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Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号 : DP181214 RelaxGene Blood DNA System (0.1-20 ml) 血液基因组 DNA 提取系统 (0.1-20 ml) ( 非离心柱型 ) 目录号 :DP349 产品内容 产品组成 DP349-01 DP349-02 ( 可处理 50 ml 血液 ) ( 可处理 200 ml 血液 ) 细胞裂解液 CLA(Buffer CLA) 125 ml 2 250 ml 缓冲液 FGA(Buffer FGA) 40 ml 160 ml 洗脱缓冲液 TB(Buffer TB) 30 ml 60 ml Proteinase K 250 μl 1 ml 储存条件该试剂盒置于室温 (15-25 ) 干燥条件下, 可保存 12 个月, 更长时间的保存可置于 2-8 2-8 保存条件下, 若溶液产生沉淀, 使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间, 必要时可在 37 水浴中预热 10 min, 以溶解沉淀

产品简介本试剂盒采用独特的缓冲液系统, 提取 0.1-20 ml 加入各种抗凝剂的新鲜血液和冻存血液样品基因组 DNA 本缓冲液系统可最大限度去除蛋白 色素 脂类及其他抑制性杂质污染 提取的基因组 DNA 片段大, 产量高, 纯度好, 稳定可靠 本试剂盒避免使用苯酚 氯仿等有机溶剂, 回收的 DNA 可适用于各种常规操作, 如酶切 PCR 文库构建 Southern 杂交等实验 提取得率 ( 根据血液样品中白细胞数量的不同,DNA 产量有所差异 ) 材料 保存时间 提取量 DNA 产量 OD 260 / OD 280 人类全血 4 一周 300 μl 3-10 μg 1.7-1.9 人类全血 4 一周 1 ml 4-30 μg 1.7-1.9 人类全血 4 一周 5 ml 100-200 μg 1.7-1.9 人类全血 4 一周 10 ml 200-400 μg 1.7-1.9 产品特点量大质优 : 提取 0.1-20 ml 各种血液, 可获得多达 2-400 μg 高纯度 DNA 安全可靠 : 无苯酚 氯仿等有机溶剂的污染 价廉物美 : 与同类产品相较, 性价比高, 纯化得到的 DNA 样品可长期保存 注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项 1. 血液样品反复冻融, 会导致提取的 DNA 片段较小 且提取量下降 所得基因组 DNA 也应尽可能避免反复冻融, 以免断裂 2. 血液样品的储存 : a) 短期保存 : 已加入抗凝剂的血液样品可在 2-8 储存最多 10 天, 对于某些实验例如 Southern 杂交等, 需要得到完整全长的基因组 DNA, 请将血液样品在 2-8 储存不超过 3 天, 此时基因组 DNA 的降解程度较轻 b) 长期保存 : 已加入抗凝剂的血液请置于 -70 保存 ( 如果提取的是高分子量的 DNA, 推荐使用 EDTA 作为抗凝剂 ) 3. 所有离心操作均可在室温下完成 2

一 小体积全血操作流程 (<600 μl 血样 ; 以 300 μl 血液处理量为例 ) 1. 向 300 μl 抗凝剂的血液中加入 750 μl 细胞裂解液 CLA, 颠倒混匀 20 次 注意 : 为方便与离心机配套使用, 可加入与血液等体积的细胞裂解液 CLA, 重复裂解两次 2. 12,000 rpm (~13,400 g) 离心 1 min 倒弃上清, 将离心管倒置在干净的吸水纸上停留 2 min, 确保沉淀在管中 ( 此步骤应小心操作, 为避免沉淀被倒出, 推荐使用尖底离心管 ) 注意 : 在极少的情况下沉淀可能会很松弛, 所以要缓慢倒上清, 将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流 3. 按照表 1 配制缓冲液 FGA 与 Proteinase K 的混合液 注意 : 此混合液最好现用现配, 并在配好后 1 h 之内用完 4. 加入 200 μl 缓冲液 FGA 与 Proteinase K 的混合液, 立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液无团块 注意 : 当处理多个样品时, 加入缓冲液 FGA 和 Proteinase K 的混合液后要立即上下剧烈震荡或涡旋混匀, 不要等所有的样品加完后再混匀 有可能出现痕量的胶状沉淀难以混匀, 此时可再次补加缓冲液 FGA 和 Proteinase K 的混合液 ( 具体补加量见表 1), 再次涡旋混匀 5. 65 水浴 10 min, 其间颠倒混匀数次 6. 加入 200 μl 异丙醇, 上下颠倒混匀 50 次至出现丝状或簇状基因组 DNA 注意 : 与异丙醇完全混合对于沉淀 DNA 非常重要, 应该仔细观察 7. 12,000 rpm(~13,400 g) 离心 5 min, 倒弃上清 将离心管倒置在干净的吸水纸上, 确保沉淀在管中 注意 : 在极少的情况下沉淀可能会很松弛, 所以要缓慢倒上清 如果样品的白细胞数量足够多, 可以看到白色的 DNA 沉淀 8. 加入 300 μl 70% 乙醇, 涡旋振荡 5 sec,12,000 rpm(~13,400 g) 离心 2 min, 倒弃上清 3

9. 将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少 5 min, 确保沉淀在管中 注意 : 在极少的情况下沉淀可能会很松弛, 所以要缓慢倒上清, 将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁中上清的回流 10. 空气干燥 DNA 沉淀直至所有的液体挥发干净 ( 至少 5 min) 注意 : 乙醇的残留会影响后续的酶反应 ( 酶切 PCR 等 ) 实验 但是要避免过分干燥 DNA 沉淀, 因为过于干燥的 DNA 很难溶解 11. 加入 200 μl 洗脱缓冲液 TB, 低速涡旋 5 sec,65 加热 20 min 溶解 DNA, 其间轻弹数次助溶 注意 : 如有难溶性物质存在, 可将 65 孵育时间延长至 1 h 二 中量全血操作流程 (1-10 ml 血样 ; 以 5 ml 血液处理量为例 ) 1. 向 5 ml 含抗凝剂的血液中加入 5 ml 细胞裂解液 CLA, 颠倒混匀 20 次,3,600 rpm (~2,000 g ) 离心 2 min, 倒弃上清 2. 再向其中加入 7.5 ml 细胞裂解液 CLA, 颠倒混匀 20 次,3,600 rpm (~2,000 g ) 离心 2 min 倒弃上清, 将离心管倒置在干净的吸水纸上停留 2 min, 确保沉淀在管中 ( 此步骤应小心操作, 为避免沉淀被倒出, 推荐使用尖底离心管 ) 注意 : 在极少的情况下沉淀可能会很松弛, 所以要缓慢倒上清, 将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流 3. 按照表 1 配制缓冲液 FGA 与 Proteinase K 的混合液 注意 : 此混合液最好现用现配, 并在配好后 1 h 之内用完 4. 加入 3.3 ml 缓冲液 FGA 与 Proteinase K 的混合液, 立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液无团块 注意 : 当处理多个样品时, 加入缓冲液 FGA 和 Proteinase K 的混合液后要立即上下剧烈震荡或涡旋混匀, 不要等所有的样品加完后再混匀 有可能出现痕量的胶状沉淀难以混匀, 此时可再次补加缓冲液 FGA 和 Proteinase K 的混合液 ( 具体补加量见表 1), 再次涡旋混匀 5.65 水浴 10-30 min, 其间颠倒混匀数次 4

6. 加入 3.3 ml 异丙醇, 上下颠倒充分 50 次至出现丝状或簇状基因组 DNA 注意 : 与异丙醇完全混合对于沉淀 DNA 非常重要, 应该仔细观察 7.3,600 rpm(~2,000 g ) 离心 8 min, 倒弃上清 将离心管倒置在干净的吸水纸上, 确保沉淀在管中 注意 : 在极少的情况下沉淀可能会很松弛, 所以要缓慢倒上清 如果样品的白细胞数量足够多, 可以看到白色的 DNA 沉淀 8. 加入 5 ml 70% 乙醇, 涡旋振荡 5 sec,3,600 rpm(~2,000 g ) 离心 3 min, 倒弃上清 9. 将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少 5 min, 确保沉淀在管中 注意 : 在极少的情况下沉淀可能会很松弛, 所以要缓慢倒上清, 将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁中上清的回流 10. 空气干燥 DNA 沉淀直至所有的液体挥发干净 ( 至少 5 min) 注意 : 乙醇的残留会影响后续的酶反应 ( 酶切 PCR 等 ) 实验 但是要避免过分干燥 DNA 沉淀, 因为过于干燥的 DNA 很难溶解 11. 加入 500 μl 洗脱缓冲液 TB, 低速涡旋 5 sec,65 加热 30 min 溶解 DNA, 其间轻弹数次助溶 注意 : 如果使用少量的洗脱缓冲液 TB 溶解 DNA, 孵育时间可能需要延长 三 大量全血操作流程 (10-20 ml 血样 ; 以 10 ml 血液处理量为例 ) 1. 处理样品 : a. 离心富集有核细胞进行核酸提取 : 将血样 3,600 rpm(~2,000 g ) 离心 15-20 min, 抽弃血浆, 取中间白膜层细胞加入到 15 ml 离心管中, 加入 10 ml 细胞裂解液 CLA, 涡旋混匀 10 sec,3,600 rpm(~2,000 g ) 离心 2 min, 倒弃上清 再加入 15 ml 细胞裂解液 CLA, 涡旋混匀 10 sec,3,600 rpm(~2,000 g ) 离心 2 min, 倒弃上清 5

b. 细胞裂解液 CLA 处理血液标本分次富集有核细胞进行核酸提取 : 在 15 ml 离心管中添加细胞裂解液 CLA 和血液样本 ( 比例 2.5:1), 多次富集进行下游实验 ( 例 10 ml 全血处理方式 : 在两个 15 ml 离心管中分别加入 5 ml 的全血和 10 ml 细胞裂解液 CLA, 颠倒混匀 5 次,3,600 rpm (~2,000 g ) 离心 3 min, 倒弃上清 ; 再向其中加入 2.5 ml 细胞裂解液 CLA, 涡旋混匀 10 sec, 混合到一支离心管里,3,600 rpm(~2,000 g ) 离心 3 min, 倒弃上清 ; 进行下游操作 ) 注意 : 细胞裂解液 CLA 处理步骤应小心操作, 为避免沉淀被倒出, 推荐使用尖底离心管 在极少的情况下细胞裂解液 CLA 处理得到的沉淀可能会很松弛, 所以要缓慢倒上清 2. 按照表 1 配置缓冲液 FGA 与 Proteinase K 的混合液, 对于 10-20 ml 的全血标本, 每个样品需要 6.7 ml 缓冲液 FGA 与 Proteinase K 工作液 注意 : 此混合液最好现用现配, 并在配好后 1 h 之内用完 3. 加入 6.7 ml 缓冲液 FGA 与 Proteinase K 的混合液, 立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液无团块 注意 : 当处理多个样品时, 加入缓冲液 FGA 和 Proteinase K 的混合液后要立即上下剧烈震荡或涡旋混匀, 不要等所有的样品加完后再混匀 有可能出现痕量的胶状沉淀难以混匀, 此时可再次补加 1 ml 洗脱缓冲液 FGA 和 Proteinase K 的混合液, 再次涡旋混匀 4.65 水浴 30 min, 其间颠倒混匀数次 注意 : 随着蛋白的消解, 溶液的颜色从红色变为黄绿色 5. 加入 6.7 ml 异丙醇, 上下颠倒混匀 50 次至出现丝状或簇状基因组 DNA 注意 : 与异丙醇完全混合对于沉淀 DNA 非常重要, 应该仔细观察 6. 离心 3,600 rpm(~2,000 g ) 离心 10 min, 倒弃上清 将离心管倒置在干净的吸水纸上, 确保沉淀在管中 注意 : 如果得到的团块过于松弛, 可以延长离心时间或者增大离心力 7. 加入 10 ml 70% 乙醇, 涡旋振荡 5 sec, 离心 3,600 rpm(~2,000 g ) 离心 3 min, 倒弃上清 注意 : 如果得到的团块过于松弛, 可以延长离心时间或者增大离心力 6

8. 将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少 5 min, 确保沉淀在管中 注意 : 在极少的情况下沉淀可能会很松弛, 所以要缓慢倒上清, 将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁中上清的回流 9. 空气干燥 DNA 沉淀直至所有的液体挥发干净 ( 至少 5 min) 注意 : 乙醇的残留会影响后续的酶反应 ( 酶切 PCR 等 ) 实验 但是要避免过分干燥 DNA 沉淀, 因为过于干燥的 DNA 很难溶解 10. 加入 1 ml 洗脱缓冲液 TB, 低速涡旋 5 sec,65 加热 1 h 溶解 DNA, 其间轻弹数次助溶 注意 : 如果使用少量的洗脱缓冲液 TB 溶解 DNA, 孵育时间需要延长 表 1 不同体积血液所需各种缓冲液用量 (μl) 血液体积 (μl) 100 300 1000 3000 5000 10000 20000 细胞裂解液 CLA 250 750 2500 7500 12500 25000 50000 缓冲液 FGA 67 200 667 2000 3333 6667 13333 Proteinase K 0.5 1.5 5 15 25 50 100 100% 异丙醇 67 200 667 2000 3333 6667 13333 70% 乙醇 100 300 1000 3000 5000 10000 20000 洗脱缓冲液 TB 100 200 200 300 500 1000 1000 补加缓冲液 FGA 和 Proteinase K 混合液 10 30 100 300 500 1000 1000 7

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