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煤伏
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1 表 10 流式细胞检测 SMMC-7721 细胞株凋亡率 Tab. 10 Flow cytometry detect apoptosis rate of SMMC 细胞的种类早期凋亡率 /% 晚期凋亡率 /% 人肝癌 SMMC ± ± 讨论人肺癌 A ± ±1.16 本研究做了大量的预实验, 可知对于水溶性药物, 采用被动载药法制备脂质体, 包封率较低所以薄膜分散法包封率较低冷冻干燥法较麻烦因此本实验采用了硫酸铵梯度法制备脂质体在制备硬脂醇半乳糖苷修饰的阿西替尼脂质体中, 本实验采用单因素实验和 Box-Behnken 响应面法对制备工艺进行优化, 拟合了脂药比, 脂胆比, 水浴温度及硫酸铵溶液的体积 4 个因素对包封率的影响的回归模型, 证明该模型合理可靠磷脂双分子层是构成脂质体的基本骨架, 一般常用普通磷脂, 但不饱和的卵磷脂在贮存过程中易氧化, 所以本实验采用了氢化大豆磷脂本实验用 CCK-8 检测细胞毒性, 虽然 MTT 较 CCB-8 便宜, 但操作繁琐,MTT 需要加二甲亚砜, 在操作过程中可能由于溶解的不完全导致测得 OD 值不准确半乳糖受体又叫去唾液酸糖蛋白受体 (ASGP-R), 人肺癌 A549 细胞株没有 ASGP-R 受体, 所以用流式细胞仪检测时, 凋亡率较人肝癌 SMMC-7721 细胞株低说明硬脂醇半乳糖苷靶向对人肝癌 SMMC-7721 细胞株具有诱导作用 [9] REFERENCES [1] AHMEDIN J, FREDDIE B, MELISSA M, et al. Global cancer statistics [J]. CA Cancer J Clin, 2011, 61(2): [2] 黄赞颂, 仇仪英. 中医药治疗原发性肝癌的研究现状 [J]. 时珍国医国药, 2012, 23(11): [3] SUN S F. Stearyl alcohol galactosidase sorafenib modified liposomesand targeting of mouse liver [D]. Jinzhou: Liaoning Med Univ( 辽宁医学院 ), [4] WANG S N, DENG Y H, WU H B, et al. Assessment of thetargetability of galactosylated liposomes to liver in mice [J]. Chin Pharm J( 中国药学杂志 )2006, 41(14): [5] ZHANG Y J, DENG Y H, YANG Q. Preparation of sunitinib malate liposomes with transmembrane ammonium sulfategradients [J]. Chin J New Drug( 中国新药杂志 ), 2012, 21(5): [6] CUI T, GUO W Y. Detemination of entrapment efficiency of capecitabine by microcolumn centrifugation-hplc [J]. Chin J Pharm( 中国医药工业杂志 ), 2012, 43(8): [7] LI J, GUO W Y. Preparation and formula optimization of stearyl alcohol galactoside modified gemcitabine hydrochloride nano liposome [J]. Chin J Mod Appl Pharm( 中国现在应用药学 ), 2015, 32(4): [8] WAN W T, LI N, LIU J, et al. Comparative study on the optimal experments conditions between CCK-8 ang MTT in cell proliferation assay of PC3CELL [J]. Lishizhen Med Mater Med Res( 时珍国医国药 ), 2010, 21(12): [9] LIU Y X, LI H Y, YAN P, et al. Mechanism of syngrathus protein extract underlying apoptosis of cervical cancer hela cell [J]. Acad J Chin PLA Med Sch( 解放军医学院学报 ), 2014, 35(6): 收稿日期 : 灵芝中 3 种三萜酸的含量测定与特征图谱研究范蕾, 余乐, 余华丽 *, 陈张金, 李水福 ( 丽水市食品药品与质量技术检验检测院, 浙江丽水 ) 摘要 : 目的建立测定灵芝中灵芝三萜含量及特征图谱的方法方法采用高效液相色谱法, 色谱柱为 Agilent-SB C 18 (250 mm 4.6 mm,5 μm), 流动相为乙腈 (A)-0.1% 冰醋酸 (B)(30 70), 梯度洗脱 (0~20 min A 30% 40%), 流速为 1.0 ml min 1, 柱温 30, 检测波长为 254 nm 利用相似度评价系统进行指纹图谱相似度计算结果灵芝中灵芝三萜类成分较高, 灵芝指纹图谱相似度达到 0.93 以上结论灵芝中灵芝三萜类成分含量高, 特征图谱方法稳定重现性好, 可用于灵芝的质量控制关键词 : 灵芝 ; 三萜 ; 特征图谱中图分类号 :R 文献标志码 :B 文章编号 : (2016) DOI: /j.cnki.issn 基金项目 : 丽水市重点科技创新团队 (2012CXTD11) 作者简介 : 范蕾, 女, 副主任中药师 Tel: (0578) fanjudy@126.com * 通信作者 : 余华丽, 女, 副主任中药师 Tel: (0578) @qq.com 1040 Chin J Mod Appl Pharm, 2016 August, Vol.33 No.8 中国现代应用药学 2016 年 8 月第 33 卷第 8 期

2 Determination of Three Triterpenoid Acid in Ganoderma and Its Characteristic Chromatograms FAN Lei, YU Le, YU Huali *, CHEN Zhangjin, LI Shuifu(Lishui Institute for Food and Drug and Quality Technology Inspection, Lishui , China) ABSTRACT: OBJECTIVE To establish determination method for triterpenoid content in Ganoderma and study its of characteristic chromatograms. METHODS HPLC was applied with the chromatographic condition as follows: the chromatographic column was Agilent Zorbax SB-C 18 (250 mm 4.6 mm, 5 μm) at 30 ; mobile phase was acetonitrile 0.1% glacial acetic acid (30 70); flow rate was 1.0 ml min 1, the detection wavelength was 254 nm. Using the similarity evaluation system for fingerprint similarity calculation. RESULTS Ganoderma triterpene component was high, Ganoderma fingerprint similarity was above CONCLUSION Ganoderma triterpene component content in Ganoderma is high, the characteristic chromatograms method is stable, good reproducibility, and can be used for quality control of Ganoderma. KEY WORDS: Ganoderma; triterpene component; characteristic chromatograms 灵芝为多孔菌科真菌赤芝 Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr.)Karst. 或紫芝 Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang 的干燥子实体, 具有补气安神, 止咳平喘的功效, 常用于心神不宁, 失眠心悸, 肺虚咳喘, 虚劳短气, 不思饮食等 [1] 传统中医视灵芝为名贵滋补类药材, 有扶正固本, 延年益寿的功效, 临床上主要用于治疗冠心病高血压高血脂肝炎白细胞减少等症 [2] 灵芝含有多种化学成分, 其中三萜酸类化合物是其主要有效成分之一, 且具有广泛的药理作用, 如抗肿瘤保肝解毒抗衰老增强免疫力等 [3] 目前, 灵芝中灵芝三萜类化合物的测定主要采用紫外光谱法 [1], 也 [4] 有报道采用高效液相色谱法, 但大多对单一成分进行含量测定且并无针对同一产地灵芝进行三萜成分测定的报道, 本实验通过高效液相色谱法同时对丽水产灵芝中灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 灵芝烯酸 D 的含量进行测定, 并建立相应特征图谱, 全面了解和评价丽水地产灵芝的质量 1 仪器与试药 Agilent 1260 高效液相色谱仪 ( 美国 Agilent 公司 );XS104 电子天平 ( 上海恒刚衡器天平有限公司 ) 14 批灵芝子实体, 经丽水市食品药品检验所主任中药师李水福鉴定为多孔菌科真菌赤芝 Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr.) Karst. 的干燥子实体, 产地和采收时间见表 1; 灵芝烯酸 D 对照品 ( 批号 :140504, 含量 :90.0%) 灵芝酸 B 对照品 ( 批号 :140804, 含量 :98.0%) 灵芝酸 C 2 对照品 ( 批号 , 含量 :98.0%) 均购自成都普菲德生物科技有限公司 ; 乙腈 ( 德国默克公司 ); 冰醋酸均为色谱纯, 水为娃哈哈纯净水表 1 14 批灵芝子实体资料 Tab. 1 The 14 batch of samples 编号样品名称采收 ( 产 ) 地采收时间 1 灵芝 (1 号产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (2 号产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (3 号不产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (4 号产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (5 号不产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (6 号产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (7 号不产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (8 号产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (9 号不产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (10 号产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (11 号不产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (12 号产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (13 号产粉 ) 龙泉兰巨乡灵芝 (14 号产粉 ) 龙泉兰巨乡含量测定 2.1 色谱条件 Agilent-SB C 18 色谱柱 (250 mm 4.6 mm, 5 μm), 流动相为乙腈 (A)-0.1% 冰醋酸 (B), 梯度洗脱 (0~20 min,a 30% 40%), 流速 :1.0 ml min 1, 柱温 :30, 检测波长 :254 nm 2.2 对照品及供试品溶液的制备精密称取灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 对照品适量, 分别置 25 ml 量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为对照品溶液取上述 3 种对照溶液各 2 ml 置同一 10 ml 量瓶中, 制成每 1 ml 约含灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 80 μg ml 1 的混合对照品溶液取灵芝子实体粗粉 0.5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 加入甲醇 100 ml, 加热回流 1 h, 放冷, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加甲醇溶解至 5 ml 量瓶中, 中国现代应用药学 2016 年 8 月第 33 卷第 8 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2016 August, Vol.33 No

3 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 用 0.45 μm 的微孔滤膜过滤, 即为供试品溶液 2.3 专属性试验分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液, 按 2.1 项下色谱条件进样, 记录色谱图, 见图 1 在该色谱条件下, 灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 可达到基线分离, 分离度均 >1.5 对照品色谱峰与供试品色谱峰中相对应色谱峰的紫外光谱吸收均一致结果表明在上述色谱条件下灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 具有良好的分离效果 2.4 线性关系考察精密吸取对照品溶液适量, 分别制成含灵芝烯酸 D 浓度为 18.44,36.88,73.76,184.4,368.8, μg ml 1 ; 含灵芝酸 B 浓度为 22.25,44.50, 89.0,178.0,356.0,712.0 μg ml 1 ; 含灵芝酸 C 2 浓度为 22.26,44.52,89.04,178.08,356.16, μg ml 1 的混合溶液, 准确吸取 5 μl, 按 2.1 项下色谱条件进行测定, 分别以对照品的浓度 (X) 为横坐标, 峰面积积分值 (Y) 为纵坐标, 得灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 回归方程分别为 Y= X (r= ), Y=3.7749X (r= ),Y= X (r= ) 结果表明, 灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 分别在 ~3.688 μg, ~3.560 μg, ~ μg 内与峰面积呈良好的线性关系图 1 HPLC 图谱 A 对照品溶液 ;B 供试品溶液 ;1 灵芝酸 C 2 ;2 灵芝酸 B;3 灵芝烯酸 D Fig. 1 HPLC chromatograms A reference solution; B sample solution; 1 ganoderic acid C 2 ; 2 ganoderic acid B; 3 ganoderenic acid D. 2.5 仪器精密度稳定性重复性试验精密吸取混合对照品溶液 5 μl, 连续进样 6 次, 测得其峰面积, 计算灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 峰面积的 RSD 分别为 0.18%,0.25%, 0.33%(n=6), 结果显示仪器精密度良好精密吸取 2.2 项下供试品溶液各 5 μl, 分别在 0,4,8,12,24 h 依次进样, 测得其峰面积, 计算灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 峰面积的 RSD 分别为 0.44%,0.68%,0.34%(n=5), 表明供试品溶液在 24 h 内稳定性良好精密称取同一灵芝子实体 (9 号样品 ) 粉末 6 份, 按 2.2 项下方法制备供试品溶液, 进样 5 μl, 按干燥品计算, 灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 浓度分别为 , , mg g 1, RSD 分别为 0.68%,0.98%,0.83% 表明本实验重复性良好 2.6 加样回收率试验取已测定的灵芝子实体 (9 号样品 ) 粉末 6 份, 各约 0.25 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 对照品混合溶液 1 ml( 浓度分别为 184.4, 89.00, μg ml 1 ), 按 2.2 项下方法制备供试品液, 进样 5 μl, 测定加样回收率结果灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 回收率分别为 98.80%, 97.96%,98.93%,RSD 分别为 0.66%,0.62%, 0.88% 结果见表样品测定取样品粉末 (1~14 号 ) 约 0.5 g, 精密称定, 按 2.2 项下方法制备供试品溶液, 精密吸取 5 μl, 分别测定并计算含量, 结果见表 3 3 特征图谱 3.1 特征图谱的确定取供试品溶液 5 μl 注入液相色谱仪, 按 2.1 项下色谱条件记录色谱图, 分别测定 14 批样品经比较分析, 有 14 个色谱峰为 14 批灵芝共有, 保留时间依次为 11.2(1),12.4(2),13.2(3),13.5(4), 14.8(5),15.5(6),16.2(7),16.6(8),17.3(9),18.7(10, S),20.2(11),23.1(12),24.3(13),29.4(14)min, 通过液相色谱 (DAD 检测器 ) 定位发现,1 号峰为灵芝酸 C 2,6 号峰为灵芝酸 B 12 号峰为灵芝烯酸 D, 见图 2 由特征图谱可见,10 号峰相对峰面积较大, 较稳定, 故选 10 号峰为参照峰 S, 各色谱峰相对峰面积见表 4 各峰保留时间的 RSD 为 1042 Chin J Mod Appl Pharm, 2016 August, Vol.33 No.8 中国现代应用药学 2016 年 8 月第 33 卷第 8 期

4 0.08%~0.27%, 相对峰面积的 RSD 为 15.1%~ 115.6%, 显示灵芝子实体中均含有上述 14 个共有成分, 但含量差异性较大见图 3 表 2 灵芝子实体中灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 的加样回收率 (n=6) Tab. 2 Recoveries of ganoderic acid C 2, ganoderic acid B and ganoderenic acid D(n=6) 样品含量 / μg 加入量 / μg 测得量 / μg 回收率 / % 平均回收率 /% RSD/% 图 2 灵芝特征图谱 1 灵芝酸 C2;6 灵芝酸 B;12 灵芝烯酸 D Fig. 2 Characteristic chromatogram of Ganoderma 1 ganoderic acid C 2 ; 2 ganoderic acid B; 3 Ganoderenic acid D 表 3 灵芝子实体中 3 种三萜酸的测定结果 (n=2) Tab. 3 The content of three triterpenoid acid in Ganoderma (n=2) mg g 1 编号灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 图 3 14 批灵芝特征图谱 Fig. 3 Characteristic chromatograms of 14 batches of samples 3.2 特征图谱的仪器精密度稳定性重复性试验取灵芝饮片 (9 号样品 ) 粉末, 按 2.2 项下方法制备供试品溶液, 连续进样 6 次, 测得各色谱峰的保留时间和相对峰面积的 RSD 分别为 0.02%~ 0.15% 0.19%~0.97%, 显示仪器精密度良好取精密度试验的供试品溶液 5 μl, 分别在 0, 4,8,12,24,48 h 依次进样, 测得各色谱峰的保留时间与相对峰面积无明显变化, 其 RSD 分别为 0.03%~0.10%,0.22%~0.84% 表明供试品溶液在 48 h 稳定性良好取同一灵芝饮片 (9 号样品 ) 粉末 6 份, 按 2.2 项下方法制备, 进样 5 μl, 测得其各色谱峰的保留时间和相对峰面积的 RSD 分别为 0.05%~ 0.17% 0.21%~0.88%, 显示该特征图谱稳重复性较好中国现代应用药学 2016 年 8 月第 33 卷第 8 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2016 August, Vol.33 No

5 表 4 14 批灵芝特征图谱共有峰相对峰面积 Tab. 4 Common peak relative peak area 共有峰相对峰面积 RSD/% 指纹图谱的相似性评价应用卫生部药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统 (2012 版 ) 软件对 14 批灵芝图谱进行处理, 见图 3, 分别采用平均值和中位值计算, 所得灵芝特征图谱的相似度均在 0.93 以上, 表明建立的特征图谱技术指标稳定 4 讨论本实验参考相关报道 [3-10], 对 14 批灵芝子实体中灵芝烯酸 D 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 的含量同时进行测定, 由测定结果可知, 此 3 种成分以灵芝烯酸 D 含量最高, 含量范围为 0.26~3.09 mg g 1 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 含量相当, 含量范围为 0.2~ 0.6 mg g 1 课题组曾经考察灵芝菌盖与菌柄中上述 3 种成分的差异, 结果显示灵芝烯酸 D 在菌柄中的含量普遍高于菌盖, 灵芝酸 B 灵芝酸 C 2 无明显差异本实验采集的灵芝样品产地虽相同, 但品种不同, 其中 3,5,7,9,11 号均为不产粉型灵芝, 其余为产粉型灵芝由表 3 可见, 不产粉型灵芝中上述 3 种成分含量差异性不大, 产粉型灵芝中灵芝烯酸 D 含量明显高于灵芝酸 B 和灵芝酸 C 2 本实验通过 14 批灵芝子实体的测定分析, 发现各特征峰相对峰面积有较大差异, 但整体特征相似, 相似度在 0.93 以上, 说明相同产地培育的灵芝亦存在差异性, 但同时也有较好的相关性由特征图谱及各批次样品图谱可知,5,9, 10,12,13 号色谱峰面积相对较大, 相对峰面积 RSD 相对较小, 其中 12 号峰为灵芝烯酸 D, 其余 11 种成分虽然均因缺少对照品未能进行定量测 [4] 定, 但与李保明等研究的结果类似, 灵芝子实体中所含灵芝三萜类成分种类较多, 且含量较高, 可考虑运用多指标成分测定的方法分析灵芝中灵 [4] 芝酸的总量李保明等测定 2 批龙泉产灵芝的上述 3 种成分均低于本实验结果, 分析原因主要是栽培技术生长年份样品数量造成的差异近年来灵芝中多糖含量一直引人关注, 含量多在 0.5%~2% 左右, 而灵芝三萜类成分具有广泛的药理作用, 且其含量远高于多糖, 对灵芝三萜类成分进行测定和研究, 可丰富对灵芝药用价值的认识灵芝在丽水龙泉地区有广泛种植, 建立代表性的特征图谱对控制灵芝质量, 鉴别品种有着指导性的意义 [5] 本实验首次对灵芝建立特征图谱方法, 各特征峰与 S 峰的相对保留时间稳定, 且运用指纹图谱软件计算相似度均在 0.93 以上该方法与含量测定方法系统条件基本一致, 采用甲醇回流法提取, 操作简便快速稳定灵芝酸类成分特征图谱的建立, 有利于促进灵芝及其制剂研制水平和质量控制水平的提高, 为全面评价和利用灵芝提供科学依据 REFERENCES [1] 中国药典. 一部 [S]. 2015: [2] LIU S S, WANG Y, HE R R, et al. Chemical constituents of Ganoderma lucidum(leys. ex Fr.) Karst [J]. J Shengyang Pharm Univ( 沈阳药科大学学报 ), 2008, 25(3): Chin J Mod Appl Pharm, 2016 August, Vol.33 No.8 中国现代应用药学 2016 年 8 月第 33 卷第 8 期

6 [3] DING P, LIANG Y J, LUO J H, et al. Simultaneous determination of six triterpenoid acids in Ganoderma by RP-HPLC [J]. Chin Pharm J( 中国药学杂志 ), 2009, 44(11): [4] LI B M, GU H F, LI Y, et al. Determination of nine triterpenoid acids from Ganoderma lucidum of different producting areas by HPLC [J]. China J Chin Mater Med( 中国中药杂志 ), 2012, 37(23): [5] CHEN J H, WU F Q, LI W L, et al. Comparison of contents of triterpenoids, polysaccharides and heavy metals in Ganoderma lucidum sporule powder and Ganoderma lucidum [J]. Chin Pharm( 中国药房 ), 2008, 19(33): [6] ZHOU X W, LIN J, SUN X F, et al. Fingerprint of Chinese materia medica and research methods of quality standard for Ganoderma spp. [J]. Chin Tradit Herb Drugs( 中草药 ), 2006, 37(8) : [7] WANG Y, CHEN S, LU R P, et al. Determination of three ganoderic acids in Lingzhi ethanol extract by HPLC-ESI-MS and HPLC [J]. Chin J Pharm Anal( 药物分析杂志 ), 2013, 33(2) : [8] 姚仲青, 李文林, 周俊, 等. 灵芝孢子粉的质量研究 [J]. 中药材, 2007, 30(5): [9] 陈若云. 灵芝化学成分与质量控制方法的研究综述 [J]. 食药用菌, 2015, 23(5): [10] ZHOU X, WANG C Z, LI S, et al. Research progress of ganoderma lucidum triterpenes. [J]. J Shandong Ins Light Indust(Nat Sci Ed)( 齐鲁工业大学学报 ), 2014, 28(4): 收稿日期 : HPLC 同时测定白花蛇舌草中熊果酸异熊果酸和对香豆酸的含量周燕红, 徐建兰, 赵叶 ( 杭州市中医院中药房, 杭州 ) 摘要 : 目的建立 HPLC 测定白花蛇舌草中熊果酸异熊果酸和对香豆酸的含量方法采用 Diamonsil C 18 ODS (4.6 mm 250 mm,5 μm), 流动相为乙腈 -15 mmol L 1 NH 4 Ac(12 88,pH 3.5), 流速为 1.0 ml min 1, 检测波长为 308 nm, 柱温为 35 结果熊果酸异熊果酸和对香豆酸线性范围分别为 ~2.271 µg(r 2 = ), ~0.309 µg (R 2 = ) 和 ~0.606 µg(r 2 = );3 种成分测定的平均回收率分别为 99.9% (RSD=0.7%),99.0% (RSD=1.7%) 和 101.1% (RSD=0.7%) 结论本法简便准确度高稳定性和重复性好, 可用于白花蛇舌草中指标性成分定量分析和质量控制关键词 : 高效液相色谱法 ; 白花蛇舌草 ; 熊果酸 ; 异熊果酸 ; 对香豆酸中图分类号 :R 文献标志码 :B 文章编号 : (2016) DOI: /j.cnki.issn Simultaneous Determination of Ursolic Acid, Isoursolic Acid and P-coumaric Acid of Hedyotis Diffusa Willd. by HPLC ZHOU Yanhong, XU Jianlan, ZHAO Ye(Dispensary of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou , China) ABSTRACT: OBJECTIVE To establish an HPLC method for the simultaneous determination of ursolic acid, isoursolic acid and p-coumaric acid in Hedyotis diffusa Willd.. METHODS Diamonsil C 18 ODS (4.6 mm 250 mm, 5 μm) was used; mobile phase was acetonitrile and 15 mmol L 1 NH 4 AC(12 88, ph3.5); flow rate: 1.0 ml min 1 ; wavelength: 308 nm; column temperature: 35. RESULTS Three ingredients showed good linear relationships, ursolic acid: µg (R 2 = ), isoursolic acid: µg (R 2 = ) and p-coumaric acid: µg (R 2 = ), with the mean recoveries as 99.9% (RSD=0.7%), 99.0% (RSD=1.7%) and 101.1% (RSD=0.7%), respectively. CONCLUSION This method is simple with high precision, repeatability, and stability, so it can be used to quantitative analysis and quality control of Hedyotis diffusa Willd. KEY WORDS: HPLC; Hedyotis diffusa Willd.; ursolic acid; isoursolic acid; p-coumaric acid 白花蛇舌草具有清热解毒利尿消肿和活血止痛的功效, 广泛应用于多种制剂 80 年代后期因为临床上用于肿瘤的治疗, 用量大增, 药材的供应出现了紧张, 其伪品 ( 水线草松叶耳草等 ) 也逐渐出现于药材市场, 混用程度惊人目前, 中国药典 2015 年版对白花蛇舌草的质量控制没有作者简介 : 周燕红, 女, 主管中药师 Tel: (0571) zyh @163.com 中国现代应用药学 2016 年 8 月第 33 卷第 8 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2016 August, Vol.33 No

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.