Microsoft Word - 文档 1
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- 懿鼎 双
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1 PCR 技 术 在 临 床 上 的 应 用 随 着 分 子 医 学 及 分 子 生 物 学 的 发 展, 在 生 物 医 学 实 验 室 诊 断 领 域, 发 生 了 飞 跃 的 变 化, 至 此, 自 第 一 代 的 细 胞 形 态 学 检 验 技 术 之 后, 发 展 到 50 年 代 生 化 指 标 作 临 床 诊 断 疾 病 的 依 据, 到 60 年 代 抗 原 抗 体 酶 标 记 技 术 的 迅 猛 发 展 形 成 了 第 三 代 免 疫 学 诊 断 技 术, 到 80 年 代 初 期 基 因 重 组 技 术 的 应 用 形 成 了 第 四 代 基 因 诊 断 技 术 在 现 代 医 学 对 疾 病 的 诊 断 中, 各 种 诊 断 技 术 密 切 配 合, 有 机 的 结 合 在 一 起, 构 成 了 现 代 生 物 医 学 领 域 中 最 活 跃 的 学 科 临 床 实 验 诊 断 学 的 有 机 整 体, 为 人 类 的 健 康 发 挥 其 重 要 作 用 从 病 原 微 生 物 检 测 角 度 看,PCR 检 验 的 应 用 以 长 程 培 养 或 无 法 分 离 培 养 者 为 优 先 考 虑, 如 TB 衣 原 体 HPV HBV HCV 和 军 团 菌 从 遗 传 学 考 虑, 则 以 有 明 确 基 因 突 变 而 引 起 疾 病 者 适 于 此 项 检 测 从 肿 瘤 诊 疗 考 虑 可 以 研 究 发 病 机 制 及 治 疗 中 耐 药 问 题 下 面 主 要 从 传 染 病 性 病 优 生 优 育 遗 传 病 肿 瘤 五 个 方 面 举 例 PCR 在 临 床 检 验 中 的 应 用 一 PCR 技 术 在 传 染 性 疾 病 方 面 的 应 用 乙 型 肝 炎 病 毒 (HBV) 我 国 是 乙 肝 高 发 区, 乙 肝 病 人 占 世 界 乙 肝 病 人 总 数 的 50%, 乙 型 肝 炎 对 我 国 危 害 很 大 ; 乙 型 肝 炎 的 病 因 学 诊 断 和 治 疗 效 果 的 判 定 一 直 是 医 生 和 病 人 所 关 心 的 问 题 (1) 病 情 判 断 和 疗 效 跟 踪 PCR 能 判 定 病 人 血 液 中 有 否 乙 肝 病 毒 及 病 毒 含 量, 从 而 得 知 病 毒 在 肝 脏 的 复 制 情 况 ; 定 量 PCR 可 测 出 病 人 血 液 中 病 毒 的 拷 贝 数, 从 而 了 解 病 毒 在 体 内 复 制 的 动 态 情 况, 判 断 病 情, 观 察 药 物 疗 效, 适 时 调 整 治 疗 方 案 ; 还 可 以 决 定 乙 肝 治 疗 的 终 点 (2) 乙 肝 病 毒 变 异 株 的 检 测 (3) 肝 炎 病 毒 复 制 的 直 接 实 验 室 证 据, 可 判 断 病 毒 携 带 者 有 否 传 染 性 丙 型 肝 炎 病 毒 丙 型 肝 炎 病 毒 是 一 种 单 链 正 股 RNA 病 毒, 归 类 于 黄 病 毒 科, 主 要 通 过 血 液 传 播 此 病 毒 呈 全 球 性 分 布, 无 明 确 地 理 界 限 全 球 约 有 1% 的 人 感 染 此 病, 约 50% 以 上 慢 性 肝 炎 是 由 HCV 感 染 引 起 的 我 国 由 于 对 献 血 员 筛 选 方 法 不 够 灵 敏, 急 性 病 毒 性 肝 炎 中, 输 血 后 乙 肝 发 病 率 占 2/3, 其 余 1/3 为 丙 型 肝 炎, 其 中 20 30% 病 人 发 展 为 肝 硬 化 因 此, 为 保 障 血 液 安 全, 维 护 受 血 者 的 健 康 利 益, 寻 找 一 种 快 速 简 便 准 确 的 诊 断 方 法, 对 患 者 提 供 早 期 诊 断, 是 时 势 所 趋
2 荧 光 PCR 检 测 HCV RNA Bringing Technology to Life 血 清 中 的 HCV RNA 是 病 毒 复 制 和 进 程 的 确 切 标 志 所 以, 检 测 血 清 HCV-RNA 已 成 为 诊 断 HCV 病 毒 血 症 的 金 标 准 HCV 感 染 者 血 清 病 毒 滴 度 通 常 很 低, 常 规 分 子 杂 交 技 术 难 以 检 出 HCV-RNA 近 年 发 展 的 RT-PCR, 巢 式 PCR 技 术 将 HCV-RNA 的 特 异 性 和 灵 敏 度 大 大 提 高, 而 荧 光 PCR 的 出 现 又 将 此 技 术 推 向 了 另 一 台 阶 通 过 荧 光 PCR 的 方 法 可 以 直 接 检 测 HCV-RNA, 大 大 提 高 HCV 感 染 的 检 测 准 确 性, 有 利 于 疾 病 的 早 期 诊 断, 可 将 窗 口 期 缩 短 50 多 天, 对 窗 口 期 感 染 的 筛 选 和 提 高 输 血 安 全 也 非 常 有 意 义 此 外, 在 抗 病 毒 药 物 治 疗 中,HCV RNA 是 对 其 疗 效 评 价 的 指 标 之 一, 其 检 测 HCV RNA 的 滴 度 和 基 因 型 可 对 用 药 和 预 后 提 供 参 考 在 治 疗 过 程 中,HCV RNA 的 动 态 监 测 同 时 还 可 为 临 床 上 的 用 药 剂 量 时 间 提 供 依 据 结 核 杆 菌 近 20 年 来, 曾 经 控 制 在 很 低 水 平 的 结 核 病, 在 世 界 范 围 内 有 死 灰 复 燃 的 趋 势 我 国 卫 生 部 组 织 的 第 四 次 全 国 结 核 病 流 行 病 学 抽 样 调 查 显 示 : 目 前 我 国 有 4 亿 人 感 染 过 结 核 杆 菌, 现 有 传 染 性 结 核 病 人 200 万 人, 这 使 我 国 成 为 全 球 22 个 结 核 病 高 负 担 的 国 家 之 一, 结 核 病 人 数 位 居 世 界 第 二, 仅 次 于 印 度 结 核 病 的 致 病 菌 是 结 核 杆 菌, 主 要 通 过 呼 吸 道 传 播, 亦 可 以 从 消 化 道 进 入 人 体, 其 对 外 界 的 抵 抗 力 较 强, 在 阴 湿 的 地 方 可 以 存 活 5 个 月 以 上, 带 菌 的 痰 液 是 结 核 杆 菌 的 主 要 传 染 源 结 核 病 尚 有 一 个 不 同 于 其 他 传 染 病 的 特 点 : 大 多 数 人 被 感 染 上 结 核 杆 菌 后 并 不 马 上 发 病, 多 数 可 以 终 生 不 发 病 PCR 检 测 结 核 杆 菌 DNA 是 一 种 病 因 学 检 测, 取 材 方 便 简 便 快 速, 整 个 过 程 仅 需 1 个 多 小 时, 可 以 做 到 当 天 取 材, 当 天 检 测, 当 天 出 结 果, 利 于 患 者 的 早 期 诊 断 早 期 治 疗 而 且 目 前 荧 光 PCR 检 测 的 灵 敏 度 和 特 异 性 极 高, 数 据 由 计 算 机 处 理, 客 观 公 正, 保 证 了 诊 断 的 准 确 性. 肺 炎 支 原 体 肺 炎 支 原 体 以 引 起 间 质 性 肺 炎 为 主, 并 有 支 气 管 肺 炎, 也 称 原 发 性 非 典 型 性 肺 炎 支 原 体 肺 炎 是 儿 科 常 见 传 染 病, 约 占 儿 童 肺 炎 的 10%, 主 要 通 过 飞 沫 传 播, 成 人 偶 发 在 秋 冬 交 接 之 季 发 病 率 高, 该 病 症 状 较 轻, 多 数 不 表 现 出 任 何 症 状, 无 特 异 性 体 征 从 患 者 的 痰 中 检 测 肺 炎 支 原 体 DNA, 可 以 从 病 因 学 上 作 出 明 确 的 诊 断, 并 可 实 时 跟 踪 治 疗 效 果 诊 断 方 法 科 学 简 便, 快 速 另 外 PCR 尚 可 检 测 幽 门 螺 杆 菌 柯 萨 奇 病 毒 EB 病 毒 伤 寒 杆 菌 等 二 PCR 技 术 在 性 传 播 性 疾 病 方 面 的 应 用 爱 滋 病 艾 滋 病 是 英 语 "AIDS" 中 文 名 称,AIDS 是 获 得 性 免 疫 缺 陷 综 合 征 的 英 文 缩 写 它 是 由 于 感 染 了 人 类 免 疫 缺 陷 病 毒 ( 简 称 HIV) 后 引 起 的 一 种 致 死 性 传 染 病 HIV 主 要 破 坏 人 体 的
3 免 疫 系 统, 使 机 体 逐 渐 丧 失 防 卫 能 力 而 不 能 抵 抗 外 界 的 各 种 病 原 体, 因 此 极 易 感 染 一 般 健 康 人 所 不 易 患 的 感 染 性 疾 病 和 肿 瘤, 最 终 导 致 死 亡 一 个 感 染 上 艾 滋 病 病 毒 的 人, 也 许 会 在 很 长 的 一 段 时 间 内 看 上 去 或 是 自 我 感 觉 起 来 很 好, 但 是 他 们 却 可 以 把 病 毒 传 染 给 别 人 艾 滋 病 从 发 现 至 今 还 不 到 20 年, 但 它 在 全 球 所 引 起 的 广 泛 流 行, 已 使 3000 多 万 人 受 到 感 染,1000 多 万 人 失 去 了 生 命 目 前, 世 界 上 每 天 有 万 余 人 新 感 染 上 艾 滋 病 病 毒 不 但 医 学 界 在 竭 尽 全 力 研 究 预 防 治 疗 艾 滋, 各 国 政 府, 社 会 各 阶 层 也 都 纷 纷 投 入 了 对 抗 艾 滋 病 的 运 动 但 到 目 前 为 止, 我 们 人 类 还 没 有 找 到 一 种 治 疗 此 病 的 方 法 因 此, 为 了 自 身 的 健 康 和 家 庭 的 幸 福, 大 家 都 应 该 关 注 艾 滋 病 了 解 艾 滋 病, 进 而 预 防 艾 滋 病 HIV 的 传 播 途 径 只 有 三 个 : 1) 水 平 传 播 2) 血 液 传 播 3) 母 婴 垂 直 传 播 爱 滋 病 分 布 范 围 广, 遍 布 全 国 的 的 20 多 个 省 市, 感 染 者 呈 年 轻 化 趋 势, 男 女 比 例 大 致 为 :4~5:1, 目 前 尚 无 一 个 比 较 好 的 检 测 方 法, 医 学 实 验 室 常 用 检 查 主 要 有 : 1) 检 测 抗 体 目 前 主 要 有 ELISA IFA RIA WB 等, 这 些 方 法 的 敏 感 性 都 比 较 高, 但 是 由 于 HIV 的 全 病 毒 抗 原 与 其 他 逆 转 录 病 毒 存 在 交 叉 反 应,HIV 感 染 的 淋 巴 细 胞 抗 原 与 一 些 人 血 清 中 的 抗 HLA 抗 体 存 在 交 叉 反 应, 故 有 一 定 的 假 阳 性 反 应, 因 此 此 类 实 验 仅 适 用 于 筛 查 HIV 抗 体, 不 宜 用 于 确 诊 2) 运 用 PCR 法 检 测 HIV 的 RNA, 可 以 检 测 出 标 本 中 微 量 的 HIV 基 因 组, 属 病 因 学 检 测, 敏 感 度 高, 特 异 性 好, 几 乎 不 存 在 交 叉 反 应, 且 在 患 者 早 期 就 可 作 出 诊 断, 大 大 缩 短 窗 口 期, 利 于 爱 滋 病 疫 情 蔓 延 的 控 制 淋 病 性 传 播 疾 病 是 当 今 世 界 上 广 泛 流 行 的 传 染 病, 其 中 淋 病 的 发 病 率 最 高, 临 床 上 男 性 一 般 有 典 型 症 状, 女 性 症 状 不 典 型 或 无 症 状, 但 可 引 起 宫 颈 炎, 尿 道 炎, 子 宫 内 膜 炎, 输 卵 管 炎, 盆 腔 炎, 不 孕 症 等 多 种 妇 科 疾 病 孕 妇 可 经 产 道 感 染 婴 儿 致 淋 菌 性 眼 结 膜 炎 目 前, 淋 病 约 占 性 病 的 70% 以 上, 近 年 来 我 国 的 发 病 率 呈 上 升 趋 势 发 病 人 数 每 年 以 二 三 倍 速 度 增 加, 而 且 逐 渐 由 沿 海 地 区 向 内 地 漫 延, 由 城 市 向 农 村 扩 散 由 于 淋 病 的 临 床 表 现 缺 乏 特 异 性, 其 确 诊 主 要 靠 实 验 室 PCR 检 查, PCR 检 测 直 接 检 测 细 菌 的 DNA, 实 现 了 快 速 特 异 敏 感 地 检 测 和 鉴 定 淋 球 菌 的 目 的 可 对 分 离 培 养 的 菌 株 进 行 鉴 定 和 进 一 步 分 析, 提 高 检 测 临 床 标 本 的 阳 性 率 和 准 确 性, 同 时 还 可 作 为 抗 生 素 治 疗 的 疗 效 观 察 梅 毒 由 梅 毒 螺 旋 体 引 起 是 性 传 播 疾 病 中 危 害 较 大 的 一 种 疾 病 症 状 表 现 多 样 化, 且 时 隐 时 现, 病 情 可 持 续 很 长 早 期 主 要 侵 犯 皮 肤 和 粘 膜, 晚 期 侵 犯 心 脏 血 管 系 统 及 中 枢 神 经 系 统 梅 毒 可 通 过 胎 盘 传 给 胎 儿 引 起 流 产 早 产 死 产 或 分 娩 出 先 天 性 梅 毒 儿, 若 不 经 治 疗
4 半 年 内 死 亡 Bringing Technology to Life 1. 潜 伏 梅 毒 感 染 梅 毒 后 经 一 定 活 动 期, 或 肌 体 免 疫 性 增 强, 或 由 于 治 疗 的 影 响, 症 状 暂 时 消 退 但 未 痊 愈, 此 阶 段 称 为 潜 伏 梅 毒 将 感 染 2 年 以 内 的 潜 伏 梅 毒 定 为 早 期 潜 伏 梅 毒, 约 有 20% 病 人 可 发 生 二 期 复 发 梅 毒 说 明 有 传 染 性 2 年 以 上 者 定 为 晚 期 潜 伏 梅 毒, 传 染 性 较 小, 但 10-20% 可 发 生 心 血 管 或 神 经 梅 毒,10-15% 可 能 发 生 晚 期 皮 肤 粘 膜 或 骨 骼 梅 毒 早 期 潜 伏 梅 毒 的 孕 妇, 会 胎 传 给 胎 儿, 故 妊 娠 期 内 应 进 行 治 疗 2. 妊 娠 梅 毒 孕 期 发 生 活 动 性 梅 毒 或 潜 伏 梅 毒 称 为 妊 娠 梅 毒 梅 毒 螺 旋 体 可 通 过 胎 盘 传 给 胎 儿, 引 起 胎 盘 坏 死, 导 致 流 产 早 产 或 足 月 分 娩 先 天 梅 毒 儿 妊 娠 梅 毒 对 母 体 和 胎 儿 都 是 有 害 的, 从 优 生 优 育 考 虑 患 梅 毒 妇 女 未 经 治 愈 前 不 能 结 婚 并 避 免 怀 孕, 如 已 妊 娠 应 在 妊 娠 早 期 接 受 充 足 治 疗, 防 止 胎 儿 被 感 染 PCR 采 用 直 接 检 测 梅 毒 螺 旋 体 的 DNA, 其 敏 感 性 特 异 性 更 高, 可 效 防 止 交 叉 反 应, 对 早 期 梅 毒, 特 别 是 症 状 不 典 型 的 梅 毒 患 者 有 较 高 的 临 床 意 义, 且 PCR 法 检 测 简 便 快 速, 整 个 过 程 仅 需 1.5 小 时 左 右, 可 以 做 到 早 期 发 现 早 期 治 疗 尖 锐 湿 疣 由 人 类 乳 头 瘤 病 毒 引 起 近 20 年 来 世 界 各 地 发 病 率 迅 速 增 加, 我 国 亦 然 该 病 潜 伏 期 很 长 (1-8 个 月 ), 大 部 分 病 人 无 症 状, 孕 妇 患 此 病 婴 儿 通 过 产 道 可 发 生 喉 部 感 染 导 致 喉 部 乳 头 瘤 发 生 该 病 复 发 率 高, 须 定 期 复 查 该 病 实 验 室 诊 断 有 细 胞 学 组 织 病 理 学 检 查, 免 疫 学 实 验, 这 些 方 法 或 繁 琐 或 敏 感 性 差 而 被 更 敏 感 的 核 酸 检 测 技 术 取 代 而 在 核 酸 检 测 技 术 中 PCR 以 其 方 便 快 速 特 异 敏 感 而 最 适 用 于 临 床 性 传 播 疾 病 的 检 查 范 围 性 传 播 疾 病 的 检 测 范 围 不 只 是 病 人 以 及 高 危 人 群 目 前 专 家 认 为 在 婚 前 产 前 输 血 前 后 升 学 就 业 参 军 以 及 幼 教 老 师 等 体 检 应 做 梅 毒 及 其 他 性 传 播 性 疾 病 检 测 三 PCR 在 优 生 优 育 五 项 中 的 应 用 沙 眼 衣 原 体 沙 眼 衣 原 体 除 致 沙 眼 外, 在 临 床 上 常 引 起 泌 尿 生 殖 道 感 染, 有 时 还 可 以 引 起 不 育, 严 重 影 响 患 者 生 活 发 展 的 临 床 检 测 方 法 也 有 多 种, 其 中 培 养 法 属 金 标 准, 但 沙 眼 衣 原 体 为 专 性 细 胞 寄 生 性, 一 般 培 养 不 能 生 长, 只 在 活 细 胞 内 才 能 增 殖 复 制, 较 难 直 接 用 于 临 床
5 检 测, 多 用 于 科 研 ; 免 疫 学 方 法 有 直 接 免 疫 荧 光 测 定, 有 一 定 主 观 因 素 ; 而 EIA 法, 对 高 危 人 群 筛 查 尚 可, 但 易 与 金 葡 链 球 菌 淋 球 菌 等 发 生 交 叉 反 应 使 其 特 异 性 受 影 响 PCR 检 测 克 服 以 上 诸 方 面 不 足, 是 目 前 较 有 发 展 前 途 的 一 种 检 测 手 段 当 然, 在 使 用 中 也 有 不 足 : 易 有 假 阳 性 和 假 阴 性, 但 随 着 防 污 染 盒 的 使 用 和 其 它 技 术 的 完 善, 以 使 该 检 测 方 法 更 适 用 于 临 床 TORCH 感 染 TORCH 感 染 是 围 产 期 慢 性 非 细 菌 性 感 染, 这 些 病 原 体 通 过 孕 妇 的 胎 盘 经 血 流, 淋 巴 循 环 或 污 染 的 羊 水 感 染 胎 儿 孕 妇 感 染 这 些 病 原 体 后 其 自 身 绝 大 多 数 无 明 显 症 状, 因 此 极 易 漏 诊 和 误 诊 但 这 些 病 原 体 经 胎 盘 传 给 胎 儿 后 危 害 很 严 重 使 胎 儿 被 感 染 导 致 流 产 死 胎 畸 胎 及 先 天 性 感 染 等 目 前 主 要 检 查 弓 形 虫 风 疹 病 毒 巨 细 胞 病 毒 单 纯 疱 疹 I 病 毒 单 纯 疱 疹 II 病 毒, 即 TORCH 感 染 TO 即 刚 地 弓 形 虫,R 即 风 疹 病 毒,C 即 巨 细 胞 病 毒,H 即 单 纯 疱 疹 病 毒 I II 型 弓 形 虫 弓 形 虫 是 一 种 寄 生 在 人 和 动 物 组 织 细 胞 内 的 寄 生 虫 弓 形 虫 病 一 般 分 为 先 天 性 和 获 得 性 两 种 先 天 性 弓 形 虫 病 是 指 母 亲 在 妊 娠 期 间 感 染 弓 形 虫 而 发 生 虫 血 症 经 胎 盘 传 给 胎 儿 引 起 胎 儿 宫 内 感 染, 中 枢 神 经 系 统 是 最 受 累 的 部 位, 其 次 为 眼 ; 获 得 性 弓 形 虫 病 是 经 消 化 道 感 染, 也 可 通 过 皮 肤 和 粘 膜 感 染, 多 发 于 轻 壮 年, 淋 巴 结 受 累 较 多 见, 严 重 病 例 可 侵 犯 多 个 器 官 本 病 广 泛 分 布 于 世 界 各 地, 传 染 源 主 要 为 动 物 临 床 表 现 :1 先 天 性 弓 形 虫 病 : 脑 病 : 小 头 畸 形 脑 积 水 无 脑 儿 ; 眼 部 : 脉 络 膜 视 网 膜 炎 视 神 经 炎 虹 膜 睫 状 体 炎 白 内 障 ;2 获 得 性 弓 形 虫 病 : 低 烧 淋 巴 结 肿 大 风 疹 病 毒 风 疹 病 毒 感 染 分 为 先 天 和 后 天 两 种, 先 天 风 疹 综 合 症 (congenital rubella syndrome CRS ): 孕 妇 妊 娠 头 四 个 月 感 染 风 疹, 病 毒 可 经 血 流 通 过 胎 盘 侵 犯 婴 儿 除 流 产 死 产 外, 活 产 者 部 分 可 无 症 状, 但 相 当 部 分 表 现 出 单 个 或 多 个 器 官 受 侵 后 的 损 害, 观 察 时 间 愈 长, 异 常 率 愈 高 主 要 表 现 如 下 : 低 体 重 : 出 生 时 常 2500g, 生 后 发 育 也 缓 慢 全 身 各 器 官 损 害 导 致 的 畸 形 或 发 育 功 能 异 常 ; 白 内 障, 视 网 膜 色 素 膜 病, 小 眼, 青 光 眼, 角 膜 云 翳, 虹 膜 发 育 不 全 等 ; 感 觉 性 神 经 性 耳 聋 或 听 力 迟 钝 ; 持 续 性 动 脉 导 管 未 闭, 肺 动 脉 狭 窄 或 发 育 不 全, 心 肌 损 害 ; 小 头 畸 形, 急 性 脑 膜 脑 炎, 智 力 低 下, 嗜 睡, 进 行 性 全 脑 炎 ; 肝 脾 肿 大, 黄 疸, 肝 炎 ; 血 小 板 缺 少 性 紫 癜, 骨 髓 外 造 血 ; 间 质 性 肺 炎 ; 其 它 晚 期 症 状 : 糖 尿 病, 胸 腺 发 育 不 全, 甲 状 腺 机 能 不 全, 生 长 激 素 缺 乏 巨 细 胞 病 毒 CMV 是 引 起 人 类 先 天 畸 形 的 重 要 原 因 之 一, 在 许 多 地 区 比 风 疹 病 毒 更 重 要 孕 妇 的 原
6 发 或 新 的 复 发 感 染 均 可 引 起 胎 儿 宫 内 感 染 或 新 生 儿 围 产 期 感 染 CMV 先 天 感 染 的 婴 儿 中 约 5% 表 现 为 典 型 的 全 身 巨 细 胞 包 涵 体 病 严 重 的 感 染 可 使 婴 儿 在 数 日 或 数 周 内 死 亡 5% 的 病 例 表 现 为 非 典 型 的 临 床 表 现 其 余 90% 属 亚 临 床 型 新 生 儿 巨 细 胞 包 涵 体 病 的 特 症 是 网 状 内 皮 系 统 和 中 枢 神 精 系 统 受 侵, 有 的 合 并 听 觉 系 统 损 害 有 部 分 患 儿 临 床 表 现 轻 微 易 被 忽 视 或 误 诊, 而 到 后 期 发 生 严 重 中 枢 神 经 系 统 损 害 患 CID 的 婴 儿 有 90% 以 上 在 出 生 后 二 年 发 展 成 显 著 的 智 力 或 感 知 缺 陷 有 的 患 儿 发 生 严 重 听 觉 视 觉 异 常 亚 临 床 感 染 预 后 较 好, 约 有 10% 婴 儿 发 生 神 经 性 耳 聋, 通 常 在 2 岁 内 发 生, 有 的 合 并 轻 度 脑 功 能 障 碍 单 纯 疱 疹 病 毒 单 纯 疱 疹 病 毒 分 I 型 和 II 型 两 种, 型 单 纯 疱 疹 病 毒 存 在 于 女 性 阴 道 和 宫 颈, 与 宫 颈 癌 的 发 生 关 系 极 为 密 切 孕 早 期 感 染 者 该 病 毒 能 破 坏 胚 芽 而 导 致 流 产, 孕 中 晚 期 感 染 者 虽 然 很 少 发 生 畸 形, 但 可 引 起 胎 儿 发 病 新 生 儿 可 以 在 通 过 产 道 时 获 得 感 染 单 纯 疱 疹 病 毒 可 引 起 角 膜 炎, 其 特 点 是 分 泌 物 少 或 无 复 发 性 病 变 表 现 为 树 枝 状 角 膜 炎 或 角 膜 溃 疡 病 变 可 达 角 膜 基 层, 引 起 角 膜 永 久 性 混 浊, 甚 至 失 明 由 于 这 些 病 原 体 感 染 的 临 床 症 状 不 典 型, 在 临 床 诊 断 上 就 造 成 了 一 定 的 困 难, 所 以 以 上 疾 病 的 诊 断 主 要 依 靠 实 验 室 诊 断 PCR 是 通 过 对 病 原 体 基 因 中 高 保 守 特 异 性 核 酸 序 列 的 扩 增 来 检 测 病 原 体 是 否 在 患 者 体 内 存 在 四 PCR 技 术 在 遗 传 性 疾 病 方 面 的 应 用 遗 传 性 的 基 因 缺 陷 导 致 的 疾 病 占 人 口 总 数 1%, 是 临 床 中 不 可 忽 视 的 一 类 疾 病 按 遗 传 方 式 与 遗 传 物 质 的 关 系, 遗 传 病 总 括 可 分 为 单 基 因 遗 传 病, 多 基 因 遗 传 病 及 染 色 体 异 常 遗 传 病 遗 传 病 是 由 基 因 在 性 细 胞 的 突 变 引 起 的 突 变 可 分 为 以 下 几 类 :1. 基 因 取 代 ;2. 缺 插 性 点 突 变 ;3. 非 编 码 序 列 的 点 突 变 ;4.DNA 重 排 突 变 可 以 自 发 或 诱 导 产 生 作 为 基 因 突 变 的 检 测, 实 验 室 较 易 做 的 基 因 分 析,PCR 方 法 使 用 主 要 可 分 为 四 种, 分 述 如 下 一 PCR 结 合 等 位 基 因 特 异 性 寡 核 苷 酸 (ASO) 探 针 法 其 原 理 基 于 对 已 知 有 突 变 热 点 基 因 进 行 检 测 用 PCR 扩 增 目 的 基 因, 将 产 物 固 定 于 尼 龙 膜 上, 针 对 各 种 常 见 突 变 点 合 成 一 系 列 正 常 及 突 变 的 寡 核 苷 酸 探 针, 将 产 物 与 探 针 杂 交, 利 用 非 同 源 序 列 不 能 杂 交 的 原 理, 可 发 现 突 变 位 点 二 PCR 扩 增 特 异 等 位 基 因 (PASA) 其 原 理 为 引 物 3 末 端 的 碱 基 决 定 PCR 反 应 特 异 性 及 扩 增 效 率, 引 物 3 末 端 碱 基 与 模 板 相 互 配 对 时,Taq 酶 才 能 使 引 物 延 伸, 产 生 特 异 PCR 扩 增 产 物 因 此 设 计 引 物, 使 突 变 位 点 位 于 3 末 端, 根 据 特 异 性 产 物 出 现 与 否 可 判 断 样 品 中 是 否 有 基 因 突 变 存 在 三 限 制 性 片 断 长 度 多 态 性 分 析 (PCR--RFLP) 如 果 碱 基 突 变 位 置 与 某 种 限 制 性 内 切 酶 识 别 位 点 相 关, 突 变 会 产 生 新 的 或 消 除 原 有 内 切 酶 位 点 选 用 特 定 的 限 制 性 内 切 酶 消 化 PCR 产 物, 通 过 电 泳 酶 切 图 谱 可 直 接 判 断 基 因 突 变 四 单 链 构 向 多 态 分 析 (PCR SSCP) 单 链 DNA 呈 复 杂 构 象, 空 间 结 构 依 靠 链 内 碱
7 基 配 对 维 系, 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 可 根 据 电 泳 迁 移 率 的 改 变 敏 感 地 发 现 突 变 的 存 在 除 基 因 分 析 外, 还 可 使 用 定 序 克 隆 或 序 列 分 析 决 定 突 变, 但 在 技 术 上 及 设 备 上 均 要 求 较 高, 不 是 一 种 实 验 室 易 实 践 的 方 法
( ) 1 2 3 4 1 1 2 1 3 4 5 6 2 1 2 3 4 5 6 2 HIV ( ) ( ) 1 (1) (2) (3) 3 (4) 2 3 ( ) 1 A4 2 4 3 4 ( ) HIV 1 2 3 4 ( ) 5 2 2 2 24 24 2 2 24 6 1 2 7 3 4 5 ( ) 3 8 9 1 2 * * * * * * * (1) (2) * * * * * * 10
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华 泰 财 产 保 险 股 份 有 限 公 司 境 外 旅 行 人 身 意 外 伤 害 保 险 条 款 总 则 第 一 条 本 保 险 合 同 由 保 险 条 款 投 保 单 保 险 单 保 险 凭 证 以 及 批 单 等 组 成 凡 涉 及 本 保 险 合 同 的 约 定, 均 应 采 用 书 面 形 式 第 二 条 被 保 险 人 应 为 年 满 一 周 岁 ( 见 第 1 条 释 义 ) 至
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