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1 74 Chinese Journal of Information on TCM Jan.04 Vol. No. 加速溶剂萃取法测定大枣中有机氯 及拟除虫菊酯类农药残留量 黄晓会,刘艳,张健 上海交通大学附属新华医院,上海 0009 摘要 目的 建立快速同时测定大枣中 0 种有机氯及拟除虫菊酯农药残留的气相色谱测定方法 方法 样 品用加速溶剂萃取法(ASE)萃取,以乙腈(%乙酸)为提取溶剂,温度 00,静态萃取 min,循环 次,提取液用 Florisil 硅土柱净化,乙酸乙酯-正己烷( 8,V/V)洗脱,采用 HP- 与 DB70 毛细管色谱柱双柱定性,以 HP- 毛细管柱定量,GC-ECD 检测器进行检测 结果 样品 水平添加时的 0 种有机氯及拟除虫菊酯农药平均 回收率为 7.4% 0.9%,RSD 为.% 4.%,符合农药残留分析的要求 结论 本方法仪器简单,使用范围广, 重复性及净化效果好,可用于大枣中 0 种有机氯及拟除虫菊酯类农药残留量检测 关键词 大枣 气相色谱法 有机氯农药 拟除虫菊酯农药 DOI 0.969/j.issn 中图分类号 R84. 文献标识码 A 文章编号 00-04(04) Determination of Organochlorine and Pyrethroid Pesticides Residues in Zigyphussp by Accelerated Solvent Extraction HUANG Xiao-hui, LIU Yan, ZHANG Jian (Xinhua Hospital, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 0009, China) Abstract Objective To establish a gas chromatography method for the determination of 0 organochlorine and pyrethroid pesticides residues in Zigyphussp. Methods The organochlorine and pyrethroid pesticides were extracted from Zigyphussp with solvents of acetonitrile (% acetic acid) by accelerated solvent extraction (ASE) for min at 00. Then the extracts were cleaned up by alumina neutral-florisil column and eluted by mixed solvents of ethyl acetate and hexane ( 8, V/V). The extract was separated by HP- and DB70 capillary dual-column and detected by electron-capture detector. Results The average recoveries and RSD ranged from 7.4% to 0.9% and.% to 4.% respectively, at three spiked mixed organochlorine and pyrethroid levels. Conclusion The method has good separation and repeatability, and can be used in determination of organochlorine and pyrethroid pesticide residues in Zigyphussp. Key words Zigyphussp gas chromatography organochlorine pesticides pyrethroid pesticides 大枣(Zigyphussp)又名红枣 干枣 枣子,起源 于中国,具有补虚益气 养血安神 健脾和胃等作用, 果蔬 [-4] [] [6] 农产品 中药材 中检测出来,而大枣的 种植期长,易受其农药的污染 为药食两用中药 在大枣种植过程中,需要通过喷洒 0 年 月 日,农业部与原卫生部联合发布 农药来防治病虫害的发生,有机氯及拟除虫菊酯类农 了食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量, 药均是广谱杀虫剂,广泛用于杀灭农业害虫,曾是各 并将于 04 年 月 日起正式实施 而此前涉及食 国杀虫剂使用最广泛的农药 有机氯农药因其化学性 品中农药最大残留的 6 项国家标准和 0 项农业行业 质稳定,脂溶性大,残留期长,残留量高,易在脂肪中 标准将同时废止 新的标准制定了 种农药在 0 蓄积,拟除虫菊酯类使用后的毒副作用越来越明显, 大类农产品和食品中的 9 个残留限量,较原有标准 [] 均可造成慢性中毒,严重危害人体健康 世界各国已 [] 在 0 世纪 70 年代末禁止使用,但目前仍然在土壤 增加了 400 余个 这就对农药残留的测定方法提出 了更高的要求,向着快速 准确 安全 自动化的方 向发展 加速溶剂萃取法(ASE)突出的优点是有机溶 基金项目 上海市科学技术委员会科研计划(DZ9700) 剂用量少 萃取速度快,回收率高,以自动化方式进行 通讯作者 张健, zj_boss@6.com 萃取,使用多元混合溶剂时,仪器自动混合,降低了对

2 04 年 月第 卷第 期中国中医药信息杂志 7 操作者的毒性 本研究采用 ASE 萃取 Florisil 硅土柱净化及气相色谱检测方法, 建立大枣中 0 种有机氯及拟除虫菊酯类农药残留量的测定方法, 为大枣的质量控制提供依据 仪器与试药 Agilent-6890 气相色谱仪 ;Agilent 电子捕获检测器 (ECD);Agilent-G4A 自动进样器 ; Agilent-DB70(0 m 0. mm 0. μm) Agilent-HP-(0 m 0. mm 0. μm) 毛细管色谱柱 ;ASE-0 加速溶剂萃取仪 ( 美国 Dionex 公司 ), 萃取池体积 4 ml JSP-70A 高速万能粉碎机 ( 浙江省永康市金穗机械制造厂 ),PL0/0 电子天平 ( 瑞士梅特勒 - 托利多仪器有限公司 ),T-0 超声波清洗器 ( 北京天鹏有限公司 ),LABORATA-4000 旋转蒸发仪 (Heidolph),SHB-B 型循环水式多用真空泵 ( 郑州长城科工贸有限公司 ) 等 正己烷 ( 色谱纯 Fisher 公司 ), 乙酸乙酯 无水硫酸钠 正己烷 ( 分析纯, 南京化学试剂有限公司 ), 乙腈 ( 分析纯, 南京化学试剂有限公司 ), 二氯甲烷 ( 分析纯, 南京化学试剂有限公司 ),Florisil 硅土柱 (000 mg,6 ml, 美国 Agilent 公司 ), 农药标准品 ( 德国 Dr.Ehrenstorfer 公司, 美国 Chem Service 公司, 德国 Riedel-deHaen 公司, 美国 Accustandard 公司, 农业部环境保护科研监测所 ), 纯度 >99.0% 大枣样品来源及产地见表 表 大枣样品来源及产地 编号 来源 产地 上海新华医院中药房 山东 上海新华医院中药房 新疆 亳州药市 内蒙古 4 亳州药市 河南 安国药市 宁夏 6 安国药市 内蒙古 7 上海三益堂药店 甘肃 8 上海同仁堂大药房 河北 9 上海健新药房 甘肃 0 上海瑞金医院中药房 山东 方法. 样品溶液的制备精确称取各样品 4.0 g 和硅藻土.0 g( 分散剂的作用 ) 混匀后装入加速溶剂萃取仪的 4 ml 萃取池中, 所用溶剂为乙腈 (% 乙酸 ), 温度 00, 静态萃取时间 min, 冲洗体积 60%, 氮气吹扫 60 s, 循环 次, 收集全部提取液, 加上系统清洗液, 总计每个样品用溶剂约 60 ml, 耗时 min 提取液于 40 水浴下旋转蒸发至近干, 加入 ml 正己烷溶解, 将 Florisil 柱置于固定架上, 加约 ml 高度的无水硫酸钠, 用 ml 正己烷预淋洗, 再用 0 ml 正己烷 - 乙酸乙酯 (8 ) 淋洗液淋洗, 在淋洗液近干时快速移入样品浓缩液, 用 0 ml 茄型瓶接收淋出液, 用 ml 淋洗液多次充分洗脱茄型瓶并转入柱中, 收集洗脱液 0 ml, 于 40 水浴旋转浓缩至近干 加入 ml 正己烷溶解, 作为样品溶液备用. 色谱条件的确定弹性石英毛细管柱 (0 m 0. mm 0. μm) HP- 与 DB70 双柱定性, 进样口温度 0, 不分流进样 升温程序 : 初始温度 0 保持 min, 以 8 /min 速度升温至 0 保持 min, 以 4 /min 速度升温至 70, 保持 4 min, 再以 0 /min 速度升温至 90, 保持 0 min 总分析时间:6.7 min 检测器温度 :00 流速: ml/min 恒流模式 进样量 : μl 标准品色谱图见图 方法学研究. 色谱柱的选择色谱柱是色谱分离的核心, 一支稳定 高效的色谱柱对建立普适性强 重现性好的方法是必不可少的, 而农药残留一般用的是弹性石英毛细管柱, 由于研究的农药种类较多, 部分农药的沸点相似, 因此选定 个不同极性的毛细管色谱柱进行双柱定性 本试验选用 HP- 及 DB70 毛细管柱定性,HP- 柱定量. 试验设计 ASE 萃取过程的主要影响因素是压力和温度, 在一定压力下, 升高温度可提高萃取效率 另一影响因素是静态萃取时间, 即一定温度压力下萃取过程持续的时间 ( 一般小于 0 min), 静态萃取时间越长, 萃取效率越高 对难提取的样品可通过增加静态萃取循环次数的方式提高萃取效率, 多数药物 个循环即可得到较高的回收率 故应对提取溶剂 静态萃取时间 循环次数 提取温度等因素进行考察 基于文献调查及对农药溶解性等各方面的考虑, 初步选择乙腈 (% 乙酸 ) 二氯甲烷 - 丙酮 ( ) 环己烷 - 乙酸乙酯 ( ) 4 种溶剂作为提取条件选择的溶剂种类 对提取溶剂 静态萃取时间 循环次数 提取温度 4 种因素进行优化试验设计 试验方案见表

3 76 Chinese Journal of Information on TCM Jan.04 Vol. No. Hz Hz 四氯硝基苯 ;.α- 六六六 ;. 六氯苯 ;4. 五氯甲氧基苯 ;. 氯硝胺 ; 6. 西玛津 ;7. 莠去津 ;8.β- 六六六 ;9.γ-六六六;0. 五氯硝基苯 ;.δ- 六六六 ;. 百菌清 ;. 五氯苯胺 ;4. 乙烯菌核利 ;. 七氯 ; 6. 甲基五氯苯基基硫醚 ;7. 艾试试剂 ;8. 三氯杀杀螨醇 ;9. 氯肽酸 ;0. 三唑酮 ;. 环氧七七氯 ;. 三唑醇 A;. 三唑醇 B;4. 腐霉利 ;. 反式氯丹 ;6.pp -DDD; 7.α- 硫丹 ; 8. 顺式氯丹 ; 9. 反式九氯 ; 0. 狄试剂 ;.pp -DDE;.op -DDT;. 异狄狄试剂 ;4. 溴虫腈 ;.β- 硫丹 ;6.pp -DDT; 7. 硫丹硫酸盐 ; 8. 丙环唑 ;9. 联苯菊酯 ;40. 甲氰菊酯 ; 4. 三氯杀螨砜 ;4. 灭蚁灵 ; 4. 功夫菊酯 ; 44. 顺式氯菊酯 ;4. 反式氯菊酯 ;46. 氯 氰菊酯 ;47. 氟氰氰戊菊酯 ;48. 氰戊菊酯 ;49. 氟胺氰菊酯 ; 0. 溴氰菊酯 图 不同色色谱柱条件下 0 种有机氯农药药及其异构体标准准色谱图 试验号 0 提取溶剂 二氯甲烷 - 丙酮 ( ) 二氯甲烷 - 丙酮 ( ) 二氯甲烷 - 丙酮 ( ) 4 环己烷 - 乙酸乙酯 ( ) 90 环己烷 - 乙酸乙酯 ( ) 00 6 环己烷 - 乙酸乙酯 ( ) 0 7 乙腈 (% 乙酸 ) 8 乙腈 (% 乙酸 ) 9 乙腈 (% 乙酸 ) 0 0 A 0 B 注 :A.HP- 柱 ;B.DB70 柱 表 提取取方法正交试验验方案 温度 ( ) 静态萃取 时间 (min) t/min 循环次数. 提取方法与结结果精确确称量.0 g 大枣共 份 ( 其中 份平行, 同时做空白和和基质添加标标准工作溶溶液各 份 ), 加入 00 μl 浓度为 400 μg/l 的农药标准品品溶液, 混匀匀过夜 按照正交试验验设计提取后, 再按照. 项下下方法制备样品, 按. 项下条件测定, 根据所得峰峰面积计算回收率, 结果显示, 大枣经 40 ml 乙腈 (% 乙酸 ) 在 00 静态萃取 min 次循环 氮氮吹 90 s 冲洗体积为 60% 时, 提取的杂质较较少, 平均回回收率基本在 87.4%, 而其他提取取系统均不符符合农药残残留测定回收率在 7% %~% 之间间的要求.4 标准溶液的配配备与标准曲曲线的绘制精密密称取 0 种农药对照照品适量, 用正己烷制成 μg/ml 的标准储备备溶液, 取标标准储备溶溶液 0.08 ml, 置 0 ml 容量瓶中, 用正己烷 ( 色谱级 ) 稀释至刻度, 摇 匀, 得 40 μg/l 的混混合对照品储储备液 将标标准储备液用正己烷 ( 色谱级 ) 稀释, 配制成质量浓度分分别为 μg/kg 的标准溶液, 按. 项下下色谱条件件进行 GC-ECD 测定 以峰面积进进行回归计计算, 得相应应农药的回归归方程, 各农药在 0.0~4 μg 范围内呈良良好的线性关关系, 均 r > 精密度与灵敏敏度取 80 μg/l 混合标准品溶溶液重复进样 6 次, 测得各农药的 RSD 值在.0%~.4% 之间, 说明明仪器精密度良好 根根据大枣基质工作溶液液各农药的信噪比, 以 倍信噪比比计算各农药药的检出限 (LOD) 在. ~4.6 μg/l 之间,0 倍信噪比计计算定量限 (LOQ) 在.~.8 μg/l 之间 结结果见表.6 重复性精密密称定同一大大枣样品 9 份, 按. 项下方法 制备样品, 按. 项下条件件进行测定, 计算各农药的 RSD 均在.8%~8.9% 之间, 方法的重复复性良好.7 准确确度准确确称取大枣枣样品.0 g, 分别添加 μg/kg 个水平平浓度混合标标准品溶液 ( 每个水平做 6 个平行 ), 然后按. 项下方方法制备样品, 按. 项下条件件进行测定, 计算加样回收率, 结果见表 个水平的的回收率均在 7.4%~0.9% 之间,RSD 均在.%~4.% 之间, 符合农药残残留测定的要要求.8 样品含量测定按. 项下下条件检测 0 批样品, 并以外标法定量, 结果见表

4 04 年 月第 卷第 期中国中医药信息杂志 77 表 大枣中农药标准品的加样回收率 RSD LOD 及 LOQ(n =6) 编号 农药 0 μg/kg 80 μg/kg 60 μg/kg LOD LOQ 回收率 (%) RSD(%) 回收率 (%) RSD(%) 回收率 (%) RSD(%) (μg/l) (μg/l) 四氯硝基苯 α-bhc 六氯苯 五氯甲氧基苯 氯硝胺 西玛津 莠去津 β-bhc γ-bhc 五氯硝基苯 δ-bhc 百菌清 五氯苯胺 乙烯菌核利 七氯 甲基五氯苯基硫醚 艾试剂 三氯杀螨醇 氯肽酸 三唑酮 环氧七氯 三唑醇 A 三唑醇 B 腐霉利 反式氯丹 pp -DDD α- 硫丹 顺式氯丹 反式九氯 狄试剂 pp -DDE op -DDT 异狄试剂 溴虫腈 β- 硫丹 pp -DDT 硫丹硫酸盐 丙环唑 联苯菊酯 甲氰菊酯 三氯杀螨砜 灭蚁灵 功夫菊酯 顺式氯菊酯 反式氯菊酯 氯氰菊酯 氟氯戊菊酯 氰戊菊酯 氟胺氰菊酯 溴氰菊酯

5 78 Chinese Journal of Information on TCM Jan.04 Vol. No. 表 大枣样品中农药残留量测定结果 (μg/kg,n =) 序号 农药 样品编号 四氯硝基苯 六氯苯 五氯甲氧基苯 氯硝胺 莠去津 五氯硝基苯 α-bhc γ-bhc 甲基五氯苯基硫醚 艾试剂 三氯杀螨醇 三唑酮 溴虫腈 腐霉利 pp -DDD pp -DDE 丙环唑 功夫菊酯 氯氰菊酯 氟氯戊菊酯 氰戊菊酯 讨论本研究建立了以 ASE 提取, 乙腈 (% 乙酸 ) 为提取溶剂, 通过 Florisil 硅土柱色谱净化, 乙酸乙酯 - 正己烷 ( 8,V/V) 洗脱,HP- 与 DB70 毛细管色谱柱双柱定性, 采用对卤代烃有特殊选择性的 ECD 检测器检测大枣中 0 种有机氯及拟除虫菊酯类农药残留, 以外标法定量, 个水平的添加回收率分别为 7.4%~ 0.% 7.9%~0.4% 74.%~0.9%, 均 RSD< %, 精密度高, 稳定性好 此方法可以同时测定 0 种农药, 适用性广泛, 并对其他样品中农药残留的研究具有一定的参考价值 参考文献 : [] 张曙明, 郭怀忠, 陈建民. 甘草中有机氯类农药残留量的毛细管气相色 谱测定 [J]. 药学学报,000,(8): [] 马瑾, 邱兴华, 周永章等湛江市土壤有机氯农药残留状况及空间分布特征 [J]. 地理学报,00,6():0-. [] 孙震, 顾亚萍, 钱和. 果蔬中农药残留分析检测技术的发展 [J]. 食品科技,007():-9. [4] 赵丽丽, 纪淑娟, 刘忠. 快速检测黄瓜种有机磷农药残留的方法 [J]. 食品工业科技,00,(): [] 刘开华, 邢淑婕. 小麦中胆碱酯酶的提取及其在蔬菜农药残留检测中的应用研究 [J]. 食品科技,007():7-40. [6] 郝丽丽, 薛健. 银杏叶中 8 中有机氯农药的多残留分析 [J]. 分析化学, 006,6():-4. ( 收稿日期 : ) ( 修回日期 :0-07-, 编辑 : 陈静 )

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print p 真 (3Cx, 0535-(388435 第 1 页 - w 5 页 1 戊菌隆 0.0125 OI/MI 4//T 19(48-200( :1 2 甲拌磷 0.00(3 OI/MI 4//T 19(48-200( :1 3 k 氯硝基苯 0.0125 OI/MI 4//T 19(48-200( :1 4 地虫硫磷 0.00(3 OI/MI 4//T 19(48-200( :1 5 艾氏剂 0.0125

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