8 期郭雪峰等 : 甘草提取物对绵羊瘤胃体外发酵及甲烷产量的影响 1549 反复重结晶得到白色针状晶体 [11] 1.3 试验设计体外培养以去基础饲粮样品为底物, 向其中分别添加 0( 对照组 ) 0.5% 1.0% 3.0% 5.0% 和 7.0% 的甘草提取物, 分别进行

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尹终贾
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1 动物营养学报 2012,24(8): ChineseJournalofAnimalNutrition doi: /j.issn x 甘草提取物对绵羊瘤胃体外发酵及甲烷产量的影响 1,2 郭雪峰 1,2 刘俊峰 2 孙丽斌高 2 军 2 张苏江 (1. 塔里木畜牧科技兵团重点实验室, 阿拉尔 ;2. 塔里木大学动物科学学院, 阿拉尔 ) 摘要 : 本试验旨在研究不同水平的甘草提取物对绵羊瘤胃体外发酵及甲烷产量的影响选择 3 只安装有永久性瘤胃瘘管的卡拉库尔羊作为瘤胃液供体, 通过体外产气法进行甘草提取物的筛选试验以绵羊基础饲粮为底物, 其中分别添加 0( 对照组 ) 0.5% 1.0% 3.0% 5.0% 7.0% 的甘草提取物, 分别培养 h, 研究其对瘤胃发酵参数 ( 产气量培养液 ph 挥发性脂肪酸浓度氨态氮浓度及甲烷产量 ) 的影响, 并应用多项指标综合指数进行评定结果表明 :24h 发酵结束时,5.0% 组 7.0% 组的产气量均显著低于对照组 (P< 0.05); 甘草提取物对培养液 ph 和氨态氮浓度无显著影响 (P>0.05); 试验组乙酸丙酸浓度 ( 除 0.5% 组 21h) 均低于对照组 ; 发酵 24h 结束时,7.0% 组甲烷产量显著低于对照组 (P< 0.05); 多项指标综合指数 1.0% 组 >0.5% 组 >7.0% 组 >3.0% 组 >5.0% 组结果显示 : 本试验条件下, 添加 1.0% 甘草提取物最有利于体外发酵关键词 : 甘草提取物 ; 瘤胃发酵 ; 甲烷 ; 卡拉库尔羊中图分类号 :S826 文献标识码 :A 文章编号 : X(2012) 反刍动物瘤胃发酵产生的甲烷气体导致能量损失占采食总能的 2% ~12%, 它是造成环境的温室效应的气体之一 [1] 反刍动物产生的甲烷量与饲料能量利用率之间存在负相关 [2] 多种化合物在体内或体外抑制甲烷产生的研究已见诸报道 [3-4] 瘤胃微生物在体外能够降解这些化合物 [4], 且降解具有体内适应性 [5], 这些化合物在动物生产中产生的正面作用已有报道 [6-7] 如丝兰皂甙, 它是从紫花苜蓿中提取的甾体类多糖, 饲粮中添加丝兰皂甙可以促进阉牛生长 [8-9], 减少氨的排放, 增加瘤胃液丙酸浓度 [10] 目前应用植物提取物作为反刍动物的瘤胃调控剂引起了许多研究者的注意新疆甘草资源非常丰富, 以此为原料提取有效成分, 用于调控反刍动物瘤胃发酵, 降低甲烷产量, 改善动物生产性能, 可为促进我国低碳畜牧业经济的发展提供思路本试验研究不同水平的甘草提取物对绵羊瘤胃体外发酵参数及甲烷产量的影响, 旨在为其作为饲料添加剂的应用提供参考数据 1 材料与方法 1.1 试验动物的饲养管理选择 3 只体况良好, 体重相近, 安装有永久性瘤胃瘘管的卡拉库尔羊作为瘤胃液供体羊饲粮配制参照美国 NRC(1981) [12], 精粗比为 3 7, 采用玉米 - 豆粕 - 棉籽壳型基础饲粮基础饲粮组成及营养水平见表 1 试验动物 08:00 和 20:00 分 2 次饲喂, 自由饮水, 自然通风和光照 1.2 试验材料甘草提取物主要成分为甘草酸, 甘草酸易溶于热水和稀乙醇, 不溶于无水乙醇和乙醚, 遇碱沉淀 [11] 根据甘草酸的理化性质和实际工艺要求, 提取的溶剂有 10% 乙醇冰乙酸含 7.0% 盐酸的甲醇溶液氯仿, 经氢氧化钾 (KOH) 溶液进行萃取收稿日期 : 基金项目 : 兵团博士资金专项反刍动物瘤胃甲烷产生抑制剂的研发 (2009JC08) 作者简介 : 郭雪峰 (1980 ), 女, 内蒙古卓资人, 副教授, 博士, 主要从事反刍动物营养研究 E mail:gxfdky@126.com

2 8 期郭雪峰等 : 甘草提取物对绵羊瘤胃体外发酵及甲烷产量的影响 1549 反复重结晶得到白色针状晶体 [11] 1.3 试验设计体外培养以去基础饲粮样品为底物, 向其中分别添加 0( 对照组 ) 0.5% 1.0% 3.0% 5.0% 和 7.0% 的甘草提取物, 分别进行和 24h 的体外批次培养表 1 基础饲粮组成及营养水平 ( 风干基础 ) Table1 Compositionandnutrientlevelsofthebasaldiet(air drybasis) % 原料 Ingredients 含量 Content 营养水平 Nutrientlevels 含量 Content 棉籽壳 Cotonseedhuls 代谢能 ME/(MJ/kg) 8.12 玉米 Corn 干物质 DM 麦麸 Wheatbran 6.60 粗蛋白质 CP 豆粕 Soybeanmeal 3.00 硫 S 0.23 尿素 Urea 0.36 钙 Ca 0.38 石粉 Limestone 0.13 磷 P 0.25 磷酸氢钙 CaHPO 氮硫比 N/S 7.42 食盐 NaCl 1.00 钙磷比 Ca/P 1.52 预混料 Premix 0.10 钠钾比 Na/K 1.60 硫酸钠 Na 2 SO 合计 Total 预混料为每千克饲粮提供 Thepremixprovidedthefolowingperkilogram ofdiet:feso 4 7H 2 O170g,CuSO 4 5H 2 O 70g,MnSO 4 5H 2 O290g,ZnSO 4 7H 2 O240g,CoCl 2 6H 2 O510mg,KI220mg,Na 2 SeO 3 130mg,VA IU, VD IU,VE540IU,VK 3 150mg,VB 1 60mg,VB 2 450mg,VB mg,VB mg, 泛酸钙 calcium pantothenate 750mg, 叶酸 folicacid15mg 1.4 体外培养体外发酵装置体外发酵装置主体为恒温数显水浴摇床 ( 江苏金坛良友仪器厂 ), 水温和震荡频率可调, 水浴摇床设有自制有机玻璃框架, 用于固定玻璃注射器 (100mL), 并保证注射器的 2/3 垂直浸入水浴中, 注射器底端连接有可控制开关的医用三通阀, 用于抽取培养液和收集发酵气体培养液配制微量元素液 : 二水氯化钙 (CaCl 2 2H 2 O) 13.2g 四水氯化锰 (MnCl 2 4H 2 O)10.0g 六水氯化钴 (CoCl 2 6H 2 O)1.0 g 和六水氯化铁 (FeCl 3 6H 2 O)8.0g 用蒸馏水溶解, 冷却, 定容至 100mL 缓冲液 : 碳酸氢钠 (NaHCO 3 )35.0g, 碳酸氢铵 (NH 4 HCO 3 )4.0g, 蒸馏水溶解, 冷却, 并定容至 1000mL 常量元素液 : 磷酸二氢钠 (NaH 2 PO 4 )5.7g, 磷酸二氢钾 (KH 2 PO 4 )6.2 g, 七水硫酸锰 (MnSO 4 7H 2 O)0.6g, 用蒸馏水溶解, 定容至 1000mL 刃天青溶液 : 用蒸馏水溶解 100mg 刃天青, 冷却, 并定容至 100mL 还原液 : 氢氧化钠 (NaOH)2.6g 一水硫化钠 (Na 2 S H 2 O)373mg 溶解于 62mL 蒸馏水, 使用当天配制瘤胃液采集 : 晨饲前 2h 由 3 只卡拉库尔羊瘤胃的上下左右不同位点采集足量的瘤胃液, 灌入经预热达 39 并通有 CO 2 的保温瓶中, 盖严瓶口, 迅速回到实验室, 用 40~60 目尼龙布过滤后与缓冲液按照 1 2 比例混合, 置于 39 的保温箱中备用一次备齐 60 支注射器需要的培养液, 蒸馏水 620mL 微量元素液 0.16mL 缓冲液 310mL 常量元素液 310 ml 刃天青 1.6 ml 瘤胃液 650mL 还原液 60 ml 或硫化钠 (Na 2 S) 302.1mg, 培养液混合均匀后持续通入 CO 2, 置于 39 的水浴槽中, 用磁力搅拌器不断搅动, 培养前将准备好的还原液加入培养液里培养液的颜色先变成粉红色, 最终变成无色后即可使用培养及样品处理分别准确称取粉碎过 1mm 筛的待发酵底物 0.2g 及对应比例的添加物, 用小勺等量的转移到注射器的密封一端每个样品称取 3 个平行样,

3 1550 动物营养学报 24 卷每批样品做 3 个空白注射芯插入注射器前在注射芯上涂抹液体石蜡润滑 ( 注意这个动作一定要轻, 勿将样品从注射口吹出 ) 称完样品, 将配制完的培养液分装至注射器内, 每支 30mL, 关闭三通阀, 置于 39 恒温数显水浴摇床中振荡发酵记录不同发酵时间点产气量, 不同发酵时间点净产气量通过样品产气量和空白试验产气量的差值来计算, 气体通过排水集气法收集, 收集的气体用于测定甲烷产量, 收集气体后的发酵液立即测定 ph, 再取 10mL 发酵液,3500r/min 离心 10min 取上清液 1 和 4mL 分装入瓶,-20 保存, 待测氨态氮 (NH 3 N) 和挥发性脂肪酸 (VFA) 浓度 1.5 测定指标 ph 的测定采用 25 型酸度计测定 ( 上海雷磁分析仪器厂, 玻璃电极 ) 氨态氮浓度的测定参照 [13] 冯宗慈等方法进行 VFA 浓度的测定参照 Eri [14] win 等的方法, 采用 GC-2014 气相色谱仪的内标法进行测定, 内标物为巴豆酸气体中甲烷浓度采用 GC-2014 气相色谱仪的外标法进行测定 [15], 测定条件 : 离子火焰检测器 (FID), 检测器温度 200 ; 色谱柱 (GDX-502), 柱温 65 ; 进样口温度 120, 载气氮气 (N 2 ), 速度 50mL/min; 采用顶空进样器直接进样 100μL; 甲烷标准气浓度为和 , 均购于北京京高气体有限责任公司 1.6 多项指标综合指数法 [16] 卢德勋提出用多项指标综合指数 (MFAEI) 将人工瘤胃产气法各时间点所测的各项指标综合后来评定饲料间的组合效应公式为 : SFAEI= 7 n=1 (A 2 -A 1 ) / n A 3 式中 :SFAEI 为单项指标综合指数, 等于各时间点某单项指标组合效应的加和 ;A 1 对照组各时间点各指标 ( 产气量 ph VFA 浓度氨态氮浓度或甲烷产量 ) 数值 ;A 2 为 0.5% 组 1.0% 组 2.0% 组 3.0% 组 5.0% 组或 7.0% 组各个时间点各指标数值 ;A 3 为每时间点 A 2 总和的平均值,n 为时间点数 MFAEI 等于各指标的 SFAEI 的加和 1.7 数据处理试验数据统计采用 SPSS17.0 软件进行单因素方差分析 (one wayanova), 均值的多重比较采用 Duncan 氏法和 LSD 法进行, 结果采用平均值 ± 标准差表示 2 结果与分析 2.1 不同水平甘草提取物对体外产气量的影响由表 2 可知, 随着发酵时间的延长, 产气量逐渐增多, 其中发酵初期增长较快但随着添加比例的增加, 产气量逐渐降低,24h 发酵结束时, 5.0% 组 7.0% 组的产气量均显著低于对照组 (P<0.05),0.5% 组 1.0% 组 3.0% 组与对照组相比, 产气量降低, 但差异不显著 (P>0.05) 表 2 不同水平甘草提取物对体外产气量的影响 Table2 Efectsofdiferentsupplementallevelsoflicoriceextractsongasproductioninvitro ml ± ±1.23 bc 29.36±0.52 bc 31.66±1.24 b 33.21±1.44 b b 36.67±0.79 b ± ±1.45 bc 28.45±1.33 b 30.25±1.22 b 31.97±1.87 b 33.54±0.15 b 34.00±0.65 b ± ±2.10 b 27.98±1.14 b 29.18±1.45 b 32.86±1.54 b 33.46±0.78 b 34.33±0.88 b ± ±1.02 b 26.54±2.12 b 28.39±1.54 b 30.67±1.25 b 31.85±0.54 ab 32.66±1.21 ab ± ±1.01 ab 24.33±1.68 ab 25.88±1.65 a 26.39±0.98 a 26.88±1.04 a 27.00±1.55 a ±1.48 a 22.45±2.14 a 25.17±1.12 a 28.64±0.45 a 29.78±0.89 a 30.66±0.58 a 同列数据无字母或字母相同表示差异不显著 (P>0.05), 相邻字母表示差异显著 (P<0.05), 相间字母表示差异极显著 (P<0.01) 下表同 Inthesamerow,valueswiththesameornoletersuperscriptsmeannosignificantdiference(P>0.05),whilewithadja centletersuperscriptsmeansignificantdiference(p<0.05),andwithalternateletersuperscriptsmeansignificantdiference (P<0.01).Thesameasbelow.

4 8 期郭雪峰等 : 甘草提取物对绵羊瘤胃体外发酵及甲烷产量的影响不同水平甘草提取物对培养液 ph 的影响由表 3 可知, 本试验添加 0.5% 1.0% 3.0% 5.0% 7.0% 水平的甘草提取物后, 随着发酵时间的延长,pH 呈逐渐下降趋势, 发酵 24h 时培养液 ph 最低不同时间点各试验组的 ph 与对照组相比差异不显著 (P>0.05) 表 3 不同水平甘草提取物对培养液 ph 的影响 Table3 EfectsofdiferentsupplementallevelsoflicoriceextractsonpHoftheculturemedium ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 不同水平甘草提取物对培养液氨态氮浓度的影响由表 4 可知, 随着发酵时间的延长, 氨态氮浓度有的增加的趋势, 各试验组与对照组氨态氮浓度相比差异不显著 (P>0.05), 但均在报道的正常范围之内表 4 不同水平甘草提取物对培养液氨态氮浓度的影响 Table4 Efectsofdiferentsupplementallevelsoflicoriceextractson NH 3 Nconcentrationintheculturemedium mg/dl ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 不同水平甘草提取物对培养液 VFA 浓度的影响由表 5 可知, 各 VFA 浓度均随发酵时间延长, 先增加后降低与对照组相比, 试验组乙酸浓度有降低的趋势,0.5% 组 1.0% 组与对照组相比差异不显著 (P>0.05),3.0% 组 (9 12 和 18h) 和 5.0% 组 (6 9 和 12h) 显著低于对照组 (P< 0.05),7.0% 组显著或极显著低于对照组 (P< 0.05 或 P<0.01); 丙酸浓度各试验组变化不一致, 除 0.5% 组 (21h) 以及 5.0% 组和 7.0% 组 (15 和 18h) 分别显著高于以及低于对照组 (P< 0.05) 外, 各试验组各时间点与对照组无显著差异 (P>0.05); 丁酸浓度各时间点各组差异不显著 (P>0.05); 随着发酵时间的延长, 总挥发性脂肪酸浓度逐渐升高, 发酵 18h 时达到最高浓度, 之后又下降,24h 时略有升高 2.5 不同水平甘草提取物对甲烷产量的影响由表 6 可知, 随着发酵时间的延长, 各组甲烷产量呈增加趋势, 随着的增加, 甲烷降低的幅度增加, 发酵 24h 结束时,0.5% 组 1.0% 组 3.0% 组 5.0% 组与对照组相比甲烷产量差异均不显著 (P>0.05),7.0% 组甲烷产量显著低于对照组 (P<0.05)

5 1552 动物营养学报 24 卷表 5 不同水平甘草提取物对培养液 VFA 浓度的影响 Table5 Efectsofdiferentsupplementallevelsoflicoriceextractson VFAconcentrationintheculturemedium mmol/l 项目 Items 乙酸 Acetate 丙酸 Propio nate 丁酸 Butyrate 总挥发性脂肪酸 TVFA ±1.25 b ±1.33 c ±1.11 c ±1.47 bc ±1.24 c ±1.11 b ±2.10 b ±1.24 b ±1.20 c ±1.32 c ±1.57 bc ±2.10 c ±1.02 b ±1.30 b ±1.15 b ±1.23 c ±1.28 c ±2.22 c ±2.24 c ±1.37 b ±1.71 b ±1.36 ab ±1.25 b ±1.34 b ±1.45 b ±1.54 b ±1.27 b ±1.06 ab ±2.14 a ±1.34 ab ±2.14 b ±1.75 b ±2.15 b ±2.69 b ±2.92 ab ±2.14 a ±2.32 a ±1.14 a ±1.25 a ±1.32 a ±2.31 a ±1.06 a ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± b ±0.48 b ±0.78 a ±0.61 a ±1.24 b ±1.22 b ±1.35 b ±2.53 a ±0.69 b ±1.20 b ±1.30 ab ±0.51 a ±0.56 ab ±2.14 ab ±2.45 a ±1.20 a ±0.58 a ±0.34 a ±0.54 a ±0.73 a ±0.67 a ±0.35 a ±0.94 a ±0.23 a 8.33 ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±

6 8 期郭雪峰等 : 甘草提取物对绵羊瘤胃体外发酵及甲烷产量的影响 1553 表 6 不同水平甘草提取物对甲烷产量的影响 Table6 Efectsofdiferentsupplementallevelsoflicoriceextractsonmethaneyield g/kg ±0.08 b ±0.04 b ±0.63 b ±0.25 b b ±0.21 bc ±0.23 bc 24h 降低率 Decreased percentage in24h/% b ±0.05 b ±0.52 b ±0.32 b ±0.21 b ±0.22 b ±0.13 bc ±0.09 b ±0.10 ab ±0.17 b ±0.11 b ab b ±0.17 bc ±0.05 ab ±0.25 a ±0.35 ab ±0.09 ab ±0.54 a ±0.21 b ±0.22 b 5.52 ±0.07 a 7.64 ±0.03 a ±0.27 a a a ±0.17 ab ±0.57 b a ±0.07 a ±0.35 a ±0.27 a ±0.32 a ±0.31 a ±0.48 a 2.6 不同水平甘草提取物对体外发酵指标的综合评定由表 7 可知, 添加不同水平的甘草提取物对各项指标影响程度不同单项指标综合指数 : 产气量和培养液 ph 均以 0.5% 组 1.0% 组 3.0% 组较高 ; 氨态氮浓度以 0.5% 组 3.0% 组和 5.0% 组较高 ; 总挥发性脂肪酸浓度以 0.5% 组和 1.0% 组较高 ; 甲烷产量以 3.0% 组 5.0% 组和 7.0% 组降低幅度较大从体外瘤胃发酵的单项指标综合指数无法确定适宜的因此需要通过各项指标进行综合评定通过多项指标综合指数评定法得到多项指标综合指数 :1.0% 组 >0.5% 组 >7.0% 组 >3.0% 组 >5.0% 组, 因此, 以 1.0% 的甘草提取物最有利于体外发酵项目 Items 单项指标综合指数 SFAEI 表 7 各项体外发酵指标的综合的评定 Table7 Syntheticalevaluationondiferentfermentationindicesinvitro 产气量 Gasproduction ph 氨态氮 NH 3 N 总挥发性脂肪酸 TVFA 甲烷 CH 多项指标综合指数 MFAEI 讨论 3.1 甘草提取物对体外瘤胃发酵各指标的影响一定时间体内发酵产气量反映了底物被瘤胃微生物的利用程度 [17] 体外产气量与饲料碳水化合物的消化率高低相关, 本试验结果显示添加甘草提取物一定程度上抑制了产气量的升高, 影响了饲料碳水化合物的消化这可能是由于甘草提取物抑制了甲烷菌的生长, 而甲烷菌和纤维素分解菌存在共生关系, 甲烷菌利用纤维素分解菌产生的氢气, 从而降低了瘤胃内的氢气分压, 使得纤维素分解菌有效地分解纤维素并保持瘤胃内粗饲料被持续地降解减少甲烷菌数量可能导致氢气的累积, 影响到纤维素的消化, 降低产气量

7 1554 动物营养学报 24 卷瘤胃内的 ph 影响瘤胃细菌种类及其发酵产物, 调节瘤胃液 ph 可以有效地改变瘤胃发酵的产物, 因此, 瘤胃液 ph 的变化也可以反映瘤胃的发酵类型当 ph 在 5.6~6.2 变化时, 会引起乙酸浓度的改变, 但当 ph 在 6.2~6.8 时, 却不会产生这样的效果 [17], 本试验发酵 21h 时 ph 降低到 5.62 以下, 说明发酵类型已经改变, 此时乙酸浓度下降, 说明结构性碳水化合物的消化率降低 ;24h 时 ph 降到最低, 这与发酵时间延长, 发酵产物累积有关, 特别是生成的 VFA 会进一步加剧酸性环境的产生微生物所必需的氮源有肽氨基酸和氨态氮, [18] Rusel 等指出, 发酵结构性碳水化合物的瘤胃微生物只以氨态氮作为其氮源, 而发酵非结构性碳水化合物的瘤胃微生物则需要游离的氨基酸和肽类如果要保证动物的最高采食量和消化率, 瘤胃内氨态氮的水平应不低于 0.2mg/mL, 瘤胃内纤维素分解菌发酵所需的氨态氮水平也应达到 [19] 这一水平 Ortega 等也认为瘤胃微生物依靠氨态氮而生长, 并且需要一个适宜水平, 其最佳的氨态氮浓度为 6.3~27.5mg/dL, 本试验结果均在上述范围之内, 但随着发酵时间的延长, 氨态氮浓度增加, 这与微生物利用率降低有关因为随着发酵时间延长, 瘤胃液 ph 降低, 降低的 ph 环境不利于分解结构性碳水化合物的微生物生长, 分解结构性碳水化合物的微生物利用氨态氮的效率降低, 导致瘤胃内氨态氮浓度增加, 这一结果与 ph 的降低趋势及乙酸的降低的趋势相一致瘤胃微生物是影响 VFA 生成比例和利用效率发酵产热及甲烷生成的主要因素, 它进一步影响动物对饲粮中能量的利用效率动物采食以粗饲料为主的饲粮时, 微生物发酵终产物中的乙酸较多, 动物采食以精料为主的饲粮时, 微生物发酵终产物中的丙酸较多, 而乙酸 / 丙酸的大小又与能量利用效率成线性相关 [20] 本试验结果说明添加甘草提取物后乙酸浓度降低, 而瘤胃中甲烷伴随着乙酸的形成而产生, 因此添加甘草提取物降低了甲烷产量同时, 生成乙酸的过程中会产生大量的氢气 [21], 氢气达到一定量后逐渐被微生物所利用以合成甲烷等产物, 因此添加甘草提取物抑制了瘤胃产气量和乙酸浓度的升高, 说明甘草提取物的添加降低了瘤胃甲烷产合成的前体物, 是否因此而影响瘤胃中纤维素分解菌分解纤维素的能力有待进一步研究影响甲烷产量的因素包括瘤胃液 ph 乙酸 / 丙酸及甲烷菌数量等, 随着添加物比例的增加, 甲烷产量的降低幅度增加, 添加物比例与甲烷产量成反比, 说明甘草提取物对瘤胃甲烷的产生有抑制作用另外本试验还发现的升高也进一步抑制了瘤胃发酵, 降低了产气量, 因此探寻一个较为合适的添加比例需要通过各项发酵指标综合评价 3.2 甘草提取物对瘤胃体外发酵的综合评定反刍动物对饲料营养物质的消化以瘤胃消化为主瘤胃内环境指标包括产气量 ph 氨态氮浓度和 VFA 浓度等, 是反映瘤胃发酵稳定程度的重要参数, 例如 ph 过高或过低对于正常的瘤胃微生物的生长增殖及瘤胃发酵均不利 [22-23] Rusel [18] 等报道, 瘤胃纤维素分解菌对瘤胃液 ph 极为敏感, 当 ph 低于 6.0 时, 瘤胃纤维素分解菌的生长速度显著下降纤维素是反刍动物瘤胃内纤维素分解菌的主要发酵底物瘤胃发酵产生的 VFA 是反刍动物能量的重要来源, 约占反刍动物吸收能量的 70% ~80%, 其中乙酸丙酸丁酸占瘤胃发酵总挥发性脂肪酸的 95% 左右 [20], 因此测定 VFA 对研究反刍动物瘤胃发酵有着重要的意义而甲烷产生较多则会导致能量损失加大因此, 瘤胃发酵各项指标综合评价可相对反映出瘤胃发酵状况正常与否, 可作为体外发酵试验的评价体系 4 结论本试验条件下, 通过多项指标综合指数分析表明在精粗比为 3 7 的底物中添加 1.0% 甘草提取物最有利于体外发酵参考文献 : [1] MOSSAR.Methane:globalwarmingandproduction byanimals[m].kingston:chalcombepublications, [2] RSKOVER,FlATTW P,MOEPW.Fermentation balanceapproachtoestimatedextentoffermentation andeficiencyofvolatilefatyacidformationinrumi nants[j].journalofdairyscience,1968,51: [3] CZERKAWSKIJW,BRECKENRIDGEG.Fermenta tionofvariousglycolyticintermediatesandothercom

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9 1556 动物营养学报 24 卷 EfectsofLicoriceExtractsonRumenFermentationand MethaneYieldofSheepinVitro GUOXuefeng 1,2 LIUJunfeng 1,2 SUNLibin 2 GAOJun 2 ZAHNGSujiang 2 (1.KeyLaboratoryofTarimAnimalHusbandryScience&Technology,Alar843300,China; 2.ColegeofAnimalScience,TarimUniversity,Alar843300,China) Abstract:Thisstudywasconductedtostudytheefectsoflicoriceextractsonrumenfermentationandmethane yieldofsheepinvitro.rumenfluidwascolectedfrom threekarakulsheepwithpermanentrumenfistulas. Thescreeningtestofsupplementalleveloflicoriceextractswasdonebyinvitrogasproductionmethod.The substratewasthebasaldietofsheep,andwasincubatedwithlicoriceextractsatlevelsof0(controlgroup), 0.5%,1.0%,3.0%,5.0% and7.0for6,9,12,15,18,21and24h,respectively.rumenfermentation parameters,includinggasproduction,culturemedium ph,volatilefatyacidconcentration,ammonianitrogen (NH 3 N)concentrationandmethaneyield,wereobserved,andtheefectswereasesedbymultiplyfactor analysesofindex(mfaei).theresultsshowedasfolows:after24hfermentation,gasproductionofgroups 5.0% and7.0% wassignificantlylowerthanthatofthecontrolgroup(p<0.05);culturemedium ph and NH 3 Nconcentrationwerenotsignificantlyafected(P>0.05);concentrationsofaceticacidandpropionic acid(exceptforgroup5.0% at21h)ofexperimentalgroupswerelowerthanthatofthecontrolgroup;after 24hfermentation,methaneyieldofgroup7.0% wassignificantlylowerthanthatofthecontrolgroup; MFAEIshowedgroup1.0% >group0.5% >group7.0% >group3.0% >group5.0%.theresultsindicate that1.0% isthepropersupplementalleveloflicoriceextractunderconditionsinthisstudy.[chinesejournal ofanimalnutrition,2012,24(8): ] Keywords:licoriceextracts;rumenfermentation;methane;Karakulsheep Author,GUOXuefeng,asociateprofesor,E mail:gxfdky@126.com ( 编辑王智航 )