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妤父梅
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1 712 临床肿瘤学杂志 2016 年 8 月第 21 卷第 8 期 Chinese Clinical Oncology,Aug. 2016,Vol.21,No.8 转录因子 POU5F1 在结直肠癌组织中的表达及临床意义济南山东省千佛山医院集团肿瘤科王德元, 聂丽敏摘要目的探讨转录因子 POU5F1 在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系方法收集 2011 年 1 月至 2013 年 7 月 142 例手术切除的结直肠癌组织及 86 例癌旁黏膜组织存档蜡块采用免疫组化 SP 法检测以上组织中 POU5F1 的表达情况, 并分析其与临床病理特征的关系 ; 根据随访资料分析 POU5F1 表达与预后的关系, 采用 Cox 比例风险模型分析影响预后的因素结果 POU5F1 阳性表达定位于细胞核和胞质其在结直肠癌中的高表达率为 47 2% (67 / 142), 高于癌旁黏膜组织的 23 3%(20 / 86), 差异有统计学意义 ( P<0 05);POU5F1 表达与性别年龄肿瘤部位远处转移 CEA CA50 及 CA199 均无关, 与浸润深度淋巴结转移 TNM 分期及分化程度有关 (P<0 05); 结直肠癌患者中 POU5F1 高表达者的中位总生存时间 (OS) 为 26 4 个月, 低于低表达者的 33 6 个月, 差异有统计学意义 (P<0 05) Cox 比例风险模型分析显示, 浸润深度淋巴结转移远处转移 TNM 分期和 POU5F1 表达为影响 OS 的独立因素结论 POU5F1 在结直肠癌组织中表达增高, 且与浸润深度淋巴结转移 TNM 分期分化程度及 OS 有关, 在结直肠癌诊断及预后预测中有一定价值关键词转录因子 POU5F1; 结直肠癌 ; 免疫组织化学 ; 预后中图分类号 :R735 3 文献标识码 :A 文章编号 : (2016) Expression of transcription factor POU5F1 in colorectal cancer tissues and its significance WANG Deyuan, NIE Limin. Department of Oncology, Qianfoshan Hospital of Shandong Province, Ji nan , China Abstract Objective To investigate the expression of transcription factor POU5F1 in colorectal cancer tissues and its rela tionship with clinicopathological features and prognosis. Methods One hundred and forty two cases of paraffin embedded colorectal cancer tissues and 86 cases of paraffin embedded adjacent mucosa tissues were collected from January 2011 to July The expres sion of POU5F1 was measured by immunohistochemical SP method in 142 cases of colorectal cancer and 86 cases of adjacent mucosa tissues. The relationship of POU5F1 expression with clinicopathological parameters was analyzed. According to follow up data, the prog nosis of patients with different expression level of POU5F1 was investigated. The factors influencing prognosis was analyzed by Cox pro portional hazard model. Results The positive expression of POU5F1 was localized in the nucleus and cytoplasm. The high expression rate of POU5F1 in colorectal cancer tissues was 47 2%(67 / 142), higher than 23 3%(20 / 86) of adjacent normal mucosa tissues, and the difference was statistically significant(p<0 05). The expression of POU5F1 was not related to sex, age, tumor location, dis tant metastasis, CEA, CA50 and CA199 of colorectal cancer, but it was related to the depth of invasion, lymph node metastasis, TNM stage and differentiation (P<0 05). The median overall survival(os) was 26 4 months in patients with high expression, worse than 33 6 months in patients with low expression( P < 0 05). Cox proportional hazard model analysis showed that the depth of invasion, lymph node metastasis, distant metastasis, TNM staging and POU5F1 expression were independent factors influencing OS. Conclusion The expression of POU5F1 in colorectal cancer tissues is associated with the degree of invasion, lymph node metastasis, TNM stage, differentiation and OS, and it has certain value in the diagnosis and prognostic prediction of colorectal cancer. Key Words Transcription factor POU5F1; Colorectal cancer; Immunochemistry; Prognosis 结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一, 近年来其发病率及死亡率呈逐年上升趋势, 由于缺乏有效的早期筛查手段, 因此大多数患者确诊时已为晚期, 此时单纯手术已经难以治愈 [1] 因此, 早期诊断有助于结直肠癌患者延长生存时间, 与结直肠癌发生和进展相关的生物标志物的鉴定也成为癌症研究的热点之一一些与结直肠癌进展相关的遗传基因因子已经被发现, 且被证实与癌细胞的恶性行为调控有关 [2] POU5F1, 也称为 Oct4, 是一种存在胚胎干细胞中的转录因子, 其与生殖细胞及胚胎干细胞的多能性增殖

2 临床肿瘤学杂志 2016 年 8 月第 21 卷第 8 期 Chinese Clinical Oncology,Aug. 2016,Vol.21,No 潜能和自我更新的能力有关 [3] 在脊椎动物发育的早期阶段,POU5F1 是调节多能性的最重要的因子之一既往研究发现 POU5F1 在正常干细胞自我更新维持中发挥重要作用 [4] 近年来发现该转录因子在恶性肿瘤中异常表达, 且在乳腺癌组织中发现 POU5F1 表达较癌旁组织升高 [5], 提示其在肿瘤的发生发展中可能起一定作用但目前尚无 POU5F1 在结直肠癌组织中表达及相关作用的报道本研究检测了 POU5F1 在结直肠癌组织中的表达, 并对其临床意义进行分析, 现将结果报告如下 1 资料与方法 1 1 一般资料收集山东省千佛山医院 2011 年 1 月至 2013 年 7 月收治的 142 例手术切除的结直肠癌组织及 86 例癌旁黏膜组织存档蜡块其中男性 79 例, 女性 63 例 ; 年龄范围 36 ~ 74 岁, 中位年龄 62 5 岁, 60 岁者 68 例,>60 岁者 74 例 ; 部位 : 结肠 68 例, 直肠 74 例 ; 浸润深度 :T 1 T 2 者 38 例,T 3 T 4 者 104 例 ;TNM 分期 :Ⅰ Ⅱ 期 64 例,Ⅲ Ⅳ 期 78 例 ; 分化程度 : 低分化 47 例, 高中分化 95 例 ;113 例有淋巴结转移,44 例有远处转移所有标本取材前未行放化疗等抗肿瘤治疗 1 2 主要试剂与仪器 POU5F1 兔抗人多克隆抗体购自沈阳力新生物有限公司, 即用型 SP 免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司 1 3 免疫组化染色蜡块 5 μm 厚连续切片, 行常规 SP 免疫组化染色步骤 : 二甲苯脱蜡, 梯度酒精水化, 双氧水室温孵育 10 min 后置于枸橼酸抗原修复缓冲液, 高温高压抗原修复 2 min, 自然冷却至室温, 滴加封闭液一抗,4 过夜, 滴加二抗,DAB 染色, 苏木素复染, 盐酸酒精分化, 脱水透明封片, 显微镜观察切片的染色情况 1 4 结果判定光镜下观察整个切片, 每例切片随机选取 5 个高倍镜视野进行结果判定以出现棕黄或棕褐色颗粒为染色阳性由两名经验丰富的病理科医师采用双盲法观察, 参照二级计分法 :(1) 按阳性细胞数 : 阳性细胞数 5% 计为 0 分,6% ~ 25% 计 1 分,26% ~ 50% 计 2 分,51% ~ 75% 计 3 分,>75% 计 4 分 ;(2) 按染色深浅 : 无阳性细胞计为 0 分, 黄色计 1 分, 棕黄色计 2 分, 棕褐色计 3 分将两者得分相乘 : 0 分计为 (-),1~2 分为 (+),3~4 分为 (++),5~12 分为 (+++) >2 分设为高表达, 2 分为低表达 1 5 评价指标 (1) 比较结直肠癌组织与癌旁黏膜组织中 POU5F1 的表达情况 ;(2) 收集临床病理特征, 分析 POU5F1 表达与临床病理参数 ( 性别年龄部位远处转移 CEA CA50 CA199 浸润深度淋巴结转移 TNM 分期及分化程度 ) 的关系 ;(3) 根据随访资料分析 POU5F1 表达与预后的关系 1 6 随访采用门诊及电话的方式进行随访, 随访截止于 2015 年 12 月总生存时间 ( OS) 定义为手术至随访截止日期或患者死亡的时间 1 7 统计学分析采用 SPSS 17 0 版软件处理数据 POU5F1 表达与临床病理特征的关系采用 χ 2 检验,Kaplan Meier 法绘制生存曲线并行 Log rank 检验, 影响预后的因素分析采用单因素和多因素 Cox 比例风险模型以 P<0 05 为差异有统计学意义 2 结果 2 1 POU5F1 在结直肠癌和癌旁黏膜组织中的表达 POU5F1 阳性表达定位于细胞核和胞质 142 例结直肠癌组织中高表达 67 例 (47 2%), 而 86 例癌旁黏膜组织中阳性表达 20 例 (23 3%), 差异有统计学意义 (P<0 05) 见表 1 图 1 表 1 POU5F1 在结直肠癌和癌旁黏膜组织中的表达 POU5F1 免疫染色分组 n 结直肠癌 <0 001 癌旁黏膜组织 χ 2 P 2 2 POU5F1 表达与结直肠癌临床病理特征的关系 POU5F1 表达与性别年龄部位远处转移 CEA CA50 及 CA199 均无关 (P>0 05), 而与浸润深度淋巴结转移 TNM 分期及分化程度均有关 (P<0 05) 其中 T 3 +T 4 期高表达率为 57 7%(60/ 104), 高于 T 1 + T 2 期的 18 4%(7/ 38);N 1 +N 2 期高表达率为 52 2% (59/ 113), 高于 N 0 期的 27 6%(8/ 29);Ⅲ+Ⅳ 期的高表达率为 61 5%(48/ 78), 高于 Ⅰ+Ⅱ 期的 29 7%(19/ 64); 低分化组织的高表达率为 72 3%(34/ 47), 高于高中分化组织的 34 7%(33/ 95), 差异均有统计学意

3 １临床肿瘤学杂志２０１年月第２１卷第期ＣｈｉｎｅｓｅＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙＡｕｇ２０１Ｖｏｌ２１ＮｏＡＰＯＵＦ１在癌旁黏膜组织中低表达ＢＰＯＵＦ１在癌旁黏膜组织中高表达ＣＰＯＵＦ１在癌组织中低表达ＤＰＯＵＦ１在癌组织中高表达ＰＯＵＦ１在结直肠癌及癌旁黏膜组织中的表达情况ＳＰ００图１义Ｐ００见表２表２临床病理参数性别男女年龄岁００部位结肠直肠浸润深度Ｔ１Ｔ２Ｔ３Ｔ淋巴结转移Ｎ０Ｎ１Ｎ２远处转移Ｍ０Ｍ１ＴＮＭ分期 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 分化程度高中低ＣＥＡｎｇｍｌＣＡ０Ｕｍｌ２０２０ＣＡ１Ｕｍｌ３３注Ｐ００ＰＯＵＦ１染色及表达程度与结直肠癌临床病理特征的关系ｎＰＯＵＦ１染色ＰＯＵＦ１表达低表达高表达２３３３２３２３２０２１２３１２３３０１３２３３１２３１１１０２１０１１２１２２２２１０３１３１２０３１２１１０２２２２３１３２３３３３２３３１３２０１１２１１１２２１２３３１１３１００１００３１０１１３１０３２２３０１２２３３２３２１３３３０２３０３３３３００２３２１３０３０３２３２３３２３００２３２３２２２

4 临床肿瘤学杂志 2016 年 8 月第 21 卷第 8 期 Chinese Clinical Oncology,Aug. 2016,Vol.21,No POU5F1 表达与远期生存的关系结直肠癌患者中 POU5F1 高表达者的中位 OS 为 26 4 个月, 低于低表达者的 33 6 个月, 差异有统计学意义 (P< 0 05) 不同浸润深度 TNM 分期及分化程度中, POU5F1 低表达者的中位 OS 均较高表达者延长 ( P <0 05) 见表 3 图影响预后的因素分析 Cox 比例风险模型分析显示, 浸润深度淋巴结转移远处转移 TNM 分期及 POU5F1 表达为影响 OS 的独立因素, 而性别年龄部位分化程度 CEA CA50 及 CA199 对 OS 无显著影响见表 4 表 3 结直肠癌临床病理特征与不同 POU5F1 表达患者 OS 的关系 ( 月 ) 临床病理参数 n 低表达高表达 P 浸润深度 T 1 +T T 3 +T <0 001 TNM 分期 Ⅰ+Ⅱ Ⅲ+Ⅳ 分化程度高 + 中低 <0 001 A: 总体 ;B:T 1 +T 2 期 ;C:T 3 +T 4 期 ;D:Ⅰ+Ⅱ 期 ;E:Ⅲ+Ⅳ 期 ;F: 高 + 中分化 ;G: 低分化图 2 不同 POU5F1 表达结直肠癌患者的 OS 曲线

5 716 临床肿瘤学杂志 2016 年 8 月第 21 卷第 8 期 Chinese Clinical Oncology,Aug. 2016,Vol.21,No.8 表 4 影响结直肠癌患者 OS 的单因素及多因素 Cox 比例风险模型分析变量单因素多因素 HR(95%CI) P HR(95%CI) P 性别 ( 男 vs. 女 ) 1 162(0 836~ 1 251) 年龄 ( 60 岁 vs. >60 岁 ) 1 067(0 526~ 1 534) 部位 ( 结肠 vs. 直肠 ) 0 726(0 419~ 1 574) 浸润深度 (T 3 +T 4 vs. T 1 +T 2 ) 1 754(1 122~ 2 627) (1 128~ 2 354) 淋巴结转移 (N 1 +N 2 vs. N 0 ) 1 531(1 204~ 1 973) (1 336~ 3 202) 远处转移 (M 1 vs. M 0 ) 1 987(1 335~ 2 674) (1 203~ 1 958) TNM 分期 (Ⅲ+Ⅳ vs. Ⅰ+Ⅱ) 2 267(1 547~ 3 652) (1 445~ 2 875) <0 001 分化程度 ( 低 vs. 高 + 中 ) 1 741(1 024~ 2 018) (0 929~ 1 723) 血清 CEA( 5 ng / ml vs. >5 ng / ml) 0 941(0 426~ 1 328) 血清 CA50( 20 U / ml vs. >20 U / ml) 1 253(0 424~ 2 365) 血清 CA199( 37 U / ml vs. >37 U / ml) 0 812(0 638~ 1 052) POU5F1( 高表达 vs. 低表达 ) 1 682(1 474~ 2 624) (1 238~ 2 674) < 讨论 POU5F1 属于 Pit Oct Unc ( POU) 转录因子家族, 其在胚胎发育的早期阶段高表达随着胚胎的发育, POU5F1 在内细胞群的功能受到限制 [6] POU5F1 可以保持胚胎干细胞处于未分化状态 [7], 虽然 POU5F1 的精确功能及其表达调控胚胎干细胞分化的方式目前尚不清楚, 但其一直被认为在调节胚胎干细胞功能上发挥关键作用目前, 研究已经显示,POU5F1 可通过限制诸如 Pax6,Otx1 和 Hoxb1 等转录因子的功能来维持细胞的多能性 [8] 多项研究显示 POU5F1 在恶性肿瘤中异常表达 [9 10], 且该因子的基因多态性分布可影响中国肺癌患者的发病风险 [9] [11] Ventelä 等的研究发现 POU5F1 可通过调控其靶基因 CIP2A 来影响头颈鳞状细胞癌的致瘤性和抗辐射以上研究提示 POU5F1 可能参与了恶性肿瘤的发生发展, 但目前其在结直肠组织中的表达情况尚不清楚本研究发现结直肠癌组织中 POU5F1 的表达水平高于癌旁黏膜组织, 表明在结直肠癌组织中 POU5F1 水平异常表达, 提示其可能参与了结直肠 [6] 癌的发生发展, 与 Liu 等在乳腺癌中的研究结果相似进一步分析发现,POU5F1 表达与结直肠癌患者的性别年龄部位远处转移 CEA CA50 及 CA199 均无关, 而与浸润深度淋巴结转移 TNM 分期及分化程度有关 (P<0 05) 其中 T 3 +T 4 期 N 1 + N 2 期 Ⅲ+Ⅳ 期及低分化组织中 POU5F1 的高表达率均高于对应项, 表明肿瘤恶性程度越高,POU5F1 水平越高, 可能与肿瘤负荷大有关, 以上结果提示 POU5F1 在调控恶性肿瘤生长上发挥促癌基因的作 [12] 用 Lin 等的研究发现采用基因手段敲除 POU5F1 表达后的胰腺癌细胞株的增殖及浸润受抑制, 推测可能与抑制 Akt 信号通路有关下一步本研究将选用常用的结直肠癌细胞株研究 POU5F1 的生物学功能肿瘤标志物的发现对肿瘤的诊断治疗及预后预测起着极其重要的作用 [11] 有研究指出 POU5F1 表达水平对恶性肿瘤的预后有一定预测价 [13] 值, 如 Li 等发现胃癌患者中 POU5F1 阳性表达者的 3 年无病生存率较低本研究根据随访数据发现 POU5F1 表达与结直肠癌患者的预后有关, 不仅全组患者中高表达者的预后较差, 而且在不同浸润深度 TNM 分期及分化程度中, 高表达者的中位 OS 均较低表达者缩短进一步经 Cox 比例风险模型分析显示,POU5F1 表达为影响结直肠癌预后的独立因素以上结果提示结直肠癌组织中 POU5F1 表达可用于预后预测, 但本研究的样本量尚少, 结果仍需大样本多中心研究的支持综上所述,POU5F1 在结直肠癌组织中表达增高, 且与浸润深度淋巴结转移 TNM 分期分化程度及 OS 有关, 在结直肠癌诊断及预后评估上有一定价值, 有望成为直肠癌新的早期诊断和预后评估指标参考文献 [ 1 ] Miller KD, Siegel RL, Lin CC, et al. Cancer treatment and sur vivorship statistics, 2016[J]. CA Cancer J Clin, 2016, 66(4):

6 临床肿瘤学杂志 2016 年 8 月第 21 卷第 8 期 Chinese Clinical Oncology,Aug. 2016,Vol.21,No [ 2 ] 李丹, 周连帮, 王年飞, 等.miR 203 在结直肠癌中的表达及其功能分析 [J]. 临床肿瘤学杂志,2015,20(5): [ 3 ] Li SW, Wu XL, Dong CL, et al. The differential expression of OCT4 isoforms in cervical carcinoma[ J / OL]. PLoS One, 2015 [ ].http: / / www. ncbi. nlm. nih. gov / pubmed / [ 4 ] Zhao QW, Zhou YW, Li WX, et al. Akt mediated phosphoryla tion of Oct4 is associated with the proliferation of stem like cancer cells[ J]. Oncol Rep, 2015, 33(4): [ 5 ] Liu CG, Lu Y, Wang BB, et al. Clinical implications of stem cell gene Oct 4 expression in breast cancer[ J]. Ann Surg, 2011, 253(6): [ 6 ] Cai S, Geng S, Jin F, et al. POU5F1 / Oct 4 expression in breast cancer tissue is significantly associated with non sentinel lymph node metastasis[ J]. BMC Cancer, 2016, 16:175. [ 7 ] Familari M, Au PC, de Iongh RU, et al. Expression analysis of Cdx2 and Pou5f1 in a marsupial, the stripe faced dunnart, during early development[j]. Mol Reprod Dev, 2016, 83( 2): [ 8 ] Kotkamp K, Mössner R, Allen A, et al. A Pou5f1 / Oct4 depend ent Klf2a, Klf2b, and Klf17 regulatory sub network contributes to EVL and ectoderm development during zebrafish embryogenesis [J]. Dev Biol, 2014, 385(2): [ 9 ] Niu R, Wang Y, Zhu M, et al. Potentially functional polymor phisms in POU5F1 gene are associated with the risk of lung cancer in Han Chinese[J / OL]. Biomed Res Int, 2015[ ]. http: / / / pubmed / [10] Liu L, Zhang J, Fang C, et al. OCT4 mediates FSH induced epi thelial mesenchymal transition and invasion through the ERK1 / 2 signaling pathway in epithelial ovarian cancer[ J]. Biochem Bio phys Res Commun, 2015, 461(3): [11] Ventelä S, Sittig E, Mannermaa L, et al. CIP2A is an Oct4 target gene involved in head and neck squamous cell cancer onco genicity and radioresistance[ J]. Oncotarget, 2015, 6 ( 1): [12] Lin H, Sun LH, Han W, et al. Knockdown of OCT4 suppresses the growth and invasion of pancreatic cancer cells through inhibi tion of the AKT pathway[j]. Mol Med Rep, 2014, 10(3): [13] Li N, Deng W, Ma J, et al. Prognostic evaluation of Nanog, Oct4, Sox2, PCNA, Ki67 and E cadherin expression in gastric cancer[j]. Med Oncol, 2015, 32(1):433. 收稿日期 : ; 修回日期 :

分级和气管是否受侵是影响预后的独立危险因素关键词状腺肿瘤 ; 癌, 乳头状 ; 预后 Clinical outcomes of 600 papillary thyroid carcinoma patients ZHANG Zong-min,

分级和气管是否受侵是影响预后的独立危险因素关键词状腺肿瘤 ; 癌, 乳头状 ; 预后 Clinical outcomes of 600 papillary thyroid carcinoma patients ZHANG Zong-min, 移性鳞癌患者的临床资料, 比较不同治疗手段的效果 50 例患者男性 44 例, 女性 6 例, 年龄 29~73 岁, 中位年龄 52.5 岁 ; 临床分期 :N2c 占 64% (32/50),N3 占 36% (18/50) 30 例患者行双颈淋巴结清扫术 50 例患者均行放疗, 剂量为 50~66