前言 ݭ ᅂ੨ ዃ ଉ 通过与常规一维液相色谱的比较 证明了二 维液相色谱 (D-LC) 能够大大提高分离性能 这在分析复杂样品时非常重要 原则上 在 ᅃ ॠ ഗ DŽ Dž ᅃ ዹ 验则由一维色谱开始 对一维色谱柱中的洗 ԭ 脱液进行采样 然后将其进样至二维色谱柱 ଉ 中进行进一步分析 分离行为主要由

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1 Agilent 90 Infinity 多中心切割二维液相色谱解决方案 技术概述 作者 Stephan Buckenmaier 安捷伦科技有限公司德国瓦尔特布隆 摘要本技术概述介绍了与一维液相色谱相比,Agilent 90 Infinity 多中心切割二维液相色谱解决方案显著提高了分离性能, 并将目标物中心切割分析提升到了更高的水平 创新性的接口技术有助于在运行二维循环时实现一维组分的驻留 通过这种方式可以将多个一维峰在较高频率下进行中心切割, 以此得到复杂样品中目标化合物的详细信息 Agilent 90 Infinity 多中心切割二维液相色谱解决方案具有如下特点 : 测定复杂样品中目标化合物的卓越分离性能 进行第二维分析时实现多中心切割驻留的创新性技术 方法开发及数据分析中直观的用户帮助 确保结果可靠性的自动化操作 A B

2 前言 ݭ ᅂ੨ ዃ ଉ 通过与常规一维液相色谱的比较 证明了二 维液相色谱 (D-LC) 能够大大提高分离性能 这在分析复杂样品时非常重要 原则上 在 ᅃ ॠ ഗ DŽ Dž ᅃ ዹ 验则由一维色谱开始 对一维色谱柱中的洗 ԭ 脱液进行采样 然后将其进样至二维色谱柱 ଉ 中进行进一步分析 分离行为主要由选择性 差异主导 在理想情况下 当第一维中的分 线二维液相色谱系统包括通过二维进样器连 接的两台独立 LC 仪器 而二维液相色谱实 ᄣഗ ዹ ᅃ ԭ ॠ ഗ 离机制与第二维正交时 分离能力将为两个 维度各自分离能力的乘积 系统中最常用的工具为交替式双定量环接 口 图 展示的安捷伦 位/ 通双阀专为 二维液相色谱应用而开发 有助于形成对称 流路 从设计理念上看 这款阀最大限度减 ݭ ᅂ੨ ዃ ଉ 少了二维色谱柱进样口的压力波动 这种波 动在切换时不可避免 因而大大延长了色 谱柱寿命 二维液相色谱从阀处于位置 ᅃ ॠ ഗ DŽ Dž 时开始 此时一维洗脱液流经定量环 蓝 色流路 将阀切换到位置 后可将定量 ᅃ ዹ 环 中的样品进样至二维循环中 二维分离 一经完成后即可进样定量环 中的样品 随 ԭ ଉ 后再将这一过程重复进行 ዹ ᄣഗ ᅃ ԭ ॠ ഗ 图. 二维液相色谱系统示意图 其中以蓝色显示第一维的模块和流路 以红色显示第二维的模块和流路 图 中通过安捷伦 位/ 通双阀将第一维和第二维相互连接 此双定量环接口处于位置 上图 和位置 下 图 时如图所示

3 二维液相色谱可以分为两种主要的操作类型, 即全二维和中心切割 每种模式的应用均取决于任务类型 全二维液相色谱主要用于分析组学类应用中发现的高度复杂的未知混合物 天然产物以及生物大分子 它的任务是收集尽可能多的信息 因此, 应对一维色谱柱中洗脱出的每个一维峰 ( 通常为全部一维洗脱液 ) 进行采样, 并将其转移至第二维中 采样应频繁进行, 以避免在第一维中成功分离的组分发生再次混合 达到这些条件需要运行具有快速梯度 短色谱柱以及高流速二维和低流速一维的典型二维液相色谱, 因为二维循环的持续时间通常与采样时间相等 中心切割二维液相色谱的用途与全二维色谱不同, 其目的在于仅测定高度复杂样品中具有代表性的一种或少数几种目标化合物 如图 所示, 仅取一维峰的一个特定组分在第二维中进行再分析 如此打破了采样时间和二维循环之间的连接, 使两个维度均可在最佳条件下运行 使用更长的二维梯度以及具有更高分离效率的色谱柱通常可以获得比全二维模式更好的色谱性能, 并且无需降低第一维的流速 然而, 在这种条件下获得的色谱质量的提高需要付出一定代价, 那就是可能使某些信息丢失 例如, 图 中的示意图表明, 在切割 和切割 的二维循环过程中分别丢失了橙色 黄色和蓝色的一维峰 插图则表明绿色峰中包含更多化合物 多中心切割二维液相色谱 本技术概述介绍了安捷伦多中心切割二维液相色谱解决方案 此方案通过在运行二维循环时驻留多个切割组分而避免了数据丢失 如图 所示, 对每个一维峰进行中心切割, 并且较高频率的采样实现了对绿色峰的详细检测 图. 中心切割二维液相色谱的图解说明 图. 多中心切割二维液相色谱的图解说明

4 新型接口技术可支持驻留操作 图 展示了一种配置, 其中的峰驻留组件各固定有 个进样定量环, 取代了双定量环接口中的进样定量环 多中心切割接口提供了 个定量环位置 二维液相色谱的应用示例展示了 : 可显著简化方法设置与数据评价的二维液相色谱软件 详尽测定多个目标化合物的常规流程 确保结果重现性和正确性的功能 二维液相色谱定量性能 方法设置和实验 实验通过 Agilent OpenLAB CDS 化学工作站版 (C.0.0 版 ) 控制的 Agilent 90 Infinity 二维液相色谱解决方案采集数据 第一维为 0 C 溶剂 A 为 0.% 的甲酸水溶液, 第一维系统包括 : 溶剂 B 为甲醇 (MeOH) 采用 B 在 0 min 内由 0% 升至 00% 的梯度进行洗脱, 流 Agilent 90 Infinity 四元泵速为 00 µl/min (G0A) 或二元泵 (G0A) 第二维 Agilent 90 Infinity 自动进样器第二维系统使用 Agilent 90 Infinity 二元 (GA) 泵 (G0A), 这款泵用于控制多中心切割 Agilent 90 Infinity 柱温箱二维液相色谱工作流程 系统采用 Agilent (GC) ZORBAX Bonus RP,0. mm,. µm Agilent 90 Infinity 二极管阵列检色谱柱, 柱温为 0 C 采用配备 0 mm 测器 (GA), 配备 0 mm 流通池 ( 部件号 G-000) 或 0 mm( 部件 (G-00) 号 G-000) 最大光强卡套式流通池的 Agilent 90 Infinity 二极管阵列检测器检测器以 Hz 的采集速率描绘 nm 处 (GA) 以 0 Hz 的采集速率描绘 nm 的紫外图 系统采用 Agilent ZORBAX SB 处的紫外图 C,00. mm,. µm 色谱柱, 柱温 A 样品为二维液相色谱校验样品 ( 部件号 90-9) 的稀释液, 其中含有浓度均为 mg/ml 的 种小分子量化合物 : 莠去津 绿麦隆 脱乙基阿特拉津 去乙基特丁津 敌草隆 环嗪酮 利谷隆 吡唑草胺 噻唑隆 溴谷隆 甲氧隆 硝苯地平 尼莫地平 扑草净 另丁津以及特丁津 在分析前使用一维流动相 (A:B,0:0,v/v) 制备稀释液 B 图. 带有固定 个进样定量环的两个峰驻留组件 (A 和 B) 的接口

5 采用多中心切割二维液相色谱接口的所有实验如图 所示, 多中心切割二维液相色谱升级工具包 (GA) 中所包括的 位 / 通阀与 位 / 通双阀 (0-0) 相连 每个 位阀均连接一组 个预安装的 0 µl 进样定量环 如此形成了具有 个定量环位置的峰驻留组件 (A 和 B) 对双阀进行的切换使峰驻留组件处于采样位置或二维分析位置 切换 位阀可实现对各定量环位置的连通 接口采用平行模式进行操作 ( 定量环填充和定量环冲洗均以相同的流动方向进行 ) 所有阀均由通用阀驱动 (G0A) 进行驱动 溶剂 A 为 0.% 的甲酸水溶液, 溶剂 B 为乙腈 系统利用. min 的二维循环时间采集数据 初始梯度为 B 在. min 内由 0% 升至 0%, 流速为 ml/min 随后设置从动梯度, 使 0 min 时达到 0% B 的起始条件 在二维二元泵对话框中将二维液相色谱分析的停止时间设定为 0 min 其他所有模块均设置为 跟随进样器 / 无限制 在二维泵对话框中设置停止时间可确保即使已超出设定的保留时间之外, 也可对接口中驻留的所有切割组分完成处理 上述二维特定设置可在图 所示的方法设置对话框中进行管理 更详细的介绍已超出本技术概述的范围, 感兴趣的读者可以参考用户手册进行了解 软件功能与常规操作梯度预览 如图 中的图 G 所示, 梯度预览叠加了一维梯度 ( 红色曲线 ) 以及二维梯度循环 ( 蓝色曲线 ), 相应刻度为左侧的 Y 轴 可以在这个图形界面上通过将点值拖拽到所需位置来编辑二维从动梯度 预览和表格 ( 图 D 和 E) 已实现了相互连接, 因此任何图形中的变化都将自动反映到表格中, 反之亦然 用户可以上传来自之前采集的任意一次运行中的一维紫外色谱图 ( 黑色迹线 ) 相应紫外刻度为右侧的 Y 轴 在这种情况下, 色谱图是由二维液相色谱校验样品以 :0 稀释后进样 µl 获得的 A B C D E F G H 图. 二维方法设置对话框 A) 二维液相色谱模式 B) 溶剂 C) 流量设置 D) 二维梯度 E) 二维时间段 F) 运行值 G) 梯度预览, 以及 H) 二维梯度初始条件的放大图

6 多中心切割实验可以在基于峰或基于时间两 图 显示了梯度预览的放大视图 ( - 0 min) 在基于时间模式中 采样可通过用户指定的 种操作模式下进行 在基于峰的模式中 中 这些实验采用 0 mau 的基线阈值进行峰 时间事件来触发 软件可根据与基于峰模式 心切割可根据一维峰识别自动进行以便进行 检测 并采用 min 的采样时间 而这一时 相同的标准自动生成一张中心切割表 图 二维分析 这一操作需要在图 中标记为可 间已超过峰宽 因此仅有一维检测器信号对 中的图 E 预览中的相应橙色标记 图 选的一维检测器 当检测器信号显示出峰起 采样起主导作用 绿色代表基于峰模式 同 中的图 G 则表示本实验中将要进行的中心 点时 系统将开始采样操作 此操作的触发 时也预测了这幅所上传色谱图的触发间隔 切割 为了进一步改善分离 用户可在发生 条件可以是基线阈值 以 mau 表示 斜 图 A 显示采用多中心切割接口获得的预览图 多个峰共洗脱 约在 和 min 处 的一 率 以 mau/s 表示 或二者的组合 当触 而图 B 则显示采用普通双定量环接口得到 维区域手动添加切割 图 的预览中预测了 发条件与第二时间匹配 表明峰终点 或采 的结果 软件标记为红色的峰无法进行中心 个二维循环 上述所有功能均能大大简 样时间 在图 中的图 E 中设置 已运行完 切割 化二维液相色谱实验条件的设置和编辑 成时 采样将会停止 软件将计入一维峰检 测 峰处于 UV 流通池中 及其到达进样定 量环入口之间的延迟 ރ ጂ ፇॲ A A ݭ ᅂ੨ ᅃ ዹ ੨ ԭ ރ ጂ ፇॲ B ੨ ዹ ੨ ੨ ଉ ག ݛ ݴ ဆ ݛ ݭ ᅂ੨! B ᅃ ዹ ଉ ག ݛ ݴ ဆ ݛ ዹ 图. 采用 A) 多中心切割二维液相色谱接口和 B) 双定量环接口在基于峰模式下获得彩色梯度预览结果 为便于说明 此处将二维循环设定为 min ԭ

7 采样 / 驻留算法多中心切割算法虽然可最大限度减少阀切换次数, 但仍遵守迅速处理所采样或驻留的中心切割这一规则 时的情形, 此位置正在处理切割, 即之前停驻于定量环 中的切割峰 连接至一维的峰驻留组件 B 已停驻了切割 0 -, 且在位置 上等待直至峰驻留组件 A 的操作全 部完成 将峰驻留组件 B 切换至二维位置时, 峰驻留组件 A 将再次为一维提供空位以便进 行采样 首个中心切割始终在峰驻留组件 A 的定量环 中进行采样, 并应立即进入其二维循环中 只要连续切割之间的时间差超过二维循 A DAD A, Sig =. Ref = 0.00 B B 00 环时间即无需驻留, 此时中心切割接口的运 00 行方式与双定量环接口相同, 采样进入每个峰驻留组件的定量环 中 也就是说, 此时仅有双阀切换而峰驻留组件无需切换 在图 的分析中, 切割 - 的情况即是如此 mau 图 中的图 A 截取了图 一维色谱图的一部分, 表明发生驻留的一维区域 在本实验条件下 ( 一维流速 = 00 µl/min, 定量环规格 = 0 µl, 采样时间 = 0. min), 系统根据触发间隔 ( 橙色标记 ) 的提示两次充满定量环 阴影区域与定量环体积相关, 宽度仅为橙色标记的一半 它对于切割发生的位置进行了更精确的预测 图 中的图 B 和 C 展示了二维液相色谱的在线监测截图 它是二维液相色谱软件的一部分, 将在二维液相色谱实验中跟踪接口的实际状态 多中心切割峰驻留组件如示意图所示, 每个组件均有 个代表进样定量环的空位 软件将在这些空位中显示切割次数和驻留时间 此处为便于说明, 仅显示切割次数 B (min) B MHC A 9 A 图 中的图 B 反映了对应于约 min 处的情形 在切割 ( 定量环, 峰驻留组件 B) 的二维分析过程中, 切割 - 9( 定量环 - ) 在峰驻留组件 A 中停驻 在等待进行这些切割的过程中, 峰驻留组件 A 始终保持与第一维 ( 蓝色流路 ) 的连接, 因此需要一个流通位置 等待定量环的编号应始终比最后一次切割驻留的定量环编号大 在本例中, 等待定量环为定量环 图 中的图 C 显示了双阀将峰驻留组件 A 切换至二维分析位置 C B 0 图. 多中心切割二维液相色谱常规流程示意图 A) 为基于时间模式下的预览,B 和 C) 为在线二维液相色谱监测, 此处显示的是逆流模式

8 尽管驻留过程从某个峰驻留组件的定量环 开始, 并在编号依次递增的定量环中继续, 但二维分析的提交按相反顺序进行 用作流通位置的定量环中的内容物将首先进样至二维中 通过这种方式可以对此定量环和连接峰驻留组件与双阀的毛细管进行冲洗 这对确保结果的正确性至关重要, 具体原因可参见章节冲洗循环 逆向放空具有显著优势 例如, 流通位置与将要在二维中运行的下一个定量环之间的物理距离最短 这使系统仅需较短的时间进行阀切换 此外, 连续液流可直接流入下一个二维位置而无需经过其他定量环, 因此可以避免受到污染 想要实现相反时间顺序的二维分析, 则需要采用直观的数据分析工具 数据分析多中心切割的数据评价由二维液相色谱中心切割查看器协助完成 图 显示了基于时间的多中心切割实验所获得的结果 查看器显示了一维色谱图 ( 图 A) 包括采样和驻留详情的中心切割表 ( 图 B) 二维的完整输出 ( 图 C) 以及局部截取视图 ( 图 D) 这些图彼此都具有联系 带有切割次数的阴影与切割和二维运行相匹配 蓝色的突出显示 ( 图 A 与 C) 表示选中了中心切割 - 9 相应的二维结果重叠显示于图 D 中 这表明与采样的一维区域相比, 此区域中获得了三个完全分离的色谱峰 带有 F 说明的黄色标记代表冲洗循环 冲洗循环每当发生驻留事件时, 某个峰驻留组件的二维流程将自动开始一个冲洗循环 ( 冲洗梯度 ) 这是为了清洗等待定量环以及峰驻留组件和双阀之间的连接毛细管, 而这对确保结果的正确性至关重要 例如, 图 中的首个冲洗循环证明了冲洗的必要性 冲洗信号 ( 图 C, 在约 min 处 ) 来源于流经连接毛细管和峰驻留组件 A 的定量环 的一维洗脱液 ( 图 中的图 B) 当切换双阀时, 可将峰驻留组件 A 切换到二维流程中 这一操作发生在.0 min 处, 最终将此一维洗脱液转移至二维色谱柱中 洗脱液中的内容物来自于当时洗脱的一维峰的尾部组分 ( 图 中的图 A) 这部分内容不属于切割 9, 因为切割 9 在峰驻留组件 A 的定量环 中的采样早已在约 0. min 之前完成 ( 与图 中的图 B 相比为. min) 但如果不运行冲洗梯度, 至少连接毛细管中的内容物将被错误分配至切割 9 中 峰驻留组件上最后一次中心切割与峰驻留组件提交至二维分离之间的时间差越大, 冲洗循环的使用就越重要 如果定量环未经充分清洗即在稍后的分析中再次使用, 则可能得出错误的评价结果 在采用定量环部分填充时, 这个问题显得尤为严重 A B C D 图. 二维液相色谱中心切割查看器

9 将二维梯度与采样时间点相关联多中心切割二维液相色谱的特点之一在于某个切割组分的驻留与其二维分析发生在不同的时间点 系统需要采取的一项重要措施就是将二维条件与方法在采样时间点处指定的条件相关联 这使得用于分析给定中心切割的二维条件能够独立于先于此次切割而被分析的切割次数 这在多中心切割结合使用二维从动梯度时尤为重要 采用这种方式可以大大简化方法设置并确保重现性 其中一个示例是将切割添加到采用二维从动梯度的已有中心切割方法中的情形 由于具有 ( 二维梯度与一维采样之间的 ) 关联, 因此无需重新编程 这种切割的添加也可能偶然发生, 例如由于在基于峰模式中检测到的杂质而造成的切割添加 在样品峰密集的一维区域进行高频率采样时, 这一措施 ( 将二维梯度与采样时间相关联 ) 尤为有用 例如, 将图 中的二维梯度设置为在 0 min 内将初始梯度条件中的乙腈由 0% 升至 0% 并保持 图 D 表明这一从动梯度变化迹线 ( 蓝色 ) 的偏离程度, 如紫色线所指示 这是正确的, 因为切割 - 9 发生于. -. min 之间, 如图 所示 而根据方法可知, 预期的二维梯度分别以.% 和.% 的乙腈作为起始 而二 维梯度将根据实际的二维时间在对应于各自二维分析起点的条件下启动 这些起始条件之间有很大差别 例如, 切割 和 9 的起始梯度分别为 0%(.0 min 处 ) 和.%(. min 处 ), 均显示于洗脱曲线中 相比之下, 图 ( 图 D) 中的叠加二维色谱图可以对切割 - 9 获得的相关组分的保留时间进行对比 目标物定量系统线性和灵敏度 研究中利用浓度范围为 µg/ml 的二维液相色谱校验样品的稀释液进行线性实验, 各浓度进样量为 µl, 且至少进样 次 此外还对两个一维区域进行了采样 图 9 中的图 A 所示为对区域 中共洗脱的 C 和 C 以及相应的区域 中与 C 发生部分共洗脱的 C 和 C 进行定量所需的中心切割 接口在定量环部分填充模式下采用基于时间的采样运行, 采样时间为 0.0 min/ 切割 ( 相当于本实验一维条件下 90% 的定量环填充 ) 图 9 中的图 B 显示了在最低浓度 0. µg/ml 下采集的区域 中切割 和 的二维色谱图, 以及相应的区域 中切割 和切割 9 的二维色谱图 系统在二维分离中获得了理想的色谱峰分离 这些峰均完全分离, 因此可 对单一组分进行积分 尽管进行了中心切割, 峰高还是超出了一维中的色谱峰 例如, 发生切割 的一维峰 (C 和 C) 的峰高约为 mau 相应的二维运行将该信号分为两个峰 (C 和 C), 峰高分别为 mau 和. mau 吸收值的增加主要是由于二维检测器中采用了 0 mm 的紫外流通池 梯度斜率 溶剂和检测器类型的不同可能也起到了一定的作用 图 9 中的图 C 显示了峰面积与浓度的对数曲线 对数刻度在较低浓度端能够更好地展现出线性 上图为对区域 的峰 (C 和 C) 积分后获得的一维结果,R 值大于 0.999, 在整个浓度范围内呈线性 下图代表二维结果, 由 ( 区域 的 ) 切割 和 ( 区域 的 ) 切割 9 的循环生成 软件对采用最大峰面积进行归一化处理的校准曲线进行了叠加 两个最高浓度超出了检测器的线性范围, 但全部四种化合物 (C C C 和 C) 浓度低至 0. µg/ml 时, 均可获得良好的线性 (R 大于 0.999) 此处所述的二维系统线性 灵敏度和下面展示的重现性一样, 都是定量实验中的重要指标 9

10 A C + C C C + C B C C C C + C (mg/ml) C C C C C C C (mg/ml) 图 µg/ml 下的二维液相色谱结果 A) 包括切割方案的一维色谱图, 一维采用 Agilent 90 Infinity 四元泵 ;B) 代表性切割的二维叠加色谱 图 ;C) 峰面积 ( 采用最大浓度峰面积进行归一化处理 ) 与浓度 ( 以 mg/ml 表示 ) 的校准 (log/log) 曲线 0

11 mau 0 重现性 二维分析的重现性可采用二维液相色谱校验 A 9 00 样品 :0 的稀释液以 µl 进样量连续进样 次来测定 图 0 中的图 A 显示了包括切 0 割方案的一维色谱图 图 B 显示了切割 的叠加二维色谱图 mau,00 与一维相比 二维中的再次分离始终具有更 0 9 C,000 分在图 0 中标记为 C - C 表 显示计算 C 00 得出的峰面积精确度数据 (%RSD) 通常都 min C C,00 报导的结果一致 切割 - 9 含有的 个组 B,00 优异的结果以及更出色的灵敏度 这与上文 C C 00 远低于 0% 切割 中的组分 C 有些异常 00 仔细检查发现 当切割 中的峰面积值较 C 00 小时 切割 和 中的面积值则较大 很 C C 0 难将其归因于任何具体原因 但在聚合物添 C 加剂的测定中也得到过类似结果 其中即使 9 0 min 图 0. 二维液相色谱校验样品以 µl 进样量连续进样 0 次后得到的叠加色谱图 A) 包括切割方案的一维结 果 B) 切割 - 9 的二维结果 是一维中一个极小的保留时间偏移即可造成 峰面积波动 由于切割通常发生在峰两侧 因此这种现象可能会经常发生 弥补方式是 将多次切割中的各组分峰面积求和得出总面 积 例如 利用本实验的第一次进样得出切 割 和 中 C 的面积分别为 0 9 和 mau 由此得出总面积为 mau 表 说明利用总二维峰面积计算得出的组分 C C 和 C 的 RSD 值均有明显改善 分 别为.% 0.% 和.% 表. 由 0 次连续二维液相色谱分析所得的二维结果计算得出的精确度数据 C C C 切割次数 C 平均峰面积 %RSD 总数 C 总数 9 总数

12 结论 本研究证明与一维液相色谱相比,Agilent 90 Infinity 多中心切割二维液相色谱解决 方案大大改善了分离性能, 并将目标物中心切割分析提升到了更高的水平 接口技术可在运行二维循环的同时实现一维组分的驻留 通过这种方式可以将多个一维峰在较高频率下进行中心切割, 以此得到复杂样品中目标化合物的详细信息 这一概念已被证明对于天然产物 药物和聚合物等样 - 品的分析大有裨益 将二维分离与一维分离的时间序列独立开来, 可以使两个维度均可在更优的条件下运行 直观的软件通过协助方法设置以及二维信息的评价, 大大简化了多中心切割二维液相色谱的运行 自动化功能确保了结果的重现性和准确性, 推动二维液相色谱向目标化合物的低检测限常规定量迈进了一步 参考文献. Stoll, D. R.; et al. Fast, comprehensive two-dimensional liquid chromatography, J. Chromatogr. A 00,, pp -. Dugo, P.; et al. Comprehensive multidimensional liquid chromatography: Theory and applications, J. Chromatogr. A 00,, pp -. Talus, E. S.; Witt, K. E.; Stoll, D. R. Effect of pressure pulses at the interface valve on the stability of second dimension columns in online comprehensive two-dimensional liquid chromatography, J. Chromatogr. A 0,, pp 0-. Vanhoenacker, G.; 等, 使用 Agilent 90 Infinity 二维液相色谱解决方案分析单克隆抗体酶解物, 安捷伦科技公司应用简报, 出版号 99-0CHCN, 0. Murphy, R. E.; Schure, M. R.; Foley, J. P. One- and Two-Dimensional Chromatographic Analysis of Alcohol Ethoxylates, Anal. Chem. 99, 0, p. Naegele, E. 采用 Agilent 90 Infinity 二维液相色谱解决方案通过中心切割法对杂质进行检测, 安捷伦科技公司应用简报, 出版号 99-0CHCN,0. Agilent D-LC Solution( 安捷伦二维液相色谱解决方案 ), 安捷伦科技公司用户手册, 订单号 G9-9000,0. Pursch, M.; Buckenmaier, S. M. C. Additives in Polymers, Loop-Based Multiple Heart-Cutting Two-Dimensional Liquid Chromatography for Target Analysis in Complex Matrices, Anal. Chem., accepted 9. Groskreutz, S. R.; et al. Selective comprehensive multi-dimensional separation for resolution enhancement in high performance liquid chromatography. Part I: Principles and instrumentation, J. Chromatogr. A 0,, pp Groskreutz, S. R.; et al. Selective comprehensive multi-dimensional separation for resolution enhancement in high performance liquid chromatography. Part II: Applications, J. Chromatogr. A 0,, pp -0. Zhang, K.; et al. Analysis of pharmaceutical impurities using multi-heartcutting D LC coupled with UV-charged aerosol MS detection, J. Sep. Sci. 0, 00, pp -. Venkatramani, C. J.; et al. Assessing stability-indicating methods for coelution by two-dimensional liquid chromatography with mass spectrometric detection, J. Sep. Sci., 0, pp -. Schneider, S. Naegele, E. Krieger, S. Online D-LC Analysis of Complex N-Glycans in Biopharmaceuticals Using the Agilent 90 Infinity D-LC Solution( 采用 Agilent 90 Infinity 二维液相色谱解决方案进行生物药物中复杂 N- 糖链的在线二维液相色谱分析 ), 安捷伦科技公司应用简报, 出版号 99-9EN,0. Krieger, S. Application of Multiple Heart-Cutting D-LC in Method Development for Impurity Analysis ( 多中心切割二维液相色谱在杂质分析方法开发中的应用 ), 安捷伦科技公司应用简报, 出版号 99-EN,0. Buckenmaier, S. M. C.; Pursch, M. Pesticides in Natural Products, in preparation. 本文中的信息如有变更, 恕不另行通知 安捷伦科技公司,0 0 年 月 日, 中国出版 99-CHCN

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