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1 在结直肠癌中的表达及其临床意义 秦长江 张琪 卜培龙 李全营 葛政 任学群 河南大学淮河医院 * 河南开封 摘要 目的 探讨 +, 在结直肠癌组织中的表达及其临床意义 方法 收集 例结直肠癌患者的标本及临床病理资料 通过,-., 及免疫组化染色检测 +, 在结直肠癌及癌旁组织中的表达 分析其与临床病理及预后之间的关系 结果,-., 结果表明癌组织中 +,%,/ 表达水平高于相对应的癌旁组织.0( 免疫组化结果显示 (1 # 的结直肠癌组织 +, 蛋白表达阳性 +, 蛋白表达与肿瘤大小 肿瘤 - 分期 分期 - 分期 23 分期 淋巴结转移和肝脏转移有关.0( 4&5&2'26 生存分析显示 高表达 +, 的结直肠癌患者预后差 与 +, 低表达的患者相比 +, 高表达的患者中位生存期及无复发中位生存时间明显缩短.0()7 回归分析显示 +, 表达是影响结直肠癌患者预后的独立因素 结 +, 在结直肠癌组织中呈高表达 其可能成为预测结直肠癌发生发展及预后的生物标志物 关键词 结直肠肿瘤 +, 中图分类号,( 文献标识码 / 文章编号 """ 8)'(('33((((/!"# $% $& '" %#"!# %#% ;&'&/ 9'.2')2 &( &';2 )35'& )< 2& '=263'>4&'<2 ;'& "$%".65)32 -) '=23'&2 ; ') )< +, +6&> 625&'6 6)33)%52%2' 22 # ' ))62& &26 '332 &8 ;2 62&')3;'5?'; '3 '')5&;))'& 3''<'&2( 2;)83 -' '%23?262 )228 <6)% 5&'23?'; ))62& &26( -; ')3 )< +, %,/ &8 56)2'?262 &8 '%%);'3);2%'36> ' ) )62& &26 '332 &8 526'&26)3 ' '=2>( )7 56)5)6')& ;&A& ') %)82?&3 &55'28 ) &&>A2 ;2 ' ))3' <&)63 )< 5&'23?'; ))62& &26( -;2 '<22 )< +, ') ) ;2 )=26& 36='=& & <622 36='=& )< 5&'23?'; ))62& &26?&3 4&5&2'26 %2;)8?'; B)6& 23(,233 -; ') )< +, %,/ ' ))62& &26 '3323?&3 ;';26 ;& ;& ' %&;28 )6%& 62& '332.0((.)3''=2 +, 3&''?& ' (1 # )< ))62& & 26 '3323( -; ') )< +, ' ))62& &26 '3323 3''<'&> )662&28?'; %)6 3'A2-3&'23 3&'>%5; )82 %2&3&3'3 &8 '=26 %2&3&3'3.0(#( 4& 5&2'26 36='=& &&>3'3 3;)?28 ;& 5&'23?'; ;'; +, ') ;&8 5))626 56)) 3'3 ;& ;)32?'; )? +, ')( )%5&628?'; 5&'23?'; )? +, ') 5&'23?'; ;'; +, ') ;&8 & 3;)626 %28'& 36='=& &8 3;) <622 36='=&( )7 56)5)6')& ;&A& ') &&>3'3 '8'&28 ;& +, ')?&3 ' ))3' <&)6 )< )=26& 36='=&.0(#( )3') +, '3 ;';> ' ))62& &26 '3323( +, <)6 56))3'3 )< ))62& &26( ( ) *&))62& 2)5&3%3+, 结直肠癌 ))62& &26,# 是人类最常见 收稿日期 修回日期 基金项目 国家自然科学基金! 河南省医学科技攻关计划省部共建项目 "# 通讯作者 秦长江 $%&'' ()% 的消化系统恶性肿瘤之一 年全球男性, 居 新发恶性肿瘤第 位 女性位居新发病例第 位 随着饮食结构及生活方式的改变 近年来我国, 的发病率和死亡率逐年上升 与欧美等发达国家基 """

2 本持平 线修复交叉互补基因! "#"$ $" %&&' 是参与同源重组修复!$ "#"%' 的关键蛋白 能把 %( 招募到断裂的 )*+ 末端 增强 %( 的活, 性 维持生物体基因组的完整性 %( 蛋白是 % 的核心蛋白 其表达异常与 &%& 的发生 发展相关 目前研究表明 %&& 在人类多种恶性肿瘤组织中 -. 异常表达 但是尚未见 %&& 在 &%& 中的研究报道 本研究应用 /%01&% 及免疫组织化学检测 %&& 在 &%& 组织中的表达 探讨其在 &%& 中的表达特点及临床意义 ( 资料与方法 临床资料收集 年 ( 月到 ( 年 ( 月河南大学淮河医院 (( 例结直肠癌术后临床石蜡样本和 例新鲜组织标本 包括肿瘤组织和相应的癌旁组织 釆集前均经河南大学淮河医院医学伦理委员会批准 纳入标准 术前已确诊为结直肠癌并在河南大学淮河医院普外科行手术治疗的患者 未接受术前新辅助治疗 包括术前放疗 化疗和放化疗 ' 的患者 原发肿瘤为结直肠癌 无同时合并其他恶性肿瘤的患者 排除标准 复发性结直肠癌或者合并有其他脏器的原发性恶性肿瘤史 临床病理资料不全的患者 所有石蜡包埋组织标本由病理科切取 所有标本均由病理科两位教授诊断确诊为结直肠癌 其中男性 例 女性,( 例 岁 例 岁 例 癌旁组织为手术切除标本距肿瘤组织边缘 的正常结肠黏膜 患者随访方式采取电话随访 随访截止时间为 ( 年 ( 月 其中 例患者失访 全部患者以确诊时间为起点 至患者死亡或最近一次随访时间生存为终点 /%01&% 检测取结直肠癌组织及癌旁正常组织各 $ 按 0! 说明书提取总 %*+ 然后以逆转录酶催化合成 )*+ 按照 2% 3" 法使用 3"& 公司的 +!!"4" 05 /&% 56 试剂盒的说明书进行标准曲线的制备和 &% 的扩增 &% 扩增实验步骤如 下 扩增条件, ( "7, 共 个循环 读板 融解曲线分析 温度 - 每个样本重复 次 根据扩增曲线和标准曲线计算出每一待测样本 %&& 基因的 数 然后除以内参 3+) 的 数来进行标准化 免疫组织化学染色结直肠癌组织与癌旁组织样本经,8 多聚甲醛溶液固定后 石蜡包埋 并将蜡块制成 厚的连续切片 二甲苯脱蜡 梯度乙醇脱水 高压热修复是在沸水中加入 97!:; 枸橼酸钠的缓冲溶液 97 低火维持沸腾继续加热 (7 " 进行抗原修复 8 过氧化氢室温湿盒孵育 7 " 以封闭内源性过氧化物酶 山羊清封闭 7 " 后 加入 %&& 抗体 + 公司购买 ',& 孵育过夜,& 过夜后 第 天在 & 下复温 ( 加入生物素化二抗 & 孵育 ()+2 显色后苏木素复染 盐酸酒精分化 最后酒精梯度脱水 透明 封片 光学显微镜下观察 统计学方法应用 (.97 统计学软件进行相关数据的统计分析 数据的描述采用平均值 标准差 5" )' 组间定量资料对比分析应用 # 检验 多组之间比较采用 " +*4+ 方差分析 应用!"1 5 法分析生存率 生存率的影响因素应用 ;$ " 检验进行单因素分析 用 &6 比例风险回归模型进行多因素分析 797 为差异有统计学意义 应用 3 制图软件绘制相关图表 结果 %&& 在结直肠癌及癌旁组织中的表达情况首先我们采用 /%01&% 实验检测了 7 对新鲜结直肠癌及癌旁组织中 %&& 的 %*+ 表达情况 与癌旁正常组织相比 结直肠癌组织中的 %&& %*+ 表达量升高 差异具有统计学意义 7977 $ +' 随后我们采用免疫组织化学技术检测了 7 例结直肠癌样本中 %&& 蛋白水平的表达 发现 %&& 阳性表达主要在细胞质和细胞膜显色 呈黄褐色 结果显示在 &%& 组织中 98.: 7'%&& 蛋白呈阳性表达 98:7' 癌组织中 %&& 蛋白表达阴性 癌旁正常组织 %&& 表达阴性 $ 2-)' 777

3 CO P=CE7Q ('( NC8857 达的患者中位生存期明显缩短 )92 *A",""2 -,-% 个月#* A-,--2.) BCD5E7!F%#无复发 中位生存时 间 也 明 显 缩短 )<: 个月#* A-,--#. -,-9 -,-! -,-- )BCD5E7!G.& 多因素分析结果显示#&'((! 3MEK=? NC88578 /5KME NC88578 )3+<-. )3+<-. F 表达! 患者年龄!4567"8 分期和淋 巴结转移为预后因素 )* 均 A-,-;.& G 性别!肿瘤 位 置!病 理 分 化 程 度!/ 分期!3 分期!1 分期!/31 分期及 肝转移 等因素对 总 体 生 存 率 $HI % 的影响无统计学意义$/=>?7!%& < ( 讨 4 本研究首先采用灵敏度较高 >"?$%* *BC%*22"D. ". A0A 9"22$*2 的 '/J*(' 的 方 法 # 来 比 较 ('( 组 织 &'((! 的 K'3F 表 达 情 况 # ;<' &'((! 蛋白表达与结直肠癌临床病理特征的 发现与癌旁 正常组织相 比# 肿 瘤 组 织 中 的 &'((! 关系 K'3F 表 达 量 升 高 # 差 异 具 有 统 计 学 意 义 )* A &'((! 蛋白表达与 肿瘤大小 )* +",-!!.!肿 瘤 / 分期 )*+-,--0.!1 分期 )*+-,-2-.!/31 分期 )*+-,--#.! 4567"8 分期 )*!",""2.!淋 巴结转移 )* +","!2. 和肝脏 -,--2%&同时我们采用免疫组织化学技术检测了 2-2 转移 )* +","9". 相关#但与患者的性别 )* +",:%9.!年 龄 中 &'((! 蛋白表达阴性#以上结果表明 &'((! 在 )*+-,2;%.!部位 )*+-,9;-.!分化程度 )*+-,<90. 和 3 分 ('( 组织表达水平高于正常癌旁组织#这与我们课 期 )*+-,-:<. 无明显相关性$/=>?7 2 %& 题 组 前 期 研 究 &'((! 在 结 肠 癌 细 胞 中 高 表 达 的 '<= 结 果 一 致 '0 ( # 提 示 &'((! 蛋白可能 与 ('( 的发生 &'((! 表达与结直肠癌患者预后的关系 与 &'((! 阴 性 表 达 患 者 相 比 #&'((! 阳 性 表 F &'((! O7D=NC@7 7VPE788CMO 例 ('( 标本中 &'((! 蛋白水平的表达# 发现癌组 织中 %$,<L &'((! 蛋白呈阳性表达#<!,$L 癌组织 有相关性& 目前研究表明 &'((! 在胶质母细胞瘤! G &'((! O7D=NC@7 7VPE788CMO &'((! PM8CNC@7 7VPE788CMO &'((! PM8CNC@7 7VPE788CMO 2-*7ER7ON 85E@C@=? MS P=NC7ON8 UCNT ('( *7ER7ON 85E@C@=? MS P=NC7ON8 UCNT ('( 2-:%9!- :%9!- *A-,--# *+-,--;< - 2!!9 <% %$! H@7E=?? 85E@C@=?)KMONT8. - 2!!9 <% %$! '7R5EE7OR7"SE77 85E@C@=?)KMONT8.!"#$%& ' ()* +, -./ 01, 2$%3"3-4 5$%3* " *2 8"9) :0: 中国肿瘤!"#$ 年第!% 卷第 #! 期!"#$%&!%$'()*+,-./0123+4/513-+ #--#

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5 ! "" #$ %"!"! # % "! # &$ ''!" %&' %&' #$ " #$ (( (( " )* +, -,.-%,.&% -,.. /0 -,&. -,%,1 -,--. -,.% -,% -,1 -,--1 " -,% -,%,- -, ",.,.,%, *,.1,&,%1, 00,..,&,%%&, 4 00,,&%,1%.,%%! 00,1, &,%,& 4! 00,&1,.1,.,% 2"5 00,%,&&,..,,%%,%.,1&,,%,,,1 (6 *,1%,&,1&,,.%1,,1%1, 7$ 8(,%%,1 &,% -,-,1%,-- &,&. -,--1 起了一定的作用 检测该指标有助于评估 $ 患者的预后情况 7$ 可能是治疗 $ 一个的潜在靶点 参考文献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王芹 王敬敏 徐畅 等, 大肠癌细胞 7$ 基因对电离辐射损伤的反应, 广东医学 -.1,: --

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