!"#$%$&$, 表达是乳腺癌预后不良的独立危险因素 同时 整合素 - 在 6 中表达的阳性率显著高于其在乳腺癌整体中的表达 提示整合素 - 可能为影响 6 预后的分子标志物及治疗靶点 本研究采用免疫组织化学染色法探讨整合素 - 在 6 中表达情况 并分析其表达与 6 的临床病理因素及预后的关系

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1 整合素 在三阴性乳腺癌中的表达及其与预后的关系 李聪 张悦 任延律 黄元夕 李志高 庞达 程绍强 哈尔滨医科大学附属肿瘤医院 黑龙江哈尔滨 摘要 目的 探讨整合素 在三阴性乳腺癌中的临床意义 方法 免疫组织化学染色法检测 例三阴性乳腺癌组织中整合素 的表达情况 结果 在三阴性乳腺癌患者中整合素 表达与患者的绝经状态及淋巴结转移状态密切相关 整合素 阳性的三阴性乳腺癌患者的 年无病生存时间及乳腺癌特异性生存时间均显著差于整合素 阴性者 多因素分析显示整合素 是三阴性乳腺癌预后不良的独立危险因素!"#$ %&# 结论 整合素 可作为判断三阴性乳腺癌预后的重要指标及潜在的治疗靶点 主题词 三阴性乳腺癌 整合素 预后中图分类号 " 文献标识码 文章编号 ()**+, -./0**+ 1 %+0/+ + /.0 020,/0* +30/ + %* /+* % +6!7 890"- 8+:90! "#$%& ;) / * /+ 0./0**+ + / /0* 3+30/, 0* 0 0./0**+ 1 +0/+ * *, : 9+*303 *++ "0*9* %+0/+ * *+13+: ** * *9* + :. +0 *9*< 0+*.*20 +0/+ 0./0* *+ /*0 :0/ *0*01/00 *9/22 + /0* 3+30/*.0313 *9/ * /0**+ 92/0 +:** *0 +0/+ * /0./+*3 13/ 1/.0+*,!" #$ % # +39*+ %+0/ *0 * 0./+*3 /=0/ /.: /0 1/, +0/+ / /0* 3+30/./+** 三阴性乳腺癌 / /0* 3+30/, 是雌激素受体 0*/0+ /030./-" 孕激素受体./0*0/+0 /030./" 及人类表皮生长因子受体 / / 13/ /030./!0/ 均为阴性的高度恶性的乳腺癌, 患者不能从内分泌治疗及靶向治疗等治疗方式获益 目前尚 无标准治疗方案 因此 针对影响, 预后的分子标志物的探索 对, 患者进行个体化治疗及 基金项目 黑龙江省自然科学基金项目! 通讯作者 程绍强 副主任医师 博士后 哈尔滨医科大学附属肿瘤医院乳腺外科 黑龙江省哈尔滨市哈平路 号 -*>+30+?3 收稿日期 修回日期 预后分析具有重要的临床意义 整合素 +0/+ 是一类细胞表面黏附分子 介导细胞间 细胞与细胞外基质间的相互黏附 在肿瘤 的发生 发展过程中发挥重要的作用 整合素 作为整合素家族重要成员之一 通常与整合素 及 2 亚单位以非共价键方式结合形成异二聚体 作为黏附受体与相应配体结合后的双向信号传导对细 胞的正常生理功能起调控作用 在乳腺癌 胃癌 肺癌 卵巢癌 前列腺癌等肿瘤细胞中存在整合素 & 过表达 同时 整合素 与肿瘤细胞的增殖 侵袭 转移 血管生成及耐药等恶性生物学行为密切 & 相关 我们前期研究中发现整合素 蛋白高

2 !"#$%$&$, 表达是乳腺癌预后不良的独立危险因素 同时 整合素 - 在 6 中表达的阳性率显著高于其在乳腺癌整体中的表达 提示整合素 - 可能为影响 6 预后的分子标志物及治疗靶点 本研究采用免疫组织化学染色法探讨整合素 - 在 6 中表达情况 并分析其表达与 6 的临床病理因素及预后的关系 资料与方法 临床资料标本来源于哈尔滨医科大学附属肿瘤医院乳腺外科 11 年 月至 11. 年 月接诊并行乳腺癌改良根治手术的 6 组织. 例 6 指癌组织经免疫组织化学检查结果显示 755 及 2 三者均为阴性的乳腺癌 其中 2 阴性定义为 免疫组织化学检测为 89: 或 (;: 若免疫组织化学 (;;: 则经过荧光原位杂交!! #) 2 检测为 9 主要排除双乳癌 炎性乳癌 确诊时存在局部进展及远处转移的患者 本组患者的临床病理特征及治疗方式见表 % % 主要试剂兔抗人整合素 - 单克隆抗体 /+./ 购自! 公司 兔二步法检测试剂盒 6 显色试剂盒均购自中杉金桥生物技术公司 实验方法组织蜡块, 连续切片 采用常规 6 免疫组化染色法检测 6 组织中整合素 - 的表达 经二甲苯脱蜡 梯度酒精脱水后 于柠檬酸缓冲液中高温高压修复 滴加抗整合素 - 抗体稀释液, 冰箱过夜孵育 滴加生物素标记二抗 6 显色后封片 结果判定免疫组织化学染色结果由资深病理科医生进行判定 随机选取 + 个视野 每个视野细胞数不少于 11 个 按阳性细胞所占同类细胞数百分比及着色深浅进行结果判定 无着色 1 分 浅黄色 % 分 棕黄色 分 棕褐色 - 分 阳性细胞百分比评分 0 + 为 % 分 ++1 为 分 +%/+ 为 - 分 < /+ 为, 分 两项得分相加 分为低表达 -+ 分为中度表达 分为高表达 整合素 - 呈棕黄色 %-.! " #$%% & $" % $ %!!"! " - " "(# )* +,- % %, -/ + -/ +, - + 1,. +,- - +1,, 2"! 3 / -., # 4 -,,, + - 5)# 4 /, /. 11,/ 11/ /1 颗粒表达于乳腺癌细胞质 " % 根据整合素 - 表达强弱将纳入患者分为 组 高表达组为整合素 - 阳性组 " % 其余为整合素 - 阴性组 (" % 随访 随访资料来自哈尔滨医科大学附属肿瘤医院病案室 采用电话随访患者术后生存情况 随访直至死亡或研究终止 患者随访按照 指南进行 术后 年每 - 个月随访 % 次 术后 + 年每 个月随访 % 次 术后超过 + 年每年随访 % 次 每年或疾病复发时进行 % 次乳腺钼靶检查 必要时行乳腺磁共振成像检查 无病生存时间 ) 定义为手术后至疾病复发或由于疾病进展导致患者死亡的时间 乳腺癌特异性生存时间!!!! 6 定义为手术后至乳腺癌引起死亡的时间或随访终止时间 统计学处理 采用 软件对相关数据进行统计分析 整合素 - 与临床病理因素间比较用 检验 采用 =9 法绘制生存曲线 并用 >"? 检验进行生存分析 比例风险回归模型进行

3 !"#$ %& 单因素及多因素预后分析 )+)% 认为差异具有统计学意义 结果 整合素 - 表达与 234 临床病理因素的关系整合素 - 表达与 234 临床病理因素的关系见表 2 整合素 - 表达与患者绝经状态及淋巴结转移显著相关 绝经前乳腺癌患者整合素 - 表达阳性率 -0%$+0&* 显著高于绝经后乳腺癌患者.--,+$&* 腋窝淋巴结转移的 234 患者的整合素 - 阳性率.%)$+)&* 显著高于无腋窝淋巴结转移的 234 患者 %.,)+.&* 整合素 - 表达与患者年龄 肿瘤大小 组织学分级及术后放化疗无关 整合素 - 表达与 234 患者预后的关系全部患者随访信息完整 中位随访时间为 0 %/)$ 个月 随访期间 $, 例患者中 - 例复发 例死亡 研究发现整合素 - 阳性组及阴性组的 234 患者 % 年 455 分别为 +&,0+.& 6 )+))7! *% 年 875 分别为.+)&,,+,&( )+))7! * 针对入选患者的 单因素分析显示淋巴结转移状态及整合素 - 表达与 234 患者预后相关 19 多因素分析显示整合素 - 阳性表达为 234 患者预后不良的独立影响因素 2 - 讨论 本研究发现整合素 - 蛋白表达与 234 患者的绝经状态及淋巴结转移状态显著相关 整合素 - 蛋白表达状态是 234 的独立预后因素 整合素 - 阳性患者的 875 及 455 显著差于整合素 - 阴性者 研究结果与本课题组的前期研究结果一致 既往研究表明整合素 - 蛋白过表达与乳腺癌预后不良. 密切相关 是乳腺癌预后不良的独立危险因素 但前期研究纳入乳腺癌患者包含多种乳腺癌亚型 而本研究仅纳入 234 患者 为进一步研究 234 的预后标志物及潜在靶点提供依据 整合素 - 作为整合素家族重要成员之一 在! ( ) $ * +, +, + -.!"#$! "# $%& "# $%& %(%)* +,- )+$.$/,+-$, )+) +$ )+0.-/+.) )+% 1!! 11!1! +-.$ +%%$/-+% +% +0$ +-./-+., +,$0 "11 / )+$)/%+%- )+),- + )+$%)/0+) )+) /. +,$ )+0)/.+.) )+0, +.) )+%%0/-+% )+., 3 3 ) 3 /- %+.$, +,%/+) )+)) +00 )+-%/%+,$) )+, $ +--)/+0.0 ()+)) +$) +)$/-+.- )+)$ )-$

4 !"#$%$&$ % % /.., 23" "3 3 *-., 23" "3 3 % % ! ""# $#% & 胃癌 肺癌 卵巢癌 子宫内膜癌 前列腺癌等肿瘤细 胞中过表达 并参与调控肿瘤细胞的增殖 侵袭 转移 血管生成及化疗耐药等恶性生物学行为 目前整合素 在乳腺癌细胞水平上已存在较多研究 参与乳腺癌的血管生成 整合素 在乳腺癌血管生成中起关键作用 表达于血管内皮细胞的有腔面和无腔面 参与内皮细胞的迁移及毛细血管管 腔的生成 参与乳腺癌细胞侵袭转移 乳腺癌患者常发生骨转移 且难以治愈 是导致患者死亡的 重要因素之一 在乳腺癌骨转移过程中 整合素 和骨唾液蛋白等细胞外基质的蛋白三肽序列 ()* 结合 相互作用介导乳腺癌细胞与骨小梁黏 + 附 使肿瘤细胞在骨中浸润 侵袭导致骨转移 参与肿瘤细胞的凋亡 整合素 可促进癌细胞与胶原基质结合而抑制肿瘤细胞凋亡 对基质脱离的癌细胞 整合素 可下调自身表达而阻断肿瘤失巢凋, 亡 本研究中发现整合素 阳性患者的 *-. 及 /.. 显著差于整合素 阴性者 整合素 蛋白表达状态是 0/ 的独立预后因素 本研究结果与其恶性生物学行为相一致 因此整合素 可以是判定 0/ 患者预后的重要预测指标 % 近期." 等发现整合素 阳性肿瘤细胞具有肿瘤干细胞样生物学活性 通过活化 1(. (/ 激活下游 0/1 和 -/ 导致肿瘤细胞对厄洛替尼 拉帕替尼等药物耐药 肿瘤干细胞是肿瘤细胞 中一小部分具有自我更新及多向分化潜能的细胞 与一般肿瘤细胞相比 肿瘤干细胞在放化疗表现出 更强的抵抗能力 这种特性使其在治疗过程中得以存活 成为导致肿瘤复发 转移的根源 在治疗上 % 对这类细胞的清除 有可能切断肿瘤产生的源泉 最终带来肿瘤的 治愈 以上证据为以整合素 为靶点的抗肿瘤治疗提供理论依据及指导 本研究发现整合素 作为影响 0/ 预后的分子标志物 整合素 阳性患者的 *-. 及 /.. 显著差于整合素 阴性者 整合素 能否作为 0/ 的潜在治疗靶点 等研究发现应用阳离子脂质载体 阻断整合素 的表达后抑制 0/ 细胞上皮间质转化过程的发生 抑制 0/ 细胞的侵袭转移能力 同时 相比未接受 治疗的成瘤裸鼠 接受静脉注射 纳米粒子的成瘤裸鼠体内肿瘤负担明显减轻并抑制肿瘤转移 提示阻断整合素 的表达可能成为治疗 0/ 的手段之一 但仍需大量体内外实验及临床试验进一步验证 此外 我们发现整合素 表达与患者绝经状态显著相关 绝经前乳腺癌患者整合素 表达阳性率显著高于绝经后乳腺癌患者 我们的既往研究发现整合素 在乳腺癌组织中的表达与患者发病 % 年龄及绝经状态密切相关 均提示整合素 表达可能受体内性激素的调控 研究表明体内孕酮调控乳腺干细胞的增殖 在月经下半周期孕酮分泌达高峰时乳腺干细胞的数量扩增 % 倍 为乳腺癌的发 生提供机会 近期研究表明整合素 阳性肿瘤 %%% 细胞具有肿瘤干细胞样生物学活性 以上研究结果提示整合素 可能为乳腺癌干细胞的分子标识 但其具体调控机制有待进一步研究 综上 整合素 表达可以作为 0/ 预后不良的评估指标 为 0/ 患者进行个体化治疗提供新

5 的思路和潜在的治疗靶点 参考文献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甄丽娜 吕鑫鑫 赵红 等 2 整合素 - 蛋白高表达提示乳癌预后不良 (2 现代肿瘤医学 3,85,68812,4 >""" %% 9)2 % "&" "& &"&"(2 (3335/ -6/84/812, (: A) 2 "& "(2 " %3375,6-12,7 /%" (#) /<"% A:2 &" ""&"& " "(2 3,,85,64842, A /A ;)(& / 2 -"&" B" "%"" &" " " " "% & " " " "% " (2 ) ( %,331,74546,8,12,1 /&" A / " ) 2 ) "&" 5-6 A)/ B " " ># "%""" (2 : "3,8, !" (>" #(2 "& B""(2 / 3,,3 A% "" )A2 "& "& " " B " """"& (2 >B *" B"3,, /""& - "&" & >*?":) " "%"" >@ " "&" (2 3,4745,,6-,-42 - (%" )( ;<"" )# 2 & " B" (2 : 3, 肿瘤学杂志 关于 在线优先出版 的通告 为了加快学术论文传播速度 缩短出版周期 使作者研究成果的首发权及时得到确认 肿瘤学杂志 自 3, 年实行 在线优先出版 经同行评议通过采用的稿件 经编辑部加工处理后在中国知网 :A 实行电子版在线优先出版 具体如下, 在线投稿接收之后 编辑部核实文稿的题目 作者 单位等版权作息 作者提供相关信息 供在线出版使用 此信息为文稿最终确认的出版信息 此后作者不再予以更改 在线出版的 9 全文是经作者最终校对的修改定稿 待编辑部完成整个校对流程后替换为正式出版稿 同时给出完整的发表年份 卷 期 起止页码和唯一的文献识别 9* 号码 - 在线出版的文献是 肿瘤学杂志 印刷版本的在线优先网络版 完全满足国内外学术交流的在线检索和引用 肿瘤学杂志 编辑部,38,

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