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候蜂陆
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第 24 卷第 12 期 215 年 12 月中国普通外科杂志 Chinese Journal of General Surgery doi:1.3978/j.issn.15-6947.215.12.15 http://dx.doi.org/1.3978/j.issn.15-6947.215.12.15 Chinese Journal of General Surgery, 215, 24(12):1716 1721.

1 第 24 卷第 12 期 215 年 12 月中国普通外科杂志 Chinese Journal of General Surgery doi:1.3978/j.issn Chinese Journal of General Surgery, 215, 24(12): Vol.24 No.12 Dec. 215 基础研究 microrna-25 高表达与直肠癌细胞的侵袭和迁移的关系徐晓慧, 孙欣, 刘娜, 矫健, 李秋阳, 刘京平, 林方才 ( 首都医科大学电力教学医院普通外科, 北京 173) 摘要目的 : 探讨 microrna-25(mir-25) 在直肠癌细胞中的表达及作用方法 : 检测多种不同直肠癌细胞中 mir-25 的表达, 并检测直肠癌细胞转染 mir-25 前体 (pre-mir-25) 上调 mir-25 的表达或转染 mir-25 抑制剂 (anti-mir-25) 下调 mir-25 的表达后生物学行为的变化结果 : 与正常直肠黏膜组织比较, 不同的直肠癌细胞中 mir-25 的表达均不同程度的明显升高 ( 均 P<.5) 在 mir-25 表达水平相对较低的直肠癌 HR-834 细胞中转染 pre-mir-25, 在 mir-25 高表达的直肠癌细胞中转染 anti-mir-25 后, 两种细胞的增殖细胞周期凋亡无明改变 ( 均 P>.5), 但侵袭及迁移能力在 HR-834 细胞的明显增强, 细胞减弱 ( 均 P<.5) 结论 :mir-25 在直肠癌细胞中的表达升高, 且其升高程度与细胞的侵袭和迁移能力密切相关关键词直肠肿瘤 ; 微 RNAs; 肿瘤侵润中图分类号 :R735.3 Relations of high microrna-25 expression with migration and invasion of rectal carcinoma cells XU Xiaohui, SUN Xin, LIU Na, JIAO Jian, LI Qiuyang, LIU Jingping, LIN Fangcai (Department of General Surgery, Electric Power Hospital, Capital Medical University, Beijing 173, China) Abstract Key words Objective: To investigate microrna-25 (mir-25) expression in rectal carcinoma cells and its action. Methods: The mir-25 expressions in several different rectal cell lines were determined, and then the changes in biological behaviors in rectal cancer cells after up- or down-regulation of mir-25 expression with mir-25 precursor (pre-mir-25) or mir-25 inhibitor (anti-mir-25) transfection were examined. Results: Compared with normal rectal mucosal tissue, the mir-25 expressions in all tested rectal cancer cells were significantly increased with varying degrees (all P<.5). In rectal cancer HR-834 cells with relatively low mir-25 expression after pre-mir-25 transfection and in rectal cancer cells with high mir-25 expression after antimir-25 transfection, the proliferation, cell cycle and apoptosis showed no significant change (all P<.5), but the invasion and migration abilities in HR-834 cells were increased, and cells were decreased significantly (all P<.5). Conclusion: The mir-25 expression is elevated in rectal cancer cells, and its degree of increase is closely related to the invasion and migration abilities of rectal cancer cells. Rectal Neoplasms; MicroRNAs; Neoplasm Invasiveness CLC number: R735.3 收稿日期 : ; 修订日期 : 作者简介 : 徐晓慧, 首都医科大学电力教学医院副主任医师, 主要从事肿瘤学方面的研究通信作者 : 林方才, fc-lin@126.com 1716

2 第 12 期徐晓慧, 等 :microrna-25 高表达与直肠癌细胞的侵袭和迁移的关系 1717 直肠癌作为常见的恶性肿瘤, 危害着人们的健康, 术后的转移和复发是致死的主要原因, 研究肿瘤发生及转移的机制, 以期寻找新的可能的作用靶点, 具有重要的意义 microrna( 简称 mirna) 即非编码单链小分子 RNA(2~25 个碱基 ), 是一类分布广泛内源性的高度保守的小分子近些年研究发现, 异常表达的 mirna 可作为一类新的抑癌基因或癌基因, 在恶性肿瘤的发生发展过程中发挥作用 [1] mir-25 属于 mir- 16b-25 家族, 已证实在胃癌食管癌卵巢上皮癌等多种恶性肿瘤中均有高表达, 而且与患者的预后有关 [2-7] 本科室前期在直肠癌组织标本中的研究发现,miR-25 在直肠癌组织中表达增高, 而且其增高水平与淋巴结转移及临床分期有关 ; 同时发现 mir-25 在直肠癌前病变直肠腺瘤中就已经存在异常高表达 [8] 本研究拟通过改变直肠癌细胞中 mir-25 的表达水平, 进行细胞增殖细胞周期细胞凋亡细胞的侵袭及迁移实验, 观察 mir-25 表达水平的改变对细胞生物学功能的影响明确 mir-25 在直肠癌细胞中发挥的生物学作用, 为寻找可能作用的下游蛋白, 提供一个有力的实验支持 1 材料与方法 1.1 材料细胞株结直肠癌细胞系 SW- 837 HCT-8 SW-62 正常直肠黏膜组织用于 mir-25 表达水平的检测直肠癌细胞系 HR 用于细胞生物学研究主要试剂及仪器 Superscript II Reverse Transcriptase 1st strand cdna 试剂盒 (Fermantus 公司 ) mir-25 的 TaqMan MicroRNA Assay- PCR Primer 引物 pre-mir-25 anti-mir-25 pre-mir-nc 和 anti-mir-nc(ambion 公司 ) ABI75 型实时定量 PCR 仪进行检测 CCK-8( 同仁株式会社 ) Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒 ( 宝赛生物公司 ) Lipofectamine 2 TRIzol(Invitrogen 公司 ) 胎牛血清 (Hyclone 公司 ) 培养基和胰酶(Gibco 公司 ) Transwell 小室 (Corning 公司 ) 1.2 方法细胞培养与转染将用含 1%FBS 的 RPMI164 培养基, 将用含 1%FBS 的 L15 培养基, 于 37 5%CO 2 培养箱中培养 (L15 培养基不需要 CO 2, 要拧紧瓶盖培养 ) 对数生长期的细胞于转染前 1 d 接种到六孔板中, 用 Lipofectmine2 进行转染 5 μl Lipofectmine2 加入 25 μl 培养基 ( 不含血清 ); 同时, 将 12 μl 浓度为 5 nm 的 premir-25/anti-mir-25 及其相应的阴性对照试剂 pre-mir-nc/anti-mir-nc 分别加入另外 25 μl 培养基, 混匀, 室温放置 5 min 将两者温和混匀, 室温放置 2 min 然后将上述混合物轻轻加到培养细胞上, 转染分子的终浓度为 3 nmol/l 37 培养 24 h 后, 换正常培养液终止转染转染 48 h 后收集细胞 qrt-pcr 检测 mir-25 在细胞中的表达水平在无 RNA 酶 (RNase-free) 的环境下操作, 全部过程严格按照 TRIzol 试剂盒说明书进行总 RNA 的提取, 用 mir-25 的 TaqMan 反转引物进行反转录震荡混匀后按如下反应条件 : 冰上, 5 min;16,3 min;42,3 min;85, 5 min 所得产物使用 ABI75 型实时定量 PCR 仪, 采用 TaqMan 探针法进行 mir-25 表达水平的检测同时扩增 mir-25 和 RNU6B, 每个待测样品设 3 个复孔反应条件如下 :95,1min,(95, 15 s;6,3 s)4 个循环细胞增殖实验取转染后 24 h, 生长状态良好的细胞, 采用一般传代方法进行消化, 制成细胞悬液计数, 精确地将细胞种在 96 孔板中, 并设置对照, 每个孔的终体积为 1 μl 正常培养条件下培养 24 h 每孔加入 1 μl 的 CCK-8 溶液, 正常培养条件下着色 1.5 h 水平晃动约 1 s 后用酶标仪测量 45 nm 波长的 OD 值, 保存数据每天依此法测定, 共 4 d 以培养时间为横轴,OD 值为纵轴, 描绘在半对数坐标纸上, 连接成曲线后即成该细胞的生长曲线细胞周期测定取转染后 48 h, 对数生长期的细胞接种于六孔板待贴壁后, 用无血清培养基培养 12 h 以同步化细胞, 然后将无血清培养基换为 1% 胎牛血清的培养基继续培养 24 h 胰酶消化后, 用含血清的 PBS 悬浮细胞,4, 8 r/min, 离心 1 min 收集细胞, 加入.3 ml PBS, 混匀后, 再加.7 ml 无水乙醇,4 固定至少 24 h 将固定后的细胞用 PBS 洗 2 遍, 加入

3 1718 中国普通外科杂志第 24 卷 1 μl RNaseA(1 mg/ml),37 消化 3 min 加入.4 ml 5 μg/ml 的碘化丙啶 (PI), 避光染色 2 min 上流式细胞仪进行分析, 每份样品获取 1 4 以上细胞, 分析细胞周期中 G /G 1 期 S 期以及 G 2 /M 期所占的比例, 软件处理分析结果细胞凋亡实验取转染后 48 h, 对数生长期的细胞经胰酶消化, 用含血清的 PBS 悬浮细胞采用宝赛生物公司的 Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒先加 1 μl 结合缓冲液, 再加 5 μl AnnexinV-FITC 轻轻混匀, 室温避光孵育 15 min 加 5 μl PI 轻轻混匀, 放置冰上, 避光上流式细胞仪分析在双变量流式细胞仪的散点图上, 左下象限显示活细胞, 为 (FITC - /PI - ); 右上象限是非活细胞, 即坏死细胞, 为 (FITC + /PI + ); 而右下象限为凋亡细胞, 显现 (FITC + /PI - ) 细胞的迁移和侵袭细胞迁移实验 : 实验前将 Transwell 小室用无血清培养基平衡至少 1 h 将 Transwell 放入 24 孔板, 在下室中加入 6 μl 含 1% 血清的培养基作为趋化因子取转染后 24 h, 继之在无血清培养基中饥饿培养 1 d 的细胞, 消化后进行活细胞计数, 调整细胞浓度为 1~4 1 6 /ml, 每个 Transwell 小室中加入 1 μl 细胞悬液 ( 无血清培养基 ), 每组设 3 个平行样本, 置于孵箱中培养 2 h 后吸去上室液体, 用 PBS 湿润的棉签擦去膜上面未穿过聚碳酸酯膜小孔的细胞, 生理盐水漂洗.5% 甲醇结晶紫溶液染色 3 min, 流水冲洗 3~5 次用小刀片将聚碳酸酯膜小心切下, 置于载玻片上, 膜底面朝上, 滴树脂后用盖玻片封片,1 倍显微镜下随机计数 5 个视野的细胞数, 求均数, 进行统计学检验细胞的侵袭实验 : 与细胞迁移实验相似, 不同的是 Transwell 小室内加入 Matrigel 胶注意在铺胶之前将使用到的材料 ( 枪头 EP 管 Matrigel 胶 Transwell 小室和 24 孔板 ) 置于 4 过夜 1.3 统计学处理数据应用 SPSS 13. 软件分析系统, 采用 t 检验分别分析实验组和对照组之间的差异 P<.5 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 各细胞系 mir-25 的相对表达水平用 Taqman 探针法检测了 4 株结直肠癌细胞系 ( HCT-8 SW-62) 及一个正常直肠黏膜组织中的 mir-25 表达水平用 RNU6B 作为内参, 根据公式计算 mir-25 的相对表达水平,R'=2 - Ct, Ct=(Ct mir-25 -Ct U6B ), Ct= Ct 细胞系 - Ct 正常黏膜设定 mir-25 在正常直肠黏膜中的表达水平为 1 4 株结直肠癌细胞系对正常直肠黏膜的 mir-25 的相对表达量分别为 :(1.6±.24) 倍 (3.21±.45) 倍 HCT-8(2.14±.38) 倍 SW-62(1.85±.36) 倍, 与正常直肠黏膜组织比较,4 株结直肠癌细胞系 mir-25 的相对表达量均明显增高 ( 均 P<.5)( 图 1) mir-25 相对表达量正常直肠黏膜 SW-62 HCT-8 图 1 各细胞系 mir-25 的相对表达水平 Figure 1 Relative mir-25 expression levels in different cell lines 2.2 mir-25 表达水平与细胞增殖细胞周期及凋亡的关系在 mir-25 相对表达水平较低的直肠癌细胞系中, 转染 pre-mir-25, 调高细胞中 mir- 25 的表达水平, 转染 pre-mir-nc 作为阴性对照 ; 在 mir-25 相对表达水平较高的直肠癌细胞系 SW- 837 中, 转染 anti-mir-25 调低细胞中 mir-25 的表达水平, 转染 anti-mir-nc 作为对照结果显示, 两种细胞的增殖细胞周期及凋亡无明显变化 ( 均 P>.5)( 图 2) 2.3 mir-25 表达水平与细胞迁移和侵袭的关系在直肠癌细胞系中, 转染 premir-25, 调高细胞中 mir-25 的表达水平后, 细胞的迁移和侵袭能力增强 (P<.5); 在直肠癌细胞系中, 转染 anti-mir-25 调低细胞中 mir- 25 的表达水平, 细胞的迁移和侵袭的能力降低 (P<.5)( 图 3)

第 12 期徐晓慧, 等 :microrna-25 高表达与直肠癌细胞的侵袭和迁移的关系 1719 OD 值 2.5 2. 1.5 1..5. pre-mir-nc pre-mir-25 1 2 3 4 时间 (d) OD 值 2.5 2. 1.5 1..5. anti-mir-nc anti-mir-25 1 2 3 4 时间 (d) A 1 2 85 68 51 34 17 细胞数 DNA 量 mir-25 前体 53.

1% 1.4% 1.7% 1 3 1 2 D1.2% D2 9.3% D1 1.9% D2 1.1% 1.% 7.1% 1 1 1 1 1 72.8% 11.2% 1 1 1 1 2 1 3 mir-25 前体 74.7% 1.8% 1 1 1 1 2 1 3 前体对照 75.9% 12.

A: Proliferation detection by CCK-8 assay; B: Cell cycle determination by flow cytometry; C: Apoptosis analysis by flow cytometry 1 D3 85.9% D4 4.6% 1 1 1 1 2 1 3 mir-25 抑制剂 D3 84.3% D4 3.

4 第 12 期徐晓慧, 等 :microrna-25 高表达与直肠癌细胞的侵袭和迁移的关系 1719 OD 值 pre-mir-nc pre-mir 时间 (d) OD 值 anti-mir-nc anti-mir 时间 (d) A 细胞数 DNA 量 mir-25 前体 53.5% 5.1% 52.5% 16.7% 28.8% 18.7% 31.2% DNA 量前体对照 15.6% 31.9% DNA 量细胞数 DNA 量 mir-25 抑制剂 38.% 39.4% 4.3% 22.5% 39.5% 23.5% 37.1% DNA 量抑制剂对照 22.5% 37.2% DNA 量 B % 13.8% 1.4% 13.1% 1.4% 1.7% D1.2% D2 9.3% D1 1.9% D2 1.1% 1.% 7.1% % 11.2% mir-25 前体 74.7% 1.8% 前体对照 75.9% 12.% 图 2 两种细胞分别转染后的增殖细胞周期及凋亡情况 A:CCK-8 法检测细胞增殖 ;B: 流式细胞术检测细胞周期 ; C: 流式细胞术检测细胞凋亡 Figure 2 Proliferation, cell cycle and apoptosis of the two types of rectal cancer cells after transfection A: Proliferation detection by CCK-8 assay; B: Cell cycle determination by flow cytometry; C: Apoptosis analysis by flow cytometry 1 D3 85.9% D4 4.6% mir-25 抑制剂 D3 84.3% D4 3.8% 抑制剂对照 86.4% 5.6% C pre-mir-25 pre-mir-nc 迁移细胞侵袭细胞迁移细胞数 pre-mir-25 pre-mir-nc pre-mir-25 pre-mir-nc 侵袭细胞数 A anti-mir-25 anti-mir-nc 迁移细胞侵袭细胞迁移细胞数 anti-mir-25 anti-mir-nc 侵袭细胞数 anti-mir-25 anti-mir-nc B 图 3 两种细胞转染后侵袭和迁移检测结果 A:;B: Figure 3 Results of invasion and migration of the two types of rectal cancer cells after transfection A: ; B:

5 172 中国普通外科杂志第 24 卷 3 讨论结直肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一据统计其发病率和病死率在美国均位居第 3 位 [9] ; 在我国均居第 5 位 [1] 恶性肿瘤本身就是一种异质性疾病, 它们发病复杂, 肿瘤发生的位置不同, 可能会导致其分子及蛋白表型有所不同 [11] 因此严格意义上讲, 结肠癌和直肠癌不能笼统地作为一种疾病来进行研究本研究针对直肠癌进行, 在进行细胞生物学研究中仅选取了直肠癌来源的细胞系由于人们体检很少将肠镜检查作为常规查体项目, 而且直肠癌早期表现缺乏特异性, 等发现症状来医院诊治的直肠癌患者大都处于中晚期, 这直接导致了患者生存率的降低影响患者生存率的主要原因是肿瘤的复发和转移, 因此进一步研究直肠癌细胞可能的侵袭和转移的机制, 显得尤为重要随着科学的发展, 既往曾经被忽视的一类小分子的非编码 RNA mirna 越来越受到人们关注, 甚至成为生命研究的热点 mirna 约占整个基因组 1%, 但是它们却能调控约 3% 的基因的表达 [12] 已有研究证明 mir-25 在多种恶性肿瘤中表 [13-15] 达增高, 甚至有学者提出血清中的 mir-25 可以作为一种新的肿瘤标志物用于乳腺癌肝细胞 [16-18] 癌非小细胞肺癌等肿瘤的诊断有多个研究表明 mirna-21 等多个 mirna 在结直肠癌中表达异常, 而且与患者的预后有关近期国内的一篇关于直肠癌 mirna 芯片的研究结果提示中国人直肠癌中 mir-25 表达增高 [19] 本科室前期收集 64 名直肠癌患者的癌组织及配对的癌旁正常组织标本进行 mir-25 表达水平的研究, 发现 mir-25 在直肠癌组织中过度表达,miR-25 的表达水平与患者的临床分期和淋巴结转移有关 [8] 这与同期发表的一项关于结直肠癌的 186 例样本的研究结果一致 [2] 同时收集了 24 对直肠腺瘤及配对瘤旁正常组织的标本, 经研究发现 mir-25 在直肠腺瘤中的表达就有增高, 提示 mir-25 可能是直肠癌发生的一个早期事件 [8] 因此进一步研究 mir-25 在直肠癌细胞中所发挥的生物学作用, 显得尤为必要本研究选取了两株直肠癌来源的细胞系 (,SW- 837) 分别转染 pre-mir-25, 调高细胞中 mir-25 的表达水平 ; 转染 anti-mir-25, 降低细胞中 mir- 25 的表达水平, 进行细胞增殖细胞周期细胞凋亡细胞的侵袭及迁移实验结果显示, 改变 mir-25 的表达水平对细胞增殖细胞周期细胞凋亡无明显影响其表达水平的变化影响到细胞的侵袭及迁移能力 :mir-25 的表达水平调高, 细胞的迁移和侵袭的能力增强 ;mir-25 的表达水平降低, 细胞的迁移和侵袭的能力降低由此提示在直肠癌中高表达的 mir-25 是通过促进肿瘤细胞的侵袭和迁移能力而促进肿瘤的发生和转移的本研究通过在直肠癌细胞中进行细胞功能实验, 发现在直肠癌细胞中, 高表达的 mir-25 的能够通过促进细胞的侵袭和迁移能力而发挥作用为下游靶蛋白的确定奠定了基础, 进一步进行靶基因及信号通路的研究, 有可能为直肠癌的治疗寻找一个新的靶点, 为直肠癌患者的生存质量的提高做出贡献参考文献 [1] Lan H, Lu H, Wang X, et al. MicroRNAs as potential biomarkers in cancer: opportunities and challenges[j]. Biomed Res Int, 215, 215: doi:1.1155/215/12594 [2] Li BS, Zuo QF, Zhao YL, et al. MicroRNA-25 promotes gastric cancer migration, invasion and proliferation by directly targeting transducer of ERB, 1 and correlates with poor survival[j]. Oncogene, 215, 34(2): [3] Zhang M, Wang X, Li W, et al. mir-17 and mir-25 simultaneously target LATS2 and regulate proliferation and invasion of gastric adenocarcinoma (GAC) cells[j]. Biochem Biophys Res Commun, 215, 46(3): [4] Zhang R, Wang W, Li F, et al. MicroRNA-16b~25 expressions in tumor tissues and plasma of patients with gastric cancers[j]. Med Oncol, 214, 31(1):243. [5] Xu X, Chen Z, Zhao X, et al. MicroRNA-25 promotes cell migration and invasion in esophageal squamous cell carcinoma[j]. Biochem Biophys Res Commun, 212, 421(4): [6] Feng S, Pan W, Jin Y, et al. MiR-25 promotes ovarian cancer proliferation and motility by targeting LATS2[J]. Tumour Biol, 214, 35(12): [7] Wang X, Meng X, Li H, et al. MicroRNA-25 expression level is an independent prognostic factor in epithelial ovarian cancer[j]. Clin Transl Oncol, 214, 16(11): [8] 徐晓慧, 马静, 林方才, 等. MicroRNA-25 在直肠癌中的表达及临床意义 [J]. 中国现代医学杂志, 214, 24(27): [9] Siegel R, Desantis C, Jemal A. Colorectal cancer statistics, 214[J].

6 第 12 期徐晓慧, 等 :microrna-25 高表达与直肠癌细胞的侵袭和迁移的关系 1721 CA Cancer J Clin, 214, 64(2): [1] 陈万青, 郑荣寿, 曾红梅, 等. 211 年中国恶性肿瘤发病和死亡分析 [J]. 中国肿瘤, 215, 24(1):1-1. [11] Minoo P, Zlobec I, Peterson M, et al. Characterization of rectal, proximal and distal colon cancers based on clinicopathological, molecular and protein profiles[j]. Int J Oncol, 21, 37(3): [12] Lewis BP, Burge CB, Bartel DP. Conserved seed pairing, often flanked by adenosines, indicates that thousands of human genes are microrna targets[j]. Cell, 25, 12(1):15-2. [13] Wu Q, Wang C, Lu Z, et al. Analysis of serum genome-wide micrornas for breast cancer detection[j]. Clin Chim Acta, 212, 413(13/14): [14] Qi J, Wang J, Katayama H, et al. Circulating micrornas (cmirnas) as novel potential biomarkers for hepatocellular carcinoma[j]. Neoplasma, 213, 6(2): [15] Chen X, Hu Z, Wang W, et al. Identification of ten serum micrornas from a genome-wide serum microrna expression profile as novel noninvasive biomarkers for nonsmall cell lung cancer diagnosis[j]. Int J Cancer, 212, 13(7): [16] 胡小苗, 李明忠. 大肠癌组织中 mirna-21 表达水平及其与预后的研究 [J]. 中国普通外科杂志, 214, 23(12): [17] 廖信芳, 李正荣, 杨清水等. microrna-139-5p 及其靶基因 Notch1 在结直肠癌中的作用 [J]. 中国普通外科杂志, 214, 23(1): [18] 刘博, 田延锋, 赵增仁等. microrna-451 在结直肠癌组织中的表达及其临床意义 [J]. 中国普通外科杂志, 213, 22(4): [19] Li X, Zhang G, Luo F, et al. Identification of aberrantly expressed mirnas in rectal cancer[j]. Oncol Rep, 212, 28(1): [2] Li X, Yang C, Wang X, et al. The expression of mir-25 is increased in colorectal cancer and is associated with patient prognosis[j]. Med Oncol, 214, 31(1):781. ( 本文编辑宋涛 ) 本文引用格式 : 徐晓慧, 孙欣, 刘娜, 等. microrna-25 高表达与直肠癌细胞的侵袭和迁移的关系 [J]. 中国普通外科杂志, 215, 24(12): doi:1.3978/j.issn Cite this article as: XU XH, SUN X, LIU N, et al. Relations of high microrna-25 expression with migration and invasion of rectal carcinoma cells[j]. Chin J Gen Surg, 215, 24(12): doi:1.3978/j.issn 本刊对来稿中统计学处理的有关要求 1. 统计研究设计 : 应交代统计研究设计的名称和主要做法如调查设计 ( 分为前瞻性回顾性或横断面调查研究 ); 实验设计 ( 应交代具体的设计类型, 如自身配对设计成组设计交叉设计正交设计等 ); 临床试验设计 ( 应交代属于第几期临床试验, 采用了何种盲法措施等 ) 主要做法应围绕 4 个基本原则 ( 随机对照重复均衡 ) 概要说明, 尤其要交代如何控制重要非试验因素的干扰和影响 2. 资料的表达与描述 : 用 x - ± s 表达近似服从正态分布的定量资料, 用 M(QR) 表达呈偏态分布的定量资料 ; 用统计表时, 要合理安排纵横标目, 并将数据的含义表达清楚 ; 用统计图时, 所用统计图的类型应与资料性质相匹配, 并使数轴上刻度值的标法符合数学原则 ; 用相对数时, 分母不宜小于 2, 要注意区分百分率与百分比 3. 统计分析方法的选择 : 对于定量资料, 应根据所采用的设计类型资料所具备的条件和分析目的, 选用合适的统计分析方法, 不应盲目套用 t 检验和单因素方差分析 ; 对于定性资料, 应根据所采用的设计类型定性变量的性质和频数所具备条件以分析目的, 选用合适的统计分析方法, 不应盲目套用 χ 2 检验对于回归分析, 应结合专业知识和散布图, 选用合适的回归类型, 不应盲目套用简单直线回归分析, 对具有重复实验数据的回归分析资料, 不应简单化处理 ; 对于多因素多指标资料, 要在一元分析的基础上, 尽可能运用多元统计分析方法, 以便对因素之间的交互作用和多指标之间的内在联系进行全面合理的解释和评价 4. 统计结果的解释和表达 : 当 P<.5( 或 P<.1) 时, 应说明对比组之间的差异有统计学意义, 而不应说对比组之间具有显著性 ( 或非常显著性 ) 的差别 ; 应写明所用统计分析方法的具体名称 ( 如 : 成组设计资料的 t 检验两因素析因设计资料的方差分析多个均数之间两两比较的 q 检验等 ), 统计量的具体值 ( 如 t=3.45, χ 2 =4.68, F=6.79 等 ) 应可能给出具体的 P 值 ( 如 P=.238); 当涉及到总体参数 ( 如总体均数总体率等 ) 时, 在给出显著性检验结果的同时, 再给出 95% 置信区间中国普通外科杂志编辑部

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5-25袁宏钧.indd 第 24 卷第 5 期 2015 年 5 月碘 131 doi:10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 Chinese Journal of General Surgery, 2015, 24(5):643 647. Chinese Journal of