食品安全封皮2016

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1 博纳艾杰尔科技 食品安全解决方案指南 官方微信

2 2 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers

3 公司简介 About Bonna-Agela Technologies 博纳艾杰尔科技秉承为全球科学家提供高效化学分离材料的原则, 长期致力于研发 生产分离性材料及设备 2016 年成功加入丹纳赫 SCIEX 大家庭, 与业界优秀的液质联用系统技术相结合, 加强了向客户提供完整解决方案的能力 截至目前, 博纳艾杰尔已拥有多项核心技术, 包括 : 新型分离技术和材料的设计 - 合成 - 应用 ; 多孔材料的表面改性及应用 ; 纳米材料在生物化学分离检测中的应用 ; 分离制备整体方案的设计和应用等 应用领域涵盖了食品安全 医药分析 环境监测 临床研究 司法鉴定 电子 纺织 石油化工等诸多行业 不仅可为用户提供样品前处理 - 纯化 - 分析相关的多样色谱设备耗材产品, 还可以根据用户需求定制开发分离材料及前处理设备 产品种类多样 规格齐全 产品质量已达国际先进水平, 性价比高! 3

4 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 目录 第一部分农药残留 001 AF10001 (NY/T , NY/T ) QuEChERS 方法用于苹果中有机磷 有机氯 菊酯 氨基甲酸酯类等 50 种农药残留量的同时检测 002 AF10002 (AOAC ) QuEChERS 方法用于白菜 苹果中 152 种农药残留量的同时检测 LC-MS/MS 法 004 AF10004 抽提式 QuEChERS 产品用于红茶中 112 种农药残留量的同时检测 010 AF10055 (AOAC ) QuEChERS 方法用于红茶中 146 种农药残留量的同时检测 LC-MS/MS 法 012 AF10097 QuEChERS 方法用于乳制品中有机氯残留量的测定 GC-ECD 法 016 AF10099 牛奶中有机氯残留量的测定 GC-ECD 法 019 AF10104 (EN 法 ) QuEChERS 净化包用于油麦菜中 105 种农药多残留的检测 LC-MS/MS 法 021 AF10105 (EN 法 ) QuEChERS 净化包用于白菜中 105 种农药多残留的检测 LC-MS/MS 法 024 AF10107 (EN ) 韭菜中 105 种农药的测定 LC-MS/MS 法 027 AF10114 (AOAC ) 橙子中 12 种有机氯农药残留的快速分析方法 030 AF10115 (AOAC ) 黄瓜中 12 种有机氯农药残留的快速分析方法 032 AF10116 (AOAC ) 大米中有机氯 有机磷农药残留的快速分析方法 034 AF10140 (AOAC ) QuEChERS 方法用于草莓中 45 种农药的测定 LC-MS/MS 法 039 AF10141 (AOAC ) QuEChERS 方法用于马铃薯中 45 种农药的测定 LC-MS/MS 法 042 AF10142 豆芽中植物生长调节剂的测定 043 MF10004 (GB/T , GB ) 茶叶中 519 种农药及相关化学品残留量的测定 (GC-MS 法 ) 及茶叶中 448 种农药及相关化学品残留量的测定 (LC-MS/MS 法 ) 049 MF10005 (GB , GB ) 桑枝 金银花 枸杞子和荷叶中 488 种农药及相关化学品残留量的测定 (GC-MS 法 ) 及桑枝 金银花 枸杞子及荷叶中 413 种农药及相关化学品残留量的测定 (LC-MS/MS 法 ) 050 CU1006 气质联用快速检测饲料中 29 种农药残留 ( 卓越论文 ) 051 CU1008 原粮 ( 高粱和稻壳 ) 和白酒中农药多残留前处理方法 ( 卓越论文 ) 052 复合质谱 QTRAP 在 51 种农业部例行监测农残的整体解决方案 055 第二部分兽药残留 057 AF10022 奶粉中雌酮 雌二醇 醋酸甲地孕酮 醋酸氯地孕酮的检测 058 AF10025 (DB21/ ) 动物源性食品中金刚烷胺的检测 SPE-LC-MS/MS 法 060 AF10026 (GB ) 动物源食品中氯霉素类药物的 LC-MS/MS 定性定量测定方法 062 AF10027 ( 农业部 1025 号公告 ) 畜禽肉中甲硝唑 地美硝唑残留量检测 LC-MS/MS 法 064 AF10028 (GB/T ) 畜禽肉中卡巴氧残留量检测 LC-MS/MS 法 066 AF10029 (GB/T ) 畜禽肉中替米考星残留量检测 LC-MS/MS 法 068 AF10030 (GB/T ) 畜禽肉中头孢噻呋残留量检测 LC-MS/MS 法 070 AF10031 (GB ) 猪肉中阿维菌素残留量检测 LC-MS/MS 法 072 AF10032 (GB/T ) 猪肉中地塞米松残留量检测 LC-MS/MS 法 074 AF10033 (GB/T ) 猪肉中磺胺类药物残留量检测 LC-MS/MS 法 076 AF10034 (DB 51T ) 猪肉中己烯雌酚残留量检测 LC-MS/MS 法 078 AF10035 猪肉中喹乙醇残留量检测 LC-MS/MS 法 080 AF10036 (GB/T ) 猪肉中氟喹诺酮类药物残留量检测 LC-MS/MS 法 082 4

5 AF10037 (GB/T ) 猪肉中林可霉素残留量检测 LC-MS/MS 法 084 AF10038 (GB ) 猪肉中氯羟吡啶残留量检测 LC-MS/MS 法 086 AF10039 (GB/T ) 猪肉 鸡肉中四环素类药物残留量检测 LC-MS/MS 法 088 AF10040 (SN/T ) 猪肉中泰乐菌素残留量检测 LC-MS/MS 法 090 AF10041 (GB/T ) 猪肉中四种硝基呋喃类代谢物残留量的测定 LC-MS/MS 法 092 AF10042 ( 农业部 1025 号公告 ) 动物源食品中 9 种 β- 受体激动剂残留量的测定 LC-MS/MS 法 094 ( 农业部 1025 号公告 和农业部 1063 号公告 ) 猪尿中 14 种 β- 受体激动剂残留的测定 098 AF10044 ( 农业部 1031 号公告 ) 动物源性食品中糖皮质激素类药物的液质实验方法 100 AF10070 动物性食品中噻苯达唑 氟苯达唑及其标示残留物残留量的测定 101 AF10090 (SN/T ) 猪肉中齐帕特罗残留量的测定 104 AF10102 动物源性食品中碘醚柳胺残留量的分析方法 106 AF10121 牛奶中甲砜霉素的分析方法 109 AF10144 (GB/T ) 鱼肉中氯霉素 氟苯尼考 甲砜霉素的测定 111 AF10145 (GB ) 呋喃苯烯酸钠的测定 113 AF10146 (GB/T ) 鱼肉中孔雀石绿和结晶紫的测定 115 AF10147 鱼肉中 5 种硝基咪唑类药物的测定 117 CU1003 改进的 QuEChERS 结合 LC-MS/MS 同时测定蜂蜜中 60 种兽药残留 ( 卓越论文 ) 119 CU1004 QuEChERS 结合 LC-MS/MS 同时测定虾肉中 72 种兽药残留 119 (GB/T ) 蜂蜜中大环内酯类药物残留量测定 120 (GBT ) 蜂王浆中土霉素, 金霉素, 四环素, 强力霉素残留量测定 121 第三部分食品添加剂 122 AF10046 食品中八种人工着色剂的测定 HPLC 法 123 AF10122 茶叶中八种人工着色剂的分析方法 125 AF10047 (GB ) 苯甲酸 山梨酸 糖精钠的测定 HPLC 法 127 AF10124 (GB ) 浓缩枣汁中的山梨酸 苯甲酸的测定 129 AF10079 (GB/T ) 食品中三氯蔗糖的分析方法 131 AF10119 (GB ) 酸奶中纽甜的测定 134 AF10133 (GB ) 花生油中 8 种抗氧化剂的测定 HPLC 法 136 AF10138 花生油中麦芽酚和乙基麦芽酚的测定 138 第四部分非法添加 140 AF10005 辣椒油中罗丹明 B 的检测方法高效液相色谱法 141 AF10019 (GB/T ) 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法 142 AF10048 鸡蛋中三聚氰胺的检测 (HPLC 法 ) 144 AF10021 奶粉中香兰素的测定 146 AF10045 婴幼儿奶粉中双氰胺的检测 HPLC-UV 法和 LC-MS/MS 法 148 AF10049 (GB/T ) 食品中苏丹红染料的检测氧化铝 SPE - HPLC 法 151 RF10006 食品中苏丹红染料的检测 Cleanert Sudan 专用柱, 升级方法 152 AF10069 花生油中 16 种邻苯二甲酸酯的分析方法 154 CU1005 (DB 31/ ) 火锅底料中罂粟碱类物质的残留量测 157 AF10125 (GB 第一法 ) 食用油中极性组分 (PC) 的测定

6 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 第五部分污染物 161 AF10053 食品中甲醛的测定 HPLC 法 162 AF10096 (GB ) 薯片和油条中丙烯酰胺的分析方法 164 AF10095 薯片和油条中丙烯酰胺的分析方法 Cleanert ACA 专用柱, 升级方法 167 RF10001 (GB 净化方法一 ) 油脂中苯并 (a) 芘的检测 HPLC 法 171 RF10002 (GB 净化方法二 ) 油脂中苯并 (a) 芘的检测 HPLC 法 173 MF00013 (GB ) 酒中氨基甲酸乙酯含量检测 (GC-MS 法 ) 175 CU1008 (GB ) 食品中亚硝酸盐的测定离子色谱法 178 第六部分营养成分 180 AF10007 (GB ) 婴幼儿乳品中葡萄糖 蔗糖 乳糖的测定 181 AF10010 (GB ) 婴幼儿配方奶粉中维生素 B1 的测定 182 AF10011 (GB ) 婴幼儿配方奶粉中维生素 B2 的测定 184 AF10012 (GB ) 婴幼儿配方奶粉中维生素 B6 的测定 185 AF10016 (GB ) 婴幼儿配方奶粉中牛磺酸的测定 186 AF10017 (GB ) 婴幼儿乳品中反式脂肪酸的测定 187 AF10023 (GB/T GB/T GB/T ) 饲料中 18 种氨基酸的测定 ( 柱前衍生 HPLC 法 ) 188 AF10050 婴幼儿乳品中碘的测定离子色谱法 192 AF10074 (GB ) 天然辣椒素与二氢辣椒素的测定 193 AP10139 (GB ) 婴幼儿奶粉中 5 种核苷酸测定 194 RF10004 食用油中的角鲨烯的测定气相色谱质谱法 196 PF10001 (GB/T ) 橄榄油中蜡含量的测定气相色谱法 197 第七部分真菌毒素 198 AF10018 (GB ) 乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1 的测定 199 AF10024 饲料中维生素的测定 (A D3 E B1 B2 B6 B12 K3) 200 CU1009 ( 中国药典 ) 酸枣仁中黄曲霉毒素 B1,B2,G1,G2 的测定 ( 液相色谱荧光法 ) 202 CU1010 (GB ) 离子交换固相萃取 - HPLC 检测粮食赭曲霉毒素 A(OA) 研究 204 第八部分化妆品 206 AF10054 (GB/T ) 化妆品中 11 种糖皮质激素的同时测定 SPE-LC-MS/MS 法 207 AF10050 化妆品中 7 种局麻药的测定 210 AF10108 化妆品中对羟基苯甲酸酯类化合物的测定 212 AF10109 化妆品中双酚 A 的测定 214 附录食品检测标准品 216 6

7 第一部分 农药残留 001

8 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (NY/T , NY/T ) QuEChERS 方法用于苹果中有 机磷 有机氯 菊酯 氨基甲酸酯类等 50 种农药残留量的同时检测 应用编号 :AF 样品前处理方法 1.1 样品提取 称取 15 g 均质好的苹果样品, 置于 50 ml 蔬菜水果提取管中, 加入 15 ml 0.1% 乙酸乙腈溶液, 加入博纳艾杰尔 MAS-QuEChERS 蔬菜水果提取包 (P/N:MS-MG5052), 再加入 4 颗玻璃珠, 手动剧烈振荡 1 min,8000 rpm 离心 5 min, 取上清液 10 ml 待净化 1.2 样品净化将上述待净化液加入到 15mL 博纳艾杰尔 MAS- QuEChERS 蔬菜水果净化管 (P/N:MS-9PA1011) 中, 手动振荡 1 min,8000 rpm 离心 5 min, 取上清液 5 ml 40 氮吹至近干, 丙酮溶解用于气相检测 再取 5 ml 上清液,40 氮吹至近干, 乙腈溶解用于液质检测 2. 色谱条件 色谱柱 : 预柱 1.0 m,0.53 mm 内径, 脱活石英毛细管柱 A 柱 :DA-50+ 色谱柱,30 m 0.53 mm 1.0 μm B 柱 :DA-1 色谱柱,30 m 0.53 mm 1.50 μm 进样口温度 :220 检测器温度 :250 柱温 :150 ( 保持 2 min) 250 ( 保持 12 min)(8 /min 升温 ) 载气 : 氮气, 纯度 %, 流速为 10 ml/min 燃气 : 氢气, 纯度 %, 流速为 75 ml/min 助燃气 : 空气, 流速为 100 ml/min 进样量 :1 µl 进样方式 : 不分流进样 样品一式两份, 由双自动进样器同时进样 3. 实验结果 表 1 有机磷类农残加标回收 GC-FPD 检测实验结果 ( 添加水平 0.02 μg/ml) 处理加标 物质名称 回收率 /% RSD/% RT/min 甲胺磷 (Methamidophos) 乙酰甲胺磷 (acephate) 甲拌磷 (phorate) 氧化乐果 (Omethoate) 二嗪磷 (diazinon) 乐果 (dimethoate) 甲基对硫磷 (parathion-methyl) 毒死蜱 (chlorpyrifos) 马拉硫磷 (malathion) 甲基异柳磷 (isofenphos-methyl) 水胺硫磷 (isocarbophos) 三唑磷 (triazophos) 伏杀硫磷 (phosalone) 亚胺硫磷 (phosmet) 表 2 有机氯和菊酯类农残加标回收 GC-ECD 检测实验结果 ( 添加水平 0.02 μg/ml) 处理加标 物质名称 回收率 /% RSD/% RT/inin α- 六六六 (α-bhc) 林丹 (γ-bhc) 五氯硝基苯 (pentachloronitrobenzene) 百菌清 (chlorothalonil) 三唑酮 (traidimefon) 腐霉利 (procymidone) O,P`DDE (O,P`DDE) P,P`DDE (P,P`DDE) O,P`DDD (O,P`DDD) P,P`DDD (P,P`DDD) 联苯菊酯 (bifenthrin) 甲氰菊脂 (fenpropathrin) 三氟氯氰菊酯 (Cyhalothrin) 氯菊酯 (permethrin) 氰戊菊酯 (fenvalerate) β- 六六六 (β-bhc) δ- 六六六 (δ-bht) 乙烯菌核利 (vinclozolin) O,P`DDT (O,P`DDT) 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

9 物质名称 P,P`DDT (P,P`DDT) 三氯杀螨醇 (dicofol) 异菌脲 (iprodione) 氟氯氰菊酯 (cyfluthrin) 氟氰戊菊酯 (flucythrinate) 氟胺氰菊酯 (tau-fluvalinate) 溴氰菊酯 (deltamethyrin) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/inin 图 3 有机氯和菊酯类 0.1 μg/ml 标品 GC-ECD 检测色谱图 表 3 氨基甲酸酯类农残加标回收 LC-MS/MS 检测实验结果 ( 添加水平 0.1 μg/ml) 物质名称涕灭威砜 (aldicarb sulfone) 灭多威 (methomyl) 涕灭威亚砜 (aldicarb sulfoxide) 吡虫啉 (imidacloprid) 3- 羟基克百威 (3-hydroxycarbofuran) 涕灭威 (aldicarb) 啶虫脒 (acetamiprid) 克百威 (carbfuran) 氟虫腈 (fipronil) 甲萘威 (carbaryl) 处理加标回收率 /% RSD/% 结论 图 4. 有机氯和菊酯类加标 0.1 μg/ml 样品 GC-ECD 检测色谱图 本实验建立了苹果中农药残留的 QuEChERS 前处理方法, 并结合气相色谱 液相色谱串连质谱对于加标量为 0.1 μg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 70%~120%, 符合国标要求,QuEChERS 方法比较稳定, 说明本方法能够用于处理苹果中的农药残留 5. 订货信息 图 1 有机磷标品 GC-FPD 检测色谱图 产品名称蔬菜水果农残提取管蔬菜水果农残净化管 DA-50+ 规格描述 50 ml 离心管,50 支 / 盒 15 ml 离心管,50 支 / 盒 50% 苯基,50% 聚二甲基硅氧烷, 30m 0.53mm 1.0μm,1 支 订货号 MS-MG5052 MS-9PA 图 2 有机磷加标 0.1 μg/ml 样品 GC-FPD 检测色谱图 DA-1 乙腈一次性注射器微孔滤膜 1.5 ml 样品瓶 100% 聚二甲基硅氧烷, 30m 0.53mm 1.50μm,1 支 4 4L/ 箱 2 ml, 无针头,100/pk 单膜,13 mm,0.22 μm,100/pk 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk AH015-4 LZSQ-2ML AS mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米 1.5 ml 样品瓶盖 色 PTFE 隔垫 45 ShoreA; mm,100/pk 003

10 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (AOAC ) QuEChERS 方法用于白菜 苹果中 152 种农药 残留量的同时检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF 样品前处理方法 1.1 样品提取 白菜 : 称取 15 g 均质好的白菜样品, 置于 50 ml 蔬菜水果提取管中, 加入 15 ml 1% 乙酸乙腈溶液, 加入博纳艾杰尔 MAS-QuEChERS 蔬菜水果提取包 (P/N:MS-MG5052), 再加入 4 颗玻璃珠, 手动剧烈振荡 1 min,8000 rpm 离心 5 min, 取上清液 待净化 苹果 : 称取 15 g 均质好的苹果样品, 置于 50 ml 蔬菜水果提取管中, 加入 15 ml 1% 乙酸乙腈溶液, 加入博纳艾杰尔 MAS-QuEChERS 蔬菜水果提取包 (P/N:MS-MG5052), 再加入 4 颗玻璃珠, 手动剧烈振荡 1 min,8000 rpm 离心 5 min, 取上清液 待净化 1. 2 样品净化白菜 : 将上述白菜待净化液加入到 2 ml 博纳艾杰尔 MAS-QuEChERS 蔬菜水果净化管 (P/N:MS-PA0250) 中, 手动振荡 1 min,8000 rpm 离心 5 min, 取上清液适量,0.22 μm 尼龙滤膜过滤, 用于液质检测 苹果 : 将上述苹果待净化液加入到 2 ml 博纳艾杰尔 MAS- QuEChERS 蔬菜水果净化管 (P/N:MS-9PA0203) 中, 手动振荡 1 min,8000 rpm 离心 5 min, 取上清液适量,0.22 μm 尼龙滤膜过滤, 用于液质检测 时间 /min 表 1 液相色谱梯度洗脱表 2.2 质谱参数离子源 :ESI+; 电喷雾电压 :5500 V; 雾化气压力 :50 psi; 气帘气压力 :15 psi; 辅助气压力 :50 psi; 离子源温度 :400 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 3. 实验结果 流速 (ml/min) A/% B/% 基质混合标准工作溶液配制取高浓度农药混合标准溶液, 用空白样品基质溶液稀释成 0.03 μg/ml 的基质混合标准工作溶液 2. 色谱条件 2.1 液相条件色谱柱 :Venusil ASB C18,5 μm,150 Å, mm; 流动相 : A 相 :0.1% 甲酸水溶液, B 相 :0.1% 甲酸乙腈溶液 ; 柱温 :30 ; 进样量 :10 µl; 梯度洗脱条件 ( 见表 1) 图 μg/ml 混合标准溶液 LC-MS/MS 色谱图 图 2 白菜基质空白 LC-MS/MS 色谱图 004 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

11 4. 结论 图 μg/ml 白菜基质混合标准工作液 LC-MS/MS 色谱图 本实验依据 AOAC 标准建立了白菜和苹果中农药残留的 QuEChERS 前处理方法, 并结合液相色谱串连质谱对于加标量为 0.03 mg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 60%~110%, 符合国标要求, 且 QuEChERS 方法数据比较稳定, 说明本方法能够用于白菜 苹果中的农药残留量的检测 5. 订货信息 图 mg/kg 白菜基质加标样品 LC-MS/MS 色谱图 产品名称蔬菜水果农残提取管蔬菜水果农残净化管 ( 含脂类及蛋白质色素丰富类基质 ) 蔬菜水果农残净化管 ( 简单基质 ) Venusil ASB C18 保护柱套 规格描述 50 ml 离心管,50 支 / 盒 2 ml 离心管,50 支 / 盒 2 ml 离心管,50 支 / 盒 5 μm,150 Å, mm,1 支适用于 mm 和 mm, 1 支 订货号 MS-MG5052 MS-9PA0203 MS-PA0250 VS SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150 Å; mm,4 支 / 包 VS S 图 5 苹果基质空白 LC-MS/MS 色谱图 1.5 ml 样品瓶 1.5mL 样品瓶盖 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A;1.0 mm,100/pk 针式过滤器一次性注射器 单膜,13 mm,0.22 μm,200/pk 2 ml 无针头,100/pk AS LZSQ-2ML 图 μg/ml 苹果基质混合标准工作液 LC-MS/MS 色谱图 图 mg/kg 苹果基质加标样品 LC-MS/MS 色谱图 苹果 白菜中 152 种农药残留添加回收率数据见附录

12 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 附录 1 表 3 苹果 白菜中 152 种农药残留加标回收 LC-MS/MS 实验结果 (n=3) ( 添加水平 0.03 mg/kg) 物质名称杀虫脒 Chlordimeform 涕灭威亚砜 Aldicarb-sulfoxide 呋虫胺 Dinotefuran 涕灭砜威 Aldicarb-sulfone 杀线威 Oxamyl 砜吸磷 Demeton-S-methyl sulfoxide 久效磷 Monocrotophos 敌百虫 Trichlorfon 久效威亚砜 Thiofanox-sulfoxide 噻虫胺 Clothianidin 乐果 Dimethoate 久效威砜 Thiofanox-sulfone 咪草酸甲酯 Imazamethabenz Methyl 啶虫脒 Acetamiprid 霜脲氰 Cymoxanil 唑嘧磺草胺 Flumetsulam 氧化萎锈灵 Oxycarboxin 涕灭威 Aldicarb 双酰草胺 Carbetamide 咪唑乙烟酸 Imazethapyr 丁噻隆 Tebuthiuron 噻虫啉 Thiacloprid 丁苯吗啉 Fenpropimorph 磷胺 Phosphamidon 辛硫磷 Phoxim 螺环菌胺 Spiroxamine 速灭威 Metolcarb 异噁隆 Isouron 噻苯隆 Thidiazuron 氰草津 Cyanazine 甲基内吸磷 Demeton-S-methyl 甲酰氨基嘧磺隆 Foramsulfuron 甲基吡噁磷 Azamethiphos 甲基硫菌灵 Thiophanate-methyl 环草定 Lenacil 咪唑喹啉酸 Imazaquin 噻吩磺隆 Thifensulfuron-methyl 克百威 Carbofuran 醚磺隆 Cinosulfuron 胺苯磺隆 Metsulfuron-methyl 双氟磺草胺 Florasulam 苹果 白菜 回收率 (%) RSD(%) 回收率 (%) RSD(%) RT/min 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

13 物质名称 苹果 白菜 回收率 (%) RSD(%) 回收率 (%) RSD(%) RT/min 甲基苯噻隆 Methabenzthiazuron 硫双威 Thiodicarb 醚苯磺隆 Triasulfuron 绿麦隆 Chlortoluron 甲萘威 Carbaryl 敌草隆 Diuron 氟草隆 Fluometuron 萎锈灵 Carboxin 酰嘧磺隆 Amidosulfuron 氯磺隆 Chlorsulfuron 绿谷隆 Monolinuron 嘧菌环胺 Cyprodinil 乙硫苯威 Ethiofencarb 砜嘧磺隆 Rimsulfuron 氯吡脲 Forchlorfenuron 胺苯磺隆 Ethametsulfuron-methyl 福拉比 Furametpyr 异丙隆 Isoproturon 二甲嘧酚 Dimethirimol 磺草唑胺 Metosulam 乙嘧酚磺酸酯 Bupirimate 四唑嘧磺隆 Azimsulfuron 甲基二磺隆 Mesosulfuron-methyl 氧环唑 Azaconazole 氟吗啉 Flumorph 内吸磷 Demeton 硫菌灵 Thiophanate 氯酯磺草胺 Cloransulam-methyl 乙黄隆 Sulfosulfuron 氯虫苯甲酰胺 Chlorantraniliprole 苄嘧磺隆 Bensulfuron-methyl 烟嘧磺隆 Nicosulfuron 丰索磷 Fensulfothion 啶嘧磺隆 Flazasulfuron 双氯磺草胺 Diclosulam 唑吡嘧磺隆 Imazosulfuron 乙基多杀菌素 Spinetoram 丙苯磺隆 Propoxycarbazone 甲硫威 Methiocarb 甲基碘磺隆 Iodosulfuron-methyl 乙霉威 Diethofencarb 利谷隆 Linuron 咪鲜胺 Prochloraz 甜菜安 Desmedipham /

14 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 物质名称 苹果 白菜 回收率 (%) RSD(%) 回收率 (%) RSD(%) RT/min 甜菜宁 Phenmedipham 乙虫腈 Ethiprole 猛杀威 Promecarb 缬霉威 Iprovalicarb 氟磺隆 Prosulfuron 吡嘧磺隆 Pyrazosulfuron-ethyl 甲基对氧磷 Paraoxon-methyl 苯线磷 Fenamiphos 螺虫乙酯 Spirotetramat 枯草隆 Chloroxuron 二苯隆 Cumyluron 苯噻酰草胺 Mefenacet 环酰菌胺 Fenhexamid 嘧菌胺 Mepanipyrim 氯吡嘧磺隆 Halosulfuron Methyl 嘧菌酯 Azoxystrobin 啶酰菌胺 Boscalid 氟吡菌胺 Fluopicolide 双炔酰菌胺 Mandipropamid 异丙甲草胺 Metolachlor 氟胺磺隆 Triflusulfuron-methyl 除虫脲 Diflubenzuron 甲氧虫酰肼 Methoxyfenozide 环丙嘧磺隆 Cyclosulfamuron 唑嘧菌胺 Ametoctradin 唑草胺 Cafenstrole 噻吩草胺 Thenylchlor 腈苯唑 Fenbuconazole 灭幼脲 Chlorbenzuron 苯氧威 Fenoxycarb 鱼藤酮 Rotenone 敌瘟磷 Edifenphos 棉铃威 Alanycarb 虫酰肼 Tebufenozide 异丙草胺 Propisochlor 氟噻甲草酯 Fluthiacet-Methyl 苄草唑 Pyrazoxyfen 双苯恶唑酸 Isoxadifen-Ethyl 氟虫双酰胺 Flubendiamide 杀铃脲 Triflumuron 吡唑硫磷 Pyraclofos 地散磷 Bensulide 氯嘧磺隆 Chlorimuron-ethyl 吡唑醚菌酯 Pyraclostrobin 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

15 物质名称 苹果 白菜 回收率 (%) RSD(%) 回收率 (%) RSD(%) RT/min 四螨嗪 Clofentezine 戊菌隆 Pencycuron 苯醚甲环唑 Difenoconazole 蝇毒磷 Coumaphos 噻草酮 Cycloxydim 氟吡甲禾灵 Haloxyfop-R-methyl 吡氟酰草胺 Diflufenican 氟铃脲 Hexaflumuron 噁唑磷 Isoxathion 茚虫威 Indoxacarb 喹禾灵 Quizalofop-ethyl 烯草酮 Clethodim 烯禾啶 Sethoxydim 亚胺唑 Imibenconazole 吲哚酮草酯 Cinidon-ethyl 呋线威 Furathiocarb 三甲苯草酮 Tralkoxydim 氟唑磺隆 Flucarbazone-sodium 双硫磷 Temephos 氟虫脲 Flufenoxuron 仲丁灵 Butralin 螺甲螨酯 Spiromesifen 丁硫克百威 Carbosulfan

16 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 抽提式 QuEChERS 产品用于红茶中 112 种农药残留量的同时检测 应用编号 AF 样品前处理方法 1.1 样品提取 称取茶叶粉2.0 g 置于50 ml 离心管中 加入 10 ml 水 静置1h后 加入 15 ml 乙腈 4.0 g 硫酸镁和 1.0 g 氯化 钠 (P/N MS-MG5055) 手动剧烈振摇 1 min 8000 r/min 离心 5 min 取 上清液作为待净化液 1.2 样品净化 用10 ml一次性针管串联博纳艾杰尔 Cleanert NANO 农 产品复杂基质专用净化柱 (P/N IC-NN1510-C) 抽取提取液1 ml 然后再推出 此步骤重复 3 次 然后将滤液过0.22 µm 有机滤膜 待 LC-MS/MS 测定 表1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /(ml/min) A/% B/% 实验结果 X IC o f+ M R M (3 5 4p a irs ): / a m ue x p e c te dr T :1 5.2ID :C y m o x a n il fro m S a m p le3(标 品 )o f w iff(t u rb os p ra y ) 1.3 基质混合标准工作溶液配制 1.3 e e e e e e 5 spc,ytisnetni 取高浓度农药混合标准溶液 用空白样品基质溶液稀 释成 0.02 µg/ml 的基质混合标准工作溶液 M a x.2.9 e 4c p s. 1.4 e e e e e 5 2. 色谱条件 3.0 e e e 色谱柱 Venusil ASB C18 5µm 150Å mm 流动相 A: 0.1%甲酸水溶液 B: 0.1%甲酸乙腈 柱 温 30 进样量 10 µl 梯度洗脱(见表1) T im e,m in 图 μg/ml 混合标准溶液 LC-MS/MS 色谱图 X IC o f+ M R M (3 5 4p a irs ): / a m ue x p e c te dr T :1 5.2ID :C y m o x a n il fro m S a m p le1 0(茶空 )o f w iff(t u rb os p ra y ) M a x c p s. 1.3 e e 6 质谱条件 1.1 e e e e 5 spc,ytisnetni 离子源 电喷雾离子源 扫描方式 正离子扫描 电喷雾电压 5500 V 雾化气压力 50 psi 气帘气压力 15 psi 辅助气压力 50 psi 离子源温度 400 采集方式 多反应监测 (MRM) 7.0 e e e e e e e T im e,m in 图 2 红茶空白样品 LC-MS/MS 色谱图 X IC o f+ M R M (3 5 4p a irs ): / a m ue x p e c te dr T :1 5.2ID :C y m o x a n il fro m S a m p le1 1(茶后 )o f w iff(t u rb os p ra y ) M a x.4.0 e 4c p s. 1.3 e e e e e e 5 spc,ytisnetni 7.0 e e e e e e e T im e,m in 图 μg/ml 红茶基质混合标准工作液 LC-MS/MS 色谱图 010 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载

17 X IC o f+ M R M (3 5 4p a irs ): / a m ue x p e c te dr T :1 5.2ID :C y m o x a n il fro m S a m p le1 2(茶手 1 )o f w iff(t u rb os p ra y ) M a x.2.1 e 4c p s. 4. 结论 1.5 e e e e e e e e 5 spc,ytisnetni 7.0 e e e e e e e T im e,m in 本 实 验 建 立 了 农 药 残 留 量 的 LC- M S / M S 检 测 方 法 并结合固相萃取技术对红茶中农药残留量的含量进行了测 定 对于加标量为 0.15 mg/kg 的样品进行了检测 回收率在 60%~110% 符合要求 QuEChERS稳定并且色谱柱重现性 良好 说明本方法能够用于检测红茶中农药的残留量 图 mg/kg 红茶基质加标样品 LC-MS/MS 色谱图 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Venusil ASB C18 5 µm 150 Å mm 1支 VS Cleanert NANO 农产品复杂基质专用净化柱 过滤头式 SPE 柱 50支/PK IC-NN1510-C 保护柱套 适用于 mm和 mm 1支 SH-100 直联式保护柱芯 5 µm 150 Å mm 4支/pk VS S 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm 100/pk ml 样品瓶盖 微孔滤膜 一次性注射器 9 mm 中心孔蓝盖 红色橡胶/米色PTFE隔垫 45 Shore A 1.0 mm 100/pk 单膜 13 mm 0.22 µm 200/pk AS 有针头 100/pk LZSQ-2ML 10 ml 有针头 100/pk LZSQ-5ML 011

18 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (AOAC ) QuEChERS 方法用于红茶中 146 种农药残留量的同 时检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取 2 g 市售红茶粉样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 10 ml 水静置 1 h 加入 15 ml 1% 乙酸乙腈溶液, 加入博纳艾杰尔 MAS-QuEChERS 提取包 (P/N:MS-MG5052), 再加入 4 颗玻璃珠, 手动剧烈振荡 1 min,8000 rpm 离心 5 min, 取上清液 10 ml 待净化 1.2 样品净化 将上述红茶待净化液加入到 15 ml 博纳艾杰尔 MAS- QuEChERS 净化管 (P/N:MS-PP0253) 中, 手动振荡 1 min,8000 rpm 离心 5 min, 取 5 ml 上清液氮吹至近干, 乙腈 - 水混合溶液复溶 (V/V=3:2),0.22 μm 尼龙滤膜过滤, 用于液质检测 2. 检测方法 2.1 色谱条件 色谱柱 :Venusil ASB C18, 3 μm,150 Å, mm 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水溶液,B 相 -0.1% 甲酸乙腈柱温 :30 进样量 :10 µl 梯度洗脱 : 见表 质谱条件 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /(ml/min) A/% B/% 离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :50 psi 气帘气压力 :15 psi 辅助气压力 :50 psi 离子源温度 :400 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 3. 实验结果 表 2 红茶农药残留加标回收 LC/MS/MS 实验结果 (n=3) ( 添加水平 0.1 mg/kg) 物质名称平均回收率 /% RSD/% RT/min 涕灭威亚砜 Aldicarb-sulfoxide 多菌灵 Carbendazim 呋虫胺 Dinotefuran 氟啶虫酰胺 Flonicamid 杀线威 Oxamyl 砜吸磷 Demeton-S-methyl sulfoxide 久效磷 Monocrotophos 抗蚜威 Pirimicarb 敌百虫 Trichlorfon 久效威亚砜 Thiofanox-sulfoxide 蚜灭磷 Vamidothion 羟基克百威 Carbofuran-3-hydroxy 杀虫脒 Chlordimeform 噻虫胺 Clothianidin 氯草敏 Chloridazon 乐果 Dimethoate 久效威砜 Thiofanox-sulfone 咪草酸 Imazamethabenz Methyl 啶虫脒 Acetamiprid 霜脲氰 Cymoxanil 唑嘧磺草胺 Flumetsulam 硫环磷 Phosfolan 氧化萎锈灵 Oxycarboxin 涕灭威 Aldicarb 双酰草胺 Carbetamide 氟苯脲 Tebuthiuron 噻虫啉 Thiacloprid 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

19 物质名称 平均回收率 /% RSD/% RT/min 丁苯吗啉 Fenpropimorph 磷胺 Phosphamidon 辛硫磷 Phoxim 螺环菌胺 Spiroxamine 速灭威 Metolcarb 异噁隆 Isouron 噻苯隆 Thidiazuron 氰草津 Cyanazine 甲基内吸磷 Demeton-S-methyl 甲酰氨基嘧磺隆 Foramsulfuron 甲基吡噁磷 Azamethiphos 环草定 Lenacil 噻吩磺隆 Thifensulfuron-methyl 克百威 Carbofuran 醚磺隆 Cinosulfuron 甲磺隆 Metsulfuron-methyl 双氟磺草胺 Florasulam 甲基苯噻隆 Methabenzthiazuron 硫双威 Thiodicarb 醚苯磺隆 Triasulfuron 甲萘威 Carbaryl 绿麦隆 Chlortoluron 敌草隆 Diuron 氟草隆 Fluometuron 酰嘧磺隆 Amidosulfuron 氯磺隆 Chlorsulfuron 嘧菌环胺 Cyprodinil 绿谷隆 Monolinuron 砜嘧磺隆 Rimsulfuron 氯吡脲 Forchlorfenuron 胺苯磺隆 Ethametsulfuron-methyl 福拉比 Furametpyr 异丙隆 Isoproturon 乙嘧酚磺酸酯 Bupirimate 二甲嘧酚 Dimethirimol 磺草唑胺 Metosulam 四唑嘧磺隆 Azimsulfuron 甲基二磺隆 Mesosulfuron-methyl 氧环唑 Azaconazole 氟吗啉 Flumorph 氯酯磺草胺 Cloransulam-methyl 乙黄隆 Sulfosulfuron 苄嘧磺隆 Bensulfuron-methyl 氯虫苯甲酰胺 Chlorantraniliprole 烟嘧磺隆 Nicosulfuron 丰索磷 Fensulfothion 物质名称 平均回收率 /% RSD/% RT/min 啶嘧磺隆 Flazasulfuron 双氯磺草胺 Diclosulam 唑吡嘧磺隆 Imazosulfuron 乙基多杀菌素 Spinetoram 甲硫威 Methiocarb 丙苯磺隆 Propoxycarbazone 乙霉威 Diethofencarb 甲基碘磺隆 Iodosulfuron-methyl 利谷隆 Linuron 咪鲜胺 Prochloraz 甜菜安 Desmedipham 甜菜宁 Phenmedipham 乙虫腈 Ethiprole 猛杀威 Promecarb 缬霉威 Iprovalicarb 氟磺隆 Prosulfuron 吡嘧磺隆 Pyrazosulfuron-ethyl 苯线磷 Fenamiphos 螺虫乙酯 Spirotetramat 枯草隆 Chloroxuron 二苯隆 Cumyluron 环酰菌胺 Fenhexamid 苯噻酰草胺 Mefenacet 嘧菌胺 Mepanipyrim 氯吡嘧磺隆 Halosulfuron Methyl 嘧菌酯 Azoxystrobin 啶酰菌胺 Boscalid 氟吡菌胺 Fluopicolide 双炔酰菌胺 Mandipropamid 异丙甲草胺 Metolachlor 氟胺磺隆 Triflusulfuron-methyl 除虫脲 Diflubenzuron 甲氧虫酰肼 Methoxyfenozide 环丙嘧磺隆 Cyclosulfamuron 唑嘧菌胺 Ametoctradin 噻吩草胺 Thenylchlor 灭幼脲 Chlorbenzuron 腈苯唑 Fenbuconazole 苯氧威 Fenoxycarb 鱼藤酮 Rotenone 敌瘟磷 Edifenphos 毒草胺 Propisochlor 氟噻甲草酯 Fluthiacet-Methyl 苄草唑 Pyrazoxyfen 氟虫双酰胺 Flubendiamide 双苯恶唑酸 Isoxadifen-Ethyl

20 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 物质名称平均回收率 /% RSD/% RT/min 杀铃脲 Triflumuron 吡唑硫磷 Pyraclofos 地散磷 Bensulide 氯嘧磺隆 Chlorimuron-ethyl 吡唑醚菌酯 Pyraclostrobin 苯醚甲环唑 Difenoconazole 戊菌隆 Pencycuron 蝇毒磷 Coumaphos 氟吡甲禾灵 Haloxyfop-R-methyl 吡氟酰草胺 Diflufenican 氟铃脲 Hexaflumuron 噁唑磷 Isoxathion 茚虫威 Indoxacarb 喹禾灵 Quizalofop-ethyl 亚胺唑 Imibenconazole 吲哚酮草酯 Cinidon-ethyl 呋线威 Furathiocarb 三甲苯草酮 Tralkoxydim 氟唑磺隆 Flucarbazone-sodium 氟虫脲 Flufenoxuron 双硫磷 Temephos 仲丁灵 Butralin 氟啶脲 Chlorfluazuron 唑螨酯 Fenpyroximate 螺甲螨酯 Spiromesifen 哒草特 Pyridate 内吸磷 Demeton 图 μg/ml 农药混合标准溶液 LC/MS/MS 色谱图 图 2 红茶基质空白 LC/MS/MS 色谱图 图 μg/ml 红茶基质混合标准工作液 LC/MS/MS 色谱图 图 mg/kg 红茶基质加标样品 LC/MS/MS 色谱图 014 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

21 4. 结论 本实验以 AOAC 标准为依据建立了红茶中农药残留的 QuEChERS 前处理方法, 并结合液相色谱串连质谱对于加标量为 0.1 mg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 60%~110%, 符合国标要求,QuEChERS 方法比较稳定, 说明本方法能够用于红茶中的农药残留检测 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 蔬菜水果农残提取管 50 ml 离心管,50 支 / 盒 MS-MG5052 蔬菜水果农残净化管 ( 高含量色素复 15 ml 离心管,50 支 / 盒 MS-9PP0253 杂基质 ) Venusil ASB C18 3 μm,150å, mm,1 支 VS 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 3 μm,150å;2.1 10mm,4 支 / 包 DC LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 Shore A; 1.0 mm,100/pk 针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 μm, 200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 015

22 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers QuEChERS 方法用于乳制品中有机氯残留量的测定 GC-ECD 法 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取牛奶基质称取 10 g 样品, 加入 10 ml 丙酮 / 正己烷 (1:9,V/V), 涡旋混合 1 min; 再依次加入 10 ml 丙酮 / 正己烷 (1:9,V/ V),4 g 氯化钠,2 ml 200 g/l 乙酸铅溶液, 超声 5 min, 4000 r/min 离心 5 min; 取上清液 10 ml 待净化 冰淇淋基质称取 2 g 样品, 加入 10 ml 丙酮 / 正己烷 (1:9,V/V), 涡旋混合 1 min; 再依次加入 10 ml 丙酮 / 正己烷 (1:9,V/ V),4 g 氯化钠,2 ml 200 g/l 乙酸铅溶液, 超声 5 min, 4000 r/min 离心 5 min; 取上清液 10 ml 待净化 奶粉基质称取 2 g 样品, 加入 10 ml 水溶解, 再加入 10 ml 丙酮 / 正己烷 (1:9,V/V), 涡旋混合 1 min; 再依次加入 10 ml 丙酮 / 正己烷 (1:9,V/V),4 g 氯化钠,2 ml 200 g/l 乙酸铅溶液, 超声 5 min,4000 r/min 离心 5 min; 取上清液 10 ml 待净化 1.2 样品净化将上述待净化液加入到 QuEChERS 净化管 ( 货号 :MS- MP01) 中, 涡旋混合 1 min,4000 r/min 离心 5 min, 取 5 ml 上清液,40 氮气吹至 0.5 ml, 用正己烷溶解定容至, 取上层清液过 0.22 µm 针式过滤器, 供气相色谱检测 2. 检测方法 气相柱 :DA-5,30 m 0.32 mm 0.25 µm; 流速 :3.5 ml/min 检测器温度 :330 进样口温度 :250, 不分流进样量 :1 µl 检测器 :µecd 升温程序 : 初温 110, 保持 0.5 min, 以 15 /min 的速率, 升至 320, 保持 5 min 3. 实验结果 表 1 QuEChERS- 乳制品中有机氯加标回收实验结果 ( 添加水平牛奶为 0.01 mg/kg, 奶粉为 0.05 mg/kg, 冰淇淋为 0.05 mg/kg) 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 牛奶 奶粉 冰淇淋 牛奶 奶粉 冰淇淋 α- 六六六 β- 六六六 δ- 六六六 γ- 六六六 ,4- 滴滴涕 ,4- 滴滴涕 ,4- 滴滴伊 ,4- 滴滴滴 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

23 图 μg/ml 混合标准工作溶液气相色谱图 图 mg/kg 牛奶基质加标气相色谱图 图 2 牛奶基质空白气相色谱图 图 mg/kg 奶粉基质加标气相色谱图 图 3 奶粉基质空白气相色谱图 图 mg/kg 冰淇淋基质加标气相色谱图 4. 结论 图 4 冰淇淋基质空白气相色谱图 本实验建立了乳制品中有机氯的 QuEChERS 前处理方法, 并结合高效液相对乳制品中有机氯的含量进行了测定 对于加标量为 0.01 mg/kg 的牛奶,0.05 mg/kg 的奶粉 冰淇淋进行了检测,QuEChERS 的平均回收率在 60% ~ 105%, RSD 小于 15%, 符合要求,QuEChERS 方法稳定并且气相柱重现性良好, 说明此方法能够用于检测乳制品中有机氯的残留量 017

24 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 DA-5 30 m 0.32 mm 0.25 µm,1 支 QuEChERS 净化管 15 ml 离心管,50 支 / 包 MS-MP ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm,100/pk 针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 μm,200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 正己烷 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH216-4 丙酮 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 018 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

25 牛奶中有机氯残留量的测定 GC-ECD 法 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取 10 g 样品, 加入 10 ml 丙酮 / 正己烷 (1:9,V/V), 涡旋混合 1 min; 再依次加入 10 ml 丙酮 / 正己烷 (1:9,V/ V),4 g 氯化钠,2 ml 200 g/l 乙酸铅溶液, 涡旋振荡混合 5 min,4000 r/min 离心 5 min, 取上清液 10 ml 待净化 1.2 样品净化 SPE 方法取 Cleanert Florisil 固相萃取柱 (1000 mg/6 ml), 用 10 ml 丙酮 / 正己烷 (1:9,V/V) 活化小柱 ; 将上述待净化液倒入 SPE 固相萃取柱中, 收集流出液 ; 最后用 5 ml 丙酮 / 正己烷 (1:9, V/V) 洗脱, 收集,40 氮气吹至 0.5 ml, 用正己烷溶解定容至, 取上层清液过 0.22 µm 针式过滤器, 供气相色谱检测 QuEChERS 方法将上述待净化液加入到 QuEChERS 净化管中, 涡旋混合 1 min,4000 r/min 离心 5 min, 取 5 ml 上清液,40 氮气吹至 0.5 ml, 用正己烷溶解定容至, 取上层清液过 0.22 µm 针式过滤器, 供气相色谱检测 2. 检测方法 气相柱 :DA-5MS,30 m 0.32 mm 0.25 µm; 流速 :3.5 ml/min 检测器温度 :330 进样口温度 :250, 不分流进样量 :1 µl 检测器 :µecd 升温程序表 : 初温 110, 保持 0.5 min, 以 15 /min 的速率, 升至 320, 保持 5 min 3. 实验结果 表 1 牛奶中有机氯加标回收实验结果 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 保留时间 /min SPE QuEChERS SPE QuEChERS α- 六六六 β- 六六六 δ- 六六六 γ- 六六六 ,4- 滴滴涕 ,4- 滴滴涕 ,4- 滴滴伊 ,4- 滴滴滴

26 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 4. 结论 图 μg/ml 混合标准工作溶液气相色谱图 本实验建立了牛奶中有机氯的前处理方法, 并结合 GC- ECD 对牛奶中有机氯的含量进行了测定 对于加标量为 0.01 mg/kg 和 0.04 mg/kg 的样品进行了检测, 两种方法平均回收率在 60% ~ 105%,RSD 小于 10%, 符合要求 两种方法均很稳定并且气相柱重现性良好, 说明两种方法均能够用于检测牛奶中有机氯的残留量 5. 订货信息 图 2 SPE- 牛奶基质空白气相色谱图 图 3 QuEChERS- 牛奶基质空白气相色谱图 产品名称 规格包装 订货号 DA-5MS 30 m 0.32 mm 0.25 µm,1 支 Cleanert Florisil 1000 mg/6 ml,30 支 /pk FS0006 QuEChERS 净化管 15 ml 离心管,50 支 / 包 MS-MP ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 μm, 200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 正己烷 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH216-4 丙酮 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH010-4 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 4 通道 24 位,1 台 SPE 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 图 4 SPE-0.01 mg/kg 牛奶基质加标气相色谱图 图 5 QuEChERS-0.04 mg/kg 牛奶基质加标气相色谱图 020 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

27 (EN 法 ) QuEChERS 净化包用于油麦菜中 105 种农药多残留的 检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取 10 g 已均质好的油麦菜样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 10 ml 乙腈, 加入 4 颗玻璃珠均质子, 再加入 MAS-Q 提取包 (MS-NMS5050), 剧烈震荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液 做为待净化液 1.2 样品净化 将上述 待净化液加入 MAS-QuEChERS 净化管 (MS- 9PP0265) 中, 涡旋振荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液适量过 0.22 µm 针式过滤器, 供 LC-MS/MS 检测 2. 检测方法 2.1 色谱条件 色谱柱 :Venusil ASB C18, 5 μm,150 Å, mm 流动相 :A: 0.1% 甲酸水溶液 ;B: 0.1% 甲酸乙腈, 使用前经微孔滤膜过滤柱温 :30 进样量 :10 µl 梯度洗脱 : 见表 质谱条件 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /(ml/min) A/% B/% 离子源 :ESI+; 电喷雾电压 :5500 V; 雾化气压力 : 50 psi; 气帘气压力 :15 psi; 辅助气压力 :50 psi; 离子源温度 :400 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 3. 实验结果 表 2 油麦菜基质加标回收实验结果 ( 添加水平 0.05 mg/kg) 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 氧环唑 (Azaconazole) 氟唑磺隆 (Flucarbazone-sodium) 甲基吡恶磷 (Azamethiphos) 氟吡菌胺 (Fluopicolide) 四唑嘧磺隆 (Azimsulfuron) 氟吡乙禾灵 (Haloxyfop-R-methyl) 地散磷 (Bensulide) 硫环磷 (Phosfolan) 唑草胺 / 苯酮唑 (Cafenstrole) 异丙草胺 (Propisochlor) 氯草敏 (Chloridazon) 烯禾定 (Sethoxydim) 氯嘧磺隆 (Chlorimuron-ethyl) 乙基多杀菌素 (Spinetoram) 枯草隆 (Chloroxuron) 螺甲螨酯 (Spiromesifen) 吲哚酮草酯 (Cinidon-ethyl) 螺虫乙酯 (Spirotetramat) 醚黄隆 (Cinosulfuron) 双硫磷 (Temephos) 四螨嗪 (Clofentezine) 鱼藤酮 (Rotenone) 二苯隆 (Cumyluron) 啶虫脒 (Acetamiprid) 环丙嘧磺隆 (Cyclosulfamuron) 涕灭威 (Aldicarb)

28 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 除虫脲 (Diflubenzuron) 涕灭砜威 (Aldicarb-sulfone) 吡氟酰草胺 (Diflufenican) 涕灭威亚砜 (Aldicarb-sulfoxide) 呋虫胺 (Dinotefuran) 嘧菌酯 (Azoxystrobin) 乙虫腈 (Ethiprole) 啶酰菌胺 (Boscalid) 苯线磷 (Fenamiphos) 多菌灵 (Carbendazim) 腈苯唑 (Fenbuconazole) 羟基克百威 (Carbofuran-3-hydroxy) 丰索磷 (Fensulfothion) 灭幼脲 (Chlorbenzuron) 氟噻甲草酯 (Fluthiacet-Methyl) 噻虫胺 (Clothianidin) 氯吡脲 (Forchlorfenuron) 氰草津 (Cyanazine) 福拉比 (Furametpyr) 霜脲氰 (Cymoxanil) 氯吡嘧磺隆 (Halosulfuron Methyl) 乐果 (Dimethoate) 氟铃脲 (Hexaflumuron) 敌瘟磷 (Edifenphos) 咪草酸甲酯 (Imazamethabenz Methyl) 环酰菌胺 (Fenhexamid) 亚胺唑 (Imibenconazole) 苯氧威 (Fenoxycarb) 异噁隆 (Isouron) 唑螨酯 (Fenpyroximate) 双苯恶唑酸 (Isoxadifen-Ethyl) 氟虫脲 (Flufenoxuron) 噁唑磷 (Isoxathion) 氟线威 (Furathiocarb) 氟吗啉 (Flumorph) 抑霉唑 (Imazalil) 氟啶虫酰胺 (Flonicamid) 茚虫威 (Indoxacarb) 双炔酰菌胺 (Mandipropamid) 缬霉威 (Iprovalicarb) 环草定 (Lenacil) 异丙隆 (Isoproturon) 苯噻酰草胺 (Mefenacet) 利谷隆 (Linuron) 氧化萎锈灵 (Oxycarboxin) 苯嗪草酮 (Metamitron) 戊菌隆 (Pencycuron) 甲硫威 (Methiocarb) 吡唑硫磷 (Pyraclofos) 甲氧虫酰肼 (Methoxyfenozide) 吡唑醚菌酯 (Pyraclostrobin) 异丙甲草胺 (Metolachlor) 苄草唑 (Pyrazoxyfen) 氧乐果 (Omethoate) 乙黄隆 (Sulfosulfuron) 磷胺 (Phosphamidon) 丁噻隆 (Tebuthiuron) 咪鲜胺 (Prochloraz) 噻苯隆 (Thidiazuron) 猛杀威 (Promecarb) 三甲苯草酮 (Tralkoxydim) 喹禾灵 (Quizalofop-ethyl) 杀铃脲 (Triflumuron) 虫酰肼 (Tebufenozide) 酰嘧磺隆 (Amidosulfuron) 噻菌灵 (Thiabendazole) 仲丁灵 (Butralin) 硫双灭多威 (Thiodicarb) 氯虫苯甲酰胺 (Chlorantraniliprole) 久效威砜 (Thiofanox-sulfone) 绿麦隆 (Chlortoluron) 久效威亚砜 (Thiofanox-sulfoxide) 蝇毒磷 (Coumaphos) 醚苯磺隆 (Triasulfuron) 内吸磷 (Demeton2) 敌百虫 (Trichlorfon) 双氟磺草胺 (Florasulam) 蚜灭磷 (Vamidothion) 氟虫双酰胺 (Flubendiamide) 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

29 4. 结论 本实验根据 EN , 结合高效液相色谱串联质谱方法进行测定, 对加标量为 0.05 mg/kg 的油麦菜样品进行了检测 结果表明,105 种农药加标回收率在 60% ~ 120%,RSD 小于 20% QuEChERS 方法较传统方法更为简便, 样品处理时间短, 可以用于测定油麦菜中的农药残留 图 μg/ml 混合标准工作溶液 LC-MS/MS 色谱图 5. 订货信息 产品名称规格包装订货号 图 2 油麦菜基质空白 LC-MS/MS 色谱图 图 μg/ml 油麦菜基质混合标准工作液 LC-MS/MS 色谱图 蔬菜水果农残检测 MAS-Q 提取管 50 ml 离心管,50 支 / 包 MS-NMS5050 含色素基质蔬菜水果农残检测 MAS-Q 2 ml 离心管,100 支 / 包 MS-9PP0265 净化管 玻璃珠均质子 直径 10 mm,50 个 / 包 HG-01 Venusil ASB C18 5 μm,150å, mm, 1 支 VS 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;2.1 10mm, 4 支 / 包 DC LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 尼龙针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 µm,200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH015-4 图 mg/kg 油麦菜基质加标 LC-MS/MS 色谱图 023

30 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (EN 法 ) QuEChERS 净化包用于白菜中 105 种农药多残留的 检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取 10 g 已均质好的白菜样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 10 ml 乙腈, 加入 4 颗玻璃珠均质子, 再加入 MAS-Q 提取包 (MS-NMS5050), 剧烈震荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液 做为待净化液 1.2 样品净化 将上述 待净化液加入 MAS-QuEChERS 净化管 (MS- PA0251) 中, 涡旋振荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液适量过 0.22 µm 针式过滤器, 供 LC-MS/MS 检测 2. 检测方法 2.1 色谱条件 色谱柱 :Venusil ASB C18, 5 μm,150 Å, mm 流动相 :A: 0.1% 甲酸水溶液 ;B: 0.1% 甲酸乙腈, 使用前经微孔滤膜过滤 柱温 :30 进样量 :10 µl 梯度洗脱 : 见表 1 时间 /min 流速 /(ml/min) A/% B/% 质谱条件 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 离子源 :ESI+; 电喷雾电压 :5500 V; 雾化气压力 :50 psi; 气帘气压力 15 psi; 辅助气压力 :50 psi; 离子源温度 : 400 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 3. 实验结果 表 2 白菜基质加标回收实验结果 ( 添加水平 0.05 mg/kg) 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 氧环唑 (Azaconazole) 氟唑磺隆 (Flucarbazone-sodium) 甲基吡恶磷 (Azamethiphos) 氟吡菌胺 (Fluopicolide) 四唑嘧磺隆 (Azimsulfuron) 氟吡乙禾灵 (Haloxyfop-R-methyl) 地散磷 (Bensulide) 硫环磷 (Phosfolan) 唑草胺 / 苯酮唑 (Cafenstrole) 异丙草胺 (Propisochlor) 氯草敏 (Chloridazon) 烯禾定 (Sethoxydim) 氯嘧磺隆 (Chlorimuron-ethyl) 乙基多杀菌素 (Spinetoram) 枯草隆 (Chloroxuron) 螺甲螨酯 (Spiromesifen) 吲哚酮草酯 (Cinidon-ethyl) 螺虫乙酯 (Spirotetramat) 醚黄隆 (Cinosulfuron) 双硫磷 (Temephos) 四螨嗪 (Clofentezine) 鱼藤酮 (Rotenone) 二苯隆 (Cumyluron) 啶虫脒 (Acetamiprid) 环丙嘧磺隆 (Cyclosulfamuron) 涕灭威 (Aldicarb) 除虫脲 (Diflubenzuron) 涕灭砜威 (Aldicarb-sulfone) 吡氟酰草胺 (Diflufenican) 涕灭威亚砜 (Aldicarb-sulfoxide) 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

31 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 呋虫胺 (Dinotefuran) 嘧菌酯 (Azoxystrobin) 乙虫腈 (Ethiprole) 啶酰菌胺 (Boscalid) 苯线磷 (Fenamiphos) 多菌灵 (Carbendazim) 腈苯唑 (Fenbuconazole) 羟基克百威 (Carbofuran-3-hydroxy) 丰索磷 (Fensulfothion) 灭幼脲 (Chlorbenzuron) 氟噻甲草酯 (Fluthiacet-Methyl) 噻虫胺 (Clothianidin) 氯吡脲 (Forchlorfenuron) 氰草津 (Cyanazine) 福拉比 (Furametpyr) 霜脲氰 (Cymoxanil) 氯吡嘧磺隆 (Halosulfuron Methyl) 乐果 (Dimethoate) 氟铃脲 (Hexaflumuron) 敌瘟磷 (Edifenphos) 咪草酸甲酯 (Imazamethabenz Methyl) 环酰菌胺 (Fenhexamid) 亚胺唑 (Imibenconazole) 苯氧威 (Fenoxycarb) 异噁隆 (Isouron) 唑螨酯 (Fenpyroximate) 双苯恶唑酸 (Isoxadifen-Ethyl) 氟虫脲 (Flufenoxuron) 噁唑磷 (Isoxathion) 氟线威 (Furathiocarb) 氟吗啉 (Flumorph) 抑霉唑 (Imazalil) 氟啶虫酰胺 (Flonicamid) 茚虫威 (Indoxacarb) 双炔酰菌胺 (Mandipropamid) 缬霉威 (Iprovalicarb) 环草定 (Lenacil) 异丙隆 (Isoproturon) 苯噻酰草胺 (Mefenacet) 利谷隆 (Linuron) 氧化萎锈灵 (Oxycarboxin) 苯嗪草酮 (Metamitron) 戊菌隆 (Pencycuron) 甲硫威 (Methiocarb) 吡唑硫磷 (Pyraclofos) 甲氧虫酰肼 (Methoxyfenozide) 吡唑醚菌酯 (Pyraclostrobin) 异丙甲草胺 (Metolachlor) 苄草唑 (Pyrazoxyfen) 氧乐果 (Omethoate) 乙黄隆 (Sulfosulfuron) 磷胺 (Phosphamidon) 丁噻隆 (Tebuthiuron) 咪鲜胺 (Prochloraz) 噻苯隆 (Thidiazuron) 猛杀威 (Promecarb) 三甲苯草酮 (Tralkoxydim) 喹禾灵 (Quizalofop-ethyl) 杀铃脲 (Triflumuron) 虫酰肼 (Tebufenozide) 酰嘧磺隆 (Amidosulfuron) 噻菌灵 (Thiabendazole) 仲丁灵 (Butralin) 硫双灭多威 (Thiodicarb) 氯虫苯甲酰胺 (Chlorantraniliprole) 久效威砜 (Thiofanox-sulfone) 绿麦隆 (Chlortoluron) 久效威亚砜 (Thiofanox-sulfoxide) 蝇毒磷 (Coumaphos) 醚苯磺隆 (Triasulfuron) 内吸磷 (Demeton2) 敌百虫 (Trichlorfon) 双氟磺草胺 (Florasulam) 蚜灭磷 (Vamidothion) 氟虫双酰胺 (Flubendiamide)

32 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 4. 结论 本实验根据 EN , 结合高效液相色谱串联质谱方法进行测定, 对加标量为 0.05 mg/kg 的白菜样品进行了检测 结果表明,105 种农药加标回收率在 60% ~ 120%,RSD 小于 20% QuEChERS 方法较传统方法更为简便, 样品处理时间短, 可以用于测定白菜中的农药残留 图 μg/ml 混合标准工作溶液 LC-MS/MS 色谱图 5. 订货信息 产品名称规格包装订货号 图 2 白菜基质空白 LC-MS/MS 色谱图 图 μg/ml 白菜基质混合标准工作液 LC-MS/MS 色谱图 蔬菜水果农残检测 MAS-Q 提取包 50 ml 离心管,50 支 / 包 MS-NMS5050 简单基质蔬菜水果农残检测 MAS-Q 2 ml 离心管,100 支 / 包 MS-PA0251 净化管 玻璃珠均质子 直径 10 mm,50 个 / 包 HG-01 Venusil ASB C18 5 μm,150å, mm, 1 支 VS 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;2.1 10mm, 4 支 / 包 DC LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 尼龙针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 µm,200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH015-4 图 mg/kg 白菜基质加标 LC-MS/MS 色谱图 026 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

33 (EN ) 韭菜中 105 种农药的测定 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取 10 g 已均质好的韭菜样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 10 ml 乙腈, 加入 4 颗玻璃珠均质子, 再加入 MAS-Q 提取包 (MS-NMS5050), 剧烈震荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液 做为待净化液 1.2 样品净化 将上述 待净化液加入 MAS-QuEChERS 净化管 (MS- 9PP0265) 中, 涡旋振荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液适量过 0.22 µm 针式过滤器, 供 LC-MS/MS 检测 2. 检测方法 2.1 色谱条件 色谱柱 :Venusil ASB C18,5 μm,150 Å, mm 流动相 :A: 0.1% 甲酸水溶液 ;B: 0.1% 甲酸乙腈, 使用前经微孔滤膜过滤 柱温 :30 进样量 :10 µl 梯度洗脱 : 见表 1 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /(ml/min) A/% B/% 质谱条件 离子源 :ESI+; 电喷雾电压 :5500 V; 雾化气压力 : 50 psi; 气帘气压力 :15 psi; 辅助气压力 :50 psi; 离子源温度 :400 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 3. 实验结果 表 2 韭菜基质加标回收实验结果 ( 添加水平 0.05 mg/kg) 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 氧环唑 (Azaconazole) 氟唑磺隆 (Flucarbazone-sodium) 甲基吡恶磷 (Azamethiphos) 氟吡菌胺 (Fluopicolide) 四唑嘧磺隆 (Azimsulfuron) 氟吡乙禾灵 (Haloxyfop-R-methyl) 地散磷 (Bensulide) 硫环磷 (Phosfolan) 唑草胺 / 苯酮唑 (Cafenstrole) 异丙草胺 (Propisochlor) 氯草敏 (Chloridazon) 烯禾定 (Sethoxydim) 氯嘧磺隆 (Chlorimuron-ethyl) 乙基多杀菌素 (Spinetoram) 枯草隆 (Chloroxuron) 螺甲螨酯 (Spiromesifen) 吲哚酮草酯 (Cinidon-ethyl) 螺虫乙酯 (Spirotetramat) 醚黄隆 (Cinosulfuron) 双硫磷 (Temephos) 四螨嗪 (Clofentezine) 鱼藤酮 (Rotenone) 二苯隆 (Cumyluron) 啶虫脒 (Acetamiprid) 环丙嘧磺隆 (Cyclosulfamuron) 涕灭威 (Aldicarb) 除虫脲 (Diflubenzuron) 涕灭砜威 (Aldicarb-sulfone) 吡氟酰草胺 (Diflufenican) 涕灭威亚砜 (Aldicarb-sulfoxide) 呋虫胺 (Dinotefuran) 嘧菌酯 (Azoxystrobin)

34 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 物质名称 平均回收率 /% RSD/% 乙虫腈 (Ethiprole) 啶酰菌胺 (Boscalid) 苯线磷 (Fenamiphos) 多菌灵 (Carbendazim) 腈苯唑 (Fenbuconazole) 羟基克百威 (Carbofuran-3-hydroxy) 丰索磷 (Fensulfothion) 灭幼脲 (Chlorbenzuron) 氟噻甲草酯 (Fluthiacet-Methyl) 噻虫胺 (Clothianidin) 氯吡脲 (Forchlorfenuron) 氰草津 (Cyanazine) 福拉比 (Furametpyr) 霜脲氰 (Cymoxanil) 氯吡嘧磺隆 (Halosulfuron Methyl) 乐果 (Dimethoate) 氟铃脲 (Hexaflumuron) 敌瘟磷 (Edifenphos) 咪草酸甲酯 (Imazamethabenz Methyl) 环酰菌胺 (Fenhexamid) 亚胺唑 (Imibenconazole) 苯氧威 (Fenoxycarb) 异噁隆 (Isouron) 唑螨酯 (Fenpyroximate) 双苯恶唑酸 (Isoxadifen-Ethyl) 氟虫脲 (Flufenoxuron) 噁唑磷 (Isoxathion) 氟线威 (Furathiocarb) 氟吗啉 (Flumorph) 抑霉唑 (Imazalil) 氟啶虫酰胺 (Flonicamid) 茚虫威 (Indoxacarb) 双炔酰菌胺 (Mandipropamid) 缬霉威 (Iprovalicarb) 环草定 (Lenacil) 异丙隆 (Isoproturon) 苯噻酰草胺 (Mefenacet) 利谷隆 (Linuron) 氧化萎锈灵 (Oxycarboxin) 苯嗪草酮 (Metamitron) 戊菌隆 (Pencycuron) 甲硫威 (Methiocarb) 吡唑硫磷 (Pyraclofos) 甲氧虫酰肼 (Methoxyfenozide) 吡唑醚菌酯 (Pyraclostrobin) 异丙甲草胺 (Metolachlor) 苄草唑 (Pyrazoxyfen) 氧乐果 (Omethoate) 乙黄隆 (Sulfosulfuron) 磷胺 (Phosphamidon) 丁噻隆 (Tebuthiuron) 咪鲜胺 (Prochloraz) 噻苯隆 (Thidiazuron) 猛杀威 (Promecarb) 三甲苯草酮 (Tralkoxydim) 喹禾灵 (Quizalofop-ethyl) 杀铃脲 (Triflumuron) 虫酰肼 (Tebufenozide) 酰嘧磺隆 (Amidosulfuron) 噻菌灵 (Thiabendazole) 仲丁灵 (Butralin) 硫双灭多威 (Thiodicarb) 氯虫苯甲酰胺 (Chlorantraniliprole) 久效威砜 (Thiofanox-sulfone) 绿麦隆 (Chlortoluron) 久效威亚砜 (Thiofanox-sulfoxide) 蝇毒磷 (Coumaphos) 醚苯磺隆 (Triasulfuron) 内吸磷 (Demeton2) 敌百虫 (Trichlorfon) 双氟磺草胺 (Florasulam) 蚜灭磷 (Vamidothion) 氟虫双酰胺 (Flubendiamide) 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

35 4. 结论 本实验根据 EN , 结合高效液相色谱串联质谱方法进行测定, 对加标量为 0.05 mg/kg 的韭菜样品进行了检测 结果表明,105 种农药加标回收率在 60% ~ 120%,RSD 小于 20% QuEChERS 方法较传统方法更为简便, 样品处理时间短, 可以用于测定韭菜中的农药残留 图 μg/ml 混合标准工作溶液 LC-MS/MS 色谱图 5. 订货信息 产品名称规格包装订货号 图 2 韭菜基质空白 LC-MS/MS 色谱图 图 μg/ml 韭菜基质混合标准工作液 LC-MS/MS 色谱图 蔬菜水果农残检测 MAS-Q 提取管 50 ml 离心管,50 支 / 包 MS-NMS5050 含色素基质蔬菜水果农残检测 MAS-Q 2 ml 离心管,100 支 / 包 MS-9PP0265 净化管 玻璃珠均质子 直径 10 mm,50 个 / 包 HG-01 Venusil ASB C18 5 μm,150å, mm, 1 支 VS 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;2.1 10mm, 4 支 / 包 DC LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 尼龙针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 µm, 200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH015-4 图 mg/kg 韭菜基质加标 LC-MS/MS 色谱图 029

36 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (AOAC ) 橙子中 12 种有机氯农药残留的快速分析方法 1. 样品前处理方法 应用编号 :AF 样品提取 称取 10 g 已均质好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 15 ml 1% 酸化乙腈, 加入 4 颗玻璃珠均质子, 再加入 MAS-Q 提取包 ( 方法 1:MS-MG5052, 方法 2:MS-NMS5050), 剧烈震荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液 10 ml 做为待净化液 图 μg/ml 混合标准工作溶液 GC-ECD 色谱图 1.2 样品净化 将上述 10 ml 待净化液加入到 MAS-Q 净化管中 (MS- 9PA1011), 涡旋振荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液 2 ml 于 40 下氮吹至近干, 后用丙酮定容至, 并用 0.22 µm 尼龙针式过滤器过滤, 供 GC-ECD 检测 2. 检测方法 色谱柱 :DA-5MS 色谱柱,30 m 0.25 mm 0.25 µm; 进样口温度 :250 ; 柱温 : 初温 110, 保持 0.5 min, 然后以 15 /min 升至 320, 保持 5 min; 载气 : 氮气, 纯度 % 流速 :3.5 ml/min; 进样方式 : 不分流进样 ; 进样量 :1 µl 图 2 橙子基质未净化 GC-ECD 色谱图 ( 方法 1) 图 3 橙子基质空白 GC-ECD 色谱图 ( 方法 1) 3. 实验结果 表 1 橙子基质加标回收实验结果 ( 添加水平 mg/kg) 物质名称 保留时间 /min 平均回收率 /% 方法 1 方法 2 RSD /% 平均回收率 /% RSD /% α- 六六六 β- 六六六 γ- 六六六 δ- 六六六 七氯 艾氏剂 p,p`dde o,p`ddt 异狄氏剂 p,p`ddd β- 硫丹 p,p`ddt 图 μg/ml 橙子基质混合标准工作液 GC-ECD 色谱图 ( 方法 1) 图 mg/kg 橙子基质加标 GC-ECD 色谱图 ( 方法 1) 030 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

37 5. 订货信息 产品名称规格包装订货号 蔬菜水果农残检测 MAS-Q 提取管 50 ml 离心管,50 支 / 包 MS-MG5052 图 6 橙子基质未净化 GC-ECD 色谱图 ( 方法 2) 图 7 橙子基质空白 GC-ECD 色谱图 ( 方法 2) 蔬菜水果农残检测 MAS-Q 提取管 50 ml 离心管,50 支 / 包 MS-NMS5050 含脂类及蛋白质蔬菜水果农残检测 15 ml 离心管,50 支 / 包 MS-9PA1011 MAS-Q 净化管 DA-5MS 30 m 0.25 mm 0.25 µm,1 支 玻璃珠均质子 直径 10 mm,50 个 / 包 HG ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 尼龙针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 µm, 200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH015-4 图 μg/ml 橙子基质混合标准工作液 GC-ECD 色谱图 ( 方法 2) 图 mg/kg 橙子基质加标 GC-ECD 色谱图 ( 方法 2) 4. 结论 本实验依据 AOAC 和 EN , 采用基质分散并结合 GC-ECD 对橙子中 12 种有机氯农药残留进行了测定 实验结果表明, 这两种方法都能对橙子基质进行良好的净化和检测, 当加标浓度为 mg/kg 时, 方法 1 中 12 种有机氯农药的回收率在 68% ~ 89% 之间,RSD 在 9% 以内 ; 方法 2 中 12 种农药的回收率在 86% ~ 102%,RSD 在 18% 以内, 两种方法都能满足检测要求 031

38 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (AOAC ) 黄瓜中 12 种有机氯农药残留的快速分析方法 1. 样品前处理 1.1 样品提取 称取 10 g 已均质好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 15 ml 1% 酸化乙腈, 加入 4 颗玻璃珠均质子, 再加入 MAS-Q 提取包 (MS-MG5052), 剧烈震荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液 10 ml 做为待净化液 应用编号 :AF 样品净化 将上述 10 ml 待净化液加入 MAS-Q 净化管中 (MS- PA1012), 涡旋振荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液 2 ml 于 40 下氮吹至近干, 后用丙酮溶解定容至, 并用 0.22 µm 尼龙针式过滤器过滤, 供 GC-ECD 检测 图 μg/ml 混合标准工作溶液 GC-ECD 色谱图 2. 检测方法 色谱柱 :DA-5MS 色谱柱,30 m 0.25 mm 0.25 µm; 进样口温度 :250 ; 柱温 : 初温 110, 保持 0.5 min, 然后以 15 /min 升至 320, 保持 5 min; 载气 : 氮气, 纯度 % 流速 :3.5 ml/min; 进样方式 : 不分流进样 ; 进样量 :1 µl 图 2 黄瓜基质未净化 GC-ECD 色谱图 3. 实验结果 表 1 黄瓜基质加标回收实验结果 ( 添加水平 mg/kg) 物质名称 保留时间 /min 平均回收率 /% RSD/% α- 六六六 β- 六六六 γ- 六六六 δ- 六六六 七氯 艾氏剂 OP-DDT PP-DDT 异狄氏剂 PP-DDE β- 硫丹 PP-DDD 图 3 黄瓜基质空白 GC-ECD 色谱图 图 μg/ml 黄瓜基质混合标准工作液 GC-ECD 色谱图 032 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

39 5. 订货信息 产品名称规格包装订货号 4. 结论 图 mg/kg 黄瓜基质加标 GC-ECD 色谱图 本实验依据 AOAC , 采用基质分散并结合 GC- ECD 对黄瓜中 12 种有机氯农药残留进行了测定 实验结果表明, 当加标浓度为 mg/kg 时, 目标物的回收率在 48% ~ 97% 之间,RSD 在 15% 以内, 满足检测要求 蔬菜水果农残检测 MAS-Q 提取管 50 ml 离心管,50 支 / 包 MS-MG5052 简单基质蔬菜水果农残检测 MAS-Q 15 ml 离心管,50 支 / 包 MS-PA1012 净化管 DA-5MS 30 m 0.25 mm 0.25 µm, 1 支 玻璃珠均质子 直径 10 mm,50 支 / 包 HG ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 尼龙针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 µm, 200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH

40 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (AOAC ) 大米中有机氯 有机磷农药残留的快速分析方法 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取 10 g 已均质好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 15 ml 乙腈后剧烈震荡 1 min, 加入 MAS-Q 提取包 (MS- MG5052), 剧烈震荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液 做为待净化液 1.2 样品净化 将上述 待净化液加入到 MAS-Q 净化管 (MS- 9PA0203), 剧烈振荡 1 min,8000 r/min 离心 5 min, 取上层清液 0.5 ml 于 40 下氮吹至近干, 后用正己烷 ( 丙酮 ) 溶解定容至 0.5 ml, 并用 0.22 µm 尼龙针式过滤器过滤, 供 GC-MS 检测 2. 检测方法 色谱柱 :DA-5MS 色谱柱,30 m 0.25 mm 0.25 µm; 进样口温度 :250 ; 程序升温 1( 有机氯农残 ): 初温 70, 然后以 20 / min 升至 150, 再以 10 /min 升至 220, 保持 5 min, 最后以 5 /min 升至 280 ; 程序升温 2( 有机磷农残 ): 初温 50, 保持 2 min, 然后以 10 /min 升至 180, 保持 1 min, 再以 3 /min 升至 250, 保持 1 min, 最后以 10 /min 升至 280, 保持 2 min; 载气 : 氮气, 纯度 % 流速 :3.5 ml/min; 进样方式 : 不分流进样 ; 进样量 :1 µl 表 1 有机氯 有机磷农药的选择离子及其相对丰度 序号 农药 定量离子 (m/z) 定性离子 (m/z) 丰度比 1 α- 六六六 ,219, /96/81.9/64 2 β- 六六六 ,183, /99.9/98.1/ γ- 六六六 ,219, /97.1/77.9/ δ- 六六六 ,219, /95.4/82.8/ 七氯 , /65.8/ 艾氏剂 66 99,79, /57.4/52.9/50 7 p,p`dde , /66.2/ 狄氏剂 79 81,82, /44.1/ 异狄试剂 81 67,79, /75.9/67.7/56 10 β- 硫丹 ,159, /69.8/60/55 11 o,p`ddt p,p`ddd , /64/ p,p`ddt , /63.5/44 13 敌敌畏 ,79 100/27.6/25 14 敌百虫 , /61.7/ 虫线磷 , /84.2/ 异吸硫磷 88 60, /60.3 / 灭线磷 , /53/54 18 百治磷 ,109, /63.2/25.5/ 甲拌磷 ,97 100/41/ 乐果 87 58,93, /100/30 21 地虫硫磷 , /47.1/ 二嗪磷 ,152, /88/64.8/ 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

41 序号 农药 定量离子 (m/z) 定性离子 (m/z) 丰度比 23 乙拌磷 88 90,97,61 100/96/35.5/ 异稻温净 ,123, /100/17/13 25 甲基毒死蜱 , /69.2/ 甲基对硫磷 ,79, /93.1/88.7/ 对氧磷 , /100/ 杀螟硫磷 ,277, /100/71.7/ 毒死稗 ,199, /100/93.9/ 倍硫磷 , /38.1/ 溴硫磷 , /76/ 嘧啶磷 ,304, /97.9/77/ 灭蚜磷 ,159, /95.5/59.1/58 34 巴毒磷 ,193, /82.1/42.9/ 乙基溴硫磷 , /71.2/59 36 丙虫磷 , /81.7/ 乙拌磷砜 ,97, /71.1/73.5/55 38 灭菌磷 , /49.6/ 抑草磷 , /87.4/ 丙溴磷 ,208, /92.8/100/ 乙硫磷 ,153, /77.5/65.2/ 三唑磷 ,172, /95.7/54.3/ 硫丙磷 , /97.2/ 亚胺硫磷 ,93, /41.2/37.9/ 实验结果 表 2 大米基质有机氯农药加标回收实验结果 ( 添加水平 0.15 mg/kg) 物质名称 保留时间 /min 平均回收率 /% RSD/% α- 六六六 β- 六六六 γ- 六六六 δ- 六六六 七氯 艾氏剂 p,p`dde 狄氏剂 异狄试剂 β- 硫丹 o,p`ddt p,p`ddd p,p`ddt

42 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 表 3 大米基质有机磷农药加标回收实验结果 ( 添加水平 0.15 mg/kg) 物质名称 保留时间 /min 平均回收率 /% RSD/% 敌敌畏 敌百虫 虫线磷 异吸硫磷 灭线磷 百治磷 甲拌磷 乐果 地虫硫磷 二嗪磷 乙拌磷 异稻温净 甲基毒死蜱 甲基对硫磷 对氧磷 杀螟硫磷 毒死稗 倍硫磷 溴硫磷 嘧啶磷 灭蚜磷 巴毒磷 乙基溴硫磷 丙虫磷 乙拌磷砜 灭菌磷 抑草磷 丙溴磷 乙硫磷 三唑磷 硫丙磷 亚胺硫磷 莎稗磷 溴苯磷 吡菌磷 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

43 图 µg/ml( 六六六 DDT 除外 ) 有机氯农药混标的选择离子流色谱图 图 mg/kg 大米基质加标选择离子流色谱图 ( 有机氯农药 ) 图 2 大米基质空白的总离子流色谱图 图 µg/ml 有机磷农药混标的选择离子流色谱图 图 3 大米基质空白的选择离子流色谱图 ( 有机氯农药检测条件 ) 图 7 大米基质空白的选择离子流色谱图 ( 有机磷农药检测条件 ) 图 mg/kg 大米基质混合标准工作液选择离子流色谱图 ( 有机氯农药 ) 图 mg/kg 大米基质混合标准工作液选择离子流色谱图 ( 有机磷农药 ) 037

44 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 订货信息 产品名称规格描述订货号 4. 结论 图 mg/kg 大米基质加标选择离子流色谱图 ( 有机磷农药 ) 本实验依据 AOAC , 采用基质分散并结合 GC-MS 对大米中 13 种有机氯和 35 种有机磷农药残留进行了测定 实验结果表明, 当加标浓度为 0.15 mg/kg( 六六六 DDT 除外 ) 时, 农药的回收率在 83% ~ 115% 之间,RSD 在 15% 以内, 满足检测要求 蔬菜水果农残检测 MAS-Q 提取管 50 ml 离心管,50 支 / 包 MS-MG5052 蔬菜水果农残检测 MAS-Q 净化管 2 ml 离心管,100 支 / 包 MS-9PA0203 DA-5MS 色谱柱 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖尼龙针式过滤器 30 m 0.25 mm 0.25 µm,1 支 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 单膜,13 mm,0.22 µm,200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

45 (AOAC ) QuEChERS 方法用于草莓中 45 种农药的测定 LC-MS/MS 法 应用编号 AF 样品前处理 2. 检测方法 1.1 样品提取 称取 10 g 已均质好的草莓样品, 置于 50 ml QuEChERS 提取管中, 加入 10 ml 1% 乙酸乙腈 (V/V) 加入 4 颗玻璃珠均质子, 再加入 QuEChERS 提取包 (MS-MG5052), 剧烈震荡 1 min,6000 r/min 离心 5 min, 取上层清液 作为待净化液 1.2 样品净化取上述 的待净化液加入 QuEChERS 净化管 (MS- 9PP0265) 中, 振荡 1 min,6000 r/min 离心 5 min, 取适量上层清液, 用水以 1:2(V/V) 比例稀释, 混匀后供 LC-MS/ MS 检测 表 1. 液相色谱梯度洗脱条件 2.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, 3 µm,100 Å, mm; 流动相 :A 相 -5 mm 甲酸铵水溶液, B 相 -5 mm 甲酸铵甲醇溶液 ; 柱温 :30 ; 进样量 :5 µl; 梯度洗脱 ( 见表 1) 时间 /min 流速 /ml/min A/% B/% 质谱条件离子源 :ESI+; 电喷雾电压 :4500 V; 雾化气压力 :50 psi; 气帘气压力 :10 psi; 辅助气压力 :50 psi; 离子源温度 : 400 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 039

46 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 3. 实验结果 表 2. 草莓基质加标回收实验结果 ( 添加水平 0.03 mg/kg) 物质名称 保留时间 /min 平均回收率 /% 变异系数 /% 甲胺磷 Methamidophos 乙酰甲胺磷 Acephate 氧乐果 Omethoate 涕灭威亚砜 Aldicarb sulfoxide 涕灭威砜 Aldicarb Sulfone 灭多威 Methomyl 噻虫嗪 Thiamethoxam 吡虫啉 Imidacloprid 羟基克百威 3-Hydroxycarbofuran 敌敌畏 Dichlorvos 敌百虫 Trichlorfon 啶虫脒 Acetamiprid 乐果 Dimethoate 多菌灵 Carbendazim 涕灭威 Aldicarb 克百威 Carbofuran 甲萘威 Carbaryl 甲基异柳磷 Isofenphos-methyl 嘧菌酯 Azoxystrobin 亚胺硫磷 Phosmet 烯酰吗啉 Dimethomorph 马拉硫磷 Malathion 三唑酮 Triadimefon 嘧霉胺 Pyrimethanil 三唑磷 Triazophos 芬普尼 Fipronil 异菌脲 Iprodione 除虫脲 Diflubenzuron 水胺硫磷 Isocarbophos-H2O 灭幼脲 Chlorbenzuron 二嗪磷 Diazinon 倍硫磷 Fenthion 辛硫磷 Phoxim 伏杀硫磷 Phosalone 咪鲜胺 Prochloraz 甲拌磷 Phorate 苯醚甲环唑 Difenoconazole 丙溴磷 Profenofos 甲维盐 Emamectin B1a 甲氰菊酯 Fenpropathrin 毒死蜱 Chlorpyrifos 二甲戊灵 Pendimethalin 氟啶脲 Chlorfluazuron 哒螨灵 Pyridaben 联苯菊酯 Bifenthrin 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

47 5. 订货信息 产品名称规格描述订货号 图 μg/ml 45 种农药标样色谱图 蔬菜水果农残检测 MAS-Q 提取管蔬菜水果农残检测 MAS-Q 净化管 50 ml 离心管,50 支 / 包 MS-MG ml 离心管,100 支 / 包 MS-9PP0265 玻璃珠均质子直径 10 mm,50 个 / 包 HG-01 Venusil MP C18 3 µm,100 Å, mm,1 支 VA 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 3 μm,150å; mm,4 支 / 包 DC LS 图 2 草莓基质空白色谱图 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm,100/pk 图 3 草莓基质 0.03 mg/kg 加标色谱图 4. 结论 本实验根据 AOAC , 结合 LC-MS/MS 对于加标量为 0.03 mg/kg 的样品进行了检测 结果表明, 使用 QuEChERS 方法包对草莓基质进行净化,45 种农药中有 42 种农药回收率满足要求且变异系数小于 20% 说明该方法适用于草莓中 42 种农药的检测, 且方法稳定 041

48 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (AOAC ) QuEChERS 方法用于马铃薯中 45 种农药的测定 LC-MS/MS 法 1. 样品前处理 1.1 样品提取 称取 10 g 已均质好的马铃薯样品, 置于 50 ml QuEChERS 提取管中, 加入 10 ml 1% 乙酸乙腈 (V/V) 加入 4 颗玻璃珠均质子, 再加入 QuEChERS 提取包 (MS- MG5052), 剧烈震荡 1 min,6000 r/min 离心 5 min, 取上层清液 作为待净化液 1.2 样品净化将上述 待净化液加入 QuEChERS 净化管 (MS- 9PP0265) 中, 振荡 1 min,6000 r/min 离心 5 min, 取适量上层清液, 用水以 1:2(V/V) 比例稀释, 混匀后供 LC-MS/ MS 检测 2. 检测方法 应用编号 AF 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, 3 µm,100 Å, mm; 流动相 :A 相 -5 mm 甲酸铵水溶液, B 相 -5 mm 甲酸铵甲醇溶液 ; 柱温 :30 ; 进样量 :5 µl; 梯度洗脱 ( 见表 1) 表 1. 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /ml/min A/% B/% 质谱条件离子源 :ESI+; 电喷雾电压 :4500 V; 雾化气压力 :50 psi; 气帘气压力 :10 psi; 辅助气压力 :50 psi; 离子源温度 : 400 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 042 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

49 3. 实验结果 表 2. 马铃薯基质加标回收实验结果 ( 添加水平 0.03 mg/kg) 物质名称 保留时间 /min 平均回收率 /% 变异系数 /% 甲胺磷 Methamidophos 乙酰甲胺磷 Acephate 氧乐果 Omethoate 涕灭威亚砜 Aldicarb sulfoxide 涕灭威砜 Aldicarb Sulfone 灭多威 Methomyl 噻虫嗪 Thiamethoxam 吡虫啉 Imidacloprid 羟基克百威 3-Hydroxycarbofuran 敌敌畏 Dichlorvos 敌百虫 Trichlorfon 啶虫脒 Acetamiprid 乐果 Dimethoate 多菌灵 Carbendazim 涕灭威 Aldicarb 克百威 Carbofuran 甲萘威 Carbaryl 甲基异柳磷 Isofenphos-methyl 嘧菌酯 Azoxystrobin 亚胺硫磷 Phosmet 烯酰吗啉 Dimethomorph 马拉硫磷 Malathion 三唑酮 Triadimefon 嘧霉胺 Pyrimethanil 三唑磷 Triazophos 芬普尼 Fipronil 异菌脲 Iprodione 除虫脲 Diflubenzuron 水胺硫磷 Isocarbophos-H 2 O 灭幼脲 Chlorbenzuron 二嗪磷 Diazinon 倍硫磷 Fenthion 辛硫磷 Phoxim 伏杀硫磷 Phosalone 咪鲜胺 Prochloraz 甲拌磷 Phorate 苯醚甲环唑 Difenoconazole 丙溴磷 Profenofos 甲维盐 Emamectin B1a 甲氰菊酯 Fenpropathrin 毒死蜱 Chlorpyrifos 二甲戊灵 Pendimethalin 氟啶脲 Chlorfluazuron 哒螨灵 Pyridaben 联苯菊酯 Bifenthrin

50 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 订货信息 产品名称规格描述订货号 图 µg/ml 45 种农药标准溶液色谱图 蔬菜水果农残检测 MAS-Q 提取管蔬菜水果农残检测 MAS-Q 净化管 Venusil MP C18 50 ml 离心管,50 支 / 包 MS-MG ml 离心管,100 支 / 包 MS-9PP µm,100 Å, mm, 1 支 VA 保护柱套 直联式保护柱芯 适用于 mm 和 mm,1 支 3 μm,150å;2.1 10mm, 4 支 / 包 SH-100 DC LS 玻璃珠均质子直径 10 mm,50 个 / 包 HG-01 图 µg/ml 马铃薯基质混合标准工作溶液色谱图 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm,100/pk 图 3 马铃薯基质空白色谱图 4. 结论 本实验根据 AOAC , 结合 LC-MS/MS 对于加标量为 0.03 mg/kg 的样品进行了检测 结果表明, 使用 QuEChERS 方法包对马铃薯基质进行净化,45 种农药中 33 种农药的回收率满足要求且变异系数小于 20% 说明该方法适用于马铃薯中 33 种农药的检测, 且方法稳定 044 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

51 豆芽中植物生长调节剂的测定 应用编号 AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取试样 10 g 于 50 ml 离心管中, 加入 40 µl 甲酸, 再加入 20 ml 乙腈, 涡旋混匀 1 min, 然后超声 30 min, 超声结束冷却后,8000 r/min 离心 5 min, 上清液转移至新的 50 ml 离心管中, 然后加入 3.0 g 氯化钠, 涡旋混匀 1 min, 超声 10 min, 冷却后 8000 r/min 离心 5 min, 吸出乙腈层, 用无水硫酸钠脱水过滤至 40 ml 玻璃瓶中, 用氮气吹至近干, 加入 2 ml 甲醇超声溶解, 待净化 1.2 样品净化净化方法一 : 取上述待净化液, 加入到 QuEChERS 净化管中, 混匀, 静止 5 min, 进一步混匀, 然后 8000 r/min 离心 5 min, 取上清液过 0.22 µm Nylon 针式过滤器后, 进行 GC-MS 分析测定 2,4-D- 乙酯和 2,4-D- 丁酯 净化方法二 : 另外取 待净化液, 加入 9 ml 40 mmol/l 的盐酸溶液, 然后超声混匀, 转移至 15 ml 离心管后,8000 r/min 离心 5 min, 上清液待净化 先将 Cleanert MCS(500 mg/6 ml) 小柱依次用 5 ml 甲醇,5 ml 水和 5 ml 40 mmol/l 的盐酸溶液活化平衡 ; 然后将待净化液转移到小柱内, 待样品过柱后, 用 5 ml 水淋洗小柱并抽干 ; 最后用 5 ml 甲醇洗脱收集, 抽干得洗脱液 1; 再用 5 ml 5% 氨化甲醇 (V/V) 洗脱收集, 抽干得洗脱液 2 洗脱液 1 2 于 45 氮气吹干, 用 20% 乙腈水 (V/V) 溶解定容, 过 0.22 µm PTFE-Q 针式过滤器后, 进行 LC-MS/MS 检测 洗脱液 1 用于分析赤霉素 2,4-D 4- 氯苯氧乙酸 吲哚乙酸 吲哚丁酸 2- 萘乙酸 6 种植物生长调节剂 ; 洗脱液 2 用于分析氯吡脲 噻苯隆 6-BA 多效唑 4 种植物生长调节剂 2. 检测方法 2.1 气质检测色谱柱 :DA-5MS (30 m 0.25 mm 0.25 µm); 进样量 :1 µl; 进样口 :220, 不分流进样 ; 程序升温 : 起初 80 保持 1min, 之后以 10 /min 的速度升至 280, 保持 21 min 载气 : 氦气,/min 离子源 : 液质检测液相条件色谱柱 :Venusil MP C18,3 µm,100 Å, mm 流动相 :A: 水 ;B: 乙腈柱温 :30 进样量 :5 µl 梯度洗脱 : 表 1. 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /ml/min A/% B/%

52 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 2.2 质谱条件 正离子模式离子源 :ESI+; 电喷雾电压 :5500 V; 雾化气压力 :45 psi; 气帘气压力 : 25 psi; 辅助气压力 :45 psi; 离子源温度 : 500 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 负离子模式离子源 :ESI-; 电喷雾电压 :-4500 V; 雾化气压力 :40 psi; 气帘气压力 : 25 psi; 辅助气压力 :40 psi; 离子源温度 : 550 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 质谱参数 : 见表 2 表 种农药质谱参数 物质名称 Q1 Q3 DP/V CE/V 吲哚乙酸 吲哚丁酸 多效唑 氯苯氧乙酸 萘乙酸 ,4-D 噻苯隆 苄氨基嘌呤 氯吡脲 赤霉素 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

53 3. 实验结果 表 3. 豆芽中加标回收实验结果 物质名称 保留时间 /min 添加水平 /mg/kg 平均回收率 /% 变异系数 /% 2,4-D- 乙酯 ,4-D- 丁酯 吲哚乙酸 吲哚丁酸 多效唑 氯苯氧乙酸 萘乙酸 ,4-D 噻苯隆 苄氨基嘌呤 氯吡脲 赤霉素 图 µg/ml 标准溶液 GC-MS 色谱图 图 5 正模式 0.02 µg/ml 标准溶液 LC-MS/MS 色谱图 4. 结论 图 12 负模式 0.02 µg/ml 标准溶液 LC-MS/MS 色谱图 本实验建立了豆芽中植物生长调节剂的 GC-MS 和 LC- MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对豆芽中植物生长调节剂的含量进行了测定 对于加标量为 0.1 mg/kg 和 mg/kg 的样品, 植物生长调节剂样品回收率在 60% ~ 100%, 变异系数小于 10%, 能够满足实验要求 说明 QuEChERS 产品和 Cleanert MCS 小柱可以用于豆芽中植物生长调节剂的检测, 且稳定性良好 047

54 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 订货信息 产品名称 规格描述 订货号 Venusil MP C18 3 µm,100 Å, mm,1 支 VA 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 3 μm,150å;2.1 10mm,4 支 / 包 DC LS DA-5MS 30 m 0.25 mm 0.25 µm,1 支 Cleanert MCS 500 mg/6 ml,30 支 /pk MCS5006 MAS-Q 净化管 - MS-HM01 Qdaura 卓睿全自动固相萃取系统 4 通道,1 台 SPE 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 1.5 ml 样品瓶短螺纹透明带书写处, mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45 Shore A; 1.0 mm,100/pk 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 048 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

55 (GB/T , GB ) 茶叶中 519 种农药及相关化学品残留量的测定 (GC-MS 法 ) 及茶叶中 448 种农药及相关化学品残留量的测定 (LC-MS/MS 法 ) 应用编号 :MF 气相色谱质谱法测定 1.1 样品提取 称取 5 g 试样 ( 精确至 0.01 g), 于 80 ml 离心管中, 加入 15 ml 乙腈, 用均质器在 r/min 均质提取 1 min, 将离心管放入离心机, 在 4200 r/min 离心 5 min, 取上清液, 置于 100 ml 鸡心瓶中 残渣用 15 ml 乙腈重复提取一次, 离心, 合并两次提取液, 将提取液于 40 水浴用旋转蒸发器旋转蒸发至约, 待净化 2. 液相色谱 - 串联质谱法测定 2.1 样品提取 称取 2 g 试样 ( 精确至 0.01 g), 于 80 ml 离心管中, 加入 15 ml 乙腈, 用均质器在 r/min 均质提取 1 min, 将离心管放入离心机, 在 4200 r/min 离心 5 min, 取上清液, 置于 100 ml 鸡心瓶中 残渣用 15 ml 乙腈重复提取一次, 离心, 合并两次提取液, 将提取液于 40 水浴用旋转蒸发器旋转蒸发至约, 待净化 1.2 净化方法在 Cleanert TPT 柱中加入约 2 cm 高无水硫酸钠, 置于 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪中, 上述提取液全部转移至上样管中 10 ml 乙腈 + 甲苯 (3+1) 活化, 加样, 用 25 ml 乙腈 + 甲苯 (3+1) 洗涤小柱, 同时收集上样液和淋洗液, 取出收集管, 并在 40 水浴中旋转浓缩至约 0.5 ml 加入 2 5 ml 正己烷进行溶剂交换两次, 最后使样液体积约为, 加入 40 µl 内标溶液, 混匀, 用于气相色谱 - 质谱测定 2.2 净化方法在 Cleanert TPT 柱中加入约 2 cm 高无水硫酸钠, 置于 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪中, 上述提取液全部转移至上样管中 10 ml 乙腈 + 甲苯 (3+1) 活化, 加样, 用 25 ml 乙腈 + 甲苯 (3+1) 洗涤小柱, 同时收集上样液和淋洗液, 取出收集管, 并在 40 水浴中旋转浓缩至约 0.5 ml, 浓缩液于 35 下氮气吹干, 用 乙腈 / 水 (3/2) 溶解残渣, 经 0.22 µm 滤器过滤后, 供液相色谱 - 串联质谱测定 3. 订货信息 产品名称 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 Cleanert TPT 固相萃取柱 DA-1701 气相色谱柱 Venusil ASB C18 液相色谱柱针式过滤器 (Nylon) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 4 通道 24 位 2g / 12mL,20 支 /pk 30 m 0.25 mm 0.25 µm 3 µm,2.1 mm 100 mm 0.22 µm, 直径 13 mm,200/pk 5 ml,100/pk 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 订货号 SPE-40 TPT VS AS ZSQ-5ML 详细方法请参如下 : GB/T 茶叶中 519 种农药及相关化学品残留量的测定 GC/MS 法 GB 茶叶中 448 种农药及相关化学品残留量的测定 LC-MS/MS 法 049

56 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB , GB ) 桑枝 金银花 枸杞子和荷叶中 488 种农药及相关化学品残留量的测定 (GC-MS 法 ) 及桑枝 金银花 枸杞子及荷叶中 413 种农药及相关化学品残留量的测定 (LC-MS/ MS 法 ) 应用编号 :MF 气相色谱质谱法测定 1.1 样品提取分别称取金银花 枸杞子试样 5 g 或荷叶 桑枝试样 2.5 g ( 精确至 0.01 g) 于 50 ml 离心管中, 加入 15 ml 乙腈,( 枸杞子试样需再加入 5 ml 水 ),15000r/min 匀浆提取 1min, 加入 2 g 氯化钠, 再匀浆提取 1 min,4200r/min 离心 5min, 取全部上清液于 150 ml 鸡心瓶中, 再在离心管中加入 15 ml 乙腈, 重复匀浆提取 1min, 在 4200r/min 离心 5min, 取全部上清液与之前的提取液合并, 提取液于 40 水浴旋转蒸发至 ~2 ml, 待净化 2. 液相色谱 - 串联质谱法测定 2.1 样品提取分别称取金银花 枸杞子 荷叶和桑枝试样 2 g ( 精确至 0.01 g) 于 50 ml 离心管中, 加入 15 ml 乙腈 ( 枸杞子试样需再加入 5 ml 水 ),15000 r/min 匀浆提取 1 min, 加入 2 g 氯化钠, 再匀浆提取 1 min,4200 r/min 离心 5 min, 取全部上清液于 150 ml 鸡心瓶中, 在离心管中再加入 15 ml 乙腈, 重复匀浆提取 1 min,4200 r/min 离心 5 min, 取全部上清液与之前的提取液合并, 于 40 水浴旋转蒸发至 ~2 ml, 待净化 1.2 净化方法在 Cleanert TPH 柱上加入约 2 cm 高无水硫酸钠, 置于 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪中, 上述提取液全部转移至萃取仪上样管中 10 ml 乙腈 + 甲苯 (3+1) 活化, 加样, 用 25 ml 乙腈 + 甲苯 (3+1) 淋洗, 同时收集上样液和洗脱液, 取出收集管, 于 40 水浴旋转浓缩至近干, 气质方法加入 正己烷溶解残渣, 加入 40 µm 内标溶液, 混匀,0.22 µm 滤器过滤, 供气相色谱 - 质谱测定 2.2 净化方法在 Cleanert TPH 柱上加入约 2 cm 高无水硫酸钠, 置于 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪中, 上述提取液全部转移至萃取仪上样管中 10 ml 乙腈 + 甲苯 (3+1) 活化, 加样, 用 25 ml 乙腈 + 甲苯 (3+1) 淋洗, 同时收集上样液和洗脱液, 取出收集管, 于 40 水浴中旋转浓缩至 ~2 ml, 将浓缩液置于氮气吹干仪上吹干, 加入 的乙腈 + 甲苯 (3+1), 混匀, 0.22 µm 滤器过滤, 液相色谱 - 串联质谱测定 3. 订货信息 产品名称 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 Cleanert TPH 固相萃取柱 DA-1701 气相色谱柱 Venusil ASB C18 液相色谱柱针式过滤器 (Nylon) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 4 通道 24 位 2g / 10 ml, 20 支 /pk 30 m 0.25 mm 0.25 µm 3 µm, 2.1 mm 100 mm 0.22 µm, Ø13 mm, 200/pk 5 ml, 100/pk 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 订货号 SPE-40 TPH VS AS ZSQ-5ML 详细方法请参如下 : GB 桑枝 金银花 枸杞子和荷叶中 488 种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱 - 质谱法 GB 桑枝 金银花 枸杞子和荷叶中 413 种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱 - 串联质谱法 050 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

57 气质联用快速检测饲料中 29 种农药残留 ( 卓越论文 ) 应用编号 :CU1006 摘要 : 建立快速测定饲料中 29 种农药多残留的方法 (QuEChERS) 该方法以乙腈作提取剂, 以 PSA ( 伯仲氨基柱 ) 和 C18 作分散净化剂, 用气相色谱 - 质谱在选择离子监测模式下检测, 并使用以内标法定量,29 种农药在 0.01~1 µg/ml ( 甲胺磷和乙酰甲胺磷在 0.02~2 µg/ml, 氯氰菊酯和溴氰菊酯在 0.05~2 µg/ml) 的线性良好,3 个添加水平的回收率分别为 66%~119% 63%~120% 和 68%~98%, 检测限为 0.4%~33.1 µg/kg

58 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 原粮 ( 高粱和稻壳 ) 和白酒中农药多残留前处理方法 ( 卓越论文 ) 应用编号 :CU1008 样品处理方法 标准储备溶液 : 准确称取利巴韦林标准品适量, 用超纯水溶解并定容配制成 1 mg/ml 1. 高粱 1.1 样品的制备 取高粱样品经粉碎机粉碎, 过 20 目筛, 混匀制成待测样, 放入分装容器中备用 1.2 农药的添加 ( 注意 : 每个浓度做三个重复 ) 添加浓度为 0.5 mg/kg: 准确称取 5.0 g 样品于 50 ml 离心管中, 准确移取 0.25 ml 浓度为 10 mg/l 的混合标准溶液于 5.0 g 样品中, 摇匀静置 20 分钟后进行提取和净化 添加浓度为 0.1 mg/kg: 准确称取 5.0 g 样品于 50 ml 离心管中, 准确移取 0.05 ml 浓度为 10 mg/l 的混合标准溶液于 5.0 g 样品中, 摇匀静置 20 分钟后进行提取和净化 1.3 提取于装有 5.0 g 样品的 50 ml 离心管中加入 3.0 ml 超纯水 5.0 ml 乙腈, 涡旋 / 震荡提取 2 min 后再加 3 g 氯化钠, 涡旋 / 震荡 30 s 后以 3800 转 / 分离心 5 min, 使乙腈相和水相分层 1.4 净化准确移取步骤 1.3 中的乙腈提取液 于 2 ml 离心管中, 用 Cleanert NANO 农产品专用 IC 小柱 (P/N:IC-NN1010-V) 进行净化, 并过 0.22 μm 有机系滤膜于进样小瓶待测 净化过程如下图所示 : 图 1 m-pfc 快速净化步骤注 : 每个空白提取液要取 2 ml, 经 IC 小柱净化过滤膜后的滤液保存在 10 ml 的离心管中, 以备配制系列基质标准溶液 ; 样品溶液直接过滤至进样小瓶中 2. 稻壳 2.1 样品的制备取稻壳样品经粉碎机粉碎, 过 20 目筛, 混匀制成待测样, 放入分装容器中备用 2.2 农药的添加 ( 注意 : 每个浓度做三个重复 ) 添加浓度为 0.5 mg/kg: 准确称取 2.0 g 样品于 50 ml 离心管中, 准确移取 0.10 ml 浓度为 10 mg/l 的混合标准溶液于 2.0 g 样品中, 摇匀静置 20 分钟后进行提取和净化 添加浓度为 0.25 mg/kg: 准确称取 2.0 g 样品于 50 ml 离心管中, 准确移取 0.05 ml 浓度为 10 mg/l 的混合标准溶液于 5.0 g 样品中, 摇匀静置 20 分钟后进行提取和净化 2.3 提取于装有 2.0 g 样品的 50 ml 离心管中加入 3.0 ml 超纯水 5.0 ml 乙腈, 涡旋 / 震荡提取 2 min 后再加 3 g 氯化钠, 涡旋 / 震荡 30 s 后以 3800 转 / 分离心 5 min, 使乙腈相和水相分层 2.4 净化准确移取步骤 2.3 中的乙腈提取液 于 2 ml 离心管中, 用 Cleanert NANO 农产品专用 IC 小柱 (P/N:IC-NN1010-V) 进行净化, 并过 0.22 μm 有机系滤膜于进样小瓶待测 净化过程如图 1 所示 注 : 每个空白提取液要取 2 ml, 经 IC 小柱净化过滤膜后的滤液保存在 10 ml 的离心管中, 以备配制系列基质标准溶液 ; 样品溶液直接过滤至进样小瓶中 3. 白酒前处理方法一 : 减压蒸去乙醇后提取净化 3.1 农药的添加 ( 注意 : 每个浓度做三个重复 ) 添加浓度为 0.5 mg/kg: 准确量取 10 ml 白酒样品于 100 ml 鸡心瓶中, 准确移取 0.5 ml 浓度为 10 mg/l 的混合标准溶液于 10 ml 样品中, 摇匀静置 20 分钟后进行提取和净化 添加浓度为 0.1 mg/kg: 准确量取 10 ml 白酒样品于 100 ml 鸡心瓶中, 准确移取 0. 浓度为 10 mg/l 的混合标准溶液于 10 ml 样品中, 摇匀静置 20 分钟后进行提取和净化 052 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

59 3. 2 提取将装有 10 ml 样品的 100 ml 鸡心瓶于 40 减压蒸馏 5 分钟, 将剩余样品移入 50 ml 离心管中, 准确移取 10 ml 乙腈溶液分两次润洗鸡心瓶, 并转移到 50 ml 离心管中, 涡旋 / 震荡提取 2 min 后再加 2 g 氯化钠, 涡旋 / 震荡 30 s 后以 3800 转 / 分离心 5 min, 使乙腈相和水相分层 注 : 此处减压蒸馏时, 应先处理空白样品, 再以样品添加浓度由低到高进行减压蒸馏 ; 减压蒸馏开始前应使真空度达到 左右时才开始旋转蒸发, 结束时应缓慢打开真空阀, 防止样品被倒抽, 污染旋转蒸发管路 3. 3 净化准确移取步骤 3.2 中的乙腈提取液 于 2 ml 离心管中, 用 Cleanert NANO 农产品专用 IC 小柱 (P/N:IC-NN1010-V) 进行净化, 并过 0.22 μm 有机系滤膜于进样小瓶待测 净化过程如图 1 所示 检测方法 1. GC-MS 检测条件 1.1 色谱条件色谱柱 :DA-5MS 毛细管柱 (30 m 0.25 mm 0.25 μm); 色谱柱升温程序 : 120 保持 0.5 min, 然后以 20 /min 升到 200, 保持 0.5 min, 再以 10 /min 升到 220, 保持 0.5 min, 再以 5 /min 升到 240, 保持 0.5 min; 载气 : 氦气, 流速 / min; 进样口温度 280 ; 进样量 :1 μl; 进样方式 : 不分流进样 1.2 质谱条件传输线温度 290 ; 离子源 :EI 源 ; 离子源温度 230 ; 电子能量 :70eV; 溶剂延迟时间 :5 min; 离子检测方式 : 选择离子监测 (SIM), 各组分定量离子及定性离子见表 1 注 : 每个空白提取液要取 4 ml, 经 IC 小柱净化过滤膜后的滤液保存在 10 ml 的离心管中, 以备配制系列基质标准溶液 ; 样品溶液直接过滤至进样小瓶中 4. 白酒前处理方法二 : 乙酸乙酯提取法 4.1 农药的添加 ( 注意 : 每个浓度做三个重复 ) 添加浓度为 0.5 mg/kg: 准确量取 5 ml 白酒样品于 50 ml 离心管中, 准确移取 0.25 ml 浓度为 10 mg/l 的混合标准溶液于 10 ml 样品中, 摇匀静置 20 分钟后进行提取和净化 添加浓度为 0.1 mg/kg: 准确量取 5 ml 白酒样品于 50 ml 离心管中, 准确移取 0.05 ml 浓度为 10 mg/l 的混合标准溶液于 10 ml 样品中, 摇匀静置 20 分钟后进行提取和净化 表 1 各组分定性定量离子 序号 化合物莠去津莠灭净杀螟硫磷马拉硫磷异丙甲草胺倍硫磷腐霉利 定量离子 定性离子 215, , , , GC-MS/MS 检测条件 CAS 号 提取于装有 5 ml 样品的 50 ml 离心管中加入 5.0 ml 超纯水 5.0 ml 乙酸乙酯, 涡旋 / 震荡提取 2 min 后再加 3 g 氯化钠, 涡旋 / 震荡 30 s 后以 3800 转 / 分离心 5 min, 使乙酸乙酯相和水相分层 4.3 净化准确移取步骤 4.2 中的乙酸乙酯提取液 于 2 ml 离心管中, 用 Cleanert NANO 农产品专用 IC 小柱 (P/N:IC-NN1010-V) 进行净化, 并过 0.22 μm 有机系滤膜于进样小瓶待测 同时要量取乙酸乙酯层上清液的体积, 计算稀释倍数, 以便于计算回收率 净化过程如图 1 所示 2.1 色谱条件色谱柱 :DA-5MS 毛细管柱 (30 m 0.25 mm 0.25 μm); 色谱柱升温程序 :60 保持 1 min, 然后以 15 /min 升到 280, 保持 2 min; 载气 : 氦气, 流速 /min, 恒流 ; 进样口温度 280 ; 进样量 :1 μl; 进样方式 : 不分流进样 2.2 质谱条件载气 : 氦气 ; 碰撞器 : 氩气,1 Torr; 传输线温度 290 ; 离子源 :EI 源 ; 离子源温度 280 ; 电子能量 : 70eV; 溶剂延迟时间 :8 min; 扫描方式 : 多反应离子检测模式 (SRM); 采用 EZ Method 设定方法, 各组分的母离子 子离子 碰撞能和保留时间见表 2 注 : 每个空白提取液要取 4 ml, 经 IC 小柱净化过滤膜后保存在 10 ml 的离心管中, 以备配制系列基质标准溶液 ; 样品溶液直接过滤至进样小瓶中 053

60 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 表 2 各组分的母离子 子离子 碰撞能和保留时间 序号 化合物莠去津莠灭净杀螟硫磷马拉硫磷倍硫磷异丙甲草胺腐霉利 保留时间 定量离子对 200/ / / /99 278/ / /96 定性离子对 200/ / / / /169;169/ / /255 碰撞能 20,20 10,15 10,20 10,10 25,25,25 10,10 10,10 订货信息 产品名称 DA-5MS 毛细管柱 Cleanert NANO 农产品专用净化柱针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 30 m 0.25 mm 0.25 μm,1 支 过滤式 SPE 柱,50/pk 单膜,13 mm,0.22 μm,200/pk 有针头,100/pk 10 ml 有针头,100/pk 订货号 IC-NN1010-V AS LZSQ-2ML LZSQ-5ML 054 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

61 复合质谱 QTRAP 在 51 种农业部例行监测农残的整体解决方案 1. 样品前处理方法 1.1 QuEChERS 样品前处理 a 取 2~3 g 样品 +15 ml H 2 O( 水果蔬菜等水分比较大的样品可以不加 )+15 ml 乙腈 ( 内含 1% 的乙酸 ); b 加入 MgSO 4 6 g, 醋酸钠 1.5 g, 加入均质子几粒 (P/ N:MS-MG5052-H) c 快速振摇, 力度频率要大 d 离心 5 min,8000 转 /min e 取 8 ml 加入净化管 (P/N:MS-9PP0264), 振荡, 取上清液进样或稀释后进样 提示 : 比较干净的基质的样品也可不经过净化过程, 稀释后直接进样 1.2 超声提取 取 2~3 g 样品, 加入 ml 乙腈超声提取半小时, 离心 5 min, 过滤直接上样或稀释后上样 2. 色谱条件 色谱柱 :Venusil MP C18, mm, 3 µm (P/N:VA ) 流动相 : A:H 2 O-2mMNH 4 OAc B:MeOH-2mMNH 4 OAc 流速 :300 µl/min 柱温 :40 进样量 :10 µl 3. 质谱条件 扫描方式 :MRM-IDA-EPI Turbo VTM ESI 离子源参数 : 气帘气 CUR: 20psi 碰撞气 CAD: Medium IS 电压 :5500 V 源温度 :600 雾化气 GAS1:50 psi; 辅助气 GAS2:50 psi 增强型子离子扫描范围 :m/z EPI 扫描速度 Da/s DP 电压 60 V CE 能量 35±15 V 化合物信息 : 名称多菌灵啶虫脒吡虫啉毒死蜱噻虫嗪烯酰吗啉苯醚甲环唑腐霉利氟虫腈三唑磷丙溴磷二甲戊灵克百威辛硫磷异菌脲敌百虫咪鲜胺氟啶脲阿维菌素阿维菌素氧乐果除虫脲甲基异柳磷敌敌畏甲胺磷灭多威乙酰甲胺磷嘧霉胺 表 2 51 个农残化合物信息 Name Carbendazim Acetamiprid Imidacloprid Chlorpyrifos Thiamethoxam Dimethomorph Difenoconazole Procymidone Fipronil Triazophos Profenofos Pendimethalin Carbofuran Phoxim Iprodione Trichlorfon Prochloraz Chlorfluazuron Avermectin B1a NH4 Avermectin B1a Na Omethoate Diflubenzuron Isofenphos-methyl Dichlorvos Methamidophos Methomyl Acephate Pyrimethanil 055

62 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 名称甲萘威涕灭威亚砜涕灭威乐果 3- 羟基克百威涕灭威砜甲拌磷甲基对硫磷杀螟硫磷倍硫磷水胺硫磷对硫磷三唑酮二嗪磷灭幼脲亚胺硫磷马拉硫磷哒螨灵伏杀硫磷嘧菌酯甲氨基阿维菌素苯甲酸盐虫螨腈甲氰菊酯联苯菊酯 Name Carbaryl Aldicarb-sulfoxid Aldicarb Dimethoate 3-Hydroxycarbofuran Aldicarb Sulfone NH4 Phorate Parathion-methyl Fenitrothion Fenthion Isocarbophos Parathion Triadimefon Diazinon Chlorbenzuron Phosmet Malathion Pyridaben Phosalone Azoxystrobin Emamectin Benzoate Chlorfenapyr Fenpropathrin Bifenthrin 在标准品以及番茄样品中, 烯酰吗啉的离子通道都是双峰, 图谱如下所示 : 通过右键搜库, 根据匹配度确定, 两个峰均为烯酰吗啉的峰, 都为被测物 4.2e6 4.0e6 3.0e Intensity, cps 2.0e6 1.0e6 4. 结论 Time, min Venusil MP C18 检测液相色谱 / 串联质谱色谱图 筛查色谱图 : 2 ppb 农残混标一针进样, 筛查结果色谱图如下所示 : 本方案提供了农业部例行监测农药残留中适合液质的 51 种方法, 前处理方法简单, 不用分段检测, 独有的例行监测数据库大大提高了检测效率 复合扫描方式 MRM-IDA-EPI, 一针进样, 既能完成 2 对 MRM 的检测, 又能解决双峰, 阳性样品难以判断的问题, 是进行例行监测的首选, 同时也提高了样品检出的准确度 056 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站搜索应用编号下载!

63 第二部分 兽药残留 057

64 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 奶粉中雌酮 雌二醇 醋酸甲地孕酮 醋酸氯地孕酮的检测 应用编号 :AF 参考方法 博纳艾杰尔内部方法 2. 实验材料 Cleanert PEP 吡咯烷酮化聚苯乙烯 / 二乙烯基苯固相萃取柱 (100mg / 6mL,P/N:PE1006, 博纳艾杰尔科技 );Cleanert Silica 硅胶固相萃取柱 (1000mg / 6mL,P/ N:SI0006, 博纳艾杰尔科技 ) ; 液相色谱柱 (Bonshell C18, mm,2.7 μm,p/ N:SC , 博纳艾杰尔科技 ); 标准品 : 雌酮 (CAS.No ) 雌二醇 (CAS.No ) 醋酸甲地孕酮 (CAS.No ) 醋酸氯地孕酮 (CAS.No ), 购自中国药品生物制品检定所 3. 实验步骤 Cleanert PEP 样品提取净化法提取 : 取 2 g 奶粉, 加标, 然后加 12 ml 80% 乙腈, 涡旋混匀两分钟后, 离心 (9000 r/min,6 min) 取 3 ml 上清液, 加入 9 ml 超纯水稀释, 涡旋混匀后, 待过 Cleanert PEP 柱净化 净化步骤 : 活化 : 以 5 ml 乙腈,5 ml 水活化 Cleanrt PEP; 上样 : 把上述稀释后的样品溶液过柱, 流速控制以 /min 为宜 ; 淋洗 : 待样品溶液完全通过小柱后, 用 5 ml 5% 乙腈淋洗小柱, 然后真空抽干 3 min; 洗脱 : 以 3-5 ml 乙腈洗脱目标, 收集流出液 ; 浓缩 : 收集液以氮气吹干 (40 水浴 ), 后以 50% 甲醇水定容至, 混匀后过 0.22 μm 尼龙针式过滤器过滤, 进 LC-MS/MS 分析 ( 以上萃取操作通过 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪完成 ) Cleanert Silica 样品提取净化法提取 : 取 2 g 奶粉, 加标, 然后加 12 ml 乙腈, 涡旋混匀两分钟后, 离心 (9000 r/min,6 min) 取 3 ml 上清液, 待过 Cleanert Silica 柱净化 净化步骤 : 活化 : 以 5 ml 乙腈活化 Cleanrt Silica 小柱 ; 上样 : 把上述提取液过柱, 收集流出液 ; 淋洗 : 以 5 ml 乙腈洗涤小柱, 收集流出液 ; 浓缩 : 合并以上流出液, 以氮气吹干 (40 水浴 ), 后以 50% 甲醇水定容至 混匀后 0.22 μm 尼龙针式过滤器过滤, 进 LC-MS/MS 分析 ( 以上萃取操作通过 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪完成 ) 4. 色谱条件 孕激素 ( 醋酸甲地孕酮 醋酸氯地孕酮 ) 测定液相色谱条件 :Bonshell C18, mm,2.7 μm; 流动相 :A:0.1% 甲酸水,B: 甲醇 ; 流速 :0.3 ml/min; 柱温 :40 ; 进样量 :10 μl; 参考质谱条件 : 电离源 : 电喷雾正离子模式 雌激素 ( 雌二醇 雌酮 ) 测定色谱条件 :Bonshell C18, mm,2.7 μm; 流动相 :A: 水,B: 乙腈 ; 流速 :0.3 ml/min; 柱温 :40 ; 进样量 :10 μl; 参考质谱条件 : 电离源 : 电喷雾负离子模式 5. 实验结果及谱图 结果见图 1 图 2 用 Cleanert PEP ( 反相 ) 或 Cleanert Silica ( 正相 ) 两种净化手段均可到达满意的回收率和净化效果, 添加浓度在 25 ppb 时回收率可达到 80% 用 Bonshell 色谱柱可以实现样品的快速分离, 大大提高工作效率 雌二醇和雌酮两种激素, 质谱响应偏低, 质谱条件需要进一步优化 本实验结果采用单点定量判定, 结果可能有失偏颇, 详细数据需做基质添加标准曲线确证, 方法的精密度, 稳定性等亦需要进一步确证 058 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

65 50ppb Progestrogen4 90 QBA Aug-2010 MRM of 4 Channels ES > e5 Sample Sample1-2P QBA Aug-2010 MRM of 4 Channels ES > e3 % Sample1-2P MRM of 4 Channels ES > e Sample1-2P MRM of 4 Channels ES TIC 8.49e4 90 % % Progestrogen4 MRM of 4 Channels ES > e Progestrogen4 MRM of 4 Channels ES TIC 1.89e6 90 % % % Time Time 图 1 两种孕激素总离子流图和选择离子流图 ( 标品 ) 图 2 两种雌激素总离子流图和选择离子流图 ( 奶粉样品 ) 6. 订货信息 名称 Cleanert PEP 固相萃取柱 Cleanert Silica 固相萃取柱 Bonshell C18 雌酮雌二醇醋酸甲地孕酮醋酸氯地孕酮 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 规格 100mg / 6mL, 30/PK 1000mg / 6mL, 30/PK mm,2.7 μm CAS.No CAS.No CAS.No CAS.No 通道 24 位连续处理 订货号 PE1006 SI0006 SC SPE

66 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (DB21/ ) 动物源性食品中金刚烷胺的检测 SPE-LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10025 金刚烷胺是由金刚烷与溴进行卤化, 再与乙腈在硫酸中反应, 生成酰胺, 再用碱水解而得 它可用于亚洲甲 - Ⅱ 型流感的预防和早期治疗, 与抗菌素合用可治败血症和病毒性肺炎, 并有退烧作用 也有抗震颤麻痹的作用, 可适用于帕金森病的治疗 根据其药理作用, 国内现在主要将金刚烷胺用于鸡 猪流感的预防和早期治疗, 及猪传染性胃肠炎的防治 鉴于金刚烷胺会在动物组织中有残留, 所以政府有关部门开始禁止使用金刚烷胺等防治高致病性禽流感等一类病原微生物引起的病毒性疫病 我国对于动物源性食品中金刚烷胺残留含量的相关研究报道属于空白, 也未曾制定或立项过国家标准 行业标准, 国际上也无特定限量要求及相应检测方法 本文采用甲醇 -1% 三氯乙酸萃取 Cleanert PCX 固相萃取柱净化 液相色谱 - 质谱 / 质谱 (LC-MS/MS) 技术建立动物源性食品中的金刚烷胺残留量的分析方法 化合物名称 英文名 结构式 CAS 编号 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil ASB C mm,3 µm,150 Å; 流速 :200 µl/min; 柱温 :30 ; 进样量 :5 µl; 时间 (min) 0 10 表 1 液相色谱分析流动相条件 流速 (µl/min) % 甲酸水 (%) 质谱条件电离模式 : 电喷雾电离正模式 ; 检测方式 : 多反应监测 (MRM); 离子源温度 (TEM):550,Curtian Gas: 10, Ion Source Gas 1: 70,Ion Source Gas 2:75 乙腈 (%) 金刚烷胺 1-Aminoadamantane 表 2 质谱参数 化合物 保留时间 /min Q1 Q3 DP/V CE/V 1. 样品提取 准确称取 2 g ( 精确至 0.01 g) 试样至 50 ml 离心管中, 加入 10 ml 甲醇 -1% 三氯乙酸 (50+50,v/v) 溶液, 涡旋 30s, 超声 30 min,8000 r/min 离心 10 min, 上清液用一次性专用过滤器注射器转移至 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪上样管中, Cleanert PCX 固相萃取柱也置入萃取仪中待净化 2. 净化方法 设置 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪程序如下 :3 ml 甲醇,3 ml 水活化 ; 加样 5 ml; 淋洗 : 3 ml 2% 盐酸, 3 ml 甲醇淋洗 ; 空气吹干小柱, 洗脱 :5 ml 氨水 - 甲醇 - 异丙醇溶液 ( ,v/v/v) 洗脱并收集 以上步骤控制流速均为 /min 取出收集管, 在 50 水浴中氮气吹干, 加 1.0 ml 甲醇 - 水 - 甲酸溶液 ( ,v/v /v) 溶解, 用 0.22 µm 滤器过滤后供 LC-MS/MS 测定 金刚烷胺 注 : 带 的监测离子为定量离子 4. 实验结果 表 2 线性和检出限 物质名称金刚烷胺 保留时间 (min) 6.8 平均回收率 79.8% RSD(%) 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

67 图 1 金刚烷胺标准品质谱图 图 2 鸡肉样品添加质谱图 ( 添加浓度为 50μg/kg) 5. 订货信息 产品名称 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 Cleanert PCX Venusil ASB C18 针式过滤器 (PTFE,Prefilter 双膜 ) 针式过滤器 (Nylon) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 4 通道 24 位 60mg / 3mL,50 支 /pk mm,3 µm,150 Å 1 µm, 直径 25 mm,100/pk 0.22 µm, 直径 13 mm,200/pk 5 ml,100/pk 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 订货号 SPE-40 CX0603 VS AS G AS ZSQ-5ML

68 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 动物源食品中氯霉素类药物的 LC-MS/MS 定性定量测定方法 应用编号 :AF10026 氯霉素 (chloramphenicol,chloromycetin) 是由委内瑞拉链霉菌产生的抗生素 属广谱抑菌抗生素, 是治疗伤寒, 副伤寒的首选药, 治疗厌氧菌感染的特效药物之一, 其次用于敏感微生物所致的各种感染性疾病的治疗 用于治疗由伤寒杆菌 痢疾杆菌 大肠杆菌 流感杆菌 布氏杆菌 肺炎球菌等引起的感染 由于氯霉素可引起严重的毒副作用, 故临床仅用于敏感伤寒菌株引起的伤寒感染 流感杆菌感染 重症脆弱拟杆菌感染 脑脓肿 肺炎链球菌或脑膜炎球菌性脑膜炎, 同时对青霉素过敏的患者, 由于不良反应严重现用得越来越少 中国行业标准 SN/T 中规定其检测底限为 0.1 µg/kg 1. 样品提取 称取 5.0 g ( 精确到 0.1 g) 粉碎好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 20 ml 乙酸乙酯, 在均质器中以 rpm 均质 30 s, 以 3000 rpm 离心 5 min, 定量滤纸漏斗加约 25 g 无水硫酸钠于浓缩瓶口, 将离心过的上层乙酸乙酯提取液由滤纸漏斗过滤至浓缩瓶中, 重复两次 合并滤液于 50 以下减压浓缩至近干, 用 4 ml 正己烷和 4 ml 水依次将残渣转移至 10 ml 玻璃离心管中,2000 rpm 涡旋混合 1 min,2000 rpm 离心 3 min, 弃去上层正己烷溶液, 再加入 4 ml 正己烷, 重复上述操作, 下层水层做待净化液 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 负离子扫描电喷雾电压 :-5500 V 雾化气压力 :60 psi 气帘气压力 :12 psi 辅助气压力 :50 psi 离子源温度 :600 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 表 2 氯霉素的质谱参数 A/% B/% 净化方法 化合物 Q1 Q3 CE/V 先将 Cleanert C18 (500mg / 3mL) 小柱分别用 5 ml 甲醇和 5 ml 水平衡, 然后将待净化液过柱 ( 流速控制在 2~3 ml/min),10 ml 水两次洗涤离心瓶, 弃去滤液 ; 再用 5 ml 甲醇 : 水 (2:8, v/v) 溶液淋洗, 弃去淋洗液, 将小柱负压抽干 ; 最后用 6 ml 甲醇洗脱 收集洗脱液于 40 氮气吹近干,5 ml 水复溶, 过 0.22 µm 滤膜后待测 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5 µm,100 Å; 流动相 :A 相 - 水,B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 µl; 氯霉素 4. 实验结果 物质名称氯霉素 (Chloramphenicol) 表 3 氯霉素加标回收实验结果 (n=3) 加标量 /(µg/kg) 处理加标回收率 /% 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测氯霉素, 加标量为 1.0 µg/kg 10 µg/kg 加标回收率在 70%~120% 之间,RSD 值小于 10%, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert C18 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的氯霉素峰形良好, 且保留时间稳定 RSD/% RT/min 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

69 图 1 氯霉素样品加标 1.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 2 氯霉素样品加标 10 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了动物源性食品中氯霉素残留的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对氯霉素的残留量进行了测定 对于加标量为 1 µg/kg 10 µg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 70%~120%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的氯霉素残留 5. 订货信息 产品名称 Venusil MP C18 Cleanert S C18 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5mL 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 2.5 µm,100 Å, mm 500mg / 3mL,50/pk 适用于 mm 和 mm 2.5 µm,100 Å, mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 单膜,13 mm,0.22 µm,200/pk 2 ml 两件式无针头,100/pk 订货号 VA S SH-100 VA S AS LZSQ-2ML 063

70 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers ( 农业部 1025 号公告 ) 畜禽肉中甲硝唑 地美硝唑残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10027 硝基咪唑类 (Nitroimidazoles) 药物是带有硝基的咪唑化合物, 其性状为白色或淡黄色结晶, 弱碱性, 能和酸结合成盐, 遇光易分解, 易溶于甲醇, 微溶于水, 主要用于预防和治疗家禽的滴虫病 猪的出血性下痢及厌氧菌感染, 并具有促生长作用, 但是该类药物对哺乳动物具有致癌 致畸 致突变作用和遗传毒性 因此欧盟 北美和我国等都禁止了硝基咪唑在食品动物中的使用 农业部 1025 号公告 规定了在畜禽肉中硝基咪唑类药物残留方法检出限为 1 µg/kg 1. 样品提取 称取 2.00 g ( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0 ml 离心管中, 加入 15.0 ml 乙酸乙酯, 涡旋振荡 2min, 4000 rpm 离心 5min, 上清液转移至 80 ml 顶空瓶中, 残渣用 15.0 ml 乙酸乙酯重复提取一次, 合并两次提取液, 加入 4 g 氯化钠和 20.0 ml 正己烷, 振荡器上振荡 10 min, 4200 rpm 离心 10 min, 小心吸取下层乙酸乙酯层于另一离心管中, 氮气吹至近干, 用 6 ml 0.1 mol/l 盐酸溶液溶解残渣备用 2. 净化方法 先将 Cleanert PCX (60mg / 3mL) 小柱分别用 2.0 ml 甲醇 2.0 ml 0.1 mol/l 盐酸水溶液活化平衡, 然后样品残液过柱 ( 流速控制在 2~3 ml/min), 弃去滤液 ; 再用 1.0 ml 0.1 mol/l 盐酸水溶液 1.0 ml 甲醇和 1.0 ml 甲醇 - 水 (1:9,v/v) 淋洗 SPE 柱, 弃去淋洗液, 最后用 3.0 ml 甲醇 -5% 氨水 (3:2,v/v) 洗脱于锥形试管中,40 氮气吹干 用 甲醇 - 水溶液 (1:9,v/v) 溶解残留物, 过 0.22 µm 尼龙针式过滤器后待测 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil ASB C18, mm,5 µm,150 Å; 流动相 :A 相 - 水,B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 µl; 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :55 psi 气帘气压力 :13 psi 辅助气压力 :60 psi 离子源温度 :600 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 化合物 甲硝唑 (Metronidazole) 地美硝唑 (Dimetridazole) A/% 表 2 硝基咪唑类药物的质谱参数 Q Q B/% CE/V 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

71 4. 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测甲硝唑和地美硝唑, 加标量为 1.0 µg/kg 加标回收率为 90%~100%, 能够满足检测要求 由图 1 可看出经 Cleanert PCX 固相萃取柱净化, 采用 Venusil ASB C18 色谱柱检测能够使甲硝唑和地美硝唑得到良好的分离, 且两种物质峰形良好, 保留时间稳定 图 1 硝基咪唑类样品加标 1.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 表 3 硝基咪唑类药物加标回收实验结果 (n=3) 物质名称甲硝唑 (Chloramphenicol) 地美硝唑 (Dimetridazole) 加标量 /(µg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 结论 : 本实验建立了硝基咪唑类残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对禽畜类肉中硝基咪唑类药物的残留量进行了测定 对于加标量为 1 µg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 90%~100%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的硝基咪唑残留量 5. 订货信息 产品名称 Venusil ASB C18 Cleanert PCX 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 5 µm,150 Å, mm 60mg / 3mL,50/pk 适用于 mm 和 mm 5 µm,150 Å, mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13 mm,0.22 µm,200/pk 2 ml 两件式无针头,100/pk 订货号 VS CX0603 SH-100 VS S AS LZSQ-2ML 065

72 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T ) 畜禽肉中卡巴氧残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10028 卡巴氧又名卡巴多 卡巴得 痢立清 喹肼脂, 是喹恶啉类生长促进剂中代性品种 卡巴氧具有广谱抗菌能力, 对革兰氏阴性菌 ( 例如大肠杆菌 沙门氏杆菌 志贺氏菌及变形杆菌 ) 特别敏感 ; 对革兰氏阳性菌 ( 例如葡萄球菌 链球菌 ) 的最小抑菌浓度也优于金霉素, 因而卡巴氧能有效控制猪赤痢脏乱细菌性下痢 卡巴氧具有蛋白同化作用, 对促进猪的生长及改善饲料转化率具有显著的效果 GB/T 规定了在畜禽肉中卡巴氧方法检出限为 1 µg/kg 1. 样品制备 称取 5.00 g ( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0 ml 离心管中, 加入 5 g 中性氧化铝加入 25.0 ml 乙腈 - 乙酸乙酯 (1:1,v/v), 用均质器均质 5 min,5000 rpm 离心 5 min 取上清液移至另一干净的 50 ml 离心管中, 加入 5 g 无水硫酸钠和 10.0 ml 正己烷, 振荡器上振荡 2 min,5000 rpm 离心 5 min, 将下层清液转移至鸡心瓶中, 重复上述步骤合并两次清液 40 减压旋转蒸发至近干, 准确加入 1.0 ml 0.1% 甲酸水溶液定容, 过 0.22 µm 尼龙针式过滤器, 滤液供高效液相色谱 - 串联质谱仪测定 2. 检测方法 2.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5 µm,100 Å; 流动相 :A 相 : 0.1% 甲酸水,B 相 : 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 µl; 梯度洗脱 : 见表 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :55 psi 气帘气压力 :13 psi 辅助气压力 :40 psi 离子源温度 :400 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 化合物 卡巴氧 (Carbadox) 3. 实验结果 表 2 卡巴氧的质谱参数 Q Q CE/V 由表 3 可知, 采用液相色谱 - 串联质谱法检测卡巴氧, 加标量为 1.0 µg/kg, 回收率大于 85%,RSD 值为 6.84%, 能够满足检测要求 由图 1 可看出 Venusil MP C18 色谱柱对卡巴氧有良好的保留作用, 且卡巴氧峰形良好, 保留时间稳定 物质名称卡巴氧 (Carbadox) 表 3 卡巴氧加标回收实验结果 (n=3) 加标量 /(µg/kg) 1.0 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 1.55 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 (min) 流速 (ml/min) A/% B/% 图 1 卡巴氧样品加标 1.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 066 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

73 结论 : 本实验建立了卡巴氧残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对禽畜类肉中卡巴氧的残留量进行了测定 对于加标量为 1µg/kg 的样品进行了检测, 回收率大于 85%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的卡巴氧残留量 4. 订货信息 产品名称 Venusil MP C18 中性氧化铝保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 2.5 µm,100 Å, mm 100~200 目,100g/ 瓶适用于 mm 和 mm 2.5 µm,100 Å, mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13 mm,0.22µm,200/pk 2 ml 两件式无针头,100/pk 订货号 VA AL0100-N SH-100 VA S AS LZSQ-2ML 067

74 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T ) 畜禽肉中替米考星残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10029 替米考星 (Tilmicosin) 是一种较新的以泰乐菌素为前体半合成的畜禽专用大环内酯类抗生素,20 世纪 80 年代由英国 Elanco 动物保健品公司首先开发成功, 主要用于牛 奶牛 山羊 绵羊 猪 鸡等动物由敏感菌引起的感染性疾病, 特别是畜禽呼吸道疾病如猪放线杆菌性胸膜肺炎 牛溶血性及多杀性巴氏杆菌病和鸡支原体病, 同时对奶牛乳房炎主要菌系具有良好的抗菌作用 GB/T 规定了在畜禽肉中替米考星方法检出限为 1 µg/kg 1. 样品提取 称取 5.00 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0 ml 离心管中, 加入 15.0 ml 乙腈, 用均质器均质 1 min, 在振荡器上振荡 10 min,4200 rpm 离心 5 min, 取上清液加入 2 g 氯化钠和 10.0 ml 正己烷, 振荡器上振荡 10 min,4200 rpm 离心 10 min, 小心吸取中间乙腈层 12.0 ml 于另一离心管中, 氮气吹至近干 2. 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 (500mg / 6mL) 小柱分别用 10.0 ml 甲醇 10.0 ml 水 5.0 ml 2% 氯化钠溶液和 5.0 ml 磷酸二氢铵缓冲溶液活化平衡, 然后用 7.0 ml 磷酸二氢铵缓冲溶液分两次溶解残液过柱 ( 流速控制在 2~3 ml/min), 弃去滤液 ; 再用 10.0 ml 水和 5.0 ml 甲醇 - 水 (2:3. v/v) 淋洗 SPE 柱, 弃去淋洗液, 将小柱负压抽干 ; 最后用 10.0 ml 甲醇洗脱于锥形试管中,45 氮气吹干 用 0.1% 乙酸铵水溶液溶解残留物, 过 0.22 µm 滤膜后待测 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :60 psi 气帘气压力 :13 psi 辅助气压力 :65 psi 离子源温度 :600 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 化合物 替米考星 (Tilmicosin) A/% 表 2 替米考星的质谱参数 Q Q B/% CE/V 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil ASB C18, mm,5 µm,150 Å; 流动相 :A 相 -10 mm 乙酸铵溶液,B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 µl; 梯度洗脱 : 见表 1 4. 实验结果及结论 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测替米考星, 加标量为 1.0 µg/kg 20.0 µg/kg 加标回收率在 90%~100% 之间,RSD 值小于 10%, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 Venusil ASB C18 色谱柱检测得到的替米考星峰形良好, 且保留时间稳定 表 3 替米考星加标回收实验结果 (n=3) 物质名称 加标量 /(µg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 替米考星 (Tilmicosin) 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

75 图 1 替米考星样品加标 1.0μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 2 替米考星样品加标 20.0μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 本实验建立了替米考星残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对禽畜类肉中替米考星的残留量进行了测定 对于加标量为 1.0 µg/kg 20.0 µg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 90%~100%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的替米考星残留量 5. 订货信息 产品名称 Venusil ASB C18 Cleanert PEP-2 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 5 µm,150 Å, mm 500mg / 6mL,30/pk 适用于 mm 和 mm 5 µm,150 Å, mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13 mm,0.22 µm,200/pk 2 ml 两件式无针头,100/pk 订货号 VS PE SH-100 VS S AS LZSQ-2ML 069

76 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T ) 畜禽肉中头孢噻呋残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10030 头孢噻呋 (ceftiofur) 又名赛得福, 是第一个畜禽专用的第三代头孢类广谱抗生素, 具有优良的抗菌活性和药动学特点, 用于治疗牛 马和猪的呼吸系统疾病 随着头孢噻呋在畜牧业中的广泛使用, 不可避免地引起其在动物组织或其产品中的残留 GB/T 规定了在畜禽肉中头孢噻呋方法检出限为 50 µg/kg 1. 样品提取 称取 5.00 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0 ml 离心管中, 加入 15.0 ml 乙腈 - 水 (15:2,v/v), 用均质器均质 30 s, 洗涤均质器刀头, 洗涤液倒回离心管中, 在振荡器上振荡 1 min,4000 rpm 离心 5 min, 合并上清液于 50 ml 离心管中, 再重复用 10 ml 乙腈 - 水 (15:2,v/v) 洗涤刀头提取一次合并上清液, 用乙腈 - 水 (15:2,v/v) 定容至 40 ml, 准确移取 20 ml 于 100 ml 鸡心瓶中,35 旋蒸去除乙腈 2. 净化方法 先将 Cleanert C18 (500mg / 3mL) 小柱分别用 3.0 ml 甲醇 3.0mL 水活化平衡 ; 向除去乙腈层的瓶中加入 25 ml 0.05 mol/l 磷酸盐缓冲溶液, 涡旋混匀 1 min, 用 0.1 mol/l NaOH 溶液调节 ph 值为 8.5, 再以 /min 流速过柱 ; 然后用 2 ml 磷酸盐缓冲液淋洗 2 次, 再用 2 ml 超纯水淋洗, 最后 3 ml 乙腈洗脱 ( 流速 1 ml/min), 洗脱液于 45 氮气吹干 用 0.01 mol/l 乙酸铵溶液 (ph 为 4.5) 溶解残留物, 过 0.22µm 滤膜后待测 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil ASB C18, mm,5 µm,150 Å; 流动相 :A 相 -10 mm 乙酸铵溶液 (ph 为 4.5),B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 µl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :50 psi 气帘气压力 :13 psi 辅助气压力 :55 psi 离子源温度 :550 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 化合物 头孢噻呋 (Ceftiofur) 4. 实验结果 A/% 表 2 头孢噻呋的质谱参数 Q Q 表 3 头孢噻呋加标回收实验结果 (n=3) B/% CE/V 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测头孢噻呋, 加标量为 50.0 µg/kg 加标回收率大于 75%, 能够满足检测要求 由图 1 可看出经 Cleanert C18 固相萃取柱净化, 采用 Venusil ASB C18 色谱柱检测得到的头孢噻呋峰形良好, 且保留时间稳定 物质名称头孢噻呋 (Ceftiofur) 加标量 /(µg/kg) 50.0 处理加标回收率 /% RSD/% 2.80 RT/min 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

77 图 1 头孢噻呋样品加标 50.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了头孢噻呋残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对禽畜类肉中头孢噻呋的残留量进行了测定 对于加标量为 50.0 µg/kg 的样品进行了检测, 回收率大于 75%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的头孢噻呋残留量 5. 订货信息 产品名称 Venusil ASB C18 Cleanert S C18 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 5 µm,150 Å, mm 500mg / 3mL,50/pk 适用于 mm 和 mm 5 µm,150 Å, mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13 mm,0.22µm,200/pk 2 ml 两件式无针头,100/pk 订货号 VS S SH-100 VS S AS LZSQ-2ML 071

78 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 猪肉中阿维菌素残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10031 阿维菌素 (Abamectin) 是由日本北里大学大村智等和美国 Merck 公司首先开发的一类具有杀虫 杀螨 杀线虫活性的十六元大环内酯化合物, 由链霉菌中灰色链霉菌 Streptomyces avermitilis 发酵产生, 具有强烈杀虫 杀螨 杀线虫活性的十六元大环内酯, 农畜两用抗生素 广谱 高效 安全 具有胃毒和触杀作用, 不能杀卵 其作用机制是干扰神经生理活性, 影响细胞膜氯化物传导 SN/ T 规定了在进出口食品中阿维菌素方法检出限为 5µg/kg 1. 样品提取 称取 5.00 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0 ml 离心管中, 加入 5g 无水硫酸钠和 15.0 ml 乙腈, 用均质器 rpm 均质 1 min,4200 rpm 离心 5 min, 取上清液经无水硫酸钠过滤并转入浓缩瓶中, 用 ml 乙腈再提取一次, 合并提取液 40 水浴中旋蒸浓缩至 2~3 ml 3.2 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 负离子扫描电喷雾电压 :-5500 V 雾化气压力 :55 psi 气帘气压力 :12 psi 辅助气压力 :55 psi 离子源温度 :550 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 1) 化合物 阿维菌素 (Abamectin) 表 1 阿维菌素的质谱参数 Q Q CE/V 净化方法 先将 Cleanert Alumina N (1g / 6mL) 小柱用 3 ml 乙腈预淋洗, 将样品转入 SPE 柱 ( 流速控制在 2~3 ml/min), 用 5 ml 乙腈分两次洗涤浓缩并将洗涤液转入 SPE 柱, 再用 2 ml 乙腈淋洗小柱, 收集全部流出液 40 氮气吹干, 用 乙腈复溶, 过 0.22 µm 尼龙针式过滤器后待测 4. 实验结果及结论 由表 2 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测阿维菌素加标回收率在 75%~90% 之间,RSD 值在 5.46%~8.50% 之间, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert Alumina N 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的阿维菌素峰形良好, 且保留时间稳定 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5 µm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.1% 乙酸水溶液,B 相 - 乙腈流速 :350 µl/min 等度洗脱 :0-6.0 min,a:b=25:75 (v/v) 柱温 :35 ; 进样量 :5 µl; 表 2 阿维菌素加标回收实验结果 (n=3) 物质名称 加标量 /(µg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% 阿维菌素 (Abamectin) RT/min 2.54 图 1 阿维菌素样品加标 5.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 072 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

79 本实验建立了阿维菌素残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中阿维菌素的残留量进行了测定 对于加标量为 5.0 µg/kg 50.0 µg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 75%~90%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的阿维菌素残留量 图 2 阿维菌素样品加标 50.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 5. 订货信息 产品名称 Venusil MP C18 Cleanert Alumina N 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 规格包装 2.5 µm,100 Å, mm 1g / 6mL,30/pk 适用于 mm 和 mm 2.5 µm,100 Å, mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13 mm,0.22 µm,200/pk 订货号 VA AL0006-N SH-100 VA S AS

80 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T ) 猪肉中地塞米松残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10032 地塞米松 (Dexamethasone) 又名氟美松 氟甲强地松龙 德沙美松, 是糖皮质类激素, 其衍生物有氢化可地松 泼尼松等, 地塞米松是较为常见的易残留兽药 兽药在动物性食品中的残留, 不仅对人体健康造成直接危害, 而且对畜牧业发展和生态环境也造成极大危害 长期食用兽药残留的食品, 会造成兽药在体内蓄积, 当其浓度达到一定量时, 就会使人体产生多种急性或慢性中毒 地塞米松是激素类药物, 能扰乱体内激素分泌, 降低机体免疫力, 造成肌肉萎缩无力, 骨质疏松和生长迟缓等直接危害, 而且还会出现发热, 软弱无力, 精神沉郁, 食欲不振, 血糖和血压下降等症状 中国和欧盟规定了在动物组织中喹诺酮类兽药的最高残留量为 0.1µg/kg 1. 样品提取 称取 5.0g( 精确到 0.1g) 均质好的样品, 置于 50mL 离心管中, 加入 20mL 乙酸乙酯, 用均质器均质 1min, 在振荡器上振荡 20min,3000rpm 离心 5min; 取上清液过盛有 25g 无水硫酸钠的滤纸漏斗至鸡心瓶中 ; 重复一次, 合并提取液并旋蒸至近干,1mL 乙酸乙酯和 5mL 正己烷复溶 2. 净化方法 先将 Cleanert Silica (500mg/3mL) 小柱分别用 2mL 丙酮 : 正己烷 (2:8,v/v) 活化平衡, 然后将待净化液过柱 ( 流速控制在 2~3 ml/min), 弃去滤液 ; 再用 2mL 丙酮 : 正己烷 (4:6,v/v) 淋洗洗瓶和 SPE 柱, 弃去淋洗液, 将小柱负压抽干 ; 最后用 6mL 丙酮 : 正己烷 (4:6,v/v) 洗脱 收集洗脱液于 40 氮气吹干, 用 1mL 0.1% 甲酸水溶液 : 乙腈 (1:1,v/v) 溶解残留物, 过 0.22µm 尼龙针式过滤器后待测 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :45 psi 气帘气压力 :13 psi 辅助气压力 :50 psi 离子源温度 :500 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 化合物 地塞米松 (Dexamethasone) A/% 表 2 地塞米松的质谱参数 Q Q B/% 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5µm,100Å; 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水溶液,B 相 -0.1% 甲酸乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5µL; 梯度洗脱 : 见表 1 4. 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测地塞米松加标回收率在 95%~105% 之间,RSD 值在 3.50%~8.00% 之间, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert Silica 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的地塞米松峰形良好, 且保留时间稳定 物质名称地塞米松 (Dexamethasone) 表 3 地塞米松加标回收实验结果 (n=3) 加标量 /(µg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

81 图 1 地塞米松样品加标 0.2μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 2 地塞米松样品加标 2.0μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了地塞米松残留量的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中地塞米松的残留量进行了测定 对于加标量为 0.2µg/kg 2.0µg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 95%~105%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的地塞米松残留量 5. 订货信息 产品名称 Venusil MP C18 Cleanert Silica 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 2.5 µm,100 Å, mm 500mg / 3mL,50/pk 适用于 mm 和 mm 2.5 µm,100 Å, mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13 mm,0.22 µm,200/pk 2 ml 两件式无针头,100/pk 订货号 VA SI5003 SH-100 VA S AS LZSQ-2ML 075

82 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T ) 猪肉中磺胺类药物残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10033 磺胺类药物 (SAs) 是对具有氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称, 它具有芳氨基和磺酰胺基, 是常用的广谱抗菌素, 在水产养殖中应用十分广泛 然而过量使用这些抗菌剂会导致水产品中有药物残留, 影响人类的健康 SAs 能够产生排尿和造血紊乱等副作用, 其残留能破坏人的造血系统, 造成溶血性贫血症, 磺胺二甲嘧啶等甚至有引起潜在致癌性的可能 1. 样品提取 称取 (5±0.05) g 试样, 置于 50 ml 离心管中, 加入 15 ml 乙酸乙酯涡旋振荡 2 min,5000 rpm 离心 10 min, 分离上清液于 100 ml 鸡心瓶中, 残渣用同样的方法重复提取 1 次, 合并乙酸乙酯层 在上述提取液中加入 0.1 mol/l 的盐酸 5 ml,45 旋蒸出乙酸乙酯, 将残留的盐酸层转移至 10 ml 离心管中, 分两次用 2 ml 0.1 mol/l 盐酸洗涤鸡心瓶, 洗涤液转移至同一离心管中, 再用 5 ml 正己烷洗涤鸡心瓶, 然后将正己烷转入含有盐酸的离心管中, 用手振摇使其混合均匀,3500 rpm 离心 5 min, 弃去正己烷, 再用 3 ml 正己烷重复洗涤 1 次, 取下层液作为待净化液 2. 净化方法 先将 Cleanert PCX (150mg / 6mL) 小柱分别用 3 ml 甲醇和 3 ml 0.1 mol/l 盐酸预洗, 将待净化液转移至柱中 ; 然后分别用 2 ml 0.1 mol/l 盐酸和 2 ml V( 水 ):V( 甲醇 ):V( 乙腈 )=55:25:20 洗涤小柱 ; 最后用 2 ml V( 水 ):V( 甲醇 ):V( 乙腈 ):V( 氨水 )=75:10:10:5 洗脱, 收集洗脱液于 45 氮气吹干, 用水定容至, 过 0.22 µm 有机滤膜, 待测 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil ASB C18, mm,3 µm,150 Å; 流动相 :A 相 - 水,B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 µl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) A/% B/% 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源 ; 扫描方式 : 正离子扫描 ; 电喷雾电压 :5500 V; 雾化气压力 :65 psi; 气帘气压力 :12 psi; 辅助气压力 :60 psi; 离子源温度 :550 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率, 质谱参数 ( 见表 2) 化合物 磺胺乙酰 Sulfanilacetamide 磺胺氯哒嗪 Sulfachlorpyridazine 磺胺二甲异恶唑 Sulfisoxazole 磺胺甲基恶唑 Sulfamethoxazole 磺胺甲噻二唑 Sulfamethizole 磺胺苯吡唑 Benzenesulfonamide 磺胺吡啶 Sulfapyridine 磺胺噻唑 Sulfathiazole 磺胺 -6- 甲氧嘧啶 Sulfamonomethoxine 磺胺嘧啶 Sulfadiazine 磺胺甲基嘧啶 Sulfamerazine 磺胺二甲基嘧啶 Sulfamethazine 磺胺邻二甲氧嘧啶 Sulfadoxine 磺胺甲氧哒嗪 Sulfamethoxypyridazine 磺胺 -5- 甲氧嘧啶 Sulfameter 磺胺间甲氧嘧啶 Sulfamonomethoxine 表 2 磺胺类药物的质谱参数 Q Q CE/V 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

83 4. 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测 16 种磺胺类药物, 加标量为 10.0µg/kg 加标回收率为 70%~110%, 能够满足检测要求 由图 1 可看出经 Cleanert PCX 固相萃取柱净化, 采用 Venusil ASB C18 色谱柱检测能够使 16 种磺胺类药物较好的分离开, 且各物质峰形良好, 保留时间稳定 表 3 磺胺类药物加标回收实验结果 (n=3) 图 1 磺胺类样品加标 10.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 物质名称加标量 /(µg/kg) 磺胺乙酰 10 Sulfanilacetamide 磺胺氯哒嗪 10 Sulfachlorpyridazine 磺胺二甲异恶唑 10 Sulfisoxazole 磺胺甲基恶唑 10 Sulfamethoxazole 磺胺甲噻二唑 10 Sulfamethizole 磺胺苯吡唑 10 Benzenesulfonamide 磺胺吡啶 10 Sulfapyridine 磺胺噻唑 10 Sulfathiazole 磺胺 -6- 甲氧嘧啶 10 Sulfamonomethoxine 磺胺嘧啶 10 Sulfadiazine 磺胺甲基嘧啶 10 Sulfamerazine 磺胺二甲基嘧啶 10 Sulfamethazine 磺胺邻二甲氧嘧啶 10 Sulfadoxine 磺胺甲氧哒嗪 10 Sulfamethoxypyridazine 处理加标回收率 /% 92.54% 73.08% 81.48% 75.16% 92.56% 79.01% 87.80% 92.24% % 96.21% 95.33% % 70.48% 98.15% RSD/% 3.87% 5.55% 10.20% 14.18% 3.86% 11.72% 6.49% 4.04% 1.53% 1.93% 2.39% 3.35% 7.31% 0.93% RT/min 结论 : 本实验建立了磺胺类药物残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中磺胺类药物的残留量进行了测定 对于加标量为 10.0 µg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 70%~110%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的磺胺类药物残留量 5. 订货信息 产品名称 Venusil ASB C18 Cleanert PCX 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 3 µm,150 Å, mm 150mg / 6mL,30/pk 适用于 mm 和 mm 3 µm,150 Å, mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13 mm,0.22 µm,200/pk 2 ml 两件式无针头,100/pk 订货号 VS CX1506 SH-100 VS S AS LZSQ-2ML 磺胺 -5- 甲氧嘧啶 Sulfameter 磺胺间甲氧嘧啶 Sulfamonomethoxine % 88.43% 0.03% 6.14%

84 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (DB 51T ) 猪肉中己烯雌酚残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10034 己烯雌酚 (Stilbestrol) 是人工合成的非甾体雌激素物质, 能产生与天然雌二醇相同的所有药理与治疗作用 主要用于雌激素低下症及激素平衡失调引起的功能性出血 闭经, 还可用于死胎引产前, 以提高子宫肌层对催产素的敏感性 孕妇服用此药, 其女性后代在青春期后宫颈和阴道的腺病及腺癌发生率升高, 男性后代生殖道异常和精子异常发生率也增加 己烯雌酚可导致恶心, 呕吐, 食欲不振, 头痛等症状, 长期使用可使子宫内膜增生过度而致子宫出血和肥大 国标中规定了在牛猪肝肾和肌肉组织中己烯雌酚方法检出限为 1.0 µg/kg 1. 样品提取 称取 5.00 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50.0 ml 离心管中, 加入 ml 叔丁基甲基醚, 涡旋 1 min, 振荡 10 min, 在 -4 下以 6000 rpm 离心 5 min, 取上清液转入浓缩瓶中 ; 用 ml 叔丁基甲基醚再提取一次, 合并提取液,45 水浴中减压旋蒸浓缩至干 加 80% 乙腈溶液 2 ml 于浓缩瓶中, 涡旋溶解残留物, 然后将其转移至 10 ml 离心管中 ; 再加入正己烷 5 ml 于浓缩瓶中洗涤, 一并转移至离心管中, 震荡混合 1 min, 在 15 以 6000 rpm 离心 10 min, 弃去上清液 再加正己烷 5 ml 于离心管中同法操作, 留下层备用 2. 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 (500mg / 6mL) 小柱用 3 ml 叔丁基甲基醚 3 ml 甲醇和 3 ml 水活化平衡, 取上述下层溶液, 以每 3~4 秒 1 滴的流速通过预处理后的固相萃取柱 ; 先用甲醇 : 水 (3:7,v/v) 溶液 3 ml 冲洗, 然后加水 3 ml 平衡, 再用甲醇 :2% 氨水 (1:9, v/v) 溶液 3 ml 冲洗, 弃去洗液, 抽干 用 0.1% 甲酸 / 甲醇 : 叔丁基甲基醚 (1:9,v/v) 溶液 7 ml 洗脱, 收集洗脱液, 氮气吹干, 用 80% 乙腈水 溶解残余物, 充分涡旋, 过 0.22 µm 滤膜, 滤液供高效液相色谱 - 串联质谱仪测定 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5 µm,100 Å; 流动相 :A 相 - 水,B 相 - 乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 µl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) A/% B/% 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源 ; 扫描方式 : 负离子扫描 ; 电喷雾电压 :-5500 V; 雾化气压力 :55 psi; 气帘气压力 :12 psi; 辅助气压力 :50 psi; 离子源温度 :550 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM); Q1 Q3 均为单位分辨率, 质谱参数 ( 见表 2) 化合物 己烯雌酚 (Diethylstilbestrol) 4. 实验结果 表 2 己烯雌酚的质谱参数 Q Q 表 3 己烯雌酚加标回收实验结果 (n=3) CE/V 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测己烯雌酚, 加标量为 2.5 µg/kg 25.0 µg/kg, 回收率在 80%~96% 之间,RSD 值在 2.26%~8.95% 之间, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的己烯雌酚峰形良好, 且保留时间稳定 物质名称己烯雌酚 (Diethylstilbestrol) 加标量 /(µg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 3.30 图 1 己烯雌酚样品加标 2.5 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 078 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

85 5. 订货信息 图 2 己烯雌酚样品加标 25 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了己烯雌酚残留量的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中己烯雌酚的残留量进行了测定 对于加标量为 2.5 µg/kg 25.0 µg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 80%~96%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的己烯雌酚残留量 产品名称 Venusil MP C18 Cleanert PEP-2 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5mL 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器己烯雌酚 规格包装 2.5µm,100Å,2.1 50mm 500mg/6mL,30/pk 适用于 mm 和 mm 2.5µm,100Å,2.1 10mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13mm,0.22µm,200/pk 2mL 两件式无针头,100/pk 标准品,100mg 订货号 VA PE SH-100 VA S AS LZSQ-2ML GBW(E)

86 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 猪肉中喹乙醇残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10035 喹乙醇 (Olaquindox) 又称喹酰胺醇, 是一种化学合成抗菌促生长剂 因其具有广谱抗菌效果和促生长作用, 作为饲料添加剂被广泛用于畜禽及水产品的养殖 大量生物毒性试验研究表明, 喹乙醇可在动物体内形成残留, 具有明显的蓄积毒性和 DNA 显性损伤等毒副作用 基于可能对人体健康造成危害, 欧盟委员会 2788/98 决议规定禁止喹乙醇的使用 国内也对喹乙醇的使用量做了限制, 并且为了加强对喹乙醇的监控, 先后制定了出口肉 动物饲料中喹乙醇的检测方法 目前, 对于饲料 肉类以及水产品等食品中喹乙醇的检测方法主要是液相色谱法, 检出限都比较高, 无法满足国际贸易的要求 随着液质联用技术发展日趋成熟, 该方法被越来越多地应用于动物源性食品中禁用药物的检测 本文针对肉类中的喹乙醇残留, 建立了高效液相色谱 - 串联质谱 (LC-MS/MS) 的检测方法 检测结果表明本方法操作简单, 回收率高, 检测限低, 定性可靠, 定量准确, 能满足对喹乙醇的检测要求 1. 样品制备 称取 5.0 g( 精确到 0.1 g) 粉碎好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 10 ml 水, 涡旋混匀, 放入 60 恒温水浴中振荡提取 15 min, 取出冷却至室温,4000 rpm 离心 10 min, 移取提取液至另一个离心管中 按上述方法重复一次, 合并提取液混匀精确取 2 ml 提取液, 加入 乙腈混匀后, 8000 rpm 离心 10 min, 取清液加入 3 ml 正己烷, 混匀后, 下层清液过 0.22 µm 滤膜, 滤液供高效液相色谱 - 串联质谱仪测定 2. 检测方法 2.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5 µm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水,B 相 -0.1% 甲酸乙腈柱温 :35 ; 进样量 :5 µl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源 ; 扫描方式 : 正离子扫描 ; 电喷雾电压 :5500 V; 雾化气压力 :55 psi; 气帘气压力 :13 psi; 辅助气压力 :55 psi; 离子源温度 :600 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM); Q1 Q3 均为单位分辨率, 质谱参数 ( 见表 2) 化合物 喹乙醇 (Olaquindox) 3. 实验结果 表 2 喹乙醇的质谱参数 Q Q 表 3 喹乙醇加标回收实验结果 (n=3) CE/V 由表 3 可知, 采用液相色谱 - 串联质谱法检测喹乙醇, 加标量为 100µg/kg, 回收率大于 85%,RSD 值小于 5%, 能够满足检测要求 由图 1 可看出 Venusil MP C18 色谱柱对喹乙醇有良好的保留作用, 且峰形良好 物质名称喹乙醇 (Olaquindox) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) 加标量 /(µg/kg) 100 处理加标回收率 /% A/% RSD/% 3.41 B/% RT/min 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

87 4. 订货信息 图 1 喹乙醇样品加标 100 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了动物源性食品中喹乙醇残留的 LC-MS/ MS 检测方法, 并对猪肉中喹乙醇的残留量进行了测定 对于加标量为 100 µg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 85%~100% 之间, 符合检测要求, 能够用于动物源性食品中的喹乙醇残留量的测定 产品名称 Venusil MP C18 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5mL 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 2.5µm,100Å,2.1 50mm 适用于 mm 和 mm 2.5µm,100Å,2.1 10mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13mm,0.22µm,200/pk 2mL 两件式无针头,100/pk 订货号 VA SH-100 VA S AS LZSQ-2ML 081

88 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T ) 猪肉中氟喹诺酮类药物残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10036 氟喹诺酮类 (fluoroquinolones, FQs), 又称吡啶酮酸类, 是近年来人工合成的一系列新型杀菌性抗菌药物, 因其抗菌谱广, 抗菌活性强, 与其他抗菌药物无交叉, 耐药性和毒副作用小等特点而广泛应用于动物和人类的多种感染性疾病的防治当中 氟喹诺酮类药物的残留除其本身的毒副作用对人体造成直接危害外, 更为严重的是长期食用含较低浓度 FQs 药物的动物源性食品, 容易诱导人类致病菌产生耐药性, 具有潜在致畸致癌的威胁 中国和欧盟规定了在动物组织中其系列喹诺酮类兽药的最高残留量为 10~90µg/kg 1. 样品提取 称取 5.0 g( 精确到 0.1 g) 均质好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 20 ml 配置好的 0.1 mol/l 的缓冲溶液,1000 rpm 涡旋混合 1 min, 再超声提取 10 min, 于 8000 rpm 离心 10 min, 重复提取三次, 合并上清液做待净化液 2. 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 小柱分别用 6 ml 甲醇和 6 ml 水活化, 然后将待净化液过柱 ( 流速控制在 2~3 ml/min), 弃去滤液 ; 再用 3 ml 5% 甲醇水淋洗, 弃去淋洗液, 将小柱抽干 ; 最后用 6mL 甲醇洗脱 收集洗脱液于 40 氮气吹干, 用 0.2% 甲酸水溶液溶解残留物, 过 0.22 µm 滤膜后待测 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,5 µm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水溶液,B 相 - 乙腈柱温 :30 ; 进样量 :10 µl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) A/% B/% 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :45 psi 气帘气压力 :15 psi 辅助气压力 :40 psi 离子源温度 :500 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率定性离子对 定量离子对 去簇电压和碰撞电压 ( 见表 2) 化合物 诺氟沙星 (Norfloxacin) 环丙沙星 (Ciprofloxacin) 培氟沙星 (Pefloxacin) 洛美沙星 (Lomefloxacin) 恩诺沙星 (Enrofloxacin) 氧氟沙星 (Ofloxacin) 表 2 氟喹诺酮类药物的质谱条件 Q Q CE/V 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

89 4. 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测六种氟喹诺酮类药物, 加标量为 2.0 µg/kg 20 µg/kg 100 µg/ kg, 回收率为 70%~120%, 能够满足检测要求 由图 1-3 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测能够使六种喹诺酮类药物得到良好的分离, 且各种物质峰形良好, 保留时间稳定 表 3 氟喹诺酮类药物加标回收实验结果 (n=3) 图 3 氟喹诺酮类样品加标 100 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 物质名称诺氟沙星 (Norfloxacin) 环丙沙星 (Ciprofloxacin) 培氟沙星 (Pefloxacin) 洛美沙星 (Lomefloxacin) 恩诺沙星 (Enrofloxacin) 氧氟沙星 (Ofloxacin) 加标量 /(µg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 结论 : 本实验建立了六种氟喹诺酮类药物的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中氟喹诺酮类药物的残留量进行了测定 对于加标量为 2 µg/kg 20 µg/kg 100 µg/ kg 的样品进行了检测, 回收率在 70%~120%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的氟喹诺酮类药物残留 5. 订货信息 产品名称 Venusil MP C18 Cleanert PEP-2 Qdaura 卓睿自动固相萃取仪保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5mL 样品瓶盖 针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 5µm,100Å,2.1 50mm 200 mg/6 ml,30 支 / 包 24 通道 适用于 mm 和 mm 5µm,100Å,2.1 10mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13mm,0.22µm,200/pk 2mL 两件式无针头,100/pk 订货号 VA PE SPE-40 SH-100 VA S AS LZSQ-2ML 图 1 氟喹诺酮类样品加标 2.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 2 氟喹诺酮类样品加标 20 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 083

90 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T ) 猪肉中林可霉素残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10037 林可霉素 (Lincomycin, 又称洁霉素 ) 主要用链霉菌发酵得到 常作用于细菌核糖体的 50s 亚单位, 通过抑制肽链的延长而抑制细菌蛋白质的合成, 从而清除细菌表面 A 蛋白质和绒毛状外衣, 使其易被吞噬和杀灭 林可霉素对机体免疫系统有增强免疫调节, 使得多核型白细胞的吞噬和杀菌功能增强, 改变细菌表面活性, 抑制细菌毒素的产生 可用于治疗革兰氏阳性菌和支原体感染, 对葡萄球菌 链球菌作用较强, 对厌氧菌有抑制作用, 在许多感染症的治疗中疗效显著 用作饲料添加剂时, 可促进肉鸡和育肥猪的生长 林可霉素造成的动物源性食品安全问题备受人们关注, 因此, 欧盟和我国对动物源性食品中林可霉素限量做了严格规定, 其最大残留量为 1µg/kg 1. 样品提取 称取 5.0 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 15 ml 乙腈, 用均质器均质 1 min, 在振荡器上振荡 10 min,4200 rpm 离心 5 min, 取上清液于另一 50 ml 离心管中 ; 再加入 10 ml 乙腈于样品残渣, 重复提取一次, 合并上清液于 50 ml 离心管中, 加入 2.0 g 氯化钠和 10 ml 正己烷, 于振荡器剧烈振荡 10 min, 以 4200 rpm 离心 10 min, 小心吸取中间乙腈层 10 ml 于另一离心管中,55 水浴氮气浓缩至近干 用 7 ml 磷酸盐缓冲液分两次溶解残留物, 作为待净化液 2. 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 (500mg / 6mL) 小柱分别用 10 ml 甲醇, 10 ml 水,5 ml 0.2% 氯化钠,5 ml 磷酸盐缓冲液活化平衡 ; 然后将待净化液过柱 ( 流速控制在 /min); 用 10 ml 水和 5 ml 甲醇 - 水 (2:3,v/v) 洗柱, 弃去全部流出液, 小柱用真空泵抽干 15 min; 最后用 10 ml 甲醇洗脱 收集洗脱液于 45 氮气吹干, 用 10 mmol 乙酸铵溶液 ( 含 0.15% 甲酸 ) 溶解残留物, 过 0.22 µm 滤膜后待测 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil ASB C18, mm,5 µm,150 Å; 流动相 :A 相 -0.3% 甲酸水溶液,B 相 -0.3% 甲酸乙腈柱温 :35 ; 进样量 :10 µl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :45 psi 气帘气压力 :15 psi 辅助气压力 :50 psi 离子源温度 :550 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 化合物 林可霉素 (Lincomycin) A/% 表 2 林可霉素的质谱参数 Q Q B/% CE/V 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

91 4. 实验结果 5. 订货信息 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测林可霉素加标回收率在 84%~105% 之间,RSD 值小于 10%, 能够满足检测要求 由图 1 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 Venusil ASB C18 色谱柱检测得到的林可霉素峰形良好, 且保留时间稳定 物质名称 林可霉素 (Lincomycin) 表 3 林可霉素加标回收实验结果 (n=3) 加标量 /(µg/kg) 1.0 处理加标回收率 /% RSD/% 5.34 RT/min 1.63 产品名称 Venusil ASB C18 Cleanert PEP-2 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5mL 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 5µm,150Å, mm 500mg/6mL,30/pk 适用于 mm 和 mm 5µm,150Å,2.1 10mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13mm,0.22µm,200/pk 2mL 两件式无针头,100/pk 订货号 VS PE SH-100 VS S AS LZSQ-2ML 图 1 林可霉素样品加标 1.0μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了林可霉素残留量的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中林可霉素的含量进行了测定 对于加标量为 1.0 µg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 84%~105%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中林可霉素的残留量 085

92 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 猪肉中氯羟吡啶残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10038 球虫病是畜牧业生产中最重要, 也是最常见的一种原虫病, 以对鸡 兔 牛 猪的危害性最大 氯羟吡啶 (Clopidol) 属吡啶类化合物, 其商品名为克球粉, 具有广泛的抗球虫作用 但是, 长期或过量的用药会造成氯羟吡啶在动物体内和组织中的残留和在食物链中的蓄积, 对环境及公众健康构成严重的潜在危害 欧盟 美国 加拿大 日本等国都规定了各种动物组织中氯羟吡啶残留最高限量标准 我国规定各种动物组织中氯羟吡啶残留最高限量标准, 其中氯羟吡啶在鸡肉中的残留限量为 5.0 µg/kg 有关动物组织中氯羟吡啶残留检测方法的文献不多, 其中以 GC/ MS 法为主 1. 样品提取 准确称取试样 (5±0.05 g) 于 50 ml 聚丙烯离心管中, 加入 15 ml 乙腈, 均质 1 min, 再振荡提取 10 min, 于 6000 r/ min 离心 10 min, 取上清液于另一 50 ml 离心管中 ; 用 10 ml 乙腈洗涤刀头, 洗涤液倒入残渣中重复提取一次 合并两次上清液, 加正己烷 15 ml, 无水硫酸钠 2 g, 振荡提取 5 min,6000 r/min 离心 5 min, 取乙腈层于 50 旋转蒸发至近干 ; 用 5 ml 乙腈溶解残留物, 作为待净化液, 备用 2. 净化方法 先将 Cleanert Alumina-N (500mg / 6mL) 小柱用 10 ml 乙腈活化, 取备用液过柱, 控制流速为 /min, 收集上样流出液 ; 用 10 ml 乙腈分两次冲洗放置备用液的离心管, 再以相同流速洗脱小柱, 并收集洗脱液 ; 将所有流出液与洗脱液于 50 氮气吹至近干 ; 最后用 10% 甲醇水溶液溶解残留物, 然后涡旋振荡 2 min, 再超声 2 min, 过 0.22 µm 滤膜, 待测 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,2.5 µm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水,B 相 -0.1% 甲酸乙腈柱温 :30 ; 进样量 :10 µl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :50 psi 气帘气压力 :15 psi 辅助气压力 :50 psi 离子源温度 :450 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) A/% 表 2 氯羟吡啶的质谱参数 B/% 化合物 Q1 Q3 CE/V 氯羟吡啶 (Clopidol) 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

93 4. 实验结果 5. 订货信息 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测氯羟吡啶, 加标量为 1.0 µg/kg 5.0 µg/kg 加标回收率在 78%~90% 之间,RSD 值小于 10%, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert Alumina-N 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的氯羟吡啶峰形良好, 且保留时间稳定 物质名称 氯羟吡啶 (Clopidol) 表 3 氯羟吡啶加标回收实验结果 (n=3) 加标量 /(µg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 2.07 产品名称 Venusil MP C18 Cleanert Alumina-N 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5mL 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 2.5µm,100Å,2.1 50mm 500mg/6mL,30/pk 适用于 mm 和 mm 2.5µm,100Å,2.1 10mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13mm,0.22µm,200/pk 2mL 两件式无针头,100/pk 订货号 VA AL5006-N SH-100 VA S AS LZSQ-2ML 图 1 氯羟吡啶样品加标 1.0μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 2 氯羟吡啶样品加标 5.0μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了氯羟吡啶残留量的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中氯羟吡啶的含量进行了测定 对于加标量为 1.0 µg/kg 5.0 µg/kg 的样品进行了检测, 回收率为 78%~90%, 符合检测要求 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中氯羟吡啶的残留量 087

94 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T ) 猪肉 鸡肉中四环素类药物残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10039 四环素类 (Tetracyclines,TCs) 是由链霉菌产生的一类广谱抗生素, 主要包括四环素 (Tetracycline,TC) 土霉素 (Oxytetracycline,OTC) 金霉素 (Chlortetracyline,CTC) 等, 其结构均含并四苯基本骨架, 已被广泛应用于可食性动物疾病的治疗和药物添加剂中, 常用于预防和治疗动物疾病 四环素类抗生素在酸性和碱性条件下均不稳定, 其含有许多羟基 烯醇羟基及羰基, 在中性条件下能与多种金属离子形成不溶性螯合物, 与钙或镁离子形成不溶性的钙盐或镁盐, 与铁离子形成红色络合物, 与铝离子形成黄色络合物 为了有效地预防四环素类药物的滥用, 欧盟 日本和美国等都制定了动物组织及牛奶中的最大残留限量, 其中规定在动物组织中的最大残留限量为 0.1 mg/l GB/T 中规定最低检出限为 50.0 µg/kg 1. 样品提取 称取 5.0 g( 精确到 0.01 g) 均质好的试样, 置于 50 ml 离心管中, 分别加入 20 ml 20 ml 10 ml 配置好的 0.1 mol/ L 的 EDTA-Mcllivaine 缓冲溶液,1000 rpm 涡旋混合 1 min, 再超声提取 10 min, 于 3000 rpm 离心 5 min, 合并上清液 ( 控制上清液体积不超过 50 ml) 并定容至 50 ml, 混匀,5000 rpm 离心 10 min, 用快速滤纸过滤, 待净化 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) A/% B/% 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :70 psi 气帘气压力 :15 psi 辅助气压力 :65 psi 离子源温度 :550 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率定性离子对 定量离子对 去簇电压和碰撞电压 ( 见表 2) 表 2 四环素类药物的质谱条件 2. 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 小柱分别用 5 ml 甲醇和 5 ml 水活化, 再准确吸取 10mL 提取液以 1 滴 /s 的速度过 SPE 小柱, 待样液完全流出后, 依次用 5 ml 水和 5 ml 5% 甲醇水溶液淋洗, 弃去全部流出液 减压抽干小柱 5 min, 最后用 10 ml 甲醇 + 乙酸乙酯 (1:9,v/v) 洗脱 将洗脱液低于 40 氮气吹干, 用 甲醇水 (3:7,v/v) 溶液溶解残渣, 过 0.45 µm 滤膜, 待测 3. 检测方法 化合物盐酸四环素 (Tetracycline hydrochloride) 盐酸土霉素 (Oxytetracycline) 盐酸金霉素 (Chlorotetracycline hydrochloride) Q Q CE/V 色谱条件色谱柱 :Durashell C18, mm,3 µm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.3% 甲酸水溶液,B 相 -0.3% 甲酸乙腈柱温 :30 ; 进样量 :5 µl; 梯度洗脱 : 见表 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

95 4. 实验结果 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测三种四环素类药物, 加标量为 10.0 µg/kg 50.0 µg/kg 200 µg/kg, 回收率为 90%~105%, 能够满足检测要求 由图 1-3 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 Durashell C18 色谱柱检测能够使三种四环素药物得到良好的分离, 且各种物质峰形良好, 保留时间稳定 结论 : 本实验建立了三种四环素类药物的 LC-MS/MS 检测方法 实验对加标量为 10 µg/kg 50 µg/kg 200 µg/kg 的样品进行了检测, 结果表明前处理方法回收率在 90%-105% 之间, 均在国标要求范围内, 固相萃取方法稳定而且色谱柱重现性较好 说明本方法能够用于检测动物源性食品中的四环素类药物残留 表 3 氟喹诺酮类药物加标回收实验结果 (n=3) 物质名称 加标量 /(µg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% 盐酸四环素 (Tetracycline hydrochloride) 盐酸土霉素 (Oxytetracycline) 盐酸金霉素 (Chlorotetracycline hydrochloride) RT/min 订货信息 产品名称 Durashell C18 Cleanert PEP-2 Qdaura 卓睿自动固相萃取仪保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5mL 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 3µm,100Å,2.1 50mm 60mg/3mL,50 支 / 包 24 通道适用于 mm 和 mm 3µm,100Å,2.1 10mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13mm,0.45µm,200/pk 2mL 两件式无针头,100/pk 订货号 DC PE SPE-40 SH-100 DC S AS LZSQ-2ML 图 1 四环素类样品加标 10.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 2 四环素类样品加标 50 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 3 四环素类样品加标 200 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 089

96 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (SN/T ) 猪肉中泰乐菌素残留量检测 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10040 泰乐菌素 (Tylosin), 亦称泰农 泰乐霉素, 是美国于 1959 年从弗氏链霉菌 (Streptomyces fradiae) 的培养液中获得的一种大环内酯类抗生素, 对支原体有特效, 对多种 G+ 菌具有很强的抗菌作用, 还对部分 G- 菌 弯杆菌 螺旋体及球虫具有抑制作用 其产品形式有酒石酸盐 磷酸盐 盐酸盐 硫酸盐及乳酸盐, 易溶于水, 被广泛的应用于畜牧业的畜禽疾病防治及促生长的饲料添加剂 2006 年欧盟成员国全面禁止使用抗生素作为促生长剂 欧盟对肉制品中泰乐菌素的最高残留量规定为 100µg/kg 我国农业部在 2002 年公告的 关于动物性食品中兽药最高残留的通知 中, 规定泰乐菌素在鸡 猪 牛的肌肉 脂肪 肝 肾组织中的最高残留量为 200µg/kg 1. 样品提取 称取 5.0 g( 精确到 0.01 g) 均质好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 20 ml 乙腈, 用均质器均质 1 min, 在振荡器上振荡 10 min,4200 rpm 离心 5 min, 取上清液于另一 50 ml 离心管中 ; 再加入 20 ml 乙腈于样品残渣, 重复提取一次, 合并上清液于 50 ml 离心管中, 用乙腈定容至 50 ml 移取 10 ml 提取液, 加入 30 ml 正己烷, 涡旋振荡 2 min, 以 4200 rpm 离心 5 min, 弃去正己烷, 下层提取液于 50 水浴氮气浓缩至近干 用 10 ml 磷酸盐缓冲液分两次溶解残留物, 作为待净化液 2. 净化方法 先将 Cleanert PEP-2 (500mg / 6mL) 小柱分别用 5 ml 甲醇, 5 ml 水,5 ml 磷酸盐缓冲液活化平衡 ; 然后将待净化液过柱 ( 流速控制在 /min); 用 5 ml 水和 5 ml 甲醇 - 水 (2+8) 洗柱, 弃去全部流出液, 小柱用真空泵抽干 30 min; 最后用 10 ml 甲醇洗脱 收集洗脱液于 45 氮气吹干, 用 10% 甲醇 - 水溶液溶解残留物, 过 0.22 µm 滤膜后待测 3. 检测方法 3.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, mm,5 µm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水,B 相 -0.1% 甲酸乙腈柱温 :30 ; 进样量 :10 µl; 梯度洗脱 : 见表 1 时间 (min) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 流速 (ml/min) 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源扫描方式 : 正离子扫描电喷雾电压 :5500 V 雾化气压力 :50 psi 气帘气压力 :15 psi 辅助气压力 :45 psi 离子源温度 :550 采集方式 : 多反应监测 (MRM) Q1 Q3 均为单位分辨率质谱参数 ( 见表 2) 化合物 A/% 表 2 泰乐菌素的质谱参数 Q1 Q3 B/% CE/V 泰乐菌素 (Tylosin) 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

97 4. 实验结果 5. 订货信息 由表 3 可知, 采用固相萃取结合液相色谱 - 串联质谱法检测泰乐菌素, 加标量为 4.0 µg/kg 20.0 µg/kg 加标回收率在 80%~100% 之间,RSD 值小于 10%, 能够满足检测要求 由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化, 采用 Venusil MP C18 色谱柱检测得到的泰乐菌素峰形良好, 且保留时间稳定 物质名称 泰乐菌素 (Tylosin) 表 3 泰乐菌素加标回收实验结果 (n=3) 加标量 /(µg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 9.59 产品名称 Venusil MP C18 Cleanert PEP-2 保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5mL 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格包装 5µm,100Å,2.1 50mm 500mg/6mL,30/pk 适用于 mm 和 mm 5µm,100Å,2.1 10mm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 13mm,0.22µm,200/pk 2mL 两件式无针头,100/pk 订货号 VA PE SH-100 VA S AS LZSQ-2ML 图 1 泰乐菌素样品加标 4.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 图 2 泰乐菌素样品加标 20.0 μg/kg 液相色谱 / 串联质谱质量色谱图 结论 : 本实验建立了泰乐菌素残留量的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中泰乐菌素的含量进行了测定 对于加标量为 4.0 µg/kg 20.0 µg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 80%~100%, 符合国标要求 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中泰乐菌素的残留量 091

98 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T ) 猪肉中四种硝基呋喃类代谢物残留量的测定 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10041 本文使用 Cleanert PEP-2 固相萃取柱 Venusil M P C18 色谱柱和 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪, 遵照中华人民共和国国家标准 猪肉 牛肉 鸡肉 猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 (GB/T ) 提供的方法, 检测猪肉中的 4 种硝基呋喃类代谢物残留 1. 样品信息 活化 ), 并用 10 ml 的水洗涤固相萃取小柱, 然后负压抽干柱子 15min 用 5 ml 乙酸乙酯洗脱于 20mL 棕色瓶中 ( 此过程可在 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪上完成, 仪器方法见图 1) 洗 脱液于 40 下氮气吹干 用样品定容溶液 (10 ml 乙腈,0.3 ml 的乙酸用水稀释至 100 ml) 定容至, 充分溶解, 并用 0.22 µm 尼龙针式过滤器过滤 呋喃代谢物 英文名 结构式 呋喃唑酮代谢物 3-amino--2- oxazolidinone(aoz) 呋喃它酮代谢物 呋喃妥因代谢物 3-amino-5- morpholinomethyl-2- oxazolidinone(amoz) 1-aminohydantoin (AHD) 呋喃西林代谢物 semicarbazide (SEM) 图 1 卓睿全自动固相萃取仪自动净化方法 2. 样品提取及衍生 2.1 提取称取猪肉样品 2 g( 精确到 0.01 g), 置于 50 ml 棕色离心管中, 加入 15 ml 甲醇 - 水混合溶液 (v:v=2:1), 均质 1min, 再用 5 ml 甲醇 - 水混合溶液洗涤刀头, 二者合并 8000 r/min 离心 5min, 吸取上清液倒掉 注 : 为更好的消除基质效应对检测结果造成的影响, 可加入同位素内标, 采用内标法定量检测 3. 检测方法 色谱柱 :Venusil MP C mm,5 µm,100 Å 质谱仪 :API 流动相 :A:0.1% 甲酸的水溶液 B:0.1% 甲酸的乙腈溶液流速 :0.2 ml/min 进样量 :5 µl 离子源 : 电喷雾 (ESI), 正离子模式扫描方式 : 多反应监测 (MRM) 2.2 水解和衍生 ( 注意避光 ) 向棕色离心管中加入 20 ml 0.2 mol/l 的盐酸溶液, 涡旋 1min 使之混合均匀, 之后加入 0.3 ml 浓度为 0.05 mol/l 的 2- 硝基苯甲醛, 混匀, 于 37 温水中避光衍生 16 小时 时间 (min) 表 1 梯度洗脱条件 A(%) B(%) 净化处理将衍生后的样品冷却至室温, 加入 5 ml 0.1 mol/l 的磷酸氢二钾, 并用 1 mol/l 的氢氧化钠溶液调 ph 约为 7.4, 混合均匀 之后用 8000 r/min 离心 10min, 以小于 2 ml/min 的流速过 Cleanert PEP-2 小柱 ( 规格为 60 mg / 3 ml, 用 5 ml 甲醇 5mL 水 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

99 表 2 质谱仪离子源参数 Source/Gas Collision Gas(CAD) Curtain Gas(CUR) Ion Source Gas 1(GS 1) Ion Source Gas 2(GS 2) Ion Spray Voltage(IS) Temperature(TEM) Interface Heater(ihe) On 图 5 AHD(249/134) 质谱图 表 3 4 种硝基呋喃待测物母离子和子离子参数表 物质名称保留时间 (min) SEM 8.10 AHD 8.30 AOZ 8.89 AMOZ 实验结果 监测离子对 209.1/ / / / / / / /128.1 DP EP CE CXP 名称 AMOZ SEM AHD AOZ 图 6 AMOZ(335/291) 质谱图 表 4 猪肉中 0.5ppb 加标回收实验结果 1(%) 2(%) 3(%) 平均回收率 (%) RSD(%) 图 2 4 种硝基呋喃代谢物总离子图 实验结论 :Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪整机采用密封避光设计, 用其进行硝基呋喃代谢物的前处理操作, 全净化过程可在避光条件下进行, 保证检测结果的准确性和重现性 Cleanert PEP-2 固相萃取柱和 Venusil MP C18 色谱柱完全可以满足国标对于硝基呋喃代谢物的检测要求, 结果准确可靠, 重现性好 5. 订货信息 图 3 SEM(209/166) 质谱图 产品名称 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 Cleanert PEP-2 固相萃取柱 Venusil MP C18 液相色谱柱针式过滤器 (Nylon) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 4 通道 24 位 60 mg / 3 ml,50 支 / 包 mm, 5 µm, 100 Å 0.22µm, 直径 13 mm,200 个 /pk 5 ml,100/pk 棕色,100/pk 100/pk 订货号 SPE-40 PE VA AS ZSQ-5ML 图 4 AOZ(236/134) 质谱图 093

100 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers ( 农业部 1025 号公告 ) 动物源食品中 9 种 β- 受体激动剂残留量 的测定 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF10042 本文使用天津博纳艾杰尔科技有限公司的 Cleanert PCX 固相萃取柱, 按照中华人民共和国国家标准农业部 1025 号公告 公告 动物源食品中 9 种 β- 受体激动剂残留检测方法 - 超高效液相色谱 - 串联质谱法 提供的方法, 检测猪肉 猪肝 牛肉 羊肉等四种组织中的 9 种 β- 受体激动剂残留 1. 样品信息 特布他林 西马特罗 沙丁胺醇 非诺特罗 氯丙那林 莱克多巴胺 克仑特罗 妥布特罗和喷布特罗等 9 种 β- 受体激动剂信息如表所示 β- 受体激动剂 特布他林 西马特罗 沙丁胺醇 非诺特罗 英文名 Terbutalin Cimaterol Salbutamol Fenoterol 结构式 2. 样品提取及衍生 2.1 样品酶解分别称取猪肉 猪肝 牛肉和羊肉样品各 2 g( 精确到 0.01 g), 置于 50 ml 棕色离心管中, 加入 0.2 mol/l 乙酸铵缓冲液 (ph 为 5.2)8.0 ml; 再加入 β- 盐酸葡萄糖醛苷酶 / 芳基硫酸酯酶 40 µl, 涡旋混匀, 于 37 下避光水浴振荡约 16h 2.2 提取酶解后放置至室温, 涡旋混匀,10000 rpm 离心 10min; 转移上清液于另一 50 ml 离心管内, 加入 0.1 mol/l 高氯酸溶液 5 ml, 涡旋混匀, 用高氯酸调 ph 至 1.0±0.2, rpm 离心 10min; 将上清液转移至另一 50 ml 离心管内 ; 用 10 mol/l NaOH 溶液调 ph 至 9.5±0.2; 加入乙酸乙酯 15 ml, 涡旋混匀, 并振荡 10min,5000 rpm 离心 5min, 取出上层有机相至另一 50 ml 离心管内 ; 再在下层水相中加入叔丁基甲醚 10 ml, 涡旋混匀, 并振荡 10min,5000 rpm 离心 5min; 合并有机相, 50 下氮气吹干, 用 2% 甲酸水溶液 5 ml 溶解, 备用 2.3 净化处理 PCX 小柱依次用甲醇 水 2% 甲酸溶液各 3 ml 活化 ; 取全部备用液过柱再依次用 2% 甲酸水溶液 甲醇各 3 ml 淋洗, 减压抽干 ; 用 3% 氨水甲醇溶液 2.5 ml 洗脱 ; 洗脱液在 50 下用氮气吹干, 残余物用甲醇 -0.1% 甲酸溶液 (10+ 90,V/V) 0.2 ml 溶解, 涡旋混匀,15000 rpm 离心 10min, 取上清液适量, 供超高效液相色谱 - 串联质谱仪测定 氯丙那林 莱克多巴胺 Clorprenaline Ractopamine 3. 检测方法 按照中华人民共和国国家标准农业部 1025 号公告 公告 动物源食品中 9 种 β- 受体激动剂残留检测方法 - 超高效液相色谱 - 串联质谱法 提供的方法进行检测 克仑特罗 Clenbuterol 妥布特罗 Tulobuterol 喷布特罗 Penbutolol 094 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

101 4. 实验结果 结果如下列附图所示 附图 结论本实验选用 Cleanert PCX 固相萃取柱 (60mg / 3mL), 按照农业部 1025 号公告 公告 动物源食品中 9 种 β- 受体激动剂残留检测方法 - 超高效液相色谱 - 串联质谱法 提供的方法, 验证测定猪肉 猪肝 牛肉 羊肉等四种组织中的 9 种 β- 受体激动剂残留回收率 通过不同基质的样品添加回收率实验, 结果显示天津博纳艾杰尔科技有限公司的 Cleanert PCX 固相萃取柱性能良好, 完全能够符合兽药残留检测的要求并应用在动物产品的残留监控工作中 5. 订货信息 产品名称 Cleanert PCX 固相萃取柱针式过滤器 (Nylon) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 60mg / 3mL,50 支 / 包 0.22µm, 直径 13mm,200 个 /pk 5 ml,100/pk 棕色,100/pk 100/pk 订货号 CX0603 AS ZSQ-5ML 图 5 空白猪肉添加试液中 9 种 β- 受体激动剂 (0.5 ng/g) 特征离子质量色谱图 095

102 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 图 7 空白牛肉添加试液中 9 种 β- 受体激动剂 (0.5 ng/g) 特征离子质量色谱图 图 6 空白猪肝添加试液中 9 种 β- 受体激动剂 (0.5 ng/g) 特征离子质量色谱图 图 8 空白羊肉添加试液中 9 种 β- 受体激动剂 (0.5 ng/g) 特征离子质量色谱图 096 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

103 表 1 猪肉 猪肝 牛肉和羊肉添加 ( ng/g) 批内回收实验结果 基质猪肉猪肝牛肉羊肉 添加浓度 ng/g 回收率 % 平均值 % 批内 RSD(%) 注 : 以上数据保留三位有效数字 097

104 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers ( 农业部 1025 号公告 和农业部 1063 号公告 ) 猪尿中 14 种 β- 受体激动剂残留的测定 1. 样品前处理方法 化合物离子对信息 准确量取 5 ml 尿样与 50 ml 离心管内, 加入 0.5 ml 2mol/ L 的乙酸铵缓冲液 (ph=5.2), 加入 40µL 葡萄糖醛苷酶和芳基硫酸酯酶, 漩涡混匀,37 避光水浴震荡 16h 10000rpm 离心 10min, 取上清液与另一 50 ml 离心管内, 用 5mol/L NaOH 调节 ph 值 9.8, 加入 10 ml 异丙醇 - 乙酸乙酯, 加入约 2g 固体氯化钠, 漩涡震荡 10min,5000rpm 离心 10min 以 10 ml 异丙醇 - 乙酸乙酯再次提取, 合并两次上清液,50 旋转蒸干, 以 5 ml 2mol/L 乙酸铵溶液溶解, 备用 取备用液过 PCX(60 mg/3 ml,p/n: CX0603) 柱以 5 ml 5% 氨水甲醇溶液洗脱 洗脱液在 50 下氮气吹干 用 0.2% 甲酸水溶液溶解, 待测, 过 0.22 µm 滤膜过滤, 待测 名称莱克多巴胺克伦特罗沙丁胺醇马布特罗氯丙那林 Q1 (amu) Q3 (amu) CE (ev) 色谱条件 流动相 : A: 含 5 mm 甲酸铵和 0.1% 甲酸水溶液 B: 乙腈色谱柱 : Venusil MP C18, mm,2.6 μm (P/N: VA ) 柱温 :40 梯度时间表 时间 (min) 流速 (µl/min) A (%) B (%) 西布特罗班布特罗溴布特罗克伦普罗马喷特罗羟甲基克伦特罗 福马特洛 克伦潘特 苯乙醇胺 质谱条件 离子源 : 具备电喷雾接口的 Turbo V 离子源极性 : 正离子模式, 离子源相关参数如下 : CUR: TEM: GS1: GS2: IS: 结论本方法基于国家标准 猪尿中 β- 受体激动剂多残留检测液相色谱 - 串联质谱法 ( 农业部 1025 号公告 ) 和农业行业标准 动物尿液中 11 中 β- 受体激动剂的检测 ( 农业部 1063 号公告 ), 使用 LC-MS/MS 法测定动物源食品中多种 β- 受体激动剂残留的测定 经验证, 适用于 SCIEX Triple Quad 3500, 3200,4000 系列, 4500 系列 API 系列以及 6500 系列的 LC/MS/MS 系统 方法灵敏度高, 重现性好, 适用于日常分析 098 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

105 莱克多巴胺 克伦特罗 沙丁胺醇 马布特罗 氯丙那林 西布特罗 班布特罗 溴布特罗 克伦普罗 马喷特罗 羟甲基克仑特罗 克伦潘特 苯乙醇胺 099

106 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers ( 农业部 1031 号公告 ) 动物源性食品中糖皮质激素类药物 的液质实验方法 1. 样品提取 肌肉组织样品 : 称取组织样品 (2±0.05)g 于 50 ml 离心管中, 加乙酸乙酯 15mL, 涡旋混合,8 000 r/min 离心 15 min, 移取乙酸乙酯层 于残渣中加 0.1 mol/l 氢氧化钠溶液 10 ml, 混匀, 加乙酸乙酯 20 ml, 涡旋混合,8000 r/min 离心 15 min, 移取乙酸乙酯层 合并两次提取液,40 旋转蒸至近干, 加乙酸乙酯 和正己烷 5 ml, 溶解残渣, 待净化 ; 牛奶 鸡蛋样品 : 称取样品 (2±0.05)mL 于 50 ml 离心管中, 加乙酸乙酯 20 ml, 涡旋混合,8 000 r/min 离心 15 min, 移取乙酸乙酯层,40 旋转蒸至近干, 加乙酸乙酯 1 ml 和正己烷 5 ml, 溶解残渣, 待净化 应用编号 :AF 净化方法 用正己烷 6 ml 活化 Silica SPE 小柱, 提取液过柱 用正己烷 6 ml 淋洗小柱, 抽干, 用正己烷 - 丙酮 (6/4,V/V)6 ml 洗脱 洗脱液 50 氮气吹干, 加 20% 乙腈水溶液 0.5 ml, 溶解残渣, 转入 1.5 ml 离心管中,15000 r/min 离心 20 min, 取上清液, 过 0.22 μm 滤膜, 供 LC-MS/MS 检测 3. 实验结果 表 1 不同基质加标回收结果 4. 结论 Cleanert Silica Venusil ASB C18 和 SCIEX 公司的 API 质谱仪用于动物源性食品中 5 种糖皮质激素的检测, 性能良好符合农业部公告的相关要求 5. 订货信息 基质 ( 加标浓度 ) 猪肝 (1 μg/kg) 猪肝 (10 μg/kg) 药物名称 平均回收率 RSD 平均回收率 RSD 泼尼松 68.61% 4.12% 89.74% 1.65% 泼尼松龙 68.62% 2.51% 77.61% 3.10% 氢化可的松 74.99% 5.63% 83.85% 2.62% 甲基泼尼松 63.40% 1.62% 86.03% 2.60% 地塞米松 77.95% 3.49% 86.10% 2.41% 产品名称 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 Cleanert Silica 固相萃取柱 Venusil ASB C18 液相色谱柱针式过滤器 (PTFE) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 4 通道 24 位 500mg / 6mL, 30 支 /pk mm, 3 µm,150 Å 0.22µm, 直径 13mm,200 个 /pk 5 ml,100/pk 短螺纹透明带书写 mm, 100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45. Shore A 1.0 mm,100/pk 订货号 SPE-40 SI5006 VS AS ZSQ-5ML 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

107 动物性食品中噻苯达唑 氟苯达唑及其标示残留物残留量的测定 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 猪肉 鸡肉 羊肾 : 称取 2 g 均质好的样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 0.5 ml 2% 碳酸钠水溶液,8 ml 乙腈, 5 ml 异辛烷, 涡旋 1 min, 超声提取 10 min,5000 rpm 离心 5 min, 取下层清液置于 100 ml 鸡心瓶中, 剩余残渣加入 0.5 ml 2% 碳酸钠水溶液,8 ml 乙腈重复提取一次, 合并两次下层清液, 加 5 ml 正丙醇,50 旋蒸至干, 用 8 ml 30% 酸化乙醇溶解, 作为待净化液 牛奶 : 称取 2 g 样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 0.5 ml 2% 碳酸钠水溶液,8 ml 乙腈,10 ml 异辛烷, 涡旋 1 min, 超声提取 10 min,8000 rpm 离心 5 min, 取下层清液置于 100 ml 鸡心瓶中, 剩余残渣加入 0.5 ml 2% 碳酸钠水溶液, 8 ml 乙腈重复提取一次, 合并两次下层清液,50 旋蒸至干, 加 5 ml 正丙醇, 用 8 ml 30% 酸化乙醇溶解, 作为待净化液 1.2 样品净化先将 Cleanert PCX (60 mg/3 ml) 小柱依次用 3 ml 甲醇,3 ml 2% 甲酸水溶液活化平衡 ; 然后将待净化液过柱 ; 用 3 ml 2% 甲酸水溶液和 3 ml 甲醇洗柱, 弃去全部流出液, 小柱用真空泵抽干 ; 最后用 3 ml 5% 氨化甲醇洗脱 收 集洗脱液于 50 氮气吹干, 用 流动相 (0.02 mol/l 乙酸铵溶液 : 乙腈 = 80:20,V/V) 溶解残留物, 过 0.45 µm 尼龙针式过滤器后待测 其中猪肉 鸡肉加标实验用博纳艾杰尔卓睿全自动固相萃取仪操作, 羊肾 牛奶加标实验用 12 位负压 SPE 装置手动操作 2. 检测方法 色谱柱 :Venusil MP C18,5 µm,100 Å, mm 流动相 :A 相 :0.02 mol/l 乙酸铵溶液,B 相 : 乙腈柱温 :40 进样量 :20 µl 梯度洗脱 : 见表 1 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /(ml/min) A/% B/% 实验结果 表 2 噻苯达唑 氟苯达唑及其标示残留物加标回收实验结果 (n=3) 物质名称 添加水平鸡肉猪肉羊肾牛奶 /(mg/kg) 平均回收率 /% 平均回收率 /% 平均回收率 /% 平均回收率 /% 5- 羟基噻苯达唑 (5-Hydroxythiabendazole) 噻苯达唑 (Thiabendazole) 氨基氟苯达唑 (2-Aminoflubendazole) 氟苯达唑 (Flubendazole) 羟基噻苯达唑 (5-Hydroxythiabendazole) 噻苯达唑 (Thiabendazole) 氨基氟苯达唑 (2-Aminoflubendazole) 氟苯达唑 (Flubendazole)

108 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 图 µg/ml 混合标准溶液液相色谱图 图 mg/kg 猪肉基质加标样品液相色谱图 图 2 鸡肉基质空白液相色谱图 图 6 牛奶基质空白液相色谱图 图 mg/kg 鸡肉基质加标样品液相色谱图 图 mg/kg 牛奶基质加标样品液相色谱图 图 4 猪肉基质空白液相色谱图 图 8 羊肾基质空白液相色谱图 102 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

109 5. 订货信息 4. 结论 图 mg/kg 羊肾基质加标样品液相色谱图 本实验重现动物性食品中氟苯达唑 噻苯达唑及标示残留物的残留量检测的农业部标准, 并结合高效液相色谱对 4 种基质中氟苯达唑 噻苯达唑及其标示残留物的含量进行了测定 对于加标量为 0.02 mg/kg 0.1 mg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 60% ~ 110% 之间, 符合国标要求 产品名称 规格包装 订货号 Qdaura 卓睿全自动固相萃取系统 4 通道,1 台 SPE-40 Venusil MP C18 5 µm,100 Å, mm,1 支 VA 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS Cleanert PCX 60 mg/3 ml,50 支 /pk CX 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 尼龙针式过滤器 单膜,13 mm,0.45 µm,200 个 / 包 AS 微孔滤膜 50 mm,0.45 µm,200 片 / 盒 AM 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH015-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH

110 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (SN/T ) 猪肉中齐帕特罗残留量的测定 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 准确称取 5 g 均质猪肉试样于 50 ml 离心管中, 加入 30 ml 乙腈,2 ml 异丙醇和 10 ml 柠檬酸缓冲液, 涡旋混合提取 3 min,8000 r/min 离心 3 min, 上清液转移至 250 ml 梨心瓶中 重复上述提取操作, 合并提取液, 加入 6 ml 异丙醇后, 在 40 旋蒸浓缩至 5 ml 左右, 转移浓缩液至 50 ml 离心管中, 并用 5 ml 柠檬酸缓冲液润洗梨心瓶, 合并洗液, 8000 r/min 离心 10 min, 取清液待净化 1.2 样品净化取 PEP-2 (60 mg/3 ml) 和 PCX (60 mg/3 ml), 用转接头按从上到下的顺序串联好, 依次用 3 ml 甲醇 3 ml 水 3 ml 柠檬酸缓冲液活化小柱, 待净化液以 0.5 ml/min 流速全部过柱, 再依次用 3 ml 柠檬酸缓冲液 3 ml 水 3 ml 水 - 甲醇 (95/5,V/V) 淋洗小柱, 抽干 5 min, 最后依次用 4 ml 甲醇 6 ml 甲醇 - 氨水 (95/5,V/V) 洗脱小柱, 合并收集洗脱液,40 氮气浓缩至干, 加入 1.0 ml 0.1% 甲酸水 - 甲醇溶液 (95/5,V/V) 振荡溶解残渣, 过 0.22 μm 尼龙针筒过滤器, 待测 注 : 上述操作步骤可在 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪上完成 2. 检测方法 2.1 液相条件色谱柱 :Venusil MP C18,2.1 50mm,3 μm,100 Å; 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水溶液,B 相 -0.1% 甲酸乙腈 ; 柱温 :30 ; 进样量 :10 µl; 流速 :300 µl/min; 等度洗脱 :0~10 min,a:b = 95:5 (V/V) 2.2 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源 ; 扫描方式 : 正离子扫描 ; 电喷雾电压 :4500 V; 雾化气压力 :40 psi; 气帘气压力 :15 psi; 辅助气压力 :40 psi; 离子源温度 :400 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM); Q1 Q3 均为单位分辨率 ; 质谱参数 ( 见表 1) 表 1 齐帕特罗的质谱参数 Compound Q1 Q3 DP EP CE CXP 齐帕特罗 (zilpaterol) 实验结果 表 2 齐帕特罗加标回收实验结果 (n=3) 物质名称 加标量 /(μg/kg) 处理加标回收率 /% RSD/% RT/min 齐帕特罗 (zilpaterol) 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

111 5. 订货信息 4. 结论 图 1 空白样品 LC-MS/MS 谱图 图 μg/kg 样品加标 LC-MS/MS 谱图 产品名称 规格包装 订货号 Venusil MP C18 3 μm,100å;2.1 50mm,1 支 VA 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 3 μm,150å;2.1 10mm, 4 支 / 包 DC LS Cleanert PEP-2 60 mg/3 ml,50 支 /pk PE Cleanert PCX 60 mg/3 ml,50 支 /pk CX ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk mL 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 24 位, 四通道,1 台 SPE-40 氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 针式过滤器 (Nylon) 单膜,13 mm,0.22 μm,200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 UV 级 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 S 本实验建立了齐帕特罗残留量的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对猪肉中齐帕特罗的含量进行了测定 对于加标量为 4.0 μg/kg 的样品进行了检测, 回收率在 90% ~ 110%, 符合国标要求, 固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好, 说明本方法能够用于检测动物源性食品中齐帕特罗的残留量 105

112 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 动物源性食品中碘醚柳胺残留量的分析方法 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 准确称取绞碎的样品 10 g 于 50 ml 离心管中, 加乙腈 20 ml,10000 r/min 涡旋均质 1 min,4000 r/min 离心 5 min, 移取上清液 残渣再用 10 ml 乙腈重复提取一次, 合并上清液 1.2 样品净化 Cleanert PAX 固相萃取小柱先用 5 ml 乙腈活化, 之后将上述提取液以 /min 的流速全部上样过柱 用 5 ml 乙腈淋洗小柱, 真空抽干, 用 10 ml 1% 甲酸酸化乙腈洗脱并收集 洗脱液于 40 下氮气吹干, 残留物用乙腈溶解并定容至 0.5 ml, 过 0.45 μm 滤膜, 待测 注 : 上述操作步骤可在 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪上完成 2. 色谱条件色谱柱 :Durashell C18,5 μm,100 Å, mm; 流动相 : 磷酸水溶液 (PH 2.5): 乙腈 = 15:85; 柱温 :30 ; 波长 :282 nm; 进样量 :20 μl; 3. 实验结果 表 1 碘醚柳胺标准溶液回归方程及相关系数 药物名称 回归方程 相关系数 碘醚柳胺 Y = 15.60x R 2 = 检测方法稳定性使用 15 μg/ml 的标准溶液, 连续进样 6 针, 记录每针碘醚柳胺的保留时间和峰面积, 计算其相对标准偏差, 结果见表 2 表 2 碘醚柳胺保留时间和峰面积 RSD 值 药物名称 保留时间 RSD/% 峰面积 RSD/% 碘醚柳胺 加标回收结果从表 3 可知, 采用 Cleanert PAX 固相萃取小柱结合高效液相色谱法检测牛肉 牛肾 羊肉 羊肾和羊油基质中的碘醚柳胺, 当牛肉基质中加标浓度在 15 μg/kg ~ 60 μg/kg 时, 回收率在 91% ~ 101% 之间 ; 牛肾基质中加标浓度在 20 μg/kg ~ 80 μg/kg 时, 回收率在 76% ~ 81% 之间 ; 羊肉基质中加标浓度在 100 μg/kg ~ 400 μg/kg 时, 回收率在 74% ~ 95% 之间 ; 羊肾基质中加标浓度在 75 μg/kg ~ 300 μg/kg 时, 回收率在 78% ~ 92% 之间 ; 羊油基质中加标浓度在 100 μg/kg ~ 500 μg/kg 时, 回收率在 64% ~ 77% 之间 ; 且各基质的最低定量限均小于欧盟规定的最大残留限量 (MRL), 满足检测要求 3.1 线性关系分别配制浓度为 0.05 μg/ml 0.1 μg/ml 0.5 μg/ml 1 μg/ml 10 μg/ml 的碘醚柳胺标准工作液, 按上述液相色谱条件检测, 测定结果经线性回归, 线性范围是 μg/ml, 回归方程 相关系数详见表 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

113 表 1 齐帕特罗的质谱参数 物质名称 样品基质 添加浓度 /(μg/kg) 平均回收率 /% RSD /% LOQ (μg/kg,s/n 10) MRL 要求 (μg/kg) 牛肉 牛肾 碘醚柳胺 羊肉 羊肾 羊油 图 2 碘醚柳胺标准溶液图谱 图 4 牛肉添加图谱 图 3 牛肉空白图谱 图 5 羊脂肪空白图谱 107

114 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 订货信息 4. 结论 图 6 羊脂肪添加图谱 本实验采用 Cleanert PAX 固相萃取小柱结合高效液相色谱建立了动物源性食品中碘醚柳胺的检测方法, 并采用外标法定量, 当碘醚柳胺的加标量在 15 μg/kg ~ 500 μg/kg 时, 回收率在 64% ~ 101% 之间, 且该方法对样品基质中的碘醚柳胺的定量限小于欧盟的 MRL 要求, 满足检测要求 产品名称 规格包装 订货号 Venusil Durashell C18 5 μm,100 Å, mm,1 支 DC 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;4.6 10mm, 4 支 / 包 DC LS Cleanert PAX 150 mg/6ml,30 支 AX1506 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 24 位, 四通道,1 台 SPE-40 固相萃取真空装置 12 位,1 台 VM12 氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk mL 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 针式过滤器 (Nylon) 单膜,13 mm,0.45 μm,200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

115 牛奶中甲砜霉素的分析方法 应用编号 :AF10121 摘要 : 本实验重现了 GB , 样品经乙酸乙酯提取,Cleanert AQ C18 固相萃取柱净化,Venusil XBP C18 (L) 色谱柱 ( mm,5 µm,150 Å) 分离, 水和乙腈为流动相进行洗脱, 外标法进行定量 结果表明, 甲砜霉素添加量为 2.0 mg/kg 时, 回收率在 90% ~ 100% 之间, 能够满足检测要求 关键词 : 甲砜霉素 ;Venusil XBP C18 (L) 色谱柱 ; Cleanert AQ C18;Cleanert PEP 1. 前言 服用甲砜霉素可发生腹痛 腹泻 恶心 呕吐等消化道反应, 其发生率在 10% 以下 ; 偶见皮疹等过敏反应 ; 早产儿及新生儿中尚未发现有灰婴综合征者 仅有个例报道有出现短暂性皮肤和面色苍白 ; 本品亦可引起造血系统的毒性反应, 主要表现为可逆性的红细胞生成抑制 ; 白细胞和血小板减少 ; 发生再生障碍性贫血者罕见 因此通过有效的实验技术手段, 对牛奶中的有关甲砜霉素残留进行监控, 以确保消费者对牛奶消费的安全具有重要意义 本实验通过优化前处理方法建立了甲砜霉素在牛奶中的高效液相色谱的检测方法 2. 实验材料 主要仪器设备高效液相色谱仪 ( 紫外检测器 ); 博纳艾杰尔 12 位负压 SPE 装置 试剂材料乙酸乙酯 乙腈 正己烷为色谱纯 ; 实验用水为超纯水 ; 甲砜霉素标准品 ( 纯度 99%); 一次性无菌注射器 ;PTFE-Q 针式过滤器 (0.45 µm, 直径 13 mm); Cleanert AQ C18 固相萃取柱 :500 mg/3 ml Cleanert PEP 固相萃取柱 :200 mg/6 ml 转至 50 ml 离心管中, 再加水 5 ml 于鸡心瓶中重复溶解后转至同一离心管中 加 20 ml 正己烷, 振荡 5 min,4000 r/min 离心 2 min, 取下层液待净化 4. 色谱条件 色谱柱 :Venusil XBP C18 (L), 5 µm,150 Å, mm 流动相 : 乙腈 : 水 =20:80 柱温 :35 进样量 :20 µl 检测波长 :225 nm 5. 结果与讨论 实验结果由表 1 可知, 采用固相萃取结合液相色谱法检测甲砜霉素, 两款小柱加标回收率均在 90% 以上, 能够满足标准要求, 并且 Cleanert PEP 效果更佳 净化柱名称 表 1. 牛奶中甲砜霉素加标回收实验结果 添加水平 /(mg/kg) 平均回收率 /% 图 mg/ml 甲砜霉素标准溶液液相色谱图 CV /% Cleanert AQ C Cleanert PEP 样品制备 样品提取称取牛奶 5 g 于 50 ml 离心管中, 加乙酸乙酯 20 ml, 振荡 10 min,4000 r/min 离心 5 min, 取上清液于鸡心瓶中, 残渣加乙酸乙酯 20 ml, 重复提取一次, 合并两次提取液, 于 45 旋蒸至近干, 加水 5 ml 于鸡心瓶中, 超声 5 min 充分溶解, 图 2. Cleanert AQ C18 牛奶基质空白液相色谱图 109

116 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 图 3. Cleanert AQ C18 2.0mg/kg 牛奶基质加标液相色谱图 图 5. Cleanert PEP 2.0mg/kg 牛奶基质加标液相色谱图 结论 本实验依据 GB 建立了牛奶中甲砜霉素残留量的检测方法, 并结合高效液相色谱对牛奶中甲砜霉素残留物的含量进行了测定 对于加标量为 2.0 mg/kg 的牛奶样品, 回收率在 90% ~ 100% 之间, 两款小柱均符合实验要求 图 4. Cleanert PEP 牛奶基质空白液相色谱图 6. 订货信息 名称 Venusil XBP C18 (L) Cleanert AQ C18 Cleanert PEP Qdaura 卓睿全自动固相萃取系统 15 位氮吹仪保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖针式过滤器一次性注射器 规格 5 µm,150 Å, mm,1/pk 500 mg/3 ml,50/pk 200 mg/6 ml,30/pk 4 通道 15 位适用于 mm 和 mm,1/pk 5 µm,150 Å; mm,4/pk 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45 Shore A; 1.0 mm 单膜,13 mm,0.45 µm,200/pk 2 ml 无针头,100/pk 订货号 VX L S AQ PE2006 SPE-40 NV15-M SH-100 VX LS AS LZSQ-2ML 110 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

117 (GB/T ) 鱼肉中氯霉素 氟苯尼考 甲砜霉素的测定 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取均质好的鱼肉样品 5 g 置于 50 ml 离心管中, 加入 30 ml 乙腈, 涡旋 1 min, 超声提取 5 min,8000 r/min 离心 5 min, 取全部上清液置于分液漏斗中, 并向分液漏斗中加入 15 ml 乙腈饱和的正己烷溶液, 震荡 5 min, 静置分层, 转移乙腈层至鸡心瓶中, 残渣再加入 30 ml 乙腈按照上述步骤液液萃取一次, 合并两次提取液, 向鸡心瓶中加入 5 ml 正丙醇, 摇匀,40 旋蒸至近干, 再用氮气吹干, 加入 5 ml 丙酮 - 正己烷 (1+9) 溶解, 摇匀, 待净化 1.2 样品净化将 Cleanert Silica 小柱用 5 ml 丙酮 / 正己烷 (V/V, 1+9) 活化平衡, 将上述待净化液全部上样于小柱上, 弃去流出液, 再用 5 ml 丙酮 - 正己烷 (V/V, 6+4) 洗脱小柱, 收集流出液, 于 40 下旋蒸至近干, 用水定容至 1 ml, 待检测 以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成 2 检测方法 2.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18, 3 µm,100 Å, mm 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水溶液,B 相 -0.1% 甲酸乙腈柱温 :30 进样量 :5 µl 梯度洗脱条件 ( 见表 1) 2.2 质谱条件离子源 :ESI-; 电喷雾电压 :-4500 V; 雾化气压力 : 50 psi; 气帘气压力 :10 psi; 辅助气压力 :60 psi; 离子源温度 :550 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 物质名称 Q1 Q3 DP/V CE/V 氯霉素 甲砜霉素 氟苯尼考 注 : 下划线 为定量离子 3. 实验结果 表 2 3 种氯霉素类药物质谱参数 表 3 鱼肉中 3 种氯霉素类药物加标回收实验结果 ( 添加水平 1.0 µg/kg) 物质名称 保留时间 /min 平均回收率 /% CV/% 氯霉素 甲砜霉素 氟苯尼考 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /(ml/min) A/% B/% 图 µg/ml 3 种氯霉素类药物混合标准溶液色谱图 111

118 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 4. 结论 本实验建立了鱼肉中 3 种氯霉素类药物的前处理方法, 并结合 LC-MS/MS 对样品进行了检测 结果表明, 对于加标量为 4.0 µg/kg 的鱼肉样品, 加标回收率在 70% ~ 115% 之间, 满足检测要求 说明该方法适用于鱼肉中氯霉素类药物的同时检测 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Cleanert Silica 200 mg/3 ml,50 支 / 包 SI2003 Venusil MP C18 3 µm,100 Å, mm,1 支 VA 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 3 μm,150å;2.1 10mm, DC 支 / 包 LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 1.5mL 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 尼龙针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 µm,200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML Qdaura 卓睿全自动固相萃取系统 4 通道,1 台 SPE 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

119 (GB ) 呋喃苯烯酸钠的测定 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品制备 量取 6 ml 40% 乙腈水 (V/V, 甲酸调至 ph 为 2.0), 置于 12 ml 样品瓶中, 加入 µg/ml 标准品, 涡旋震荡溶解, 作为待净化液 1.2 样品净化取 Cleanert PEP 萃取柱 (60 mg/3 ml), 依次用 3 ml 甲醇,3 ml 水活化小柱 ; 将上述待净化液上样到小柱上, 然后用 6 ml 水润洗样品瓶, 将润洗液也上样到柱上, 弃去淋洗液, 抽干 10 min; 最后用 5 ml 10% 氨化甲醇洗脱, 收集 ;40 氮气吹至近干, 用 乙腈溶解定容, 过 0.22 µm PTFE 针式过滤器后进 LC-MS/MS 检测 以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成 物质名称 Q1 Q3 DP/V CE/V 呋喃苯烯酸钠 注 : 下划线为定量离子 3. 实验结果 表 2 呋喃苯烯酸钠质谱参数 表 3 呋喃苯烯酸钠回收实验结果 物质名称 平均回收率 /% 变异系数 /% 保留时间 /min 呋喃苯烯酸钠 检测方法 2.1 液相条件 色谱柱 :Venusil MP C18(2),3 µm,110 Å, mm 流动相 :A:0.1% 甲酸水 ;B: 乙腈柱温 :30 进样量 :5 µl 流速 :0.5 ml/min 梯度洗脱 : 见表 1 图 µg/ml 标准溶液 LC-MS/MS 色谱图 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /(ml/min) A/% B/% 质谱条件 离子源 :ESI-; 电喷雾电压 :-4500 V; 雾化气压力 : 8 psi; 气帘气压力 :20 psi; 辅助气压力 :45 psi; 离子源温度 :350 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 质谱参数 : 见表 2 图 2 萃取柱空白 LC-MS/MS 色谱图 113

120 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 订货信息 产品名称规格包装订货号 Venusil MP C18(2) 3 µm,110 Å, mm,1 支 VA 结论 图 3 标样过柱 LC-MS/MS 色谱图 本实验建立了呋喃苯烯酸钠的 LC-MS/MS 检测方法, 并结合固相萃取技术对呋喃苯烯酸钠的标样过柱进行了测定 对于标样过柱的样品, 呋喃苯烯酸钠回收率为 84.7%, 变异系数小于 10%, 能够满足实验要求 说明 Cleanert PEP 小柱可以用于呋喃苯烯酸钠的检测, 且稳定性良好 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 3 μm,150å;2.1 10mm, 4 支 / 包 DC LS Cleanert PEP 60 mg/3 ml,50 支 /pk PE ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk mL 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 针式过滤器 PTFE 单膜,13 mm,0.22 µm,100 个 / 包 AS T 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML Qdaura 卓睿全自动固相萃取系统 4 通道,1 台 SPE 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 114 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

121 (GB/T ) 鱼肉中孔雀石绿和结晶紫的测定 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取均质好的鱼肉样品 5 g 置于 50 ml 离心管中, 加入 200 µl 2 ng/ml 的内标标准溶液, 再加入 1 乙腈, 超声提取 2 min,8000 r/min 匀浆 30 s,4000 r/min 离心 5 min, 取全部上清液置于 25 ml 比色管中, 取另一离心管加入 11 ml 乙腈洗涤匀浆刀头 10 s, 合并于装有样品残渣的离心管中, 残渣用玻璃棒捣碎, 涡旋 30 s, 超声振荡 5 min,4000 r/min 离心 5 min, 合并两次上清液, 用乙腈定容至 25 ml, 摇匀, 待净化 1.2 样品净化将 Cleanert Alumina-N 小柱用 5 ml 乙腈活化, 从上述待净化液中取出 5 ml 上样于小柱上, 收集流出液于 KD 浓缩瓶中, 再用 4 ml 乙腈洗涤小柱, 收集流出液于同一 KD 浓缩瓶中, 将流出液于 45 旋蒸至小于, 用乙腈定容至, 超声振荡 5 min, 加入 5 mmol/l 乙酸铵溶液, 超声振荡 1 min, 经 0.22 µm 尼龙针式过滤器过滤, 待检测 以上操作可用卓睿全自动固相萃取仪完成 2. 检测方法 2.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18,3 µm,100 Å, mm 流动相 :A 相 -0.1% 甲酸水溶液 (V/V),B 相 - 乙腈柱温 :30 进样量 :5 µl 梯度洗脱条件 ( 见表 1) 2.2 质谱条件离子源 :ESI+; 电喷雾电压 :5500 V; 雾化气压力 : 50 psi; 气帘气压力 :25 psi; 辅助气压力 :50 psi; 离子源温度 :500 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 物质名称 Q1 Q3 DP/V CE/V 孔雀石绿 隐色孔雀石绿 结晶紫 隐色结晶紫 D5- 孔雀石绿 D6- 隐色孔雀石绿 实验结果 表 2 孔雀石绿质谱参数 注 : 下划线 为定量离子 表 3 鱼肉中孔雀石绿与结晶紫加标回收实验结果 ( 添加水平 2.5 µg/kg) 物质名称 保留时间 /min 平均回收率 /% CV/% 孔雀石绿 隐色孔雀石绿 结晶紫 隐色结晶紫 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 图 µg/ml 孔雀石绿结晶紫混合标准溶液色谱图 115

122 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 4. 结论 本实验建立了鱼肉中孔雀石绿与结晶紫的前处理方法, 并结合 LC-MS/MS 对样品进行了检测 结果表明, 对于加标量为 2.5 µg/kg 的鱼肉样品, 加标回收率在 90% ~ 115% 之间, 且变异系数小于 10%, 满足检测要求 说明该方法适用于鱼肉中孔雀石绿与结晶紫的检测 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Cleanert Alumina-N 1000 mg/3 ml,30 支 / 包 AL0003-N 卓睿全自动固相萃取仪 4 通道,24 位,1 台 SPE-40 Venusil MP C18 3 µm,100 Å, mm, 1 支 VA 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 3 μm,150å;2.1 10mm,4 DC 支 / 包 LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk 氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 1.5 ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 尼龙针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 µm, 200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 116 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

123 鱼肉中 5 种硝基咪唑类药物的测定 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取均质好的鱼肉样品 20 g 置于 250 ml 具塞锥形瓶中, 加入 10 g 硅藻土与样品充分混匀, 再依次加入 5 ml 饱和氯化钠溶液水溶液和 70 ml 甲醇 : 丙酮 =3:1(V/V), 高速均质 3 min 将提取液转移至离心管中, 于 r/min 条件下离心 5 min, 将上清液转移至 250 ml 浓缩瓶中, 剩余残渣用甲醇 : 丙酮 =3:1(V/V) 重复提取两次, 合并提取液 将提取液用 40 旋蒸至只剩余水相, 转移至分液漏斗中, 加入 50 ml 饱和氯化钠和 25 ml 乙酸乙酯, 振摇 3 min, 静置分层, 收集乙酸乙酯相, 水相再用 20 ml 乙酸乙酯重复提取 2 次, 合并乙酸乙酯相 再经约 3 g 的无水硫酸钠脱水, 收集于浓缩瓶中,40 旋蒸至近干, 加入 5 ml 甲醇溶解残渣, 并用 0.45 µm Nylon 针式过滤器过滤, 待净化 1.2 样品净化将 Cleanert C18 小柱用 5 ml 甲醇活化平衡, 将上述待净化液全部上样于小柱上, 收集流出液, 再用 10 ml 甲醇洗脱小柱, 收集流出液, 合并两次流出液, 于 45 下旋转蒸发至干, 用流动相定容至, 待检测 2. 检测方法 2.1 色谱条件色谱柱 :Venusil MP C18,3 µm,100 Å, mm 流动相 :A 相 -5 mmol 乙酸铵溶液,B 相 - 甲醇柱温 :30 进样量 :5 µl 梯度洗脱条件 ( 见表 1) 2.2 质谱条件离子源 :ESI+; 电喷雾电压 :5500 V; 雾化气压力 : 50 psi; 气帘气压力 :25 psi; 辅助气压力 :50 psi; 离子源温度 :500 ; 采集方式 : 多反应监测 (MRM) 物质名称 Q1 Q3 DP/V CE/V 羟甲基咪唑 甲硝咪唑 甲硝唑 洛硝达唑 羟基二甲硝咪唑 注 : 下划线 为定量离子 3. 实验结果 表 2 5 种硝基咪唑类药物质谱参数 表 3 鱼肉中 5 种硝基咪唑类药物加标回收实验结果 ( 添加水平 1.0 µg/kg) 物质名称 保留时间 /min 平均回收率 /% CV/% 羟甲基咪唑 甲硝咪唑 甲硝唑 洛硝达唑 羟基二甲硝咪唑 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /(ml/min) A/% B/% 图 µg/ml 5 种硝基咪唑类药物混合标准溶液色谱图 117

124 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 4. 结论 本实验建立了鱼肉中 5 种硝基咪唑类药物的前处理方法, 并结合 LC-MS/MS 对样品进行了检测 结果表明, 对于加标量为 1.0 µg/kg 的鱼肉样品, 加标回收率在 90% ~ 110% 之间, 满足检测要求, 且变异系数小于 10%, 稳定性良好 说明该方法适用于鱼肉中 5 种硝基咪唑类药物的同时检测 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Cleanert S C mg/6 ml,30 支 / 包 S 卓睿全自动固相萃取仪 4 通道,24 位,1 台 SPE-40 Venusil MP C18 3 µm,100 Å, mm, 1 支 VA 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 3 μm,150å;2.1 10mm,4 DC 支 / 包 LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk 氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 1.5 ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; mm,100/pk 尼龙针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 µm, 200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 118 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

125 改进的 QuEChERS 结合 LC-MS/MS 同时测定蜂蜜中 60 种兽药残留 ( 卓越论文 ) 应用编号 :CU1003 作者 : 王伟, 石志红等摘要 : 建立了同时测定蜂蜜中 60 种兽药残留的 LC-MS/MS 检测方法 蜂蜜样品采 Mcllvaine 缓冲溶液 (ph 4) 稀释,5% 乙酸乙腈提取, 提取液经盐析,NH 2 吸附剂分散固相萃取净化,LC-MS/MS 动态多反应监控模式测定 在 3 个添加水平下 (n=6),60 种兽药平均回收率在 70%~120% 范围内的占比分别为 96.7%,98.3% 和 98.3%,RSD 为 0.6%~20% 在 0.1~1000 μg/kg 范围内, 81.7% 的目标物的线性相关系数 ( r2 ) > 0.995, 检出限和定量限范围分别为 ~ μg/kg 和 0.02~59.97 μg/kg 对 16 个市售蜂蜜样品进行测定, 其中 5 个样品中检出磺胺类 喹诺酮类 硝基咪唑类等兽药残留 该方法具有一次处理样品, 可同时测定 60 种兽药残留的特点, 适合于蜂蜜中多类兽药的高通量筛查检测 分析实验室 2013 年第 32 卷第 4 期 QuEChERS 结合 LC-MS/MS 同时测定虾肉中 72 种兽药残留 ( 卓越论文 ) 应用编号 :CU1004 作者 : 明楠, 石志红等摘要 : 建立了虾肉中 72 种兽药残留的 QuEChERS 结合液相色谱串联质谱测定的分析方法 样品经 5% 醋酸乙腈均质提取离心后, 上清液依次用 C18 净化 乙腈沉淀蛋白 氮吹浓缩,0.1% 甲酸 - 乙腈 (4:1, 体积比 ) 定容,0.22 μm 滤膜过滤,LC- MS/MS 测定, 外标法定量 流动相为 0.1% 甲酸和乙腈, 采用梯度洗脱模式进行色谱分离 ; 离子源为电喷雾离子源 (ESI), 多重反应监测模式 (MRM) 在 0.1~1840 μg/kg 范围内,97.2% 的目标兽药的线性相关系数大于 0.95, 定量下限范围为 0.02~33.58 μg/kg 除熊脱氧胆酸 头孢吡啉 头孢喹咪 头孢噻呋 林可霉素 二嗪哝的回收率为 38%~58% 外, 其它目标化合物的回收率为 61%~119%, 相对标准偏差为 1. 6%~20%, 满足各国的限量法规要求 对市售的海虾 凤尾虾仁 青虾仁样品进行 72 种兽药残留筛查测定, 海虾和凤尾虾仁中无检出 ; 青虾仁样品中检出磺胺嘧啶和磺胺甲唑, 检出量分别为 4.0 μg /kg 和 2.2 μg /kg, 均低于各国规定的限量要求 分析测试学报 2012 年第 31 卷第 5 期 119

126 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T ) 蜂蜜中大环内酯类药物残留量测定 1. 样品前处理方法 准确称取蜂蜜试样 (5.00±0.01g), 置于 50 ml 具塞离心管中, 加入 15 ml 0.1 mol/l Na 2 CO 3 /NaHCO 3 (ph 9.3) 缓冲溶液, 于液体混匀器上快速混合 1 min, 使试样完全溶解 将混合液倒入下接 Cleanert PEP-2 (60 mg/3 ml, P/ N: PE0603-2) 的贮液器中, 溶液以 2 ml/min 的流速通过 Cleanert PEP-2 (60 mg/3 ml, P/N: PE0603-2). 待溶液完全流出后, 用 5 ml 水洗离心管和贮液管并过柱, 再用 5 ml 甲醇 + 水 ( 甲醇 水 =4 6) 洗柱, 弃去全部淋出液, 抽干, 用 5 ml 甲醇洗脱 收集洗脱液于 50 下用氮气吹干, 甲醇 + 水 ( 甲醇 水 =3 7) 定容至 1.0 ml, 过 0.45 μm 的滤膜到进样瓶中, 供液相色谱 / 质谱仪测定 2. 色谱条件 流动相 :A: 水 (0.1% 甲酸 ),B: 甲醇色谱柱 :Venusil MP C18, mm,3 μm (P/N: VA ) 柱温 :40 梯度洗脱梯度时间表 蜂蜜中大环内酯类物质的离子对信息名称 Q1 (amu) 红霉素 罗红霉素 替米卡星 泰乐菌素 交沙霉素 竹桃霉素 螺旋霉素 I 北里霉素 Q3 (amu) 时间 (min) 流速 (µl/min) A (%) B (%) 总结该方法基于 (GB/T ), 使用 LC-MS/MS 法进行蜂蜜中大环内酯类抗生素的测定, 该法简单 灵敏, 特异性强, 适用于蜂蜜中大环内酯类药物残留的分析确证 并且通过验证可用于各种蜂产品基质中大环内酯类的定量 定性分析 数据库经验证适用于 SCIEX Triple Quad 4000 系列 4500 系列 API 系列以及 6500 系列的 LC/MS/MS 系统 3. 质谱条件 离子源 : 具备电喷雾接口的 Turbo V 离子源极性 : 正离子模式, 离子源相关参数如下 : CUR: 20.0 TEM: GS1: 60.0 GS2: 60.0 IS: 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

127 (GBT ) 蜂王浆中土霉素, 金霉素, 四环素, 强力霉素 残留量测定 1. 样品前处理方法 称取 2.0 g( 精确到 g) 样品, 置于 50 ml 离心管中, 加入 15 ml 1% 的三氯乙酸溶液,1000 rpm 涡旋混合 1 min, 于 6500 rpm 离心 5 min, 取上清液 10 ml, 用 1mol/LNa 2 HPO 4 调节 ph 值为 6-7, 将溶液通过 SPE 小柱, 待样液完全流出后, 依次用 5 ml 水和 5 ml 5% 甲醇水溶液淋洗, 弃去全部流出液 减压抽干小柱 5 min, 最后用 5 ml 甲醇洗脱 40 氮气吹干, 用 甲醇水 (3:7,v/v) 溶液溶解残渣, 过 0.45 μm 滤膜, 待测 2. 色谱条件 流动相 :A: 水 (0.1% 甲酸 ),B: 乙腈 (0.1% 甲酸 ) 色谱柱 :Venusil MP C18, mm,3 μm (P/N: VA ) 柱温 :40 梯度洗脱梯度时间表 化合物离子对信息如下表所示 : 名称 Polarity Q1 (amu) Q3 (amu) CE(eV) 盐酸四环素盐酸强力霉素盐酸土霉素 positive positive positive 盐酸金霉素 positive 同时检测蜂王浆中 4 中四环素类抗生素总离子流色谱图 : 时间 (min) 流速 (µl/min) A (%) B (%) 质谱条件 离子源 : 具备电喷雾接口的 Turbo V 离子源极性 : 正离子模式, 离子源相关参数如下 : CUR: 20.0 TEM: GS1: 60.0 GS2: 60.0 IS: 总结该方法基于 (GB/T ), 使用 LC-MS/MS 法进行蜂王浆中四环素类抗生素的测定, 并且通过验证可用于各种蜂产品基质中四环素的定量 定性分析 数据库经验证适用于 SCIEX Triple Quad ,4000 系列 4500 系列 API 系列以及 6500 系列的 LC/MS/MS 系统 灵敏度高, 重现性好, 适用于各相关实验室进行该类物质的日常分析 121

128 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 第三部分 食品添加剂 122 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

129 食品中八种人工着色剂的测定 HPLC 法 应用编号 :AF10046 人工合成着色剂又称人工合成色素, 常以苯 甲苯等为原料, 先制备色素中间体, 再将一种或两种中间体进行磺化 偶合 缩合和偶氮化等化学反应而制成 食品中合成着色剂的测定 (GB/T ), 采用聚酰胺吸附食品中的人工合成着色剂, 并用乙醇胺溶液进行洗脱 聚酰胺对合成色素的吸附能力会受到温度的影响, 实验时需对样品和淋洗液做加热处理, 而且乙醇胺浓缩所需时间过长, 此方法不适合大批量样品同时处理, 且不易做自动化方法移植 大多数人工合成着色剂均具有苯磺酸钠结构, 本实验选用 Cleanert PWAX 混合型弱阴离子交换柱, 用以吸附食品中的合成着色剂, 选用氨化甲醇洗脱, 浓缩时间短, 适用于大批量样品的同时检测 样品组分 柠檬黄 新红 苋菜红 靛蓝 赤藓红 结构式 1. 样品溶液的配置 表 1 着色剂样品信息 样品组分 胭脂红 日落黄 诱惑红 亮蓝 结构式 a) 乙酸铵溶液 (0.02 mol/l): 称取 1.54 g 乙酸铵, 加水溶解并稀释至 1000 ml; b) 甲醇 / 甲酸 (6+4) 溶液 : 量取甲醇 60 ml, 甲酸 40 ml, 混匀 ; c) 柠檬酸溶液 : 称取 20 g 柠檬酸, 加水至 100 ml 溶解, 混匀 ; d) 提取液 a: 量取无水乙醇 70 ml, 氨水溶液 20 ml 水 10 ml, 混匀 ; e) 水 (ph 为 6.0): 水加柠檬酸溶液调节 ph 为 6.0; 2. 样品提取 a) 饮料类样品 : 称取 10 g 样品放入 100 ml 烧杯中, 含二氧化碳的样品加热去除二氧化碳 ; b) 配制酒类 : 称取 10 g 样品放入 100 ml 小烧杯中, 加热去除乙醇 ; c) 液体调味料 : 称取 10 g 样品放入 100 ml 小烧杯中, 若试样 ph 值偏高, 用柠檬酸水溶液调节 ph 至 6 左右 ; d) 固体调味料 : 称取 2 g 样品放入 100 ml 小烧杯中, 加入 10 ml 1% 氨水溶液, 涡旋提取 1 min,4000 r/min 离心 5 min, 重复提取至提取液无色, 合并上清液, 用柠檬酸水溶液调节 ph 至 6 左右作为待净化液 ; e) 酱料类 : 称取 2 g 样品, 加入 20 ml 石油醚, 涡旋混合 1 min,5000 r/min 离心 5 min, 弃去石油醚上清液, 残渣吹干, 加入 10 ml 1% 氨水溶液, 涡旋提取 1 min,4000r/ min 离心 5 min, 重复提取至提取液无色, 合并上清液, 用柠檬酸水溶液调节 ph 至 6 左右作为待净化液 ; f) 果冻 水果罐头 : 称取已均质样品 2 g, 装入 50 ml 离心管中, 加入 5 ml 提取液 a 涡旋 1 min,4000r/min 离心 5 min, 重复提取至提取液无色, 合并上清液置于 80 水浴中浓缩至 2 ml, 水洗转移至 10 ml 比色管中, 用水定容 ( 若试样 ph 偏高, 用柠檬酸水溶液调节 ph 至 6 左右 ); g) 肉制品 : 称取已均质样品 2 g, 装入 50 ml 离心管中, 加入 20 ml 石油醚, 涡旋混合 1 min,4000 r/min 离心 5 min, 弃去石油醚上清液 残渣吹干, 加入 5 ml 提取液 a 涡旋 1 min,4000 r/min 离心 5 min, 重复提取至提取液无色, 合并上清液置于 80 水浴中浓缩至 2 ml, 水洗转移至 10 ml 比色管中, 用水定容 ( 若试样 ph 偏高, 用柠檬酸水溶液调节 ph 至 6 左右 ) 转移至卓睿全自动固相萃取仪上样管中, 待净化 3. 固相萃取柱净化 SPE 小柱 :Cleanert PWAX (150 mg/6 ml) 取固相萃取柱及上述提取液至 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪中, 完成 SPE 净化过程 活化 :6 ml 甲醇,6 ml 水 (ph 值 6 ~ 7); 上样 : 取全部提取液上样 ; 淋洗 : 依次用 6 ml 水 (ph 为 4) 6 ml 甲醇 - 甲酸 (6:4) 6 ml 水 (ph 值 (6 ~ 7) 淋洗, 通气吹干小柱 5 min; 洗脱 :6 ml 2% 氨化甲醇洗脱并接收 ; 收集液于 50 氮气吹干, 用 水定容, 过 0.45 μm 水系滤器过滤, 待测 123

130 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 4. 实验条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(L) 5µm mm; 流速 :1.0 ml /min; 进样量 :20 µl; 波长 :254 nm; 梯度 : 表 2 流动相及时间梯度 时间 实验结果 5.1 Cleanert PWAX SPE 柱添加回收实验 通过对不同基质样品的加标实验, 对上述检测方法进行验证, 结果见下表 : 样品组分 柠檬黄新红苋菜红靛蓝胭脂红日落黄诱惑红亮蓝 样品组分 胭脂红日落黄诱惑红 A%(0.02mol/L 乙酸铵 ) 表 3 5 μg/g 红酒基质 8 种着色剂加标回收率 标样过柱 1(%) 表 4 1 μg/g 火锅蘸料基质 3 种着色剂加标回收率 标样过柱 (%) 标样过柱 2(%) 添加样 1(%) 红酒样品 1(%) 添加样 2(%) B%( 甲醇 ) 红酒样品 2(%) 添加样 3(%) 赤藓红净化方法优化赤藓红为苯甲酸钠结构, 相对其他苯磺酸钠结构的着色剂, 在 SPE 小柱上保留较弱, 国标 GB 中赤藓红的前处理方法是和其他色素不一样的, 采用的是液液萃取的方法 如按照 2.2 的净化方法操作, 在淋洗阶段赤藓红将全部被洗脱下来 通过方法优化, 最终淋洗方法确定为 6 ml 水 (ph 值 6 ~ 7) 6 ml 甲醇, 选用 Cleanert PWAX (150 mg/6 ml), 其他条件不变, 可满足同时处理 9 种着色剂的实验要求 注意事项 1) 若提取液呈碱性, 在上样之前要将其 ph 值调节至 6 左右, 保证小柱对合成着色剂有良好地吸附 ; 2) 若样品酒精度过高, 建议在上样前对样品进行除醇处理 ; 3) SPE 小柱净化过程中, 要注意对流速的控制, 建议控制在 1mL/ min 左右 ; 4) 洗脱液氮吹复溶后, 应选用水系滤膜过滤, 防止因滤膜吸附造成样品的损失, 建议选用 Hydrophilic PTFE 滤头 5.3 结论实验结果表明,Cleanert PWAX 和 Venusil XBP C18(L) 液相色谱柱可以用于食品中的合成着色剂的检测, 该方法快速 准确 6. 订货信息 产品名称规格包装 Qdaura 卓睿 4 通道 24 位全自动固相萃取仪 LC-10F 10 ml/min, 梯度系统, 高效液相色谱仪 nm 双波长检测器 CC-100 温控范围 :5-70 ; 可安装分析型色谱柱温箱 1-2 支 300 mm 液相色谱柱 Cleanert PWAX 150 mg/6 ml, 30/pk 甲醇 4 4L/ 瓶 Venusil XBP C18(L) mm, 5 µm, 150 Å 液相色谱柱保护柱芯 mm, 4/pk 保护柱套适用于 mm 保护柱芯针式过滤器 (PTFE) 亲水 0.45 µm, 直径 13 mm, 200/pk 一次性无针头注射器 2 ml, 两件式, 100/pk 短螺纹透明带书写 1.5 ml 样品瓶 mm, 100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 1.5 ml 样品瓶盖 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0mm,100/pk 订货号 SPE-40 FL-LC010GS CC-100 WA1506 AH230-4 VX L VX CH-100 AS LZSQ-2ML 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

131 茶叶中八种人工着色剂的分析方法 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取 2 g 茶叶放入 50 ml 离心管中, 加入 10 ml 60 水, 浸泡 1 小时后, 超声提取 15 min,10000 r/min 离心 10 min, 取上清液转移到新的离心管中, 重复提取一次, 合并两次提取液, 待净化 3. 实验结果 表 2 八种着色剂加标回收实验结果添加水平平均回收率 CV 物质名称波长 /nm /mg/kg /% /% 柠檬黄 (Lemon yellow) 1.2 样品净化先将 Cleanert PWAX (150 mg/6 ml) 小柱依次用 6 ml 甲醇, 6 ml 水活化平衡 ; 然后将待净化液过柱 ; 用 6 ml 水 (ph 为 4.0) 6 ml 甲醇 / 甲酸 (6:4,V/V) 和 6 ml 水 (ph 为 7.0) 洗柱, 弃去全部流出液, 小柱用真空泵抽干 ; 最后用 6 ml 2% 氨化甲醇洗脱 收集洗脱液于 40 氮气吹干, 用 水溶解残留物, 过 0.45 µm PTFE 亲水滤膜后待测 2. 液相条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(L),5 μm,150 Å, mm 流动相 :A 相 mol/l 乙酸铵溶液,B 相 - 甲醇柱温 :30 进样量 :20 µl 梯度洗脱 : 见表 1 苋菜红 (amaranth) 胭脂红 (carminum) 靛蓝 (Indigo) 日落黄 (sun set yellow) 诱惑红 (temptation red) 亮蓝 (light blue) 酸性红 (carmosine) 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /(ml/min) A/% B/% 图 μg/ml 八种着色剂标准溶液液相色谱图 图 2 茶叶样品基质空白液相色谱图 125

132 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 订货信息 4. 结论 图 mg/kg 茶叶样品基质加标样品液相色谱图 本实验建立了茶叶中八种着色剂残留量检测的实验方法, 并结合高效液相色谱对茶叶中八种着色剂残留物的含量进行了测定 对于加标量为 0.25 mg/kg 的靛蓝 0.05 mg/kg 的柠檬黄 苋菜红 胭脂红 日落黄 诱惑红 亮蓝和酸性红样品, 回收率在 75% ~ 115% 之间, 符合要求 产品名称 规格包装 订货号 Venusil XBP C18(L) 5 μm,150 Å, mm,1 支 VX L 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS Cleanert PWAX 150 mg/6 ml,30 支 /pk WA ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm,100/pk 针式过滤器 (PTFE 单膜,13 mm,0.45 μm, 亲水 ) 200 个 / 包 AS 氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 卓睿全自动固相萃取仪 4 通道,24 位,1 台 SPE 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

133 (GB ) 苯甲酸 山梨酸 糖精钠的测定 HPLC 法 应用编号 :AF10047 苯甲酸 山梨酸和糖精钠是常用饮料及食品等的添加剂 食品中苯甲酸 山梨酸和糖精钠的测定方法有气相色谱法 (GC) 薄层色谱法 (TLC) 和高效液相色谱法 (HPLC) GC 法准确度不够, 分离度不好 ;TLC 法操作复杂, 仅可半定量分析 ; HPLC 法可同时测定食品中苯甲酸 山梨酸和糖精钠 具有方法简便, 灵敏度高, 选择性好, 线性范围宽等优点 1. 材料与样品处理 仪器 : 高效液相色谱仪 ( 配紫外检测器 ) 试剂 :1. 甲醇 (CH 3 OH) 色谱纯 ; 2. 乙酸铵 (NH 4 Ac) A.R.; 3. 苯甲酸标准储备液 (1.0 mg/ml); 4. 山梨酸标准储备液 (1.0 mg/ml); 5. 糖精钠标准储备液 (1.0 mg/ml); 6. 纯水 2. 色谱条件 色谱柱 :Venusil XBP C18 L 4.6 mm 250 mm,5 µm; 波长 :230 nm; 流动相 :0.02 mol/l 乙酸铵 : 甲醇 =95:5(v/v); 流速 :1.0 ml/min; 进样量 :20 µl; 柱温 :30 3. 结果与讨论 3.1 标准曲线绘制 苯甲酸 山梨酸 糖精钠标准混合液的配制 吸取苯甲酸 山梨酸 糖精钠标准储备液, 配制浓度分别为 µg/µl 的标准混合液 按上述色谱条件测定峰面积, 并绘制校正曲线 见图 2 ~ 4 由图可见, 苯甲酸 山梨酸 糖精钠校正曲线的线性关系良好 ( 相关系数均大于 ) 图 2 苯甲酸校正曲线图 3 山梨酸校正曲线图 4 糖精钠校正曲线 3.2 苯甲酸 山梨酸和糖精钠测定精密度试验在上述色谱条件下, 连续六次吸取苯甲酸 山梨酸和糖精钠标准混合液 ( 浓度分别为 µg/µl) 20 µl 注入色谱仪, 分别绘制色谱图 见图 5 在上述色谱条件下, 注入 20 µl 苯甲酸 山梨酸和糖精钠标准混合液 ( µg/µl) 色谱图见图 1 图 5 苯甲酸 山梨酸和糖精钠测定精密度试验色谱图 图 1 苯甲酸 山梨酸 糖精钠标准混合液色谱图 127

134 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers a) 保留时间测定精密度试验, 见表 1 表 1 苯甲酸 山梨酸和糖精钠保留时间测定结果 保留时间 (min) 序号苯甲酸山梨酸糖精钠 X RSD (%) b) 峰面积测定精密度试验, 见表 2 表 2 峰面积测定结果 序号 X RSD (%) 苯甲酸 山梨酸 糖精钠 由表 1 ~ 2 可见, 苯甲酸 山梨酸和糖精钠保留时间相对标准偏差 (RSD) 范围为 0.39 ~ 0.74%; 峰面积相对标准偏差 (RSD) 范围为 0.66 ~ 0.88% 表明仪器系统测定精密度良好 3.3 内控样品测定用可口可乐饮料作基质, 配制含苯甲酸 山梨酸和糖精钠浓度分别为 µg/µl 的内控样品 按相关文献进行样品预处理 在同样条件下测定苯甲酸 山梨酸和糖精钠含量 结果分别为 µg/µl 3.4 结论高效液相色谱仪及色谱柱 Venusil XBP C18-L (4.6 mm 250 mm,5 µm), 测定食品中苯甲酸 山梨酸和糖精钠, 具有灵敏度高 结果准确 精密度和线性关系良好 出峰时间快 峰形好 分离度好等特点 适用于饮料 食品等中苯甲酸 山梨酸和糖精钠含量的测定 4. 订货信息 产品名称 Venusil XBP C18 (L) 针式过滤器 (Nylon) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 mm,5 µm 0.45 µm, 直径 13 mm,200/pk 5 ml,100/pk 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 订货号 VX L AS ZSQ-5ML 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

135 (GB ) 浓缩枣汁中的山梨酸 苯甲酸的测定 应用编号 :AF 样品前处理 标准储备液 : 准确称取苯甲酸 山梨酸标准品各 0.1 g, 分别置于 100 ml 容量瓶中, 用 5.0 ml 碳酸钠溶液 (20 g/ L) 加热溶解, 并用水稀释至刻度 混合标准溶液 : 分别吸取苯甲酸和山梨酸的标准储备液各 100 µl, 用水稀释至 1.0 ml 果汁样品 : 取约 10 g 浓酸枣汁样品置于 50 ml 容量瓶中, 加入 20 ml 水稀释混匀后, 用稀氨水 (1:1)pH 计调至 ph7.0, 用水定容至刻度, 过滤, 待进样 2. 色谱条件 色谱柱 :Venusil MP C18(2), 5 µm,110 Å; mm; 流动相 :0.02 mol/l 乙酸铵溶液 : 甲醇 =95:5(v/v); 波长 :230 nm; 流速 :1.0 ml/min; 进样量 :10 µl; 温度 :35 3. 实验结果 由表 1 及图可知, 在上述色谱条件下, 山梨酸和苯甲酸分离度良好, 枣汁样品中苯甲酸和相邻杂质分离度均大 表 1 浓缩枣汁中防腐剂分析数据 样品名称 化合物名称 保留时间 /min 理论塔板数 分离度 拖尾因子 混合标准溶液 苯甲酸 山梨酸 未知杂质 浓缩枣汁供试品溶液 苯甲酸 未知杂质 图 1 Venusil MP C18(2) 混合标准溶液高效液相色谱图 图 2 Venusil MP C18(2) 浓缩枣汁供试品溶液高效液相色谱图 129

136 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 订货信息 图 3 Venusil MP C18(2) 浓缩枣汁供试品溶液高效液相色谱图 4. 结论 ( 纵坐标局部放大图 ) 本实验参照 食品中山梨酸 苯甲酸和糖精钠的测定方法 (GB ) 高效液相色谱法, 采用 Venusil MP C18(2) 色谱柱对浓缩枣汁中的防腐剂进行了测定 结果表明在上述实验条件下,Venusil MP C18(2) 色谱柱可对枣汁样品中山梨酸 苯甲酸进行分析测定 产品名称 规格包装 订货号 Venusil MP C18(2) 5 µm,110 Å; mm,1 支 VA 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS 1.5 ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 Shore A; 1.0 mm,100/pk 微孔滤膜 单膜,13 mm,0.45 μm, 100 个 / 包 AS T 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 130 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

137 (GB/T ) 食品中三氯蔗糖的分析方法 应用编号 :AF10079 摘要 : 本实验重现了 食品中三氯蔗糖的测定 (GB/ T ), 样品经甲醇水 (3:1,V/V) 提取,Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化,Venusil XBP C18 (L) 色谱柱 ( mm,5 µm,150 Å) 分离, 水和乙腈为流动相进行洗脱, 外标法进行定量 结果表明, 三氯蔗糖添加量为 1.0 mg/g 时, 回收率在 80% ~ 110% 之间, 能够满足检测要求 关键词 : 三氯蔗糖 ;Cleanert PEP-2 固相萃取柱 ; Venusil XBP C18 (L) 色谱柱 1. 前言 三氯蔗糖是以蔗糖为原料经氯代而制得的一种非营养型强力甜味剂, 是一种白色粉末状产品, 极易溶于水, 水溶液澄清透明, 其甜度是蔗糖的 400~800 倍 其中, 食品包装成分表中常能看到的蔗糖素 ( 学名三氯蔗糖 ), 虽然所含热量少, 但吃多了也会胖, 而且还可能阻碍身体对一些药物的吸收 因此通过有效的实验技术手段, 对食品中的有关三氯蔗糖残留进行监控, 以确保消费者对食品消费的安全具有重要意义 本实验通过优化前处理方法建立了三氯蔗糖在食品中的高效液相色谱的方法 2. 仪器 试剂与材料主要仪器设备 高效液相色谱仪 ( 蒸发光检测器 ); 博纳艾杰尔 12 位负压 SPE 装置 试剂材料甲醇 乙腈 正己烷为色谱纯 ; 实验用水为超纯水 ; 乙酸锌 亚铁氰化钾均为分析纯 ; 中性氧化铝 (100 目 ~200 目 ) 三氯蔗糖标准品 ( 纯度 99%); 乙酸锌溶液 : 称取 21.9 g 乙酸锌, 加 3 ml 乙酸, 加水溶解至 100 ml; 亚铁氰化钾溶液 : 称取 10.6 g 亚铁氰化钾, 加水溶解至 100 ml; 甲醇水溶液 : 量取 75 ml 甲醇, 加 25 ml 水, 混匀 ; 乙腈水溶液 : 量取 1 乙腈, 加 89 ml 水, 混匀 一次性无菌注射器 ; 尼龙针式过滤器 (0.45 µm, 直径 13 mm); Cleanert PEP-2 固相萃取柱 :200 mg/6 ml 3. 样品制备 样品提取酱油称取 2 g 样品置于 50 ml 离心管中, 加入 1.0 g 中性氧化铝, 加入 3 ml 水, 涡旋混匀振荡 3 min 后, 加入 15 ml 甲醇, 继续震荡 30 s, 超声波提取 20 min,3000 r/min 离心 10 min, 上清液移入 50 ml 离心管中, 沉淀物加入 5.0 ml 甲醇水 (3:1,V/V), 涡旋 30 s, 以 3000 r/min, 离心 10 min, 重复提取 2 次, 将上清液合并于 150 ml 分液漏斗中 在 150 ml 分液漏斗中, 加入 30 ml 正己烷, 振摇 2 min, 静置分层,20 min 后, 下层水相移至于 50 ml 蒸发皿 蒸发皿于沸水浴上蒸发, 当液体在 左右时, 用 9 ml 水分 3 次冲洗蒸发皿, 合并于 15 ml 离心管中, 超声处理 5 min,3000 r/min 离心 10 min, 待净化 可口可乐称取混匀后试样 5 g, 置于 15 ml 离心管中, 加入 5 ml 水, 涡旋混合器上振荡 30 s, 以 3000 r/min 离心 10 min 酸奶称取混匀后试样 2 g 置于 50 ml 离心管中, 加入 5 ml 水, 涡旋振荡 3 min 后加入 15 ml 甲醇,0.5 ml 乙酸锌,0.5 ml 亚铁氰化钾, 继续震荡 30 s, 超声波提取 20 min,3000 r/ min 离心 10 min, 上清液移入 50 ml 离心管中, 沉淀物加入 5.0 ml 甲醇水 (3:1,V/V), 涡旋 30 s, 以 3000 r/min, 离心 10 min, 重复提取 2 次, 将上清液合并于 150 ml 分液漏斗中在 150 ml 分液漏斗中, 加入 30 ml 正己烷, 振摇 2 min, 静置分层,20 min 后, 下层水相移至于 50 ml 蒸发皿 蒸发皿于沸水浴上蒸发, 当液体在 左右时, 用 9 ml 水分 3 次冲洗蒸发皿, 合并于 15 ml 离心管中, 超声处理 5 min,3000 r/min 离心 10 min, 待净化 样品净化先将 Cleanert PEP-2 (200 mg/6 ml) 小柱分别用 4 ml 甲醇,4 ml 水溶液活化平衡 ; 然后将待净化液过柱 ; 用 水洗柱, 弃去全部流出液 ; 最后用 3 ml 甲醇洗脱 收集洗脱液于 40 氮气吹干, 用 乙腈水 (11:89,V/V) 溶解残留物, 过 0.45 µm 尼龙针式过滤器滤膜后待测 4. 色谱条件 131

138 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 色谱柱 Venusil XBP C18 (L) 5 µm 150 Å mm 流动相 乙腈:水=11:89 柱 温 35 进样量 20 µl 蒸发温度 结果与讨论 实验结果 由表2可知 采用固相萃取结合液相色谱法检测三氯蔗 糖 加标回收率在80% ~ 110%之间 能够满足标准要求 图 4. 可口可乐样品基质空白液相色谱图 表 1. 三氯蔗糖加标回收实验结果 (n=3) 物质名称 添加水平 mg/ 平均回收率 % RSD % kg 酱油 可口可乐 酸奶 图 mg/kg 可口可乐样品基质加标液相色谱图 图 mg/ml 混合标准溶液液相色谱图 图 mg/kg 酸奶样品基质空白液相色谱图 图 2. 酱油样品基质空白液相色谱图 图 mg/kg 酸奶样品基质加标液相色谱图 结论 图 mg/kg 酱油样品基质加标液相色谱图 132 本实验依据 食品中三氯蔗糖的测定 GB/T 建立了食品中三氯蔗糖残留量的检测方法 并结 合高效液相色谱对食品中三氯蔗糖残留物的含量进行了测 定 对于加标量为50 mg/kg的可乐和20 mg/kg的酸奶 酱油 样品进行了检测 回收率在80% ~ 110%之间 符合要求 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载

139 6. 订货信息 产品名称 Venusil XBP C18 (L) Cleanert PEP-2 Qdaura 卓睿全自动固相萃取系统 15 位氮吹仪保护柱套直联式保护柱芯 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖针式过滤器一次性注射器 规格包装 5 µm,150 Å, mm 200 mg/6 ml,30/pk 4 通道 15 位适用于 mm 和 mm,4/pk 5 µm,150 Å; mm 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm,100/pk 单膜,13 mm,0.45 µm,200/pk 2 ml 无针头,100/pk 订货号 VX L PE SPE-40 NV15-M SH-100 VX LS AS LZSQ-2ML 133

140 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 酸奶中纽甜的测定 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 准确称取 2.0 g 酸奶于 50 ml 具塞塑料离心管中, 加入 10 ml 混合提取液, 涡旋震荡 5 min, 超声 15 min 后, 以 6000 r/min 离心 10 min 后, 再次加入 10 ml 混合提取液进行重复上述提取过程, 合并提取液并加入 20% 乙酸锌 10% 亚铁氰化钾各 200μl, 超声 10min 后, 以 8000 r/min 离心 10 min, 取上清液, 待上样 图 1 10 µg/ml 纽甜标准测定液液相色谱图 1.2 样品净化 Cleanert S C18 和 Cleanert S C18-N 固相萃取柱依次用 5 ml 甲醇 10 ml 水活化平衡 ; 将上样液过固相萃取柱, 用 5 ml 混合提取液淋洗, 弃去淋洗液, 最后以 5 ml 甲醇洗脱, 收集洗脱液 将洗脱液在 40 氮气吹至近 2 ml, 用混合提取液定容至 5 ml, 混匀, 过滤, 待检测 注 : 上样液 洗脱液以 /min-2 ml/min 的流速通过固相萃取柱 图 2 Cleanert S C18 空白样品高效液相色谱图 2. 色谱条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(L); 5 µm,150 Å, mm; 流动相 : 离子对试剂缓冲液 : 乙腈 =60:40(v/v); 流速 :1.0 ml/min; 检测波长 :218nm; 柱温 :30 ; 进样量 :50 µl 3. 实验结果 表 1 纽甜加标回收实验结果 (n=3) 图 3 Cleanert S C18 样品加标高效液相色谱图 固相萃取柱 物质名称 添加水平平均回收率 RSD (mg/kg) (%) (%) Cleanert S C18 纽甜 Cleanert S C18-N 纽甜 图 4 Cleanert S C18-N 空白样品高效液相色谱图 134 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

141 5. 订货信息 4. 结论 图 5 Cleanert S C18-N 样品加标高效液相色谱图 本实验依据 食品中纽甜的测定方法 (GB ) 建立了食品中纽甜的检测方法, 并用外标法结合液相色谱法对酸奶中纽甜含量进行了测定 当纽甜的加标量为 25 mg/kg 时,Cleanert S C18 Cleanert S C18-N 两款固相萃取柱的回收率均在 80% ~ 100% 之间, 符合要求 产品名称 规格包装 订货号 Venusil XBP C18(L) 5 μm,150 Å, mm,1 支 VX L 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS Cleanert S C18-SPE 500 mg/6 ml,30 支 / 包 S Cleanert S C18-N-SPE 500 mg/6 ml,30 支 / 包 S185006N 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 Shore A; 1.0 mm,100/pk 针式过滤器 单膜,13 mm,0.45 μm, 200 个 / 包 AS T 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 15 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 固相萃取真空装置 12 位,1 台 VM

142 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 花生油中 8 种抗氧化剂的测定 HPLC 法 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称 1 g 样品至 50 ml 离心管中, 加 10 ml 乙腈, 震荡 2 min, 超声 10 min,3000 r/min 离心 5 min, 收集上清液至鸡心瓶中, 再加 10 ml 乙腈萃取, 震荡 2 min, 超声 1 min, 3000 r/min 离心 5 min 合并上清液 1.2 样品净化先将 Cleanert S C18-N(2000 mg/12 ml) 固相萃取柱用 5 ml 甲醇,5 ml 乙腈活化平衡, 然后将待净化液上 SPE 柱, 收集流出液, 再用 10 ml 乙腈 : 甲醇 =2:1(V/V) 进行洗脱, 并收集洗脱液,40 蒸干, 用 乙腈溶解残留物, 过 0.22 µm Nylon 针式过滤器后待测 以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成 2. 液相条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(L), 5 µm,150 Å, mm 流动相 :A: 0.5% 甲酸水溶液 ;B: 甲醇 ; 流速 :/min 柱温 :35 进样量 :5 µl 检测波长 :280 nm 流动相梯度见表 1 表 1 流动相梯度 时间 /min A/% B/% 实验结果 表 2 花生油中 8 种抗氧化剂加标回收实验结果 物质名称 保留时间 /min 添加水平 /mg/kg 回收率 /% CV/% PG TBHQ NDGA BHA Ionox OG BHT DG 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

143 4. 结论 本实验建立了花生油中 8 种抗氧化剂的检测方法, 并结合高效液相色谱对花生油中 8 种抗氧化剂含量进行测定 对加标量为 PG: 171 mg/kg TBHQ: 135 mg/kg NDGA: 121 mg/ kg BHA: 213 mg/kg Ionox-100: 141 mg/kg OG: 95 mg/kg BHT: 151 mg/kg DG: 135 mg/kg 的花生油样品, 回收率在 89% ~ 106% 之间, 变异系数小于 6.0%, 符合实验要求 图 1 8 种抗氧化剂标准溶液液相色谱图 ( 标准浓度 :PG: 171 µg/ml TBHQ: 135 µg/ml NDGA: 121 µg/ml BHA: 213 µg/ml Ionox-100: 141 µg/ml OG: 95 µg/ ml BHT: 151 µg/ml DG: 135 µg/ml) 图 2 花生油基质空白液相色谱图 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Venusil XBP C18(L) 5 μm,150 Å, mm,1 支 VX L 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS Cleanert S C18-N 2000 mg/12 ml,20 支 / 包 S N Qdaura 卓睿全自动固相萃取系统 4 通道,1 台 SPE 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 Shore A; 1.0 mm,100/pk Nylon 针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 μm, 200/pk AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 图 3 花生油基质加标液相色谱图 ( 加标浓度 :PG: 171 mg/kg TBHQ: 135 mg/kg NDGA: 121 mg/kg BHA: 213 mg/kg Ionox-100: 141 mg/kg OG: 95 mg/kg BHT: 151 mg/kg DG: 135 mg/kg) 137

144 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 花生油中麦芽酚和乙基麦芽酚的测定 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称 2.00 g 花生油样品于 15 ml 离心管中, 加 5 ml 甲醇, 旋涡震荡 5 min,10000 rpm 离心 5 min, 取上层甲醇溶液, 待净化 1.2. 样品净化 将 Cleanert S C18(500 mg/6 ml) 固相萃取柱用 5 ml 甲醇,5 ml 水活化平衡, 将待净化液全部上样, 用 4 ml 甲醇洗脱, 收集上样液和洗脱液, 用甲醇定容到 10 ml, 过 0.22 µm Nylon 针式过滤器后待测 以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成 2. 检测方法 2.1 液相条件色谱柱 :Venusil ASB C8,5 µm,150 Å, mm; 流动相 :A:0.01 mol/l 乙酸铵水溶液 ( 含 0.2% 甲酸 );B: 甲醇 ; 流速 :0.4 ml/min 柱温 :30 进样量 :5 µl 流动相梯度见表 1: 表 2 麦芽酚 & 乙基麦芽酚的定性离子对 定量离子 碎裂电压和碰撞能量 名称 母离子 m/z 子离子 m/z DP /V CE /ev 麦芽酚 * 乙基麦芽酚 * * 定量离子 3. 实验结果 表 3 麦芽酚 & 乙基麦芽酚回收率实验结果 物质名称 保留时间添加水平回收率 CV /min /mg/kg /% /% 麦芽酚 乙基麦芽酚 表 1 流动相梯度 时间 /min A/% B/% 图 1 麦芽酚 & 乙基麦芽酚混标溶液的 LC-MS/MS 色谱图 ( 混标浓度 : 麦芽酚 & 乙基麦芽酚分别为 mg/l 和 mg/l) 2.2 质谱条件 离子源 :ESI+; 电喷雾电压 :5500 V; 雾化气压力 : 55 psi; 气帘气压力 :20 psi; 辅助气压力 :55 psi; 离子源温度 :550 ; 监测方式 : 多反应监测 (MRM) 定性离子对 定量离子 碎裂电压和碰撞能量见表 2: 图 2 花生油空白 LC-MS/MS 色谱图 138 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

145 4. 结论 本实验建立了花生油中麦芽酚 & 乙基麦芽酚的检测方法, 并结合高效液相色谱串联质谱对花生油中麦芽酚 & 乙基麦芽酚的含量进行测定 加标量分别为 4.55 mg/kg 和 5.04 mg/kg 时, 回收率分别为 89.3% 和 86.1%, 变异系数分别小于 4.0% 和 3.0%, 符合实验要求 说明 Cleanert S C18 小柱可以用于检测油中的麦芽酚 & 乙基麦芽酚 图 3 花生油基质加标 LC-MS/MS 色谱图 ( 加标浓度 : 麦芽酚 & 乙基麦芽酚分别为 4.55 mg/kg 和 5.04 mg/kg) 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Venusil ASB C8 5 μm,150 Å, mm,1 支 VS Cleanert S C mg/6 ml,30 支 / 包 S Qdaura 卓睿全自动固相萃取系统 4 通道,1 台 SPE 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 直联式保护柱芯 5 µm,150 Å; mm,4 支 / 包 VS S 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm,100/pk Nylon 针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 μm,200/pk AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100/pk LZSQ-2ML 139

146 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 第四部分 非法添加 140 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

147 辣椒油中罗丹明 B 的检测方法高效液相色谱法 应用编号 :AF 样品制备 1.1 辣椒油空白样 : 称取不含罗丹明的辣椒油 1 g, 加入 10 ml 含 20% 丙酮的正己烷, 振荡 2 分钟, 混合均匀后, 用移液管将上清液取出 1.2 添加样 : 向 1 g 辣椒油中添加 5 ppm 罗丹明标准品 ( 溶于正己烷 ), 其他步骤和空白样相同 2. SPE 净化 SPE 柱 :Cleanert Alumina-N,2g / 6mL, (P/N:AL20006-N) 活化 :6 ml 正己烷上样 : 全部上清液淋洗 :10 ml 20% 丙酮正己烷洗脱 : 用 10 ml 2% 氨水甲醇 (0.2 ml 浓氨水 +9.8 ml 甲醇 ) 过柱, 收集 浓缩与定容 : 将收集液用氮气吹干, 用 甲醇定容, 上样 3. 液相色谱条件 色谱柱 :Venusil MP C18, mm,5 μm (P/N: VA ) 流动相 :75% 甲醇水溶液进样量 :5 μl; 流速 :/min; 波长 :550 nm 4. 实验结果 图 1 罗丹明标准品色谱图 表 1 罗丹明标样和加标样的回收率 峰面积回收率 (%) 标品 标品 油样 油样

148 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T ) 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法 应用编号 :AF10019 执行标准 GB/T 原料乳及乳制品中三聚氰胺检测方法 液相色谱检测方法 1. 样品前处理 称取 2 g 试样于 50 ml 具塞离心管中, 加入 15 ml 三氯乙酸溶液 5 ml 乙腈溶液和 5% 醋酸铅溶液 ( 质量比 ) 2 ml, 超声提取 10 min, 再震荡提取 10 min 后, 以 5000 r/ min 离心 10 min 上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后, 用三氯乙酸溶液定容到 25 ml, 移取 5 ml 滤液, 加入 5 ml 水混合均匀后, 全部上样 净化处理 Cleanert PCX 60mg/3mL 活化 :5 ml 甲醇 5 ml 水依次活化固相萃取小柱 ; 上样 : 将全部待净化液以 /min 的流速通过固相萃取小柱 ; 淋洗 : 依次用 3 ml 水和 3 ml 甲醇淋洗固相萃取小柱, 淋洗完毕后, 抽至近干 ; 洗脱 : 用 6 ml 5% 氨化甲醇 (v/v) (5% 氨化甲醇 :5 ml 氨水 + 95 ml 甲醇 ) 溶液以 /min 洗脱固相萃取小柱并收集, 洗脱液于 50 下氮气吹干, 残渣用 流动相定容, 涡旋混合 1 min,0.45 μm 尼龙针式过滤器过滤 ( 以上净化操作通过 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪完成 ) 2. 色谱条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(L);250 mm 4.6 mm,5 μm; 流动相 : 缓冲盐溶液 : 乙腈 = 85:15; 紫外检测器波长 :240 nm; 流速 :1.0 ml/min; 进样量 :10 μl; 缓冲盐配制 : 准确称柠檬酸 2.10 g 和辛烷磺酸钠 2.16 g, 加入约 980 ml 水溶解, 调节 ph 到 3.0 后, 定容至 1 L; VWD1 A, Wavelength=240 nm ( VWD1 A, Wavelength=240 nm ( 三聚氰胺标准品 牛奶中的三聚氰胺 142 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

149 气相色谱 - 质谱联用法 (GC-MS 和 GC-MS/MS) 1. 样品前处理 称取 5 g 试样于 50 ml 具塞比色管中, 加入 25 ml 三氯乙酸溶液, 涡旋震荡 30 s, 再加入 15 ml 三氯乙酸溶液, 超声提取 15 min,, 加入 2 ml 乙酸铅溶液, 用三氯乙酸溶液定容到刻度 充分混合后转移上层溶液约 30 ml 到 50 ml 离心管中, 以 5000 r/min 离心 10 min 上清液待净化 净化处理 Cleanert PCX 60mg/3mL 活化 :5 ml 甲醇 5 ml 水依次活化固相萃取小柱 ; 上样 : 取 5 ml 待净化液以 /min 的流速通过固相萃取小柱 ; 淋洗 : 依次用 3 ml 水和 3 ml 甲醇淋洗固相萃取小柱, 淋洗完毕后, 抽至近干 ; 洗脱 : 用 6 ml 5% 氨化甲醇 (v/v) (5% 氨化甲醇 :5 ml 氨水 + 95 ml 甲醇 ) 溶液以 /min 流速洗脱固相萃取小柱并收集, 洗脱液于 50 下氮气吹干, 残渣用 流动相定容, 涡旋混合 1 min, 0.45 μm 过滤 ( 以上净化操作通过 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪完成 ) 2. 色谱条件 色谱柱 :DA-50+ 5% 苯基二甲基聚硅氧烷石英毛细管色谱柱,30 m 0.25 mm,0.25 μm; 流速 :10 ml/min; 升温程序 :70 保持 1 min, 以 10 /min 的速率升温至 200, 保持 10 min; 传输线温度 :280 ; 进样口温度 :250 ; 进样方式 : 不分流进样 ; 进样量 :1 μl; 电离方式 : 电子轰击电离 (EI) 电离能量 :70 ev; 离子源温度 :230 扫描模式 : 选择离子扫描, 定性离子 m/z , 定量离子 m/z 327; 3. 注意事项 处理不同的样品, 离心的效果是不同的, 有时离心后上清液仍然浑浊, 若直接上样会导致固相萃取柱堵塞, 这时可以适当的提高离心的转速或离心的时间, 如果还不能解决该问题, 可以用滤纸先过滤一下上清液再用固相萃取柱处理样品 样品处理过程中注意交叉污染, 影响检测结果 在做三聚氰胺的重复性实验中, 注意取样和最终的定量 定容的准确性 订货信息 产品名称 Venusil XBP C18(L) Cleanert PCX Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 DA-50+ 5% 苯基二甲基聚硅氧烷石英毛细管色谱柱 规格包装 mm, 5 μm, 150 Å 60mg/3mL, 50/PK 4 通道 24 位 30m 0.25 mm,0.25 μm 三聚氰胺牛奶样品色谱图 订货号 VX L VAS T CX0603 SPE

150 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 鸡蛋中三聚氰胺的检测 (HPLC 法 ) 应用编号 :AF 三聚氰胺标准溶液配制 称取三聚氰胺标样 10.0 mg, 加流动相溶解定容至 100 ml, 即得浓度为 100 mg/l 的三聚氰胺标样溶液 将浓度为 100 mg/l 的三聚氰胺标准溶液分别用水稀释成浓度为 1 mg/ L 5 mg/l 10 mg/l 15 mg/l 20 mg/l 的标准品溶液, 用 0.45 µm 滤膜过滤后进液相色谱检测 2. 样品提取 将鸡蛋打开搅匀, 分别称取 1.00 g 鸡蛋样本置于 10 ml 具塞离心管中, 分别加入 100 mg/l 三聚氰胺标样溶液 10 µl 20 µl 100 µl, 分别得到添加浓度为 1.0 mg/kg 2.0 mg/kg 10.0 mg/kg 的样本 往装有上述样本的具塞离心管中分别加入 10 ml 1% 三氯乙酸溶液,2 ml 5% 醋酸铅溶液, 摇匀, 超声 20 min,8000 rpm 离心 10 min, 全部上清液转入固相萃取仪上样管中 Cleanert PCX 混合型阳离子交换固相萃取柱, 标记序号依次放入 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪中, 上样管中放置对应样品, 设定操作程序如下 :3 ml 甲醇,3 ml 水依次活化, 加样,3 ml 水,3 ml 甲醇淋洗, 抽干, 最后用 5 ml 5% 的氨化甲醇洗脱 (V/V), 接收洗脱液 ( 以上操作流速均为 / min), 取出收集管于 50 氮气吹干, 用 流动相定容, 0.45 µm 滤器过滤后进液相色谱检测 4. 实验结果 : 4.1 峰型与分离度 分别移取浓度为 1.0 mg/l 5.0 mg/l 的三聚氰胺标准溶液, 分别连续进样 6 次, 结果如表 1 所示 由表 1 结果可见, 本方法具有很好的精密度和重现性 鸡蛋空白样品图谱 鸡蛋添加 10 mg/kg 样品图谱 3. 色谱条件 : 色谱柱 :Venusil ASB C8, mm,5 µm; 流动相 : 乙腈 :10 mm/l 柠檬酸 + 10 mm/l 庚烷磺酸钠缓冲液 = 7:93 (ph 为 3.0) 波长 :240 nm; 流速 :/min; 进样 :20 µl 图 1 鸡蛋空白样品和鸡蛋添加 10 mg/kg 的样品图谱 表 1 保留时间与峰面积的稳定性数据 浓度 mg/ml 指标保留时间 (min) 峰面积保留时间 (min) 峰面积 1# # # # # # 平均值 RSD% 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

151 4.2 标准校正曲线根据表 2 数据计算线性方程为 :y = 87.43x ,R² = 0.999, 相关曲线见图 2 结果显示, 该方法在 1 ~ 20 mg/kg 范围内线性关系良好 浓度 mg/kg 表 2 标准校正曲线实验数据 峰面积第 1 次进样 峰面积第 2 次进样 图 2 浓度与峰面积的回归曲线 峰面积均值 添加回收率由表 3 可见, 本方法检测鸡蛋中三聚氰胺回收率较好 添加浓度 (mg/kg) 结论 表 3 添加浓度与回收率数据 峰面积 计算含量 回收率 (%) 通过上述实验可见, 运用本方法测定鸡蛋中三聚氰胺, 基质净化效果好, 杂质干扰小, 色谱峰型良好对称度高, 操作简单方便, 和准确度高等优点, 非常适用于鸡蛋中三聚氰胺的检测 结果显示, 该方法在 1~20 mg/kg 范围内线性关系良好 6. 订货信息 产品名称三聚氰胺标准品 ( 99.0%) 庚烷磺酸钠 ( 色谱级 ) LC-10F 高效液相色谱仪 CC-100 分析型色谱柱温箱 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 Cleanert PCX Venusil ASB C8 液相色谱柱针式过滤器 (Nylon) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 100 g/pk 25 g 10 ml/min, 梯度系统, nm 双波长检测器温控范围 :5 ~ 70 ; 可安装 1-2 支 300mm 色谱柱 4 通道 24 位 60 mg/3 ml,50/pk mm,5 µm 0.45 µm, 直径 13 mm,200/pk 5 ml,100/pk 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 订货号 SJ-SJQA-100 ION-Q7-25 FL-LC010GS CC-100 SPE-40 CX0603 VS AS ZSQ-5ML

152 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 奶粉中香兰素的测定 应用编号 :AF 参考方法 博纳艾杰尔内部方法 香兰素亦称香草素 香草醛等, 学名为 3- 甲氧基 -4- 羟基苯甲醛, 根据欧盟专家委员会 2000 年 2 月 24 日报道, 大剂量可导致头痛, 恶心, 呕吐, 呼吸困难, 甚至损伤肝肾功能 限量标准 中华人民共和国国家标准 食品添加剂使用标准 (GB ) 规定, 较大婴儿和幼儿配方食品中香兰素最大使用量为 5mg / 100mL, 其中 100 ml 以即食食品计, 生产企业应按照冲调比例折算成配方食品中的使用量 ; 婴幼儿谷类辅助食品中可以使用香兰素, 最大使用量为 7mg / 100g, 其中 100 g 以即食食品计 ; 凡使用范围涵盖 0 至 6 个月婴幼儿配方食品不得添加任何食用香料 国家标准中只规定了限值, 未有检测方法 本实验使用天津博纳艾杰尔科技有限公司的 Cleanert PAX 固相萃取小柱和 Venusil XBP C18(L) 液相色谱柱, 建立了一种奶粉中香兰素的检测方法, 经实验验证, 该方法简单 快速 准确度高 2. 实验材料 OH 水 (ph=4.5): 取 100 ml 水, 用乙酸调节 ph 至 4.5; 2% 乙酸铅溶液 : 称取乙酸铅 2 g, 加水稀释并定容至 100 ml; 5% 氨水溶液 : 取氨水溶液 5 ml, 加水稀释并定容至 100 ml; 5% 酸化甲醇 : 取甲酸 5 ml, 加甲醇 95 ml 混匀 ; 香兰素储备液 (1mg / ml): 准确称取香兰素标准 10 mg, 加水稀释并定容至 10 ml; 固相萃取柱 :Cleanert PAX ( 规格为 60mg / 3mL), 使用前分别用 3 ml 甲醇和 3 ml 水活化 ; 液相色谱柱 :Venusil XBP C18(L) 5 μm,150 Å, mm; 针式过滤器 : 亲水型 PTFE (0.45 μm,13 mm) LC-10F 高效液相色谱系统 ; Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 ; 高速离心机 ( 转子 50 ml 6); 氮吹仪 ; 12 位固相萃取装置 O 香兰素结构式 O 3. 实验步骤 准确称取奶粉试样 1 g( 精确至 0.01 g) 于 50 ml 离心管中, 加入 ph=4.5 的水溶液 5 ml, 混匀超声提取 5 min, 加 2% 乙酸铅溶液 2 ml, 混匀后静置 2 min,8000 r/min 离心 10 min; 取上清液用 5% 氨水溶液调节 ph 至中性 ; 将上清液全部加样至活化好的 Cleanert PAX 小柱, 然后分别用 3 ml 5% 氨水溶液和 3 ml 甲醇淋洗小柱, 弃去淋洗液 ; 用 3 ml 5% 酸化甲醇洗脱 ( 以上固相萃取操作通过 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪完成 ), 收集洗脱液于 30 下氮气吹干, 用 1 ml 流动相重新溶解, 过滤, 待测 4. 色谱条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(L), 5 μm,150 Å, mm; 流动相 :A (0.02 mol/l 的磷酸二氢钾溶液, 磷酸调节 ph=4.0):b ( 乙腈 ) = 90:10; 流速 :1.0 ml/min; 进样量 :20 μl; 波长 :276 nm; 柱温 :30 5. 实验结果及谱图 量取一定量香兰素标准储备液, 分别用水稀释至 1 μg/ ml 5 μg/ml 10 μg/ml 25 μg/ml 和 50 μg/ml, 按照 4 检测条件依次进样, 以浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 拟合标准曲线方程, 结果见表 1; 表 2,3 为回收率结果实验 标准曲线方程 Y=86.443X 回收率 回收率 平行 % 平行 % 表 1 香兰素标准曲线和检出限 相关系数 表 2. 5 μg/g 添加回收实验结果 平行 % 平行 % 表 3. 25μg/g 添加回收实验结果 平行 % 平行 % 检出限 (S/N>3) 1μg/g 平均回收率 91.33% 平均回收率 85.51% RSD 2.70% RSD 2.16% 图 1 奶粉空白谱图 146 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

153 图 2. 5 μg/g 添加谱图 图 3. 1 μg/g 标准溶液谱图 6. 订货信息 名称分析型高效液相色谱仪分析型色谱柱温箱 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 Cleanert PAX 固相色谱柱 Venusil XBP C18(L) 液相色谱柱保护柱芯保护柱套针式过滤器一次性注射器溶剂过滤器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 12 ml 样品瓶 12 ml 样品瓶盖微孔滤膜 (MCM) 微孔滤膜 (Nylon) 离心机氮吹仪真空固相萃取缸流速调节阀穿板导流针无油隔膜真空泵 规格 10 ml/min, 等度系统, nm 双波长检测器 4 通道 24 位连续处理 60mg / 3mL,50 支 / 盒 5 μm,150 Å, mm mm,4/pk 适用于 mm 的保护柱芯 PTFE( 亲水 ),0.45 μm,13 mm,200/pk 2 ml 无针头, 两件式,100 支 /pk 1 L 短螺纹, 透明, 带书写处,100/pk 预组装 :9 mm 中心孔, 螺纹盖 ; 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,100/pk 透明, 螺纹口,100/pk 预组装 :15 mm 黑色实心盖 ; 红色丁基 / 灰色 PTFE 隔垫,100/pk 50 mm,0.45 μm,100 片 /pk 50 mm,0.45 μm,100 片 /pk 最大转速 r/min 15 位 12 位 12 个 / 包 12 个 / 包 1 台 订货号 FL-LC010 CC-100-T SPE-40 AX0603 VX L VX L CH-100 AS LZSQ-2ML AM AM AM TGL-10B NV15-G VM12 A81213 A80100 A

154 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 婴幼儿奶粉中双氰胺的检测 HPLC-UV 法和 LC-MS/MS 法 应用编号 :AF 样品 : 新西兰婴儿配方奶粉 (0~6 个月 ) 名称 双氰胺 2. 样品提取及净化 表 1 双氰胺的信息 结构式 分子量 称取 1 g 试样于 50 ml 具塞离心管中, 加 2 ml 水, 涡旋 30s, 加 2 ml 乙腈涡旋 30s 再往现有的提取液中加 2 ml 乙腈, 重复上述提取步骤 再将该提取步骤重复 2 次, 得到共计约 10 ml 的提取液 以 4000 r/min 离心 5 min, 将全部上清液加入新一代 Cleanert MAS-QuChERS 管中 (500mg / 15mL), 将 MAS 管上下晃动 30s, 然后涡旋 30s 后,8000r/min 离心 5 min, 取全部上清液 ( 约 10 ml) 于玻璃试管中,50 下氮气吹干, 加入 乙腈 - 水混合溶液 (97:3) 复溶, 过 0.22 µm 滤器, 待测 注 :a. 做基质加标实验时的标准溶液建议选择以水为溶剂, 防止加标瞬间发生蛋白沉淀 ;b. 乙腈提取分 4 次, 为防止乙腈体积过多时沉淀蛋白速度过快, 影响提取效果 ;c. 净化液氮气吹干后, 如发现有少量油脂, 可采用 乙腈 : 水 (97:3) 混合溶液复溶, 之后加入 正己烷 ( 色谱纯 ) 液液萃取, 取下层溶液过 0.22 μm 针式过滤器, 进样检测 CAS 检测方法 3.1 高效液相色谱法 色谱柱 :Venusil HILIC(5µm,100Å, mm); 流动相 : 10mmol/L 乙酸铵 (ph 为 4.0): 乙腈 =3:97; 波长 :220nm; 进样量 :10µL; 柱温 :30 ; 流速 :0.8mL/min 注 : 本实验选用的奶粉经过净化后, 按 10 mmol/l 乙酸铵 (ph 为 4.0): 乙腈 =15:85 液相条件, 有一个杂质与双氰胺完全重合, 经实验条件优化后, 确定流动相条件为 10 mmol/l 乙酸铵 (ph 为 4.0): 乙腈 =3:97, 双氰胺保留时间为 9.3 min, 可以和杂质完全分离 3.2 液相色谱串联质谱法色谱柱 :Venusil HILIC 5 µm,100 Å, mm; 流动相 :A:0.5 mmol/l 乙酸铵 (ph 为 4.0) B: 乙腈 ; 进样量 :10 µl; 柱温 :30 ; 流速 :0.3 ml/min 表 2 流动相梯度程序 时间 (min) A% B% * 备注 : 本文曾尝试过多种 C18 色谱柱, 对双氰胺没有保留, 需要使用离子对试剂, 但是无法用于 LC-MS/MS; 也曾尝试过 Brand M HILIC 柱, 但是得到双氰胺的峰面积偏差较大, 分析原因是其具有阳离子交换基团, 对双氰胺有不稳定的死吸附 最后确定使用键合丙基酰胺的 Venusil HILIC 柱, 以亲水作用色谱机理对双氰胺进行保留 图 1 净化液氮吹后 图 2 乙腈复溶 质谱条件 : 质谱仪 :API 4000+; 离子源 : 电喷雾离子源 ; 扫描方式 : 正离子扫描 ; 检测方式 : 多反应监测 ;CAD:8.00; CUR: 20.00; GS1: 60.00; GS2: 50.00; IS: ; TEM: 表 3 双氰胺质谱信息 药物名称双氰胺 监测离子对 85.1/ /43.1 DP EP CE CXP 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

155 4. 结果与讨论 4.1 高效液相色谱法 VWD1 A, Wavelength=220 nm ( VWD1 A, Wavelength=220 nm ( 图 5 奶粉空白谱图 图 3 双氰胺 10 µg/ml 标准溶液的液相色谱图 4.2 LC-MS/MS 法 XI C of + MRM (2 p ai rs ): / D a f ro m Sa mple 1 9 ( 10ppb+ _ne w) o f w if f (T ur bo Sp ra y) Max. 8. 9e4 c ps. 8.9e 实际样品基质加标的线性关系和检出限 准确称取双氰胺标准品 50 mg 于 50 ml 容量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 作为标准贮备液 ; Intensity, cps 8.5e4 8.0e4 7.5e4 7.0e4 6.5e4 6.0e4 5.5e4 5.0e4 4.5e4 4.0e4 3.5e4 分别称取 1 g 奶粉试样, 添加一定量标准溶液, 配制成含双氰胺为 0.5 µg/g,1 µg/g,2 µg/g,5.0 µg/ml 和 10 µg/ g 的添加样品, 按照上述提取 净化方法操作, 所得净化液按照上述色谱条件, 依次进样检测 以双氰胺含量为横坐标, 峰面积为纵坐标, 拟合线性方程, 结果见表 4: 名称 双氰胺 表 4 双氰胺线性方程和定量限 (HPLC 法 ) 保留时间 5.57min 线性方程 Y=108.16X 相关系数 最低定量限 (S/N=10) 0.5µg/g 准确度和精密度选取市售某品牌婴幼儿奶粉试样, 进行添加回收实验, 结果见表 5 平行 % 表 µg/g 添加回收实验结果 (HPLC 法 ) 平行 % 平行 % 平均值 85.63% RSD 3.97% 图 6 双氰胺 10 ng/ml 标准溶液质谱图 实际样品基质加标的线性关系和检出限准确称取双氰胺标准品 50 mg 于 50 ml 容量瓶中, 加水溶液并稀释至刻度, 作为标准贮备液 ; 分别称取 1 g 奶粉试样, 添加一定量标准溶液, 配制成含双氰胺为 5 ng/ml,10 ng/ml,50 ng/ml,100 ng/ml 和 200 ng/ml 的添加样品, 按照上述提取 净化方法操作, 所得净化液按照上述液质条件, 依次进样检测 以双氰胺含量为横坐标, 峰面积为纵坐标, 拟合线性方程, 结果见表 6: 名称 双氰胺 3.0e4 2.5e4 2.0e4 1.5e4 1.0e Ti me, mi n 表 6 双氰胺线性方程和定量限 (LC-MS/MS 法 ) 保留时间 3.15min 线性方程 Y=3859.1X 相关系数 最低定量限 (S/N=10) 2ng/g VWD1 A, Wavelength=220 nm ( 准确度和精密度选取市售某婴幼儿奶粉试样, 进行添加回收实验, 结果见表 7 采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响 空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液, 双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化, 故判断该方法无基质效应的影响 图 4 奶粉 0.5 µg/g 添加谱图 平行 % 表 7 10 ng/g 添加回收实验结果 平行 2 平行 3 平均值 83.5% 89.3% 85.2% RSD 4.31% 149

156 XIC of +MRM (2 pairs): / Da from Sample 29 (kb-yye*_new) of wiff (Turbo Spray) Max cps. Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货 新一代 MAS-QuChERS- 双氰胺净化管 ( 填料量加 500mg / 15mL,50 支 / 包 MS-SQA02 大, 更适合婴幼儿奶粉等 图 7 婴幼儿奶粉空白质谱图 复杂样品 ) MAS-QuChERS- 双氰胺 100mg / 2mL,50 支 / 包 MS-SQA01 Intensity, cps 净化管 Venusil HILIC 液相色谱柱针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器, 无针头 mm,5 µm,100 Å mm,5 µm,100 Å 0.22µm, 直径 13mm, 200/pk 5 ml,100/pk VH VH AS ZSQ-5ML Ti me, m in 图 8 婴幼儿奶粉 10 ng/g 添加水平的质谱图 双氰胺对照品离心管 500mg / 瓶, 含量 99.0% 1g/ 瓶, 含量 99.0% 50 ml, 带螺纹盖,25 个 / 包 DCD-0001 DCD-0002 LXG ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm, 100/pk mm 中心孔蓝盖, 红色 1.5 ml 样品瓶盖 橡胶 / 米色 PTFE 隔垫, Shore A 1.0mm,100/pk 150 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

157 (GB/T ) 食品中苏丹红染料的检测氧化铝 SPE - HPLC 法 应用编号 :AF 样品提取及净化 1.1 红辣椒粉等粉状样品 称取 1 g ~ 5 g ( 准确至 g) 样品于三角瓶中, 加入 10 ml ~ 30 ml 正己烷, 超声 5 min, 过滤, 用 10 ml 正己烷洗涤残渣数次, 至洗出液无色, 合并正己烷液, 用旋转蒸发仪浓缩至 5 ml 以下, 慢慢加入 Cleanert Alumina-N 柱中, 为保证层析效果, 在柱中保持正己烷液面为 2 mm 左右时上样, 在全程的层析过程中不应使柱干涸, 用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶, 一并注入层析柱 控制氧化铝表层吸附的色素带宽宜小于 0.5 cm, 待样液完全流出后, 视样品中含油类杂质的多少用 10 ml ~ 30 ml 正己烷洗柱, 直至流出液无色, 弃去全部正己烷淋洗液, 用含 5% 丙酮的正己烷液 60 ml 洗脱, 收集 浓缩后, 用丙酮转移并定容至 5 ml, 经 0.45 µm 滤器过滤后待测 1.2 红辣椒油 火锅料 奶油等油状样品称取 0.5 g ~ 2 g ( 准确至 g) 样品于小烧杯中, 加入适量正己烷溶解 ( 约 ~ 10 ml), 难溶解的样品可于正己烷中加温溶解 按 1.1 中 慢慢加入到 Cleanert Alumina-N 柱中 过滤后待测 操作 1.3 辣椒酱 番茄沙司等含水量较大的样品称取 10 g ~ 20 g ( 准确至 0.01 g) 样品于离心管中, 加 10 ml ~ 20 ml 水将其分散成糊状, 含增稠剂的样品多加水, 加入 30 ml 正己烷 : 丙酮 = 3:1, 匀浆 5 min,3000 rpm 离心 10 min, 吸出正己烷层, 于下层再加入 20 ml 2 次正己烷匀浆, 离心, 合并 3 次正己烷, 加入无水硫酸钠 5 g 脱水, 过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持 5 min, 用 5 ml 正己烷溶解残渣后, 按 1.1 中 慢慢加入到 Cleanert Alumina-N 柱中 过滤后待测 操作 1.4 香肠等肉制品称取粉碎样品 10 g ~ 20 g ( 准确至 0.01 g) 于三角瓶中, 加入 60 ml 正己烷充分匀浆 5 min, 滤出清液, 再以 20 ml 2 次正己烷匀浆, 过滤 合并 3 次滤液, 加入 5 g 无水硫酸钠脱水, 过滤后于旋转蒸发仪上蒸至 5 ml 以下, 按 1.1 中 慢慢加入到 Cleanert Alumina-N 柱中 过滤后待测 操作 2. 检测方法 色谱柱 : Venusil ASB C18,4.6 mm 150 mm,3 µm 流动相 : 溶剂 A :0.1% 甲酸的水溶液 : 乙腈 = 85:15 溶剂 B: 0.1% 甲酸的乙腈溶液 : 丙酮 =80:20 梯度洗脱 : 流速 :/min, 柱温 :30, 检测波长 : 苏丹红 Ⅰ 478 nm, 苏丹红 Ⅱ 苏丹红 Ⅲ 苏丹红 Ⅳ 520 nm, 于苏丹红 Ⅰ 出峰后切换 进样量 :10 µl 梯度条件见表 1 时间 (min) 订货信息 产品名称 LC-10F 高效液相色谱仪 CC-100 分析型色谱柱温箱 Cleanert Alumina-N 固相萃取柱 Venusil ASB C18 液相色谱柱针式过滤器 (PTFE) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 表 1 流动相梯度条件 A% 流动相 B% 规格包装 10 ml/min, 梯度系统, nm 双波长检测器温控范围 :5-70 可安装 1-2 支 300 mm 色谱柱 4 g/12 ml,20 支 /pk 4.6 mm 150 mm,3 µm 曲线 线性线性线性线性线性线性 订货号 FL-LC010GS CC-100 AL N VS µm, 直径 13mm,200/pk AS mL,100/pk ZSQ-5ML 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫, Shore A 1.0 mm,100/pk 注 : 由于有些样品, 基质干扰严重, 如辣椒油 火锅油等, 需要使用 4g/12mL 的规格, 才能有较好的回收率, 具体方法可咨询 具体请参考 :GB/T 食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法下载请到 :

158 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 食品中苏丹红染料的检测 Cleanert Sudan 专用柱, 升级方法 应用编号 :RF10006 GB/T 食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法 中采用正己烷作为萃取溶剂, 用氧化铝固相萃取柱净化样品 该方法样品处理过程复杂, 且氧化铝的活性不易控制, 回收率难以得到保证 本实验利用装填具有芳香性功能基团的聚合物材料的 Cleanert Sudan 固相萃取柱萃取辣椒油 辣椒粉等食品中 4 种苏丹红, 用二氯甲烷洗脱, 开发了一套食品中 4 种苏丹红检测的新方法, 与国标方法相比, 可获得更稳定的回收率, 溶剂用量更少更环保, 方法也更简便 1. 样品提取及净化 1.1 辣椒粉等粉状样品 称取 0.5 g ( 准确至 g) 样品于三角瓶中, 加入 5 ml 正己烷, 超声 10 min, 过滤, 将滤液于 5000 r/min 下离心 5 min 后取上清液 3 ml, 待净化 加标样品的处理 : 向 0.5 g ( 准确至 g) 辣椒粉中加入 2 ml 的 4 µg/ml 苏丹红混标以及 4 ml 正己烷, 然后按照上述方法进行预处理 1.2 辣椒油等油状样品称取 0.5 g ( 准确至 g) 样品于小烧杯中, 加入 3 ml 正己烷溶解, 涡旋 1 分钟混匀, 待净化 加标样品的处理 : 向 0.5 g ( 准确至 g) 辣椒油样品中加入 的 4 µg/ml 苏丹红混标, 然后按照上述方法进行处理 1.3 火腿肠类样品将火腿肠切成小丁, 称取 3.0 g ( 准确至 g), 放入 10 ml 离心管中, 加入 5 ml 正己烷, 超声 10 min,5000 r/ min 离心 5 min 后取上清液 3 ml, 待净化 加标样品的处理 : 将火腿肠切成小丁, 称取 3.0 g ( 准确至 g), 放入 10 ml 离心管中, 加入 2 ml 的 4 µg/ ml 苏丹红混标以及 4 ml 正己烷, 然后按照上述方法进行处理 1.4 火锅底料等酱类样品称取火锅底料 1.0 g ( 准确至 g), 加入 水, 再加 5 ml 正己烷, 涡旋 3 min, 超声 10 min, 接着以转速 6000 r/min 离心 5 min, 取上层有机相 3 ml, 加入无水硫酸钠 0.5 g, 涡旋 0.5 min, 静置取上清液作为上样液 加标样品的处理 : 向 1.0 g ( 准确至 g) 火锅底料中加入 水, 再加 2 ml 的 4 µg/ml 苏丹红混标及 4 ml 正己烷, 然后按照上述方法进行处理 2. 净化方法 净化样品所用固相萃取柱为 Cleanert Sudan 苏丹红专用柱 (500 mg/6 ml) 1. 活化 : 在 Cleanert Sudan 苏丹红专用柱中依次加入 5 ml 二氯甲烷,5 ml 正己烷 2. 萃取 : 将上述中的待净化液加入 Cleanert Sudan 柱中, 再用 正己烷洗涤样品瓶, 一并加入 SPE 柱中, 流出液弃去 3. 淋洗 : 待上样液完全流出后, 用 3 ml 3% 异丙醇 - 正己烷溶液淋洗, 淋洗液弃去, 开启真空泵, 将小柱抽干 4. 洗脱 :3 ml 二氯甲烷洗脱, 收集洗脱液 5. 吹干与定容 : 将洗脱液于 50 下氮气吹干, 加入 乙腈溶解, 使用 0.45 µm PTFE 有机滤膜过滤后, 进行 HPLC 分析 3. 色谱条件 色谱柱 :Venusil MP C18 5 µm,100 Å, mm 流动相 : 乙腈 : 水 =97:3(v/v) 流速 :1.0 ml/min 进样量 :20 µl 柱温 :35 检测波长 :520 nm 152 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

159 4. 实验结果 液相色谱条件下, 将浓度为 4 µg/ml 的标准溶液进行 HPLC 分析, 得到 4 种苏丹红标准溶液色谱图如图 1 所示 Ⅰ 图 1 4 种苏丹红标准溶液液相色谱图 苏丹红 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 保留时间分别为 :4.498 min min min min Ⅱ 经由上述样品处理方法处理的辣椒粉 辣椒油 火腿肠 火锅底料及其加标样品, 经 HPLC 分析, 得到色谱图见图 2~ 图 9 加标前 Ⅲ Ⅳ 加标后 表 2 4 种样品中苏丹红的平均加标回收率及 RSD 值 低浓度 (0.4mg/L) 样品名 组分 平均回收 RSD 率 /% (n=5)/% 苏丹红 Ⅰ 96.00% 5.02 辣椒粉 苏丹红 Ⅱ 95.19% 1.42 苏丹红 Ⅲ 98.82% 1.62 苏丹红 Ⅳ 97.16% 3.73 苏丹红 Ⅰ 93.42% 4.35 辣椒油 苏丹红 Ⅱ 91.67% 8.46 苏丹红 Ⅲ % 4.43 苏丹红 Ⅳ % 3.83 苏丹红 Ⅰ 90.63% 3.89 火腿肠 苏丹红 Ⅱ 87.60% 6.10 苏丹红 Ⅲ % 3.89 苏丹红 Ⅳ 92.68% 8.19 苏丹红 Ⅰ 99.67% 5.53 火锅底料 苏丹红 Ⅱ 87.95% 4.67 苏丹红 Ⅲ 99.02% 5.56 苏丹红 Ⅳ 91.05% 7.40 图 2 辣椒粉样品的液相色谱图 加标前 加标后 结论 Cleanert Sudan 能很好去除油脂中的杂质, 针对辣椒粉 辣椒油 火腿肠和火锅底料等四种不同的样品,4 种苏丹红的加标回收率都较理想 样品前处理的操作过程简单, 所需耗材少, 更经济 环保 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 图 3 辣椒油样品的液相色谱图 Cleanert Sudan Venusil MP C mg/6 ml,30/pk 5 µm,100 Å,4.6 mm 150 mm SD5006 VA 氮吹仪 15 位 NV-15G 加标前 加标后 1.5mL 样品瓶 1.5 ml,100/pk 和 AV mL 玻璃瓶 20 ml,100/pk AV 和 AV 图 4 火腿肠样品的液相色谱图 12mL 样品瓶 20 ml,100/pk 和 PTFE 滤头 0.45 µm, 直径 13 mm,200/pk AS 加标前 加标后 图 5 火锅底料样品的液相色谱图 153

160 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 花生油中 16 种邻苯二甲酸酯的分析方法 应用编号 :AF 前言 邻苯二甲酸酯类是指邻苯二甲酸 (Phthalate acid) 的酯化衍生物, 是塑胶工业中最为常见的塑化剂 在日常及工业上被广泛添加于高分子塑胶产品的生产, 如聚氯乙烯 ( PVC) 聚丙烯 (PP) 泡棉, 亦可添加于胶合剂 涂料 油墨中 此外应用于地毯衬垫 驱虫剂 头发喷雾剂 指甲油与火箭燃料等, 对人类健康有严重危害 人们对儿童用品中的邻苯二甲酸酯最为重视 欧盟于 1999 年就正式作出决定, 在欧盟成员国内, 对 3 岁以下儿童使用的与口接触的玩具 ( 如婴儿奶嘴 ) 以及其他儿童用品中邻苯二甲酸酯的含量进行严格限制 2005 年 12 月 27 日, 欧盟发布新的指令 2005/84/EC 要求 : 所有玩具及育儿物品中,DEHP DBP 及 BBP 的含量不得超过 0.1%, 所有可以放入儿童嘴中的玩具及育儿物品,DINP DIDP 及 DNOP 的含量不得超过 0.1% 2. 实验材料 主要仪器设备 Agilent 气相色谱串连质谱仪 试剂材料乙腈 二氯甲烷均为色谱纯 ; 正己烷为农残级 ; 30% 二氯甲烷 / 正己烷溶液 : 量取 30 ml 二氯甲烷, 用正己烷稀释至 100 ml 16 种邻苯二甲酸酯标准品 ( 纯度 99%): 正己烷溶解 ; Cleanert PSA 玻璃柱 :1 g/6 ml 3. 样品制备 样品提取方法一 : 称取花生油样品 1 g 于 40 ml 玻璃样品瓶中, 加入 2 ml 正己烷,10 ml 乙腈, 涡旋 2 min,4000 r/min 离心 2 min, 取上层清液转移至另一干净样品瓶中 剩余液体加入 10 ml 乙腈重复提取一次, 合并两次上清液, 于 40 氮吹至干, 加入 2 ml 正己烷溶解, 作为待净化液 方法二 : 称取花生油样品 1 g 于 40 ml 玻璃样品瓶中, 加入 2 ml 正己烷,10 ml 乙腈, 涡旋 2 min,4000 r/min 离心 2 min, 取上层清液转移至另一干净样品瓶中 剩余液体加入 10 ml 乙腈重复提取一次, 合并两次上清液, 于 40 氮吹至剩余 5 ml 左右, 作为待净化液 样品净化方法一 : 将 Cleanert PSA 玻璃柱依次用 5 ml 二氯甲烷, 5 ml 正己烷活化平衡, 将上述提取方法一中的待净化液全部上样于小柱上并收集流出液, 然后用 5 ml 正己烷清洗装上样液的样品瓶, 将洗涤液全部上于小柱上, 收集流出液, 最后用 5 ml 30% 二氯甲烷 / 正己烷溶液洗脱小柱, 合并三次流出液, 于 40 下氮吹至近干, 正己烷定容至, 待检测 方法二 : 将 Cleanert PSA 玻璃柱依次用 5 ml 二氯甲烷, 5 ml 乙腈活化平衡, 将上述提取方法二中的待净化液全部上样于小柱上并收集流出液, 然后用 5 ml 乙腈清洗装上样液的样品瓶, 将洗涤液全部上于小柱上, 收集流出液, 合并两次流出液, 于 40 下氮吹至近干, 正己烷定容至 1 ml, 待检测 注 : 上述操作步骤均可在 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪上完成 4. 实验条件 色谱柱 :DA-5MS 色谱柱, 30 m 0.25 mm 0.25 µm; 进样口温度 :250 ; 载气 : 氦气, 纯度 %; 流速 :/min; 电离方式 :EI 源 ; 离子源温度 :230 ; 溶剂延迟 :7 min; 进样方式 : 不分流进样 ; 样量 :1 µl; 程序升温 :50 保持 1 min, 以 20 /min 升至 220 保持 1 min, 再以 5 /min 升至 280 保持 4 min 154

161 表 种邻苯二甲酸酯类化合物定量离子及辅助定量离子 序号 中文名称 英文缩写 定量离子 辅助定量离子 1 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 邻苯二甲酸二 (2- 甲氧基 ) 乙酯 DMEP 邻苯二甲酸二 (4- 甲基 -2- 戊基 ) 酯 BMPP 邻苯二甲酸二 (2- 乙氧基 ) 乙酯 DEEP 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 邻苯二甲酸二 (2- 丁氧基 ) 乙酯 DBEP 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 邻苯二甲酸二 (2- 乙基 ) 己酯 DEHP 邻苯二甲酸二苯酯 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 结果与讨论 实验结果由表 2 可知, 采用 SN/T 方法处理花生油中的邻苯二甲酸酯, 邻苯二甲酸二 (2- 甲氧基 ) 乙酯和邻苯二甲酸二苯酯的回收率不能满足要求, 而优化的两种前处理方法, 所有目标物的回收率均能够满足要求, 在 70% ~ 120% 之间, 方法二的回收率要比方法一的回收率稍好 表 种邻苯二甲酸酯前处理方法加标实验结果 (n=3, 添加水平 2 mg/kg) SN/T 方法一方法二 峰号 化合物 简称 保留时间 平均回收率 /% RSD/% 平均回收率 /% RSD/% 平均回收率 /% RSD/% 1 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 邻苯二甲酸二 (2- 甲氧基 ) 乙酯 DMEP 邻苯二甲酸二 (4- 甲基 -2- 戊基 ) 酯 BMPP 邻苯二甲酸二 (2- 乙氧基 ) 乙酯 DEEP 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 邻苯二甲酸二 (2- 丁氧基 ) 乙酯 DBEP 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 邻苯二甲酸二 (2- 乙基 ) 己酯 DEHP 邻苯二甲酸二苯酯 未检出 未检出 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 邻苯二甲酸二壬酯 DNP

162 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 图1. 2 µg/ml 16种邻苯二甲酸酯标准溶液色谱图 图2. 花生油基质空白色谱图 图5. 花生油基质方法二处理2 mg/kg加标色谱图 图4. 花生油基质方法一处理2 mg/kg加标色谱图 本实验依据SN/T 优化出两种处理16种邻 苯二甲酸酯的SPE方法 并结合GC/MS对加标量为2 mg/ kg的样品进行了测定 结果在70% ~ 120%之间 且稳定 性良好 方法二的回收率要优于方法一的回收率 但是 除油效果是方法一最佳 说明两种方法均可用于测定植 物油中16种邻苯二甲酸酯的残留 6. 订货信息 名称 规格 订货号 Cleanert PSA 玻璃柱 1 g/6 ml 30/pk PA0006-G DA-5MS 30 m 0.25 mm 0.25 µm Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 24 位 无本底 SPE-40 氮吹仪 15 位 NV15-M 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm 100/pk ml 样品瓶盖 结论 图3. 花生油基质SN/T 方法处理2 mg/kg加标色谱图 mm 中心孔蓝盖 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm 100/pk 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载

163 (DB 31/ ) 火锅底料中罂粟碱类物质的残留量测 应用编号 :CU1005 罂粟碱是罂粟壳的主要成分之一, 罂粟碱对血管 心脏或其它平滑肌有直接的非特异性松弛作用, 人体长期摄入可成瘾, 大量摄入可导致严重心律失常 同时, 罂粟壳中还含有吗啡 那可丁 可待因和蒂巴因等相关违禁成分 近些年一些不法商贩在大众食品调料 汤料中掺入罂粟壳及其水浸物, 企图使顾客产生依赖成瘾以达到拉 回头客 的目的 地方食品安全标准 DB 31/ 规定了火锅食品中罂粟碱 吗啡 那可丁 可待因和蒂巴因的液相色谱 - 串联质谱测定方法 适用于火锅酱料 汤料 调味油和固体类调味粉等火锅食品中罂粟碱 吗啡 那可丁 可待因 蒂巴因的测定 本方法样品用水或盐酸溶液分散均匀 乙腈提取后, 经盐析分层, 乙腈提取液用键合硅固相萃取吸附剂净化, 离心, 液相色谱 - 串联质谱仪检测, 罂粟碱 那可丁和蒂巴因采用外标法定量, 吗啡和可待因采用内标法定量 梯度洗脱 : 时间 (min) 流速 (µl/min) A(%) 离子源 : 具备电喷雾接口的 Turbo V 离子源极性 : 正离子模式, 离子源相关参数如下 : CUR: 40.00; TEM: GS1: 60.00; GS2: 60.00; IS: B(%) 样品处理 称取 2 g 试样 ( 精确至 0.01 g) 于 50 ml 聚四氟乙烯具塞离心管中, 加入 150 μl 同位素内标工作液, 加入 5 ml 水, 振摇使分散均匀 ( 酱类样品必要时可加 10 ml 水 ), 加入 15 ml 乙腈, 涡旋振荡 1 min, 加入 6 g 无水硫酸镁 (3.7) 和 1.5 g 无水醋酸钠 (3.8) 的混合粉末 (P/N:MS-MG5052), 迅速振摇, 涡旋振荡 1 min, 以 4000 转 / 分钟离心 5 min, 取上清液待净化 称取 50 mg(±5 mg)psa(3.9),100 mg(±5 mg) 无水硫酸镁 (3.7),100 mg(±5 mg)c18 粉末置于 2 ml 聚四氟乙烯具塞离心管中 (P/N:MS-9PA0205), 移取 1.5 ml 上清液至此离心管中, 涡旋混合 1 min, 以 转 / 分钟离心 2 min, 移取上清液,0.22 μm 滤膜过滤, 取滤液待测 以上前处理方法主要针对火锅酱料 汤料 调味油 2. 液相条件 色谱柱 :Venusil Hilic, mm,3 µm (P/N:VH ); 进样量 :10 µl 流动相 :A: 0.1% 甲酸,10 mmol/l 乙酸铵水溶液 B: 乙腈 3. 质谱条件 物质名称 Q1 Q3 罂粟碱 吗啡 那可丁 可待因 蒂巴因 吗啡 -D 可待因 -D

164 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers Intensity, cps 3.2e6 3.0e6 2.8e6 2.6e6 2.4e6 2.2e6 2.0e6 1.8e6 1.6e6 1.4e6 1.2e6 1.0e6 8.0e5 6.0e5 4.0e5 2.0e Time, min 种罂粟碱类物质的总离子流色谱图 总结 该方法基于 (DB 31/ ), 使用 LC-MS/MS 法进行火锅调料中罂粟碱类的物质检测, 并且通过验证可用于各种火锅调料产品中罂粟碱类物质的定量 定性分析 经验证适用于 SCIEX Triple Quad 4000 系列 4500 系列 API 系列以及 6500 系列的 LC/MS/MS 系统 灵敏度高, 重现性好, 适用于各相关实验室进行该类物质的日常分析 158 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

165 (GB 第一法 ) 食用油中极性组分 (PC) 的测定 应用编号 :AF10125 食用油的极性组分是指食用油在煎炸食品的工艺条件下发生劣变, 发生了热氧化反应 热聚合反应 热裂解反应和水解反应, 产生了比正常植物油分子 ( 甘油三酸酯 ) 极性较大的一些成分, 是甘油三酸酯的热氧化产物 ( 含有酮基 羟基 过氧化氢基和羧基的甘油三酸酯 ) 热聚合产物 热氧化聚合产物 水解产物 ( 游离脂肪酸 一酸甘油酯和二酸甘油酯 ) 的总称, 对人体有害 根据食用植物油煎炸过程中的卫生标准, 食用油中的极性组分不得超过 27% 博纳艾杰尔 EOPC 全自动食用油极性组分分离系统完全适用于 GB 食用油中极性组分 (PC) 的测定 ( 第一法制备型快速柱层析法 ), 可实现食用油极性组分的自动化 快速分离设备, 配合标准化的 EOPC 分离柱, 适用于各类食用动植物油脂中极性组分的分离! 相对于传统方法中硅胶柱层析分离 - 薄层色谱 (TLC) 检测极性组分, 本系统超乎想象的缩短了分离食用油极性组分的时间,40 分钟即可完成极性组分的分离, 可连续自动处理 5 个样本, 能节省 90% 的时间! 1. 仪器 试剂与材料 1.1 主要仪器设备 EOPC 全自动食用油极性组分分离系统 ; EOPC 专用柱 检测波长 :200 nm; 流速 :25 ml/min; 收集 : 全收集 洗脱条件 : 时间 /min A/% B/% 实验结果 表 1 液相色谱洗脱条件 由图 1 图 2 图 3 图 4 可知, 采用 EOPC 分离系统测定食用油中极性组分在线监测准确, 且薄层色谱验证分离良好, 可用于测定食用油中极性组分的含量 表 2 油中极性组分含量测试结果 样品编号 平均含量 /% 试剂材料石油醚 ( 沸程 30 ~ 60 ) 乙醚均为色谱纯; 食用油样品 : 客户提供 2. 样品制备 图 号样品分离色谱图 称取 1 g 油样至于烧杯中, 加入 5 ml 石油醚 ( 沸程 30 ~ 60 ) 溶解, 待上样 3. 色谱条件 仪器 :EOPC 全自动食用油极性组分分离系统 ; 色谱柱 :EOPC 专用柱 1 支 ; 流动相 A: 非极性组分洗脱液 ; 流动相 B: 极性组分洗脱液 ; 进样量 : 全上样, 且上样后再用 3 ml 石油醚清洗烧杯, 并上样 ; 图 号样品色谱图 159

166 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 结论 本实验采用 EOPC 全自动食用油极性组分分离系统对食用油中极性组分含量进行了测定 结果 7004 号样品极性组分含量为 5.8%,7489 号样品极性组分含量为 18.6%, 且经薄层色谱验证,EOPC 系统对于食用油中的非极性与极性组分的分离良好 6. 订货信息 图 号样品薄层色谱验证图 产品名称 规格包装 订货号 EOPC 分离系统 分离系统和收集系统,1 台 EOPC-SEP EOPC 自动进样系统 5 个进样通道,1 个清洗通道, 定量环 5 ml,1 台 EOPC-ATS EOPC 柱转换系统 6 根色谱柱切换,1 台 EOPC-ACQ EOPC 温控系统 4 ~ 室温,1 台 EOPC-T EOPC 专用柱 20 g,2 支 / 包 EOPC20 图 号样品薄层色谱验证图 160 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

167 第五部分 污染物 161

168 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 食品中甲醛的测定 HPLC 法 应用编号 :AF10053 社会上先后报道存在用甲醛溶液喷洒白菜保鲜的现象, 甲醛之所以能保鲜是能够延缓白菜的腐烂和霉变, 其可以使蛋白质变性, 同时也能溶解脂肪, 故有杀菌和保鲜作用 此外, 甲醛还是一种重要的工业有机原料, 广泛用于合成纤维 皮革工业 医药 染料等工业等 但是甲醛是一种破坏生物细胞蛋白质的原生质毒素对人体有很大的危害 吸入甲醛可以引起食欲减退 厌食 体重减轻 衰弱 失眠症 甲醛对中枢神经系统有麻醉作用, 此 外甲醛还能损伤细胞内的遗传物质是可疑的致癌物质 国家纺织产品基本安全技术规范 GB 中规定纺织品中甲醛含量不得大于 20 mg/kg, 对于食品, 甲醛更是非法添加物质, 啤酒和白菜规定不得人为添加, 啤酒中规定不大于 2 mg/l 本实验采用水提取法, 最低检测限可到 1.0 mg/l, 经实验证明该方法检测效率高, 检测限低, 适合做甲醛的检测 1. 实验试剂 1.1 样品 : 市售白菜 ; 市售啤酒 1.2 DNPH 标准溶液 : 称取 6 mg DNPH 固体, 溶于 20 ml 乙腈, 摇匀 ; 1.3 DNPH 衍生剂溶液 : 移取 0.3 ml DNPH 标准溶液, 用乙腈稀释至 30 ml; 1.4 甲醛溶液 : 分析纯, 含量 37%~40% 1.5 甲醛储备液 : 准确移取 38 µl 甲醛溶液, 加水稀释至 10 ml; 1.6 甲醛标准稀释液 : 准确移取甲醛储备液, 加水稀释至 20 ml; 2. 样品处理 2.1 白菜样品前处理 准确称取 1 g 白菜试样两份, 分别置于 60 ml 样品瓶中, 并分别加入 50 µl 和 100 µl 甲醛溶液, 混匀, 再分别加入 50 ml 水, 摇匀,40 加热提取 30 min 取 提取液, 加入 DNPH 衍生剂溶液, 混合均匀,60 衍生 30 min, 即为试样溶液 试样溶液通过 0.45 µm Nylon 针式过滤器过滤, 待测 2.2 啤酒样品前处理移取 5 ml 啤酒试样两份, 分别置于 60 ml 样品瓶中, 并分别加入 50 µl 和 100 µl 甲醛溶液, 混匀后取出, 加入 DNPH 衍生剂溶液, 常温衍生 30 min, 即为试样溶液 试样溶液通过 0.45 µm Nylon 针式过滤器过滤, 待测 3. 实验试剂 色谱柱 :Venusil XBP C18(L) (5 µm,150 Å, mm); 流动相 : 乙腈 : 水 =50:50 流速 :1.0 ml/min 进样量 :10 µl 波长 :360 nm 柱温 :30 4. 实验结果 4.1 线性关系和检出限 量取一定量甲醛标准稀释液, 分别加水稀释至 0.4 µg/ ml 0.8 µg/ml 2 µg/ml 4 µg/ml 和 8 µg/ml, 依次进样, 以浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 拟合标准曲线方程并计算最低检测限, 结果见表 1 标准曲线方程 y =53273x 表 1 甲醛标准曲线 精密度和检出限 4.2 添加回收率 表 2 白菜 啤酒样品的添加回收率 (50 μl,100 μl 添加水平 ) 添加水平 50 µl 100 µl 相关系数 保留时间 RSD % 啤酒 94% 91% 回收率 峰面积 RSD % 白菜 102% 99% 检出限 (S/N>3) 1.2mg/L 162 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

169 图 1 50 μl 添加白菜样品谱图 图 2 50 μl 添加啤酒样品谱图 5. 订货信息 产品名称 LC-10F 高效液相色谱仪 CC-100 分析型色谱柱温箱 Venusil XBP C18 (L) 液相色谱柱针式过滤器 (Nylon) 微孔过滤膜 (Nylon) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶, 样品瓶盖 12 ml 样品瓶 12 ml 样品瓶盖 30 ml 样品瓶 30 ml 样品瓶盖 60 ml 样品瓶 60 ml 样品瓶盖 规格包装 10 ml/min, 梯度系统, nm 双波长检测器温控范围 :5-70 ; 可安装 1-2 支 300 mm 色谱柱 mm,5 µm,150 Å 0.45 µm, 直径 13 mm,200/pk 0.45 µm, 直径 50 mm,100/pk 5 ml,100/pk 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 螺纹棕色,100/ 盒 100/ 包螺纹棕色,100/ 盒 100/ 包螺纹透明,100/ 盒 100/ 盒 订货号 FL-LC010GS CC-100 VX L AS AM ZSQ-5ML

170 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 薯片和油条中丙烯酰胺的分析方法 应用编号 :AF10096 摘要 : 本实验重现了 食品中丙烯酰胺的测定 GB 中第一法 稳定性同位素稀释的液相色谱 - 质谱 / 质谱法 (LC-MS/MS), 样品经超纯水提取, 先后经 Cleanert PEP 和 Cleanert SAS 固相萃取柱净化,Venusil MP C18 色谱柱 ( mm,5 µm,100 Å) 分离,0.1% 的甲酸水溶液作为流动相洗脱, 三重四极杆质谱检测, 内标法进行定量 结果表明 : 当丙烯酰胺的加标量为 2 mg/kg 时, 回收率在 100% ~ 115%, 可以满足检测要求 关键词 :LC-MS/MS; 丙烯酰胺 ;Cleanert PEP; Cleanert SAS;Venusil MP C18 1. 前言 丙烯酰胺 (acylamide; CAS 登记号 ) 是一种无色 无臭透明片状晶体 ; 可溶于水 醇 丙酮 醚和三氯甲烷, 微溶于甲苯, 不溶于苯和庚烷 相对分子质量为 71.08, 结构式如图 1 所示 丙烯酰胺是一种公认的神经毒素和准致癌物, 动物实验和体外细胞实验都证明丙烯酰胺还可导致遗传物质发生改变, 早在 2005 年国际癌症研究机构就已将其列为 2A 级致癌物质 2002 年 4 月, 瑞典国家食品管理局发现许多含淀粉的食物经过煎 烤 炸等高温烹调后会产生高含量的丙烯酰胺 众多研究表明薯条 薯片等土豆制品中丙烯酰胺的含量最高, 超过饮用水中允许最大限度的 500 多倍 NH 2 C H 2 C O 图 1. 丙烯酰胺的结构式 因此通过有效的实验技术手段, 对食品中的丙烯酰胺进行监控, 以确保消费者对食品消费的安全具有重要意义 本实验通过优化前处理方法建立了丙烯酰胺在食品中的 LC-MS/MS 方法 2. 实验材料 主要仪器设备 SCIEX API 液相质谱联用仪 试剂材料某品牌原味薯片 油条 ; 甲酸 甲醇 正己烷皆为色谱纯 ; 屈臣氏水 ; 丙烯酰胺标准品 ( 纯度 > 99%), 用水溶 ; D3- 丙烯酰胺标准溶液 (CD2=CDCONH 2 ) ( 浓度 500 mg/l, 溶剂乙腈 ); 80% 甲醇水溶液 : 取 20 ml 水, 加甲醇稀释定容至 100 ml; 0.1% 甲酸溶液 : 移取 100 µl 甲酸并加入 100 ml 水, 摇匀 ; 一次性无菌注射器 ; 尼龙针式过滤器 (0.22 µm, 直径 13 mm); Cleanert PEP 固相萃取柱 :200 mg/6 ml; Cleanert SAS 固相萃取柱 :200 mg/3 ml 3. 样品制备 样品提取准确称取粉碎后的 1 g 样品置于 50 ml 离心管中, 加入 200 µl D3- 丙烯酰胺内标 (1 mg/l), 再加入 10 ml 水, 超声振荡 30 min 后, 于 8000 r/min 离心 5 min, 将上清液转移到 15 ml 离心管中, 加入 5 ml 正己烷, 漩涡萃取 1 min, 以 6000 r/min 的速度离心 5 min, 除去上层有机相, 再用 5 ml 正己烷重复萃取一次, 之后迅速取 5 ml 水相作为上样液 样品净化 Cleanert PEP 固相萃取柱 (200 mg/6 ml) 使用前依次用 3 ml 甲醇 3 ml 水活化, 将上述上样液上 Cleanert PEP 固相萃取柱, 收集上样液, 并用 4 ml 80% 的甲醇水溶液洗脱, 合并收集全部洗脱液, 该洗脱液待用 Cleanert SAS 固相萃取柱净化 ;Cleanert SAS 固相萃取柱 (200 mg/3 ml) 依次用 3 ml 甲醇 3 ml 水活化, 将上述洗脱液全部上样, 在重力作用下流出, 收集全部流出液, 并用 2 ml 甲醇洗脱, 合并收集全部洗脱液 于 40 下氮吹浓缩至近干, 用水定容至, 待 LC- MS/MS 检测 注 : 上述操作步骤可在 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪上完成 4. 实验条件 液相条件色谱柱 :Venusil MP C18, 5 µm,100 Å, mm; 流动相 : 0.1% 甲酸水溶液 ; 柱温 :26 ; 流速 :0.2 ml/min; 进样量 :2 µl 164 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

171 质谱条件 离子源 ESI+ 电喷雾电压 5500 V 雾化气压力 45 psi 气帘气压力 10 psi 辅助气压力 45 psi 离子源 温度 330 采集方式 多反应监测(MRM) 物质名称 丙烯酰胺 添加水平 出峰时 平均回收率 % mg/kg 间 薯片 油条 RSD % 薯片 油条 表1. 丙烯酰胺质谱参数 物质名称 Q1 丙烯酰胺 72 D3- 丙烯酰胺 75 Q3 CE/V 图3. 1 mg/l丙烯酰胺标准溶液lc-ms/ms谱图 5. 结果与讨论 线性关系 分别配制浓度为0.01 mg/l 0.05 mg/ L 0.1 mg/l 0.5 mg/l 1 mg/l 3 mg/l的丙烯酰胺标准溶液 内标 0.1 mg/l 进行液相色谱-质谱/质谱检测 以各标准溶液的 丙烯酰胺进样浓度 mg/l 为横坐标 以丙烯酰胺的峰面 积与内标D3-丙烯酰胺的峰面积比值为纵坐标 绘制标准曲 线 如图2所示 拟合参数如表2 图4. 薯片样品基质空白LC-MS/MS谱图 表2. 丙烯酰胺标准曲线和检出限 化合物名称 标准曲线方程 相关系数 检出限 (mg/l S/N = 3) 丙烯酰胺 Y = 9.41 X 图5. 薯片样品基质空白LC-MS/MS放大图 图2. 丙烯酰胺标准溶液曲线 实验结果 图6. 2 mg/kg薯片样品基质加标lc-ms/ms谱图 由表3可知 采用固相萃取结合液相色谱-质谱/质谱 法检测丙烯酰胺 内标法定量 丙烯酰胺的加标回收率在 100% ~ 115%之间 满足检测要求 165

172 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 图 7. 2 mg/kg 薯片样品基质加标 LC-MS/MS 放大图 图 8. 油条样品基质空白 LC-MS/MS 谱图 图 9. 2 mg/kg 油条样品基质加标 LC-MS/MS 谱图 结论 本实验依据 食品中丙烯酰胺的测定 GB 中第一法 稳定性同位素稀释的液相色谱 - 质谱 / 质谱法建立了食品中丙烯酰胺的检测方法, 并用内标法结合 LC- MS/MS 对食品中丙烯酰胺含量进行了测定 当加标量为 2.0 mg/kg 时, 回收率在 100% ~ 115% 之间, 符合要求 6. 订货信息 名称 Venusil MP C18 Cleanert PEP Cleanert SAS Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪氮吹仪 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格 5 μm,100 Å, mm 200 mg/6ml,30/pk 200 mg/3ml,50/pk 24 位, 四通道 15 位短螺纹透明带书写处, mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm,100/pk 单膜,13 mm,0.22 µm,200/pk 2 ml 无针头,100/pk 订货号 VA PE2006 SS2003 SPE-40 NV15-M AS LZSQ-2ML 166 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

173 薯片和油条中丙烯酰胺的分析方法 Cleanert ACA 专用柱, 升级方法 应用编号 :AF10095 摘要 : 本实验参照 食品中丙烯酰胺的测定 G B 中第一法 稳定性同位素稀释的液相色谱 - 质谱 / 质谱法 (LC-MS/MS) 对油炸食品中丙烯酰胺进行测定, 考虑到国标法中前处理过程存在操作步骤繁琐, 操作时间长等问题, 改用 Cleanert ACA 固相萃取柱一次净化, Venusil MP C18 色谱柱 ( mm,5 µm,100 Å) 分离,0.1% 的甲酸水溶液作为流动相洗脱, 三重四极杆质谱检测, 内标法进行定量, 取得了较好的实验结果 结果表明 : 该方法不仅简化了前处理过程的实验操作步骤和降低了操作时间, 而且使样品的净化效果更好, 减小了样品的基质效应 当丙烯酰胺的加标量分别为 0.1 mg/kg 2 mg/kg 时, 回收率均在 100% ~ 110% 之间, 可以满足检测要求 关键词 :LC-MS/MS; 丙烯酰胺 ;Cleanert ACA; Venusil MP C18 1. 前言 丙烯酰胺 (acylamide; CAS 登记号 ) 是一种无色 无臭透明片状晶体 ; 可溶于水 醇 丙酮 醚和三氯甲烷, 微溶于甲苯, 不溶于苯和庚烷 相对分子质量为 71.08, 结构式如图 1 所示 丙烯酰胺是一种公认的神经毒素和准致癌物, 动物实验和体外细胞实验都证明丙烯酰胺还可导致遗传物质发生改变, 早在 2005 年国际癌症研究机构就已将其列为 2A 级致癌物质 2002 年 4 月, 瑞典国家食品管理局发现许多含淀粉的食物经过煎 烤 炸等高温烹调后会产生高含量的丙烯酰胺 众多研究表明薯条 薯片等土豆制品中丙烯酰胺的含量最高, 超过饮用水中允许最大限度的 500 多倍 NH 2 C H 2 C O 因此通过有效的实验技术手段, 对食品中的丙烯酰胺进行监控, 以确保消费者对食品消费的安全具有重要意义 本实验参照国标法一法, 使用 Cleanert ACA 固相萃取柱对样品净化, 建立了快速 有效的食品中丙烯酰胺的 LC- MS/MS 检测方法 试剂材料某品牌原味薯片 油条 ; 甲酸 甲醇 正己烷皆为色谱纯 ; 屈臣氏水 ; 丙烯酰胺标准品 ( 纯度 > 99%), 水溶解 ; D3- 丙烯酰胺标准溶液 (CD2=CDCONH 2 )( 浓度 500 mg/l, 溶剂乙腈 ); 基质标准工作溶液 : 0.1% 甲酸溶液 : 移取 100 µl 甲酸并加入 100 ml 水, 摇匀 ; 一次性无菌注射器 ; 尼龙针式过滤器 (0.22 µm, 直径 13 mm); Cleanert ACA 固相萃取柱 :200 mg/6 ml 3. 样品制备 样品提取准确称取粉碎后的 1 g 样品置于 50 ml 离心管中, 加入 200 µl D3- 丙烯酰胺内标 (1 mg/l), 再加入 10 ml 水, 超声振荡 30 min 后, 于 8000 r/min 离心 5 min, 将上清液转移到 15 ml 离心管中, 加入 5 ml 正己烷, 漩涡萃取 1 min, 以 6000 r/min 的速度离心 5 min, 除去上层有机相, 再用 5 ml 正己烷重复萃取一次, 之后迅速取 5 ml 水相作为上样液 样品净化手动操作 Cleanert ACA 固相萃取柱 (200 mg/6 ml) 使用前依次用 5 ml 甲醇 5 ml 水活化, 将上样液上 Cleanert ACA 固相萃取柱, 并用 5 ml 水洗涤, 真空抽干小柱, 用 5 ml 甲醇洗脱, 并收集全部洗脱液, 于 40 下氮吹浓缩至近干, 用水定容至 1 ml, 待 LC-MS/MS 检测 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪操作程序先将 Cleanert ACA 固相萃取柱安装在仪器上, 并将样品注入到上样管里, 按下图中程序自动操作 : 2. 实验材料 主要仪器设备 SCIEX API 液相质谱联用仪 ; Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 167

174 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 4. 实验条件 表2. 丙烯酰胺标准曲线和检出限 液相条件 色谱柱 Venusil MP C18 5 µm 100 Å mm 流动相 0.1%甲酸水溶液 柱 温 26 流 速 0.2 ml/min 进样量 2 µl 质谱条件 离子源 ESI+ 电喷雾电压 5500 V 雾化气压力 45 psi 气帘气压力 10 psi 辅助气压力 45 psi 离子源 温度 330 采集方式 多反应监测(MRM) 化合物名称 标准曲线方程 相关系数 检出限 (mg/l S/N = 3) 丙烯酰胺 Y = 9.41 X 实验结果 由表3可知 采用Cleanert ACA固相萃取柱结合液相色 谱-质谱/质谱法检测丙烯酰胺 当丙烯酰胺的加标量分别为 0.1 mg/kg和2 mg/kg时 回收率均在100% ~ 110%之间 满 足检测要求 表3. 丙烯酰胺加标回收实验结果(n=3) 表1. 丙烯酰胺质谱参数 Q1 物质名称 丙烯酰胺 72 D3- 丙烯酰胺 75 Q3 CE/V 物质 名称 丙烯 酰胺 操作 添加水平 保留时 平均回收率 % RSD % 方式 mg/kg 间 /min 薯片 油条 薯片 油条 自动 0.1 手动 结果与讨论 线性关系 分别配制浓度为0.01 mg/l 0.05 mg/ L 0.1 mg/l 0.5 mg/l 1 mg/l 3 mg/l的丙烯酰胺标准溶液 内标 0.1 mg/l 进行液相色谱-质谱/质谱检测 以各标准溶液的 丙烯酰胺进样浓度 mg/l 为横坐标 以丙烯酰胺的峰面 积与内标D3-丙烯酰胺的峰面积比值为纵坐标 绘制标准曲 线 如图3所示 拟合参数如表2 图 mg/l丙烯酰胺标准溶液lc-ms/ms谱图 图5. 薯片样品基质空白LC-MS/MS谱图 图3. 丙烯酰胺标准溶液曲线 图6. 薯片样品基质空白LC-MS/MS放大图 168 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载

175 结论 本实验参照 食品中丙烯酰胺的测定 GB 中第一法 稳定性同位素稀释的液相色谱-质谱/质谱 法 使用Cleanert ACA固相萃取柱建立了食品中丙烯酰胺 的检测方法 并用内标法结合LC-MS/MS对食品中丙烯酰胺 含量进行了测定 当加标量为0.1 mg/kg和2 mg/kg时 回收 率均在100% ~ 110%之间 符合要求 该方法的定量限为60 μg/kg 图 mg/kg薯片样品基质加标lc-ms/ms谱图 讨论 图 mg/kg薯片样品基质加标lc-ms/ms放大图 与国标法相比 该方法具有诸多优点 1 从操作过程上说 该方法操作简单 只需要使用 一根固相萃取柱 而国标法需要使用两根固相萃取柱 该 方法操作时间短 前处理整个过程只需要4 h 而国标法则 需要12 h以上 2 从净化效果上说 该方法除杂效果比国标法好 如下图所示为薯片基质用该方法和国标法处理的LC-MS/MS 谱图 从图中可以看到国标法处理的杂质峰的峰高是该方 法的10倍左右 图9. 油条样品基质标准工作溶液LC-MS/MS谱图 图12. 薯片样品基质空白LC-MS/MS谱图 浅色-国标法 深色-本实验方法 图10. 油条样品基质空白LC-MS/MS谱图 3 从实验结果上说 该方法和国标法都存在基质效 应 ME 且ME < 100% 即皆为离子抑制效应 本实验 方法对薯片和油条基质的ME分别为90%和87% 而国标法 对薯片和油条基质的ME分别为23%和35% 本实验方法的 ME更接近100% 因此本实验的基质效应更小 从绝对回 收率上看 本实验对薯片和油条的回收率分别为76.6%和 63.4% 而国标法对薯片和油条的绝对回收率只有22.3%和 32.7% 注 ME = 空白样品处理后加标响应峰面积-空 白样品丙烯酰胺响应峰面积 /溶剂标响应峰面积 图 mg/kg油条样品基质加标lc-ms/ms谱图 169

176 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 表 4. 丙烯酰胺加标回收实验结果 (n=3) 物质名称 前处理方法 添加水平 (mg/kg) 保留时间 / min 平均回收率 /% ( 绝对 ) RSD(%) ME/% 薯片油条薯片油条薯片油条 丙烯酰胺 ACA 国标 订货信息 名称 Venusil MP C18 Cleanert ACA Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪氮吹仪 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖针式过滤器 (Nylon) 一次性注射器 规格 5 μm,100 Å, mm 200 mg/6ml,30/pk 24 位, 四通道 15 位短螺纹透明带书写处 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm,100/pk 单膜,13 mm,0.22 µm,200/pk 2 ml 无针头,100/pk 订货号 VA ACA2006 SPE-40 NV15-M AS LZSQ-2ML 170 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

177 (GB 净化方法一 ) 油脂中苯并 (a) 芘的检测 HPLC 法 应用编号 :RF 样品制备 称取约 g 的油样, 用 5 ml 正己烷溶解涡旋混合器上充分混匀 2. 固相萃取柱净化 活化 : 用约 30 ml 正己烷将 Cleanert BaP,22g/60mL (P/N: BAP2260-0) 柱预先活化 ( 注意 : 在正己烷滴出的过程中, 柱体上部要不断添加正己烷, 千万注意不能让正己烷低于柱子的上筛板, 避免空气进入柱子!) 上样 : 将溶解好的油样添加到预活化好的 Cleanert BaP 柱子中, 注意操作过程中上筛板不能干涸 洗脱 : 添加 80 ml 正己烷, 用 150 ml 的旋蒸瓶接收, 直到 80 ml 的正己烷完全自然滴出 为了保证回收率, 也可以增加正己烷的洗脱体积, 最多可至 120 ml 5. 实验结果 本方法采用 Cleanert BaP 固相萃取柱用于某植物油苯并 (a) 芘的净化处理于 5 µg/kg 添加水平可获得 99.49% 回收率, 采用 Venusil ASB C18 所得到的图谱见图 1~3 图 1 5µg/L 苯并 (a) 芘的标准样品的色谱图 3. 浓缩 旋转蒸发 : 将洗脱液在 45 水浴中旋转蒸发至干, 如果仍然有油滴无法蒸干, 说明样品中油脂含量较高, 净化不完全, 需要向油滴中添加 80 ml 的正己烷制得新样, 取一根新柱重复上述净化过程 ; 图 2 某植物油的实际样品色谱图 氮吹 : 用总计 10 ml 的正己烷分三次淋洗旋蒸瓶, 合并淋洗液到氮吹管中, 氮气吹干 添加 300 µl 的正己烷到氮吹管中, 在涡旋混合器上充分混匀 注意氮吹过程避免气流过大, 造成液体溅出 ; 涡旋过程避免正己烷蒸发 将上述 300 µl 的正己烷转移至 1.5 ml 样品瓶内插管中, 进样分析 4. 色谱条件 图 3 某植物油加标量为 5µg/kg 的标准样品色谱图 色谱柱 :Venusil ASB C mm 4.6 mm 5.0 µm ( P/N:VS ) 流速 :1.0 ml/min; 流动相 : 乙腈 : 水 =88:12; 发射波长 :406 nm; 激发波长 :384 nm 5µg/L 标准品 表 1 苯并芘的响应及回收率 油脂实际样品 油脂加标样品 回收率 99.49% 171

178 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Venusil ASB C mm 4.6 mm,5 µm,1 支 VS 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS Cleanert BAP 苯并芘专用柱 22 g/60 ml,10 支 /pk BAP ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm,100/pk 针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 μm,200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 172 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

179 (GB 净化方法二 ) 油脂中苯并 (a) 芘的检测 HPLC 法 应用编号 :RF 试样处理 (1) 使用正己烷配制 200 ppm 苯并 (a) 芘标准品标样备用, 并用正己烷稀释成 1 ppm 苯并 (a) 芘工作液备用 (2) 取 0.5 g 油于 12 ml 样品瓶 (P/N: 和 P/ N: ) 中, 加 3 ml 正己烷涡旋震荡溶解, 作为待净化液, 若要做加标实验, 根据需要向油中先加入适量的标准品 2. 固相萃取方法 固相萃取柱名称 :Cleanert BAP-3 ( 混合分子印迹材料 ), 500mg / 6mL (P/N:BaP5006) 2.1 针对花生油 大豆油 玉米油 葵花籽油 稻米油 胡麻油 调和油 菜籽油 橄榄油, 固相萃取方法如下 : 图 1 空白实验色谱图 (P/N:AV 和 P/N:AV7920-0) 中 ; 浓缩 : 将洗脱液在 40 下氮气吹干, 用 乙腈定容, 超声 10s, 过 PTFE 0.22 µm 滤头, 收集于 1.5 ml 样品瓶 (P/N: 和 P/N:AV2100-0) 的内插管 (P/N: ) 中, 待测 ; 另取 加标浓度的标样 ( 正己烷溶 ) 40 吹干 乙腈定容, 作为液相检测时用的参考标样 2.2 针对香油样品, 需要在 Cleanert BAP-3 柱上串联一支 Cleanert Silica 柱 (500mg/6mL,P/N:SI5006), 按照 2.1 中的方法进行活化 上样, 注意淋洗时先用 5 ml 正己烷淋洗串联柱, 然后弃去硅胶柱, 再用 5 ml 的正己烷二次淋洗 Cleanert BAP-3 柱, 最后按照 2.1 中的方法对 Cleanert BAP-3 柱进行洗脱和浓缩 3. 液相色谱条件 色谱柱 :Venusil ASB C18,4.6 mm 250 mm 5.0 µm (P/N:VS ); 流动相 : 乙腈 : 水 = 88:12; 流速 :1.0 ml/min; 进样量 :20 µl; 柱温 :30 ; 荧光检测器 : 发射波长 406 nm, 激发波长 384nm 图 2 10 µg/l 苯并 (a) 芘的标准样品的色谱图 图 3 实际样品的加标 (10 µg/l) 回收率实验色谱图 活化 :5 ml 二氯甲烷,5 ml 正己烷 ; 上样 : 将待净化液过柱, 用 2 ml 正己烷润洗样品瓶, 也上样到柱上 ; 淋洗 :10 ml 正己烷 ; 洗脱 :5 ml 二氯甲烷, 收集于 20 ml 玻璃瓶 样品编号 1# 2# 表 1 油中苯并芘的回收率 10 µg/l 5 µg/l 96.60% 84.10% 97.10% 86.50% 1 µg/l 92.90% 82.50% 173

180 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Venusil ASB C mm 4.6 mm,5 µm,1 支 VS 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS Cleanert BAP-3 苯并芘专用柱 500mg/6 ml,30 支 /pk BAP5006 Cleanert Silica 500mg/6 ml,30 支 /pk SI ml 样品瓶 螺纹棕色样品瓶,100/pk ml 样品瓶盖 15mm 黑色实心盖 ; 红色丁基 / 灰色 PTFE Shore A; 1.6mm,100/pk 20mL 透明螺口瓶 mm,100/pk AV mL 透明螺口瓶盖 3mm,100/pk AV ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 白色 PTFE 隔垫 9*1mm,100/pk AV2100-A 100mL 内插管 底部 15mm,100/pk (P/N:AV 和 P/N: AV7920-0) PTFE 针式过滤器 单膜,13 mm,0.22 μm,200 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 174 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

181 (GB ) 酒中氨基甲酸乙酯含量检测 (GC-MS 法 ) 应用编号 :MF00013 方法一 GC/MS 法参照 GB 摘要 : 本文参照食品安全国家标准方法 G B 食品中氨基甲酸乙酯的测定, 进行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的测定 采用商品化 Cleanert EC 氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱 ( 碱性硅藻土 ) 进行样品前处理,GC/MS 法测定, 结果表明氨基甲酸乙酯检出限为 2.0 µg/kg, 定量限为 5.0 µg/kg ( 取样 2.00g), 回收率在 98.3%~ 104.5%; 白酒样品的日间精密度测试,RSD < 3% 方法简单, 产品稳定, 结果准确灵敏, 完全满足分析检测的要求 氨基甲酸乙酯 (Ethyl Carbamate, EC), 是一种致癌物, 可以引起肺肿瘤 淋巴癌 肝癌 皮肤癌等 它是发酵食物和酒精饮品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物 2007 年, 世界卫生组织的国际癌症研究机构 (IARC) 正式将氨基甲酸乙酯 (Ethyl Carbamate) 归为 2A 类致癌物 因此对相关食品中进行氨基甲酸乙酯的检测和监测是非常必要的 1. 标准溶液配制 1.0 mg/ml D5- 氨基甲酸乙酯贮备液 : 准确称取 10.0 mg D5- 氨基甲酸乙酯标准品, 用甲醇定容至 10 ml 2.0 µg/ml D5- 氨基甲酸乙酯使用液 : 准确吸取 1.0 mg/ml D5- 氨基甲酸乙酯标准贮备液 0., 用甲醇定容至 50 ml 1.0 mg/ml 氨基甲酸乙酯贮备液 : 准确称取 g 氨基甲酸乙酯标准品, 用甲醇定容至 50 ml 分别准确吸取一定量氨基甲酸乙酯标准液, 加 100 µl 2.0 µg/ml 的 D5- 氨基甲酸乙酯溶液, 用甲醇定容至 1.0 ml, 得到 ng/ml 的标准使用液 ( 内含 ng/ml D5- 氨基甲酸乙酯 ) 固相萃取柱 :Cleanert EC 氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱 ( 碱性硅藻土 ) 气相色谱柱 :DA-INNOWAX 柱 刻度试管中, 在室温下用氮气缓缓吹至 0.5 ml 左右, 用甲醇定容至 1.0 ml 制成测定液供 GC/MS 分析, 同时做空白 3. GC-MS 操作条件 色谱柱 :DA-INNOWAX 柱,30 m 0.25 mm 0.25 µm; 进样口温度 :220 ; 柱温 : 初温 50, 保持 1 min, 然后以 8 / min 升至 180, 然后以 15 / min 升至 210 保持 5 min; 载气 : 氦气, 纯度 % 流速 :/min; 电离方式 :EI 源 离子源温度 :230 ; 进样方式 : 不分流进样 ; 样量 :1-2 µl; 氨基甲酸乙酯选择监测离子 (m/z): ; 定量离子 62; D5- 氨基甲酸乙酯选择监测离子 (m/z):64 76; 定量离子 64; 4. 实验结果 图 1 氨基甲酸乙酯及内标总离子图 2. 样品处理 准确量取 2.00 ml 酒样, 加 100 µl 2.0 µg/ ml D5- 氨基甲酸乙酯内标使用液 氯化钠 0.3 g( 白酒 酱油不加 ), 超声溶解 混匀, 然后加样到氨基甲酸乙酯上, 抽真空, 让试样慢慢渗入到 Cleanert EC 氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱中, 静置约 10 min, 先用 10 ml 正己烷淋洗除杂, 然后用 10 ml 5% 乙酸乙酯 / 乙醚溶液以 /min 流速洗脱并收集于 10 ml 具塞 图 2 氨基甲酸乙酯质谱图 175

182 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 图 3 内标 D5- 氨基甲酸乙酯质谱图 图 4 标准曲线 4.1 加标回收率及精密度 表 1 白酒样品加标的回收率及精密度 序号 白酒样品 (mg/l) 加标量 (mg/l) 测定浓度 (mg/l) 回收量 (mg/l) 回收率 (%) 平均回收率 (%) RSD(%) 2.51 表 2 白酒样品日间精密度 测定数据 (mg/l) 平均值 注 : 相同的样品, 每天测定 2 次, 连续 7 天内测定数据 结论 4.2 方法检出限 当试样取 2.00 g 时, 本方法氨基甲酸乙酯检出限为 2.0 µg/kg, 定量限为 5.0 µg/kg 本文采用商品化 Cleanert EC 氨基甲酸乙酯专用固相柱 ( 碱性硅藻土 ) 前处理结合 DA-INNOWAX 柱进行白酒中氨基甲酸乙酯的测定, 结果表明氨基甲酸乙酯检出限为 2.0 µg/kg, 回收率在 98.3%~104.5%, 完全满足食品安全国家标准 GB 方法的检测要求 5. 订货信息 产品名称 Cleanert EC ( 氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱 ) DA-INNOWAX 柱 Qudura 卓睿全自动固相萃取仪 1.5 ml 样品瓶 La-Pha-Pack 样品瓶 盖 垫, 蓝色中心孔盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 垫片 PTFE 滤膜 规格包装 20 支 / 包 30 m 0.25 mm 0.25 µm 4 通道, 可连续处理 24 个样品 1.5 ml 1.0 mm 0.22 µm, 直径 13 mm;200 个 /pk 订货号 GB SPE AS 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

183 方法二 液相方法 - 荧光检测法 1. 原理 在盐酸中, 氨基甲酸乙酯与 9- 羟基吨反应, 生成具有荧光特性的衍生物, 经色谱柱分离, 荧光检测器检测, 外标法定量 4. 色谱条件 色谱柱 :Venusil MP C18,4.6 mm 250 mm,5 µm (P/N:VA ) 流速 :0.8 ml/min 柱温 :30 激发波长 :233 nm 发射波长 :600 nm 流动相 :A:0.02M 乙酸钠 (ph 为 7.2), B: 乙腈, 梯度程序如下 时间 (min) A% B% 量取 0.02 mol/l 的 9- 羟基吨 500 µl 添加到 酒精度调整至 40% 的样品或标样中, 然后加入 100 µl 的 1.5mol/L HCl 中, 混匀使反应完全, 放暗处衍生至少 60min, 过 0.45μm 滤膜, 待测 注意事项 : 1) 衍生试剂配置完成后, 应在 4 避光保存 ( 有效期 1 个月 ) 2) 在加样时, 尽量缩短操作时间, 避免衍生试剂见光时间过长分解 3) 该衍生反应需要在暗处进行 4) 衍生时间不得少于 30min 5) 流动相 ph 值要调整准确 5. 订货信息 产品名称 Cleanert EC ( 氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱 ) Venusil MP C18 色谱柱 Qudura 卓睿全自动固相萃取仪 1.5 ml 样品瓶 La-Pha-Pack 样品瓶 盖 垫, 蓝色中心孔盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 垫片 PTFE 滤膜 规格包装 20 支 / 包 4.6 mm 250 mm,5 μm 4 通道, 可连续处理 24 个样品 1.5 ml 1.0 mm 0.22 µm, 直径 13 mm;200 个 /pk 订货号 GB VA SPE AS

184 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 食品中亚硝酸盐的测定离子色谱法 应用编号 :CU1008 关于食品中亚硝酸盐的测定法, 离子色谱法以其方便准确的优点正逐渐取代传统重氮化偶合分光光度法 在样品的前处理过程中, 提取水溶液中颗粒物 有机物和 Cl - 等杂质的干扰 需要用 Cleanert IC-RP 柱除掉有机物, 防止污染离子色谱柱 ;Cleanert IC-Ag 和 Na 柱串联使用除掉 Cl -, 避免影响 NO 3 - 的峰形 而在此之前需要先将颗粒物通过水系的 MCM 针式过 滤器去除 1. 试样预处理 1.1 新鲜蔬菜 水果 : 将试样用去离子水洗净, 晾干后, 取可食部分切碎混匀 将切碎的样品用四分法取适量, 用食物粉碎机制成匀浆备用 如需加水应记录加水量 1.2 肉类 蛋 水产及其制品 : 用四分法取适量或取全部, 用食物粉碎机制成匀浆备用 1.3 乳粉 豆奶粉 婴儿配方奶粉等固态乳制品 ( 不包括干酪 ) : 将试样装入能够容纳 2 倍试样体积的带盖容器中, 通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直到使试样均一化 1.4 发酵乳 乳 炼乳及其他液体乳制品 : 通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀 1.5 干酪 : 取适量的样品研磨成均匀的泥浆状 为避免水分损失, 研磨过程中应避免产生过多的热量 2.3 乳 : 称取试样 10 g ( 精确至 0.01 g), 置于 100 ml 容量瓶中, 加水 80 ml, 摇匀, 超声 30 min, 加入 3 % 乙酸溶液 2 ml, 于 4 放置 20 min, 取出放置至室温, 加水稀释至刻度 溶液经滤纸过滤, 取上清液备用 2.4 乳粉 : 称取试样 2.5 g ( 精确至 0.01 g), 置于 100 ml 容量瓶中, 加水 80 ml, 摇匀, 超声 30 min, 加入 3 % 乙酸溶液 2 ml, 于 4 放置 20 min, 取出放置至室温, 加水稀释至刻度 溶液经滤纸过滤, 取上清液备用 2.5 取上述备用的上清液约 15 ml, 通过 0.22 µm 水性滤膜针头滤器 C18 柱, 弃去前面 3 ml ( 如果氯离子大于 100 mg/l, 则需要依次通过针头滤器 C18 柱 Ag 柱和 Na 柱, 弃去前面 7 ml ), 收集后面洗脱液待测 固相萃取柱使用前需进行活化, 如使用 Cleanert IC-RP 柱 (1.0 ml) Cleanert IC-Ag 柱 (1.0 ml) 和 Cleanert IC-Na 柱 (1.0 ml), 其活化过程为 :Cleanert IC-RP 柱 (1.0 ml) 使用前依次用 10 ml 甲醇 15 ml 水通过, 静置活化 30 min Cleanert IC-Ag 柱 (1.0 ml) 和 Cleanert IC-Na 柱 (1.0 ml) 用 10 ml 水通过, 静置活化 30 min 3. 实验结果 2. 提取 2.1 水果 蔬菜 鱼类 肉类 蛋类及其制品等 : 称取试样匀浆 5 g ( 精确至 0.01 g, 可适当调整试样的取样量, 以下相同 ), 以 80 ml 水洗入 100 ml 容量瓶中, 超声提取 30 min, 每隔 5 min 振摇一次, 保持固相完全分散 于 75 水浴中放置 5 min, 取出放置至室温, 加水稀释至刻度 溶液经滤纸过滤后, 取部分溶液于 r/min 离心 15 min, 上清液备用 2.2 腌鱼类 腌肉类及其它腌制品 : 称取试样匀浆 2 g ( 精确至 0.01 g), 以 80 ml 水洗入 100 ml 容量瓶中, 超声提取 30 min, 每 5 min 振摇一次, 保持固相完全分散 于 75 水浴中放置 5 min, 取出放置至室温, 加水稀释至刻度 溶液经滤纸过滤后, 取部分溶液于 r/min 离心 15 min, 上清液备用 处理前的样品 经 Cleanert IC-Ag 柱和 IC-Na 柱处理后的样品 178 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

185 4. 订货信息 产品名称 Cleanert IC - RP 固相萃取柱 Cleanert IC - Ag 固相萃取柱 Cleanert IC - Na 固相萃取柱针式过滤器 (MCM) 一次性无针头注射器 1.5mL 样品瓶 1.5mL 样品瓶盖 规格包装 1cc,50/pk 1cc,50/pk 1cc,50/pk 0.22 µm, 直径 13 mm, 200/pk 5 ml, 100/pk 短螺纹透明带书写 mm, 100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫, 45.Shore A 1.0 mm,100/pk 订货号 IC-RP10 IC-Ag10 IC-Na10 AS ZSQ-5ML 注 : 由于 Cl - 和硝酸根 亚硝酸根离子分离度较大 一般对于 Cl - 含量不高的样品, 不建议使用前处理柱 因为 Cleanert IC - Ag 柱是优先去除 Cl -, 但是当 Cl - 含量不高时, 会有剩余的 Ag + 离子会吸附亚硝酸根离子, 导致其回收率偏低 179

186 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 第六部分 营养成分 180

187 (GB ) 婴幼儿乳品中葡萄糖 蔗糖 乳糖的测定 应用编号 :AF 执行标准 GB 食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中乳糖 蔗糖的测定 2. 色谱条件 3. 注意事项 样品前处理过程中可用温水超声样品, 使葡萄糖 蔗糖 乳糖更好的溶于水中 建议用较高浓度的亚铁氰化钾和乙酸锌去除奶粉中的蛋白质, 用固相萃取小柱除去样品中的脂肪等杂质 色谱柱 :Venusil XBP NH 2, mm,5 μm; 流动相 : 乙腈 : 水 =70:30 流速 :/min; 柱温 :35 ; 进样量 :10 μl 示差折光检测器条件 : 温度 33~37 4. 订货信息 产品名称 Venusil XBP NH 2 规格包装 mm,5 μm 订货号 VN

188 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 婴幼儿配方奶粉中维生素 B1 的测定 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取 3 g ~ 5 g 固体试样或者 10 g ~ 20 g 液体试样于 100 ml 锥形瓶中 ( 带有软质塞子 ), 加 60 ml 0.1 mol/l 盐酸溶液, 充分摇匀, 塞上软质塞子, 高压灭菌锅中 121 保持 30 min 水解结束待冷却至 40 取出, 轻摇数次, 用 2.0 mol/l 乙酸钠溶液调节 ph 至 4.0 左右, 加入 2 ml( 可根据酶活力不同适当调整用量 ) 混合酶溶液, 摇匀后, 置于培养箱中 37 过夜 ( 约 16 h), 将酶解液全部转移至 100 ml 容量瓶中, 用水定容至刻度, 摇匀, 离心或者过滤, 取上清液备用 图 1 维生素 B 1 标准溶液 1.2 样品衍生化准确移取上述上清液或者滤液 2 ml 于 10 ml 试管中, 加入 碱性铁氰化钾溶液, 涡旋混匀后, 准确加入 2 ml 正丁醇, 再次涡旋混匀 1.5 min 后静置约 10 min 或者离心, 待充分分层后, 吸取正丁醇相 ( 上层 ) 经 0.45 µm 微孔滤膜过滤, 取滤液于 2 ml 棕色进样瓶中, 待检测 若样品中维生素 B1 浓度超出线性范围的最高浓度值, 应取上清液稀释适宜倍数后, 重新衍生后进样 2. 液相条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(2), 5 µm, mm,100 Å 流动相 :0.05 mol/l 乙酸钠溶液 : 甲醇 = 65:35 荧光检测器检测波长 : 激发波长 375 nm, 发射波长 435 nm 流速 :1.0 ml/min; 进样量 :10 μl 3. 实验结果 经图 1 图 2 可知, 采用 Venusil XBP C18(2) 色谱柱检测婴幼儿配方奶粉中的维生素 B1, 峰形良好, 保留时间稳定, 能够满足实验要求 4. 结论 本实验依据 GB 第一法, 用 Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å, mm) 检测婴幼儿配方奶粉中的维生素 B 1, 并结合液相色谱 - 荧光检测器对样品进行了检测, 结果维生素 B 1 保留时间稳定, 峰形良好, 说明 Venusil XBP C18(2)( 5 µm, 100 Å, mm) 能够用于婴幼儿配方奶粉中维生素 B 1 的检测 5. 注意事项 图 2 婴幼儿配方奶粉中的维生素 B 1 按照国标法进行样品前处理时回收率较低, 可采用先热超声提取, 再经过酸沉淀蛋白后直接衍生化的方法加以改善 热超声时要注意温度的控制, 以防止维生素 B 1 遭到破坏 因维生素 B 1 为强极性化合物实验中应注意流动相比例的确定, 且流动相的 ph 对出峰时间影响较大, 因此在每次开始实验前, 要调节流动相 ph 值到相同的值 182 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

189 6. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Venusil XBP C18(2) mm, 5 µm, 100 Å,1 支 VX 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm,100/pk 微孔滤膜 尼龙,50 mm,0.45 µm,100 片 AM

190 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 婴幼儿配方奶粉中维生素 B2 的测定 应用编号 :AF 样品前处理 称取 2 ~ 10 g 混匀后的试样 ( 试样中的维生素 B2 的含量大于 5 µg) 于 100 ml 具塞锥形瓶中, 加入 60 ml 的 0.1 mol/l 盐酸溶液, 充分摇匀, 塞好瓶塞 将锥形瓶放入高压灭菌锅内, 在 121 下保持 30 min, 冷却至室温后取出 用 1 mol/l 氢氧化钠溶液调节 ph 至 6.0 ~ 6.5, 加入 2 ml 混合酶溶液, 摇匀后置于 37 培养箱或者恒温水浴锅中过夜酶解 将酶解液转移至 100 ml 容量瓶中, 加水定容至刻度, 用滤纸过滤或离心, 取滤液或上清液, 过 0.45 µm 水相滤膜作为待测液 2. 液相条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(2), 5 µm, mm,100 Å 流动相 :0.05 mol/l 乙酸钠溶液 : 甲醇 = 65:35 荧光检测器检测波长 : 激发波长 462 nm, 发射波长 522 nm 流速 :1.0 ml/min; 进样量 :10 µl 3. 实验结果 经图 1 图 2 可知, 采用 Venusil XBP C18(2) 色谱柱检测婴幼儿配方奶粉中的维生素 B 2, 峰形良好, 保留时间稳定, 能够满足实验要求 4. 结论 本实验依据 GB 第一法, 用 Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å, mm) 检测婴幼儿配方奶粉中的维生素 B 2, 并结合液相色谱 - 荧光检测器对样品进行了检测, 结果维生素 B2 保留时间稳定, 峰形良好, 而且试样中杂质与维生素 B2 分离度良好, 说明 Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å, mm) 色谱柱能够用于婴幼儿配方奶粉中维生素 B2 的检测 5. 注意事项 可以在避光的条件下, 用直接酸解法除去样品中的蛋白质 这种方法操作比较简单, 耗时短, 成本也比较低 6. 订货信息 图 2 婴幼儿配方奶粉中的维生素 B 2 产品名称规格包装订货号 图 1 维生素 B 2 标准溶液 Venusil XBP C18(2) mm, 5 µm, 100 Å,1 支 VX 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 µm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 Shore A; 1.0 mm,100/pk 微孔滤膜 水系,50 mm,0.45 µm,100 片 AM 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

191 (GB ) 婴幼儿配方奶粉中维生素 B6 的测定 1. 样品制备 称取混合均匀的固体试样约 5 g 于 150 ml 锥形瓶中, 加入约 25 ml 45 ~ 50 的水, 混匀 静置 5 min ~ 10 min, 冷却至室温 待用 应用编号 :AF 待测液制备 用盐酸溶液调节上述待用液的 ph 至 1.7±0.1, 放置约 1 min 再用氢氧化钠溶液调节试样溶液的 ph 至 4.5±0.1 把上述锥形瓶放入超声振荡器中, 超声振荡约 10 min, 将试样溶液转移至 50 ml 容量瓶中, 用水冲洗锥形瓶, 洗液合并于 50 ml 容量瓶中, 用水定容至 50 ml 领取 50 ml 锥形瓶, 上面放入漏斗和滤纸, 把定容后的试样溶液倒入其中, 自然过滤 滤液经 0.45 µm 微孔滤膜过滤, 转移 滤液至样品瓶, 待检测 图 2 婴幼儿配方奶粉中的维生素 B 6 3. 液相条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(2), 5 µm, mm,100 Å; 保护柱 :C18 5 µm, mm; 流动相 : 甲醇 50 ml, 辛烷磺酸钠 2.0 g, 三乙胺 2.5 ml, 水定容至 1000 ml, 冰乙酸调 ph 为 3.0 ± 0.1; 荧光检测器检测波长 : 激发波长 293 nm, 发射波长 395 nm; 流速 :1.0 ml/min; 进样量 :10 µl 4. 实验结果 5. 订货信息 图 3 婴幼儿配方奶粉中的维生素 B 6 产品名称 规格包装 订货号 Venusil XBP C18(2) mm, 5 µm, 100 Å,1 支 VX 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 µm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 Shore A; 1.0 mm,100/pk 微孔滤膜 尼龙,50 mm,0.45 µm,100 片 AM 图 1 维生素 B 6 标准溶液 185

192 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 婴幼儿配方奶粉中牛磺酸的测定 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 称取 5 ~ 40 g 试样于锥形瓶中, 加入 40 温水 20 ml, 充分混匀, 超声提取 10 min, 冷却到室温 加 沉淀剂 1, 涡旋混合, 沉淀剂 2, 涡旋混合, 转入 100 ml 容量瓶中, 用水定容至刻度, 充分混匀, 样液于 5000 r/min 离心 10 min, 取上清液备用 上清液在 4 暗处保存放置 24 h 内稳定 图 2 婴幼儿配方奶粉中的牛磺酸 1.2 样品衍生化准确吸取 上述上清液到 10 ml 具塞玻璃试管中, 加入 碳酸铵缓冲液, 丹磺酰氯溶液, 充分混合, 室温避光衍生反应 (1 h 后需摇晃 1 次 ), 加入 0. 盐酸甲胺溶液涡旋混合, 以终止反应, 避光静置至沉淀完全 取上清液经 0.45 µm 微孔滤膜过滤, 取滤液备用 衍生物在 4 下可避光保存 48 h 2. 液相条件 液相色谱柱 :Venusil XBP C18(2) 5 µm, mm,100 Å; 流动相 :10 mm 乙酸钠缓冲溶液 (ph 为 4.2): 乙腈 =70:30(V/V); 波长 :254 nm; 流速 :1.0 ml/min; 进样量 :20 µl 3. 实验结果 经图 1 图 2 可知, 采用 Venusil XBP C18(2) 色谱柱检测婴幼儿配方奶粉中的牛磺酸, 峰形良好, 保留时间稳定, 且与杂质的分离度良好, 能够满足检测要求 4. 结论 本实验依据 GB 第二法, 用 Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å, mm) 检测婴幼儿配方奶粉中的牛磺酸, 并结合液相色谱 - 紫外检测器对样品进行了检测, 结果牛磺酸保留时间稳定, 峰形良好, 且与样品中杂质分离效果较好, 说明 Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å, mm) 能够用于婴幼儿配方奶粉中牛磺酸的检测 5. 注意事项 牛磺酸试液及标准工作液在衍生过程中要注意避光 流速对分离效果及保留时间影响较大, 具体的实验中应注意对流速的选择 6. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Venusil XBP C18(2) mm, 5 µm, 100 Å,1 支 VX 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 µm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 Shore A; 1.0 mm,100/pk 微孔滤膜 尼龙,50 mm,0.45 µm,100 片 AM 图 1 牛磺酸标准品 186 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

193 (GB ) 婴幼儿乳品中反式脂肪酸的测定 应用编号 :AF 执行标准 标准品 GB 食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定 2. 色谱条件 气相色谱柱 : 氰丙基芳基聚硅氧烷色谱柱, 100 m 0.25 mm,0.2 μm; 进样口温度 :250 ; 检测器温度 :300 ; 分流比 :10:1; 进样量 :1.0 μl; 升温程序 : 升温速率 温度 持续时间 ( /min) ( ) (min) 注意事项 样品 1- 婴幼儿配方奶粉 反式脂肪酸标准品 奶粉中的反式脂肪酸 样品处理过程中提取脂肪时一定要充分, 这一过程对结果影响较大 合理选择甲酯化方法, 不同的甲酯化方法也会影响实验结果的准确性 4. 订货信息 产品名称氰丙基芳基聚硅氧烷气相色谱柱 规格包装 mm, 0.2 μm 订货号 7025-A

194 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB/T GB/T GB/T ) 饲料中 18 种氨基酸的测定 ( 柱前衍生 HPLC 法 ) 应用编号 :AF10023 氨基酸对动物的生长 神经系统的发育及动物体内营养物质的正常代谢都有重要的作用, 而且蛋白质是动物生长必需的营养物质, 是评价饲料营养成分的一种重要物质, 而氨基酸是构成蛋白质的基本单位, 所以氨基酸的种类和含量也就是评价饲料质量的根本依据, 从而准确检测氨基酸的含量和种类具有重要意义 柱后衍生的方法, 虽然准确性高, 但是耗时长 灵敏度低, 所以本文采用柱前衍生的方法以缩短分析时间, 增加灵敏度 同时该方法得到的氨基酸衍生物在 -20 可保存数月, 克服了柱前衍生法衍生物不稳定的缺点, 另外该方法准确性高, 用标准品做未知样品进行检测, 检测的含量与标准品的标示值非常接近 1. 样品前处理 酸水解法 : 准确称取一定量的样品, 使样品氨基酸总量在 50~75 mg 范围内, 置于 20~30 ml 安瓿瓶中, 加入 10 ml 含 0.1% 苯酚的 6 mol/l 盐酸, 振摇使样品溶解或者是样品均匀分散在溶液中, 将安瓿瓶置于 -20 冰箱中冷冻 3~5 分钟, 充氮后用喷灯熔封, 然后置于 110±1 烘箱中水解 24 小时, 取出冷却, 取水溶液, 置于浓缩管中用浓缩仪浓缩至干, 加入 的 0.1 mol/l 稀盐酸溶解, 用 0.45 µm 滤器过滤后, 取清液贮存于冰箱中, 供衍生使用 2. 衍生方法 准确量取水解后溶液及氨基酸标准品 200 µl, 分别置于 1.5 ml 离心管中, 往每支离心管中准确加入正亮氨酸内标 50 µl, 然后分别加入三乙胺乙腈溶液 100 µl 和异硫氰酸苯酯乙腈溶液 100 µl, 摇匀室温静置衍生 1 小时 衍生结束后分别加入 400 µl 正己烷, 振摇并静置 10 min, 取下层溶液 200 µl 并用水稀释到, 混合均匀后用 0.45 µm 针式过滤器过滤即可 3. 检测方法 3.1 溶液配制流动相 A: 称取 15.2 g 无水乙酸钠, 加水 1850 ml, 溶解后用冰醋酸调 ph 值到 6.5, 然后加乙腈溶液 140 ml, 混合均匀并用 0.45 µm 滤器过滤流动相 B:80% 乙腈水溶液 3.2 高效液相检测条件仪器 :LC-10F 高效液相色谱仪 色谱柱 :Venusil AA 氨基酸分析专用柱 mm,5 µm,100 Å 流速 :/min; 进样量 :10 µl 检测波长 :254 nm; 柱温 :40 检测梯度如表 1 时间 实验结果与讨论 表 1 流动相梯度变化表 流动相 A 液相条件的建立样品中氨基酸含量比较低, 而且直接检测溶剂效应较大, 经过衍生后直接检测样品中的氨基酸不能完全分离, 本文通过用水稀释衍生溶液的方法降低检测中的溶剂效应, 并且经过优化流动相梯度使 18 种氨基酸得到良好的分离 但是实际检测过程中相同的检测条件下, 仪器不同, 分离效果差别较大, 有的甚至都完全分不开, 为此本文还开发了一种基础检测条件, 可以根据仪器的自身特点, 稍加调整流动相的比例即可使 18 种氨基酸得到较好的分离 基础检测条件如表 2 所示 时间 表 2 流动相基础梯度变化表 流动相 A 流动相 B 流动相 B 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

195 4.2 检测方法的稳定性 线性及准确性氨基酸标准品按照 2 方法衍生后, 相同的条件下连续重复进样 6 次, 计算相对标准偏差, 结果如表 3 所示 由结果可知该方法比较稳定, 可以用来检测氨基酸样品, 其实验谱图如图 1 所示 根据仪器对各个物质的响应情况, 将氨基酸标准溶液分别稀释成 2.5 µmol/ml ( 胱氨酸为 1.25 µmol/ml) 1.25 µmol/ ml ( 胱氨酸为 µmol/ml) 0.5 µmol/ml ( 胱氨酸为 0.25 µmol/ml) 0.25 µmol/ml ( 胱氨酸为 µmol/ml) µmol/ml ( 胱氨酸为 µmol/ml) 5 个浓度, 然后按照 2 的衍生方法同时衍生处理, 样品经稀释过滤后在相同的实验条件下进样, 依据进样浓度 X (µmol/ml) 为横坐标, 峰面积 Y 为纵坐标进行线性回归, 根据各个物质峰高 噪音, 遵循 S/ N=3 计算出最低检出限, 回归方程及检出限见表 3 可见, 在选定的液相色谱条件下氨基酸标准溶液的响应与浓度呈良好的线性关系 表 3 氨基酸的线性回归方程 标准偏差和检出限 名称 线性回归方程 相关系数 r2 峰面积 RSD 6 时间 RSD 6 检出限 (µmol/ml) 门冬氨酸 Y=405.5x % 0.06% 谷氨酸 Y=401.1x % 0.14% 丝氨酸 Y=503.2x % 0.10% 甘氨酸 Y=689.0x % 0.09% 组氨酸 Y=581.2x % 0.10% 精氨酸 Y=542.0x % 0.10% 苏氨酸 Y=441.8x % 0.07% 丙氨酸 Y=753.6x % 0.07% 脯氨酸 Y=563.9x % 0.05% 酪氨酸 Y=0.0016x % 0.04% 缬氨酸 Y=0.0015x % 0.02% 甲硫氨酸 Y= % 0.02% 胱氨酸 Y=9.344x % 0.03% 异亮氨酸 Y=0.0014x % 0.02% 亮氨酸 Y=0.0014x % 0.01% 正亮氨酸 % 0.01% - 苯丙氨酸 Y=0.0013x % 0.01% 赖氨酸 Y=0.0008x % 0.01% 为了验证建立方法的准确性, 本文用 Sigma 氨基酸标准品为样品, 以博纳艾杰尔科技的标准品为标准品通过相同的方法衍生和检测得出检测值与标示值之间的偏差, 除胱氨酸外, 偏差均小于 3%, 接近标准品的标示值, 证明该方法准确性高, 检测效果稳定 实验结果如表 4 图 1 氨基酸标准偏差试验色谱图 因为半胱氨酸在碱性环境下能够转化成胱氨酸, 所以经碱水解后胱氨酸的含量不稳定, 此外有时两个半胱氨酸残基会发生二硫键交联, 经异硫氰酸苯酯衍生后的胱氨酸也不稳定, 非常容易分解, 所以胱氨酸的相关系数和偏差都比较大 189

196 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 表 4 检测 Sigma 标准品的相对误差 氨基酸标准溶液中文名门冬氨酸谷氨酸丝氨酸甘氨酸组氨酸精氨酸苏氨酸丙氨酸脯氨酸酪氨酸缬氨酸甲硫氨酸胱氨酸异亮氨酸亮氨酸正亮氨酸苯丙氨酸赖氨酸 Sigma ( 稀释 5 倍 ) 分析包 ( 稀释 5 倍 ) Area Area Area Area Sigma 标示浓度 ( 原液 ) µmol/ml 分析包标示浓度 ( 原液 ) µmol/ml Sigma 测得浓度 ( 稀释 5 倍 ) µmol/ml Sigma 测得浓度与标示浓度间的误差 (%) 样品检测结果按照上述方法检测处理后的饲料样品可得色谱图如图 2 图 3, 通过单点校正法可以得出样品 1 和样品 2 中含有标准品中的 18 种氨基酸 样品中的 18 种氨基酸均能得到良好的分离, 这说明在有基质干扰的情况下本文建立的这种方法同样适用, 而且样品连续进样重复性非常好, 未出现样品变质或者峰形变差的现象, 证明本文建立的方法在有基质干扰的情况下也同样克服了衍生氨基酸容易分解的问题 图 2 实际样品 1 色谱图 4.4 实验结论按照上述实验条件, 可以准确检测饲料样品中 18 种氨基酸, 同时检测的灵敏度及线性都能满足检测的要求, 而且本方法准确性高, 与样品中含有氨基酸的真值偏差非常小, 所以该方法可以准确的检测饲料样品中的氨基酸 图 3 实际样品 2 色谱图 190 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

197 5. 订货信息 产品名称 LC-10F 高效液相色谱仪 CC-100 分析型色谱柱温箱 Venusil AA 氨基酸分析方法包色氨酸 (Trp) 针式过滤器 (Nylon) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 10 ml/min, 梯度系统, nm 双波长检测器温控范围 :5-70 ; 可安装 1-2 支 300 mm 色谱柱包含以下产品 ( 不含色氨酸 ) Venusil AA 氨基酸分析专用色谱柱 ( mm,5 µm) 异硫氰酸苯酯 (PITC),10 25 µl 17 种氨基酸标准溶液,2 正亮氨酸 (Nle),1 100 mg ml mg 0.22 µm, 直径 13 mm,200/pk 5 ml,100/pk 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A,1.0 mm,100/pk 订货号 FL-LC010GS CC-100 AA K AA AA-D AA-S AA-I AA-B AA-T AS ZSQ-5ML

198 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 婴幼儿乳品中碘的测定离子色谱法 应用编号 :AF 样品处理 称取 g 奶粉样品于 10 ml 比色管中, 加入 5 ml 50% 乙腈水溶液摇匀, 盖上试管塞, 超声萃取 20 min, 过滤, 滤液用水稀释 10 倍后, 过 Cleanert IC-RP 小柱后上机 Cleanert IC- RP 小柱先淋洗 10 ml 的甲醇, 再淋洗 10 ml 的超纯水进行活化, 活化后可上样, 通过小柱的样品弃前 3 ml 样液后开始接取样品, 备用 2. 分析条件 离子色谱仪电化学检测器条件离子色谱柱参数 : 阴离子保护柱 IonPac AG 16 (50 mm 2 mm) 或相当者 ; 阴离子分析柱 IonPac AS 16 (250 mm 2 mm) 或相当者淋洗液 :40 mmol/l 氢氧化钾溶液等度洗脱流速 :0.25 ml/min; 电化学检测器 : 银电极进样量 :100 µl; 碘的检测波形见表 1: Waveform Potential 实验结果 3.1 方法检出限 表 1 电化学检测波形 GainRegion Off on Off Off Off Off Off Ramp on on on on on on on Intergratation Off on Off Off Off Off Off 图 1 是浓度为 0.25 µg/l 进样量 100 µl 的碘离子, 根据信噪比的关系最终确定仪器的检出限为 0.10 µg/l 3.2 精密度和加标回收对奶粉样品进行了溶剂提取法的加标回收实验 为了考证碘酸根和碘离子各自的回收率情况, 分别在样品中加入 3 个梯度的单标溶液, 由下表可以看出无论是碘酸根还是碘离子, 加标回收率均在 95.6%-105.3% 之间, 精密度在 1.14%-2.16% 之间, 完全满足实验的要求 由表 2 也可以看出, 无论是添加碘酸根还是碘离子, 最终碘酸根也转化为碘离子的形式而能被电化学检测器所检测到, 这可能是因为食品中的有机基体成分在样品处理的过程中, 大量的还原性物质 ( 主要是碳 ) 将碘酸根还原为碘离子 图 2 为奶粉样品的离子色谱分离图 添加水平 µg/l 样品名称平均回收率 % n=6 奶粉加入碘酸根奶粉加入碘离子 表 2 溶剂提取法加标回收和精密度实验 10 µg/l 50 µg/l 500 µg/l 精密度 % 平均回收率 % n= 精密度 % 2.16 平均回收率 % n= 图 2 奶粉水提取法离子色谱安培检测器色谱图 结论采用水提取, 乙腈沉淀蛋白,Cleanert IC-RP 固相萃取柱净化, 离子色谱 AS16 色谱柱进行分离, 离子色谱电导检测器进行检测, 最终检测灵敏度 回收率和精密度均能满足实验的要求, 该方法适用于奶粉中碘的测定 1.64 精密度 % 订货指南 产品名称 规格包装 订货号 Cleanert IC-RP 固相萃取柱 1cc,50/pk IC-RP ml 样品瓶 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 图 1 浓度为 0.25 µg/l 的碘离子在离子色谱安培检测器上的色谱分离图 1.5 ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45. Shore A 1.0 mm,100/pk 乙腈 4 4 L/ 箱 AH 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

199 (GB ) 天然辣椒素与二氢辣椒素的测定 应用编号 :AF 样品前处理 辣椒样品供试品溶液 : 取辣椒样品约 1.0 g, 精密称定, 用甲醇 - 四氢呋喃 (1:1) 混合溶剂超声溶解, 并定容至 50 ml, 经 0.45 µm 滤膜过滤, 取续滤液 5.0 ml, 加水 5.0 ml 稀释, 即得 ; 辣椒素混合标准溶液 : 分别称取天然辣椒素与二氢辣椒素标准品适量, 加甲醇溶解并稀释制成每 1.0 ml 中含 1.0 mg 的溶液, 混匀, 取适量后, 用甲醇 - 水 (1:1) 稀释制成每 1.0 ml 中含 20 µg 的溶液, 制成辣椒素混合标准溶液 2. 色谱条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(L);5 μm,150 Å, mm; 流动相 : 甲醇 : 水 =65:35 (v\v); 流速 :1.0 ml/min; 柱温 :30 ; 进样量 :20 µl; 波长 :280 nm 3. 结果 本实验采用 Venusil XBP C18(L) 色谱柱对辣椒样品中天然辣椒素及二氢辣椒素进行了测定, 由图 1 图 2 可知, 在上述色谱条件下, 待测物峰形良好 4. 结论 本实验按 GB 食品安全国家标准食品添加剂辣椒油树脂标准方法, 采用 Venusil XBP C18(L) 色谱柱对辣椒样品中天然辣椒素与二氢辣椒进行了测定 结果表明天然辣椒素峰与二氢辣椒素峰峰形良好, 分离效果满足要求 5. 订货信息 产品名称规格包装订货号 Venusil XBP C18(L) 5 μm,150 Å, mm,1 支 VX L 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 µm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 Shore A; 1.0 mm,100/pk 针式过滤器 单膜,13 mm,0.45 μm,100 个 / 包 AS T 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH230-4 四氢呋喃 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH340-4 图 1 辣椒素混合标准溶液高效液相色谱图 图 2 辣椒样品供试品溶液高效液相色谱图 193

200 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 婴幼儿奶粉中 5 种核苷酸测定 应用编号 :AP 样品前处理 5 种核苷酸混合标准溶液 : 分别称取核苷酸标准品 CMP AMP UMP 各 10 mg GMP IMP 各 5 mg( 精确至 0.1 mg), 用水溶解成并定容至 100 ml, 混匀, 即得 ; 某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液 : 称取 5.0 g 奶粉样品, 用 20 ml 热水 (50-60 ) 充分溶解试样, 冷却至室温 ; 用 10% 乙酸溶液调节 ph 至 4.1, 移至 50 ml 容量瓶中, 定容, 滤纸过滤, 所得滤液用 0.45 μm 滤膜过滤, 即得供试品溶液 2. 色谱条件 色谱柱 :Venusil AQ C18 Plus; 5 μm,150 Å, mm; 流动相 : 磷酸盐缓冲溶液 ( 称取 1.360g 磷酸二氢钾, 加 g 四丁基硫酸氢铵, 加 900 ml 水溶解, 用 0.1 mol/l 磷酸氢二钾溶液调 ph 至 3.2, 定容至 1000 ml): 甲醇 =1000:40(v/ v); 波长 :254 nm; 柱温 :25 ; 流速 :1.0 ml/min; 进样量 :10 µl 3. 结果 本实验按照 GB 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法, 使用 Venusil AQ C18 Plus 色谱柱对 5 种核苷酸混合标准溶液 婴幼儿奶粉供试品溶液进行检测, 由以下结果可知,5 种核苷酸分离度均大于 1.5, 实现完全分离 ; 对婴幼儿奶粉样品的分离效果与国标标准图谱接近 表 1 5 种核苷酸实验数据 样品名称 化合物名称 保留时间 /min 理论塔板数 分离度 拖尾因子 备注 CMP UMP 种核苷酸混标 AMP 图 1 GMP IMP CMP UMP 某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液 AMP 图 2 图 3 GMP IMP 图 1 Venusil AQ C18 Plus 色谱柱 5 种核苷酸混标高效液相色谱图 图 2 Venusil AQ C18 Plus 色谱柱婴幼儿奶粉供试品溶液高效液相色谱图 194 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

201 4. 结论 图 3 Venusil AQ C18 Plus 色谱柱婴幼儿奶粉供试品溶液高效液相色谱图 ( 纵坐标局部放大图 ) 本实验按照 GB 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法, 使用 Venusil AQ C18 Plus 色谱柱对 5 种核苷酸混合标准溶液 婴幼儿奶粉供试品溶液进行检测, 结果表明在上述实验条件下,Venusil AQ C18 Plus 色谱柱可用于婴幼儿奶粉中 5 种核苷酸的分析检测 5. 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Venusil AQ C18 Plus 5 μm,150å; mm,1 支 VAP L 保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 直联式保护柱芯 5 μm,150å;4.6 10mm,4 支 / 包 DC LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 45 Shore A; 1.0 mm,100/pk 微孔滤膜 单膜,13 mm,0.45 μm,100 个 / 包 AS T 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 195

202 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 食用油中的角鲨烯的测定气相色谱质谱法 应用编号 :RF 样品预处理 正己烷则将目标物角鲨烯洗脱下来, 达到净化的目的 称取 0.5 g 食用油, 加入 正己烷, 摇匀, 待净化 若为加标样, 则加入 角鲨烯标准溶液 ( 溶剂为正己烷 ), 将其摇匀, 待净化 2. SPE 净化过程 固相萃取柱 : Cleanert Squalene 专用柱 (2g / 12mL) 将预处理过的油样溶液上样至 Cleanert Squalene 专用柱上, 再用 5 ml 正己烷将小柱洗脱, 收集洗脱液, 将洗脱液于 40 下氮吹干 ; 加入 乙腈重定容, 涡旋 1 min, 超声 3 min, 随后 6000 r/min 离心 3 min, 转移上清液进样检测 3. 色谱条件 3.1 色谱条件色谱柱 :DA-5MS (30 m 0.25 mm 0.25 μm); 程序升温 : /min 300 (5 min); 进样量 :1 μl; 流速 :/min; 进样口温度 :300 ; 不分流进样 ; 接口温度 : 质谱条件离子源温度 :230 ; 四极杆温度 :150 ; 溶剂延迟 :5.0 min; EM 电压 :1565; 采集模式 : 全扫描 / 选择离子检测全扫描范围 :45~550 amu 选择离子检测 :69/81/136 图 1 10ppm 角鲨烯标样色谱图 图 2 油样色谱图 4. 实验结果 在上述仪器条件下, 角鲨烯色谱图见图 1~3 本次实验进行了两个油样平行试验 两个油样加标 10 ppm 角鲨烯的平行试验 试验结果发现, 油样中含有一定量的角鲨烯, 两个平行试验的结果分别为 3.28 mg/kg 3.16 mg/kg; 油样加标回收率分别为 95.7% 91.8% ( 由于食用油中含有一定量的角鲨烯, 加标回收率是在扣除了油样中角鲨烯含量之后计算得到的 ) 采用 Cleanert Squalene 专用柱可以较好吸附住油样, 而 图 3 油样加标色谱图 196 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

203 (GB/T ) 橄榄油中蜡含量的测定气相色谱法 应用编号 :PF10001 现行 GB/T 动植物油脂橄榄油中蜡含量的测定气相色谱法, 采用传统硅胶柱层析分离, 薄层色谱 (TLC) 检测油脂中极性组分 方法费时费力, 溶剂消耗量大, 且开放的溶剂体系易造成环境污染 采用博纳艾杰尔 CHEETAH MP 中压快速纯化制备色谱对现有方法进行优化, 实现了全自动在线分离 检测植物油中的蜡含量的测定, 配合商品化 FLASH 柱, 大大节约分离时间, 保证了结果的准确性和稳定性 现有 GB 方法的问题 传统柱层析, 结果不稳定, 重现性差 - 手工装柱和控制流速, 结果重现性差 分离效果验证滞后 - 柱层析分离结束后, 再依赖 TLC 验证分离效果, 操作繁琐 - 经常反复数次操作, 才能达到理想分离效果 费力费时 - 硅胶颗粒烘干 4 h, 脱活处理 >12 h - 人工装填玻璃硅胶柱 30 min - 柱平衡 :15 g 硅胶制成悬浮液, 转移至玻璃柱中自然沉降,30 ml 正己烷淋洗, 数小时 - 柱层析分离过程现场控制 60 min - 洗脱 :1 h - TLC 验证分离效果 30 min CHEETAH MP 中压快速纯化制备色谱 高度重现 稳定的自动分离 - 工业化预装柱 自动控制洗脱溶剂流速, 结果稳定可靠 - 自动收集所需洗脱馏分, 准确快捷 双波长紫外在线检测, 及时可靠 - 双波长紫外检测器, 引导馏分收集, 方便快捷 省时 - 预活化商品柱, 直接使用, 省时省力 - 上样 :20 min - 洗脱 :14 min - 在线紫外检测, 引导馏分收集, 简单快捷 CHEETAH MP 中压制备色谱 1. 样品制备 平衡 : 取 1 支 Silica Flash 柱 (20 g, 脱活硅胶,P/N: CS ) 置于中压快速纯化制备色谱 (CHEETAH M P 200,P/N:FS-9200T) 上, 以正己烷为流动相平衡 20 min, 流速为 20 ml/min, 紫外检测波长为 200 nm 上样 : 准确称量 500±20 mg 样品于 25 ml 锥形瓶中, 加入适当比例的内标物正己烷溶液 加入内标物量依据预计蜡含量, 如 : 橄榄油样品中加入 0.1 mg 十二烷醇花生酸酯, 油橄榄果渣油样品中加入 0.25 mg-0.50 mg 十二烷醇花生酸酯 加入 2 ml 正己烷, 混匀, 转移至 10 ml 注射器中, 再用 2 ml 正己烷分两次洗涤锥型瓶, 洗涤液并入注射器中, 用 0.45 μm 的膜过滤后注入 Flash 柱中 脱硅胶柱 5 min 后用流动相 B 洗脱 10 min 用梨形瓶收集 min 馏分 ; 2.2 馏分后处理及检测用旋转蒸发仪 35 下浓缩上述馏分, 直至溶剂浓缩至约近, 然后在室温下用弱氮气流除去剩余溶剂, 再加入 2 ml 正庚烷溶解超声后进行气相分析 (DA-1,15 m 0.25 mm 0.25 μm,p/n: ) 2. 色谱分离 2.1 方法设置流动相 A 为正己烷, 流动相 B 为现配置的乙醚 : 正己烷 =3:100. 流速 20 ml/min, 检测波长 200 nm 流动相 A 洗 图 1 中压色谱图 197

204 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 第七部分 真菌毒素 198 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

205 (GB ) 乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1 的测定 应用编号 :AF 执行标准 GB 食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1 的测定 2. 样品前处理 牛乳样品 : 称取 50 ml 牛乳样品, 加热到 35 ~37 ; 于 10000r/min 离心 15 min; 去除乳脂及沉淀, 取上层全部溶液用于上样检测 稀释倍数 :0.02 固体奶粉及制品 : 10 g 固体样品, 用 50 ml 50 热蒸馏水溶解混匀 ; 冷却至 20, 并定容至 100 ml; 于 r/min 离心 15 min; 去除乳脂及沉淀 ; 取上层溶液 10 ml, 用蒸馏水定容至 50 ml; 取定容后的液体, 全部用于上样检测 稀释倍数 :1 3. 操作步骤 取出免疫亲和柱, 将上方塞子取出斜剪断, 再插回亲和柱上 ;(3 ml 的免疫亲和柱去掉上方塞子, 安装上转接头, 将转接头另一端与针筒固定后使用 ) 将柱子与气控操作架上的针筒连接固定, 处理后的溶液上样 ; 去掉亲和柱下方堵头, 调节开关, 使液体以 1~2d/s 的速度流出 ; 待液体排干后, 更换新针筒, 用 10 ml 蒸馏水洗涤 1 次, 流速 2~3d/s; 待液体排干后, 更换新针筒, 上样 甲醇, 用样品瓶接洗脱液, 流速 1d/s; 洗脱后液体可用于检测 4. 注意事项 使用前, 免疫亲和柱需回至室温 (22~25 ) 每次上样前都要将上次液体完全排干 也适用于 GB 色谱条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(L);150 mm 2.1 mm,5 μm; 流动相 :A 液,0.1% 甲酸溶液 ; B 液, 乙腈 : 甲醇溶液 (1:1); 流 速 :1.0 ml/min; 柱 温 :35 ; 试液温度 :20 ; 进样量 :10 μl; 梯度洗脱 : 时间 流动相 流动相 梯度变化 (min) A% B% 曲线 注 :1 为即时变化,6 为线性变化 检测方式 : 多离子反应监测 (MRM), 详见表 1 中母离子 子离子和碰撞能量 离子源控制条件 : 6. 订货指南 7. 质控指标 项目 : 黄曲霉毒素 M 1 标准 :GB 限量 :0.5 μg/kg 电离方式电喷雾电离, 负离子毛细管电压 (kv) 3.5 锥孔电压 (V) 45 射频透镜 1 电压 (V) 12.5 射频透镜 2 电压 (V) 12.5 离子源温度 ( ) 120 锥孔反吹气流量 (L/h) 50 脱溶剂气温度 ( ) 350 脱溶剂气流量 (L/h) 500 电子倍增电压 (V) 650 产品名称规格包装 Venusil XBP C18(L) mm, 5 μm, 100 Å 黄曲霉毒素 M1 免疫 3 ml 亲和柱 订货号 VX L BAC 表 1 离子选择参数表 黄曲霉毒素 母离子 定量子离子 碰撞能量 定性子离子 碰撞能量 离子化方式 M ESI

206 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 饲料中维生素的测定 (A D3 E B1 B2 B6 B12 K3) 应用编号 :AF 一次进样同时分析维生素 A 乙酸酯 D 3 E 乙酸酯 参照方法 :GB/T GB/T GB/ T 样品 : 维生素 A 乙酸酯 D 3 E 乙酸酯对照品, 某品牌鲤鱼用 1% 复合预混料样品处理 : 按照标准第二法 甲醇提取仪器 :LC-10F 高效液相色谱仪色谱柱 :Venusil XBP C18(L),4.6 mm 150 mm,5 μm 流动相 : 甲醇 : 水 =95:5; 流速 :1.0 ml/min 柱温 :25 ; 进样量 :20 μl; 波长 (nm): 维生素 A 乙酸酯 :326; 维生素 D 3 :264; 维生素 E 乙酸酯 : 一次进样同时分析维生素 A D 3 E 样品 : 某品牌肉鸡用复合多维素样品处理 : 参照国标中第一法即皂化法, 色谱条件同上波长梯度 : 维生素 D 3 采用波长梯度一次进样可同时检测维生素 A 乙酸酯 D 3 E 乙酸酯波长梯度设置 : 时间 (min) 波长 (nm) 维生素 A 乙酸酯 维生素 A 乙酸酯 维生素 D 3 维生素 E 乙酸酯 某品牌鲤鱼用 1% 复合预混料 维生素 E 乙酸酯 时间 (min) 波长 (nm) 维生素 D 3 维生素 E 乙酸酯 维生素 A 维生素 A 乙酸酯 维生素 D 3 维生素 E 维生素 A 乙酸酯 D 3 E 乙酸酯混合标准品 维生素 A D 3 E 提取后稀释 100 倍后液相色谱图 200 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

207 mv mv mv mv mv mv 维生素 A ' 维生素 D 3 维生素 E 优异的重现性 维生素 B 1 B 2 B 6 混标 3. 维生素 B 1 B 2 B 6 参照方法 :GB/T GB/T GB/T 样品 : 维生素 B 1 B 2 B 6 标准品仪器 :LC-10F 高效液相色谱仪色谱柱 :Venusil XBP C18(L),4.6 mm 150 mm,5 μm (P/N:VX L) 流动相 : 在已装入约 700 ml 去离子水的 1000 ml 容量瓶中, 加入 50 mg EDTA,1.1 g 庚烷磺酸钠, 待全部溶解后加入 25 ml 冰乙酸 三乙胺调节该溶液 ph 3, 过 0.45 μm 滤膜 取该溶液 860 ml 与 140 ml 甲醇混合 流速 :1.0 ml/min; 柱温 :25 ; 进样量 :20 μl; 波长 (nm): 维生素 B 1 :246 ; 维生素 B 2 :267; 维生素 B 6 :280 混合维生素 B 1 B 2 B 6 : ' ' ' ' mi n 4. 维生素 B 12 参照方法 :GB/T 样 品 : 维生素 B 12 标准品 仪 器 :LC-10F 高效液相色谱仪 色谱柱 :Venusil XBP C18(L),4.6 mm 150 mm,5 μm; (P/N:VX L) 流动相 :3% 磷酸水溶液 : 乙腈 =13:35; 流 速 :1.0 ml/min; 柱 温 :25 ; 进样量 :20 μl; 波 长 :361 nm ' mi n 维生素 B 维生素 K mi n 维生素 B 1 的液相色谱图 ' 参照方法 :GB/T 样品 : 维生素 K 3 标准品仪器 :LC-10F 高效液相色谱仪色谱柱 :Venusil XBP C18(L),4.6 mm 150 mm,5 μm; (P/N:VX L) 流动相 : 甲醇 : 水 =75:25; 流速 :/min; 柱温 :25 ; 进样量 :20 μl; 波长 :251 nm mi n 维生素 B ' mi n ' 维生素 K mi n 维生素 B

208 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers ( 中国药典 ) 酸枣仁中黄曲霉毒素 B1,B2,G1,G2 的测定 ( 液相色谱荧光法 ) 应用编号 :CU1009 参考 2010 版药典附录 Ⅸ Ⅴ 黄曲霉毒素测定法 1. 混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合标准品 ( 黄曲霉毒素 B1 B2 G1 G2 标示浓度分别为 1.0 µg/ml 0.3 µg/ml 1.0 µg/ ml 0.3 µg/ml), 置 10 ml 量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 作为储备液 精密量取储备液, 置 50 ml 量瓶中, 用 70% 甲醇溶液稀释至刻度, 即得 2. 样品提取及净化 取供试品粉末约 10 g, 精密称定, 加入氯化钠 2 g, 精密加入 70% 甲醇溶液 100 ml, 超声处理 20 min, 离心 5 min ( 离心速度 8000 r/min), 精密量取上清液 10 ml, 置 50 ml 量瓶中, 用水稀释至刻度, 摇匀, 精密量取 25 ml, 通过免疫亲和柱, 流速每分钟 2-3 ml, 用水 5 ml 淋洗, 洗液弃去, 使空气进入柱子, 再用甲醇 1.4 ml 分 2 次洗脱, 收集洗脱液, 用水定容至 2 ml, 即得 分别精密吸取上述混合对照品溶液 20 µl 供试品溶液 20 µl, 注入液相色谱仪, 测定峰面积, 从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素 B1 B2 G1 G2 的量, 计算, 即得 3. 色谱条件 仪器 :LC-10F 高效液相色谱仪, 荧光检测器, 光化学柱后衍生装置 ( 德国 LC Tech) 色谱柱 :Venusil MP C mm; (P/N:VA ) 进样量 :20 µl; 柱温 :40 ; 流速 :1./min 梯度洗脱程序 : 见表 1 (B: 乙睛 ;C: 甲醇 ;D: 水 ) 表 1 梯度洗脱程序 表 2 柱回收率实验 (2 ng/ml) G2 G1 B2 标液 峰面积 回收率 (%) 平均 RSD 进样精密度实验, 见表 3 表 3 精密度实验 (n=6) n G2 G1 B 平均 RSD 1.06% 0.78% 0.76% 4.3 实验图谱 B B % Time Flow A% B% C% D% 实验结果 4.1 柱回收实验 : 取酸枣仁提取液 5 ml, 加 2 ng/ml 混标 5 ml, 用水稀释至 50 ml, 同法以 IAC 柱净化, 测定, 计算回收率, 见表 2 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载! 图 1 供试品 ( 酸枣仁 ) 加标, 对照品叠加色谱图

209 图 2 混合对照品色谱图 图 4 酸枣仁样品色谱图 图 3 供试品 ( 酸枣仁 ) 加标色谱图 图 5 精密度实验 5. 订货信息 产品名称 LC-10F 高效液相色谱仪 CC-100 分析型色谱柱温箱黄曲霉毒素总量 (B1,B2,G1,G2) 免疫亲和柱 Venusil MP C18 液相色谱柱 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 10 ml/min, 梯度系统, nm 双波长检测器温控范围 :5-70, 可安装 1-2 支 300 mm 色谱柱,25 支 /pk mm,5 µm 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 订货号 FL-LC010GS CC-100 BAC09001 VA

210 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers (GB ) 离子交换固相萃取 - HPLC 检测粮食赭曲霉毒素 A(OA) 研究 应用编号 :CU 样品处理 1.1 提取用试剂 提取液 : 含 20% 0.1 mol/l 氢氧化钾溶液 60% 甲醇水溶液 ; 淋洗液 : 含 30% 0.1 mol/l 氢氧化钾溶液 50% 乙腈水溶液 ; 洗脱液 : 甲醇 : 乙腈 : 甲酸 : 蒸馏水 =4:5:0.5: 提取 a) 玉米 : 将样品粉碎, 称取玉米粉 10 g, 加入 50 ml 氯仿, 震荡 3 ~ 5 min, 用滤纸过滤, 取滤液 10 ml 进入一个 100 ml 平底烧瓶中, 于 60 水浴中旋转蒸发至近干, 用 20 ml 石油醚溶解残渣, 加入 10 ml 提取液, 震荡 3 ~ 5 min, 分层后, 用滤纸过滤, 取下层提取液 5 ml 进行固相萃取 b) 糙米 小麦 小麦粉和大豆 : 将样品粉碎, 称取粉碎样品 l0 g, 加入 50 ml 提取液, 震荡 3 ~ 5 min, 用滤纸过滤, 取滤液 10 ml 进入一个 100 ml 平底烧瓶中, 加入 20 ml 石油醚, 震荡 3 ~ 5 min, 分层后, 用滤纸过滤, 取下层提取液 5 ml 至 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪上样管中进行固相萃取操作 2. 固相萃取净化 Cleanert PAX 固相萃取柱置于 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪中, 上样管至于对应位置, 设定操作程序如下 :5 ml 甲醇, 3 ml 提取液活化, 加样 5 ml,10 ml 淋洗液淋洗, 吹干, 最后用 5 ml 洗脱液洗脱 OA, 收集 ( 以上操作流速均为 / min) 收集液于 60 水浴中旋转蒸发至干, 用 流动相溶解残留物, 经滤器过滤后上液相色谱检测 3. 色谱条件 色谱柱 :Venusil ASB C18,4.6 mm 250 mm,5 µm 保护柱 :Venusil ASB C18,4.6 mm 10 mm,5 µm 流动相 : 乙腈 : 水 : 乙酸 =48:51:1; 检测器波长 : 激发光 333 nm, 发射光 460 nm; 进样量 :25 µl; 流速 :/min; 柱温 :30 4. 结果 以小麦粉 小麦 玉米 糙米和大豆为研究对象, 分别作三个不同浓度 OA 添加水平, 这三个浓度分别为 0.8 µg/kg 4 µg/kg 10 µg/kg, 每个浓度水平作 6 次平行性检测 检测回收率和精密度数据见表 l 表 2 和表 3; 典型色谱图见图 3 表 1 添加 OA 浓度为 0.8 µg/kg 时各种粮食回收率和精密度 粮食小麦粉小麦玉米糙米大豆 各个平行试验回收率 (%) 平均回收率 (%) RSD(%) 表 2 添加 OA 浓度为 4 µg/kg 时各种粮食回收率和精密度 粮食小麦粉小麦玉米糙米大豆 各个平行试验回收率 (%) 平均回收率 (%) RSD(%) 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

211 表 3 添加 OA 浓度为 10µg/kg 时各种粮食回收率和精密度 粮食小麦粉小麦玉米糙米大豆 各个平行试验回收率 (%) 平均回收率 (%) RSD(%) 图 1 小麦中 OA 检测典型色谱图 5. 订货信息 产品名称 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 LC-10F 高效液相色谱仪 CC-100 分析型色谱柱温箱 Cleanert PAX 固相萃取柱 Venusil ASB C18 液相色谱柱 Venusil ASB C18 保护柱针式过滤器 (Nylon) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 4 通道 24 位 10 ml/min, 梯度系统, nm 双波长检测器温控范围 :5-70 ; 可安装 1-2 支 300 mm 色谱柱 200 mg/6 ml,30/pk 4.6 mm 250 mm,5 µm 4.6 mm 10 mm,5 µm 0.22 µm, 直径 13 mm,200/pk 5 ml,100/pk 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45. Shore A 1.0 mm,100/pk 订货号 SPE-40 FL-LC010GS CC-100 AX2006 VS VS AS ZSQ-5ML

212 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 第八部分 化妆品 206 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

213 (GB/T ) 化妆品中 41 种糖皮质激素的同时测定 SPE-LC-MS/MS 法 应用编号 :AF 实验材料 1.1 糖皮质激素类药物标准品 1.2 标准储备液及混合标准工作液的配置 分别精密称取适量的 11 种糖皮质激素标准品, 用甲醇溶解定容, 分别配制成 1000 µg/ml 的贮备液 -20 以下保存 混合标准工作液 : 准确量取糖皮质激素类药物标准贮备液适量, 用 20% 乙腈水溶液稀释成适宜浓度的混合标准工作液, 现配现用 1.3 标准储备液及混合标准工作液的配置 a) 10% 亚铁氰化钾溶液 : 称量 2.3 g K 4 Fe(CN) 6 3H 2 O, 用水溶解定容至 20 ml; b) 20% 乙酸锌溶液 : 称量 4.78 g C 4 H 6 O 4 Zn 2H 2 O, 用水溶解定容至 20 ml; c) 定容液 : 量取 70 ml 水和 30 ml 乙腈, 混匀后加入 100 µl 甲酸混匀 2. 样品提取 表 1 糖皮质激素类药物标准品信息 中文名英文名泼尼松龙 Prednisone 氢化可的松 Hydrocortisone 泼尼松 Prednisone 可的松 Cortisone 甲基泼尼松龙 Methylprednisolone 倍他米松 Betamethasone 地塞米松 Dexamethasone 曲安奈德 Triamcinolone acetonide 氢化可的松醋酸酯 Hydrocortisone 21-acetate 泼尼松醋酸酯 Prednisone 21-acetate 可的松醋酸酯 Cortisone 21-acetate CAS 号相对分子质量 霜膏类化妆品 : 称取 0.2 g 试样 ( 精确至 0.01 g) 于 50 ml 离心管, 混匀 加入 3 ml 饱和氯化钠溶液, 涡旋混合使样品分散, 加入 3 ml 乙腈, 超声提取 5 min,8000 r/min 离心 5 min, 吸取上层清液于另一 50 ml 离心管中, 下层氯化钠溶液用 2 ml 乙腈重复提取一次, 合并二次乙腈提取液, 往提取液加入 40 ml 去离子水, 混匀, 加入亚铁氰化钾溶液 0.2 ml, 混匀, 加入乙酸锌溶液 0.2 ml, 混匀, 8000 r/min 离心 10 min, 作为待净化液 精油类样品 : 称取 0.5 g 试样 ( 精确至 0.01 g) 于 50 ml 离心管, 混匀 加入 4 ml 正己烷, 涡旋混合使样品分散, 加入 4 ml 50% 乙腈水溶液, 涡旋提取 2 min,8000 r/min 离心 5 min, 吸取下层提取液, 上层正己烷用 4 ml 50% 乙腈水溶液重复上述提取步骤一次, 合并二次 50% 乙腈提取液, 往提取液加入 36 ml 去离子水, 混合, 加入亚铁氰化钾溶液 0.1 ml, 混匀, 加入乙酸锌溶液 0., 混匀,8000 r/min 离心 10 min, 作为待净化液 3. 固相萃取柱净化 将 Cleanert PEP-2 固相萃取小柱置于 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪中, 上样液转移至上样管中, 溶剂置于相应的溶剂瓶中, 设定操作程序如下 : 用 5 ml 甲醇 10 ml 水活化 将上样管中溶液全部上样, 然后以 10 ml 10% 乙腈水溶液淋洗小柱, 通气吹干小柱中的残留液 (5 min) 最后以 6 ml 甲醇洗脱小柱, 通气吹干小柱中的残留液 (5 min), 以上操作流速均设定为 /min 取出收集瓶, 于 40 氮气吹干, 用 定容液溶解定容, 过 0.22 µm Nylon 滤器, 待测 4. 检测条件 4.1 液相色谱条件 色谱柱 :Venusil ASB C18,3 µm,150 Å, mm; 柱温 :30 ; 进样量 :10 µl 流动相 :A 相 : 含 0.1% 甲酸的水溶液 ; B 相 : 含 0.1% 甲酸的乙腈溶液 ; 梯度洗脱程序见表 4 时间 (min) 表 2 流动相梯度洗脱条件和流速 流速 (µl/min) A 相 (%) B 相 (%) 液相色谱条件离子源 : 电喷雾离子源 ; 扫描方式 : 负离子扫描 ; 检测方式 : 多反应监测 ; IS:-4500V; GS1:55Psi; GS2:55Psi; TEM:550 ; 207

214 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 表 3 糖皮质激素类药物多反应监测的优化参数 物质名称泼尼松龙氢化可的松泼尼松可的松甲基泼尼松龙倍他米松地塞米松曲安奈德氢化可的松醋酸酯泼尼松醋酸酯可的松醋酸酯 保留时间 (min) 监测离子对 405.1/ / / / / / / / / / / / / / / / / / / / / /369.3 DP EP CE CXP 倍他米松 甲基泼尼松龙地塞米松曲安奈德可的松醋酸酯 注 : 带 的监测离子为定量离子 泼尼松龙 泼尼松醋酸酯 泼尼松龙 可的松 氢化可的松醋酸酯 氢化可的松 图 1 11 种糖皮质激素液相色谱 - 串联质谱图 208 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

215 5. 结果与讨论 以市售玫瑰精油和护手霜为基质, 进行添加回收实验, 进行 0.1 µg/g 和 0.05 µg/g 添加浓度的实验,11 种糖皮质激素的回收率和重现性如下 : 药物名称泼尼松泼尼松龙可的松氢化可的松甲基泼尼松龙倍他米松地塞米松可的松醋酸酯泼尼松醋酸酯氢化可的松醋酸酯曲安奈德 药物名称泼尼松泼尼松龙可的松氢化可的松甲基泼尼松龙倍他米松地塞米松醋酸酯可的松泼尼松醋酸酯氢化可的松醋酸酯曲安奈德 表 4 玫瑰精油 0.1 µg/g 添加回收实验结果 平行 % 91.68% 93.67% 84.56% 94.08% 89.74% % 87.19% % 91.12% 98.72% 平行 % 90.70% 92.11% 89.38% 82.90% 90.28% 93.90% 87.40% % 91.69% 84.57% 平行 3 平均回收率 76.98% 82.61% 81.07% 87.82% 82.38% 89.39% 86.89% 86.94% 84.75% 87.24% 80.51% 86.84% 89.10% 95.37% 92.02% 88.87% % % 87.43% 90.08% 87.15% 90.14% 表 5 玫瑰精油 0.05 µg/g 添加回收实验结果 平行 % 85.75% 86.99% 72.36% 84.80% 76.19% 80.38% 86.52% % 94.54% 94.10% 平行 % 85.75% 77.29% 69.15% 88.74% 85.32% 79.99% 93.17% % % 73.98% 平行 % 86.16% 88.46% 75.04% 99.95% 95.32% 90.64% % % % 90.74% RSD 5.90% 6.68% 6.84% 2.77% 6.87% 6.33% 7.46% 3.07% 3.89% 2.57% 8.36% RSD 7.29% 0.28% 7.20% 4.08% 8.62% 11.18% 7.22% 11.13% 5.28% 7.58% 12.49% 药物名称泼尼松泼尼松龙可的松氢化可的松甲基泼尼松龙倍他米松地塞米松可的松醋酸酯泼尼松醋酸酯氢化可的松醋酸酯曲安奈德 表 6 护手霜 0.1 µg/g 添加回收实验结果 平行 % % 99.64% 91.60% % % 99.96% % % % 94.97% 平行 % % 93.01% 90.07% % % 97.00% % 93.72% % % 平行 % % 97.16% 95.88% % % % % 90.30% % 93.30% 平均回收率 94.16% % 96.60% 92.51% % % 99.02% % 96.11% % % RSD 6.09% 3.18% 3.47% 3.26% 3.07% 3.02% 1.77% 5.46% 7.60% 5.40% 10.22% 实验结论 : 使用 Cleanert PEP-2 Venusil ASB C18, API 4000 PLUS 三重四极杆质谱仪进行定量分析, 建立了一种化妆品中 11 种糖皮质激素同时检测的分析方法, 在高低添加水平下,11 种糖皮质激素的平均回收率为 75%-120%; 相对标准偏差均小于 13% 实验结果表明本方法快速 准确, 可用于化妆品中糖皮质激素的检测 6. 订货信息 产品名称 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 Cleanert PEP-2 固相萃取柱 Venusil ASB C18 液相色谱柱针式过滤器 (Nylon) 一次性无针头注射器 1.5 ml 样品瓶 1.5 ml 样品瓶盖 规格包装 4 通道 24 位 150 mg/6 ml,30 支 /pk mm,3 µm,150 Å 0.22 µm, 直径 13 mm,200/pk 5 ml,100/pk 短螺纹透明带书写 mm,100/pk 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫,45.Shore A 1.0 mm,100/pk 订货号 SPE-40 PE VS AS ZSQ-5ML

216 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 化妆品中 7 种局麻药的测定 应用编号 :AF 样品前处理 1.1 样品提取 霜类 : 称取 0.5 g 霜样品 ( 精确至 0.01 g) 于离心管中, 加入 200 μl 25 μg/ml 局麻药标准工作液, 涡旋混合 1 min, 加入 8 ml 1% 三氯乙酸和 2 ml 乙腈, 振荡提取 1 min, 超声 10 min,8000 r/min 离心 5 min, 转移上层清液至另一离心管, 待净化 精油类 : 称取 0.5 g 霜样品 ( 精确至 0.01 g) 于离心管中, 加入 200 μl 25 μg/ml 局麻药标准工作液, 涡旋混合 1 min, 加入 2 ml 乙腈饱和正己烷溶液, 振荡提取 1 min, 超声 10 min; 加入 8 ml 1% 三氯乙酸和 2 ml 乙腈, 振荡提取 1 min, 8000 r/min 离心 5 min, 转移上层清液至另一离心管, 待净化 1.2 样品净化取 PCX( 60 mg/3 ml) 小柱, 依次用 3 ml 甲醇 5 ml1% 三氯乙酸活化小柱, 将上述待净化样品以 1.0 ml/min 通过小柱, 再依次用 3 ml 1% 三氯乙酸 3 ml 1% 甲酸甲醇溶液淋洗小柱, 抽干, 最后用 10 ml 5% 氨水甲醇溶液洗脱小柱, 收集洗脱液,40 氮气浓缩至近干, 用 甲醇 : 水 (1:1, 体积比 ) 溶解残留物, 过 0.45 μm 尼龙针式过滤器, 样品供 HPLC 检测 注 : 霜类提取样品上样液 淋洗液在 0.25 MPa 负压下通过小柱 2. 液相条件 色谱柱 :Venusil XBP C18(L) 5 μm,150 Å; mm 流动相 A:20 mmol/l 磷酸氢二纳 ( 用磷酸调节 ph 至 7.0); 流动相 B: 甲醇 A:40% 流动相 A,60% 流动相 B; B:20% 流动相 A,80% 流动相 B 波长 :220 nm 进样量 :20 μl 流速 :1.0 ml/min 柱温 :30 梯度 : 3. 实验结果 表 1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 B % 表 1 精油基质加标回收实验数据 ( 添加水平 10 μg/g) 物质名称 空白回收率 % 平均加标回收率 % RSD 值 % 普鲁卡因胺 苯佐卡因 普鲁卡因 氯普鲁卡因 利多卡因 丁卡因 辛可卡因 表 2 霜基质加标回收实验数据 ( 添加水平 10 μg/g) 物质名称 空白回收率 % 平均加标回收率 % RSD 值 % 普鲁卡因胺 苯佐卡因 普鲁卡因 氯普鲁卡因 利多卡因 丁卡因 辛可卡因 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!

217 液相色谱图 图 1 局麻药混标溶液 5 μg/ml 液相色谱图 图 5 10 μg/g 霜基质加标液相色谱图 4. 结论 图 2 精油基质空白液相色谱图 本实验建立了 7 种局麻药的高效液相色谱检测方法, 并结合固相萃取技术对化妆品中 7 种局麻药的含量进行了测定 对于加标量为 10 μg/g 的样品进行了检测, 除苯佐卡因外其他回收率在 70% ~ 120% 之间, 固相萃取方法稳定并且色谱柱检测重现性良好, 说明本方法能够用于检测化妆中 7 种局麻药 5. 订货信息 产品名称规格包装订货号 图 3 10 μg/g 精油基质加标液相色谱图 图 4 霜空白液相色谱图 Cleanert PCX 60 mg/3 ml,50 支 / 盒 CX0603 Venusil XBP C18(L) 5 μm,150 Å, mm,1 支 VX L 直联式保护柱套 适用于 mm 和 mm,1 支 SH-100 Venusil XBP C18(L) 直 5 µm,150å;4.6 10mm, 联式保护柱芯 4 支 / 包 VX LS 1.5 ml 样品瓶 短螺纹透明带书写处 mm,100/pk ml 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖, 红色橡胶 / 米色 PTFE 隔垫 Shore A; 1.0 mm,100/pk 针式过滤器 单膜,13 mm,0.45 μm,100 个 / 包 AS 一次性注射器 2 ml 无针头,100 支 / 包 LZSQ-2ML 乙腈 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH015-4 甲醇 4 L/ 瓶, 色谱纯,4 4 L/ 箱 AH230-4 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪 4 通道 24 位,1 台 SPE 位氮吹仪 15 位,1 台 NV15-G 211

218 Best Value Guaranteed Product Quality Innovation to Benefit Customers 化妆品中对羟基苯甲酸酯类化合物的测定 应用编号 :AF 样品前处理 准确称取试样 1 g 置于 50 ml 离心管中, 加甲醇 10 ml, 涡旋混匀, 超声提取 15 min, 离心 上清液经 0.45 μm 滤膜过滤, 取续滤液作为样品试液 2. 液相条件 色谱柱 :Venusil XBP C18 (L),5 μm,150 Å, mm; 流动相 :0.05 mol/l 磷酸二氢钠 ( 含 mol 十六烷基三甲基溴化铵, 磷酸调节 ph 至 3.5) 甲醇乙腈 = (V/V/ V); 波长 :254 nm; 柱温 :25 ; 流速 :1.5 ml/min 进样量 :5 μl 3.2 稳定性测试表 3 保留时间稳定性测试结果 (n=5) 化合物名称保留时间 RSD/% 峰面积 RSD/% 对羟基邻苯二甲酸甲酯 对羟基邻苯二甲酸乙酯 图 2 保留时间稳定性测试谱图 min 3. 结果 3.1 线性关系和检出限 量取对羟基苯甲酸酯类标准储备液, 分别用甲醇稀释至 50 μg/ml 40 μg/ml 30 μg/ml 20 μg/ml 和 10 μg/ml 的标准溶液, 按照上述检测条件依次进样, 以浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 拟合标准曲线方程, 结果见表 2: 表 2 对羟基苯甲酸酯类物质标准曲线和检出限 化合物名称标准曲线方程相关系数 检出限 (μg/ml,s/n = 3) 对羟基苯甲酸甲酯 Y = 22.06X 对羟基苯甲酸乙酯 Y = 19.63X 市售化妆品检测 样品名称 表 4 市售化妆品测试结果 对羟基苯甲酸甲酯 (μg /g) 对羟基苯甲酸乙酯 (μg /g) 某品牌护手霜 某品牌洗面奶 651 由图 3-5 可看出,Venusil XBP C18 (L) 色谱柱能够将化妆品中两种苯甲酸酯类物质较好的分离开, 满足检测要求 图 3 对羟基苯甲酸酯类混标 (50 μg /ml) 高效液相色谱图 图 1 对羟基苯甲酸酯类物质标准曲线 212 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!