中国组织化学与细胞化学杂志 454 第 27 卷 midgut, while significantly lower enzymatic activity in the stomach corpus and hindgut. Conclusion The distribution of six en

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彪咸
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1 第 27 卷第 5 期 2018 年 10 月中国组织化学与细胞化学杂志 CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRY Vol.27.No.5 October.2018 泥鳅消化道过氧化物酶三磷酸腺苷酶琥珀酸脱氢酶酸性磷酸酶碱性磷酸酶及非特异性酯酶的分布与组织定位 * ( 安徽师范大学生命科学学院, 安徽省重要生物资源保护与利用重点实验室, 芜湖 ) 摘要目的研究过氧化物酶 (POX) 三磷酸腺苷酶 (ATPase) 琥珀酸脱氢酶 (SDH) 酸性磷酸酶 (ACP) 碱性磷酸酶 (ALP) 及非特异性酯酶 (NSE) 等 6 种酶在泥鳅消化道不同部位的分布和组织定位方法在泥鳅食道胃贲门胃体胃幽门前肠中肠和后肠等 7 个部位取样, 采用冷冻切片酶组织化学染色和光密度定量分析等技术结果 POX 在食道黏膜上皮细胞中酶活性最高, 在胃前肠中肠和后肠中酶活性均较低 ;SDH ALP 和 ATPase 在食道中酶活性最低, 在消化道其他部位酶活性均较高, 主要分布于胃黏膜上皮细胞顶部和肠上皮细胞的纹状缘 ;ACP 在食道胃贲门胃体前肠中肠和后肠上皮细胞中酶活性均较高, 胃幽门中酶活性显著较低 ;NSE 在食道胃贲门胃幽门前肠和中肠上皮细胞中酶活性均较高, 在胃体和后肠中酶活性显著较低结论泥鳅消化道黏膜 6 种酶的分布表明, 泥鳅的胃分化程度低, 胃和肠道都具有吸收功能 ; 胃贲门胃体和前肠是蛋白质的主要消化部位 ; 胃贲门胃幽门前肠和中肠是脂质的主要消化部位关键词泥鳅 ; 消化道 ; 酶组织化学中图分类号 Q954.6 文献标识码 A DOI: / j. cnki Distribution and histological localization of peroxidase, adenosine triphosphatase, succinate dehydrogenase, acid phosphatase, alkaline phosphatase and non-specific esterase in the digestive tract of Misgurnus anguillicaudatus Cao Xinfang, Huang Huihui, Ren Qiunan, Chen Tingting, Wang Jing, Zhang Shengzhou * (College of life science, Anhui Normal University, Key Laboratory for Conservation and Use of Important Biological Resources of Anhui Province, Wuhu , China) Abstract Objective To study the distribution and histological localizations of 6 enzymes including peroxidase (POX), adenosine triphosphatase (ATPase), succinate dehydrogenase (SDH), acid phosphatase (ACP), alkaline phosphatase (ALP) and nonspecific esterase (NSE) in the different parts of digestive tract of Misgurnus anguillicaudatus. Methods Tissue samples were obtained from seven parts including esophagus, stomach cardiac, stomach corpus, stomach pylorus, foregut, midgut and hindgut of the digestive tract and techniques such as cryosection, enzyme histochemical staining and quantitative analysis of optical density were applied. Results The enzymatic activity of POX was highest in the mucosal epithelial cells of the esophagus and relatively lower in the stomach, foregut, midgut and hindgut. However, the enzymatic activities of SDH, ALP and ATPase were lowest in the esophagus and relatively higher in other parts of the digestive tract, These three enzymes were mainly distributed in the apex of stomach mucosal epithelial cells and the striated border of intestinal epithelial cells. The enzymatic activity of ACP was higher in the mucosal epithelial cells of the esophagus, stomach cardiac, stomach corpus, foregut, midgut and hindgut, while significantly lower in the stomach pylorus. NSE exhibited higher enzymatic activity in the mucosal epithelial cells of esophagus, stomach cardiac, stomach pylorus, foregut and 收稿日期修回日期基金项目安徽省自然科学基金项目( MC82); 国家级大学生创新创业训练计划项目 ( ); 安徽省重要生物资源保护与利用重点实验室建设基金作者简介曹新芳, 女 (1995 年 ), 汉族, 本科生 * 通讯作者 (To whom correspondence should be addressed):szzhang@mail.ahnu.edu.cn

2 中国组织化学与细胞化学杂志 454 第 27 卷 midgut, while significantly lower enzymatic activity in the stomach corpus and hindgut. Conclusion The distribution of six enzymes in the digestive tract mucosa of Misgurnus anguillicaudatus indicated that its stomach was poorly differentiated, and both the stomach and intestine had absorption capacity. The stomach cardiac, stomach corpus and foregut were the main parts of protein digestion. The stomach cardiac, stomach pylorus, foregut and midgut were the main parts of lipid digestion. Keywords Misgurnus anguillicaudatus; digestive tract; enzyme histochemistry 泥鳅 (Misgurnus anguillicaudatus) 别称鱼鳅泥鳅鱼, 隶属鲤形目鳅科泥鳅属, 常栖息于湖泊池塘水田的淤泥表层或缓流水中, 繁殖速度快, 适应性强, 是一种杂食性小型鱼类, 主要摄食水生昆虫甲壳类幼螺等底栖无脊椎动物和各种藻类植物碎片等 [1,2] 泥鳅肉质鲜美, 具有很高的营养价值和补气养肾等药用价值, 其蛋白降解产物还具有抗氧化作用, 深受人们的喜爱, 有水中之参的美称 [2,3] 近年来, 随着泥鳅的市场需求量不断增加, 人们对泥鳅的人工养殖技术及其相关基础理论的研究也在不断深入开展刘孝华等 [2] 对泥鳅的生物学特性和人工养殖方法进行了描述和研究 ; 胡廷尖等通过组织学切片和显微观察研究了泥鳅消化道的形态特征和组织结构 ; 陈苏维等 [5] [4] 采用生物化学方法检测了泥鳅消化道不同部位淀粉酶蛋白酶和脂肪酶的活力然而, 泥鳅消化道黏膜中与消化吸收相关的重要酶, 如过氧化物酶 (POX) 三磷酸腺苷酶 (ATPase) 琥珀酸脱氢酶(SDH) 碱性磷酸酶 (ALP) 酸性磷酸酶(ACP) 和非特异性酯酶 (NSE) 等的活力尚未见研究报道本文采用酶组织化学染色对泥鳅消化道黏膜中该 6 种重要酶的分布及组织定位进行研究, 旨在增进对泥鳅消化生理功能的认识, 为其人工养殖提供基础资料材料和方法 1 实验材料鲜活人工养殖泥鳅 9 条, 长 15.4~18.6cm, 重 45.8~49.1g, 购自芜湖市黄山西路菜市场, 置于清水中暂养 2h 用钝器敲打其头部致晕, 快速解剖取出完整消化道, 在泥鳅消化道的食道胃贲门胃体胃幽门前肠中肠后肠等 7 个部位进行精确分离取样, 样品于 0.01mol/L 磷酸缓冲液 (PBS) 中漂洗干净后,OCT 包埋, 进行冷冻切片, 厚度为 8μm, 置于 -20 冰箱中备用 2 酶组织化学染色 6 种酶的组织化学染色方法及酶反应的底物见表 1, 药品试剂的配制及实验操作步骤参考谢毓玲等的方法进行表 1 6 种酶的组织化学染色方法和主要底物 Tab.1 Histochemical staining techniques and main substrates of the 6 enzymes 酶的种类 Types of enzymes 显色方法 Stain methods 过氧化物酶 (POX) DAB 法 DAB 主要底物 Main substrates 三磷酸腺苷酶 (ATPase) 钙 - 钴法 CaCl 2 硝酸钴琥珀酸脱氢酶 (SDH) 四唑盐法 NBT 琥珀酸钠盐碱性磷酸酶 (ALP) NBT/BCIP 法 NBT BCIP 酸性磷酸酶 (ACP) 铅法硝酸铅硫化铵非特异性酯酶 (NSE) 偶氮法 α- 乙酸萘酯六偶氮副品红 3 光密度测定与数据分析使用 Olympus BX61 型显微镜观察酶的组织化学染色结果并拍照利用 Image-Pro Plus 图像分析软件, 对酶组织化学染色的阳性部位进行光密度分析, 测出面积 (Area) 和累积光密度值 (IOD), 并计算出平均光密度 (MOD) 值表示酶活力大小在 SPSS 软件中, 采用单因素方差分析 (One-way ANOVN) 法, 分别对 6 种酶在消化道不同部位的活力进行两两比较, 得出不同酶在泥鳅消化道不同部位分布的差异显著性,P < 0.05 为差异显著

3 第 5 期曹新芳等. 泥鳅消化道过氧化物酶三磷酸腺苷酶琥珀酸脱氢酶酸性磷酸酶碱性磷酸酶及非特异性酯酶的分布与组织定位 455 结果在光镜下, 经组织化学染色后, 泥鳅消化道黏膜 6 种酶均呈现出明显的染色反应对组织化学染色结果进行光密度测定和统计学分析, 得出 6 种酶在泥鳅消化道不同部位的活力分布 ( 表 2) 表 2 泥鳅消化道黏膜 6 种重要酶的分布 Tab. 2 Distribution of the 6 essential enzymes in the digestive mucosa of Misgurnus anguillicaudatus POX ATPase SDH ALP ACP NSE 食道 Esophagus 胃贲门 Stomach cardiac 胃体 Stomach corpus 胃幽门 Stomach pylorus 前肠 Foregut 中肠 Midgut 后肠 Hindgut 0.46±0.27 a 0.12±0.06 b 0.12±0.01 b 0.13±0.26 b 0.34±0.27 a 0.20±0.06 a 0.19±0.07 b 0.46±0.28 a 0.49±0.38 a 0.38±0.20 a 0.51±0.28 a 0.19±0.02 a 0.29±0.18 b 0.44±0.31 a 0.30±0.18 a 0.36±0.24 a 0.48±0.29 a 0.16±0.03 b 0.27±0.14 b 0.48±0.33 a 0.45±0.28 a 0.51±0.37 a 0.31±0.16 b 0.23±0.08 a 0.24±0.11 b 0.49±0.33 a 0.49±0.38 a 0.43±0.30 a 0.40±0.26 a 0.19±0.06 a 0.24±0.12 b 0.47±0.36 a 0.48±0.34 a 0.29±0.14 a 0.34±0.18 a 0.21±0.07 a 0.30±0.17 b 0.32±0.20 a 0.50±0.38 a 0.45±0.16 a 0.34±0.16 a 0.17±0.04 b 不同上标 (a, b) 表示同一种酶在消化道不同部位的酶活力差异显著 ( 单因素方差分析,0.01<P<0.05) Different superscripts (a, b) mean significant differences of the enzymatic activities of the same enzyme among the different parts of digestive tract (one-way ANOVA, 0.01<P<0.05) 过氧化物酶 :POX 组织化学染色阳性部位呈棕 ( 图 C1); 在前肠中肠和后肠中集中分布于黏膜褐色, 颗粒状分布 POX 在食道中酶活性最高, 在上皮细胞顶部, 部分上皮细胞基部亦有少量分布 ( 图消化道的其余部位酶活性显著较低 ( 表 2) POX 在 C2) 食道中主要分布于黏膜上皮细胞中 ( 图 A1); 在胃碱性磷酸酶 :ALP 组织化学染色阳性部位呈深贲门胃体和胃幽门中主要分布于黏膜上皮细胞基蓝色 ALP 在胃贲门胃体胃幽门前肠中肠部 ; 在肠道中主要分布于黏膜上皮细胞基部, 固有和后肠中酶活性较高, 在食道中酶活性显著较低 ( 表层也有少量零星分布 ( 图 A2) 2) ALP 在食道中主要分布于黏膜上皮细胞顶部 ; 三磷酸腺苷酶 :ATPase 组织化学染色阳性部位在胃贲门胃体和胃幽门中集中分布于黏膜上皮细呈棕黑色 ATPase 在胃贲门胃体胃幽门前肠胞的顶部 ( 图 D1); 在前肠中肠和后肠中集中分中肠和后肠中酶活性较高, 在食道中酶活性显著较布于黏膜上皮细胞的纹状缘 ( 图 D2) 低 ( 表 2) ATPase 在食道中主要分布于黏膜上皮酸性磷酸酶 :ACP 组织化学染色阳性部位呈棕细胞顶部 ; 在胃贲门胃体和胃幽门中集中分布于黄色 ACP 在食道胃贲门胃体前肠中肠和黏膜上皮细胞顶部 ( 图 B1); 在前肠中肠和后肠后肠中酶活性较高, 在胃幽门中酶活性显著较低 ( 表中主要分布于黏膜上皮细胞的纹状缘, 上皮细胞的 2) ACP 在食道中主要分布于黏膜上皮细胞中 ; 在基部亦可见少量分布 ( 图 B2) 胃贲门胃体和胃幽门中主要分布于黏膜上皮细胞琥珀酸脱氢酶 :SDH 组织化学染色阳性部位呈中, 固有层中亦有少量分布 ( 图 E1); 在前肠中蓝紫色 SDH 在胃贲门胃体胃幽门前肠肠和后肠中主要分布于黏膜上皮细胞顶部, 固有层中肠和后肠中酶活性较高, 在食道中酶活性显著降亦有少量分布 ( 图 E2) 低 ( 表 2) SDH 在食道中主要分布于黏膜上皮细非特异性酯酶 :NSE 组织化学染色阳性部位呈胞顶部 ; 在胃贲门胃体和胃幽门中主要分于胃小砖红色 NSE 在食道胃贲门胃幽门前肠中凹黏膜上皮细胞顶部, 上皮细胞基部亦有少量分布肠中酶活性较高, 在胃体和后肠中酶活性显著降低

456 中国组织化学与细胞化学杂志第 27 卷图 1 泥鳅消化道黏膜 6 种酶的组织化学定位 A POX 在食道 A1 和后肠 A2 的分布 B ATPase 在胃体 B1 和后肠 B2 的分布 C SDH 在胃体 C1 和中肠 C2 的分布 D ALP 在胃体 D1 和前肠 D2 的分布 E ACP 在胃幽门 E1 和中肠 E2 的分布 F NSE 在胃幽门 F1

4 456 中国组织化学与细胞化学杂志第 27 卷图 1 泥鳅消化道黏膜 6 种酶的组织化学定位 A POX 在食道 A1 和后肠 A2 的分布 B ATPase 在胃体 B1 和后肠 B2 的分布 C SDH 在胃体 C1 和中肠 C2 的分布 D ALP 在胃体 D1 和前肠 D2 的分布 E ACP 在胃幽门 E1 和中肠 E2 的分布 F NSE 在胃幽门 F1 和后肠 F2 的分布 SB 纹状缘 ME 黏膜上皮 LP 固有层 GP 胃小凹比例尺 50μm Fig. 1 Histochemical localization of 6 enzymes in digestive tract mucosa of Misgurnus anguillicaudatus. A, distribution of POX in the esophagus (A1) and hindgut (A2); B, distribution of ATPase in the stomach corpus (B1) and hindgut (B2); C, distribution of SDH in the stomach corpus (C1) and midgut (C2); D, distribution of ALP in the stomach corpus (D1) and foregut (D2); E, distribution of ACP in the stomach pylorus (E1) and midgut (E2); F, distribution of NSE in the stomach pylorus (F1) and hindgut (F2); SB, striated border; ME, mucosal epithelia; LP, lamina propria; GP, gastric pit; scale bar, 50μm 表 2 NSE 在食道中主要分布于黏膜上皮细胞组成泥鳅的胃不十分明显由肠管膨大形成呈的顶部和基部在胃贲门胃体和胃幽门中主要分直管状无弯曲属 I 型胃 [4] 本研究显示泥布于黏膜上皮细胞顶部和基底部固有层亦有少量鳅胃没有明显的胃腺 POX ATPase SDH 和 ALP 分布图 F1 在前肠中肠和后肠中主要分布于的酶活性在胃和肠道之间没有显著差异性进一步黏膜上皮细胞的纹状缘上皮细胞基部和固有层中表明泥鳅的胃分化程度较低其黏膜的组织结构亦有少量分布图 F2 和酶组成与肠黏膜有较高的相似性讨论泥鳅的消化道由食道胃前肠中肠和后肠 POX 是广泛存在于微生物动植物体内的一种氧化还原酶具有消除细胞内有毒代谢产物如过氧化氢醛类酚类胺类等物质的作用 [7, 8] 本研究

5 第 5 期曹新芳等. 泥鳅消化道过氧化物酶三磷酸腺苷酶琥珀酸脱氢酶酸性磷酸酶碱性磷酸酶及非特异性酯酶的分布与组织定位 457 显示,POX 主要分布于泥鳅消化道的食道, 在胃和肠道中分布较少与乌鳢 (Ophiocephalus argus) 消化道中 POX 主要分布于胃贲门和胃体, 食道中分布较少, 存在明显差异 ; 与鳜鱼 (Siniperca chuatsi) [9] 消化道中 POX 在肠道中分布较少相似, 但鳜鱼胃幽门中 POX 分布最多, 食道中分布较少泥鳅食道中较高的 POX 酶活性有利于清除食道中因频繁吞咽活动产生的较多有毒代谢废物 POX 发挥催化作用释放的氧自由基还具有杀灭病原微生物的作用 [10], 因此,POX 在泥鳅食道中分布较多还有利于防止外来病原微生物侵入机体, 可能是机体的一种保护机制 ATPase 是普遍存在于细胞膜和线粒体溶酶体等细胞器膜上的一类水解酶, 能够水解 ATP 并释放能量, 参与营养物质的吸收和胞内物质的转运 [11] 本研究显示,ATPase 主要分布于泥鳅消化道的胃贲门胃体胃幽门前肠中肠和后肠, 在食道中酶活性显著较低与乌鳢消化道中 ATPase 的分布明显不同, 主要分布于乌鳢胃体, 其次为胃幽门和胃贲门, 在肠道中分布相对较少 ; 鳜鱼 [9] 消化道中 ATPase 主要分布于食道胃贲门胃体胃幽门前肠和后肠, 在中肠分布最少, 与泥鳅消化道 ATPase 的分布亦存在差异乌鳢和鳜鱼胃中 ATPase 活性较高主要是由于其胃腺发达, ATPase 集中分布于胃腺, 黏膜上皮细胞中分布较少, 主要为胃蛋白酶和胃酸的分泌提供能量 ; 泥鳅胃黏膜无明显的胃腺,ATPase 集中分布于黏膜上皮细胞顶部, 与肠道中 ATPase 主要分布于上皮细胞的纹状缘相似, 表明泥鳅的胃上皮细胞可能具有较强的吸收功能, 泥鳅的胃和肠道均是营养物质的吸收部位 SDH 广泛存在于线粒体内膜, 是线粒体的一种标志酶, 参与并催化三羧酸循环中琥珀酸还原为延胡索酸, 酶活性可用于判断三羧酸循环的强度 [12] 本研究发现,SDH 在泥鳅的胃和肠道各段均分布较多, 在食道中分布最少与乌鳢和鳜鱼 [9] 消化道中 SDH 主要分布于胃贲门和胃体, 在肠道分布较少存在显著差异, 但与两者食道中 SDH 分布最少相似乌鳢和鳜鱼胃腺发达,SDH 集中分布于胃腺, 为胃腺的分泌活动提供足够的能量泥鳅没有明显的胃腺, 胃中 SDH 集中分布于黏膜上皮细胞顶部, 与肠道中 SDH 的分布相一致, 可为胃和肠道上皮细胞吸收营养物质提供充足的 ATP 能量 ALP 主要存在于细胞膜中, 参与营养物质如脂质糖类钙和无机磷酸盐的吸收, 可根据其分布来判断鱼类消化道中营养物质吸收的主要部位 [13,14] 本研究显示,ALP 在泥鳅的胃和肠道各部位活性均较高, 在食道中酶活性显著较低与乌鳢消化道中 ALP 主要分布于前肠和中肠, 胃贲门胃体和胃幽门分布较少不同 ; 与许氏平鲉 (Sebastes schlegelii ) [15] 消化道中 ALP 主要分布于中肠, 前肠和后肠分布相对较少, 食道胃贲门和胃幽门未检测到酶活性存在显著差异 ; 与半滑舌鳎 (Cynoglossus semilaevis) [8] 消化道中 ALP 主要分布于前肠, 其次为后肠, 胃中分布最少亦明显不同泥鳅消化道中 ALP 主要定位于胃黏膜上皮细胞顶部和肠上皮细胞的纹状缘, 进一步表明泥鳅的胃和肠道都是营养物质的吸收部位 ACP 是存在于溶酶体的一种标志酶, 主要参与细胞内蛋白质的消化和吸收通过胞饮作用直接吸收蛋白颗粒然后进行细胞内消化被认为是硬骨鱼中蛋白质消化的另一种途径 [16] 本研究显示,ACP 在泥鳅的食道胃贲门胃体前肠中肠和后肠中酶活性较高, 胃幽门中酶活性显著较低与褐菖鲉 (Sebastiscus marmoratus) [17] 消化道中 ACP 主要分布于中肠, 其次为食道胃体前肠和后肠, 在胃贲 [15] 门和胃幽门分布最少相似 ; 与许氏平鲉消化道中 ACP 在后肠和中肠中分布较多, 前肠和胃贲门中相对较少, 食道和胃幽门中分布最少存在不同之处 ; 与乌鳢消化道中 ACP 在中肠和后肠分布最高, 其次为胃幽门和前肠, 在胃贲门胃体和食道分布最少则明显不同由此可见,ACP 在鱼类消化道各段的分布具有一定的物种特异性泥鳅消化道 ACP 的分布表明其胃贲门胃体和前肠具有较强的蛋白质吸收和细胞内消化功能 NSE 参与包括鱼类在内的大多数脊椎动物中脂肪酸甘油酯的水解, 与脂质的消化和吸收有关由于鱼类的能源物质主要是脂质而不是碳水化合物和蛋白质, 因此,NSE 对鱼类获取能源物质尤为重要 [13,18] 本研究显示,NSE 在泥鳅的食道胃贲门胃幽门前肠中肠中活性均较高, 在胃体和后肠中分布较少与项带重牙鲷 (Diplodus vulgaris) [19] 消化道中 NSE 主要分布于前肠和中肠, 在后肠分布最少相似 ; 但与褐菖鲉 [17] 消化道中 NSE 在胃幽门中分布最高, 其次为胃贲门胃体, 在食道和肠道

6 中国组织化学与细胞化学杂志 458 第 27 卷中分布最少存在显著差异 ; 与红娘鱼 (Lepidotrigla Cavillone) [20] 消化道中 NSE 在后肠分布最多, 其次为前肠, 在幽门盲囊和中肠分布最少亦明显不同泥鳅消化道中 NSE 分布较为广泛, 食道胃贲门胃幽门和前肠中检测到较高的酶活性, 表明泥鳅消化道的前段就有较强的脂质消化功能, 这与鱼类以脂质为主要能源物质相适应综上所述, 泥鳅消化道黏膜 6 种酶的分布同其他鱼类相比, 显示出明显的物种特异性, 主要表现为泥鳅胃分化程度低, 酶的分布和定位与肠道较为相似本研究表明, 泥鳅的胃和肠都有较强的吸收功能 ; 胃贲门胃体和前肠具有较强的蛋白质吸收和细胞内消化功能 ; 胃贲门胃幽门前肠和中肠具有较强的脂质消化能力参考文献 [1] Park J Y, Kim I S, Kim SY. Structure and mucous histochemistry of the intestinal respiratory tract of the mud loach, Misgurnus anguillicaudatus (Cantor). J Appl Ichthyol, 2010, 19(4): [2] 刘孝华. 泥鳅的生物学特性及养殖技术. 湖北农业科学, 2008,47(1): [3] You L, Zhao M, Joem R, et al. Changes in the antioxidant activity of loach (Misgurnus anguillicaudatus) protein hydrolysates during a simulated gastrointestinal digestion. Food Chem, 2010, 120(3): [4] 胡廷尖, 刘士力, 练青平, 等. 泥鳅消化系统的组织学研究. 长江大学学报 ( 自科版 ),2011,8(9): [5] 陈苏维, 吉红, 朱文东, 等. 泥鳅消化道指数及消化酶活性分布的研究. 水产科学,2009,28(5): 谢毓玲, 王锦乙, 袁保勤, 等. 乌鳢消化道黏膜 6 种重要酶的组织化学定位. 中国组织化学与细胞化学杂志, 2016,25(5): [7] Fang J, Chen K, Cui HM, et al. Morphological and cytochemical studies of peripheral blood cells of Schizothorax prenanti. Anat Histol Embryol, 2014, 43(5): [8] Wang YZ, Sun JF, Lv AJ, et al. Histochemical distribution of four types of enzymes and mucous cells in the gastrointestinal tract of reared half smooth tongue sole Cynoglossus semilaevis. J Fish Biol, 2018, 92(1): [9] 彭迁迁, 权梦雪, 罗莹, 等. 鳜鱼消化道黏液细胞和 6 种酶的组织化学定位. 激光生物学报,2016,25(2): [10] 王一泽, 孙敬锋, 刘军锋, 等. 养殖半滑舌鳎肝胰中肾鳃头肾脾和心中酸性磷酸酶碱性磷酸酶和过氧化物酶的组织化学定位. 中国组织化学与细胞化学杂志,2017,26(3): [11] Liquori GE, Zizza S, Mastrodonato M, et al. Pepsinogen and H,K-ATPase mediate acid secretion in gastric glands of Triturus carnifex (Amphibia, Caudata). Acta Histochem, 2005, 107(2): [12] Rutter J, Winge DR, Schiffman JD. Succinate dehydrogenase - Assembly, regulation and role in human disease. Mitochondrion, 2010, 10(4): [13] Zvonimir Kozariæ, Srebrenka Nejedli, Zdravko Petrinec. Histochemical distribution of digestive enzymes in hake, Merluccius merluccius L Vet Arhiv, 2004, 74(4): 299. [14] Tengjaroenkul B, Smith BJ, Caceci T, et al. Distribution of intestinal enzyme activities along the intestinal tract of cultured Nile tilapia, Oreochromis niloticus L.. Aquaculture, 2000, 182(3-4): [15] 冯晓燕, 郑家声, 王梅林. 许氏平鲉消化道的组织化学研究. 中国海洋大学学报 ( 自然科学版 ),2003,33(3): [16] Mir IH, Channa A. Histochemical distribution of lipase and acid phosphatase in the intestinal tract of the snow trout, Schizothorax curvifrons Heckel.. J Biol Sci, 2010, 10(7): [17] 石戈, 王健鑫, 刘雪珠, 等. 褐菖鮋消化道的组织学和组织化学. 水产学报,2007,31(3): [18] Kužir S, Gjurčević E, Nejedli S, et al. Morphological and histochemical study of intestine in wild and reared European eel (Anguilla anguilla L.). Fish Physiol Biochem, 2012, 38(3): [17] Tlak IG, Nejedli S, Kozarić Z. Histochemical distribution of digestive enzymes in the intestine of the common two-banded seabream, Diplodus vulgaris, Geoffroy St-Hilaire Anat Histol Embryol, 2013, 42(3): [18] Kozarić Z, Petrinec Z, Kužir S, et al. Histochemical analyses of digestive enzymes in the intestine of adult large-scaled gurnard ( Lepidotrigla Cavillone, Lacepède, 1801). Anat Histol Embryol, 2011, 40(4):

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