吉林省科技发展计划项目申报书28426

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功詹
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1 计划类别 : 自然科学基金项目类别 : 自然科学基金 ( 主题引导项目 ) 支持领域 : 支持重点 : 管理处室 : 中医药现代化主题中西医药比较研究基础处项目名称 : 申报主持单位 ( 盖章 ): 项目负责人 : 通讯地址 : 大黄调节脓毒症免疫紊乱的机制探索郑伟吉林长春市东风大街 2643 号固定电话 : 移动电话 : 传真 : 邮编 : 电子邮箱 : @qq.com 填报日期 : 吉林省科学技术厅二 O 一二年八月制

2 一申报项目基础信息项目名称大黄调节脓毒症免疫紊乱的机制探索项目所属学科临床医学项目所属专业治疗学经费预算总额 50.0 万元, 其中申请经费 50.0 万元起止年限至申报主持单位项目负责人申报参加单位 1 申报参加单位 2 名称所在绿园区地通讯地址吉林长春市吉林大学第四医院邮编单位类别企业科研机构高等院校事业单位其它隶属中直省直其它帐号开户银行吉林长春市工行驻一汽支行姓名郑伟性别女出生年月学历本科学位硕士身份证号职务主诊医师职称副高级电话工作单位邮箱 @qq om 名称所在地联系人帐号电话开户银行名称所在地联系人帐号电话开户银行脓毒症是重症监护室患者死亡的首要原因之一, 至今仍无治疗的特效药物目前研究结果项目简介 ( 研表明, 大黄可降低脓毒症的胃肠道肺和肝损伤, 可减少氧化应激, 改善微循环障碍, 而发内容拟解很多的研究报告指出大黄可以维持免疫平衡, 但具体作用机制不明确本研究旨在探讨大决关键技术黄及其组分对于脓毒症的作用, 并深入分析其对于免疫系统中巨噬细胞的调节机制首先预期技术经, 通过构建脓毒症小鼠模型, 分别观察大黄大黄素及大黄酚的治疗作用其次, 通过分济指标等析其对腹腔肝脏肺脏巨噬细胞激活的影响, 探讨对免疫系统调节作用的机制本研究 )(400 字以内主要解决如何构建与临床相似度高的脓毒症小鼠模型以及确定给药窗口期的问题通过本研究可以为临床治疗脓毒症找到新的靶点, 并且为如何降低脓毒症的病死率减少治疗费 ) 用指导临床治疗提供理论支持预期成果新产品新品种新工艺新装置新材料技术标准 ( 国际标准国家标准行业标准企业标准 ) 专利计算机软件论文论著研究报告其它预期专利授权获得国外发明专利 0 项, 国内专利 0 项, 其中发明专利 0 项成果预期作用形成自主研发能力突破关键技术试点示范规模生产推广应用提高经济效益其它第 1 页

3 二申报项目内容概况 (1) ( 一 ) 立项的必要性 (150 字以内 ) 脓毒症是危重病患者死亡的首要原因, 经过不懈努力病死率仍居高不下, 探讨和研究新的治疗方法迫在眉睫近年有大黄治疗脓毒症有效的报道, 也有研究提示其主要成分大黄素和大黄酚在调节免疫方面表现出了不同的作用, 但具体的机制还不明确, 有必要进一步探讨大黄治疗脓毒症调节免疫紊乱的机制, 以指导临床治疗降低病死率 ( 二 ) 相关技术国内外发展现状与趋势 (150 字以内 ) 研究发现免疫麻痹是脓毒症患者死亡的主要原因, 多种炎症介质发挥了重要的作用大黄的有效成分为大黄酚和大黄素, 有研究显示大黄酚可提高铅中毒小鼠的免疫能力, 大黄及大黄素可通过多种机制调控炎症因子的产生巨噬细胞是炎症因子的主要来源, 某些药物可通过抑制 M1 型促进 M2 型巨噬细胞而发挥抑制脓毒症的作用 ( 三 ) 前期工作基础 1 申报单位和项目负责人前期所开展的相关研究工作 (200 字内 ); 申请人所在课题组近年来一直从事脓毒症相关的研究, 旨在找到办法降低脓毒症的病死率曾于 2014 年 4 月年 9 月参加北京协和医院牵头的大型多中心研究以 PCO2/Ca-vO2 为目标指导脓毒症早期的多中心前瞻随机对照研究临床上开展了应用大黄治疗胰腺炎抑制全身炎症反应的观察性研究 2 前期研究所取得的进展和阶段性成果 (200 字以内 ) 研究显示 PCO2/Ca-vO2 组与 SVO2 组 30 内 60 天病死率住院时间住 ICU 时间脱离血管活间脱离机械通气时间脱离器官功能衰竭时间均没有差异, 可以用 PCO2/Ca-vO2 指导脓毒症早期复苏大黄减轻了重症胰腺炎引起的胰腺和其他器官的病理损伤, 降低淀粉酶超敏 C 反应蛋白及降钙素的水平, 减轻胰腺组织的损伤和抑制 SIRS, 从而减轻其他器官的损伤和 MOF, 缩短患者的住 ICU 时间及住院时间, 可降低治疗费用 ( 四 ) 研究 ( 开发 ) 内容和拟解决的关键技术问题 1 研究( 开发 ) 内容 (400 字以内 ) (1) 大黄及其成分大黄酚大黄素在小鼠脓毒血症模型中的治疗作用构建小鼠脓毒血症模型, 分别给予大黄及其成分大黄酚大黄素后, 观察小鼠的生存率取肝脏及肺, 从病理学角度观察炎症变化情况 ; 分离血清, 检测促炎及抗炎细胞因子的变化情况, 检测大黄对炎症的调节作用 (2) 大黄及其组分对脓毒血症中巨噬细胞的作用及机制 1) 模型鼠分别给予大黄及其成分大黄酚大黄素后, 分离腹腔巨噬细胞, 检测巨噬细胞的基因表达情况同时分析巨噬细胞的表型数量及分泌细胞因子情况, 以探讨大黄及其组分对巨噬细胞的调节作用同时取肝脏和肺脏, 分析其对肝脏肺脏巨噬细胞激活和表型的影响 2) 为了探讨大黄及其组分对于巨噬细胞的作用方式, 检测血清中 HMGB1 的含量变化, 分析大黄作用后是否通过减少了 HMGB1 的含量从而导致对巨噬细胞的激活减少此外, 体外培养巨噬细胞, 直接加入大黄及其组分, 分析是否可以通过直接作用从而调节巨噬细胞的激活 2 拟解决的关键技术 (400 字以内 ) 1) 脓毒血症小鼠模型的建立 : 由于目前有脓毒血症最新的诊断标准, 那么如何构建与临床相似度较高的动物模型是本研究要解决的技术问题 2) 给药窗口期的确定 : 由于脓毒血症的发生发展是一个复杂的过程, 而在不同时期, 细胞因子及免疫应答的变化导致给药后的作用是不一致的因此, 选择合适的给药窗口期对于本研究是要解决的另一关键问题第 2 页

4 二申报项目内容概况 (2) ( 五 ) 实施方案 1 技术路线(600 字以内 ) (1) 大黄及其成分大黄酚大黄素在小鼠脓毒症模型中的治疗作用 1) 脓毒症模型的制备及分组 : 取 BALB/C 小鼠, 采用注射内毒素的方法构建小鼠脓毒症模型并分为 4 组 2) 生存率观察 : 造模后 1h 分别灌胃给予大黄及其成分大黄酚大黄素后, 72h 后观察小鼠的生存率 3) 组织炎症检测 : 给药后 4h 取肝脏及肺, 从病理学角度观察炎症变化情况 4) 血清细胞因子的检测 : 用 ELISA 方法检测促炎因子 TNF-α IL-6 IL-1β inos 及抗炎细胞 TGF-β 的变化情况 (2) 大黄及其组分对脓毒症中巨噬细胞的作用及机制 1) 腹腔巨噬细胞的表型检测 : 模型鼠分别给予大黄及其成分大黄酚大黄素 48h 后, 取腹腔液, 离心后 DMEM 培养液调细胞浓度至 2 106, 接种于细胞培养板, 至于 5%CO2 培养箱培养 4h 后, 洗掉未贴壁细胞, 即可得到贴壁的腹腔巨噬细胞 1 流式细胞术检测细胞表型 2ELISA 检测细胞培养上清中的细胞因子 3PCR 检测巨噬细胞的基因变化 4PCR 芯片检测巨噬细胞的基因表达谱 5HMGB1 的分泌检测 6 分离小鼠的巨噬细胞, 直接加入大黄及其组分, 检测巨噬细胞的表型变化 2) 肝脏及肺巨噬细胞的表型分析 : 肝脏及肺组织固定后切片, 分别用 F4/80 CD163 MHC-II 抗体染, 荧光显微镜观察巨噬细胞的表型 2 实施方案 ( 组织方式产学研合作机制等 )(200 字以内 ) 本课题以为依托单位, 由副主任医师郑伟及研团队为实施者, 部分免疫及病理学项目由吉林大学白求恩医学部基础医学院辅助完成 ( 六 ) 预期成果及指标 1 预期技术指标(200 字以内 ) 通过注射内毒素可以建立小鼠脓毒症模型, 大黄作为能够调节机体免疫系统的中药, 可以有效治疗脓毒症, 而炎症因子及抗炎因子的主要来源细胞为巨噬细胞, 巨噬细胞在不同微环境下可向 M1 及 M2 型分化, 分别分泌 TNFα IL-6 IL-12 IL-10 TGF 等效应分子大黄及其有效成分在脓毒症中调节了免其是巨噬细胞引起的固有免疫应答通过此项研究明确大黄及其有效成分治疗脓毒症的机制, 为临床提供新的靶点和思路 2 预期经济指标 (100 字以内 ) 探索大黄及其有效成分调节脓毒症免疫紊乱的机制, 找到新的治疗靶点和时间窗 ; 在临床中进行进一步的应用研究, 最终降低脓毒症患者的住院时间病死率及治疗费用, 减轻患者的负担第 3 页

5 3 预期产业应用前景和社会生态效益(100 字以内 ) 脓毒症的发病率治疗花费不断增加, 经过不懈努力病死率仍居高不下, 因此探讨和研究新的治疗方法和理念有着广泛的应用前景本研究着重探讨大黄及其组分对于脓毒症小鼠的免疫调节作用, 并且深入探讨这种作用是否与调节巨噬细胞的激活有关以及作用方式, 为指导临床治疗提供理论支持 4 成果提供形式 ( 授权专利技术标准新技术新产品新装置论文专著的数量等 )(100 字以内 ) 本课题预计可发表 SCI 文章 2 篇, 核心期刊 1-2 篇 5 人才队伍建设 ( 培养博士硕士数等 )(100 字以内 ) 提高团队的科研水平, 培养科研人才 2 名第 4 页

6 三项目团队构成项目负责人简介 ( 参与过的主要研究开发和成果转化项目及任务分工, 授权发明专利, 在国内外核心期刊上发表的代表性学术论文等研究成果情况 )(350 字以内 ): 申请者参加完成省市科研项目 4 项 2010 年主持完成 L 型脂肪酸结合蛋白与慢性肾脏疾病的相关性研究科研项目, 该项科研获得 2011 年度长春市科技进步一等奖 2014 年参加北京协和医院牵头的大型多中心研究以 PCO2/Ca-vO2 为目标指导脓毒症早期复苏的多中心前瞻随机对照研究, 负责科研协调监督资料收集整理工作目前发表 SCI 文章 1 篇, 在国内核心期刊上发表论文 3 篇作为本项目的申请者, 主要负责项目的部分科研工作, 并协调项目组成员之间的相互协作与配合, 丰富的科研经验以及科研组织能力可以确保本项目的顺利完成项目负责人姓名性别年龄郑伟女 39 主要参加人罗莉女 48 程海涛男 52 参加人员吴丽红女 36 董春丽女 33 史大治男 39 张悦萌男 32 徐赫男 32 吕佳奇男 35 所在单位及部门职称现从事专业在本项目中承担的主要工作副主任医师重症医学项目负责人主任医师重症医学主要参与主任医师重症医学统筹指导主治医师重症医学模型小鼠制备及给药主治医师重症医学细胞因子检测副主任医师重症医学数据统计住院医师重症医学细胞学检测住院医师重症医学分子生物学实验住院医师重症医学病理分析第 5 页

7 四经费预算表单位 : 万元序号科目名称合计申请专项经费自筹经费 1 一经费支出合计 ( 一 ) 直接费用设备费 (1) 购置设备费用 (2) 设备升级改造费用 (3) 设备租赁费材料费测试化验加工费燃料动力费差旅费会议费国际合作与交流费出版 / 文献 / 信息传播 / 知识产权事务费劳务费专家咨询费其他支出技术引进费 ( 条件与平台计划使用 ) 人员培训费 ( 条件与平台计划使用 ) 科技平台运行费 ( 条件与平台计划使用 ) 20 ( 二 ) 间接费用房屋租赁费水电费暖消耗费绩效支出其他支出二经费来源合计申请从专项经费获得的资助 / 28 2 自筹经费来源 0.0 / 0.0 备注第 6 页

8 五年度计划安排 (1) 年月项目计划完成的内容及目标 1 内容:1 脓毒症小鼠模型的摸索目标 : 建立符合条件的小鼠脓毒症模型 2 内容: 2 大黄大黄酚大黄素给药剂量及方式预实验目标 : 确定大黄大黄酚大黄素给药剂量及方式 2017 年 01 月至 2017 年 06 月 1 内容:1 大黄大黄酚及大黄素改善病死率观察目标 : 比较大黄大黄酚及大黄素给药后小鼠的病死率差异 2 内容: 2 对肝脏肺脏炎症影响的病理学检测目标 : 明确脓毒症小鼠肝脏肺脏的炎症病理学变化 3 内容: 3 血清细胞因子检测目标 : 检测脓毒症小鼠血清细胞因子水平 2017 年 07 月至 2017 年 12 月 1 内容:1 ELISA 法分析腹腔巨噬细胞分泌细胞因子目标 : 检测腹腔巨噬细胞分泌细胞因子的水平 2 内容: 2 流式细胞术检测巨噬细胞表型目标 : 检测出巨噬细胞表型 2018 年 01 月至 2018 年 06 月第 7 页

9 五年度计划安排 (2) 年月项目计划完成的内容及目标 1 内容:1 免疫荧光分析巨噬细胞表面分子目标 : 分析巨噬细胞表面分子 2 内容 : 2 腹腔巨噬细胞基因表达谱分析目标 : 分析腹腔巨噬细胞基因表达谱 2018 年 07 月至 2018 年 12 月 2019 年 01 月至 2019 年 06 月 1 内容:1 RT-PCR 或 Q-PCR 分析巨噬细胞极化相关基因表达目标 : 分析巨噬细胞极化相关基因表达 2 内容: 2 体外分析大黄及其组分对巨噬细胞的作用方式目标 : 明确大黄及其组分在体外对巨噬细胞的作用方式 1 内容:1 ELISA 法分析血清 HMGB1 的含量变化目标 : 明确脓毒症小鼠及给药后血清 HMGB1 的含量变化 2 内容: 2 总结实验结果, 撰写研究论文目标 : 成果鉴定撰写论文 2019 年 07 月至 2019 年 12 月第 8 页

10 六任务分工及申请经费分配项目申报形式 : 独立合作产学研合作申报主持单位单位任务申请经费 ( 万元 ) 参与方式本课题以为依托单位, 由郑伟副主任医师及其课题组为主要实施者, 独立完成承担任务为 : 制备脓毒症小鼠模型及分组 ; 给药后观察生存率取肺脏及肝脏送病理分析 ; 各组血清细胞因子的检测腹腔巨噬细胞的表型检测流式测细胞表型检测细胞培养上清中的细胞因子巨噬细胞的基因变化检测检测巨噬细胞的基因表达谱 HMGB1 的分泌检测腔巨噬细胞的表型检测肝脏及肺巨噬细胞的表型分析由吉林大学白求恩医学部免疫实验室辅助完成 50.0 万元 / 合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托申报参加单位合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托第 9 页

11 七申报单位与推荐部门意见申报主持单位意见 : 申报参加单位意见 : 盖章年月日盖章盖章年月日年月日盖章年月日盖章年月日盖章年月日推荐部门意见 : 盖章盖章年月日年月日第 10 页

吉林省科技发展计划项目申报书22112

吉林省科技发展计划项目申报书22112 计划类别 : 项目类别 : 管理处室 : 自然科学基金自然科学基金基础处项目名称 : 申报主持单位 ( 盖章 ): 项目负责人 : 通讯地址 : 基于虚损性肾衰理论探讨益肾通络法对大鼠肾纤维化影响的实验研究 ( 白求恩专项 ) 长春中医药大学刘艳华吉林长春市吉林省长春市净月经济开发区博硕路 1035 号固定电话 : 0431-86178717 移动电话 : 15948000513 传真