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1 ISSN CN / Q http / /cjbmb bjmu edu cn Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology ~ 1226 DOI /j cnki cjbmb microrna-21 * microrna-21 microrna-21 microrna-21 PTEN SMMC7721 HepG2 microrna-21 PTEN microrna-21 microrna-21 PTEN microrna-21 R273 Polydatin Inhibits Proliferation and Invasion in Hepatocellular Carcinoma Cells by Suppressing microrna-21 SUN Hai-Rong * WANG Lu-Yu WANG Zhong-Xin Haiyang Renmin Hospital Yantai Shandong China Abstract Primary hepatocellular carcinoma is one of the most common clinical malignancy without effective clinical treatments It was reported that polydatin inhibited cell proliferation in lung and colorectal cancer cells The role of polydatin in hepatocellular carcinoma remains obscure To investigate the effect of polydatin on the proliferation and invasion in hepatocellular carcinoma a rat model of hepatocellular carcinoma was adopted in three experimental groups of normal cancer and polydatin treatment The hepatocellular carcinoma incidence in the polydatin group was significantly reduced with the pathology-confirmed results The microrna-21 expression was reduced in hepatocellular carcinoma tissues whereas PTEN a target of mir-21 was upregulated In SMMC7721 and HepG2 cells exposure to polydatin suppressed cell proliferation and invasion with decreased mir-21 and increased PTEN expression These data suggested that polydatin might inhibit the hepatocellular carcinoma tumorigenesis by regulating mir-21 expression Key words polydatin hepatocellular carcinoma microrna PTEN target of microrna-21 polydatin PD 3 4' β-d Caco-2 6 * Corresponding author Tel sunhairong_0408@ 163 com * Tel sunhairong_0408@ 163 com Received April Accepted June
2 11 microrna Wistar 1 2 ml /kg microrna RNA ~ 25 RNA pre-mirna microrna 0 4% 2 ml /kg microrna 1 11 microrna DEN 3 d 3% microrna 0 1 ml /100 g 4% microrna-21 PTEN Eppendorf HE diethylnitrosamine DEN Ⅰ Ⅱ Ⅲ 5 min 100% 90% 80% 70% MicroRNA 2 min 5 min PCR quantitative real-time PCR qrt- 5 min 1% PCR 3 s microrna qrt-pcr 0 5% 3 min TaKaRa PCR 80% 95% 100% 2 s Roche Santa Cruz PTEN sc-7974 GAPDH sc min mirneasy Mini Kit 1 5 qrt-pcr microrna Qiagen 2 ml /kg 1 3 qrt-pcr Western 4% 24 h HE Ⅰ Ⅱ Ⅲ 2 microrna 1 2 Trizol 15 min SPF 8 Wistar 15 min r /min 15 min RNA 180 ± 20g RNA 15 RNA dntp DEN MMLV RNA 20 mg 3 12 DEPC min
3 min 4 cdna 500 μl MTT LightCycler Real Time PCR 4 h 500 μl DMSO 3 microrna-21 U6 PCR A A 1 6 Western PTEN ± RIPA SPSS 15 0 P < % SDS-PAGE 2 PVDF 1 h PVDF 3 1 h PVDF SMMC7721 HepG2 ATCC 10% U /ml 100 μg /ml DMEM 37 5% CO 2 2 ~ 3 d % 1 8 MTT /ml μl 3 24 h 2 20 μl MTT 4 h μl DMSO 10 min nm SMMC7721 HepG2 = 1 - / 100% 1 9 Transwell 10 min 1 10 Fig 1 HE Fig 1 0% 0 /15 100% 15 / % 11 /15 MTT Fig 2A Transwell Fig 2B 2 Matrigel Transwell CORNING BSA microrna /ml Transwell microrna μl h
4 11 microrna Fig 1 Polydatin inhibits tumor formation rate in hepatocellular carcinoma rat model The changes of liver morphology and HE staining were observed in normal group model group and preventing group The model group was manifested as hard rough liver surface with gray nodules The HE staining showed disordered cell cord and tumor cell atypia compared with normal group whereas these diversification disappeared in preventing group Fig 2 Polydatin inhibits hepatocellular carcinoma cells proliferation and invasion A MTT assay was used to detect the cells proliferation rate in control group Con and polydatin group PDT The result showed that the proliferation rate of SMMC7721 cells and HepG2 cells were both downregulated in polydatin group than the control group B Transwell assay was employed to detect the cells invasion rate in control group and polydatin group The result presented that the invasion rate of SMMC7721 cells and HepG2 cells were both decreased in polydatin group compared with the control group * represented P < Xu 15 microrna-21 MAPKK3 HepG2 Bao 16 microrna-21 PTEN hsulf-1 PTEN 1 3 microrna PTEN PTEN Fig 3B Western microrna-21 PTEN PTEN qrt-pcr PTEN microrna-21 Fig 3A microrna-21 gan1 microrna-21 microrna-21
5 PTEN PCR Fig 4A 2 4 microrna-21 microrna-21 Western Fig 4B microrna-21 PTEN microrna-21 microrna-21 PTEN qrt- Fig 3 Polydatin inhibits microrna-21 expression in the liver tissues A qrt-pcr assay was used to detect the expression profile of microrna-21 in normal group model group and preventing group The result showed that in model group the expression level of microrna-21 was upregulated than normal group and preventing group B Three samples in each group were chosen for Western blot assay to detect the protein level of PTEN a classical target of microrna-21 in normal group model group and preventing group * represented P < 0 05 Fig 4 Polydatin inhibits the microrna-21 expression level in hepatocellular carcinoma cells A qrt-pcr assay was employed to verify the microrna-21 expression change in control group and polydatin group The result presented that the microrna-21 was downregulated in polydatin group compared with the control group B Western blot was employed to verify the expression change of PTEN in control group and polydatin group The result presented that the PTEN was greatly upregulated in polydatin group compared with the control group * represented P < S Western Bcl-2 Bax cyclin D1 De Maria 6 H1975 Caco-2 Zhang 5 A549 NCI-
6 11 microrna microrna RNA References mrna microrna-21 microrna 1354 microrna-21 Wagenaar 18 microrna Wang 9-3- microrna-21 PTEN Damania 20 HBx microrna-21 microrna-21 PDCD4 PTEN microrna-21 arrest J 21 microrna microrna Med PTEN 7 Zhang Q Tan Y Zhang N et al PTEN hepatic steatosis in rats J PI3KAkt 8 Zhang H Yu CH Jiang YP Akt microrna-21 PTEN 2007 Meng 17 microrna-21 PTEN PTEN PTEN 1 Du QH Peng C Zhang H Polydatin a review of pharmacology and pharmacokinetics J Pharm Biol Wen H Gao X Qin J Probing the anti-aging role of polydatin and cirrhosis J microrna-21 PTEN Int cisplatin resistance by targeting PTEN J micrornas BMC Cancer in Caenorhabditis elegans on a chip J Integr Biol Camb 3 Yang B Li JJ Cao JJ et al Polydatin attenuated food allergy via store-operated calcium channels in mast cell J World J Gastroenterol Lanzilli G Cottarelli A Nicotera G et al Anti-inflammatory effect of resveratrol and polydatin by in vitro IL-17 modulation J Inflammation Zhang Y Zhuang Z Meng Q et al Polydatin inhibits growth of lung cancer cells by inducing apoptosis and causing cell cycle Oncol Lett De Maria S Scognamiglio I Lombardi A et al Polydatin a natural precursor of resveratrol induces cell cycle arrest and differentiation of human colorectal Caco-2 cell J J Transl Polydatin supplementation ameliorates diet-induced development of insulin resistance and Mol Med Rep et al Protective effects of polydatin from Polygonum cuspidatum against carbon tetrachloride-induced liver injury in mice J PLoS One e Zhang J Tan Y Yao F et al Polydatin alleviates non-alcoholic fatty liver disease in rats by inhibiting the expression of TNFalpha and SREBP-1c J Mol Med Rep Bandiera S Pfeffer S Baumert TF et al mir-122 a key factor and therapeutic target in liver disease J J Hepatol Xin X Zhang Y Liu X et al MicroRNA in hepatic fibrosis Front Biosci Landmark Ed Gori M Arciello M Balsano C MicroRNAs in nonalcoholic fatty liver disease novel biomarkers and prognostic tools during the transition from steatosis to hepatocarcinoma J Biomed Res 13 Yang H Kong W He L et al MicroRNA expression profiling in human ovarian cancer mir-214 induces cell survival and Cancer Res Haghikia A Hilfiker-Kleiner D MiRNA-21 a key to controlling the cardiac fibroblast compartment J Cardiovasc Res Xu G Zhang Y Wei J et al MicroRNA-21 promotes hepatocellular carcinoma HepG2 cell proliferation through repression of mitogen-activated protein kinase-kinase 3 J
7 Bao L Yan Y Xu C et al MicroRNA-21 suppresses PTEN and hsulf-1 expression and promotes hepatocellular carcinoma progression through AKT /ERK pathways J Cancer Lett Meng F Henson R Wehbe-Janek H et al MicroRNA-21 regulates expression of the PTEN tumor suppressor gene in human hepatocellular cancer J Gastroenterology Wagenaar TR Zabludoff S Ahn SM et al Anti-miR-21 Suppresses Hepatocellular Carcinoma Growth via Broad Transcriptional Network De-regulation J Mol Cancer Res Wang X He H Lu Y et al Indole-3-carbinol inhibits tumorigenicity of hepatocellular carcinoma cells via suppression of microrna-21 and upregulation of phosphatase and tensin homolog J Biochim Biophys Acta Damania P Sen B Dar SB et al Hepatitis B virus induces cell proliferation via HBx-induced microrna-21 in hepatocellular carcinoma by targeting programmed cell death protein4 PDCD4 and phosphatase and tensin homologue PTEN One e91745 J PLoS 21 Wang H Hou L Li A et al Expression of serum exosomal microrna-21 in human hepatocellular carcinoma J Biomed Res Int CUSBEA CUSBEA Article Series 2008 Science China Life Sciences Albert W Wu Johns Hopkins Alice Shu - Hsien Wu Jack Szostak CUSBEA Article Series CUSBEA CUSBEA 400 CUSBEA CUSBEA
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