出口蜂蜜中大米糖浆的检测方法 液相色谱-质谱法-编制说明-征求意见稿.doc

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1 出口蜂蜜中大米糖浆特征物的检测方法液相色谱 - 质谱 / 质谱法 编制说明 一 标准制定的任务来源及意义 1 任务来源 本标准是根据国家认证认可监督管理委员会下达的任务, 名称为 进出口动 物源性食品中磺胺增效剂残留量的检测方法, 计划编号为 2011B152, 由中华人 民共和国江苏出入境检验检疫局 南京中谱检测有限公司和秦皇岛出入境检验检 疫局负责制定, 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 2 制定标准的意义 蜂蜜掺假问题由来已久, 但一直没有受到普通消费者的警惕 一方面, 掺假 蜂蜜本身对人体危害程度不及其它一些掺假食品 ; 另外一方面, 检测方法的滞后, 导致假蜂蜜横行泛滥 目前在蜂蜜中掺入大米糖浆是一种普遍存在的现象, 但是现有检测标准方法 在鉴定蜂蜜中的大米糖浆都存在一定的困难 为满足出口检验工作需要, 急需建 立一种灵敏 简便 准确适用于出口蜂蜜中大米糖浆的检测方法 二 编制依据 本标准的编制遵循 GB/T 标准化工作导则第 1 部分 : 标准的结构 和编写规则 和 GB/T 标准编写规则第 4 部分 : 化学分析方法 和 SN/T 出品商品中农药 兽药残留量及生物毒素检验方法标准编 写的基本规定 的要求进行编写制订的 三 标准制定过程 本标准起草单位在 2011 年 4 月收到认监委的任务下达文件后, 立刻开始着 手进行标准文本 编制说明和验证工作 本标准起草人通过查询相关资料和文献, 结合大米糖浆生产工艺和已有检测 基础, 建立了蜂蜜中大米糖浆特征物的检测方法 经实验研究验证后, 方法的灵 敏度 特异性和选择性均能满足相应的检测要求

2 四 主要试验技术论证 目前蜂蜜中大米糖浆的检测方法无论国际和国内均无任何报导 在摸索蜂蜜中大米糖浆的检测方法过程中按顺序进行了以下五个方面的工作 ( 一 ) 收集不同来源的大米糖浆进行比对筛选, 找到大米糖浆中的共有特征物质 ( 二 ) 大米糖浆特征物质的色谱和质谱条件优化, 并对所有大米糖浆进行二级图谱确认 ( 三 ) 收集不同蜜源的蜂蜜进行测定, 验证不同蜜源的蜂蜜不含有大米糖浆的特征物质 ( 四 ) 用于定量的大米糖浆标准参照物的确认 ( 五 ) 在不同蜜源蜂蜜中添加不同浓度的大米糖浆特征物进行验证 ( 一 ) 大米糖浆中特征物质的查找和定量用大米糖浆的选择可能收集不同来源的大米糖浆, 最终收集到各类大米糖浆 29 种 来源分为 3 类 :1 企业购买, 包括国内生产糖浆的企业和生产蜂蜜糖浆的企业 ;2 糖浆委托送样 ;3 其他检测机构提供 通过高效液相色谱 - 质谱对收集到的大米糖浆进行筛选, 找出可能的共有特征物质 1 29 种大米糖浆全扫描测定利用高效液相色谱 - 质谱进行全扫描, 全扫描图谱参见图 4-1 至 4-29 图 4-1 1# 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图

3 图 4-2 2# 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 4-3 3# 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 4-4 4# 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 4-5 5# 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图

4 图 4-6 6# 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 4-7 7# 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 4-8 8# 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 4-9 9# 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图

5 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图

6 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图

7 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图

8 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图

9 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图 图 # 大米糖浆全扫描图谱和特征化合物提取离子流图对所有 29 种大米糖浆进行分析, 发现所有收集到的大米糖浆中都有一个化合物在纯正蜂蜜中不存在, 其质核比为 311m/z, 质谱图参见图 4-30 对 29 种大米糖浆中特征物质 311m/z 进行提取离子流图合并, 合并离子流图参见 4-31, 图中可以非常清楚的看到 29 种大米糖浆在固定分析条件下, 确实存在一个共有的

10 质核比为 311m/z 的化合物 图 4-30 特征物质质谱图 图 种大米糖浆特征物质 311m/z 提取离子流合并图 ( 二 ) 特征化合物检测条件的优化 (1) 色谱条件的优化 A) 色谱柱的选择实验发现在油菜蜜 洋槐蜜等不同蜜源的蜂蜜中均或多或少存在一定干扰, 因此在选择色谱柱时, 具有高效分离效果的色谱柱成为首选 实验中选择了不同的品牌的色谱柱, 在固定色谱条件下进行色谱分离, 结果发现使用 Phenomenex Kinetex C 18, 2.7 µm, 100 mm 4.6 mm i.d 的色谱柱可以满意的分离相关的干扰 B) 流动相色选择实验中使用 3 种不同的水相流动相, 包括 10mM 醋酸铵 0.1% 甲酸和纯水流动相 结果发现,3 种不同的流动相在固定流速和梯度配比的条件下, 对特征化合物的保留时间无实质性的影响, 但使用 10mM 醋酸铵 0.1% 甲酸作为水相流动相其特征化合物的信号相应值下降为纯水流动相的 10%~30% 最终选择纯

11 水作为水相流动相使用 (2) 质谱条件的优化对大米糖浆特征化合物进行二级碎片的查找, 在二级全扫描图谱中 ( 参见图 4-32), 发现其主要特征碎片有 2 个, 即 149m/z 和 185m/z, 分别对 2 个碎片进行优化, 优化后的质谱条件如下 : a ) 离子喷雾电压 :5500 V; b ) 气帘气压力 :0.175 MPa; c ) 雾化气压力 :0.280 MPa; d ) 辅助气压力 :0.32 MPa; e ) 离子源温度 (TEM):500 C 定性离子对 定量离子对 去簇电压 碰撞能量 驻留时间参见表 4-1 图 4-32 大米糖浆特征物二级全扫描图谱 表 4-1 待测物定性离子对 定量离子对 锥孔电压 碰撞能量 驻留时间母离子子离子去簇电压碰撞能量驻留时间化合物 (m/z) (m/z) (V) (ev) (sec.) 149.0* 大米糖浆特征物 注 : 表中带 * 的离子为定量离子 (3) 所有 29 种大米糖浆二级质谱的确认在优化后的质谱色谱条件下, 对 29 种大米糖浆进行检测, 对二级质谱碎片和丰度进行确认 所有 29 种大米糖浆中 185m/z 和 149m/z 碎片丰度比在 0.75~ 1.1 之间

12 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 5 (1) of wiff (Turbo Spray) Max. cps e5 1.8e5 1.7e5 1.6e5 1.4e5 1.3e5 1.2e5 1.1e5 9.0e4 8.0e4 7.0e4 6.0e4 4.0e4 3.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 6 (2) of wiff (Turbo Spray) Max. 6.4e5 cps. 6.4e e5 4.5e5 3.5e5 2.5e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 7 (3) of wiff (Turbo Spray) Max. 2.6e5 cps. 2.6e5 2.5e e5 2.3e5 2.2e5 2.1e5 1.9e5 1.8e5 1.7e5 1.6e5 1.4e5 1.3e5 1.2e5 1.1e5 9.0e4 8.0e4 7.0e4 6.0e4 4.0e4 3.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 8 (4) of wiff (Turbo Spray) Max. 2.1e6 cps. 2.1e e6 1.9e6 1.8e6 1.7e6 1.6e6 1.5e6 1.4e6 1.3e6 1.2e6 1.1e6 1.0e6 9.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 9 (5) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.1e6 cps. 1.13e6 1.10e e6 1.00e6 9.50e5 9.00e5 8.50e5 8.00e5 7.50e5 7.00e5 6.50e5 6.00e5 5.50e5 5.00e5 4.50e5 4.00e5 3.50e5 3.00e5 2.50e5 2.00e5 1.50e5 1.00e5 5.00e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱

13 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 10 (6) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.2e6 cps. 1.20e e6 1.10e6 1.05e6 1.00e6 9.50e5 9.00e5 8.50e5 8.00e5 7.50e5 7.00e5 6.50e5 6.00e5 5.50e5 5.00e5 4.50e5 4.00e5 3.50e5 3.00e5 2.50e5 2.00e5 1.50e5 1.00e5 5.00e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 11 (7) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.2e6 cps. 1.24e6 1.20e e6 1.10e6 1.05e6 1.00e6 9.50e5 9.00e5 8.50e5 8.00e5 7.50e5 7.00e5 6.50e5 6.00e5 5.50e5 5.00e5 4.50e5 4.00e5 3.50e5 3.00e5 2.50e5 2.00e5 1.50e5 1.00e5 5.00e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 12 (8) of wiff (Turbo Spray) Max. 9.2e5 cps. 9.0e e5 7.5e5 6.5e5 5.5e5 4.5e5 3.5e5 2.5e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 13 (9) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.1e5 cps. 1.14e5 1.10e e5 1.00e5 9.50e4 9.00e4 8.50e4 8.00e4 7.50e4 7.00e4 6.50e4 6.00e4 5.50e4 5.00e4 4.50e4 4.00e4 3.50e4 3.00e4 2.50e4 2.00e4 1.50e4 1.00e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 14 (10) of wiff (Turbo Spray) Max. 2.0e6 cps. 2.0e e6 1.8e6 1.7e6 1.6e6 1.5e6 1.4e6 1.3e6 1.2e6 1.1e6 1.0e6 9.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱

14 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 15 (11) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.6e5 cps. 1.6e e5 1.3e5 1.2e5 1.1e5 9.0e4 8.0e4 7.0e4 6.0e4 4.0e4 3.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 16 (12) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.1e6 cps. 1.10e e6 1.00e6 9.50e5 9.00e5 8.50e5 8.00e5 7.50e5 7.00e5 6.50e5 6.00e5 5.50e5 5.00e5 4.50e5 4.00e5 3.50e5 3.00e5 2.50e5 2.00e5 1.50e5 1.00e5 5.00e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 17 (13) of wiff (Turbo Spray) Max. cps. 1.04e5 1.00e e4 9.00e4 8.50e4 8.00e4 7.50e4 7.00e4 6.50e4 6.00e4 5.50e4 5.00e4 4.50e4 4.00e4 3.50e4 3.00e4 2.50e4 2.00e4 1.50e4 1.00e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 18 (14) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.2e5 cps. 1.19e5 1.15e e5 1.05e5 1.00e5 9.50e4 9.00e4 8.50e4 8.00e4 7.50e4 7.00e4 6.50e4 6.00e4 5.50e4 5.00e4 4.50e4 4.00e4 3.50e4 3.00e4 2.50e4 2.00e4 1.50e4 1.00e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 19 (15) of wiff (Turbo Spray) Max. 9.8e5 cps. 9.8e5 9.5e e5 8.5e5 7.5e5 6.5e5 5.5e5 4.5e5 3.5e5 2.5e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱

15 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 20 (16) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.2e6 cps. 1.20e e6 1.10e6 1.05e6 1.00e6 9.50e5 9.00e5 8.50e5 8.00e5 7.50e5 7.00e5 6.50e5 6.00e5 5.50e5 5.00e5 4.50e5 4.00e5 3.50e5 3.00e5 2.50e5 2.00e5 1.50e5 1.00e5 5.00e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 22 (18) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.5e6 cps. 1.5e e6 1.3e6 1.2e6 1.1e6 1.0e6 9.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 23 (19) of wiff (Turbo Spray) Max. 2.3e6 cps. 2.3e e6 2.1e6 2.0e6 1.9e6 1.8e6 1.7e6 1.6e6 1.5e6 1.4e6 1.3e6 1.2e6 1.1e6 1.0e6 9.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 25 (21) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.6e5 cps. 1.6e e5 1.3e5 1.2e5 1.1e5 9.0e4 8.0e4 7.0e4 6.0e4 4.0e4 3.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱

16 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 26 (22) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.6e5 cps. 1.6e5 1.6e e5 1.3e5 1.2e5 1.1e5 9.0e4 8.0e4 7.0e4 6.0e4 4.0e4 3.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 27 (23) of wiff (Turbo Spray) Max. 9.8e5 cps. 9.8e5 9.5e e5 8.5e5 7.5e5 6.5e5 5.5e5 4.5e5 3.5e5 2.5e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 28 (24) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.3e6 cps. 1.3e e6 1.2e6 1.2e6 1.1e6 1.1e6 1.0e6 9.5e5 9.0e5 8.5e5 7.5e5 6.5e5 5.5e5 4.5e5 3.5e5 2.5e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 29 (25) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.8e6 cps. 1.8e e6 1.6e6 1.5e6 1.4e6 1.3e6 1.2e6 1.1e6 1.0e6 9.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱

17 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 30 (26) of wiff (Turbo Spray) Max. 2.0e6 cps. 2.0e e6 1.8e6 1.7e6 1.6e6 1.5e6 1.4e6 1.3e6 1.2e6 1.1e6 1.0e6 9.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 31 (27) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.6e6 cps. 1.6e e6 1.4e6 1.3e6 1.2e6 1.1e6 1.0e6 9.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 32 (28) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.3e6 cps. 1.29e6 1.25e6 1.20e6 1.15e6 1.10e6 1.05e6 1.00e6 9.50e5 9.00e5 8.50e5 8.00e e5 7.00e5 6.50e5 6.00e5 5.50e5 5.00e5 4.50e5 4.00e5 3.50e5 3.00e5 2.50e5 2.00e5 1.50e5 1.00e5 5.00e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 33 (29) of wiff (Turbo Spray) Max. 9.9e5 cps. 9.9e e5 9.0e5 8.5e5 7.5e5 6.5e5 5.5e5 4.5e5 3.5e5 2.5e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱

18 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 34 (30) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.4e6 cps. 1.4e e6 1.2e6 1.1e6 1.0e6 9.0e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 35 (31) of wiff (Turbo Spray) Max. 8.5e5 cps. 8.5e e5 6.5e5 5.5e5 4.5e5 3.5e5 2.5e 图 # 大米糖浆 MRM 图谱 表 种大米糖浆特征物质强度一览表 选择离子流强度 选择离子流强度 编号 311m/z>185m/z 311>149m/z 编号 311m/z>185m/z 311>149m/z 1 1.7* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *105

19 ( 三 ) 不同蜜源和不同区域的蜂蜜的分析对国内的包括油菜 洋槐 荆条 山花 芝麻蜜 苜蓿蜜 杂花蜜 椴树蜜 荔枝蜜 葵花蜜 白蜜在内的 11 种不同蜜源的蜂蜜进行测试, 没有发现大米糖浆中的特征物 对国外实验室寄送来的来自欧洲 美洲和亚洲其它国家的蜂蜜进行测定, 也未发现大米糖浆中的特征物 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 61 (58) of wiff (Turbo Spray) Max. 180 cps 图 4-62 油菜蜜 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 19 (16) of wiff (Turbo Spray) Max. 140 cps 图 4-63 洋槐蜜 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 30 (27) of wiff (Turbo Spray) Max cps. 2.5e4 2.4e4 2.3e4 2.2e4 2.1e4 1.9e4 1.8e4 1.7e4 1.6e4 1.5e4 1.3e4 1.1e 图 4-64 荆条蜜 MRM 图谱

20 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 46 (43) of wiff (Turbo Spray) Max. 3.5e4 cps. 1.25e5 1.20e5 1.15e5 1.10e5 1.05e5 1.00e5 9.50e4 9.00e4 8.50e4 8.00e4 7.50e4 7.00e4 6.50e4 6.00e4 5.50e4 5.00e4 4.50e4 4.00e4 3.50e4 3.00e4 2.50e e4 1.50e4 1.00e 图 4-65 山花蜜 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 50 (47) of wiff (Turbo Spray) Max cps. 2.4e4 2.3e4 2.2e4 2.1e4 1.9e4 1.8e4 1.7e4 1.6e4 1.5e4 1.3e4 1.1e 图 4-66 芝麻蜜 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 51 (48) of wiff (Turbo Spray) Max cps 图 4-67 椴树蜜 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 55 (52) of wiff (Turbo Spray) Max cps. 2.2e4 2.1e4 1.9e4 1.8e4 1.7e4 1.6e4 1.5e4 1.3e4 1.1e 图 4-68 杂花蜜 MRM 图谱

21 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 58 (55) of wiff (Turbo Spray) Max cps. 2.3e4 2.2e4 2.1e4 1.9e4 1.8e4 1.7e4 1.6e4 1.5e4 1.3e4 1.1e 图 4-69 荔枝蜜 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 59 (56) of wiff (Turbo Spray) Max cps. 1.8e4 1.7e4 1.6e4 1.5e4 1.3e4 1.1e 图 4-70 苜蓿蜜 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 27 (24) of wiff (Turbo Spray) Max cps 图 4-71 葵花蜜 MRM 图谱 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 20 (17) of wiff (Turbo Spray) Max cps. 1.3e4 1.1e 图 4-72 白蜜 MRM 图谱

22 ( 四 ) 用于定量的大米糖浆标准参照物的确认和定量下限的确认由于目前无法通过精确质量数在已知化合物中找到对应的标准物质, 需要通过寻找相关科研机构合作并通过一系列的手段, 诸如色谱 - 质谱 核磁等化学手段的验证才能最终确认 而这个过程有较大的不确定性, 需要较长的时间, 花费的费用也比较高 因此暂时在 29 种大米糖浆中挑选一种作为标准参照物进行阴阳性的判断, 被挑选的大米糖浆需要符合以下 3 个条件 (1) 其糖分组成和同位素值接近纯正蜂蜜糖分组成 (2) 特征物强度适中 (3) 获取糖浆质量 ( 量足够多 ) 适中 按照上述 3 个条件进行筛选, 最终选择 28# 糖浆作为最终参照物使用 图 4-72 大米糖浆参照物液相色谱 - 同位素质谱图 图 4-73 纯正蜂蜜液相色谱 - 同位素质谱图 目前暂时将蜂蜜中大米糖浆的检测低限定为 5%, 其原因有 2 个 :

23 (1) 从掺假成本来说,5% 的检测低限完全可以有效防止恶意掺假 (2) 中国养蜂行业中普遍存在当蜜源不充足或蜜蜂越冬时候, 蜂农喂食大米糖浆或白糖水等 当检测低限过低, 有可能导致打击范围过大, 引起不必要的恐慌 五 方法的主要技术指标 1 线性范围取不同浓度的标准溶液, 按本标准确定条件分别进样, 浓度在 0.1 mg/ml~ 20 mg/ml 之间, 以峰面积对浓度作线性回归, 其浓度与响应值有良好的线性关系, 相关性 R 2 为 以上 Untitled 7 (SM-2): "Linear" Regression ("1 / x" weighting): y = 5.55e+003 x e+003 (r = ) 5.8e5 5.5e5 4.5e5 3.5e5 Area, counts 2.5e Concentration, mg/g Untitled 7 (SM-1): "Linear" Regression ("1 / x" weighting): y = 5.68e+003 x e+003 (r = ) 5.7e5 5.5e5 4.5e5 3.5e5 Area, counts 2.5e Concentration, mg/g 2 方法回收率和精密度数据在油菜 洋槐 荆条 山花 芝麻蜜 苜蓿蜜 椴树蜜 葵花蜜和白蜜中分别添加不同浓度水平 (2%,5% 和 10%), 上述添加水平 5 次平行, 测定回收率和室内精密度 实验内数据表明, 方法的总体平均回收率 97.3%~109.5%, 方法的相对标准偏差为 2.2 %~7.2 %, 实验内数据参见表 5-1

24 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 30 (jintiao-5%-1) of wiff (Turbo Spray) Max. 2.4e4 cps. 2.4e4 2.3e e4 2.1e4 1.9e4 1.8e4 1.7e4 1.6e4 1.5e4 1.3e4 1.1e 图 5-1 荆条蜜添加 5% 大米糖浆 MRM 图 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 36 (zhima-5%-1) of wiff (Turbo Spray) Max. 2.1e4 cps. 2.1e e4 1.8e4 1.7e4 1.6e4 1.5e4 1.3e4 1.1e 图 5-2 芝麻蜜添加 5% 大米糖浆 MRM 图 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 43 (shanhua-5%-2) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.7e4 cps. 2.3e4 2.2e4 2.1e4 1.9e4 1.8e4 1.7e e4 1.5e e4 1.1e 图 5-3 山花蜜添加 5% 大米糖浆 MRM 图 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 48 (kuihua-5%-1) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.5e4 cps. 1.5e e4 1.1e 图 5-4 葵花蜜添加 5% 大米糖浆 MRM 图

25 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 54 (muxu-5%-1) of wiff (Turbo Spray) Max. 2.2e4 cps. 3.6e4 3.4e4 3.2e4 3.0e4 2.8e4 2.6e4 2.4e4 2.2e e4 1.6e 图 5-5 苜蓿蜜添加 5% 大米糖浆 MRM 图 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 60 (youcai-5%-1) of wiff (Turbo Spray) Max. 2.3e4 cps. 2.8e4 2.6e4 2.4e e4 1.8e4 1.6e 图 5-7 白蜜添加 5% 大米糖浆 MRM 图 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 72 (duanshu-5%-1) of wiff (Turbo Spray) Max. 1.9e4 cps. 1.9e e4 1.7e4 1.6e4 1.5e4 1.3e4 1.1e 图 5-8 椴树蜜添加 5% 大米糖浆 MRM 图 XIC of +MRM (10 pairs): 311.0/149.0 Da ID: SM-1 from Sample 66 (yanghuai-5%-1) of wiff (Turbo Spray) Max. 4.6e4 cps. 4.6e e4 4.2e4 4.0e4 3.8e4 3.6e4 3.4e4 3.2e4 3.0e4 2.8e4 2.6e4 2.4e4 2.2e4 1.8e4 1.6e 图 5-9 洋槐蜜添加 5% 大米糖浆 MRM 图洋槐

26 六 结论综合上述情况, 本方法可满足蜂蜜中大米糖浆的检测, 方法的检测低限 回 收率及精密度等各项技术指标均符合 GB/T 标准化工作导则第 1 部分 : 标准的结构和编写规则 GB/T 标准编写规则第 4 部分 : 化学分 析方法 SN/T 出口商品中农药兽药残留量及生物毒素检验方法标准 编写的基本规定 的要求 七 参考文献 1 GB/T 标准化工作导则第 1 部分 : 标准的结构和编写规则 2 GB/T 标准编写规则第 4 部分 : 化学分析方法 3 SN/T 出口商品中农药 兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定

27 表 5-1 实验室内不同蜜源蜂蜜添加回收数据 基质洋槐蜜油菜蜜苜蓿蜜葵花蜜芝麻蜜山花蜜荆条蜜椴树蜜白蜜 添加水平 (%) 测定值 (%) 平均值 (%) 平均回收率 (%) RSD(%) % 2.0% 2.0% 1.9% 1.9% 1.9% 97.3% 3.7% % 4.9% 5.1% 5.0% 5.4% 5.1% 102.6% 3.5% % 19.1% 21.1% 21.0% 19.7% 20.1% 100.5% 4.4% % 1.8% 2.1% 2.0% 2.0% 2.0% 101.3% 5.2% % 4.5% 4.9% 4.8% 5.1% 4.9% 97.6% 4.8% % 21.5% 21.1% 19.9% 19.5% 20.6% 103.2% 4.3% % 1.9% 2.1% 1.9% 1.9% 1.9% 97.5% 5.7% % 5.3% 5.3% 5.5% 5.4% 5.3% 105.5% 4.6% % 19.2% 20.6% 19.4% 19.5% 19.6% 98.0% 2.8% % 1.9% 2.0% 2.1% 1.9% 2.0% 99.1% 5.0% % 5.3% 5.2% 4.7% 5.0% 5.0% 99.9% 5.6% % 20.1% 20.6% 18.8% 19.4% 19.8% 99.0% 3.6% % 2.1% 2.3% 2.1% 2.1% 2.1% 106.3% 4.6% % 5.2% 4.8% 5.1% 5.0% 5.0% 100.2% 3.5% 2 2% 21.0% 19.2% 18.7% 18.8% 19.5% 97.6% 4.8% % 1.9% 2.1% 2.0% 2.3% 2.1% 103.2% 7.2% % 5.2% 5.0% 4.9% 5.4% 5.1% 102.2% 4.0% % 19.0% 20.3% 20.9% 18.7% 19.8% 98.8% 4.6% % 2.2% 2.1% 2.3% 2.2% 2.2% 109.5% 2.3% % 5.2% 4.7% 5.3% 5.4% 5.1% 101.4% 5.8% % 20.8% 19.4% 2% 19.5% 19.9% 99.4% 2.9% % 2.2% 2.2% 2.2% 2.1% 2.2% 109.8% 2.2% % 5.1% 5.3% 5.3% 4.7% 5.1% 101.7% 4.8% % 21.0% 20.1% 19.3% 19.3% 2% 10% 3.7% % 2.3% 2.1% 2.1% 2.1% 2.2% 108.0% 4.4% % 5.2% 5.1% 5.3% 5.1% 5.1% 101.7% 3.9% % 19.1% 20.4% 19.8% 19.2% 19.6% 97.8% 2.8%

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