中国畜牧兽医卷 ;010%6-9.:010-0*#09096 <4%1;- %6-9.:010-0 ;#.09# ;010 9%6-9.: #-%0 ;0109%6-9.:#-%0 ;#.

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窘夸钱
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1 中国畜牧兽医! " # 活性干酵母与酵母培养物对体外瘤胃发酵参数影响的比较耿春银赵丽萍何立文周振明孟庆翔延边大学农学院延吉中国农业大学动物科技学院动物营养国家重点实验室北京摘要本研究采用体外产气量法以全日制混合日粮 *"7 精粗比 > 为发酵底物比较了两种典型酵母制剂活性干酵母 -901::0-9<4 和酵母培养物 : 对体外产气量产气动力学参数甲烷 2 含量及瘤胃发酵参数的影响同时根据 # 产气量预测了酵母制剂对底物代谢能 ", 有机物消化率 3"< 及微生物蛋白 "+ 产量的影响旨在比较二者在体外瘤胃发酵影响上的差异为进一步揭示其应用效果的差异机制及其合理应用奠定基础结果显示 <4 及 42 组产气量相近但 42 组 # 的产气量均高于 <4 组 <4 组发酵前期的产气速率较对照组降低了 42 组较对照组升高了 42 组较 <4 组升高了与对照组相比 42 显著增加了 2 气体含量显著降低了及 23 的含量 <4 显著降低了含量但对 2 及 23 气体无显著影响与对照组相比 <4 和 42 对发酵液的总挥发性脂肪酸均无显著影响但均显著升高了发酵液中氨态氮的浓度 <4 对个别挥发性脂肪酸比例无显著影响 42 有升高乙酸比例降低异丁酸比例的趋势与对照组相比 <4 及 42 对预测的底物 3"<", 及 "+ 产量无显著影响但 42 组各预测指标均显著高于 <4 组综上所述 42 与 <4 在对发酵底物的体外瘤胃产气量气体成分含量产气速率及发酵参数的影响上存在差异关键词酵母制剂体外产气技术产气量瘤胃发酵中图分类号 ) 文献标识码文章编号 &'$(!!!"(!*"$24'(''( #&5&'$''&(,2#: 3'%,';0 3#0&% ",%-% 2). )*.#! 53-!502/!! (&)!))*!!)). )*/## '#))..#!3-!0. *+('"*#9:;-909&-109# ::0-9<4-: %-19:-&6%-19&09# &0601& &0901:-!)%-1990#B0-9#0-.06",3"<-:0.6"+ ; %9#% # #0&0#-&6 9# : # *#010.9#;09#-9 <4-42#-& %-19#;0019#0%-19642%1-9 -#;010#%#019#-9#-96<42&-10923%19#01-906% &09-901;-10-0:42% : <4%1-9#-9642%1;-%6-9.:10-0: 9#-9#-9 6<4%1 *# %1;-%6-9.:10-0- 收稿日期基金项目国家肉牛牦牛产业技术体系项目 27) 国家自然科学基金项目作者简介耿春银男吉林榆树市人博士讲师研究方向反刍动物营养,&-.:%0%& 通信作者孟庆翔男博士教授研究方向反刍动物营养,&-.B&0%-0

2 中国畜牧兽医卷 ;010%6-9.:010-0*#09096 <4%1;- %6-9.:010-0 ;#.09# ;010 9%6-9.: #-%0 ;0109%6-9.:#-%0 ;#.09# #09;%1 ;-%6-9.:10-0 <4 ;# # #01-969:1-2&-1%923%19#03"<",- "+6<4-42%1;0109%6-9.:-6090 ;#.09#-9642%1 ;010-.%6-9.:10-09#- <4 %1!.9#010; #006096<4-42 % %-9#01-906% &090161&0601&09-9,-(: !)%-1990#B0%-191&0601&09-9 酵母制剂作为一种潜在的抗生素替代品已广泛应用于反刍动物生产中尽管如此二者的应用效果结论并不一致有研究者认为仅活性酵母制剂才能对瘤胃发酵及反刍动物消化产生有益的影响另一部分研究者认为活酵母对于有益影响的产生并不是必要的他们认为培养基提取物中的代谢物是有活性的组分因此不需要以活性形式添加目前活性干酵母 -901::0-9<4 及酵母培养物 : 对反刍动物生产性能改善的原因已经被广泛的研究较为一致的观点认为其与对瘤胃发酵环境及瘤胃发酵模式的影响有关因此在过去的几年中比较 42 与 <4 对瘤胃发酵的影响一直是研究的热点通过动物活体试验开展的饲料营养价值及饲料添加剂效果评定费时费力且易受动物身体状况环境因素和人为因素等影响体外产气法 -!) 是将被测饲料样本在体外与瘤胃液共同培养通过测定被测样品在瘤胃微生物作用下降解产生的 23 和 2 等气体情况进而估测饲料营养价值或饲料添加剂效果的快速方法其具有简便经济评价效率高等优点本研究采用!@+ 法以生产中较为常见的全混合日粮 *"7 精粗比 > 为发酵底物比较 <4 和 42 对体外产气量产气动态参数气体成分含量及瘤胃发酵参数的影响同时根据产气量对底物能值有机物消化率及微生物蛋白产量进行预测旨在比较 <4 与 42 对体外瘤胃发酵影响的差异为揭示其应用效果差异机制及酵母制剂的合理应用奠定基础材料与方法. 材料 42 及 <442 为细粉状颗粒粗蛋白质 2+ 粗脂肪,, 粗纤维 2= 水分灰分 # 肉牛中的推荐量为 % 头 #<4 菌种为 /##)##- 22"! 乳白色球状颗粒活菌数? 2=% 肉牛中推荐量为 % 头 #<4 在试验前 # 经蒸馏水活化后过滤保留上清液用血球板进行计数确定上清液中酵母菌浓度后待用发酵底物用于体外发酵的基础发酵底物为全价 *"7 饲料精粗比 > 参考中国肉牛饲养标准配制肉牛基础日粮其组成及营养水平见表发酵底物经风干粉碎至目备用. 试验动物与饲养管理瘤胃液供体牛为头体重约 % 安装有永久性瘤胃瘘管的健康利木赞阉牛瘘管牛在采集瘤胃液前预饲周瘘管牛每天 > 和 > 饲喂次自由饮水. 试验设计产气量试验采用单因子试验设计分为基础日粮组 23 酵母培养物组 42 组及活性干酵母制剂组 <4 组每组个平行空白组不加发酵底物 23 组以 &% 基础日粮目为发酵底物 42 组在基础日粮 &% 中添加 &%42 <4 组在基础日粮 &% 中添加约为? 2= 的活菌酵母酵母制剂组添加量的确定主

3 期耿春银等活性干酵母与酵母培养物对体外瘤胃发酵参数影响的比较要参考产品用于肉牛的推荐量以瘤胃体积 ' 换算后确定在发酵 # 时从每组中随机取出个平行测定气体成分在发酵 # 时终止发酵测定发酵液的及氨态氮浓度发酵期间记录各组产气量变化情况表日粮组成及营养水平干物质基础 '+&($$'$2(!+'('$(<" - 原料!%1009 含量 2909 营养水平含量 2909 玉米 21 干物质 <" 棉粕 2900&0-. 粗蛋白质 2+ 豆粕 ):0-&0-. 粗脂肪,, 麦麸 5#0-91- 粗灰分 # 玉米青贮 21.-%0 中性洗涤纤维 <= 苜蓿草粉.6-.6-&0-. 酸性洗涤纤维 <= 羊草 2#00;.1:0 钙 2- 预混料 2&10& 磷 + 总计 *9-. 盐 -2.. 瘤胃液体外发酵体外发酵采用 "00 等体外发酵法进行在晨饲前采集头瘘管牛的瘤胃液经混匀层纱布过滤后与预热并与经 23 饱和的人工瘤胃营养液按 > 体积比混合制成混合人工瘤胃培养液混合人工瘤胃培养液边加热边用磁力搅拌器搅拌同时通入无氧 23 用自动分液器向提前预热的人工瘤胃培养管德国 "-#06-1&# 公司最小刻度 &' 中加入 &' 混合发酵液其中 <4 组在分装瘤胃液前顺着注射器前端硅橡胶管用移液器注入 ' 酵母活菌液约为? 2= 混匀读取刻度后迅速放入已预热的水浴箱中待加液完毕后成批转入人工瘤胃培养箱中培养. 测定指标净产气量及产气参数当培养至 # 时取出培养管快速读取活塞处的刻度值 &' 并记录计算各时间段的净产气量情况并绘制产气量曲线根据 I1 等产气量模型利用 )+)) 预测样本相关产气动态参数并计算主要时间点的产气速率 4 $0 $9 式中 4 发酵底物的产气量 &' 理论最大产气量 &' 发酵底物的产气速率 #9 培养时间 # # 时发酵气体成分在发酵 # 后从每组平行管中任意取出只放入冰水浴中停止发酵立即采集发酵气体采用气相色谱仪型号 *+* 北京分析仪器厂测定气体中甲烷 2 23 氧氮及氢气等含量测定条件载气氩气气体流量 &&& 进样量 &&*2< 检测器柱子型号 *<( &? &&?&& 柱温检测器温度进样口温度 # 时发酵液发酵参数发酵 # 后将剩余人工瘤胃发酵管全部取出放入冰水中终止发酵迅速排出培养管中的发酵液使用快速测定仪 90*09 德国测定发酵液然后将发酵液 1& 离心 & 后取 &' 上清液参考 101 参考 ' 等方法测定发酵液中含量有机物消化率 3"< 代谢能值 ", 及瘤胃微生物蛋白 "+ 产量计算参考 "00 等方法根据体外产气法得到的培养 # 后的产气量计算发酵底物 3"< 及 ",3"< D +D2+D 式中 +# 的净产气量 &'&%<"2+ 粗蛋白质含量粗灰分含量 ", "E% <"D +D2+"+ 根据每千克可消化有机物 <3" 可产生 % 微生物氮求得 <3" %% 3"+$+ D(+D('D 式中 3" 有机物 + 发酵 # 的产气量 &' &%<"(+2+ 含量 (',, 含量. 数据统计分析试验数据用 )+)) 进行单因素方差分析并用 <- 法进行多重比较以作为差异显著性判断标准

4 中国畜牧兽医卷结果与分析. 产气量动态曲线各试验组产气量动态曲线见图由图可知各组产气动态曲线相似前 # 累积产气量相近在 # 后各组产气量略有差异 <4 及 42 组在及 # 的产气量相近但 42 组高于 <4 组图各试验组产气量动态曲线 5$6.'&$""2(!6'("$!$&'6(. 产气速率动态曲线各试验组主要时间点的产气速率曲线见表由表可知 # 时与对照组相比 42 组的产气速率较对照组升高了 <4 组产气速率较对照组降低了 42 组产气速率较 <4 组升高了及 # 时 <4 及 42 组产气速率均略低于对照组但无显著差异预测的理论最大产气量与 # 实际观测的产气量变化趋势一致 <4 及 42 组与对照组无显著差异. 发酵时气体成分由表可知与对照组相比 <4 显著降低了发酵 # 时含量 23 含量有所降低 2 及氧氮含量略有升高但与对照组均无显著差异与对照组相比 42 显著增加了 2 含量同时显著降低了及 23 含量氧氮含量无显著变化与 <4 相比 42 组含量显著降低但同时 2 含量显著升高表活性酵母及酵母培养物对发酵底物产气速率的影响 # '+!"(!'("''"$2'('!6'("$ 时间 #*&0 对照组 23%1 活性酵母组 <4%1 酵母培养物组 42%1 - - 同行数据肩标不同字母表示差异显著肩标相同字母或无字母标注表示差异不显著下同!9#0-&01;-.0;9# &0-% #.0;9#9#0-& &0-% *#0-&0-0.; 表酵母培养物和活性酵母对时底物发酵气体成分的影响 '+!"(!'("''"$2'(6'("&&-&+(%&$'!&'$! 项目!90& 对照组 23%1 活性酵母组 <4%1 酵母培养物组 42%1 二氧化碳甲烷 2 - 氧氮 D3 氢气 -

5 期耿春银等活性干酵母与酵母培养物对体外瘤胃发酵参数影响的比较. 发酵时发酵参数由表可知与对照组相比 <4 及 42 组对发酵液无显著差异但都显著升高了浓度与对照组相比 <4 组对各挥发酸比例均无显著影响 42 组有升高乙酸降低异丁酸的趋势同时显著降低了戊酸的比例此外 42 组有升高乙酸丙酸值的趋势表酵母培养物和活性酵母对体外瘤胃液发酵参数的影响 '+!"(!'("''"$2'(!&'$''&(&-&+(%&$'!&'$! 项目!90& 对照组 23%1 活性酵母组 <4%1 酵母培养物组 42%1 氨态氮 &%&' - - 总挥发酸 &&.'*9-.@= 乙酸丙酸异丁酸!9:1-90 丁酸 9:1-90 异戊酸! 乙酸丙酸及 0 产量根据 # 产气量预测各组的 3"<", 及 "+ 结果见表由表可知与对照组相比 <4 组 3"<", 及 "+ 略低于对照组而 42 组略高于对照组但均无显著差异 42 组各预测指标均显著高于 <4 组表酵母培养物和活性酵母对有机物消化率代谢能值及微生物蛋白产量的影响 '+!"(!'("''"$2'(040 '0"$&-&+(%&$'&$"6'$(&!&'1 $ 项目!90& 对照组 23%1 活性酵母组 <4%1 酵母培养物组 42%1 有机物消化率 3"< - - 代谢能 "E%", - - 微生物蛋白产量 %%" 讨论. 产气量发酵底物的化学成分与体外产气量密切相关!@+ 常用于发酵底物营养特性及添加剂的效果评价中本研究使用相同的发酵底物评价了 <4 及 42 对产气量的影响结果发现与对照组相比 <4 组及 # 的产气量均降低 42 组产气量均升高但两组均与对照组无显著差异其中 42 组结论与. 研究结果一致产气量的变化与发酵底物可利用的化学成分密切相关潜在产气量与底物非纤维性碳水化合物 =2 水平呈正相关与蛋白水平呈负相关此外纤维素酶可增加体外发酵底物干草及青贮的累积产气量和产气速率本研究中与对照组相比 <4 产气量有所降低而 42 组产气量有所升高且 42 组显著高于 <4 组这个结果初步说明 <4 与 42 在对底物养分如 2+,, 或 =2 利用的影响上可能存在一定的差异此外因 42 自身提供了一部分养分这也可能是导致 <4 与 42 组产气量出现差异的原因之一. 产气速率产气速率能够反映出底物的营养特性及瘤胃微生物的发酵能力变化本研究结果表明 <4 与 42 在对底物产气参数的影响上存在一定的差异各组中 42 发酵前期产气速率最高 <4 最低但二者与对照组相比均无显著差异因此本研究结果说明 <4 有降低底物起始发酵速率的趋势而 42 有加速底物发酵速率的趋势等发现酿酒酵母培养液刺激了纤维降解的起始速率本

6 中国畜牧兽医卷研究中 42 对底物前期产气速率也具有一定的刺激作用这可能与 42 对纤维利用菌活性的影响有关 <4 对底物前期的发酵速率的抑制作用可能与酵母菌对养分的利用影响了瘤胃其他微生物的活性有关具体机制还需深入研究总之 <4 对前期产气速率的抑制作用说明 <4 具有延迟瘤胃发酵的作用这可能是高精料饲喂条件下 <4 能够减缓瘤胃剧烈下降的原因之一. 气体成分瘤胃气体主要由 23 和 2 组成此外还有微量的 ) 和 3 23 主要是在丙酮酸脱羧生成乙酸过程中生成的 2 主要是由瘤胃中的甲烷菌生成瘤胃中的 2 由和 23 还原反应生成 2 是一种重要的温室气体不仅会造成环境的污染还会降低饲料能量的利用本研究结果发现与对照组相比 <4 组发酵 # 气体中 2 含量略有增加 23 含量在数值上有所降低 42 显著增加了 2 气体的含量同时显著降低了及 23 含量与 <4 组相比 42 组含量显著降低但同时 2 含量显著升高据报道日粮中添加 <4 降低了草原红牛 2 的产量而 '.- 等体外研究表明 42 对 2 含量无显著影响体内的研究结果表明添加 42 在增加干物质及中性洗涤纤维消化率的同时也增加了 2 气体的产量乔国华等体外研究结果也表明 42 增加了 2 气体的含量本研究中 42 对 2 的影响与报道的结论一致关于 <4 对 2 产量影响结论不一致的原因可能与使用的菌种及日粮有关此外体内及体外的不同研究方式也可能也是导致研究结论不一致的原因本研究中 <4 对和 23 的影响可能与促进乙酸生成有关据报道酵母菌存在时瘤胃乙酸的生成增强乙酸生成会消耗和 23 但过量的乙酸生成会刺激某些甲烷菌的生长这可能是导致 42 增加 2 生成的重要原因另外 42 对原虫的刺激可能也是其导致 2 升高的重要原因据报道甲烷菌与纤毛虫之间存在分子间转移瘤胃原虫为甲烷菌提供生长物质甲烷菌借助种间分子转移消耗原虫生成的并利用原虫生成更多的氧化产物和能量物质. 发酵参数瘤胃是测量瘤胃发酵的一个重要参数指标瘤胃过低不仅会影响瘤胃发酵功能也对其他器官产生不利影响目前有关酿酒酵母对瘤胃的影响结论并不一致据报道饲喂酵母制剂包括 <4 和 42 具有稳定瘤胃的作用而其他的报道表明 <4 及 42 并不能改变瘤胃平均在本研究中虽然没有对 <4 及 42 稳定发酵液的效果进行观测但是 42 及 <4 对体外 # 瘤胃发酵液无显著影响酵母制剂对瘤胃影响结论不一致的原因可能是由于菌种及日粮组成的差异造成的此外体内与体外研究条件的差异也可能是导致研究结果不一致的重要原因瘤胃的是微生物生长的氮来源浓度在进食后 # 内会增加至 &.' 这主要取决于摄入的可降解氮量由于瘤胃微生物的利用或瘤胃壁的吸收之后浓度会迅速下降下降根据目前报道酵母制剂对瘤胃浓度的影响结论并不一致 7#901 等报道了添加高水平的 42 能够增加瘤胃浓度 *#10 等和 19 等研究结果表明 <4 及 42 对瘤胃液中浓度均无显著影响本研究中 42 及 <4 均显著增加了发酵液浓度这与 7#901 等的报道结论一致浓度的增加表明瘤胃微生物对蛋白质利用加强这可能是酵母制剂改善动物生长性能的重要原因之一酵母制剂对浓度的影响与其对瘤胃中微生物的蛋白水解活性的刺激有关 4 等报道称添加酵母制剂能够增加奶牛瘤胃中蛋白分解菌的数量这表明增加蛋白分解菌数量是酵母增加发酵液浓度的核心目前酵母制剂对瘤胃挥发酸的影响结果并不一致而且体内体外研究结论也存在明显差异这可能与瘤胃发酵受到多种因素的影响有关这些因素包括日粮组成饲料加工瘤胃瘤胃微生物变化及饲喂方式等在相同的试验条件下研究 <4 及 42 对犊牛瘤胃发酵影响结果表明 <4 比例均无显著影响但是 42 显著增加了乙酸浓度及乙酸丙酸比值本研究中 <4 对体外发酵 # 比例均无显著影响 42 浓度无显著影响但显著降低了戊酸的比例同时 42 有升高乙酸比例及乙酸丙酸比值的趋势这与 8;-. 等研究结果基本一致这些结果表明酵母制剂可以改变瘤胃发酵模式且 <4 和 42 在发酵模式上存在一定的差异这种差异可能与 <4 和 42 在对瘤胃微生物数量的影响

7 期耿春银等活性干酵母与酵母培养物对体外瘤胃发酵参数影响的比较上存在差异有关揭示这种差异机制对于酵母制剂的合理应用及酵母菌种的基因改造都具有重要意义.040 及 0 产量酵母制剂已经被广泛用于反刍动物营养中饲喂酵母制剂对反刍动物的有益影响包括改善瘤胃发酵提高 2= 的消化率增加 "+ 产量此外酵母制剂还可通过减少 2 产量进而增加饲料能量利用效率本研究中通过发酵 # 的产气量预测了酵母制剂对发酵底物 3"<", 及 "+ 产量结果表明与对照组相比 42 及 <4 对上述指标均没有显著影响但与 <4 相比 42 获得了更高的 3"<", 及 "+ 产量预测值值得注意的是虽然 3"<", 及 "+ 产量等指标可以间接地对添加剂的使用效果进行预测但由于本研究中各组在气体组成上存在很大差异尤其是 2 含量的差异此外体外产气只有气体的物理累积量不存在体内不断外排及交换的动态变化因此仅仅通过本研究的预测值还不能完全真实的反映出其在体内实际的应用效果为此有必要进一步开展体内的研究结论综上所述通过体外产气试验发现 42 与 <4 对精粗比为 > 的发酵底物的体外产气量气体组成产气速率发酵参数的影响上存在一定差异提示 42 及 <4 在对瘤胃发酵影响的机制上可能存在差异这为进一步揭示其应用效果的差异机制奠定了基础参考文献耿春银任丽萍周振明等反刍动物酵母菌制剂应用的效果及可能作用机制 E 动物营养学报 <00) +00-* &-9919E.))*.#!/## 中华人民共和国农业部 4* 肉牛饲养标准 ) 北京中国农业出版社 "008 )90%-,9&-969#0001% & #0&-.--.: - -!) %-19%1&06.E,#$-)! I1,7"<-.!*#009& %1--.9:9#01&061&-9 &0-10&09 ;0%#90-1% %0E' ))*.#!/## %E 9&-90& &-96-&& &-1 &-.6.--!) &0-E))* $ /## '4 '"0% (, : &090;9#6.;01.1&-.601& % !)E#-!!) " ')-.0;09-.*#009&-96 %09.9:-&09-./-.0001%:90961& &9#0%-19;#09#0:-10-90;9#1&0.B1-!)E))*.#!/##.8 "!6.006/##)##- 601& & %1--.9: --!)9:<50019:6@0901-1: "00@ E5-.-0)E"-09-.! &09-1:61.:90/:&09#0601& %1-: &01&-.&11%- &-!)E))* /## 班志彬张国梁杨华明等活性干酵母和纤维素酶对草原红牛瘤胃挥发性脂肪酸浓度及甲烷排放的影响 E 中国畜牧兽医 '.-"#-&&04-*09-.,6096-9; 91-6/##)##-.00.&01 &-.&11%-&601&09-9-!)E) )*/## 乔国华单安山直接饲喂微生物培养物对奶牛瘤胃发酵产甲烷及生产性能的影响 E 中国畜牧兽医 2#-#0:1-==9: %-!) 9./-9:-1&-.-09%0-901& ;9#--1#-0-&09#-%0 9&.-90: /##)# #- E-)!"#))). 郭嫣秋胡伟莲刘建新瘤胃甲烷菌及甲烷生成的调控 E 微生物学报 *#10 "-# 7/"10 "09-.,6096 /##)##- 1&-.-& &09-9-1:;:0-9.0&09-9 1&0601&09-9E&-!)#/##

8 中国畜牧兽医卷 8;-. )&-.E+--EE &0601& #0& -.-1-& &# &090 ;9# :0-9 /##)## E/##, 等著孙鹏译活性干酵母和灭活干酵母对肉用小母牛亚急性瘤胃酸中毒瘤胃发酵及营养物质消化率的影响 E 中国畜牧兽医 2-: *09-.,6096 /##)##- 601& &-.601& /-9-1: ; E) )* $ /## "- '"- '5-%E809-.,6096/# #)##- 601& !)601&09-9-&1-.&&906.; B-.9:61-%0- &009E))* /## 0%2 470'+# "09-.2& ::0-9/##)##- -: %1;9#0161& &0-9 B-.9:-.006#%-9.0E /## ) )-.-9 ) 等著赵连生译夏季日粮中添加活性酵母对奶牛消化率和生产性能的影响 E 中国畜牧兽医 30/901)#1001 0:01-#"09-.!6.006.%--9.-0:0-96-#-1&:0.-1 -!)1&-.&1-.&09-.&E))* $/## 7#901=.-#;:&0-9/.09%90% /0 01 ; #1% &10%.-910 &-9#1E! " # 4!8)901 " <,6096/##)## - -.)6 1&-.601& :;E))* $ /## <-;8 0&-8,.%E,6096& 1-..0&099-%:0-9-&#!)# 1%#-%0601&-.& E) )*/## 责任编辑姚倩倩

中 国 畜 牧 兽 医 卷 ;010%6-9.:010-0*#09096 <4%1;- %6-9.:010-0 ;#.09# ;010 9%6-9.: #-%0 ;0109%6-9.:#-%0 ;#.

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