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Working Safety with Pathogens in the Laboratory 實 驗 室 感 染 性 病 原 之 安 全 防 護 林 瑞 燕 中 央 研 究 院 學 術 事 務 組 biosafe@gate.sinica.edu.tw http://www.sinica.edu.tw/~biosafe 1 目 的 降 低 避 免 實 驗 室 工 作 感 染 病 原 的 危 險 To minimize the risk for an occupationally acquired infection at the Academic Sinica. 2 1

實 驗 室 感 染 在 實 驗 室 操 作 處 理 之 病 原 微 生 物 均 可 能 感 染 研 究 人 員 感 染 常 肇 因 於 各 種 意 外 : 針 頭 操 作 意 外 皮 膚 遭 濺 灑 污 染 割 傷 穿 刺 產 生 傷 口 發 生 實 驗 室 感 染 20% 為 已 知 之 意 外 80% 不 知 道 或 沒 注 意 3 避 免 感 染 人 員 及 技 術 安 全 防 護 裝 備 實 驗 室 硬 體 設 計 4 2

減 少 氣 霧 產 生 實 驗 室 安 全 防 護 仔 細 考 量 實 驗 操 作 設 計 遵 守 安 全 操 作 規 範 5 病 原 分 類 病 毒 (Viruses( Viruses) 細 菌 (Bacteria( Bacteria) 黴 菌 (Fungi( Fungi) 寄 生 蟲 (Parasites( Parasites) 變 性 蛋 白 (Prions( Prions) Biological MSDS: http://www.phac-aspc.gc.ca/msds aspc.gc.ca/msds-ftss/ 6 3

病 毒 (Viruses( Viruses) 血 液 感 染 性 病 毒 (Bloodborne Pathogen viruses) Retrovirus:HIV, HTLV Hepatotropic Viruses:HBV, HCV 其 他 非 血 液 感 染 性 病 毒 Adenovirus Baculoviruses Coronavirus; SARS- CoV Dengue Virus Enterovirus Foot and Mouth Disease Virus Grouper iridovirus Herpes B Virus Infectious pancreatic necrosis virus Japanese encephalitis virus Transmissible gastroenteritis virus Vaccinia virus White spot syndrome virus Yellow grouper nervous necrosis 7 virus 細 菌 (Bacteria( Bacteria) Agrobacterium Bacillus cereus Deinococcus radiodurans Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Lactobacillus Meiothermus Methylococcus Pseudomonas Ralstonia solanacearum Rubrobacter Salmonella Streptococcus Sulfolobus Xamthomonas 8 4

黴 菌 (Fungi( Fungi) Cryptococcus neoformans Pichia pastoris Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces. pombe 寄 生 蟲 (Parasites( Parasites) Leishmania Trichomonas vaginalis 9 第 一 危 險 群 病 原 RG1 Pathogen 病 原 特 性 : 此 類 微 生 物 與 人 類 健 康 成 之 疾 病 無 關 消 毒 劑 : 可 用 之 消 毒 劑 有 1% sodium hypochlorite and 70% ethanol, glutaraldehyde, formaldehyde, iodines 滅 菌 : 可 用 之 滅 菌 方 法 有 moist heat (121 C for at least 15 min) and dry heat (160-170 C for at least 1 hour) 防 護 設 施 需 求 : 需 具 備 跟 一 般 微 生 物 學 實 驗 室 相 同 等 級 的 設 備, 且 依 P1 / BSL1 級 防 護 操 作 防 護 裝 備 : 操 作 此 類 病 原 時, 需 穿 戴 實 驗 衣 手 套 10 5

P1 級 實 驗 室 生 物 污 染 穿 戴 拋 棄 式 手 套 紙 巾 浸 泡 消 毒 水 舖 於 污 染 區 以 浸 泡 過 消 毒 水 之 乾 淨 紙 巾 清 理 污 染 區 使 用 過 之 紙 巾 置 於 塑 膠 袋 內 拋 棄 11 血 液 感 染 性 病 原 (Bloodborne Pathogen) 病 原 會 存 在 於 血 液 或 體 液 中, 可 經 由 傷 口 污 染 或 輸 血 等 途 徑 傳 染, 例 如 HBV HCV HIV HIV 操 作 人 類 血 液 細 胞 組 織 會 面 臨 特 殊 的 危 險 例 如 人 體 血 液 或 體 液 可 能 帶 有 B 型 肝 炎 病 毒 或 AIDS 病 毒 若 您 需 要 操 作 這 些 實 驗 材 料, 施 打 B 型 肝 炎 疫 苗 是 非 常 重 要 的 12 6

其 它 潛 在 感 染 物 (OPIM) OPIM(Other Potentially Infectious Materials): 人 體 體 液 及 任 何 污 染 到 血 液 或 體 液 的 液 體 未 固 定 處 理 的 人 體 組 織 或 器 官 含 有 HIV 或 HBV 之 培 養 液 或 其 它 溶 液 來 自 感 染 HIV 或 HBV 之 實 驗 動 物 的 血 液 器 官 或 其 它 組 織 其 它 應 注 意 材 料 :Human: and other primate tumor cells, Primary cell lines 13 血 液 感 染 性 病 毒 - 人 類 免 疫 缺 乏 病 毒 (HIV) 屬 於 第 三 級 危 險 群 微 生 物 (RG3( RG3) 原 發 性 感 染 症 狀 : 感 染 後 約 2-6 星 期 疲 倦 似 感 冒 症 狀 體 重 減 輕 淋 巴 腺 腫 大 隱 形 期 : 感 染 愛 滋 病 毒 後 到 出 現 臨 床 症 狀 的 期 間, 一 般 是 5-10 年, 無 特 殊 病 徵 14 7

HIV : 職 業 感 染 風 險 感 染 愛 滋 病 毒 後, 是 否 發 病 成 為 AIDS 病 毒 量 多 寡 感 染 者 的 免 疫 力 病 毒 種 類 有 無 接 受 抗 病 毒 藥 物 治 療 伺 機 性 感 染 的 預 防 與 治 療 15 HIV 感 染 意 外 發 生 二 小 時 內 處 理 需 盡 速 提 出 報 告 目 前 仍 無 疫 苗 保 護 預 防 性 用 藥 : 需 於 曝 露 24 小 時 內 使 用 醫 療 諮 詢 藥 物 治 療 : 衛 生 署 自 1997 年 4 月 開 始 免 費 提 供 藥 物, 每 位 感 染 者 及 患 者 都 可 以 在 指 定 醫 院 取 得 這 些 藥 物 http://203.65.72.83/ch/das/showpublication.asp? RecNo=1828 16 8

Lentiviral vector 由 lentivirus 改 造 而 來 Packaging plasmid Envelopment plasmid HIV transfer plasmid Self-inactivating (SIN) vectors 可 感 染 不 分 裂 (nondividing) 或 分 化 末 期 (terminally differentiated) 的 細 胞 現 在 證 明 源 自 HIV 的 Lentiviral vector 可 有 效 地 進 入 未 刺 激 的 人 類 CD34+ 細 胞 及 樹 枝 狀 細 胞, 而 傳 統 的 反 轉 錄 病 毒 載 體 則 不 易 進 入 此 兩 類 細 胞 需 於 第 二 級 生 物 安 全 防 護 (P2/BSL2( P2/BSL2) ) 等 級 下 操 作 若 為 oncogene related study,, 需 於 P2+/BSL2+ 下 操 作 需 定 期 檢 測 RCL(Replication Replication Competent Lentivirus ) 17 血 液 感 染 性 病 毒 - B & C 型 肝 炎 病 毒 屬 於 第 二 級 危 險 群 微 生 物 (RG2( RG2) 初 期 症 狀 似 感 冒 症 狀 食 慾 降 低 腹 部 不 適 噁 心 嘔 吐 肌 肉 疼 痛 二 期 症 狀 黃 疸 長 期 影 響 : 帶 原 者 :15%: - 20% 受 感 染 者 慢 性 肝 炎 肝 硬 化 肝 癌 目 前 尚 無 根 治 法 α- 干 擾 素 注 射 治 療 口 服 藥 Lamivudine(3TC) 18 9

B 型 肝 炎 疫 苗 使 用 血 液 /OPIM 為 實 驗 材 料 者 應 接 受 B 型 肝 炎 疫 苗 接 種 若 從 未 檢 查 過 B 型 肝 炎 病 毒 抗 原 及 抗 體, 則 需 抽 血 檢 查 若 為 陽 性, 則 曾 感 染 B 型 肝 炎 病 毒 (HBV) 若 為 陰 性, 則 給 予 B 型 肝 炎 疫 苗 接 種 三 劑 B 型 肝 炎 疫 苗 接 種 : 第 一 劑 第 二 劑 ( 第 一 劑 一 個 月 後 ) 第 三 劑 ( 第 一 劑 六 個 月 後 ) 19 疫 苗 接 種 之 效 果 檢 測 接 種 後, 採 血 檢 查 疫 苗 接 種 效 果 約 有 10% 沒 有 抗 體 反 應 其 原 因 可 能 為 : >40 歲 體 重 抽 煙 免 疫 缺 陷 20 10

實 驗 室 內 血 液 傳 染 性 病 原 之 傳 播 皮 膚 傷 害 : 一 級 風 險 被 污 染 之 尖 銳 物 ( 針 頭 刀 片 ) 所 傷 動 物 咬 傷 設 備 傷 害 濺 灑 : 二 級 風 險 感 染 物 傾 倒 感 染 物 滴 落 離 心 超 音 波 打 碎 震 盪 混 勻 21 可 能 污 染 血 液 感 染 性 病 原 之 設 備 : 冷 凍 切 片 機 (Cryostats) 顯 微 注 射 器 (Microinjectors) 動 物 籠 (Animal Caging) 細 胞 離 心 機 (Cyrocentrifuges) 流 速 細 胞 分 析 儀 (Flowcytometers) 切 片 機 (Microtomes) 組 織 均 質 器 (Glass Tissue Homogenizers) 細 胞 收 集 器 (Cell Harvesters) 22 11

本 院 人 類 檢 體 實 驗 材 料 使 用 守 則 原 則 : 必 須 在 生 物 安 全 防 護 等 級 二 級 以 上 操 作 操 作 者 : 凡 使 用 具 活 性 之 人 類 檢 體 ( 包 含 血 液 組 織 細 胞 培 養 等 ) 為 實 驗 材 料, 必 須 在 生 物 安 全 防 護 等 級 二 級 以 上 操 作 需 明 瞭 血 液 感 染 性 病 原 實 驗 之 危 險 性 需 接 受 過 適 當 之 安 全 防 護 教 育 訓 練 實 驗 依 安 全 之 操 作 程 序 進 行, 並 遵 守 相 關 安 全 防 護 規 定 廢 棄 物 需 依 感 染 性 廢 棄 物 方 式 處 理 接 受 適 當 的 免 疫 接 種 或 測 試 http://www.sinica.edu.tw/~biosafe/2-3.html 23 血 液 感 染 性 病 原 污 染 之 緊 急 處 置 步 驟 一 : 污 染 之 皮 膚 及 傷 口 需 以 優 碘 擦 洗 十 五 分 鐘, 而 後 以 大 量 的 水 沖 洗 污 染 之 眼 睛 或 黏 膜 需 以 生 理 鹽 水 或 利 用 安 全 洗 眼 器 沖 洗 十 五 分 鐘 步 驟 二 : 立 刻 通 知 實 驗 室 負 責 人 步 驟 三 : 通 報 醫 療 中 心 : 本 院 醫 務 室 27899437 必 須 在 24 小 時 內 使 用 感 染 後 預 防 藥 物 ( 若 感 染 原 包 含 HIV) 若 需 緊 急 運 送 到 醫 院, 請 打 119 若 醫 療 中 心 已 下 班, 且 感 染 源 包 含 HIV,, 請 撥 打 119 即 送 醫 119,, 立 24 12

其 它 非 血 液 感 染 性 病 原 25 腺 病 毒 Adenovirus 常 造 成 呼 吸 道 及 腸 胃 道 的 感 染, 可 以 引 起 結 膜 炎 滲 出 性 的 扁 桃 體 炎 喉 氣 管 炎 ( 哮 吼 ) 支 氣 管 炎 細 支 氣 管 炎 及 肺 炎 喉 與 結 膜 炎 (Pharyngo-Conjunctival Fever, PCR) 的 特 殊 徵 候 群, 孩 童 腹 瀉 傳 染 方 式 : 腺 病 毒 是 藉 由 飛 沫 傳 染 的, 當 含 有 病 毒 的 微 粒 接 觸 到 易 受 感 染 的 人 群 的 鼻 子 喉 嚨 或 眼 結 膜 的 黏 膜 時, 就 是 感 染 的 開 始 腺 病 毒 也 可 以 經 由 口 -- 糞 傳 染 潛 伏 期 :2~14: 天 腺 病 毒 的 感 染 一 般 不 需 要 特 殊 的 治 療, 大 多 數 病 情 並 不 嚴 重 也 不 需 要 住 院 治 療, 然 而 年 紀 小 幼 童 和 免 疫 機 能 低 下 的 病 人, 可 能 需 要 住 院 給 予 支 持 性 的 照 顧 屬 於 第 2 級 危 險 群 微 生 物 有 些 non-lipid virus 對 70% % 酒 精 有 輕 微 抵 抗 力 26 13

仙 人 掌 桿 菌 Bacillus cereus 主 要 中 毒 原 因 食 品 為 受 污 染 之 米 飯 等 榖 類 食 品 香 腸 肉 汁 等 肉 類 加 工 製 品 蔬 菜 及 布 丁 可 由 細 菌 本 身 或 由 細 菌 產 生 之 毒 素 而 致 病 因 食 入 食 品 的 不 同, 而 分 為 嘔 吐 型 和 下 痢 型 兩 類 屬 於 第 2 級 危 險 群 微 生 物 適 用 之 消 毒 劑 : Spores are relatively resistant Inactivated by 2% glutaraldehyde, 5% sodium hypochlorite; prolonged contact times required 27 冠 狀 病 毒 Coronavirus SARS-associated Coronavirus 引 起 嚴 重 急 性 呼 吸 道 症 候 群 Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS) 起 源 於 中 國, 病 徵 為 高 燒 及 呼 吸 症 狀 如 咳 嗽 呼 吸 窘 迫 及 X 光 肺 部 相 攝 影 有 瀰 漫 性 肺 炎 症 狀 潛 伏 期 2-10 天 可 經 由 吸 入 或 黏 膜 接 觸 病 人 的 飛 沫 或 體 液 而 傳 染 SARS associated Coronavirus 屬 於 第 3 級 危 險 群 微 生 物 SARS 實 驗 安 全 準 則 http://www.sinica.edu.tw/~biosafe/2.html http:// http://www.cdc.gov.tw/sars/ 28 http:// http://www.cdc.gov/ncidod/sars/ 14

隐 球 菌 Cryptococcus neoformans 新 型 隱 球 菌 侵 入 肺 部 是 感 染 的 第 一 步, 球 菌 通 過 吸 入 傳 入 人 的 體 而 致 病 臨 床 上, 球 菌 病 的 主 要 表 現 為 隱 球 菌 腦 膜 炎 在 環 境 及 組 織 中 以 酵 母 菌 型 存 在 黴 菌 存 在 土 壤 及 家 禽 糞 便 中, 尤 其 是 在 鴿 子 大 便 中, 傳 染 可 能 藉 著 吸 入 胞 子 或 傷 口 感 染 可 以 感 染 呼 吸 道 中 樞 神 經 眼 睛 及 皮 膚 屬 於 第 2 級 危 險 群 微 生 物 29 登 革 病 毒 Dengue Virus 引 起 登 革 熱, 藉 由 病 媒 蚊 叮 咬 而 感 染, 主 要 呈 現 發 燒 出 疹 肌 肉 骨 骼 疼 痛 等 症 狀 台 灣 地 區 傳 播 登 革 熱 的 病 媒 蚊 屬 斑 蚊 類, 特 徵 是 身 體 黑 色, 腳 上 有 白 斑, 主 要 是 埃 及 斑 蚊 和 白 線 斑 蚊 兩 種 潛 伏 期 約 3-8 天 感 染 後 表 現 之 症 狀 有 很 大 的 差 異, 有 些 人 感 染 到 登 革 熱 病 毒 並 不 會 生 病, 稱 為 不 顯 性 或 無 症 狀 感 染, 有 些 人 僅 有 發 燒 等 輕 微 症 狀, 有 些 人 則 出 現 較 嚴 重 的 典 型 症 狀, 包 括 發 燒 紅 疹 眼 窩 或 骨 頭 酸 痛, 甚 至 出 血 休 克 典 型 登 革 熱 : 致 死 率 低 於 1%; 登 革 出 血 熱 : 若 無 適 當 治 療, 死 亡 率 可 達 10~50 50%, 早 期 診 斷 並 加 以 適 當 治 療, 死 亡 率 可 低 於 5% 登 革 熱 目 前 沒 有 特 效 藥 物 可 治 療, 一 般 採 行 支 持 性 療 法, 目 前 尚 無 有 效 可 施 打 的 疫 苗 屬 於 第 2 級 危 險 群 微 生 物 30 15

艾 巴 氏 病 毒 Epstein-Barr virus 鼻 咽 癌 過 濾 性 病 毒 Epstein-Barr virus (EBV) 是 一 種 普 遍 存 在 的 疱 疹 病 毒, 可 能 引 發 一 些 惡 性 的 腫 瘤, 包 含 B-cell neoplasms(burkitt Burkitt s lymphoma) ) 或 者 是 上 皮 細 胞 的 腫 瘤 ( 鼻 咽 癌,undifferentiated, nasopharyngeal carcinoma) 屬 於 第 2 級 危 險 群 微 生 物 31 大 腸 桿 菌 Escherichia coli 腸 桿 菌 是 腸 桿 菌 科 的 一 員, 經 常 作 爲 科 學 研 究 的 細 菌 模 式 每 個 人 每 天 平 均 從 糞 便 中 排 出 1011 到 1013 個 大 腸 桿 菌 在 環 境 衛 生, 大 腸 桿 菌 很 早 就 被 選 作 水 污 染 程 度 的 指 標, 出 血 型 大 腸 桿 菌 O157:H7 為 一 種 毒 性 很 強 的 菌 株 食 物 裏 只 要 幾 十 隻 的 O157:H7 就 足 以 造 成 致 命 危 機 大 多 數 E.coli 屬 於 第 1 級 危 險 群 微 生 物 所 有 腸 致 病 性 腸 致 毒 性 腸 侵 襲 性 及 攜 帶 有 K1 抗 原 的 菌 株, 包 括 E. coli O157:H7 H7,, 屬 於 第 2 級 危 險 群 微 生 物 32 16

腸 病 毒 Enterovirus 常 見 的 腸 病 毒 例 如 造 成 小 兒 麻 痺 的 Poliovirus 71 型 等 感 染 腸 病 毒 後 可 出 現 各 種 不 同 的 症 狀, 最 常 見 是 發 燒 及 出 疹, 其 他 如 無 菌 性 腦 膜 炎 肋 膜 炎 心 肌 炎 口 腔 炎 及 新 生 兒 感 染 等 也 可 見 嬰 兒 及 兒 童 容 易 被 感 染, 夏 秋 季 是 流 行 的 季 節 腸 病 毒 主 要 傳 染 途 徑 為 糞 便 -- 手 -- 口 病 毒 可 由 患 者 之 痰 唾 液 糞 便 排 出, 再 經 由 口 傳 入 別 人 感 染 腸 病 毒 後, 在 出 現 症 狀 前 二 ~ 三 天 到 症 狀 出 現 後 一 ~ 兩 週 都 可 從 呼 吸 道 口 腔 分 泌 物 排 出 病 毒 ; 在 數 月 後 糞 便 仍 有 病 毒 存 在, 可 感 染 他 人 腸 病 毒 70 型 可 由 眼 淚 排 出 克 沙 奇 A21 型 主 要 以 呼 吸 道 分 泌 物 傳 染 衛 生 不 良 地 區, 不 潔 的 飲 水 食 物 也 可 造 成 大 流 行 EV71 屬 於 第 2 級 危 險 群 微 生 物 Poliovirus 屬 於 第 3 級 危 險 群 微 生 物 有 些 non-lipid virus 對 70% % 酒 精 有 輕 微 抵 抗 力 33 口 蹄 疫 病 毒 Foot and Mouth Disease Virus 引 起 口 蹄 疫, 是 一 種 急 性 熱 性 及 高 度 傳 染 性 的 疾 病, 幾 乎 所 有 偶 蹄 類 動 物 均 有 感 受 性 病 徵 以 口 部 黏 膜 口 唇 舌 頰 部 齒 齦 及 口 蓋 部 及 蹄 或 乳 房 部 皮 膚, 偶 而 在 胃 腸 發 生 水 皰 為 特 性 潛 伏 期 2~7 日 屬 於 第 4 級 危 險 群 微 生 物 (RG4) - Belgium 34 17

禽 流 感 病 毒 Avian Influenza virus Avian Influenza virus 引 起 禽 流 感 症 狀 : 病 徵 及 發 病 初 期, 都 與 一 般 流 感 類 似, 但 發 燒 可 高 至 41 度, 且 較 一 般 流 感 容 易 影 響 肝 功 能, 也 較 易 引 致 淋 巴 細 胞 減 少 及 呼 吸 衰 竭, 甚 至 多 器 官 功 能 衰 竭 而 死 亡 潛 伏 期 幾 小 時 到 幾 天 不 等 傳 染 途 徑 : 消 化 道 呼 吸 道 皮 膚 損 傷 和 眼 結 膜 等 途 徑, 主 要 經 由 呼 吸 道 黏 液 或 糞 便 直 接 接 觸 傳 染 或 間 接 由 污 染 的 水 及 飼 料 等 傳 播, 有 專 家 認 為 禽 流 感 的 擴 散 主 要 是 通 過 糞 便 中 大 量 的 病 毒 粒 子 污 染 空 氣 而 傳 播, 人 員 和 車 輛 往 來 是 傳 播 禽 流 感 的 重 要 因 素, 另 外 吸 血 昆 蟲 可 傳 播 病 毒, 帶 毒 的 種 蛋 可 進 行 垂 直 傳 播 水 棲 候 鳥 在 自 然 界 中 攜 帶 H5N1 病 毒 最 多 屬 於 第 3 級 危 險 群 微 生 物 35 日 本 腦 炎 病 毒 Japanese Encephalitis Virus 引 起 的 急 性 腦 膜 腦 炎, 受 損 部 位 包 括 腦 脊 髓 和 腦 膜 感 染 後 大 部 分 為 無 症 狀 感 染, 少 數 發 病 例 可 有 發 燒 頭 疼 噁 心 嘔 吐 頭 痛 倦 怠 腹 痛 或 出 現 意 識 障 礙 及 精 神 症 狀 等 無 菌 性 腦 膜 炎 的 表 徵 更 少 數 重 症 病 例 以 突 發 高 燒 頭 痛 嘔 吐 嗜 睡 開 始 發 病, 接 著 出 現 腦 膜 刺 激 現 象,3-, 5 日 出 現 痙 攣 異 常 行 為 肌 強 直, 意 識 明 顯 變 化 甚 至 昏 迷, 但 很 少 發 生 鬆 弛 性 癱 瘓 ( flaccid paralysis ),) 以 蚊 子 為 媒 介, 在 動 物 間 傳 播, 可 能 被 感 染 的 動 物 包 括 老 鼠 馬 牛 蝙 蝠 狗 羊 貓, 人 類 只 是 偶 而 被 感 染 病 毒 由 口 腔 感 染 的 方 式 在 許 多 節 肢 動 物 体 內 繁 殖, 目 前 為 止 蚊 子 是 已 確 定, 且 可 能 是 唯 一 媒 介 病 毒 感 染 人 類 與 家 畜 的 節 肢 動 物, 受 感 染 的 病 媒 蚊 並 無 病 徵 呈 現, 但 終 其 一 生 具 有 傳 染 力 疫 苗 接 種 : 台 灣 地 區 為 常 規 預 防 接 種 屬 於 第 2 級 危 險 群 微 生 物 36 18

克 雷 白 式 菌 Klebsiella spp. 克 雷 白 氏 肺 炎 菌 (Klebsiella pneumoniae) 屬 於 革 蘭 氏 陰 性 腸 內 菌 科 (Enterobacteraceae)) 是 一 種 伺 機 性 感 染 的 病 原 細 菌, 平 時 少 量 存 在 於 健 康 人 體 的 呼 吸 道 或 腸 道 中, 對 免 疫 力 下 降 的 病 人 會 造 成 嚴 重 感 染, 可 引 起 肺 炎 敗 血 症 腦 膜 炎 肝 膿 瘍 眼 內 炎 泌 尿 系 統 發 炎, 或 是 傷 口 感 染 等 屬 於 第 2 級 危 險 群 微 生 物 37 利 什 曼 原 蟲 Leishmania 利 什 曼 原 蟲 是 經 由 雌 性 沙 蠅 叮 咬 所 傳 播 沙 蠅 在 日 出 及 日 落 時 份 最 為 活 躍 牠 們 在 日 間 不 太 活 躍, 但 受 到 打 擾 時 亦 會 叮 人 疾 病 也 可 經 輸 血 而 傳 播, 或 由 孕 婦 傳 給 胎 兒, 但 不 常 見 適 用 殺 菌 劑 : 1% sodiumhypochlorite, 2% glutaraldehyde, formaldehyde 屬 於 第 2 級 危 險 群 微 生 物 38 19

變 性 蛋 白 Prions 與 羊 搔 癢 症 (scrapie) 狂 牛 病 (mad( cow disease) 人 的 克 魯 病 (kuru) 及 庫 賈 氏 症 (Creutzfeldt-Jakob disease, CJD) 有 關 Prions 是 一 種 不 需 要 動 用 基 因 或 DNA,, 就 能 夠 讓 病 原 在 人 體 內 複 製 的 蛋 白 質 庫 賈 氏 症 (Creutzfeldt-Jakob disease, CJD) 之 潛 伏 期 可 達 十 年 屬 於 第 3 級 危 險 群 微 生 物 Prions are inactivated by 1N NaOH,, 4.0 M guanidinium hydrochloride or isocyanate, sodium hypochlorite (2% free chlorine concentration), and steam autoclaving at 132C for 4.5 h. 39 假 單 胞 菌 屬 Burkholderia/Pseudomonas 此 菌 屬 種 類 高 達 140 種 以 上, 大 部 分 為 腐 生 菌 或 能 導 致 植 物 病 害, 約 有 25 種 會 感 染 人 類, 但 多 屬 伺 機 性 感 染 綠 膿 桿 菌 Pseudomonas aeruginosa 是 本 屬 之 中 研 究 最 多 最 重 要 的 院 內 感 染 致 病 菌 經 由 傷 口 或 呼 吸 道 黏 膜 黏 膜 組 織 入 侵 宿 主 除 B. mallei,, B. pseudomallei 為 第 3 級 危 險 群 微 生 物 外, 屬 第 2 級 危 險 群 微 生 物 40 20

沙 門 氏 桿 菌 屬 Salmonella 常 藉 由 食 物 傳 染, 而 造 成 嚴 重 感 染 S. typhimurium 的 宿 主 廣 泛, 能 引 起 人 家 禽 實 驗 動 物 及 家 禽 以 腸 炎 為 主 要 症 狀 的 感 染 症 在 S. typhimurium 則 分 泌 腸 毒 素 (enterotoxin)) 而 引 起 腸 炎, 發 生 腸 炎 細 胞 可 能 壞 死, 進 而 潰 瘍 由 傷 寒 桿 菌 (S.( typhimurium) ) 所 引 起 的 傷 寒 熱 (Typhoid fever), 其 感 染 途 徑 一 般 經 由 水 及 食 物 進 入 人 體 傷 寒 症 狀 包 括 頭 痛, 發 燒, 腹 痛, 腹 脹, 脾 臟 腫 大, 先 發 生 便 祕, 繼 之 演 變 為 帶 血 性 腹 瀉, 皮 膚 並 出 現 玫 瑰 斑 ( Rose spots) 嚴 重 病 例 會 發 生 腸 出 血, 腸 穿 孔 及 腹 膜 炎 而 死 亡, 死 亡 率 約 為 2-10% 10% 41 屬 第 2 級 危 險 群 微 生 物 鏈 球 菌 Staphylococcus 念 珠 狀 鏈 桿 菌 (streptobacillus moniliformis), 無 乳 鏈 球 菌 (Streptococcus agalactiae), 肺 炎 鏈 球 菌 (Streptococcus pneumoniae) 肺 炎 鏈 球 菌 可 造 成 許 多 臨 床 疾 病, 常 見 的 包 括 : 中 耳 炎 肺 炎 菌 血 症 腦 膜 炎 肋 膜 炎 鼻 竇 炎 及 關 節 炎 等, 不 慎 或 不 當 的 治 療 亦 會 造 成 死 亡 屬 第 2 級 危 險 群 微 生 物 42 21

陰 道 鞭 毛 滴 蟲 Trichomonas vaginalis 主 要 寄 生 於 婦 女 陰 道 和 尿 道 內, 也 可 寄 生 於 男 性 尿 道 和 前 列 腺 中, 引 起 滴 蟲 性 陰 道 炎 和 尿 道 炎 直 接 傳 播 主 要 通 過 性 生 活 ; 間 接 傳 播 則 是 通 過 坐 式 馬 桶 公 共 浴 池 游 泳 池 以 及 公 用 浴 具 游 泳 衣 褲 等 而 接 觸 感 染 屬 第 2 級 危 險 群 微 生 物 43 牛 痘 病 毒 Vaccinia Virus 對 人 的 致 病 力 很 弱, 一 般 僅 能 在 接 種 部 位 繁 殖, 但 由 於 它 和 天 花 病 毒 有 很 強 的 交 叉 免 疫 性, 故 在 接 種 牛 痘 後 人 體 內 會 出 現 對 天 花 病 毒 的 免 疫 力 如 果 被 接 種 者 無 免 疫 力, 則 接 種 後 呈 原 發 反 應 : 種 後 3 日 左 右 局 部 出 現 紅 丘 疹,5 日 左 右 丘 疹 形 成 疹,8 日 左 右 轉 為 膿,12 日 左 右 形 成 棕 色 痂 蓋,18 日 後 痂 蓋 脫 落, 遺 留 瘢 痕 這 是 種 痘 成 功 的 表 現 若 被 接 種 者 近 期 種 過 牛 痘, 具 有 免 疫 力, 則 會 出 現 即 刻 反 應 ( 免 疫 反 應 ): 種 痘 數 小 時 至 第 2 日, 接 種 處 即 輕 微 紅 腫 癢 感 或 發 生 丘 疹,2~3 日 內 迅 速 消 退 若 痘 苗 毒 力 較 強, 被 接 種 者 的 免 疫 功 能 較 差 或 護 理 不 當, 亦 可 發 生 子 痘 匐 行 痘 移 植 痘 全 身 痘 濕 疹 痘 壞 疽 痘 等 併 發 症 若 被 接 種 者 對 痘 苗 過 敏, 可 發 生 痘 後 疹 種 痘 後 紫 癜 種 痘 後 腦 炎, 但 均 少 見 屬 第 2 級 危 險 群 微 生 物 適 用 之 殺 菌 劑 : 1% sodiumhypochlorite, 2% glutaraldehyde, formaldehyde 44 22

生 物 安 全 櫃 使 用 尖 銳 物 品 運 送 生 物 體 個 人 防 護 裝 備 污 染 除 污 廢 棄 物 處 理 安 全 防 護 操 作 45 生 物 安 全 櫃 (Biological Safety Cabinets; BSC) Chemical Fume Hoods (not BSC) Laminar Flow Clean Benches (not BSC) 保 護 人 員 (Personnel) 保 護 實 驗 品 (Product) 保 護 環 境 (Environmental) Class I BSC Class II & III BSC 操 作 指 導 影 片 : Safe Use of Biological Safety Cabinets or The Case of the Contaminated Cultures 46 23

使 用 針 頭 針 筒 除 非 必 要, 避 免 使 用 針 筒 針 頭 及 其 他 尖 銳 器 具 當 必 須 使 用 這 些 器 具 時, 要 小 心 操 作 以 免 意 外 刺 傷 或 割 傷 不 用 雙 手 套 回 針 筒 蓋 盡 可 能 使 用 有 安 全 設 計 之 針 頭 針 筒 使 用 過 的 針 頭 及 拋 棄 式 切 割 器 具 必 須 棄 置 於 有 蓋 防 漏 防 破 之 容 器 中 使 用 過 的 針 頭 不 可 重 複 使 用 彎 曲 或 折 斷 47 48 24

49 安 全 注 射 器 Self-sheathed protected position Attached to syringe needle Retracted protected position 50 25

運 送 感 染 性 病 原 使 用 防 漏 之 雙 層 容 器 使 用 之 容 器 必 須 防 漏, 可 滅 菌 處 理, 可 鎖 蓋 容 器 上 標 示 : 內 容 物 實 驗 者 姓 名 實 驗 室 名 稱 及 日 期 標 示 :BIOHAZARD: 不 可 使 用 大 眾 交 通 工 具 運 送 51 手 套 眼 睛 臉 部 保 護 : 若 可 能 發 生 濺 灑 意 外 時 需 戴 上 眼 睛 臉 部 保 護 裝 備 如 護 目 鏡 全 臉 式 面 罩 等 不 宜 穿 著 短 褲 露 趾 鞋 實 驗 衣 個 人 防 護 裝 備 52 26

個 人 防 護 裝 備 - 手 套 操 作 感 染 物 時, 必 須 戴 手 套 選 擇 合 適 大 小 功 能 之 手 套 http://www.sinica.edu.tw/~biosafe/3.html 手 套 使 用 時, 須 除 去 戒 指 等 可 能 會 扯 破 手 套 之 物 若 手 套 污 染, 脫 去 污 染 手 套 洗 手 換 上 新 手 套 脫 去 手 套 後 必 須 洗 手 若 手 上 有 傷 口, 戴 上 手 套 前 先 將 傷 口 包 紮 好 53 個 人 保 護 裝 備 - 實 驗 衣 P2(BL2) 級 以 上 實 驗 室 必 須 穿 著 實 驗 衣 穿 著 時 記 得 扣 上 鈕 扣 注 意 污 染 離 開 實 驗 室 前 脫 下 實 驗 衣 54 27

生 物 洩 漏 依 據 洩 漏 之 大 小, 告 知 實 驗 室 人 員 及 通 報 總 辦 事 處 ( 電 話 27899999) 若 洩 漏 於 BSL-2 或 高 於 此 防 護 等 級 洩 漏 過 大 過 危 險 以 至 實 驗 室 無 法 自 行 清 理, 請 維 持 此 區 域 ( 包 括 整 個 實 驗 室 ), 並 撥 打 總 辦 事 處 電 話 尋 求 協 助 55 洩 漏 發 生 於 生 物 安 全 櫃 (BSC( BSC) ) 內 讓 生 物 安 全 櫃 繼 續 運 轉 五 分 鐘 以 上, 以 除 氣 霧 (Aerosols( Aerosols) 清 理 時, 須 穿 戴 實 驗 衣 安 全 眼 鏡 和 手 套 清 理 時, 生 物 安 全 櫃 須 持 續 運 轉 把 乾 紙 巾 放 在 洩 漏 上 ( 吸 收 液 體 ), 再 以 消 毒 劑 ( 1% sodium hypochlorite ) 浸 濕 的 紙 巾 覆 蓋 污 染,( 至 少 二 十 分 鐘 ) 於 污 染 外 圍 小 心 加 入 消 毒 劑, 避 免 產 生 氣 霧, 由 外 向 內 擦 拭 乾 淨 再 以 消 毒 劑 浸 溼 的 紙 巾 擦 拭 生 物 安 全 櫃 之 牆 壁 工 作 區 及 設 備 依 適 當 之 生 物 廢 棄 物 處 理 方 式 處 理 被 污 染 之 紙 巾 ( 例 如 高 壓 高 溫 滅 菌 ) 可 重 複 使 用 之 污 染 器 具, 在 滅 菌 和 清 理 前, 須 置 於 生 物 有 害 容 器 或 有 蓋 之 高 壓 高 溫 滅 菌 容 器 不 進 行 高 溫 高 壓 滅 菌 處 理 之 物 品, 在 移 離 生 物 安 全 櫃 前, 須 用 消 毒 劑 處 理 二 十 分 鐘 清 理 時 穿 著 之 保 護 衣 物, 脫 掉 後, 須 置 於 生 物 有 害 容 器 中 滅 菌 處 理 56 生 物 安 全 櫃 於 清 理 後, 須 繼 續 運 轉 十 分 鐘, 方 可 重 新 使 用 或 關 閉 28

洩 漏 發 生 於 生 物 安 全 櫃 外 之 實 驗 區 域 若 物 質 洩 漏 於 BSL-2 或 高 於 此 防 護 等 級 時, 需 通 報 總 辦 事 處 ( 電 話 2789-9999 9999) 人 員 撤 離 至 少 三 十 分 鐘, 待 氣 霧 沉 降 後, 方 可 進 入 洩 漏 區 移 除 任 何 受 污 染 衣 物, 並 置 於 生 物 有 害 容 器 中 滅 菌 處 理 穿 戴 拋 棄 式 實 驗 衣 安 全 眼 鏡 手 套 口 罩 依 照 下 列 步 驟, 使 用 消 毒 劑 ( 1% sodium hypochlorite ) 進 行 清 理 把 乾 紙 巾 放 在 洩 漏 上 ( 吸 收 液 體 ), 再 以 消 毒 劑 浸 濕 的 紙 巾 覆 蓋 污 染 ( 至 少 二 十 分 鐘 ) 於 污 染 外 圍 小 心 加 入 消 毒 劑, 避 免 產 生 氣 霧, 由 外 向 內 擦 拭 乾 淨 洩 漏 區 之 所 有 物 品 器 具 設 備, 均 須 以 適 當 方 式 去 除 污 染 器 具 設 備 以 適 當 消 毒 劑 擦 拭 重 複 使 用 之 物 品 器 具 可 以 消 毒 方 式 ( 例 如 高 壓 高 溫 滅 菌 ) 處 理 依 照 適 當 的 生 物 廢 棄 物 處 理 程 序 處 理 被 污 染 廢 棄 之 物 品 或 除 污 用 紙 57 曝 露 於 血 液 和 體 液 注 意 : 若 曝 露 ( 由 針 頭 噴 濺 或 直 接 接 觸 ) 於 人 類 / 靈 長 類 之 血 液 體 液 或 實 驗 室 之 HIV,, 首 要 進 行 立 即 評 估 曝 露 於 人 類 / 靈 長 類 之 血 液 體 液 或 HIV 之 立 即 處 理 程 序 首 先 : 將 傷 口 / 污 染 部 位 浸 於 70% % 酒 精 溶 液 中 並 盡 量 把 接 觸 之 血 液 體 液 或 HIV 自 傷 口 / 污 染 部 位 排 ( 擠 ) 出 然 後 : 尋 求 協 助 ( 包 括 醫 療 ) 備 註 : 須 於 曝 露 HIV 或 含 高 風 險 HIV 血 液 24 小 時 內, 使 用 曝 露 後 預 防 藥 物 正 常 上 班 時 間 : 撥 打 醫 務 室 電 話 27899437,, 並 在 電 話 旁 等 候 依 據 風 險 評 估 結 果, 您 可 獲 得 醫 務 室 之 評 量 和 建 議, 醫 務 室 也 許 會 建 議 您 去 忠 孝 醫 院 後 續 處 理 下 班 時 間 : 請 直 接 到 忠 孝 醫 院 進 行 醫 療 處 理 風 險 評 估 可 由 忠 孝 醫 院 或 本 院 總 辦 事 處 具 有 經 驗 之 人 員 來 進 行 在 醫 院 醫 療 處 理 時, 可 能 會 建 議 您 使 用 曝 露 後 預 防 藥 物 58 29

生 物 材 料 之 廢 棄 處 理 棄 置 前 需 先 殺 菌 處 理, 可 使 用 高 溫 高 壓 蒸 汽 滅 菌 法 化 學 殺 菌 或 輻 射 殺 菌 法 殺 菌 處 理 後 之 廢 棄 物, 請 依 總 務 組 及 各 所 之 規 定 辦 理 儲 存 於 適 當 標 示 之 封 口 容 器 儲 存 於 適 當 場 所 生 物 材 料 之 儲 存 59 污 染 除 污 每 個 人 都 必 須 負 責 對 所 使 用 的 設 備 除 污, 維 持 無 污 染 狀 態 當 污 染 發 生 時, 至 少 消 毒 殺 菌 15-30 分 鐘 適 用 之 消 毒 殺 菌 劑 Chlorine Compounds such as Sodium Hypochlorite ( 漂 白 水 ) Wescodyne (iodine with detergent) Alcohol(70-85% Ethyl or Isopropyl) 60 30

少 量 血 液 污 染 之 除 污 使 用 適 當 之 個 人 防 護 裝 備 以 吸 收 材 料 覆 蓋 污 染 物 自 污 染 外 圍 向 內 側 加 上 消 毒 劑 反 應 15-30 分 鐘 清 除 污 染 ( 血 液 必 須 完 全 擦 乾 淨 ) 以 新 的 消 毒 劑 消 毒 污 染 區 將 污 染 廢 棄 物 以 生 物 感 染 性 廢 棄 物 處 理 實 驗 室 發 生 嚴 重 污 染 緊 急 通 報 電 話 :2789: 2789-99999999 61 感 染 性 廢 棄 物 之 處 理 方 式 放 置 於 專 用 垃 圾 袋 及 容 器 內 清 除 3/4 滿 時 即 該 清 除 依 各 實 驗 室 之 標 準 程 序 進 行 垃 圾 清 除 包 裝 標 示 (BIOHAZARD) 不 可 用 力 擠 壓 62 31

減 少 感 染 性 廢 棄 物 垃 圾 分 類 化 學 消 毒 殺 菌 滅 菌 依 各 所 之 標 準 程 序 進 行 垃 圾 清 除 相 關 法 規 : 部 分 感 染 性 醫 療 廢 棄 物 滅 菌 處 理 標 準 及 相 關 規 定 ( 衛 生 署 ) 事 業 廢 棄 物 貯 存 清 除 處 理 方 法 及 設 施 標 準 ( 環 保 署 ) 有 害 事 業 廢 棄 物 認 定 標 準 ( 環 保 署 ) 63 實 驗 室 工 作 者 之 責 任 參 加 訓 練 課 程 仔 細 考 量 是 否 應 施 打 B 型 肝 炎 疫 苗 安 全 之 實 驗 操 作 若 有 感 染 發 生, 立 即 通 報 請 牢 記 自 己 必 須 負 責 自 己 在 實 驗 室 的 安 全 The Ultimate Responsibility for Your Safety in the Laboratory Lies With You! 64 32

實 驗 室 安 全 操 作 指 導 影 片 ( 本 院 生 命 科 學 圖 書 館 ) Controlling Your Risks HIV in the Research Laboratory Laboratory risk assessment : what, why and how : risk assessment in the infectious disease laboratory Practicing Safe Science Safe Use of Biological Safety Cabinets or The Case of the Contaminated Cultures Safety in the research laboratory Set 1: Radionuclide Hazards; Chemical Hazards; Emergency Response Safety in the research laboratory Set 2: Centrifugation Hazards; Chemical Storage Hazards; Glassware Washing Hazards Safety in the research laboratory Set 3: Mammalian Cell Culture Hazards; X-ray X Diffraction Hazards; Assessing Risks of Toxic Chemicals 65 參 考 資 料 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, NIH, 1999 Working Safety with HIV and Other Bloodborne Pathogens, NIH, 2002 Control of Biohazards, BioControl, Inc.2003 HHMI Laboratory Safety Training 行 政 院 衛 生 署 http://www.doh.gov.tw/ 衛 生 署 疾 病 管 制 局 http://203.65.72.83/ch/ 66 33