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1 GC-MS/MS 法测定中药材中 74 种农药 残留含量 摘要 : 本文利用岛津 GCMS-TQ8040 三重四极杆气质联用仪建立了 GC-MS/MS 测定 2015 版 中国药典 通则 2341 中规定的 74 种农药残留的方法 在 1~50µg/L 浓度范围内建立内标曲线, 线性关系良好, 相关系数 r 均大于 该方法适用于 2015 版药典中对中药材中农药残留量的快速定量测定 关键词 :GC-MS/MS 中药材有机磷类农药有机氯类农药拟除虫菊酯类农药自 1953 年第一部 中国药典 发行以来, 中国药典已成为国家监管药品质量的法定技术依据 2014 年 3 月, 国家药典委员会发布了关于 中国药典 2015 版通则 ( 草案 ) 公开征求意见通 知 与 2010 版药典相比,2015 版药典在收载品种数上有较大增幅, 在整体构架上也有较大调整, 主要表现在将 2010 版三部的附录凡例 制剂通则 分析方法指导原则等三合一, 独立成卷作为第四部, 制定了统一的技术要求 关于中药材中农药残留, 通则 2431 农药残留量测定法 建立和完善了中药材中农药残留量的测定方法, 包括气相色谱 - 串联质谱法和液相色谱 - 串联质谱法 其中气相色谱 - 串联质谱法涉及 74 种农药 ( 不含 2 种氘代内标 ), 并规定了检出限范围 05~25mg/kg 本文采用了 GC-MS/MS 的 MRM 多反应监测模式, 有效降低背景干扰, 避免了单四极杆 GCMS 因为基质干扰导致的定性不准问题, 提高了分析灵敏度, 大部分待测组分的检出限低于 1μg/L 该方法满足新版药典对中药材中农药残留含量测定的要求 1 实验部分 1.1 仪器 GCMS-TQ8040 三重四极杆气质联用仪 1.2 分析条件 GC-MS/MS 参数 : 色谱柱 :InertCap-5ms NP/Sil, 30m 0.25mm 0.25µm 进样口温度 :250 进样方式 : 不分流进样进样时间 :1min 载气控制方式 : 恒线速度载气线速度 :47.2cm/sec 柱温程序 :50 (1min)_25 /min _125 _ /min _300 (3.5min) 接口温度 :280 离子源温度 :200 碰撞气 : 氩气检测器电压 : 调谐电压 +0.6kv 农药组分 MRM 采集条件见表 1

2 No. 保留时间 (min) 表 1. 农药组分保留时间及 MRM 参数 化合物名称英文名称 CAS No 敌敌畏 Dichlorvos 四氯硝基苯 Tecnazene 定量离子对 (CE) 185.0> >202.9 定性离子对 (CE) 185.0> > 二苯胺 Diphenylamine > > 氟乐灵 Trifluralin 杀虫脒 Chlordimeform alpha- 六六六 BHC-alpha 六氯苯 Hexachlorobenze ne > > > > 五氯甲氧基苯 Pentachloranisole >237(15) 氯硝胺 Dicloran 氘代莠去津 ( 内标 ) Atrazine-d5(IS) 五氯硝基苯 Quintozene beta- 六六六 BHC- beta 特丁硫磷 Terbufos gamma- 六六六 BHC- gamma 七氟菊酯 Tefluthrin 百菌清 Chlorothalonil delta- 六六六 BHC-delta Pentachloroanilin 五氯苯胺 e 206.0> > > > > > > > > >191.9 (21) 306.1> >140 (15) 218.9> > > > >105.0 (15) 294.8> > > > > > > >193.9 (21) 甲基毒死蜱 Chlorpyrifos-meth yl 乙烯菌核利 Vinclozolin > > > >178.0

3 甲基对硫磷 Parathion-methyl 七氯 Heptachlor 皮蝇磷 Fenchlorphos 八氯二丙醚 Octachlorodiprop yl ether (S421) > > > > > >117.0 (32) 284.9> > 杀螟硫磷 Fenitrothion >26(6) 277.0> 甲基五氯苯基 硫醚 Methyl-pentachlor ophenyl sulfide >263(15) 246> 苯氟磺胺 Dichlofluanid > > 艾氏剂 Aldrin 毒死蜱 Chlorpyrifos 氯酞酸甲酯 氘代倍硫磷 ( 内标 ) Chlorthal-dimethy l Fenthion-d6(IS) 对硫磷 Parathion 三唑酮 Triadimefon > > > >169.0 (15) 291.1> > > > > > >137.0 (6) 208.1> 仲丁灵 Butralin > > 三氯杀螨醇 Dicofol 溴硫磷 Bromophos 二甲戊灵 Pendimethalin 氟虫腈 Fipronil 氧化氯丹 Chlordane-oxy 环氧七氯 B 异构体 环氧七氯 A 异构体 Heptachlor exo-epoxide 25> > > > > > > >254.9 (30) 386.8> > > >281.9 Heptachlor >289.0(6) 352.8>253.0 endo-epoxide 366.9> > 腐霉利 Fipronil (30)

4 三唑醇 Triadimenol > > (4) 哌草丹 Dimepiperate > > 乙基溴硫磷 Bromophos-ethyl 反式氯丹 Chlordane-trans o,p'- 滴滴伊 o,p'-dde 氟节胺 Flumetralin 顺式氯丹 Chlordane-cis α- 硫丹 Endosulfan I p,p'- 滴滴伊 p,p'-dde > > >176.0 (30) > (21) 372.8> > >176.0 (30) 358.9> > > > > > > 狄氏剂 Dieldrin > >17 (38) o,p'- 滴滴滴 o,p'-ddd 溴虫腈 Chlorfenapyr 异狄氏剂 Endrin 除草醚 Nitrofen β- 硫丹 Endosulfan II p,p'- 滴滴滴 p,p'-ddd o,p'- 滴滴涕 o,p'-ddt 硫丹硫酸盐 Endosulfan sulfate 235.0> > >191.0 (30) 282.9> > > > > > > > > > > > > p,p'- 滴滴涕 p,p'-ddt > > 联苯菊酯 Bifenthrin > > 溴螨酯 Bromopropylate > > 甲氰菊酯 Fenpropathrin > >172.1

5 甲氧滴滴涕 Methoxychlor 苯醚菊酯 Phenothrin , > > > >153.1 氯氟氰菊酯 -1,2 Cyhalothrin-1, > > 氟丙菊酯 Acrinathrin > > >235(5) 灭蚁灵 Mirex >237(15) , , 20.34, 20.40, , 20.68, 20.73, , 氯菊酯 -1,2 Permethrin-1, 氟氯氰菊酯 -1,2,3,4 氯氰菊酯 -1,2,3,4 氟氰戊菊酯 -1, 2 Cyfluthrin-1,2,3, Cypermethrin-1,2, 3, Flucythrinate-1, 喹禾灵 Quizalofop-ethyl , , 样品前处理 183.1> > > > > > >199.1 (6) 181.1> > >272.1 氰戊菊酯 -1,2 Fenvalerate-1, >225.1(6) 419.1>167.1 溴氰菊酯 -1,2 Deltamethrin-1, > >171.9 精确称取 3g 党参粉碎样品, 加入 1% 冰醋酸溶液 15mL, 涡旋混匀后静置 30min, 加入 15mL 乙腈与 100µL 内标 涡旋混匀后震荡 5min, 加入 7.5g 无水硫酸镁与无水醋酸钠混合粉末 (4:1,m/m), 摇散后震荡 3min, 冰浴中冷却 10min, 离心 5min, 移 取上清液 9mL 置固相分散萃取净化管 ( 无水硫酸镁 900mg,PSA300mg,C18 键合硅胶 300mg, 石墨化炭黑 90mg, 硅胶 300mg) 中, 涡旋混匀, 震荡 5min, 离心 5min, 移取上清液 5mL, 氮吹至约 0.4mL, 乙腈定容至 1mL 涡旋混匀,0.22µm 滤膜过滤, 取滤液供上机分析 20

6 2 结果 2.1 标准样品谱图混标溶液 (10 μg/l)mrm 总离子流谱图如图 1 所示 部分农药组分 (5 μg/l)mrm 质量色谱图如图 2 所示 (x100,000) 图 1. 混标溶液 MRM 总离子流谱图 (10 μg/l) (x1,000) (x10,000) 7.5 (x1,000) 敌敌畏毒死蜱对硫磷 (x1,000) (x100) (x10,000) 异狄氏剂硫丹硫酸盐灭蚁灵图 2. 部分农药组分 MRM 图 (5 μg/l) 2.2 标准曲线使用基质空白配制农药混合标准系列, 浓度分别为 µg/L 以浓度比为横坐标, 峰面积比为纵坐标, 制作内标曲线 因篇幅所限, 部分农药组分内标曲线如下所示, 各组分内标曲线相关系数见表 2 21

7 峰面积比 (x0.1) 25.0 浓度比 峰面积比 峰面积比 25.0 浓度比 峰面积比 (x0.1) 0 50 浓度比 敌敌畏毒死蜱对硫磷 浓度比 峰面积比 浓度比 峰面积比 浓度比 异狄氏剂 硫丹硫酸盐 灭蚁灵 图 3. 部分组分标准曲线 2.3 检出限及重复性 根据 1μg/L 标准溶液数据, 计算方法检出限 (3 倍噪声计算 ),5μg/L 标准溶液重复测定 6 次, 考察仪器重复性 各组分检出限及重复性见表 2 表 2. 相关系数及检出限 No. 化合物名称 相关 系数 LOD (μg/l) RSD % (n=6) No. 化合物名称 相关 系数 LOD (μg/l) RSD % 1 敌敌畏 氧化氯丹 四氯硝基苯 二苯胺 环氧七氯 B 异 构体 环氧七氯 A 异 构体 (n=6) 氟乐灵 腐霉利 杀虫脒 三唑醇 alpha- 六六六 哌草丹 六氯苯 乙基溴硫磷 五氯甲氧基苯 反式氯丹 氯硝胺 o,p'- 滴滴伊 氘代莠去津 ( 内标 ) 氟节胺 五氯硝基苯 顺式氯丹 beta- 六六六 α- 硫丹 特丁硫磷 p,p'- 滴滴伊 gamma- 六六 狄氏剂

8 六 15 七氟菊酯 o,p'- 滴滴滴 百菌清 溴虫腈 delta- 六六六 异狄氏剂 五氯苯胺 除草醚 甲基毒死蜱 β- 硫丹 乙烯菌核利 p,p'- 滴滴滴 甲基对硫磷 o,p'- 滴滴涕 七氯 硫丹硫酸盐 皮蝇磷 p,p'- 滴滴涕 八氯二丙醚 联苯菊酯 杀螟硫磷 溴螨酯 甲基五氯苯基 硫醚 甲氰菊酯 苯氟磺胺 甲氧滴滴涕 艾氏剂 苯醚菊酯 毒死蜱 氯氟氰菊酯 氯酞酸甲酯 氟丙菊酯 氘代倍硫磷 ( 内标 ) 灭蚁灵 对硫磷 氯菊酯 三唑酮 氟氯氰菊酯 仲丁灵 氯氰菊酯 三氯杀螨醇 氟氰戊菊酯 溴硫磷 喹禾灵 二甲戊灵 氰戊菊酯 氟虫腈 溴氰菊酯 加标回收率 对空白样品进行 5ng/kg 加标回收测试, 所得色谱图如图 4 所示, 回收率见表 (x1,000,000) 图 4. 5ng/kg 加标样品的 MRM 图 23

9 表 3. 5ng/kg 加标回收率 No. 化合物名称加标回收率 % No. 化合物名称加标回收率 % 1 敌敌畏 氧化氯丹 四氯硝基苯 环氧七氯 B 异构体 二苯胺 环氧七氯 A 异构体 氟乐灵 腐霉利 杀虫脒 三唑醇 alpha- 六六六 哌草丹 六氯苯 乙基溴硫磷 五氯甲氧基苯 反式氯丹 氯硝胺 o,p'- 滴滴伊 氘代莠去津 ( 内标 ) - 48 氟节胺 五氯硝基苯 顺式氯丹 beta- 六六六 α- 硫丹 特丁硫磷 p,p'- 滴滴伊 gamma- 六六六 狄氏剂 七氟菊酯 o,p'- 滴滴滴 百菌清 溴虫腈 delta- 六六六 异狄氏剂 五氯苯胺 除草醚 甲基毒死蜱 β- 硫丹 乙烯菌核利 p,p'- 滴滴滴 甲基对硫磷 o,p'- 滴滴涕 七氯 硫丹硫酸盐 皮蝇磷 p,p'- 滴滴涕 八氯二丙醚 联苯菊酯 杀螟硫磷 溴螨酯 甲基五氯苯基硫醚 甲氰菊酯 苯氟磺胺 甲氧滴滴涕 艾氏剂 苯醚菊酯 毒死蜱 氯氟氰菊酯 氯酞酸甲酯 氟丙菊酯 氘代倍硫磷 ( 内标 ) - 69 灭蚁灵 对硫磷 氯菊酯 三唑酮 氟氯氰菊酯 仲丁灵 氯氰菊酯 三氯杀螨醇 氟氰戊菊酯 溴硫磷 喹禾灵 二甲戊灵 氰戊菊酯 氟虫腈 溴氰菊酯

10 3 结论 采用岛津公司 GCMS-TQ8040 三重四极杆气质联用仪分析 2015 版 中国药典 通则 2341 中规定的农药组分, 方法操作简单, 在 1~50µg/L 浓度范围内, 大部分农药线性良好, 相关系数大于 0.995, 加标回收率在 60~120% 之间, 可以应对 2015 版 中国药典 中对中药材中农药残留量的测定要求 25

2

2 2015 版 中国药典 农残检测的解决方案以及方法包介绍 赛默飞世尔科技三重四极杆串接气质 2 目录 一. 方法包简介 4 二. 仪器简介 5 三. 化合物简介 6 四. 相关政策及法规 8 五. 仪器和设备 9 六. 样品前处理方法 10 七. 方法包使用简介 11 八. 应用文章 15 3 一. 方法包简介 方法包是赛默飞世尔科技色谱质谱部应用部门针对客户需求提出的简易仪器使用流程, 方法包内所涉及的化合物均为常见的

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