADAM9 p-egr/egr 和 p-akt/akt 的水平降低, 差异均具有统计学意义 (P<05) 荧光素酶报告实验证实 mr-134-3p 可靶向结合 ADAM9 mrna 而抑制其表达 ; 而 SW480 细胞转染 mr-134-3p 则与 mr-134-3pmm 作用相反 结论 mr-134-3p 通过靶向调控 ADAM9 的表达而抑制 EGR/AKT 通路, 从而抑制结肠癌细胞的存活和迁移 关键词 : 结肠癌 ;mr-134-3p; 金属蛋白酶解离素 9; 细胞增殖 ; 凋亡 ; 迁移中图分类号 :Q291;R34 文献标志码 :A DOI:17652/jdyx mr-134-3phavyandmgannan hughagngadam9/egr/aktpahway U L-ang 1,SUNJ 2 (ChnMdnHpaLnyCy,Lny276000; DpamnTadnaChnMdn,ShandngMdaCg,Lny276000,Chna) ABSTRACT:Ojv TxpwhhmR-134-3pguahuvvaand mgannan hughagngadam9/egr/aktpahway.mhd Ra-mqPCRwauddnghmR pxpnnmanpha (NCM460)andnan(SW480,HCT6andRKO). Manwh,WnwaudmaunghpnxpnADAM9,EGRandAKT. Suquny, wandwhmr-134-3pmm/mr-134-3p,pan,appand mganwxamndycck-8k,wymyandtanwmganaay,pvy.nx,h pnxpnandphphyanadam9,egrandakt wmaudvauahavan ADAM9/EGR/AKT pahway.nay, hanhp wn mr-134-3p and ADAM9 wavd wh uaaay.ru MR-134-3pwagnanydwn-guadhnanmpad hnmanphancm460(p<05).inna,hxpnadam9,egrandakt nady2-3dnanmpad wh NCM460 (P<05).Thpanapay SW480dadandhunmgaddudamR-134-3pmmann.Capp 收稿日期 : 修回日期 : 基金项目 : 山东省教育厅课题资助项目 (N.J13LK56); 山东省临沂市科技发展计划项目 (N ) SuppdyhPjShandngPvnaEduanDpamn(N.J13LK56)andSnandThngyDvpmn PjLnyCy ( N ) 通信作者 : 孙杰, 讲师.E-ma: jund@16m 优先出版 :hp :// kn.nk.n/km/da/61399.r hm( ) hp://yxx.xju.du.n

2 654 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 39 卷 pnagvad (15.0±1)%,whhwagnanyhghhaahn(9.0±7)% (P< 05).Inaddn,hwaagnandanADAM9, p-egr /EGRandp-AKT/AKTmpadwh hn(p<05).luaaaynmdhamr-134-3pudndadam9 mrnaupp xpn.hwv,mr-134-3phwdhppaganmr-134-3p mmannn SW480.Cnun mr-134-3pduvvaand mgannanhughagng ADAM9andhuqunEGR/AKTgnang. KEY WORDS: nan ;mr-134-3p ; ADAM9;pan;app;mgan 结肠癌是一种常见的严重威胁全人类健康的消化道肿瘤 在我国, 结肠癌的发病率和死亡率分别位居癌症的第五位和第三位, 且呈逐年上升的趋势 金属蛋白酶解离素 9(adngnandmapa 9,ADAM9) 是一类膜锚定的金属蛋白酶家族成员, 广泛参与了细胞的信号转导过程 有研究发现,AD- AM9 通过活化表皮生长因子受体 (pdmagwh ap,egr)/ 蛋白激酶 B(pnkna B,AKT) 通路而极大地促进食管鳞癌细胞的生长和 [1] 存活 在结肠癌相关的研究中,ADAM9 过表达不 [2-3] 仅能促进癌细胞的侵袭, 也能增加其耐药性, 由此看来,ADAM9 很可能是治疗结肠癌发生发展的一个潜在靶基因 mrna 是一类内源性的非编码小 RNA, 能通过抑制某些特定靶基因的表达进而调控癌症的发生发展, 例如,mR-6 通过靶向调控 ADAM9 抑制胰 [4] 腺癌细胞的迁移和侵袭 最近的一项研究发现, 由 mr-134 前体 3' 臂剪切产生的 mr-134-3p 具有抑制 [5] 卵巢癌干细胞增殖分化的功能 全基因组筛选鉴定发现 mr-134 通过靶向整合素 β1(ngnβ1) 抑 [6] 制肝癌细胞的远端转移 尽管已知 mr-134 的表 [7] 达在结直肠癌组织和细胞系中明显下调, 并与肿瘤的转移和生长相关, 但其具体作用机制尚不明确 本文通过检测 mr-134-3p 对结肠癌细胞存活和迁移的作用, 进一步调查 mr-134-3p 和 ADAM9 之间的靶向关系, 以期为结肠癌的治疗提供潜在药物靶点和相关理论支持 1 材料与方法 1 材料结肠癌细胞系 SW480 由第四军医大学细胞工程中心提供 ; 结肠癌细胞系 HCT6 RKO 和正常结肠上皮细胞系 NCM460 购自上海生命科学研究院细胞资源中心 ;RPMI1640 培养基和胎牛血清均购自美国 G 公司 ; 青 / 链霉素购自沃尔森生物有限公司 ; 小鼠抗人 ADAM9 抗体购自美国 RD 公司 ; 兔抗人 EGR 和 p-egr 抗体购自美国 Epm 公司 ; 人抗兔 AKT 和 p-akt(s473) 抗体购自美国 CSgnang 公司 ; 兔抗小鼠 β-an 抗体 HRP 标记的羊抗兔二抗购自武汉博士德公司 ;CCK-8 增殖检测试剂盒和荧光素酶报告基因检测试剂盒购自 Sgma 公司 ; 实时定量 RT-PCR 试剂盒购自日本 TaKaRa 公司 ;PCR 引物由广州锐博生物有限公司设计并合成 ; 蛋白质提取试剂盒和 ECL 发光液等购自 Mp 公司 ; 脂质体 3000 转染试剂购自美国 Invgn 公司 2 方法 1 细胞培养取出冻存的 SW480 HCT6 RKO 和 NCM460 细胞, 复苏后培养于含 0mL/L 胎牛血清 青霉素和链霉素 ( 各 0μg/L) 的 RPMI 1640 培养基中, 在 50mL/LCO 2 37 饱和湿度下经 5g/L 胰酶传代培养, 每 2~3d 传代 1 次 待细胞长势良好时, 取对数生长期的细胞用于分子生物学检测或细胞转染 2 实时定量 RT-PCR 检测基因 mrna 的表达 Tz 裂解细胞后提取细胞内总 RNA, 经 RNA 反转录试剂盒 (mna) 将提取的 RNA 反转录得到 DNA, 最后采用 SYBR 荧光定量试剂盒在荧光定量 PCR 仪上扩增来检测各基因 mrna 的表达情况 反应条件为 : 90 预变性 mn, 按照 95 变性 25,60 退火 30, 72 延伸 30 的循环扩增 40 次 以 GAPDH 为内参 3 Wn 免疫印迹检测蛋白表达 RIPA 裂解液 ( 美国 Thm 公司 ) 裂解细胞后提取细胞内总蛋白, 吸取 40μg 蛋白样品测定蛋白浓度, 然后用 % SDS-PAGE 按分子质量大小分离蛋白质 切胶, 将目的蛋白转至 PVD 膜上 用含 50g/L 脱脂奶粉的 TBST 室温下封闭目的蛋白 5h, 再用 ADAM9 EGR p-egr AKT 或 p-akt 抗体于 4 下过夜孵育 用 HRP 标记的山羊抗兔 IgG 室温孵育目的蛋白 1h 加 ECL 发光液显影后分析蛋白条带的灰度值 4 细胞转染对数期的细胞以 1 5 密度接种于 6 孔板, 待细胞达 80% 以上融合后, 采用脂质体 3000 孵育细胞 48h 将 50nm/L mr-134-3pmm 或 mr-134-3p 转染到 SW480 细胞 细胞分组为 :Cn mmnc mr-134-3p mm INC mr-134-3p 5 流式细胞术检测细胞凋亡离心收集转染后 hp://yxx.xju.du.n

3 5 期付立芳, 孙杰.mR-134-3p 通过靶向调节 ADAM9/EGR/AKT 抑制结肠癌细胞的活性和迁移 655 的各组细胞,PBS 清洗 按试剂盒说明于 2~8 避光条件下加入 5μL Annxn V-ITC, 孵育 15mn 后, 于相同条件下加入 μlpi 孵育 5mn 最后, 在流式细胞仪上检测各组细胞的凋亡情况 6 CCK-8 检测细胞增殖在 mr-134-3p mm 或 mr-134-3p 转染细胞 h 后, 每组分别加入 μlcck-8 试剂于 37 50mL/L CO 2 的培养箱内孵育 1h 随后测定各组细胞在 450nm 处的 A 值, 进而绘制细胞生长曲线 7 Tanw 检测细胞迁移转染后的细胞以 2 4 密度接种于 Tanw 小室表面, 上层小室含 Mag 基质胶 细胞于 37 下孵育 48h, 取出上层小室, 将穿过膜的细胞收集于 ml/l 的多聚甲醛溶液, 用 2mL/L 的结晶紫溶液染色 15mn 显微镜下进行细胞计数 8 荧光素酶报告实验 PCR 扩增 ADAM9-3' UTR-WT 和 ADAM9-3'UTR-MUT 序列, 将扩增后的序列分别转入重组质粒 phk-2 中 ; 构建好的重组质粒分别与 mr-134-3pmm 或 mr-134-3p 共同转染细胞,72h 后收集细胞, 严格按照 LuaRpGnAayK 说明书操作实验 最后通过发光化学仪检测萤火虫和海肾荧光比值 3 统计学分析采用 SPSS19.0 进行统计分析, 连续变量以均值 ± 标准差 ( x± ) 表示, 两组间比较采用 检验, 多组间比较用单因素方差分析 (OnwayANOVA), 两两比较采用 LSD- 检验或 Gam- Hw 检验 ; 不同转染组之间 SW480 结肠癌细胞增殖活力随时间变化的比较, 采用重复测量的单因素方差分析 P<05 为差异有统计学意义 2 结果 1 mr-134-3p 在人结肠癌细胞系中低表达, 而 ADAM9 高表达收集人结肠癌细胞系 SW480 HCT6 RKO 和正常结肠上皮细胞系 NCM460 细胞, 实时定量 PCR 检测了各细胞内 mr-134-3p 的表达 单因素方差分析显示 :mr-134-3p 的表达在不同细胞系之间差异具有统计学意义 (=4.241,P= 002) 与 NCM460 细胞相比,mR-134-3p 在 SW480 HCT6 和 RKO 癌细胞中表达水平均显著下调 (P<05), 且在 SW480 细胞中下调最为明显 ( 图 1A, 表 1) Wn 免疫印迹发现 ADAM9 EGR 和 AKT 的蛋白表达在不同细胞系之间存在显著差异, 与正常 NCM460 细胞相比,3 种蛋白在结肠癌细胞系中均明显上调 (P<05, 图 1B C 表 2) 这些结果表明 mr-134-3p 和 ADAM9/EGR/AKT 可能参与了结肠癌的发病机制 图 1 mr-134-3p 和 ADAM9/EGR/AKT 在人结肠癌细胞系中的表达 g.1expnmr-134-3pandadam9/egr/aktnann A:mR-134-3p 在人结肠癌细胞系中低表达 ;B~C:ADAM9/EGR/AKT 在人结肠癌细胞系中高表达 与 NCM460 组相比, P<05 表 1 mr-134-3p 在各细胞系中的表达 Ta.1 mr-134-3pvnnmaandan ( x± ) 细胞系 相对表达 NCM460 00±04 SW480 43±05 HCT6 55±06 RKO 64± P 002 与 NCM460 细胞相比, P<05 表 2 ADAM9/EGR/AKT 在各细胞系中的表达 Ta.2 ExpnADAM9/EGR/AKTnnmaand an ( x± ) 细胞系 ADAM9 EGR AKT NCM460 00±18 00±24 00±35 SW480 62±31 02±28 54±24 HCT6 75±26 63±31 81±19 RKO ±30 31±22 23± P 与 NCM460 细胞相比, P<05 hp://yxx.xju.du.n

4 656 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 39 卷 2 mr-134-3p 抑制结肠癌细胞的存活由于 mr-134-3p 和 ADAM9 在 SW480 细胞中的变化最为显著, 接下来的探究实验在 SW480 细胞中进行 用 mr-134-3p mm 或 mr-134-3p 转染 SW480 细胞以上调或抑制 mr-134-3p 的水平 各组细胞凋亡率差异具有统计学意义 (=6.3,P= 001) 流式细胞术检测结果显示: 对照组细胞凋亡率为 (9.0±7)%,mR-134-3p mm 转染后细胞凋亡率升高至 (15.0±1)%, 而 mr-134-3p 转染组细胞凋亡率为 (5.9±2)%, 与对照组相 比, 差异均有统计学意义 ( 图 2A B, 表 3) 另外, 我们用 CCK-8 试剂盒检测了各转染组细胞不同时间点 ( h) 的增殖情况, 重复测量方差分析结果显示 :1 不同时点间的细胞增殖率差异有统计学意义 (=4.261,P =005);2 不同组间细胞增殖能力差异有统计学意义 ( =4.562,P =014);3 不同转染组和观察时间之间存在交互作用 (=508, P=0, 图 2C, 表 4) 由此可见,mR-134-3p 能抑制结肠癌细胞的存活 图 2 mr-134-3p 抑制结肠癌细胞的存活 g.2mr-134-3pduvva A: 流式细胞术检测细胞凋亡 ;B:mR-134-3p 抑制了凋亡细胞的百分比 ;C:CCK-8 检测细胞增殖 与对照组相比, P<05 表 3 mr-134-3p 表达水平对结肠癌细胞凋亡的影响 Ta.3 EmR-134-3pxpnnappn an ( x± ) 相对表达 Cn 9.0±7 MmNC 9.8±0 mr-134-3pmm 15.0±1 INC ±2 mr-134-3p 5.9±2 6.3 P 001 与对照组相比, P<05 3 mr-134-3p 抑制了 SW480 细胞的迁移 Tanw 小室迁移实验结果显示,mR-134-3p mm 或 mr-134-3p 转染了 SW480 细胞 48h 后,mR-134-3pmm 组的穿膜细胞数最少, 而 mr p 组的穿膜细胞数最多, 这一结果表明 mr-134-3p 能抑制 SW480 细胞的迁移 ( 图 3) 4 mr-134-3p 抑制了 ADAM9/EGR/AKT 通路的活化为了探讨 mr-134-3p 是否通过抑制 AD- AM9/EGR/AKT 通路的活化从而进一步抑制癌细胞的存活和迁移,mR-134-3p mm 或 mr-134-3p 转染了细胞后, 我们检测了各组细胞内 mr-134-3p 和 ADAM9 的表达以及 p-egr/egr 和 p-akt/akt 水平 实时定量 PCR 检测到 mr p 表达在 mr-134-3p mm 组显著上调, 而在 mr-134-3p 组显著下调, 这一结果表明 mr pmm 与 mr-134-3p 在 SW480 细胞中成功转染 ( 表 5) Wn 免疫印迹结果显示, 不同转染组之间 ADAM9 p-egr/egr 和 p-akt/akt 的水平差异具有统计学意义 (=756,P=033; hp://yxx.xju.du.n

5 5期 付立芳,孙 杰.mR134 3p 通过靶向调节 ADAM9/EGR/AKT 抑制结肠癌细胞的活性和迁移 =4. 578, P= 015; = 269, P = 045) 与 对 照 组相 比,mR134 3p mm 转 染 后 ADAM9 -EGp 657 显著升高( P < 05,图 4 表 6) 因 此,mR134 3p 通过抑制 ADAM9/EGR/AKT 通 路 的 活 化 抑 制 了 R/EGR 和 p -AKT/AKT 的 水 平 降 低,而 转 染 mr134 3p 之后, 3 种蛋白质的表达水平均 癌细胞的存活和迁移 表 4 mr134 3p 表达水平对结肠癌细胞增殖的影响 ±) ( x Ta. 4 E mr134 3pxp nnp a n n an mr134 2p mm I NC 63± 80± mr134 3p 时间( h) Cn Mm NC 0 48± 46± 45± 50± 06 49± ± 30± 79± 14 15± 87± ± 72 81± 96 15± 90± 60± 88± 13 00± 08 27± 47± 02± 17 50± 16 80± 83± 17 图 3 mr134 3p 抑制结肠癌细胞的迁移 3 mr134 3p d m a n g. g 图 4 mr134 3p 抑制了 ADAM9/EGR/AKT 通路的活化 4 mr134 3p da va n ADAM9/EGR/AKT pa hway g. A:实时定量 PCR 检测细胞中 m R 134 3p mrna 的表达; B:W n 免疫印迹检 测 细 胞 中 ADAM9/EGR/AKT 通 路 的 蛋 白 表 达; C: ADAM9 蛋白的相对表达量; D: -EGR/EGR 的相对表达量; E: -AKT/AKT 的相对表达量 与对照组相比, P< 05 p p mr134 3p 表 达 水 平 对 结 肠 癌 细 胞 ADAM9/EGR/ 表 5 m R pmm 和 转染后其表达水平的变化 表6 Ta. 5 Chang mr134 3pxp na an n ( w h mm x±) AKT 通路活化的影响 相对表达水平 Cn 00± 19 mr134 3p mm 4. ± 34 Mm NC I NC mr134 3p P 与对照组相比, P < 05 92± 28 17± 22 34± Ta. 6 E mr134 3pxp nna va n AD / / ( AM9 EGR AKT ng n n an x±) gna n 00± 19 p-egr/egr 00± 16 mr-134-3p mm 54± 14 93± 20 44± 96± 13 ADAM9 MmNC 87± 17 I NC mr-134-3p P 20± 与对照组相比, P < 05 //yxx. h x u. du. n p: j 92± 30± p-akt/akt 00± 19 66± 20 98± 22 07± 24 80±

6 658 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 39 卷 5 ADAM9 是 mr-134-3p 的靶基因 TagSan 靶基因预测软件结果显示,ADAM9 mrna 的 3' UTR 区域能与 mr-134-3p 的种子序列靶向结合, 我们进一步合成了 ADAM9 mrna 的 3'UTR 序列和其突变的序列 ( 图 5A 表 7), 并将其分别克隆到荧光素酶报告基因后转染到 SW480 细胞 荧光素酶报告基因检测结果显示, 转入 mr-134-3pmm 后, 含野 生型 3'UTR 序列组的荧光素酶活性明显降低 (P<05), 而突变后 3'UTR 组的荧光素酶活性与对照组相比没有明显差异 ( 图 5B) 另外, 细胞过表达 mr-134-3p 后,ADAM9 mrna 的表达水平下降 (P< 05), 而抑制 mr-134-3p 后,ADAM9 mrna 的表达水平上升 (P<05, 图 5C 表 8) 图 5 ADAM9 是 mr-134-3p 的靶基因 g.5adam9aaggnmr-134-3p A: 突变型和野生型 ADAM9mRNA 的 3'UTR 区域与 mr-134-3p 的靶向结合位点 ;B: 荧光素酶报告显示的各组细胞荧光素酶活性强度 ;C:ADAM9mRNA 的相对表达量 与对照组相比, P<05 表 7 荧光素酶报告基因检测 mr-134-3p 与 ADAM9 基因的 靶向关系 Ta.7 Luapgnaayanayhag mr-134-3pnadam9 ( x± ) 分组 Cn mr-134-3pmm WT-UTR 00± 48± MUT-UTR 00± 87±08 与对照组相比, P<05 表 8 mr-134-3p 表达水平对结肠癌细胞 ADAM9mRNA 水 平的影响 Ta.8 EmR-134-3pxpnnADAM9 mrna vnnan ( x± ) 相对表达水平 Cn 00±13 MmNC 87±15 mr-134-3pmm 54± INC 93±16 mr-134-3p 20± P 021 与对照组相比, P<05 3 讨论尽管结肠癌的诊断和治疗技术逐渐走向成熟, 但由于肿瘤的局部复发和远端转移, 患者的 5 年生存率依然很低 因此, 结肠癌的发生发展机制仍是近年来的研究重点 目前, 已有不少研究发现 ADAM9 在多种恶性肿瘤组织中高表达, 包括非小细胞肺癌 胃癌 胰腺癌等 ADAM9 甚至被认为是肿瘤侵袭 转 [8-] 移及不良预后的候选标志基因之一 一项临床研究发现,ADAM9 能促进结肠癌的发病和血管生 [] 成 在体外,ADAM9 能通过激活 EGR 增强结 [3] 肠癌细胞的耐药性 本研究结果发现,ADAM9/ EGR/AKT 通路在结肠癌细胞中被显著激活, 当 ADAM9 表达被抑制后, 癌细胞的增殖和迁移能力降低, 细胞凋亡增加, 进一步表明 ADAM9 参与结肠癌的发生发展 近年来,mR-134-3p 的抑癌功能和作用机制不断被证实 在非小细胞肺癌中,mR-134 也能通过靶向抑制细胞周期素 D1(ynD1,CCND1) 的表达来 hp://yxx.xju.du.n

7 5 期付立芳, 孙杰.mR-134-3p 通过靶向调节 ADAM9/EGR/AKT 抑制结肠癌细胞的活性和迁移 659 [] 抑制癌细胞的存活 在三阴性乳腺癌细胞中, 胞外膜泡高表达的 mr-134 不仅抑制了癌细胞的迁移和侵袭能力, 而且增强了对 an-hp90 药物的敏感性, 这一研究结果表明,mR-134 可作为治疗乳腺癌 [13] 的潜在生物靶标 另外,mR-134 被发现在人骨肉瘤组织和细胞中低表达, 过表达的 mr-134 不仅抑制体外骨肉瘤细胞的增殖 侵袭 迁移和存活, 也能 [14] 抑制活体小鼠肿瘤的发生 在之前与结肠癌相关的研究中,mR-134 低表达被证实与肿瘤的大小以及 [7] 不良预后相关 本研究发现 mr-134-3p 能抑制结肠癌细胞的增殖 存活和迁移, 与这些研究结果一致, 这也进一步证实 mr-134-3p 能抑制结肠癌的发生发展 有文献报道,mR-134-3p 可通过靶向调控 EGR 程序性细胞死亡 7(pgammddah7,PDCD7) [15-16] 等基因的表达调控细胞增殖和存活, 但是 mr p 是否能够通过靶向 ADAM9 抑制癌细胞的存活仍不明确 我们通过生物信息学工具 TagSan 对 mr-134-3p 和 ADAM9 之间的靶向结合位点进行了预测, 发现 ADAM9 mrna 的 3'UTR 区域能与 mr p 的种子序列靶向结合 荧光素酶报告分析结果发现,mR-134-3p 引起野生型 3'UTR 序列组细胞的荧光素酶活性和 ADAM9 表达明显降低, 而对突变型 3' UTR 组没有明显影响, 这些结果证实了 ADAM9 是 mr-134-3p 的靶基因,mR-134-3p 正是通过靶向抑制 ADAM9/EGR/AKT 通路的活化抑制了结肠癌细胞的存活和迁移 本研究不仅为结肠癌的治疗提供了新的药物靶点, 同时也提示 mr-134-3p 具有较大的潜在研究和药用价值 参考文献 : [1]LIU R,GUJ,JIANGP,a.DNMT1-mRNA6pgnunuphagaquamuanma gwh va ADAM9-EGR-AKT gnang [ J].Cn Can R,2015,21(4):854. [2]LIJ,JIZ,QIAO C,a.OvxpnADAM9pmnannvan[J].JInvSug, 2013,26 (3):7-13 [3]U Q,CHENGJ,ZHANGJ,a.mR-20du5-Uanyuppngh ADAM9/EGRgnangpahway nnan[j].onrp, 2016,37(1):3-13 [4]SUGIMOTO K,KOORNNEE M.MR-6aaaum uppnpanaanvahguanad- AM9[J].MCanR,20,(1):3-1 [5]CUIC,LIU T,HUANG Y,a.MRNA-134-3panvpnahumanvaananm y agngrab27a[j].gn,2017,605:99-7. [6]ZHARP,ZHANG Z,QIU ZP,a.Gnm-wdnngdndhamR-134aaa maauppy agngngn β1n hpauaanma[j].pls On,2014,9(2): [7]XIE Y,SONG J,ZONG Q,a.Dadxpn MIR-134andnagnanumanaan [J].Hpaḡangy, 2015,62(139):615. [8]ZHANGJ,CHEN N,QIJ,a.HDGandADAM9anvmuaagngmak, pgnmakand pdvmakadjuvanhmhapynugay daginn-maungan[j].jcan R CnOn,2014,140(8): [9]KIMJM,JEUNG HC,RHASY,a.Thdngn-mapna ADAM9n gaan pgn [J].MCanThap, 2014,13(): []YAMADA D,OHUCHIDA K,MIZUMOTO K,a.InadxpnADAM 9andADAM 15 mrnanpanaan[j].ananr,2007,27(2): [] 施文, 李俊生. 结肠癌组织中 ADAM9 的表达及其与微血管密度的关系 [J]. 东南大学学报 ( 医学版 ),20,28(4): []SUN CC,LISJ,LIDJ.Ha-mR-134uppnn-ma ungan(nsclc)dvpmughdwn-guan CCND1 [J].Onag,2016,7(24):3596 [13]O'BRIENK,LOWRY MC,CORCORANC,a.mR-134n xauavdup-ngavaanaḡ gnandnadugnvy [ J].Onag,2015,6 (32): [14]ZHANG L,LVZ,XUJ,a.MRNA-134amaanggnandpanyagngh VEG- A/VEGR1pahway [ J].EBSJ,2018,285(7): [15]PENGSY,CHANG KW,LINSC,a.Aa181:mR- 134agpgammddah7 (PDCD7) gn mduahpahgnhadandnkanma [J].Can R,2015,75(15Suppmn):18 [16]QIN Q,WEI,ZHANGJ,a.mR-134nn-ma ungangwhyagnghpdmagwhap[j].jcmmd,2016,20(): ( 编辑张敏 ) hp://yxx.xju.du.n

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