http: / / www. cjrccm. com 269,,,,,,,,, [ 1-2 ],,, [ 3-6 ], 12( Caspase-12) [ 7] Caspase-12, 1. : 20% ( ) ; Caspase-12 ; -actin ABC ; TRLA
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- 也 蔺
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1 268 Chin J Respir Crit Care Med, May 2014, Vol. 13, No. 3 http: / /www. cjrccm. com Caspase ( ) ; 2 ( ) ; 3 ( ) ; 4 ( ) 12( Caspase-12) 30 Spragne-Dawley( SD) 14 d 28 d - ( RT-PCR) Caspase-12 mrna, HE Masson HE Masson ( P < 0. 01), Caspase d ( P < 0. 01), 28 d ( P < 0. 01) Caspase-12, ; ; ; ; 12 Expression of Endoplasmic Reticulum Stress A ssociated Apoptosis Gene Caspase-12 in Lung of Paraquat-induced Pulmonary Fibrosis Rats Zhang Zhijian Youhu, Peng Libo., Dong Yaoyao, Wu Can, Shou Yunfeng, He Intensive Care Unit, Banan District People s Hospital, Chongqing, , China Correspondence Author: Peng Libo, plbbnicu@ yeah. net Abstract Objective To investigate the endoplasmic reticulum stress associated apoptosis gene Caspase-12 expression in paraquat-induced pulmonary fibrosis. Methods 30 adult healthy Sprague-Dawley ( SD ) rats were randomly divided into a nomal control group, two pulmonary fibrosis model groups ( intragastrically administered paraquat for 14 days and 28 days, respectively). The model of pulmonary fibrosis was established through intragastrically administering paraquat at the dose of 30 mg / kg. RT-PCR was used to determine the mrna expression of Caspase-12. Immunohistochemistry was used to determine the protein expression of Caspase-12. HE staining and Masson staining were used to determine the degree of alveolitis and pulmonary fibrosis. Results HE staining and Masson staining of lung tissues proved that pulmonary fibrosis model was successfully constructed. The degree of alveolitis and pulmonary fibrosis in the model group was significantly more serious than that in the control group ( P < 0. 01). RT-PCR and Immunohistochemistry results showed that the expression of Caspase-12 were remarkably increased in the pulmonary fibrosis model group( 14 d group) ( P < 0. 01), even more elevated in 28 d group compared with the 14 d group. Conclusion The results demonstrate that the expression of Caspase-12 in paraquat poisoned rats is up-regulated, suggesting endoplasmic reticulum stress plays an important role in paraquat inducedpulmonary fibrosis. Key words Paraquat; Pulmonary fibrosis; Endoplasmic reticulum stress; Apoptosis; Caspase-12 DOI: / : ( : ) :, plbbnicu@ yeah. net
2 http: / / www. cjrccm. com 269,,,,,,,,, [ 1-2 ],,, [ 3-6 ], 12( Caspase-12) [ 7] Caspase-12, 1. : 20% ( ) ; Caspase-12 ; -actin ABC ; TRLAOL, RT Invitrogen ; PCR Eppendorf ; LOGENE PAS : 30 Spragne-Dawley( SD), ( ) g, ( 14 d 28 d, 5 ), 14 d 28 d, 10 [ 8] 1. :,,, ( / ) 4% 48 h 0. 1 mol /L PBS, - 80, ( RT-PCR) Caspase : - ( HE) Masson [ 9] 3. Caspase-12 : 24 h( 4 ),,,, 200, 5, ( MOD), MOD Caspase Caspase-12 mrna : 100 mg Trizol RNA, ( cdna), PCR Caspase-12 ( 438bpm) 5 -CCTGGAAGGAATCTGTGG-3, 5 -AGTTCACCTGGGACCTCA-3 ; -actin ( 260bpm) 5 -GAGACCTTCAACACC CCAGC-3, 5 -ATGTCACGCACGATT TCCC-3 PCR : 94 3 min, s, 72 5 min 5 L 1. 5%,, SPSS 16. 0, x s,, SNK-q P < d,,, ;,, 14 d 14 d ( ) g ( ) g, ( P < 0. 05) ; 28 d 28 d ( ) g ( ) g, ( P < 0. 01) HE Masson,,,,,,,,, 28 d, 1 1
3 270 Chin J Respir Crit Care Med, May 2014, Vol. 13, No. 3 表1 各组大鼠肺泡炎变及肺纤维化程度比较 四 肺组织中 Caspase-12 蛋白表达 ( n = 10, x ±s) 对照组仅有少数细 胞胞 浆黄 染; 14 d 模型 组肺 肺 泡炎积 分 对 照组 ± d 模型 组 ± d 模型 组 ±0. 95 注 : 与 对照 组比较, http: / / www. cjrccm. com 肺 纤维 化积分 组织细 胞 中 可 见 大 量 Caspase-12 阳 性 表 达 呈 棕 黄 ±0. 31 色; 28 d 模型 组阳 性表达 较 14 d 模型 组明 显增 加 ± ±0. 89 结果见图 4 和表 3 P < ; 与 14 d 模 型 组 比 较, P < 0. 05, P < 三 Caspase-12 mrna 在肺组织中表达 对照组大鼠肺组织中 Caspase-12 mrna 表达最 低, 14 d 模型组较对照组 明显 升高 ( P < 0. 01), 28 d 模型组 较 14 d 模型 组 明显 增 高 ( P < 0. 01) 结果 见图 3 和表 2 表2 1 : 对 照组; 2 : 14 d 模型 组; 3: 28 d 模 型组 图3 各组大鼠肺组织 Caspase-12 mrna 表达 各组大鼠肺组织 Caspase-12 平均吸光度值变化 ( n = 10, MOD 值, x ±s) ( n = 10, x ±s) 表3 各组大鼠肺组织 Caspase-12 mrna 表达 Caspase-12 mrna Caspase-12 对 照组 ± 对照 组 14 d 模型组 ± d 模 型组 ± d 模型组 ± d 模 型组 ±7. 87 注 : 与 对照 组比较, P < 0. 01; 与 14 d 模 型组 比较, P < 图 1 各组大鼠肺组织 HE 染色病理学图( 200) 注 : 与 对照组 比较, ±1. 78 P < 0. 01; 与 14 d 模 型组 比较, P < 图2 各组大鼠肺组织 Masson 染色病理学图( 200) 图4 各组大鼠肺组织 Caspase-12 蛋白表达( 200)
4 http: / / www. cjrccm. com 271,,, [ 10 ],,, DNA, [ 11 ], ( ),, N,,,, ( endoplasmic reticulum stresss, ER stresss) [ 12-13] 3, CHOP ( C/ EBP homologous protein, C /EBP ) JNK ( c-jun ) Caspase-12 Caspase-12 [ 14-15], calpain 2 Caspase-7 ER GRP78 Caspase-7 Caspase-12 [ 16-17], HE Masson,,,,, 28 d,, Caspase-12, MOD, MOD Caspase-12 mrna,, 28 d 14 d, ( P < 0. 01), Caspase-12,,,, Caspase-12,,, 1 Inokuchi Y, Nakajima Y, Shimazawa M, et al. Effect of an inducer of Bip, a molecular chaperone, on endoplasmic reticulum( ER) stressin-duced retinal cell death. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2009, 50 : Dinis-Oliveira RJ, Duarte JA, S nchez-navarro A, et al. Paraquat poisonings: mechanisms of lung toxicity, clinical features, and treatment. Crit Rev Toxicol, 2008, 38: Dinis-Oliveira RJ, Sousa C, Remiao F, et al. Effects of sodium salicylate in the paraquat induced apoptotic events in rat lungs. Free Radical Biol Med, 2007, 43: Nakamura S, Lipton SA. Molecularmechanisms of nitrosative stressmediated protein misfolding in neurodegen erative diseases. Cell Mol Life Sci, 2007, 64: Klintworth H, Newhouse K, Li T, et al. Activation of c-jun N- Terminal protein kinase is a common mechanism underlying paraquat and rotenone induced dopaminergic cell apoptosis. Toxicol Sci, 2007, 97: ,,,. Livin Caspase-3.,2011,20: Zhang A, Zhang J, Sun P, et al. EIF2alpha and caspase-12 activation are involved in oxygen-glucose-serum deprivation/ restorationinduced apoptosis of spinal cord astrccytes. Neurosci Lett, 2010, 478: ,,,.., 2011, 20: Hubner RH, Gitter W, Mokhtari HE, et al. Standardized quantification of pulmonary fibrosis in histological samples. Biotechniques, 2008, 44 : Yamashita M, Yamashita M, Ando Y. A long-term follow-up lung function in survivors of paraquat poisoning. Hum Exp Toxicol, 2000, 19: Ishida Y, Takayasu T, Kimura A, et al. Gene expression of cytokines and grouth factors in the lung after paraquat administration in mice. Leg Med, 2006, 8: Zhang C, Wang G, Zheng Z, et al. Endoplasmic reticulum-tethered transcription factor camp responsive element-binding protein, hepatocyte specific, regulates hepatic lipogenesis, fatty acid
5 272 Chin J Respir Crit Care Med, May 2014, Vol. 13, No. 3 http: / /www. cjrccm. com oxidation, and lipolysis upon metabolic stress in mice. Hepatology, 2012, 55: Satoh T, Abiru N, Kobayashi M, et al. CHOP deletion does not impact the development of diabetes but suppresses the early production of insulin autoantibody in the NOD mouse. Apoptosis, 2011, 16: Zhang K, Kaufman RJ. From endoplasmic-reticulum stress to the inflammatory response. Nature, 2008, 454: Nakagawa T, Zhu H, Morishima N, et al. Caspase-12 mediates ERspecific apoptosis and cytotoxicity by amyloid-beta. Nature, 2000, 403: Jung EJ, Avliyakulov NK, Boontheung P, et al. Pro-oxidative DRP chemicals induce heat shock proteins and an unfolding protein response in a bronchial epithelial cell line as determined by DIGE analysis. Protemics, 2007, 7: Kelaen SG, Duan X, Ji R, et al. Cigarette smoke induce an unfolded protein response in the human lung: a proteomic approach. Am J Respir Cell Mol Biol, 2008, 38 : ( : : ) ( : ) ( ) [ 1 ] ( ) 2,, : ; - : ; :, 4 3?, 0. 9% ml + 8 U U 5 mg 1 2,,,, : ( 1),,,? ( 2), ;, ( 3),, ( 4) 1, 1, [ 2 ], 2 5 mg 0. 9% ml, ( ) 2 [ 3 ] -,, ;, 5 min [ 4] -, DOI: / :, @ qq. com, ( 5)?, ;, ( 6),,,, [ 4 ],,, ;,, :, [ 2 ] 3 15 d?,,,, 0. 9%?! 1..,2012, 11: ,. ( ). :, 2004, 70. 3,. ( ) :, 2011, ,. ( ) :, 2005, ( : ) ( : )
< F63756D656E D2D796E2DB9A4D7F72D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D C4EA2DB5DA34C6DAB8BDBCD32D30302DB7E2C3E6CDC6BDE941A3A D34A3A92E6D6469>
2013 绎 Vol.15 No.4 阴 元元 450002 Ki-6772 Wistar 6 5 mg kg -1 30 0.8 mg kg -1 7.5 15.0 22.5 g kg -1 1 30 Ki-67 TUNEL Ki-67 P
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21 13 1 2 1* 2 1. 430065 2. 445000 20 10 5 g kg - 1 5 mg kg - 1 ig 10 d ig HE 1 TFF1 TFF1 P < 0. 01 P < 0. 01 P < 0. 01 P < 0. 05 R285. 5 doi 10. 13422 /j. cnki. syfjx. 2015130100 A 1005-9903 2015 13-0100-05
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绎 阴 元元 / 100102 MCAT MCAO 84~333 mg kg -1 167 333 mg kg -1 MCAT 84 167 mg kg -1 MCAT 27% 37% 84~333 mg kg -1 MCAT 21%~ 32% MCAO LDH 10%~ 12% MDA 28%~38% SOD 15%~36% GSH 14%~36% doi: 10.3969/j.issn.1674-3849.2013.01.016
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