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说明书 Moibio Blood DNA Mini kit 小量全血基因组 DNA 提取试剂盒 ( 磁性微粒法 ) 货号 : DM104 试剂盒内容 试剂盒组成 DM104-01 (50 次 ) DM104-02 (100 次 ) 细胞裂解液 CL 10ml 20ml 结合液 CC 20ml 40ml 清洗液 CWⅠ 20ml 40ml 清洗液 CWⅡ 50ml 100ml 洗脱液 CS 5ml 10ml 磁性微粒 C 1ml 2ml 蛋白酶 K 0.5ml 1ml 说明书 1 份 1 份 储存条件 该试剂盒置于室温 (15-25 ) 干燥条件下, 可保存 12 个月 1 / 12

产品简介 Lanzhou Moibio Bio-Pharmaceuical Co., Ltd. 本试剂盒可以快速和高效的从 2-200ul 小量抗凝全血样本中提取分离到高品质基因组 DNA; 该方法也可用于血液 血浆 血清 体液和精液等样本中的基因组 DNA 的制备 该试剂盒允许单个或多个样本同时处理 没有酚 / 氯仿的抽提和耗时的步骤, 异丙醇或乙醇沉淀步骤也被淘汰 样本经专门研制的裂解液与蛋白酶 K 一起裂解消化后, 与磁性微粒 C 混合, 在高盐条件下 DNA 即吸附在磁性微粒表面, 在外加磁场下使 DNA 和蛋白质等其他杂质分离, 再经三个快速洗涤步骤去除微量盐和蛋白质污染物, 最后的 DNA 用水或低离子强度的缓冲液洗脱, 就可得高纯度的基因组 DNA, 纯化的 DNA 可在下游应用中直接使用而不需要进一步纯化 本试剂盒可以有效除去样本中蛋白质 多糖 酚类化合物 酶抑制剂等杂质 本试剂盒是专门用来提取高质量的组织基因组 DNA 的试剂盒 纯化得到的 DNA 可用于酶切 PCR 文库构建 Southern 杂交等等下游实验 提取得率 对于 100ul 新鲜抗凝全血样本, 得到的 DNA 产量不少于 2ug;DNA 纯度 OD260 /OD280 为 1.7-1.9 产品特点 1 操作方便, 可在 30 分钟内完成一次提取, 无需离心 加热, 可上自动核酸提取仪使用 2 安全性好, 无苯酚 氯仿等有机溶剂的污染 3 与同类产品相比较, 性价比高, 纯化得到的 DNA 样品纯度 稳定性好 注意事项 1 请将磁性微粒 C 充分漩涡震荡摇匀后使用 2 若试剂有沉淀, 可在热水浴中重新溶解摇匀后使用 3 本试剂盒要配合磁性分离架使用( 手动操作时 ) 4 磁性分离时可用手指压住磁性分离架上的离心管, 拿起磁性分离架上下颠倒几次, 以清洗管壁上的物质 ( 手动操作时 ) 5 本试剂盒试剂仅供本试剂盒使用, 不可与其它试剂盒试剂相互代替使用 2 / 12

提取方法 Lanzhou Moibio Bio-Pharmaceuical Co., Ltd. 一 100ul 全血中提取分离基因组 DNA 操作步骤 3 二 100-200ul 全血中提取分离基因组 DNA 操作步骤 4 三 其他样本量和禽类 两栖动物中提取分离基因组 DNA 操作步骤 5 四 干血 体液 头发 精子 唾液中提取分离基因组 DNA 操作步骤 5 五 动物组织 上皮细胞等样本中提取分离基因组 DNA 操作步骤 6 用户需提供的试剂 仪器 1.5ml 的无菌无酶离心管或 650ul 的无菌无酶离心管 96 孔深孔板 可调温水浴锅或金属浴 ( 手动操作时 ) 漩涡震荡器或其他震荡混合仪器 ( 手动操作时 ) 磁性分离设备 ( 磁性分离架 磁条等 ) 一 100ul 全血中提取分离基因组 DNA 操作步骤 1 取 100ul 的新鲜抗凝全血 ( 冷冻的抗凝全血先室温溶解 ) 转入 1.5ml 离心管或 96 孔深孔板中 2 加 200ul 细胞裂解液 CL 和 10ul 蛋白酶 K, 漩涡震荡混合 20s 或吸头吹吸混合 30 次 3 室温消化 15min, 期间轻弹管底或上下震荡混合数次以加速细胞裂解 注 : 也可置 65 水浴消化 10min, 能提高消化效率和减少消化时间 4 加 20ul 磁性微粒 C 和 400ul 结合液 CC, 漩涡震荡混合 10s 或上下震荡混合 1min, 室温放置 5min 注 : 取磁性微粒 C 前一定要先充分混匀磁性微粒 C, 可提前将结合液 CC 和磁性微粒 C 按比例混合均匀后加入 5 磁性分离 1min, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 6 加入 400ul 清洗液 CWⅠ, 漩涡震荡混合 15s, 室温放置 1min 7 磁性分离 30s, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 8 从磁力分离架上取下离心管, 加入 500ul 清洗液 CWⅡ, 涡旋震荡混合或上下震荡混合 20 次 9 磁性分离 30s, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁 3 / 12

铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 10 重复步骤 8 9 一次 11 打开离心管盖并将其置于磁性分离架上, 用移液器吸除所有液滴, 室温晾干 5-10min 12 从磁性分离架上取下离心管, 晾干后立刻加入 50-100μl 洗脱液 CS, 用移液器吹吸混合 30 次, 吸取混合液全部转入一新的 1.5ml 的离心管中,65 水浴放置 10min, 期间轻弹管底混 匀数次 13 将离心管置磁力分离架上分离 1min, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角 上, 溶液应完全澄清, 小心吸取上清液体, 避免磁性颗粒被吸出, 将上清液 ( 分离纯化得到 的 DNA 溶液 ) 转移到新的 1.5ml 离心管或 PCR 管中, 直接用于下游实验或 -20 保存备用 4 / 12

二 100-200ul 全血中提取分离基因组 DNA 操作步骤 1 取 100-200ul 的新鲜抗凝全血 ( 冷冻的抗凝全血先室温溶解 ) 转入一 1.5ml 离心管或 96 孔深孔板中 2 加 400ul 细胞裂解液 CL 和 20ul 蛋白酶 K, 漩涡震荡混合 20s 或吸头吹吸混合 30 次 3 置 65 水浴消化 10min, 期间轻弹管底或上下颠倒混合数次以加速细胞裂解 4 加 40ul 磁性微粒 C 和 800ul 结合液 CC, 漩涡震荡混合 10s 或上下震荡混合 1min, 室温放置 5min 注 : 取磁性微粒 C 前一定要先充分混匀磁性微粒 C, 可提前将结合液 CC 和磁性微粒 C 按比例混合均匀后加入 5 磁性分离 1min, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 6 加入 500ul 清洗液 CWⅠ, 漩涡震荡混合 15s, 室温放置 1min 7 磁性分离 30s, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 8 从磁力分离架上取下离心管, 加入 1000ul 清洗液 CWⅡ, 涡旋震荡混合或上下震荡混合 20 次 9 磁性分离 30s, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 10 重复步骤 8 9 一次 11 打开离心管盖并将其置于磁性分离架上, 用移液器吸除所有液滴, 室温晾干 5-10min 12 从磁性分离架上取下离心管, 晾干后立刻加入 100μl 洗脱液 CS, 用移液器吹吸混合 30 次, 吸取混合液全部转入一新的 1.5ml 的离心管中,65 水浴放置 10min, 期间轻弹管底混匀数次 13 将离心管置磁力分离架上分离 1min, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心吸取上清液体, 避免磁性颗粒被吸出, 将上清液 ( 分离纯化得到的 DNA 溶液 ) 转移到新的 1.5ml 离心管或 PCR 管中, 直接用于下游实验或 -20 保存备用 5 / 12

三 其他样本量和禽类 两栖动物全血中提取分离基因组 DNA 操作步骤 Lanzhou Moibio Bio-Pharmaceuical Co., Ltd. 步骤同上一, 具体用量如下 : 试剂量 细胞裂 蛋白酶 结合液 磁性微 清洗液 清洗液 清洗液 洗脱液 样本 解液 CL K CC 粒 C CWⅠ CWⅡ CWⅡ CS 2-20ul( 包括 20ul) 100ul 0ul 200ul 10ul 200ul 250ul 250ul 30-50ul 20-50ul( 包括 50ul) 100ul 5ul 200ul 10ul 200ul 250ul 250ul 30-50ul 50-100ul( 包括 100ul) 200ul 10ul 400ul 20ul 400ul 500ul 500ul 50-100ul 100-200ul( 包括 200ul) 400ul 20ul 800ul 40ul 500ul 1ml 1ml 100ul 禽类动物全血 100ul 200ul 10ul 400ul 40ul 500ul 500ul 500ul 100ul 两栖类动物全血 100ul 200ul 10ul 400ul 40ul 500ul 500ul 500ul 100ul 6 / 12

四 干血 体液 头发 精子 唾液中提取分离基因组 DNA 操作步骤 Lanzhou Moibio Bio-Pharmaceuical Co., Ltd. 1 取滴有血液 体液 精子等的滤纸, 剪成 3 3mm 大小的小块, 用干净的镊子取 3-5 块放入一 1.5ml 离心管中 头发 : 取 3 根带有毛囊的头发, 剪取其带有毛囊的发根部分, 用干净的镊子转入一 1.5ml 离心管中 精液 : 取 10-100ul 转入一 1.5ml 离心管中 2 加 200ul 细胞裂解液 CL 10ul 蛋白酶 K 10ulDTT 溶液 ( 未提供, 自配 1M 浓度的 DTT 溶液 ), 置 65 水浴消化 30min, 期间轻弹管底或上下颠倒混合数次以加速细胞裂解 3 加 400ul 结合液 CC, 漩涡震荡混合 10s, 室温放置 5min 4 取上清 500ul 转入另一新的 1.5ml 离心管中 注 : 对上清浑浊 上清中有颗粒物的可于室温 10000rpm 离心 2min, 再去上清 5 加 20ul 磁性微粒 C, 漩涡震荡混合 20s 或上下震荡混合 1min, 室温放置 5min 注 : 取磁性微粒 C 前一定要先充分混匀磁性微粒 C 6 磁性分离 1min, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 7 加入 400ul 清洗液 CWⅠ, 漩涡震荡混合 15s, 室温放置 1min 8 磁性分离 30s, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 9 从磁力分离架上取下离心管, 加入 500ul 清洗液 CWⅡ, 涡旋震荡混合或上下震荡混合 20 次 10 磁性分离 30s, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 11 重复步骤 9 10 一次 12 打开离心管盖并将其置于磁性分离架上, 用移液器吸除所有液滴, 室温晾干 5-10min 13 从磁性分离架上取下离心管, 晾干后立刻加入 50-100μl 洗脱液 CS, 用移液器吹吸混合 30 次, 吸取混合液全部转入一新的 1.5ml 的离心管中,65 水浴放置 10min, 期间轻弹管底混匀数次 14 将离心管置磁力分离架上分离 1min, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心吸取上清液体, 避免磁性颗粒被吸出, 将上清液 ( 分离纯化得到 7 / 12

的 DNA 溶液 ) 转移到新的 1.5ml 离心管或 PCR 管中, 直接用于下游实验或 -20 保存备用 五 动物组织 上皮细胞等样本中提取分离基因组 DNA 操作步骤 1 使用组织匀浆器 : 称取 30mg 的动物组织 ( 若样本为脾脏等蛋白含量较高的组织, 建议取 20mg) 到匀浆器中, 加入 500ul 细胞裂解液 CL, 快速匀浆或冰上匀浆, 研磨成细粉状, 取上清 200ul 到 1.5ml 离心管中 液氮 : 称取 10mg 的动物组织 ( 若样本为脾脏等蛋白含量较高的组织, 建议取 5mg; 若为鼠尾取 1cm 左右, 先将鼠尾剪碎 ), 置于 2ml 圆底离心管中, 加入液氮, 使用研棒研磨至细粉状, 在组织解冻前加入 200ul 细胞裂解液 CL, 混匀 2 在步骤 1 的离心管中加入 20ul 蛋白酶 K, 涡旋混合 15s, 新鲜组织需 RNase A 消化 RNA ( 未提供 : 自配 RNase A 的溶液, 取 5ul 加入, 涡旋混匀 ),65 水浴 30min, 期间可轻弹管底混匀数次以加速细胞裂解, 待消化液变澄清为止 若消化液不澄清可适当离心弃去沉淀颗粒物, 转移上清到一新离心管中, 继续下一步操作 注 : 若样本为脾脏等蛋白含量较高的组织, 可先在 200ul 细胞裂解液 CL 中加入 10ul 1M 的 DTT, 涡旋混匀 3 加 20ul 磁性微粒 C 和 400ul 结合液 CC, 漩涡震荡混合 20s 或上下震荡混合 1min, 室温放置 5min 注 : 取磁性微粒 C 前一定要先充分混匀磁性微粒 C, 可提前将结合液 CC 和磁性微粒 C 按比例混合均匀后加入 4 磁性分离 1min, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 5 加入 400ul 清洗液 CWⅠ, 漩涡震荡混合 15s, 室温放置 1min 6 磁性分离 30s, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 7 从磁力分离架上取下离心管, 加入 500ul 清洗液 CWⅡ, 涡旋震荡混合或上下震荡混合 20 次 8 磁性分离 30s, 弃上清 ( 将离心管放在磁性分离架上, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角上, 溶液应完全澄清, 小心移除所有上清液体, 避免磁性颗粒被吸出 ) 9 重复步骤 7 8 一次 10 打开离心管盖并将其置于磁性分离架上, 用移液器吸除所有液滴, 室温晾干 5-10min 8 / 12

11 从磁性分离架上取下离心管, 晾干后立刻加入 50-100μl 洗脱液 CS, 用移液器吹吸混合 30 次, 吸取混合液全部转入一新的 1.5ml 的离心管中,65 水浴放置 10min, 期间轻弹管底混 匀数次 12 将离心管置磁力分离架上分离 1min, 待所有的磁性颗粒被吸附在磁铁相邻的管壁角 上, 溶液应完全澄清, 小心吸取上清液体, 避免磁性颗粒被吸出, 将上清液 ( 分离纯化得到 的 DNA 溶液 ) 转移到新的 1.5ml 离心管或 PCR 管中, 直接用于下游实验或 -20 保存备用 9 / 12

DNA 浓度及纯度检测 提取的基因组 DNA 片段大小与样本保存时间 操作过程中的剪切力等因素有关 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度 DNA 在 OD260 处有显著吸收峰, 当 1cm 光程比色皿测定样品时,OD260 值为 1 相当于大约 50ug/ml 双链 DNA 40ug/ml 单链 DNA DNA 的量 =OD260 50ug/ml 稀释倍数 洗脱液体积 ml DNA 的纯度以 OD260 /OD280 来确定, 比值应在 1.7-1.9 之间 注 : 如果 DNA 样品稀释倍数过高,OD260 值低于 0.1 时, 测量值可能不准确, 建议使用 1cm 光程的微量比色皿测量样品 10 / 12

疑问解答 问题可能原因解决建议 DNA 收率低 影响下游实验应用问 题 未完全悬浮磁性微粒 C 用前需完全涡旋混匀悬浮磁性微粒 C 样品未裂解彻底减少样品的量, 或增加细胞裂解液的量细胞裂解时裂解效率适当增加蛋白酶 K 裂解消化时间低操作过程中可能损失在吸弃上清或吹吸混合过程中, 小心避免删了磁性微粒 C 除磁性微粒 C DNA 任然吸附在磁性可适当增加洗脱液 CS 的体积或放 65 水浴微粒 C 上 10min 可能由于蛋白酶 K 的活适当增加蛋白酶 K 的用量性降低 DNA 可能在清洗是被清洗时需用清洗液 CWⅡ 或 80% 乙醇洗除 DNA 含量不够 提取时增加样品用量 准确的使用提取的 DNA 的用量盐杂质干扰室温下可增加用 80% 乙醇洗乙醇干扰洗脱前需晾干含在磁性微粒 C 上的乙醇 11 / 12

提取示意图 加入样本 裂解液 ProK 震摇 20s 室温 15min 结合液 磁性微粒 震荡 5-10s 放置 5min 加清洗液 弃去上清 震摇 15s 放置 1min 弃去上清 晾干 加入洗脱液 吹吸混匀 放置 分离磁性微粒 吸取 DNA 注 : 本产品仅供科研使用! 12 / 12