赛默飞世尔科技 (Thermo Fisher Scientific) 赛默飞世尔科技是科学服务领域的世界领导者 公司年销售额 170 亿美元, 在 50 个国家拥有约 名员工 我们的使命是帮助客户使世界更健康 更清洁 更安全 我们的产品和服务帮助客户加速生命科学领域的研究 解决在分析领域

Transcription

1 体外诊断常用试剂与定制方案

2 赛默飞世尔科技 (Thermo Fisher Scientific) 赛默飞世尔科技是科学服务领域的世界领导者 公司年销售额 170 亿美元, 在 50 个国家拥有约 名员工 我们的使命是帮助客户使世界更健康 更清洁 更安全 我们的产品和服务帮助客户加速生命科学领域的研究 解决在分析领域所遇到的复杂问题与挑战, 促进医疗诊断发展 提高实验室生产力 借助于首要品牌 Thermo Scientific Applied Biosystems Invitrogen Fisher Scientific 和 Unity Lab Services, 我们将创新技术 便捷采购方案和实验室运营管理的整体解决方案相结合, 为客户 股东和员工创造价值 赛默飞世尔科技进入中国发展已有 30 多年, 在中国的总部设于上海, 并在北京 广州 香港 台湾 成都 沈阳 西安 南京 武汉 昆明等地设立了分公司, 员工人数超过 3700 名 我们的产品主要包括分析仪器 实验室设备 试剂 耗材和软件等, 提供实验室综合解决方案, 为各行各业的客户服务 为了满足中国市场的需求, 现有 8 家工厂分别在上海 北京和苏州运营 我们在全国共设立了 6 个应用开发中心, 将世界级的前沿技术和产品带给国内客户, 并提供应用开发与培训等多项服务 ; 位于上海的中国创新中心结合国内市场的需求和国外先进技术, 研发适合中国的技术和产品 ; 我们拥有遍布全国的维修服务网点和特别成立的中国技术培训团队, 在全国有超过 2000 名专业人员直接为客户提供服务 我们致力于帮助客户使世界更健康 更清洁 更安全

3 1 分子诊断...2 分子诊断 基于PCR实验流程...2 样本管理...3 样本制备...4 反应设置...13 扩增分析...39 分子诊断 基于二代测序实验流程...42 样品提取...43 文库制备 免疫诊断...58 表面捕获...59 抗体和检测探针...69 偶联...80 非特异性结合...82 检测底物 分子克隆与抗体生产...94 抗原制备...95 免疫动物 抗体纯化 抗体标记 抗体验证 了解更多关于赛默飞世尔科技产品的信息:

4 Your format. Our standards. Large volume. Consistent quality. 大包装定制服务 经过认证的洁净空间生产设施 完整的质量管理体系和全面的研发经验使我们具备为制药 分子诊断和生命科学研究领域提供最 高品质产品的能力 赛默飞世尔科技与研发和生产领域的合作伙伴紧密合作, 通过专业的支持与服务提供增值定制解决方案 值得您信赖的卓越品质 我们的产品都在经过认证的洁净空间内制造, 而这些标准都是 GMP 生产的前提条件 产品质量控制遵照 ISO9001 质量管理体系, 确保批间重复性 通过采用洁净空间和 ISO 管理系统, 确保所有产品的稳定性, 防止产品污染 分子生物学产品定制服务 : DNA/RNA Ladders dntps NTPs 及修饰的核苷酸 DNA/RNA 聚合酶 DNA/RNA 修饰酶 限制性内切酶 核酸纯化产品 Dynabeads 磁珠核酸纯化产品 技术研发和定制生产 经过 ISO 9001 认证 定制 QC 检测 验证和文档服务 为科研和诊断解决方案提供定制配方 生物质的规模开发 实验和中试发酵及生产 根据要求进行小瓶分装 标记和包装 完整的产品和工艺文档蛋白研究产品定制服务 : 蛋白酶和磷酸酶抑制剂 亲和纯化和抗体纯化介质 免疫检测底物 交联剂和生物素标记试剂 荧光染料 蛋白 / 抗体标记服务 包被平板 Dynabeads 磁珠细胞及蛋白纯化产品

5 分子诊断 分子诊断是当代医学发展的重要前沿领域之一, 在传染病和肿瘤早期诊断 疾病控制 输血安全食品卫生和检验检疫方面均有较大用途 常规技术包括 : 聚合酶链式反应 (PCR),DNA 测序, 荧光原位杂交技术 (FISH),DNA 印迹技术, 单核苷酸多态性 (SNP), 连接酶链反应 (LCR), 基因芯片技术 其中,PCR 产品占据目前分子诊断的主要市场 赛默飞世尔科技作为全球科学服务领域的领先者, 在分子诊断领域提供完整的解决方案 :PCR 和实时定量 PCR 仪 PCR 试剂以及 PCR 耗材 PCR 反应试剂在特异性 灵敏度 保真度等方面有多种选择, 满足不同的研发 生产需 求 ;PCR 反应管 反应板也具有多种形状 规格 颜色, 能与市场上主流的仪器相匹配

6 分子诊断 基于 PCR 实验流程 分子诊断 1 样本管理 2 样本制备 3 反应设置 4 扩增分析 5 数据处理 实验前准备 : 样本收集及保存 样本识别 样本检测 样本登记 (LIMS) 样本制备 : 核酸分离及纯化 核酸定量 核酸修饰 反应设置 : 反转录反应 PCR 反应 PCR&qPCR 耗材 扩增分析 : 执行扩增分析 获得原始数据 填写报告 (LIMS) 将数据转变为临床信息 : 软件分析 专家分析临床分析结果 : 生成报告 分析结果存储 (LIMS) 原始数据存储 样本管理 - 样本收集与保存...3 Tempus 血液 RNA 系统... 3 RNAlater...3 RNaseZap...3 样本制备 - 核酸分离及纯化...4 Dynabeads 磁珠纯化...4 Trizol 试剂...5 DNA 纯化...6 RNA 纯化...6 GeneJET 核酸纯化系列 核酸定量...8 Qubit 3 核酸定量 核酸修饰...9 脱氧核糖核酸酶...9 核糖核酸酶...11 反应设置 - 反转录反应...13 SuperScript 系列反转录试剂...13 RevertAid 和 Maxima 反转录试剂 PCR 反应...16 常规 PCR...16 热启动 PCR...17 高保真 PCR...19 直接 PCR...20 多重 PCR...20 核苷酸 PCR&qPCR 耗材...29 Thermo Scientific PCR 耗材选择指南...29 Applied Biosystems PCR 耗材选择指南...35 扩增分析 - 执行扩增分析...39 扩增仪器...39 电泳产品

7 1 样本管理 样本收集及保存 Tempus 血液 RNA 系统 Tempus 血液 RNA 系统包括 Tempus 血液 RNA 收集管和 Tempus Spin RNA 提取试剂盒 Tempus 收集管中包含 6 ml 的 Applied Biosystems 稳定试剂, 可有效稳定 3 ml 血液样本中的 RNA 同时裂解血细胞 当血液抽取至收集管并与试剂充分混匀后, 血细胞立即开始裂解 稳定试剂可以使血液中的 RNA 酶失活并选择性地使 RNA 沉淀, 而基因组 DNA (gdna) 和蛋白质仍溶解在溶液中 采集的血液经过 Tempus 收集管处理后, 您可以使用 Tempus Spin RNA 提取试剂盒纯化得到高质量的 RNA, 并且无需样本预处理, 如白细胞分离或选择性的红细胞 (RBC) 裂解 分子诊断 产品规格货号 Tempus Blood RNA Tubes 50 tubes Tempus Spin RNA Isolation Kit 50 tubes Tempus 12-port RNA Isolation Kit (foruse on 6100 Nucleic Acid PrepStation) 24 preps RNAlater RNAlater 是一种液态, 无毒的组织贮藏试剂, 能够迅速渗透组织来稳定和保护细胞 RNA 使用 RNAlater 您无需迅速处理组织样品或用液态氮冻结样品以备后续处理 组织切割后浸没入 RNAlater 中贮藏, 不会损害后续 RNA 分离步骤所获得的 RNA 质量和数量 只需很方便地将样品 ( 组织 细胞 土壤 昆虫 植物等等 ) 浸入 5-10 倍体积的 RNAlater 液中保存, 就可保护样品内 RNA 免于内源 RNase 降解 大多数组织经 RNAlater 处理后可以在室温或低温保存很长时间, 在 -20 /-80 甚至无限长 产品规格货号 RNAlater 550 ml AM7021 RNaseZap Ambion RNaseZap 溶液是三种不同的化学物质结合的产 物, 一旦接触即可迅速彻底地灭活 RNases 只需在待处理 的表面进行喷洒, 再使用不含核酸酶的水彻底清洗 另有 RNaseZap 擦拭布, 浸有 RNaseZap 溶液的湿巾可供选择 产品 规格 货号 RNaseZap 250 ml AM9780 RNaseZap Wipes 100 wipes AM9786 3

8 2 样本制备 分子诊断 核酸分离及纯化 Dynabeads 磁珠纯化 序列特异性的 RNA/DNA 纯化 Invitrogen 链酶亲和素偶联的 Dynabeads 磁珠是一种稳定且用途广泛的工具, 可用于靶向并捕获特定的 RNA 或 DNA 序列, 然后直接将其从溶液中提取出来 大小单一 超顺磁性的 Dynabeads 磁珠是一种高效的固相介质, 是固相硝酸纤维素的替代物, 可以为您带来出众的产品质量和数据的一致性 极佳的近液相反应动力学可提高实验的反应速度 磁处理固有的简便性让下游操作和缓冲液更换变得极为简单, 只需利用磁性把磁珠吸附浓缩到管壁上, 然后弃去上清液即可 这些磁珠适用于几乎所有的样本类型, 包括大多数体液 植物 动物和微生物的裂解粗产物及纯化的总 RNA 或 DNA 由于这些 Dynabeads 磁珠只与特异性靶向 RNA 或 DNA 分子结合, 因此一般无须进行上游总 RNA 或 DNA 纯化步骤 适用于 mrna gdna 和生物素化分子的产品 操作流程可轻松放大, 以满足特定的样本量要求 磁性分离有直接和间接方法 在直接捕获过程中, 靶点特异性的配体与 Dynabeads 磁珠结合, 然后加入样本中 在某些 应用中, 还可实现磁珠的重复使用, 从而降低成本 在间接捕获过程中, 配体首先与靶点结合, 然后加入 Dynabeads 磁 珠 当靶点浓度较低 特异的亲和力较弱或结合动力学较慢时, 此方法具有一定的优势 产品 规格 货号 DynaMag -15 magnet each 12301D DynaMag -50 magnet each 12302D DynaMag -Spin magnet each 12320D DynaMag -2 magnet each 12321D Dynabeads MyOne Streptavidin T1 10 ml Dynabeads MyOne Streptavidin C1 10 ml Dynabeads MyOne Silane 5 ml 37002D Dynabeads M-270 Streptavidin 10 ml Dynabeads M-280 Streptavidin 10 ml 11206D Dynabeads Oligo(dT)25 5 ml Dynabeads mrna Purification Kit 2 ml Dynabeads mrna DIRECT Purification Kit 10 ml Dynabeads Streptavidin Trial Kit 4 x 1 ml 65801D Dynabeads SILANE Viral NA Kit 96 preps 37011D MagMAX Cell-Free DNA Isolation Kit 1 kit A29319 MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra Kit 1 kit A

9 TRIzol 试剂 TRIzol 试剂是即用型酚和异硫氰酸胍单相溶液, 可用于提取总 RNA, 且不含有 DNA 和蛋白质 提取采用 Chomczynski 和 Sacchi 开发的经过改进的一步法 RNA 提取方法,1 小时内即可完成 TRIzol 试剂被数千篇文献引证, 是利用各种起始材料制备优质的完整 RNA 所需的最值得信赖的试剂 最高效且可靠的 RNA 纯化 无与伦比的裂解能力 适用于组织 细胞 血清 病毒和细菌的灵活配方 分子诊断 采用该技术制备人 动物 植物或细菌来源的少量组织 ( mg) 和细胞 ( ) 以及大量组织 ( 1 g) 和细胞 (>10 7 ), 均可 获得极佳的性能 TRIzol 试剂方法十分简单, 可同时处理大量样本, 整个过程可在一小时内完成 采用 TRIzol 试剂提取 的总 RNA 不会被蛋白质和 DNA 污染 产品 部件代号和试剂盒规格 主要样本类型 实验方案 TRIzol ml 组织和细胞 1 ml 试剂用于 100 mg 组织或 ml 10 7 个细胞 TRIzol LS ml ml 液体样本, 如血清和病毒制备液 0.75 ml 试剂用于 5 x 10 6 个细胞 TRIzol Plus RNA 纯化系统将 TRIzol 试剂的强大裂解能力与 PureLink RNA 小量提取试剂盒方便省时的硅胶膜离心柱形式集于一身 以小量提取方式提供无与伦比的 1,000 μg 结合容量 无需乙醇沉淀 - 无沉淀, 只需简单洗脱 业内推荐的基因表达分析实验方案即便是难以处理的样本,TRIzol Plus RNA 纯化系统亦可获得高 RNA 完整性和产量, 包括纤维或脂肪组织和植物 - 仅需一个小时 纯化的总 RNA 可用于敏感的基因表达研究, 如芯片分析或定量 RT-PCR 产品规格货号 TRIzol RNA 纯化系统 50 次

10 DNA 纯化 PureLink 试剂盒是一个核酸纯化系统家族, 设计用于满足各种特定核酸类型 样本来源 体积 通量水平以及下游应用 的挑战 这些试剂盒基于二氧化硅膜技术或离子交换树脂技术 分子诊断 产品 规格 货号 PureLink HiPure Plasmid Miniprep Kit 100 preps K PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit 250 preps K PureLink Pro Quick 96 Plasmid Purification Kit 4 x 96 rxns K211004A PureLink HiPure Plasmid Midiprep Kit 50 preps K PureLink HiPure Plasmid Filter Midiprep Kit 25 preps K PureLink HiPure Plasmid Maxiprep Kit 25 preps K PureLink HiPure Plasmid Filter Maxiprep Kit 25 preps K PureLink HiPure Plasmid FP (Filter and Precipitator) Maxiprep Kit 25 preps K PureLink HiPure Plasmid Megaprep Kit 4 preps K PureLink HiPure Plasmid Gigaprep Kit 2 preps K PureLink Genomic DNA Mini Kit 250 preps K PureLink Pro 96 Genomic DNA Mini Kit 4 x 96 preps K182104A PureLink Pro 96 Viral RNA/DNA Purification Kit 4 plates(4 x 96 rxns) A PureLink Pro 96 Viral RNA/DNA Mini Kit 50 preps PureLink Genomic Plant DNA Mini Kit 50 preps K DNAzol Reagent 100 ml RNA 纯化 近 30 年来, 我们在 RNA 技术方面不断创新, 一直处于领先地位, 我们将为您提供可靠的 RNA 试剂盒 值得信赖的 RNA 工具和经验丰富的技术支持 RNA 分离是您研究中的关键步骤 相信您可以正确起步 从任意样本类型中分离, 适合各种应用领域 获取高质量的完整 RNA 即便是较小的样本量, 亦可获得高产量 产品 规格 货号 应用 PureLink RNA Mini Kit 50 preps A 总 RNA 纯化 PureLink Viral RNA/DNA Mini Kit 50 preps 病毒 RNA 纯化 RiboPure RNA Purification Kit, blood 40 preps AM1928 血液 RNA 纯化 Tempus Spin RNA Isolation Kit 50 preps 血液 RNA 纯化 Tempus Blood RNA Tube 50 tubes 血液 RNA 纯化 RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation Kit for FFPE 40 preps AM1975 石蜡包埋 RNA 纯化 mirvana mirna Isolation Kit, without phenol 40 preps AM1561 mirna 纯化 Dynabeads mrna Purification Kit (for mrna purification from total RNA preps) 2 ml mrna 纯化 Dynabeads mrna DIRECT Purification Kit 10 ml mrna 纯化 PARIS Kit 50 preps AM1921 蛋白 /RNA 共抽提 Power SYBR Green Cells-to-CT Kit 40 preps CELLS-TO-CT TaqMan Gene Expression Cells-to-CT Kit 40 preps CELLS-TO-CT TaqMan Gene Expression Cells-to-CT Kit 100 preps AM1728 CELLS-TO-CT Single Cell-to-CT qrt-pcr Kit 50 preps CELLS-TO-CT 6

11 GeneJET 核酸纯化系列 Thermo Scientific TM GeneJET 产品线包括所有基础的核酸纯化工具, 能够支持并加速你的实验流程 拥有 30 余年的分子生物学产品研发生产经验, 我们意识到对简单可靠的 DNA 和 RNA 样本制备工具需求的渐长 GeneJET DNA 和 RNA 纯化试剂盒满足直接用于下游应用的高纯度核酸的需求并针对常见和特殊的样本种类提供详细的操作方法 了解更多, 请登录 thermofisher.com/genejet 分子诊断 产品 规格 货号 GeneJET RNA Purification Kit 50 preps K preps K0732 GeneJET Plant RNA Purification Kit 50 preps K preps K0802 GeneJET Viral DNA/RNA Purification Kit 50 preps K0821 RapidOut DNA Removal Kit 50 rxns K2981 GeneJET Plasmid Miniprep Kit 50 preps K preps K0503 GeneJET Genomic DNA Purification Kit 50 preps K preps K0722 GeneJET Gel Extraction Kit 50 preps K preps K0692 GeneJET PCR Purification Kit 50 preps K preps K0702 核酸纯化 质粒 DNA 总 RNA 基因组 DNA 病毒 DNA 和 RNA DNA 片段 小提 中提 大提 细胞 & 组织 RNA 全血 RNA 植物 RNA 细胞 & 组织 DNA 全血 DNA 植物 DNA 血清 & 血浆 产物 PCR 凝胶 去内毒素大提 7

12 核酸定量 Qubit 3 荧光定量 分子诊断 Qubit TM 3 定量平台为 DNA RNA 和蛋白的定量提供了一种创新的方法 与紫外吸收检测法相比, 它具有更高的准确度和灵敏度, 成本却大为降低 定量准确度的提高将为任何分子生物学工作带来更为优质的结果 Qubit 3 定量平台采用可对 DNA RNA 和蛋白进行特异性定量的荧光染料, 并且不受其它生物分子或混杂核苷酸的干扰, 因此定量结果更加准确, 灵敏度也更高 选择性 - Qubit 3 定量平台能够进行选择性定量, 它可区 分 DNA RNA 蛋白和游离核苷酸, 因此与不具备区分能 力的紫外吸收检测方法相比, 结果更为准确 灵敏性 - Qubit 3 定量平台的灵敏度远远高于紫外吸收检 测方法, 能够检测一些低丰度样品 简单直观 - 新一代 Qubit 3 荧光计同样具有您所期待的高 准确性, 而且速度更快, 使用更为方便 仪器 规格 货号 Qubit 3 荧光计 1 台 Q33216 Qubit 3 定量起始套装, 包括 : 1 套 Q 台 Qubit 3 荧光计 Qubit dsdna BR 分析试剂盒 (100 次 ) Qubit RNA HS 分析试剂盒 (100 次 ) 1 套 Qubit 分析管 (500 支 ) Qubit dsdna HS 分析试剂盒 (100 次 ) Qubit 蛋白质分析试剂盒 (100 次 ) Qubit 3 NGS 起始套装, 包括 : 1 套 Q 台 Qubit 3 荧光计 Qubit dsdna HS 分析试剂盒 (500 次 ) 1 套 Qubit 分析管 (500 支 ) 相关产品 包装 规格 货号 Qubit dsdna BR 分析试剂盒 100 次分析,2-1,000 ng 1 套 Q 次分析,2-1,000 ng 1 套 Q32853 Qubit dsdna HS 分析试剂盒 100 次分析, ng 1 套 Q 次分析, ng 1 套 Q32854 Qubit ssdna 分析试剂盒 100 次分析,1-200 ng 1 套 Q10212 Qubit RNA HS 分析试剂盒 100 次分析,5-100 ng 1 套 Q 次分析,5-100 ng 1 套 Q32855 Qubit RNA BR 分析试剂盒 100 次分析, ng 1 套 Q 次分析, ng 1 套 Q10211 Qubit microrna 分析试剂盒 100 次分析,1-100 ng 1 套 Q 次分析,1-100 ng 1 套 Q32881 Qubit 蛋白分析试剂盒 100 次分析, μg 1 套 Q 次分析, μg 1 套 Q33212 Qubit 分析管 500 管 1 套 Q32856 了解更多, 请登录 thermofisher.com/qubit 8

13 核酸修饰 赛默飞世尔科技所有 DNA/RNA 修饰酶均在严格遵守 ISO 9001:2008 质量管理体系的 D 级洁净空间内生产 所有产品均经过严 格的质量控制 产品的活性单位精确度 污染物活性 ( 核酸酶 磷酸酶和蛋白酶 ) 及其在特定功能分析中的性能均经严格控制 每个产品 的标签和质检报告中都列出了有效期和产品质量保证签名 所有批号的产品都要经常检测, 确保在有效期内符合质控 要求 脱氧核糖核酸酶 (DNases) 核酸酶应用底物作用方式 DNase I, RNase-free Endonuclease IV, E.coli (Endo IV) Endonuclease V, T.maritima (Endo V) Exonuclease I (Exo I) Exonuclease III (Exo III) Lambda Exonuclease 制备不含 DNA 的 RNA. 体外转录除去模板 DNA RT-PCR 前制备不含 DNA 的 RNA ssdna a 模板 dsdna 缺口平移方法标记 DNA RNA-DNA 杂合 DNase I 足迹实验体中的 DNA 产生具有随机重叠 DNA 插入片段的文库 DNA 损伤和修复研究 单细胞电泳 抗肿瘤药物研究 AP DNA DNA 结构分析 SNP 分析 高通量突变分析方法 突变和 DNA 修复研究脱氨基的 DNA 错配切割 基因分型 PCR 产物纯化 从核酸混合物中除去 ssdna ssdna 分析是否存在含有 3 - 羟基末 f 端的单链 DNA 生成单项缺失的 DNA 片段 生成测序用 ssdna 定点突变 PCR 产物克隆 制备链特异性探针 生成测序 SSCP 分析和滚环复制用的 sspcr 产物 从 dsdna 片断中制备 ssdna PCR 产物克隆 内切核酸酶 b 脱嘌呤 / 脱嘧啶内切核酸酶 c 内切核酸酶 外切核酸酶 g dsdna( 含缺外切核酸口, 平末端,5 - 突出末端 ) h 酶 i AP DNA 脱嘌呤 / 脱嘧啶内切核酸酶 特异性, 切割的极性 序列和碱基非特异性 无碱基位点的 5 端,3 5 外切核酸酶 损伤位点 3 端的第二个磷酸二酯键 RNA-DNA 杂合 RNase H ( 外 3 5 体中的 RNA 切核酸酶 ) 具有 3 - 磷酸化 3 - 磷酸酶 末端的 DNA 5 - 磷酸化的 dsdna j 外切核酸酶 无碱基位点的 5 端 5 3 反应产物失活目录号 # 5 - 寡核苷酸 在 AP 位点的 5 端含有切口的 DNA 缺口的 DNA e 5 -dnmps, 5 - 末端二核苷酸 5 -dnmps, ssdna 在 AP 位点的 5 端含有切口的 DNA NMPs DNA 3 -OH 末端 5 -dnmps EGTA 或 EDTA 存在时 65 加热 10 分钟 80 加热 15 分钟 d EDTA 存在时,>95 加热 10 分钟 80 加热 15 分钟 70 加热 10 分钟 80 加热 15 分钟 EN0521 EN0523 EN0525 EN0591 EN0141 EN0581 EN0582 EN0191 EN0561 EN0562 分子诊断 a ssdna 的切割速率比 dsdna 低 b Mg 2+ 存在时, 酶切后的 DNA 片段含有突出末端 ;Mn 2+ 离子存在时, 酶切后的片段长度更小, 产生的末端主要是平末端或者是含有 1-2 核苷酸突出的末端 c 从 dsdna 的损伤末端切除 3 - 封闭基团 ( 如 3 - 磷酸乙醇酸和 3 - 磷酸盐 ) d 该酶无需添加 Mg 2+,EDTA 存在时仍有活性 e 当酶过量时, 互补链也会产生切口, 从而有可能使双链断裂 f 不能切割含有 3 - 磷酰基或乙酰基末端的 DNA 链 不适合切除 dsdna 的 3 - 突出末端 其活性急剧下降 g 同时也展示 DNA 脱氧核糖核酸磷酸酯酶活性 h 对有 3 - 突出末端 ( 至少 4 个碱基 ) 的 DNA 和硫代磷酸酯 - 连接的核苷酸或 ssdna 无活性 i 其同时也是 DNA 3 - 磷酸单酯酶和 3 - 修复二酯酶 j 选择性切割 dsdna 的 5 - 磷酸化链 对 ssdna 和非磷酸 DNA 的活性非常低 ; 对含有缺口的 DNA 的活性有限, 对含有切口的 DNA 无活性 ss 单链 ds 双链 dnmp 单磷酸脱氧核苷 NMP 单磷酸核苷 AP 脱嘌呤 / 脱嘧啶 SSCP 单链构型多态性 9

14 分子诊断 DNase I, RNase-free DNase I, RNase-free 是一种内切酶, 可切割单链和双链 DNA 该酶水解磷酸二酯键, 产生具有 5 - 磷酸和 3 -OH 基团的单核 苷酸和寡聚脱氧核糖核苷酸 酶活性严格依赖于 Ca 2+, 受 Mg 2+ 或 Mn 2+ 离子激活 特点 重组酶 从含有低水平 RNases 含量的非动物寄主中纯化 应用 制备不含 DNA 的 RNA 体外转录后, 除去模板 DNA RT-PCR 前, 制备不含有 DNA 的 RNA 在 DNA Polymerase I 协同作用下, 缺口平移标记 DNA DNase I, RNase-free 足迹分析方法研究 DNA 和蛋白的相互 作用 产生含有随机重叠 DNA 插入的基因文库, 反应缓冲液中含 有 Mn 2+ Exonuclease I (Exo I) Exonuclease I (ExoI) 按 3 5 方向降解单链 DNA, 逐步释放脱氧核糖核苷 5 - 单磷酸并保留完整的 5 - 末端的二核苷酸 该酶不能切割末端 3 -OH 基团被磷酰基或乙酰基封闭的 DNA 链 特点 在赛默飞世尔科技的 PCR 缓冲液中有活性 应用 除去 PCR 混合物中引物, 应用如下 : - PCR 产物测序前 - 同试管内 大引物 PCR 突变 从核酸混合物中去除含有 3 - 羟基末端的单链 DNA 分析是否含存在有 3 - 羟基末端的单链 DNA 产品规格货号 Exonuclease I (20 U/µL) units EN0582 产品 规格 货号 DNase I, RNase-free (1 U/µL) 1000 units EN0521 DNase I, RNase-free, HC (50 U/µL) 1000 units EN0523 DNase I, RNase-free (supplied with MnCl 2 ) (1 U/µL) 1000 units EN sdna 或寡核苷酸 Mg OH + 5 dnmps OH Exonuclease III (Exo III) Exonuclease III (ExoIII) 具有以下 4 种催化活性 : 5 NpN-OH dnmps Exonuclease I 活性 3 5 外切脱氧核糖核酸酶活性, 尤其适合双链 DNA 3 - 磷酸酶活性 : ExoIII 可切除 3 - 末端的磷酸基团, 产生 3 -OH 基团 RNase H 活性 : ExoIII 可降解 RNA-DNA 杂合体中的 RNA 链 脱嘌呤 / 脱嘧啶 - 核酸内切酶活性 : ExoIII 切割脱嘌呤或脱嘧啶位点的磷酸二酯键, 产生 5 - 端无碱基的脱氧核糖 5 - 磷酸残基 特点 在赛默飞所有的限制性内切酶缓冲液中均有活性 应用 与 S1 Nuclease 协同作用, 制备具有单向缺失的 DNA 片段 产生双脱氧 DNA 测序用单链模板 定点突变 PCR 产物克隆 制备特异性探针 Lambda Exonuclease Lambda Exonuclease 是一种具有高持续能力的 5 3 外切脱氧核糖核酸酶, 选择性切割双链 DNA 的 5 - 磷酸化链 该酶对单链 DNA 和未磷酸化 DNA 的活性较低 对含有切口的 DNA 无活性 对有缺口的 DNA 活性有限 特点 在赛默飞世尔科技的 PCR 缓冲液中有活性 应用 产生单链 PCR 产物, 应用于 : DNA 测序 分析 DNA 单链构型多态性 (SSCP) 滚环复制 从双链 DNA 片段中制备单链 DNA PCR 产物克隆 产品 规格 货号 Exonuclease III (200 U/µL) 4000 units EN0191 产品 规格 货号 Lambda Exonuclease (10 U/µL) 5000 units EN

15 核糖核酸酶 (RNases) 核糖核酸酶应用催化反应底物反应产物失活目录号 # RNase T1 RNase A/T1 Mix RNase I RNase H 除去质粒或基因组 DNA 中的 RNA 除去重组蛋白抽提物中的 RNA 核糖核酸酶保护分析 DNA 或 RNA 中单碱基突变图谱绘制 除去 DNA 溶液中的 RNA RNA 测序 核糖核酸酶保护分析 除去重组蛋白抽提物中的 RNA 检测 G-less cassette DNA 模板体外转录合成的 RNA 转录子水平 除去 DNA 溶液中的 RNA 除去重组蛋白抽提物中的 RNA 核糖核酸酶保护分析 除去 DNA 溶液中的 RNA 除去重组蛋白抽提物中的 RNA 核糖核酸酶保护分析 第二链 cdna 合成前除去 mrna 第一链 cdna 合成后除去 RNA oligo(dt) 杂交后除去 mrna 中的 poly(a) 序列 位点特异性切割 RNA 体外聚腺苷酸化产物研究 切割 3 -C 或 3 -U 残基和邻近核苷酸 5 -OH 基团之间的磷酸二酯键 切割 3 -G 残基和邻近核苷酸 5 -OH 基团之间的磷酸二酯键 RNase A 和 RNase T1 的双重活性 切割 RNA 的所有磷酸二酯键 切割 RNA-DNA 杂合体中 RNA 链的磷酸二酯键 ssrna ssrna ssrna ssrna RNA-DNA 杂合体中的 RNA 3 -CMP,3 -UMP, 含有 3 -CMP 或 3 -UMP 末端的寡核苷酸 3 -GMP, 含有 3 -GMP 末端的寡核苷酸 RNase A, DNase and proteasefree 3 -CMP,3 -UMP,3 - GMP, 含有 3 -CMP,3 -UMP 或 3 -GMP 末端的寡核苷酸 3 -NMP 5 -P 寡核苷酸 过柱离心法或苯酚 / 氯仿抽提 过柱离心法或苯酚 / 氯仿抽提 过柱离心法或苯酚 / 氯仿抽提 100 加热 30 分钟 65 加热 10 分钟 EN0531 EN0541/2 EN0551 EN0601/2 EN0201/2 分子诊断 ss 单链 ds 双链 NMP 核糖核苷单磷酸 RNase A, DNase and Protease-free RNase A 是一种内切核糖核酸酶, 在 C 和 U 残基位置特异性降解 单链 RNA 该酶可以切割核苷酸 5 - 核糖与邻近嘧啶核苷 3 - 核 糖上磷酸基团之间的磷酸二酯键 产生的 2, 3 - 环磷酸可以 水解为相应的 3 - 核苷磷酸盐 特点 无 DNase 活性, 使用前无需加热 应用 质粒和基因组 DNA 制备 除去重组蛋白抽提物中的 RNA 核糖核酸酶保护分析, 与 RNase T1 协同作用 DNA 或 RNA 单碱基突变图谱绘制 相关产品 规格 货号 RNase A, DNase and protease-free (10 10 mg EN0531 mg/ml) RNase I Ribonuclease I (RNase I) 是一种内切核糖核酸酶, 优先降解单链 RNA 通过形成中间体核苷 2 -,3 - 环磷酸将 RNA 降解成核苷 3 - 单磷酸 该酶发挥活性无需金属离子参与 特点 多种反应条件下保持活性和稳定 100 加热 30 分钟可使酶失活 应用 除去 DNA 溶液的 RNA 除去重组蛋白抽提物中的 RNA 核糖核酸酶保护分析 相关产品规格货号 RNase I (10 U/µL) 5000 units EN0602 RNase H Ribonuclease H (RNase H) 可以特异性地降解 RNA-DNA 杂合体的 RNA 链 但是该酶却不能水解单链和双链 DNA 和 RNA 的磷酸二酯键 应用 第二链 cdna 合成前除去 mrna RT-PCR 和 qrt-pcr: 第一链 cdna 合成后除去 RNA 模板 与 oligo(dt) 杂交除去 mrna 中的 poly(a) 序列 位点特异性切割 RNA 体外聚腺苷酸化反应产物研究 RNA 5 RpRpRpRpRpRpRpRpRp 3 DNA 3 DpDpDpDpDpDpDpDpDp 5 RNA/DNA 杂合体 RNase H 活性 RpR + prprprpr + prprprp+ ssdna R 核苷 D 脱氧核苷 p 磷酸盐 相关产品 规格 货号 RNase H (5 U/µL) 500 units EN

16 其它修饰酶 分子诊断 Uracil-DNA Glycosylase (UDG, UNG) Uracil-DNA Glycosylase ( 尿嘧啶 DNA 糖基酶 ) 水解尿嘧啶和糖基之间的 N- 糖基键, 在含尿嘧啶的单链或双链 DNA 中产生脱嘧啶的位点 该酶对 RNA 无活性 特点 在赛默飞限制性内切酶和嗜热性聚合酶缓冲液中有活性 应用 PCR 交叉污染控制 定点突变 蛋白 -DNA 相互作用研究用探针 SNP 基因分型 PCR 产物克隆 PCR 产物和 cdna 中产生单链突出末端 Proteinase K (recombinant), PCR grade Proteinase K 是一种蛋白内切酶, 可以切割脂肪族氨基酸 疏水性氨基酸和芳香族氨基酸羧基端连接的酯键和肽键 Proteinase K 属于丝氨酸类蛋白酶 该酶可水解的最小多肽底物是四肽分子 特点 即用型溶液 在多种反应条件下有活性 应用 从鼠尾组织中分离基因组 DNA 从培养细胞中分离基因组 DNA 从组织和细胞中分离 DNA 和 RNA 时除去 DNases 和 RNases 酶定位检测 提高 PCR 产物克隆效率 产品 规格 货号 Uracil-DNA Glycosylase (1 U/µL) units EN0362 产品 规格 货号 Proteinase K, recombinant, PCR grade 5 x 1 ml EO0492 RiboLock RNase Inhibitor RiboLock RNase Inhibitor 按照 1:1 的比例以非竞争性模式与 RNases A B 和 C 结合, 从而抑制 RNases A B 和 C 活性 但是其不能抑制真核生物的 RNases T1 T2 U1 U2 CL3 以及原核生物的 RNases I 和 H 的活性 特点 在多种反应条件下有活性 保护 RNA, 使其免受降解, 最高有效温度达 55 C 应用 抑制 RNA 降解, 应用如下 : - 体外转录, - cdna 合成, - 体外翻译, - RNA 扩增 RNA 纯化和保存 特异性的核糖核酸酶活性测定 肿瘤抑制研究 Pyrophosphatase, Inorganic (from yeast) Pyrophosphatase,Inorganic( 无机焦磷酸酶,PPase) 可以催化无机焦磷酸盐水解生成两个正磷酸盐 该酶发挥活性需二价金属离子参与 Mg 2+ 可以刺激该酶发挥最大的酶活性 特点 在赛默飞 DNA 聚合酶 RNA 聚合酶和反转录酶缓冲液中有活性 应用 体外转录高产量合成 RNA DNA 聚合反应 : 防止磷酸盐累积 基于焦磷酸检测方法的 SNP 基因分型中, 除去试剂中的 PPi 污染 PCR 产物和 cdna 中产生单链突出末端 产品规格货号 Pyrophosphatase, inorganic (0.1 U/µL) 10 units EF0221 产品 规格 货号 RiboLock RNase Inhibitor (40 U/µL) 4 x 2500 units EO

17 3 反应设置 反转录反应 SuperScript 系列反转录试剂 SuperScript 系列逆转录酶, 涵盖 II 到最新的 IV 代产品, 是您进行 cdna 合成的第一选择 数以万计的文献引用 低至 pg 级的超高灵敏度 降低的 RNase 活性, 更高热稳定, 可扩增高产量的全长 cdna 兼具高效 可靠 准确性 最新的 SuperScript IV 更具 10 分钟的更短反应时间, 多种困难样本高效扩增 生物抑制剂耐受 支持更高反应温度的特点 分子诊断 SuperScript 反转录产品大家族 通用 cdna 合成高性能的 cdna 合成高效全能的 cdna 合成高灵敏 qrt-pcr 的 cdna 合成 SuperScript II SuperScript III SuperScript IV SuperScript IV VILO Master Mix 产品形式单酶 / 试剂盒单酶 / 试剂盒单酶 / 试剂盒预混液 最佳反应温度 反应速度 50 分钟 50 分钟 10 分钟 10 分钟 灵敏度 10 pg - 5 μg 总 RNA 10 pg - 5 μg 总 RNA 1 pg - 5 μg 总 RNA 1 pg - 5 μg 总 RNA 热稳定性 6.1 分钟 220 分钟 220 分钟 220 分钟 (50 半衰期 ) cdna 产量 高 高 超高 超高 RNase H 活性 降低的 高度降低 高度降低 高度降低 对反应抑制剂的抗性 好 高 超高 超高 SuperScript IV 反转录酶 SuperScript IV 反转录酶 (RT) 是一种全新的 RT, 可以达到 SuperScript III RT 所具备的全部高性能 - 且已经过重新改造, 提高了稳定性, 具有以下特性 : 更高的反应抑制剂抵抗性 更高的热稳定性 ( 高达 55 C), 适用于富含 GC 含量的模板 适用于各种样本合成高品质 cdna 极速 10 分钟 RT 反应速率强大的反应抑制剂耐受能力 RNA 样本中经常存在的抑制性组分会干扰 cdna 合成, 并产生假阴性结果 抑制剂可能是 RNA 提取过程中使用的试剂, 或者是来源于生物学样本的共纯化组分, 如胆盐或腐植酸 相比 SuperScript III RT 和其他同类 RT,SuperScript IV RT 对污染抑制剂的抵抗性更强 该特性可以帮助您获得出色的结果, 即便是较低纯度的样本亦是如此, 如福尔马林固定石蜡包埋样本 (FFPE) 的 RNA 即使难以处理的样本和降解 RNA 仍可实现灵敏且可重复的 cdna 合成理想的 RT 可以反转录最难以处理的 RNA 类型, 如从植物中提取的 RNA 样本 ( 正常情况下被降解, 只能获得较低拷贝的 RNA 转录本 ) SuperScript IV RT 十分稳定且灵敏, 可以反转录 降解的 RNA 及未纯化的 RNA 因此,SuperScript IV RT 是 cdna 合成的极佳选择 在 10 分钟内完成 cdna 合成, 获得高产量 cdna SuperScript IV RT 可以在 10 分钟内合成 9 kb cdna, 而使用推荐的实验方案,SuperScript III RT 和同类 RT 通常需要 分钟 SuperScript IV 第一链合成系统 SuperScript IV 第一链合成系统使用方便, 可提供更高的 cdna 产量 高灵敏度 对抑制剂的抵抗性, 且可实现全长转录 您可以获得完成第一链 cdna 合成所需的全部组分, 且均为独立包装, 帮助您最大程度地实现 cdna 合成优化, 并尽可能确保每个实验的成功 产品规格货号 SuperScript IV Reverse Transcriptase untis SuperScript IV First-Strand Synthesis System 200 reactions

18 分子诊断 SuperScript IV VILO 预混液 SuperScript IV VILO 预混液是适用于两步法定量 RT-qPCR 的 cdna 反应预混液 它采用全新的 SuperScript IV, 延续了 SuperScript IV 快速 高效 灵敏的特点外, 还提供更为便捷的产品形式和全新的 ezdnase, 特异去除单链 gdna, 将值得信赖的 VILO 技术提升到一个新的水平 特点 超快速 10 分钟 RT 反应,2 分钟去除 gdna 超高产量 Ct 值较其他所有逆转录试剂降低超过 2 个循环 超便捷 单管反应预混液, 可用于 2 步法 RT-qPCR 超高的灵敏度 对低模板量和纯度不佳的样本亦适用 ezdnase 高效快速去除 gdna ezdnase 提供了简化的工作流程, 包括 2 分钟基因组 DNA 去除步骤, 无需 DNA 酶热灭活或去除步骤 ezdnase 是一种全新的双链特异性 热不稳定的 DNA 酶, 可以去除污染的基因组 DNA, 且不会影响靶 RNA 的质量或数量, 也不会损伤单链 DNA, 如引物和探针 产品规格货号 SuperScript IV VILO Master Mix 500 reactions SuperScript IV VILO Master Mix with ezdnase 500 reactions ezdnase 50 reactions Traditional RT workflow with gdna removal RNA DNase I treatment 37 C 20 min DNase I inactivation/+edta 65 C 10 min Primer annealing C 10 min min RT 42 C 60 min Enzyme inactivation 85 C 5 min Total time: >100 min SuperScript IV VILO workflow with ezdnase RNA ezdnase treatment 37 C 2 min Primer annealing 25 C 10 min SuperScript IV VILO Master Mix 50 C 10 min Enzyme inactivation 85 C 5 min Total time: 27 min SuperScript III 反转录酶 相比较 SuperScript II, 经过点突变的 SuperScript III 具有更高的热稳定性 更长的半衰期及更低的 RNase H 活性 特点 在 50 C 下半衰期为 220 分钟, 可获得高 cdna 产量 RNase H 活性更低, 可获得更多的全长 cdna 在 50 C 下具有全部活性, 可增强基因特异性引物 (GSP) 的特异性 SuperScript III 反转录酶 (RT) 是 SuperScript II RT 的专利突变产品, 在 50 C 下具有活性, 半衰期为 220 分钟, 可增强基因特异性引物的特异性且具有高 cdna 产量 与 SuperScript II RT 一样, 它可以从单链 RNA DNA 或 RNA:DNA 杂合体合成互补 DNA 链 SuperScript III RT 可用于特定基因的 RT-PCR, 或者利用总 RNA 或 poly (A)+ RNA 样本生成 cdna 它适用于第一链 cdna 合成 芯片标记 cdna 文库构建 RT-PCR 引物延伸及 3 和 5 RACE SuperScript III 反转录酶与 SuperScript II RT 和 M-MLV RT 的比较 放射自显影图显示了在各种温度下, 使用 200 个单位的各种 RT 酶, 以 0.25 μg RNA 混合物 ( 包括 1.35 kb 2.4 kb 4.4 kb 7.5 kb 和 9.5 kb 的片段 ) 为模板合成 32P 标记的 cdna M 泳道为 32P 标记的 1 kb DNA 分子量标准 产品规格货号 SuperScript III Reverse Transcriptase 4 x 10,000 units

19 RevertAid 和 Maxima 反转录试剂 Thermo Scientific TM 提供一系列反转录酶 (RTs), 可以满足您常规的和更高的实验要求, 其中包括经遗传修饰的 M-MuLV RT 酶和通过 M-MuLV RT 酶体外进化得到的酶 RevertAid Reverse Transcriptase Thermo Scientific TM RevertAid Reverse Transcriptase 是一种重组的 M-MuLV RT 这种酶具有 RNA 和 DNA 聚合酶活性, 且具有 RNase H 活性, 可以特异降解 RNA-DNA 复合体中的 RNA 特点 可以高效合成长达 13 kb 的全长第一链 cdna 最佳活性温度为 42 温度高达 50 时仍有活性 合成时可掺入带有修饰的核苷酸 ( 例如 Cy3- Cy5- 罗丹明 - 氨基烯丙基- 荧光素- 标记的核苷酸 ) 应用 合成第一链 cdna, 用于 RT-PCR 和实时 RT-qPCR 合成 cdna, 用于克隆和表达研究 DNA 标记 产品 RevertAid Reverse Transcriptase (200 U/μL) RevertAid H Minus Reverse Transcriptase (200 U/μL) 货号 EP0441/EP0442 EP0451/EP0452 Maxima Reverse Transcriptase Thermo Scientific TM Maxima Reverse Transcriptase 是通过对 M-MuLV RT 体外进化改造而得到的酶 这种酶不仅具有依赖 RNA 和 DNA 的聚合酶活性, 还具有 RNase H 活性 与野生型 M-MuLV RT 相比, 该酶具有热稳定性好 反应稳定性佳以及合成速率高的特点 Maxima Reverse Transcriptase 可以在更高的温度下 (50-60 ) 成功进行反转录反应, 其反应的起始模板量线性范围很广 (1 pg - 5 μg) 可以获得较高的 cdna 产率, 并且能够合成长达 20kb 的 RNA 转录产物 反应温度可以升高到 60, 对于具有复杂二级结构的 RNA 可以进行高效的转录 特点 在 42 C-65 C 范围有效合成 cdna 适合反转录具有复杂二级结构的 RNA 高产量, 可合成长达 20 kb 的全长 cdna 极速 5 分钟合成 7.5 kb cdna 抗干扰能力强 轻松抵抗常见反应抑制剂应用 两步法 RT-PCR 两步法 RT-qPCR 第一链 cdna 合成 构建全长 cdna 文库 DNA 标记 分子诊断 Maxima H Minus RT Maxima RT 供应商 A III 残留活性 % 60 C 时间,min 60 高温度条件孵育后的残留活性 产品 Maxima Reverse Transcriptase (200 U/ L) Maxima H Minus Reverse Transcriptase (200 U/ L) 货号 EP0741/EP0742/EP0743 EP0751/EP0752/EP

20 PCR 反应 分子诊断 从常规 PCR 到热启动 PCR, 从高保真 PCR 到直接 PCR, 我们提供的丰富产品组合可以满足多种 PCR 应用, 凭借业界领先的酶技术走在核酸扩增的前沿 常规 PCR Taq DNA Polymerase (recombinant) DreamTaq DNA Polymerase Thermo Scientific TM Taq DNA Polymerase 是嗜热细菌 Thermus Thermo Scientific DreamTaq DNA Polymerase 是一种优化的适用 aquaticus 来源的一种高度热稳定的 DNA 聚合酶 该聚合酶于所有的标准 PCR 应用的增强型 Taq DNA 聚合酶 该聚合酶能催化 DNA 的 5 3 合成, 并且拥有低的 5 3 核酸外切保证了更高的灵敏度 更长的 PCR 产物以及更高的产量 酶活性 该聚合酶配套提供经过优化的 DreamTaq Buffer, 其中含有 20mM 的 MgCl 2 重组 Taq DNA 聚合酶适合扩增长度为 5 kb 或更短的模板, 是标准 PCR 的一种理想的工具 Taq DNA 聚合酶中提供 BSA 除了单酶,DreamTaq 还有预混液系列, 即含有聚合酶 经作为稳定剂 当扩增更低纯度的 DNA 样品时, 这个版本的优化的缓冲液 MgCl 2 和 dntps 的即用型溶液 Taq DNA 聚合酶通常是最佳选择 另外,DreamTaq 系列还有绿色缓冲液可供选择 该绿色缓特点冲液中含有一种密度试剂和两种示踪染料用于 PCR 产物直 热稳定性 - 在 95 半衰期超过 40 分钟接凝胶上样 这种彩色的缓冲液并不会干扰 PCR 性能, 并 产生具有 3 -d A 末端的 PCR 产物且与下游的应用如荧光 DNA 测序 连接和酶切等相兼容 提供两种缓冲液 - 含有 KCL 的 10x Taq Buffer 以及含有特点 (NH 4 ) 2 SO 4 的 10x Taq Buffer 高产量的 PCR 产物 能结合修饰核苷酸 具有更高的灵敏度应用 以基因组 DNA 为模板可扩增长达 6 kb 的目的产物 ; 以病 常规 PCR 扩增长达 5 kb 的 DNA 片段毒 DNA 为模板可扩增长达 20 kb 的目的产物 DNA 标记 绿色缓冲液使得 PCR 产物可以直接凝胶上样 高通量 PCR 能结合修饰核苷酸 应用 常规 PCR 高通量 PCR 基因型分析 16 Taq DNA 聚合酶在含有 (NH 4) 2SO 4 和不同 MgCl 2 浓度的 10x Taq DNA Buffer 进行的 PCR 在较宽范围的 Mg 2+ 浓度下对来自人基因组 DNA 长度为 950bp 的单拷贝基因进行了扩增 M - GeneRuler 100 bp Plus DNA Ladder 产品规格货号 Taq DNA Polymerase, recombinant (5 U/µL) units EP0406 PCR Master Mix (2X) 1000 reactions K0172 DreamTaq DNA Polymerase 与其它厂家 Taq DNA 聚合酶的灵敏度和产量比较根据厂家的建议使用渐减量的人基因组 DNA 模板对来自人 α-l- Fucosidase 基因一个长度为 545bp 的片段进行了扩增 M - FastRuler Low Range DNA Ladder 即用型 D - DreamTaq DNA Polymerase T - Taq DNA 聚合酶 1-3 来自不同厂家的 Taq DNA 聚合酶 产品规格货号 DreamTaq DNA Polymerase (5 U/μL) units EP0704 DreamTaq PCR Master Mix (2X) 1000 reactions K1072 DreamTaq Green DNA Polymerase units EP0714 (5 U/μL) DreamTaq Green PCR Master Mix (2X) 1000 reactions K1082

21 热启动 PCR Platinum Taq DNA Polymerase Platinum Taq DNA 聚合酶是一种结合专利抗体的重组 Taq DNA 聚合酶, 该抗体可在室温下抑制聚合酶的活性 由于与这种抑制剂的特异性结合,Platinum Taq DNA 聚合酶以非活性形式提供 在 PCR 启动时, 聚合酶以温度依赖性形式 (94 C) 被活化 一旦与抑制剂脱离,Taq DNA 聚合酶即可恢复全部活性 可在基因分型 基因表达谱和二代测序 (NGS) 等 PCR 应用中进行稳健 可靠的扩增 抗体介导的热启动 PCR 具有高特异性和高产量 适用于广泛扩增片段的通用配方 单酶和预混液形式, 方便的室温反应条件 绿色缓冲液可直接进行凝胶上样 AmpliTaq Gold DNA Polymerase AmpliTaq Gold DNA 聚合酶是久经验证的热启动酶之选 它采用了化学修饰的热启动酶技术, 较抗体介导的热启动酶耐受室温时间更长 因此是高通量实验的首选 Applied Biosystems AmpliTaq Gold DNA 聚合酶推荐用于扩增长度小于 5 kb 的实验 更长的扩增, 我们推荐 Platinum Taq 抗体介导的酶 较非热启动酶显著提高特异性 灵敏度与产物得率 降低背景与非特异产物, 包括引物二聚体 PCR 产物 方便的室温下反应液准备 提高低拷贝模板的扩增效果 AmpliTaq Gold DNA 聚合酶配有三种不同的缓冲液, 可根据您的具体实验需求进行选择 分子诊断 产品 规格 货号 Platinum Taq DNA Polymerase reactions Platinum Taq Green Hot Start DNA Polymerase reactions Platinum Hot Start PCR Master Mix 1000 reactions Platinum Green Hot Start PCR Master Mix 1000 reactions 缓冲液 组成 Tris HCL, ph8.3 KCl MgCl 2 Gelatin 10XPCR Buffer I 100 nm, ph nm 15 nm 0.01% 10XPCR Buffer II 100 nm, ph nm 独立单管 * 10XPCR Gold Buffer 150 nm,ph nm 独立单管 * * MgCl 2 是以 25 nm 的单管形式提供 AmpliTaq Gold 360 DNA 聚合酶, 性能更佳 与 AmpliTaq Gold DNA 聚合酶相比, AmpliTaq Gold 360 DNA 聚合酶经过了额外的专利性分离程序的纯化, 去除了酶制备过程中的污染细菌 DNA 序列 与 360 Gold 缓冲液一起使用时, 这种超纯酶除了具有热启动功能外, 还可减少假阳性结果, 扩增低水平靶序列, 促进多种模板的扩增 该产品还可提供 360 GC 增强剂, 用于处理扩增困难的富 GC 模板 产品 规格 货号 AmpliTaq Gold DNA Polymerase 1,000 units N with Buffer I AmpliTaq Gold DNA Polymerase 1,000 units N with Buffer II and MgCl 2 AmpliTaq Gold DNA Polymerase 1,000 units with Gold Buffer and MgCl 2 AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase 1,000 units AmpliTaq Gold 360 PCR Master Mix 5ml

22 分子诊断 DreamTaq Hot Start DNA Polymerase DreamTaq 热启动 DNA 聚合酶是热启动版的 DreamTaq DNA 聚合酶 与我们标准的 DreamTaq DNA 聚合酶一样, 相比于基于传统 Taq 的聚合酶, 这种热启动聚合酶可获得更高的产量和扩增更长的片段 此外, 由于热启动修饰,DreamTaq 热启动 DNA 聚合酶具有更高的灵敏度和特异性 使用 DreamTaq 热启动 DNA 聚合酶, 可在室温下配置反应体系而不会降低扩增特异性和扩增产物产量 DreamTaq Hot Start DNA 聚合酶可提供无色或绿色的反应缓冲液, 且可提供 2X 的无色或绿色预混液形式 经特异优化的 DreamTaq 缓冲液含有 Mg 2+, 无需多余反应条件优化即可进行强劲地扩增 除此之外, 绿色缓冲液可实现 PCR 扩增产物的直接凝胶上样电泳 特点 可扩增低至 3 pg 的人基因组 DNA 可扩增长达 6 kb 基因组 DNA 和 20 kb lambda DNA 扩增产物含有 3'-dA 突出端 可结合 dutp 和修饰核苷酸 几乎无需优化引物退火温度 优化的 DreamTaq 缓冲液, 包含 20 mm MgCl 2 可提供 2X 预混液形式 扩增后可以直接凝胶上样 适用于大部分 PCR 应用 应用选择 DreamTaq 热启动 DNA 聚合酶, 用于质粒 病毒或复杂基因组模板 DNA 的扩增 常见应用包括 : 菌落 PCR 基因分型 RT-PCR 获得 PCR 产物用于 TA 克隆 更多信息请访问 :thermofisher.com/dreamtaq 产品 规格 货号 DreamTaq Hot Start DNA Polymerase 2500 U EP1703 DreamTaq Hot Start PCR Master Mix 1000 reactions K9012 Phire Hot Start II DNA Polymerase Thermo Scientific TM Phire TM Hot Start II DNA 聚合酶包含一个双链 DNA 结合区域, 使得该酶能缩短延伸时间 (10-15 s), 提高产量, 且相比于 Taq DNA 聚合酶提高了 2 倍保真性 另外, 独特的热启动技术可在标准循环温度下 零时间 完全激活酶活性 如此众多优点使得 Phire Hot Start II DNA 聚合酶成为常规和高通量 PCR 的理想选择 Phire Green Hot Start II DNA 聚合酶随附 5xPhire 绿色反应缓冲液, 其包含一种密度试剂和两种示踪染料, 用于 PCR 产物的直接凝胶上样 特点 快速热启动 无需再激活步骤 快速 扩增速度为热启动 Taq 酶的 4 倍 功能强劲 由于具有较高的抑制剂耐受性, 优化反应的时间最少 高产量的 PCR 产物 更长的 PCR 产物 比其它热启动 Taq 酶能扩增更长的 DNA 片段 PCR 产物可以直接进行凝胶上样 Phire Green Hot Start II DNA 聚合酶的反应缓冲液中含有上样染料 应用 热启动 PCR 常规 PCR 非高保真 PCR 快速 PCR 高通量 PCR 产品 规格 货号 Phire Hot Start II DNA Polymerase 1000 x 50 μl rxns F-122L Phire Green Hot Start II DNA 1000 x 50 μl rxns F-124L Polymerase Phire Hot Start II PCR Master Mix 1000 x 50 μl rxns F-125L Phire Green Hot Start II PCR Master Mix 1000 x 50 μl rxns F-126L DreamTaq Hot Start Green DNA Polymerase DreamTaq Hot Start Green PCR Master Mix 2500 U EP reactions K

23 高保真 PCR Platinum SuperFi DNA Polymerase Platinum SuperFi DNA 聚合酶是一种具有校读功能的 DNA 聚合酶, 兼具出众的保真度与备受信赖的 Platinum 热启动 技术, 专为提高 PCR 成功率而设计 Platinum SuperFi DNA 聚合 酶可提供 >100 x Taq 保真度, 是克隆 突变实验及其他需要 极佳序列准确度的应用领域的理想选择 特点 出众的 >100 x Taq 保真度 利用 Platinum 热启动技术获得更高特异性和更高产量 实现难扩增样本的高效扩增, 包括纯度不佳和 GC 含量大于 65% 的样本 扩增片段长度可高达 20 kb, 少量样本也可高效扩增 便捷的工作流程, 可实现室温组装反应, 使用绿色缓冲液, 可直接进行凝胶上样 应用 高保真 PCR 高通量 PCR 长片段 PCR ( 长达 20 kb) 纯度不佳样本的扩增 快速 PCR 克隆和亚克隆 定点突变 富含 GC 模板的扩增 测序模板制备 产品 规格 货号 Platinum SuperFi DNA Polymerase 5 x 500 units Platinum SuperFi Green DNA 5 x 500 units Polymerase Platinum SuperFi PCR Master Mix 5 x 500 units Platinum SuperFi Green PCR Master Mix 5 x 500 units Platinum Pfx DNA Polymerase Platinum Pfx DNA 聚合酶适用于高保真 PCR 应用中的 DNA 片段扩增 其高保真度得益于一种专有酶制剂, 它含有来源于耐热球菌 KOD 的重组 DNA 聚合酶, 具有校正 (3 5 核酸外切酶 ) 活性 Platinum 抗体技术提供了一种简单的自动热启动方法, 可提升 PCR 特异性 其中包括的 PCRX 增强剂可以提高引物的特异性, 扩大镁离子的浓度范围和退火温度范围, 同时还能提高热稳定性 PCRX 增强剂还可以帮助优化困难模板和 / 或富含 GC 的模板的 PCR 反应 保真度较 Taq DNA 聚合酶高 26 倍 扩增片段长达 12 kb 在室温下建立反应体系 产品 规格 货号 100 reactions Platinum Pfx DNA Polymerase 500 reactions Phusion High-Fidelity DNA Polymerases Thermo Scientific TM Phusion DNA 聚合酶为高保真 PCR 反应建立了新的标准 Phusion DNA 聚合酶的错配率比 Taq 酶低 52 倍, 比 Pfu 低 6 倍, 是保真度最好的热稳定聚合酶 Phusion High-Fidelity PCR master mix 是便捷的 2X 溶液, 只需添加模板和引物即可进行实验, 从而最大限度的减少了手动步骤, 使用更为方便 特点 准确性 具有最高保真性的热稳定聚合酶 (52 x Taq) 功能强劲 更高的成功率, 更少的优化步骤 快速 增强的持续合成能力缩短了反应时间 ( 延伸速度 s/kb) 产量高 更少的酶, 更高的产量 (0.5-1 U/50 μl 反应 ) 高特异性 独特的热启动技术, 实现零时间激活, 减少非特异性扩增和引物降解 PCR 产物直接凝胶上样 Phusion Green 和 Phusion Green Hot Start II DNA 聚合酶的反应缓冲液中含有上样染料 应用 高性能 PCR 高保真 PCR 克隆 测序 ( 模板扩增 ) 产品 Phusion High-Fidelity DNA Polymerase,500 U Phusion Green High-Fidelity DNA Polymerase, 500 U Phusion High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer, 500 reactions Phusion High-Fidelity PCR Master Mix with HF Buffer, 500 reactions Phusion Hot Start II High-Fidelity DNA Polymerase Phusion Green Hot Start II High-Fidelity DNA Polymerase Phusion Hot Start II High-Fidelity PCR Master Mix Phusion Green Hot Start II High-Fidelity PCR Master Mix 货号 F-530L F-534L F-532L F-531L F-549L F-537L F-565L F-566L 1.7 kb 2.2 kb 2.3 kb (GC-rich) M P A B C D M P A B C D M P A B C D M P: Phusion Hot Start II High-Fidelity DNA 聚合酶 A-D: 主要供应商的校正热启动 DNA 聚合酶 Thermo Scientific Phusion Hot Start II DNA 聚合酶拥有极高的特异性和极高的产量使用主要供应商的五种校正热启动 DNA 聚合酶扩增 kb 的人类基因组 DNA 片段 Phusion Hot Start II DNA 聚合酶可扩增出高产量的特异性产物, 而其它酶则扩增不出或只有极低的产量, 一些还能扩增出非特异性的产物 分子诊断 19

24 直接 PCR 分子诊断 Thermo Scientific TM 直接 PCR 方法可实现直接用未经纯化的样本进行 PCR, 为 DNA 扩增带来了前所未有的便捷 无需任何纯化步骤, 只需微量的原始样本直接作为 PCR 反应中的模板, 节省了大量时间和成本 无需进行耗时又昂贵的 DNA 纯化 样本材料需求量非常少 提供预混液及预加上样染料的产品形式, 能尽可能减少移液次数 PCR 时间极短 已对多种样本类型进行测试 强劲的热启动 DNA 聚合酶保证特异性和高产量 试剂盒组成丰富 - 包含对照 水和 DNA Ladder 产品 规格 货号 Phire Plant Direct PCR Master Mix 1250 reactions F-160L Phire Tissue Direct PCR Master Mix 1250 reactions F-170L Phusion Blood Direct PCR Master Mix 500 reactions F-175L Phire Plant Direct PCR Kit (without sampling tools) 500 reactions F-130WH Phire Animal Tissue Direct PCR Kit (without sampling tools) 500 reactions F-140WH Phusion Human Specimen Direct PCR Kit 200 reactions F-150BID Phusion Blood Direct PCR Kit 500 reactions F-547L 多重 PCR Platinum Multiplex PCR Master Mix Platinum Multiplex PCR Master Mix 是一款专为终点多重 PCR 设 计的多重 PCR 预混液, 高特异性 极少优化, 是高通量多 引物 PCR 的首选 产品采用单管 2X 预混液形式, 包括除引 物和模板外的所有组分, 方便快捷 另外, 还提供 GC 增强 剂, 用于扩增困难模板尤其是高 GC 含量模板 特点 即买即用, 极少优化 具有优异的多重扩增能力, 最多可以在一个反应中扩增 20 个扩增子 专为末端多重 PCR 设计, 具有宽广的扩增范围, 可以对从 50 bp 到 2.5 kb 的产品进行扩增 产品 规格 货号 Platinum Multiplex PCR Master Mix reactions Platinum SuperFi Green PCR Master Mix 5 x 500 units Phusion U Multiplex PCR Master Mix Thermo Scientific Phusion U 多重 PCR 预混液为即用型 2X 终点 PCR 预混液, 设计用于在单一反应管内同时扩增多个目的片段 在单一反应中可以加入多达 20 个引物对, 进行高特异性和高效的多重扩增 Phusion U 多重 PCR 预混液其独特的缓冲液含有平衡浓度的各 PCR 组分, 从而无需进行重复的优化反应 特点 可特异高效地扩增多达 20 个目的片段, 每个片段可长达 2.5 kb 即使是对于不纯的样本, 由于具有高抑制剂耐受能力, 也能获得好的扩增结果 快速扩增, 绿色缓冲液可实现扩增后直接凝胶上样电泳应用 基因分型 病原检测 食品检测 遗传修饰生物的检测 微卫星标记的扩增 产品 规格 货号 Phusion U Multiplex PCR Master Mix 500 reactions F-562L Phusion U Green Multiplex PCR Master Mix 500 reactions F-564L 20

25 核苷酸 1. 脱氧核糖核苷三磷酸 (dntps), 分子生物学级别 赛默飞是少数可以制备工业级核苷酸的主要生产商之一 PureExtreme dntps 以溶液形式提供, 其 ph 值经 NaOH 滴定为 7.0 我们可以提供四种独立包装的 dntp 溶液套装, 也可以提供 dntps 混合液, 混合液的浓度经过优化, 可直接用于 PCR 反转录 标记和其它生物学应用 特点 HPLC 检测纯度大于 99% 无痕量核苷酸的污染 无内切或外切脱氧核糖核酸酶 核糖核酸酶 磷酸酶及切口酶活性的污染 无人类和 E.coli DNA 污染 高度稳定 中性 ph 值确保核苷酸可长期保存的稳定保存 : 可稳定保存 3 年 ; - 多次冻 - 融循环后仍然保持稳定 ; - 室温放置 7 个星期后, 保持三磷酸状态的 dntps 比例高达 90-95%; - 30 个 PCR 循环 (94,1 分钟 ;72,3 分钟 ) 后, 保持三磷酸状态的 dntps 比例高达 85-90% 分子诊断 应用 Thermo Scientific TM dntps 适用于常规分子生物学应用, 包括 PCR 实时 PCR 高保真 PCR 长片段 PCR LAMP-PCR cdna 合成 RT-PCR RDA MDA DNA 标记和 DNA 测序 产品 目录号 浓度 含量 PCR 使用次数 (50 μl 体系, 每种 dntp 的浓度为 0.2 mm) dntp Set R0181 4x0.25 ml (4x25 µmol) mm datp, dttp, dctp 和 R0182 dgtp 溶液, 独立包装 4x1 ml (4x100 µmol) R0186 4x5 ml (4x500 µmol) dntp Mix, 25 mm each R ml (100 µmol total) 2500 每种 dntp 的浓度为 25 mm R1122 5x1.0 ml (500 µmol total) R ml (8 µmol total) 200 dntp Mix, 10 mm each R0192 每种 dntp 的浓度为 10 mm 1.0 ml (40 µmol total) 1000 R0193 5x1.0 ml (200 µmol total) 5000 dntp Mix, 2 mm each R ml (8 µmol total) 200 每种 dntp 的浓度为 2 mm R0242 5x1.0 ml (40 µmol total) 1000 dntp/dutp Mix* R0251 datp dctp 和 dgtp 的浓度为 2 mm dutp 的浓度为 4 mm 1.0 ml (10 µmol total) 200 * 不适合具有校正活性的酶 包含校正酶的 Mix 和 DreamTaq DNA 聚合酶催化的 PCR 反应 datp 99.40% 纯度 dgtp 99.56% 纯度 dttp 99.44% 纯度 dctp 99.52% 纯度 Thermo Scientific PureExtreme dntps 纯度大于 99%(HPLC 检测 ) 柱 TOSOH TSK gel ODS-100V, mm. 缓冲液 A 100 mm triethylamonium acetate, ph 7.0 缓冲液 B 60% acetonitrile/a 梯度 0-25% B 流动速度 1 ml/ 分钟 21

26 分子诊断 datp datp(2 -deoxyadenosine 5 -triphosphate,2 - 脱氧腺苷 5 - 三磷酸 ) 以 100mM 溶液形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 应用适用于常规分子生物学应用, 如常规 PCR 实时 PCR 高保真 PCR 长片段 PCR cdna 合成 LAMP-PCR RT-PCR RDA MDA DNA 标记和 DNA 测序 基本特性 λ max= 259 nm, ε = 15.4x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 dctp dctp (2 -deoxycytidine 5 -triphosphate,2 - 脱氧胞苷 5 - 三磷酸 ) 以 100 mm 溶液形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 应用适用于常规分子生物学应用, 如常规 PCR 实时 PCR 高保真 PCR 长片段 PCR cdna 合成 LAMP-PCR RT- PCR RDA MDA DNA 标记和 DNA 测序 基本特性 λ max= 271 nm, ε = 9.1x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 #R µmol (0.25 ml of 100 mm 溶液 ) #R µmol (0.25 ml of 100 mm 溶液 ) 分子式 C 10H 13N 5O 12P 3Na 3 分子量 (acid form: 491.2) 分子式 C 9H 13N 3O 13P 3Na 3 分子量 (acid form: 467.1) dgtp dgtp(2 -deoxyguanosine 5 -triphosphate,2 - 脱氧鸟苷 5 - 三磷酸 ) 以 100 mm 溶液形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 应用适用于常规分子生物学应用, 如常规 PCR 实时 PCR 高保真 PCR 长片段 PCR cdna 合成 LAMP-PCR RT-PCR RDA MDA DNA 标记和 DNA 测序 基本特性 λ max= 253 nm, ε = 13.7x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 dttp dttp (2 -deoxythymidine 5 -triphosphate,2 - 脱氧胸苷 5 - 三磷酸 ) 以 100 mm 溶液形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 应用适用于常规分子生物学应用, 如常规 PCR 实时 PCR 高保真 PCR 长片段 PCR cdna 合成 LAMP-PCR RT-PCR RDA MDA DNA 标记和 DNA 测序 基本特性 λ max= 267 nm, ε = 9.6x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 #R µmol (0.25 ml 100 mm 溶液 ) #R µmol (0.25 ml 100 mm 溶液 ) 分子式 C 10H 13N 5O 13P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :507.2) 分子式 C 10H 14N 2O 14P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :482.1) 22

27 dutp dutp (2 -deoxyuridine 5 -triphosphate,2 - 脱氧尿苷 5 - 三磷酸 ) 以 100 mm 溶液形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 应用适用于常规分子生物学应用, 包括常规 PCR 实时 PCR&RT-PCR (Taq DNA Polymerase 催化 ) cdna 合成和引物延伸等 基本特性 λ max= 262 nm, ε = 10.0x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 ditp ditp (2 -deoxyinosine 5 -triphosphate,2 - 脱氧次黄嘌呤核苷 5 - 三磷酸 ) 以 100 mm 溶液提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 应用适用于分子生物学应用, 包括 RT-PCR& PCR (Taq DNA Polymerase 催化 ) cdna 合成 SNP 基因分型和引物延伸等 基本特性 λ max= 249 nm, ε = 12.2x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 分子诊断 #R µmol (0.25 ml 100 mm 溶液 ) #R µmol (0.25 ml 100 mm 溶液 ) 分子式 C 9H 12N 2O 14P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :468.1) 分子式 C 10H 12N 4O 13P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :492.1) 23

28 2. 核糖核苷三磷酸 (NTPs), 分子生物学级别 赛默飞是少数可以制备工业级核苷酸的主要生产商之一 PureExtreme dntps 以溶液形式提供, 其 ph 值经 NaOH 滴定为 7.0 我们可以提供四种独立包装的 dntp 溶液套装, 也可以提供 dntps 混合液, 混合液的浓度经过优化, 可直接用于 PCR 反转录 分子诊断 标记和其它生物学应用 特点 HPLC 检测纯度大于 99% 无痕量核苷酸的污染 无内切或外切脱氧核糖核酸酶 核糖核酸酶 磷酸酶及切口酶活性污染 无人类和 E.coli DNA 污染 NTPs 功能检测采用体外转录方法 高度稳定, 中性 ph 值确保核苷酸长期稳定保存 : -20 可稳定保存 3 年 ; 多次冻 - 融循环后仍然保持稳定 NTP Set ATP CTP GTP 和 UTP 溶液的套装组合, 每种的浓度均为 100 mm 应用 体外转录 ; RNA 扩增 ; sirna 合成 ; arna 合成 保存 -20 保存 #R0481 4x25 µmol (4x0.25 ml 100 mm 溶液 ) UTP UTP (uridine 5 -triphosphate, 尿苷 5 - 三磷酸 ) 以 100 mm 溶液形式 提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 应用 体外转录 ; RNA 扩增 ; sirna 合成 ; arna 合成 ATP ATP (adenosine 5 -triphosphate, 腺苷 5 - 三磷酸 ) 以 100 mm 溶液 形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 应用 体外转录 ; RNA 扩增 ; sirna 合成 ; arna 合成 ; 连接 ; 磷酸化 基本特性 λ max= 259 nm, ε = 15.4x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0). 保存 -20 保存 #R µmol (0.25 ml 100 mm 溶液 ) 基本特性 λ max= 262 nm, ε = 10.0x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0). 保存 -20 保存 分子式 C 10H 13N 5O 13P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :507.2) #R µmol (0.25 ml 100 mm 溶液 ) 24 分子式 C 9H 12N 2O 15P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :484.1)

29 CTP CTP (cytidine 5 -triphosphate, 胞苷 5 - 三磷酸 ) 以 100 mm 溶液形式 提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 应用 体外转录 ; RNA 扩增 ; sirna 合成 ; arna 合成 基本特性 λ max= 271 nm, ε = 9.0x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0). 保存 -20 保存 #R µmol (0.25 ml 100 mm 溶液 ) GTP GTP(guanosine 5 -triphosphate, 鸟苷 5 - 三磷酸 ) 以 100 mm 溶液 形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 应用 体外转录 ; RNA 扩增 ; sirna 合成 ; arna 合成 基本特性 λ max= 253 nm, ε = 13.7x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0). 保存 -20 保存 #R µmol (0.25 ml 100 mm 溶液 ) 分子诊断 分子式 C 9H 13N 3O 14P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :483.1) 分子式 C 10H 13N 5O 14P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :523.2) 25

30 3. 修饰的核苷酸, 分子生物学级别 分子诊断 Fluorescein-12-dUTP Fluorescein-12-dUTP( 荧光素 -5(6)- 甲酰氨基已酰 -[5-{3- 氨基烯丙基 }-2 - 脱氧尿苷 -5 - 三磷酸 ]) 以 1 mm 溶液形式提供 Fluorescein-12-dUTP 在 Taq DNA Polymerase phi29 DNA Polymerase DNA Polymerase I Klenow Fragment, exo Klenow Fragment 和反转录酶催化下掺入新合成 DNA 产物中 应用 PCR 切口平移 cdna 合成 随机引物标记和引物延伸等应用中酶促非放射性标记 DNA 基本特性 Ex max= 495 nm; Em max= 520 nm (ph 9.0) λ max= 495 nm, ε = 70.0x10 3 M -1 x cm -1 (ph 9.0) 保存 -20 避光保存 #R nmol (25 µl 1 mm 溶液 ) Biotin-11-dUTP Biotin-11-dUTP(biotin-ε-aminocaproyl-[5-{3-aminoallyl}-2 - deoxyuridine-5 -triphosphate], 生物素 -ε- 氨基己酰 -[5-{3- 氨基烯丙基 }-2 - 脱氧尿苷 -5 - 三磷酸 ]) 以 1 mm 浓度的溶液形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 Biotin-11-dUTP 在 Taq DNA Polymerase phi29 DNA Polymerase Klenow Fragment, exo Klenow Fragment DNA Polymerase I 和反转录酶催化下掺入新合成 DNA 产物中 应用 PCR 切口平移 cdna 合成 随机引物标记和引物延伸等应用中酶促非放射性标记 DNA 基本特性 λ max= 240 nm, ε =10.7x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) λ max= 289 nm, ε = 7.1x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 #R nmol (50 µl 1 mm 溶液 ) 分子式 C 39H 41N 4O 21P 3 分子量 分子式 C 28H 41N 6O 17P 3SNa 3 分子量 ( 酸形式 :861.6) dm 6 ATP dm 6 ATP(2 -deoxy-n6-methyladenosine 5 -triph-osphate,2 - 脱氧 -N6- 甲基腺苷 5 - 三磷酸 ) 以 10 mm 溶液形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 dm 6 ATP 在 Taq DNA Polymerase Klenow Fragment 催化下掺入到新合成 DNA 产物中 应用合成甲基化 DNA 基本特性 λ max= 265 nm ε = 15.4x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 dm 4 CTP dm 4 CTP(2 -deoxy-n4-methylcytidine 5 -triphos-phate,2 - 脱氧 -N4- 甲基胞苷 5 - 三磷酸 ) 以 10 mm 溶液形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 dm 4 CTP 在 Taq DNA Polymerase Klenow Fragment 催化下掺入到新合成 DNA 产物中 应用合成甲基化 DNA 基本特性 λ max= 274 nm ε = 13.6x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 #R µmol (0.1 ml 10 mm 溶液 ) #R µmol (0.1 ml 10 mm 溶液 ) 分子式 C 11H 15N 5O 12P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :507.2) 分子式 C 10H 15N 3O 13P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :481.1) 26

31 dm 5 CTP dm 5 CTP(2 -deoxy-5-methylcytidine 5 -triphosp-hate,2 - 脱氧 -5- 甲基 胞苷 5 - 三磷酸 ) 以 10 mm 溶液形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴 定为 7.0 dm 5 CTP 在 Taq DNA Polymerase Klenow Fragment 催化下掺 入到新合成 DNA 产物中 应用 合成甲基化 DNA 基本特性 λ max= 279 nm ε = 8.77x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 #R0431 1µmol (0.1ml 10 mm 溶液 ) 分子式 C 10H 15N 3O 13P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :481.1) Aminoallyl-dUTP Aminoallyl-dUTP (5-[3-aminoallyl]-2 deoxyuridine-5 -triphosphate, 5-[3- 氨基烯丙基 ]-2 - 脱氧鸟苷 -5 - 三磷酸 ) 以 10 mm 和 50 mm 两种浓度的溶液提供 ph 值经 NaOH 溶液精确滴定为 7.0 Aminoallyl-dUTP 在 Taq DNA Polymerase phi29 DNA Polymerase Klenow Fragment, exo Klenow Fragment DNA Polymerase I 和反转录酶催化下掺入新合成 DNA 产物中 含有氨基的 DNA 可被与氨基反应的荧光染料 生物素和半抗原所标记 应用 PCR 切口平移 cdna 合成 随机引物标记和引物延伸等应用中酶促非放射性间接标记 DNA 基本特性 λ max= 240 nm, ε =11.9x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) λ max= 290 nm, ε = 7.8x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 #R µmol (0.1 ml 10 mm 溶液 ) #R µmol (0.05 ml 50 mm 溶液 ) 分子诊断 Aminoallyl-UTP Aminoallyl-UTP(5-[3-aminoallyl]-2 -uridine-5 -triphosphate,5-[3- 氨基烯丙基 ]-2 - 尿苷 -5 - 三磷酸 ) 以 50 mm 溶液的形式提供 ph 值经 NaOH 精确滴定为 7.0 Aminoallyl-UTP 经 T7 T3 和 SP6 RNA Polymerase 催化掺入新合成 RNA 中 含有氨基的 RNA 可被与氨基反应的荧光染料 生物素和半抗原标记 应用体外转录酶促非放射性间接标记 RNA 基本特性 λ max= 240 nm, ε =11.9x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) λ max= 290 nm, ε = 7.8x10 3 M -1 x cm -1 (ph 7.0) 保存 -20 保存 分子式 C 12H 17N 3O 14P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :523.2) #R µmol (0.05 ml 50 mm solution) 分子式 C 12H 17N 3O 15P 3Na 3 分子量 ( 酸形式 :539.2) 27

32 PCR&qPCR 耗材 Thermo Scientific PCR 耗材 Thermo Scientific ( 原 ABgene) PCR 耗材, 在市场上已经有 25 年的历史, 已成为国际上众多医疗检测机构和生命科研 工业用户的指定用产品 我们的耗材均在英国生产, 采用医用级聚丙烯原料, 经过严密设计 制造和测试, 确保用户获得精确 可重复的 PCR 和 qpcr 实验数据 选择合适的 PCR 板 请参见下列兼容表格来找到适合您仪器的 Thermo Scientific 反应板 反应板型号推荐主要基于获得最佳的 PCR 性能以及易于使用的目的 Thermo Scientific PCR 耗材选择指南 :PCR 板 Bio-Rad Agilent (Stratagene) Thermal cyclers PCR qpcr PCR qpcr PCR MJ Mini T100 icycler, MyCycler C1000, S1000 PTC-2(xx) PTC-100 with 96-well block icycler iq4, iq5, MyiQ, MyiQ2 CFX96, CFX384 Opticon MiniOpticon SureCycler 8800 RoboCycler Gradient 96 Mx4000 Mx3000P, Mx3005P Eppendorf Roche Biometra Mastercycler Gradient Mastercycler ep Gradient, pro, nexus qpcr Mastercycler ep realplex qpcr LightCycler 480 LightCycler 96 PCR qpcr T1 Thermocycler TGradient/TAdvanced TRobot TProfessional TOptical Bibby Scientific (Techne) PCR qpcr Flexigene, TC-412, TC-4000 Genius, Touchgene, TC-512, TC-5000 TC-PLUS, Prime, PrimeG, Prime Elite PrimeQ Gene Technologies GS1, GS4, GSX Additional instruments PCR MWG- Biotech Takara Primus 96 Primus 384 THEQ Lifecycler TP 3000 Sequencing Amersham MJ Research Transgenomic MegaBACE 500 MegaBACE 1000 mark II MegaBACE 4000 BaseStation WAVE PCR Thermo Scientific PCR Express, Px2, PxE MultiBlock Satellite (MBS) System Piko 24 Piko 96 Arktik qpcr PikoReal 24 PikoReal 96 提示 低容反应管将 PCR 反应体系上方的空间最小化, 从而进一步减小了蒸发的影响 如果适用, 建议您选择低容反应管 分子诊断 96-well 全裙边低容 AB-0800, AB 全裙边, 机械操作低容 AB 半裙边标准 AB-1400 半裙边, 可分割标准 AB-0900 标准 AB-2596 半裙边, 机械操作低容 AB-2496 标准 AB-0600 无裙边低容 AB 或 48 孔板 半裙边标准 AB-0624, AB-0648 超薄壁 低容 24 孔 SPL 孔白色 SPL 孔 SPL 孔白色 SPL well 机械操作标准 AB-2384 标准标准 AB-1384 超大容量标准 AB-0937 优先推荐 亦可兼容 1 与 Agilent Stratagene 的 Perfect Fit Frames 兼容 2 对于在 2000 年 7 月以前购买的 MegaBACE 1000 仪器, 使用 PCR CycloPlate, 96 well ( 货号 AB-1243); 3 反应板仅与全裙边模块相兼容 * 大多数推荐的反应板都是全裙边或半裙边的, 因为这样的板刚性更强, 可减少热循环期间板的卷曲, 便于多通道移液, 提高整体的易用性 了解更多 请登录 thermofisher.com/thermoscientificplastics 29

33 Thermo Scientific PCR 耗材选择指南 : 单管, 联管和管盖 分子诊断 Bio-Rad Agilent (Stratagene) Eppendorf Biometra Bibby Scientific (Techne) Gene Technologies MWG-Biotech Takara Thermo Scientific Key 平盖 超透明盖 推荐 可兼容 管类型管盖类型管盖 T100, MJ Mini icycler, MyCycler C1000, S1000 PTC-2(xx) PTC-100 with 96-well block icycler iq4, iq5, MyiQ, MyiQ2 CFX96 Opticon MiniOpticon SureCycler 8800 RoboCycler Gradient 96 Mx4000 Mx3000P, Mx3005P Mastercycler Gradient Mastercycler ep Gradient, pro, nexus Mastercycler ep realplex T1 Thermocycler TGradient TRobot TProfessional TOptical Flexigene, TC-412, TC-4000 Genius, Touchgene, TC-512, TC-5000 TC-PLUS, Prime, PrimeG, Prime Elite GS1, GS4, GSX Primus 96 THEQ Lifecycler TP 3000 PCR Express, Px2, PxE MultiBlock Satellite (MBS) System Piko 24 Arktik PikoReal ml 单管, 标准 平盖 AB-0620 NA 0.5 ml 单管, 标准 平盖 AB-0350 NA 0.2 ml 八联管, 标准 0.2mL 带盖八联管, 标准 0.1 ml 单管, 低容 0.2 ml 八联管, 低容 VersiPlate 平盖 AB-1182 NA 超透明 AB-1183 NA 超透明 AB-1191 NA 超透明 AB-1502 NA 超透明 AB-1502/W NA 超透明 TUC0010 NA 超透明 TUC0011 NA 平盖 AB-0776 NA 超透明 AB-1770 NA 超透明 AB-1771 NA 平盖 AB-1800 AB-1815 超透明 AB-1820 超透明 AB-1800/W AB

34 Thermo Scientific PCR 耗材选择指南 : 密封产品 分子诊断 成功测试 * 不推荐 货号 包装 平盖 2 圆盖 2 超透明 qpcr 管盖 AB-0784 (8 caps per strip) AB-0265 (8 caps per strip) AB-0866 (8 caps per strip) PCR 联盖 用于超薄壁板 (UTW) 3 的超透明平盖 TCS-1080 (8 caps per strip) 平盖 VersiCap Mats 2 AB-1815 (12 x 8 strips) 超透明 VersiCap Mats AB-1820 (12 x 8 strips) 250 strips 250 strips 120 strips 120 strips 25 mats 25 mats PCR 封口箔片 PCR 封口膜 粘性封口膜 Piko PCR/ qpcr 封口膜 ABsolute qpcr 封口膜 AB-0626 AB-0558 ASF-0020 AB sheets 100 sheets 400 sheets 50 sheets 我们提供多种功能的封口产品以适应各种应用需求 所有封口产品均可用于为样本提供终极保护 同时也方便使用 Thermo Scientific qpcr 封口产品采用超透明的光学膜 确保您最大化和一致的信号传递 帮助获得准确的 qpcr 结果 应用 PCR ( 包括水浴 ) qpcr 密封温度范围 20 C to 120 C 20 C to 120 C 20 C to 120 C 20 C to 120 C 20 C to 120 C 20 C to 120 C 长期储存 40 C to 120 C 20 C to 120 C 20 C to 120 C 80 C to 110 C 了解更多 请登录 thermofisher.com/thermoscientificplastics 机械性能 可穿刺的 可剥离的 可重复封口 厚度 N force 75 µm 255 µm 255 µm 100 µm 耐受性 DMSO (100%) 乙醇 (100%) 异丙醇 (100%) 紫外线照射 γ- 射线照 覆膜工具 AB-0536 AB-0536 AB-0536 AB-1391 AB-1391 AB-1391 AB-1391 兼容产品 联管 / 板 PCR 8 联管 96 孔 PCR 板 PCR 8 联管 96 孔 PCR 板 PCR 8 联管 96 孔 PCR 板 SPL0240 SPL0241 PCR 8 联管 96 孔 PCR 板 PCR 8 联管 96 孔 PCR 板 所有板 所有板 SPL0240 SPL0241 SPL0960 SPL0961 所有板 不包括离型纸 2. 请根据仪器制造商的建议选择盖的形状 3. 超薄壁 25 33

35 Applied Biosystems PCR 耗材 优化的 MicroAmp PCR 耗材 专为 Applied Biosystems PCR 仪设计 经过严格的测试和优化 确保完全兼容的同时为快速高效的 PCR 扩增提供最精确和均一的温度 您可以根据通量的需求或 PCR 仪的样品基座来选择需要的产品 and genetic analyzers 了解更多 请登录 thermofisher.com/plastics Category/part description Cat. No. 3 x 32-well 96-well 96-well Fast 384-well Genetic analyzers ProFlex Veriti, ProFlex, SimpliAmp 96-well 0.2 ml plates Optical 96-Well Plate N , Optical 96-Well Plate with Barcode , Well Plate with Barcode & Optical Caps Optical 96-Well Plate with Barcode & Optical Adhesive Films EnduraPlate Optical 96-Well Clear Plate with Barcode* , well 0.1 ml plates Fast Optical 96-Well Plate, 0.1 ml Fast Optical 96-Well Plate with Barcode, 0.1 ml , EnduraPlate Optical 96-Well Fast Clear Plate with Barcode* , well plates Optical 384-Well Plate Optical 384-Well Plate with Barcode , , EnduraPlate Optical 384-Well Clear Plate with Barcode* , Strip tubes and caps Fast 8-Tube Strip, 0.1 ml Optical 8-Tube Strip with attached optical caps, 0.2 ml A Tube Strip with attached domed caps, 0.2 ml A Tube Strip, 0.2 ml N , N Optical 8-Tube Strip, 0.2 ml Cap Strip N , N , N Optical 8-Cap Strip Cap Strip N , N , N Single tubes Fast Reaction Tube with Cap, 0.1 ml , Reaction Tube with Cap, 0.2 ml N , N , N , N Reaction Tube without Cap, 0.2 ml N , N , N Optical Tube without Cap, 0.2 ml N Seals and covers Clear Adhesive Film Optical Adhesive Film , Well Full Plate Cover N Accessories Splash Free 96-Well Base Well Support Base Well Base N Well Reaction Tube/Tray/Retainer Set, 0.2 ml , *Multiple colors are available Veriti ProFlex, Veriti , 3130xl, 3500, 3500xL, 3730, 3730xl 分子诊断 35

36 Category/part description Cat. No. 48-well 96-well 96-well Fast 384-well StepOne , 7500 QuantStudio, ViiA7, 7900HT StepOne Plus 7500 QuantStudio, ViiA 7, 7900HT QuantStudio, ViiA 7, 7900HT 96-well 0.2 ml plates Optical 96-Well Plate N , Optical 96-Well Plate with Barcode , Optical 96-Well Plate with Barcode & Optical Caps Optical 96-Well Plate with Barcode & Optical Adhesive Films EnduraPlate Optical 96-Well Clear Plate with Barcode* , ** 96-well 0.1 ml plates Fast Optical 96-Well Plate, 0.1 ml Fast Optical 96-Well Plate with Barcode, 0.1 ml , EnduraPlate Optical 96-Well Fast Clear Plate with Barcode* , well plates Optical 384-Well Plate Optical 384-Well Plate with Barcode , , EnduraPlate Optical 384-Well Clear Plate with Barcode* , well plates Fast Optical 48-Well Plate Strip tubes and caps Fast 8-Tube Strip, 0.1 ml Optical 8-Tube Strip with attached optical caps, 0.2 ml A30588 Optical 8-Tube Strip, 0.2 ml Optical 8-Cap Strip Single tubes and caps Fast Reaction Tube with Cap, 0.1 ml Optical Tube without Cap, 0.2 ml N Seals and covers Optical Adhesive Film , Well Optical Adhesive Film Reaction trays 96-Well Tray/Retainer Set Fast 48-Well Tray Well Tray for VeriFlex Blocks Accessories Splash-Free 96-Well Base 10 bases Well Support Base 10 bases Well Base N *Multiple colors are available. ** = Requires use of proper adapter, Cat. No. A 分子诊断 Find out more at thermofisher.com/plastics 37

37 分子诊断 38

38 4 扩增分析 执行扩增分析 PCR 扩增仪器 ProFlex PCR 系统 分子诊断 最为灵活, 最高通量的高性能 PCR 仪 允许多位用户同时使用 利用三个独立的控制模块同时允许三个不同的程序 灵活的模块配置 可利用五种不同的加热模块进行优化和通量选择, 包括首款 3 32 孔独立模块 方便的远程登录 利用免费的手机应用程序, 在任何地方连接您的仪器 Veriti PCR 仪 操作简单, 性能可靠的热循环仪, 可供体外诊断使用 优于传统梯度 PCR 优化的新途径 VeriFelx 加热模块 操作简单 功能强大的触屏界面, 支持快速 PCR 反应, 可通过 U 盘方便地转移程序文件 Veriti DX 热循环仪 通过 CFDA 认证, 供体外诊断应用 SimpliAmp PCR 仪 优雅设计, 明智之选 设计紧凑 节省宝贵的实验台空间 操作简单 8 英尺的彩色触摸屏, 简化仪器操作 3 个独立的 PCR 优化控温区域 Veriti 模块 2720 PCR 仪 日常 PCR 应用的经济选择 设计小巧 cm, 后排风的设计允许并排放置 功能强大的软件 内置 Tm 值计算器, 以确定引物的推过温度 在断电的情况下, 机器仍能保留这些实验数据 精确的温度控制 热盖设计, 减少蒸发 自动化 PCR 仪 解放双手, 自动化 PCR 工作流程 设计小巧, 独立的控制模块, 节省空间 SiLA 兼容软件, 对接 Halmiton 等自动化工作站 提供电脑软件, 可作为一台独立的 PCR 仪运行 了解更多, 请登录 thermofisher.com/thermalcyclers 39

39 分子诊断 电泳产品 1. 琼脂糖 UltraPure 琼脂糖 UltraPure 琼脂糖可分离 100 bp 至 30 kb 以上的 DNA 和 RNA 片段 对于长度在 1000 bp 以下的小片段 DNA RNA 和 PCR 产物, 若想获得较好的分离效果, 建议使用 UltraPure 琼脂糖 1000 如果需要低熔点琼脂糖, 则可使用 UltraPure 低熔点琼脂糖, 其熔点约为 65 C, 适合分离长度在 1000 bp 以上的 DNA 和 RNA 片段 2. 预制琼脂糖凝胶电泳系统 E-Gel TM 预制琼脂糖凝胶电泳系统包括了 E-Gel TM ibase TM 电源系统 E-Gel TM Safe Imager 实时投射仪, 以及相配套的 E-Gel 预制凝胶系列 它是完全无缓冲液的电泳系统, 可用于 DNA 与 RNA 样品分析 迅速分离 - 采用预设的 speed E-gel 程序, 在 E-Gel ibase 电源系统上只需要 7 分钟, 即可分离 50bp-10kb 的样本 ( 可选琼脂糖浓度包括 0.8% 1.2% 和 2%) 实时观察 -E-Gel Safe Imager 实时透射仪与 E-Gel ibase 电源系统完美匹配, 可以实时观察到 SYBR TM Safe E-gel 中 DNA 的迁移 简单 快速提取 - 使用 E-Gel TM CloneWell TM 凝胶, 无需纯化试剂盒, 即可快速简单的收集各 DNA 条带 产品 规格 货号 Agarose, molecular biology grade 100 g UltraPure Agarose 100 g UltraPure Low Melting Point Agarose 100 g UltraPure Agarose g 预制琼脂糖凝胶 凝胶类型应用范围单 / 双梳加样孔数电泳长度电泳时间 低通量预制琼脂糖凝胶 E-Gel CloneWell E-Gel SizeSelect E-Gel NGS 快速回收 DNA 条带, 用于下游克隆或文库构建 适用于二代测序应用, 分离长片段 DNA 双梳 cm 14 to 36 min 双梳 cm 8.5 to 20.5 min 单梳 cm 26 min E-Gel EX 最快速的分离凝胶 单梳 cm 10 min 10 min 15 min E-Gel 常规用途 单梳 cm 30 min 双梳 cm 15 min 中 / 高通量预制琼脂糖凝胶 E-Gel 48 双梳 cm 20 min E-Gel 96 双梳 cm 12 min Step 1: Snap in E-Gel precast gel Step 2: Load samples and markers Step 3: Run with preset or personalized protocol 40

40 3.DNA Ladders/DNA markers 赛默飞拥有一系列的 DNA ladders 和 markers 不同系列, 不同规格, 可根据您的实验应用需求自由选择 DNA ladder/marker 类型 NoLimits Custom DNA Ladders GeneRuler and O GeneRuler DNA Ladders MassRuler DNA Ladders FastRuler DNA Ladders O'RangeRuler DNA Ladders ZipRuler Express DNA Ladders Conventional DNA Markers Conventional Phage and Plasmid DNA Markers 备注 分子量 bp 琼脂糖凝胶分离时间 时间长短与条带种类有关 10 分钟 小时 并不是各类型内所有的 DNA ladders/markers 都适合上表所列的应用 * 只标出了保存在 TE 缓冲液中的 DNA ladders/markers 特点 主要特点来源形式 根据客户要求配制, 可大量订购 宽范围双链 DNA 的分子量鉴定和定量 分钟精确定量 DNA 分钟 分钟 小时 分钟 分钟 - 18 小时 45 分钟 小时 短距离电泳快速分离 DNA 片段 梯度 Ladders, 条带增量有 5, 10, 20, 50, 100, 200, 500 bp 不等 宽范围 DNA 片段分子量的快速 精确鉴定 经典 markers 经典 markers 单一条带, 独立包装, 层析纯化的 DNA 片段 层析纯化的 DNA 片段, 多种条带的混合物层析纯化的 DNA 片段, 多种条带的混合物 TE 缓冲液保存 - 常规或即用型 TE 缓冲液保存 - 常规或即用型 即用型 层析纯化的 5 条 DNA 片段, 即用型多种条带的混合物 5, 10, 15, 20, 50, 100, 200, 500 bp DNA 片段连接产物 层析纯化的 DNA 片段, 多种条带的混合物 切割的 Lambda DNA 切割的 Phage 和质粒 DNA 即用型 即用型 TE 缓冲液保存 - 普通或即用型 TE 缓冲液保存 - 普通或即用型 提供的上样染料 各种 Thermo Scientific TM 上样染料, 依需求而定 6X DNA Loading Dye 或 6X Orange Loading Dye 6X MassRuler Loading Dye 6X MassRuler Loading Dye, 6X Orange Loading Dye 6X Orange Loading Dye 6X Orange Loading Dye 6X DNA Loading Dye 6X DNA Loading Dye 使用次数 电泳 标记试剂 * 琼脂糖 PAGE 快速 定量 T4 PNK Klenow 分子诊断 41

41 分子诊断 基于二代测序实验流程 分子诊断 1 样品提取 2 文库制备 3 测序 4 数据分析 核酸纯化 片段化和片段回收 在 IonTorrent 或 Illumina 测序平 利用与平台配套的软件, 输 核酸富集 反转录 台上通过测序, 进行基因表达 出多种软件方案可使用的标 末端处理和加 A 谱分析或小 RNA 分析 准 (FASTQ SFF SAM 或 接头连接片段扩增 BAM 数据输出 ) 文件格式, 供二次分析使用 文库质量检测 随着二代测序技术的快速发展, 大家的目光大多聚焦在二代测序仪本身及其功能上, 不过要享受仪器带来的便利, 我们首先还得准备好测序样品, 这可绝不仅仅是提个 DNA 而已 如何提取和制备高质量的 DNA, 并将其转换为高质量文库是测序成功的关键 测序文库指的是连有相应的接头的一系列 DNA 片段, 其长度和接头序列都适于测序仪进行处理 当然, 文库制备的步骤取决于您的应用和所选择的测序仪 例如, 要构建转录组文库就需要进行 cdna 合成, 要制备 ChIP-seq 文库当然也少不了 ChIP 用于单方向测序的文库与末端配对文库的制备步骤也是不同的 样品提取和文库制备过程通常都包含一些与测序平台无关的核心步骤, 本手册主要以 RNA-seq 作为主要应用, 向您介绍和推荐在核酸提取 文库制备各个步骤中需要用到的产品, 以及在每一个应用阶段中各产品的特点及其发挥的作用 我们介绍的产品是基于样本提取和文库制备的通用步骤, 通用性强,Ion torrent 和 Illumina 平台均适用 样品提取 - 核酸纯化...42 文库制备 - 片段化和片段回收 反转录 末端处理和加 A 接头连接 片段扩增 文库质量检测...51 Microbial sequencing Targeted sequencing Transcriptome sequencing Exome sequencing Ion PGM Sequencer Ion Proton Sequencer 42

42 1 样本提取 核酸纯化 RNA 纯化 1. 总 RNA 纯化 TRIzol 试剂 PureLink 试剂盒 MagMAX 试剂盒 Cell-to-CT 试剂盒 分子诊断 处理大量组织从各种样本中快速分离 RNA 高通量的 RNA 和 DNA 纯化处理细胞用于基因表达 制备时间 60 分钟 <20 分钟 45 分钟 10 分钟 样本类型 大多数样本, 尤其是难以 细菌 液体 血液 细胞 细胞 血液 植物 培养的细胞 裂解的样本 酵母 植物 组织 起始材料 100 mg 组织或 10 7 个细胞 10 8 个细胞 200 mg 组织 mg 组织或 5 x10 6 个细胞 1 100,000 个细胞 mg 植物 0.2 ml 血液 5 x 10 8 酵母 10 9 细菌 产量 1 x 10 6 个上皮细胞 :8 15 至多 350 μg 取决于样本 不适用 μg, 烟草叶 :73 μg 高通量兼容性 技术有机萃取硅胶模离心柱 / 过滤板磁珠裂解初产物 2. mrna 纯化 Dynabeads mrna 纯化试剂盒 Dynabeads mrna DIRECT 纯化试剂盒 Dynabeads mrna DIRECT 微量提取试剂盒 mrna Catcher Plus 纯化试剂盒 从总 RNA 中快速纯化 mrna 无需纯化, 直接从原始样本中提取 mrna 从微量样本中提取 mrna 从总 RNA 中直接提取或富集高通量 mrna 制备时间 15 分钟 15 分钟 15 分钟 90 分钟 从原始样本中分离 从总 RNA 中富集 样本类型 总 RNA 液体 RNA FFPE 和固定 酵 母 血液 组织 病毒 植 物 细胞 起始材料 75μg 总 RNA 2 x 10 7 个细胞,2 200 mg 组 织,4 400 mg 植物 液体 RNA FFPE 和固定 酵母 血液 组织 病毒 植物 细胞 总 RNA 血液 哺乳动物组织和细胞 1 x 10 4 个细胞,5 mg 组织或植物 100 至 1 x 10 6 个细胞,4 mg 组织,40 μl 全血,100ng 100μg 总 RNA 高通量兼容性 技术磁珠磁珠磁珠 Oligo dt 亲和力 43

43 3.MicroRNA 和小 RNA 纯化 分子诊断 mirvana mirna 分离试剂盒 MagMAX mirvana 总 RNA 提取试剂盒 TaqMan microrna Cells-to- CT 试剂盒 在 30 分钟内实现大部分样本的提取高通量 纯化 浓缩 microrna 整套试剂盒, 从细胞到 qpcr 制备时间 30 分钟 <60 分钟 10 分钟 样本类型细菌 细胞 酵母 植物 组织 病毒血浆 / 血清 全血 组织 细胞 尿液细胞 起始材料 250 mg 组织或 10 7 个细胞 100 mg 组织或 5 x10 6 个细胞 ,000 个细胞 高通量兼容性 技术有机萃取和硅胶膜离心柱磁珠 ( 不含酚 ) 裂解粗产物 4. 病毒 RNA 纯化 新鲜或冷冻的无细胞生物液体 环境和生物液体样本 高质量纯化分离 低病毒浓度 PureLink 病毒 RNA/ DNA 试剂盒 MagMAX 病毒 RNA 提取试剂盒 分钟制备时间 30 分钟制备时间 高通量兼容性 高通量兼容性 44

44 更多 RNA 抽提产品 货号产品名称产品规格产品应用 Dynabeads mrna DIRECT Purification Kit 5 ml mrna 抽提 Dynabeads mrna Purification Kit 2 ml 从总 RNA 中富集纯化 mrna AM1830 MagMAX-96 Total RNA Isolation Kit 96 preps RNA 提取, 适合广泛的样品类型, 兼容高通量平台 AM1912M RNAqueous Total RNA Isolation Kit, with 50 preps 总 RNA 抽提, 操作简便, 注射器形式 Manual AM1931 RNAqueous-Micro Total RNA Isolation Kit 50 preps 小量起始样本总 RNA 抽提 AM9690 Plant RNA Isolation Aid 10 ml 植物总 RNA 提取 分子诊断 在以基因组 DNA 为起始样品的测序中, 我们推荐的产品有 : 货号 产品名称 产品规格 产品应用 K PureLink Genomic DNA Mini Kit 50 preps 基因组 DNA 抽提 K PureLink Genomic Plant DNA Purification Kit 50 preps 植物基因组 DNA 抽提 37012D Dynabeads SILANE Genomic DNA Kit 96 preps 血液基因组 DNA 抽提 ( 高重复性, 可用于自动化操作系统 ) Dynabeads DNA DIRECT Blood Kit 100 preps 血液基因组 DNA 抽提, 操作简单 ( 一管完成所有步骤 ) Dynabeads DNA DIRECT Universal Kit 300 preps 适合各种样本类型 ( 真菌, 细菌, 口腔黏膜, 血液, 组织, 细胞 ) 的基因组 DNA 提取 MagMAX-96 DNA Multi-Sample Kit 96 preps 96 孔板高通量 DNA 抽提 CS18000 ChargeSwitch gdna Plant Kit 96 preps 从各种植物组织和真菌中抽提基因组 DNADNA, 兼容高通 量平台 45

45 2 文库制备 分子诊断 文库制备的主要的工作流程包括核酸的片段话, 末端修复, 添加 A 悬垂, 连接接头 (adaptor), 片段的纯化回收, 片段的扩 增, 文库的质量检测 核酸片段化 提取的 DNA 或 RNA 进行片段化主要有物理和化学两种方法 CovarisS2 是通过超声的方法对核酸进行打断, 用物理的方法进行片段化, 操作简单快速 Ambion RNA 片段化试剂 ( 货号 :AM8740) 是专为 RNA 片段化而研发, 可生成 bp 的核苷酸片段, 重复性好, 容易定量操作 产品货号 CovarisS2 /S220 System Tubes & Caps RNA Fragmentation Reagents AM

46 反转录 对于 RNA 样本, 还需要进行反转录合成 cdna Invitrogen 的 SuperScript 反转录系列酶因其出众的性能, 成为二代测序中的 cdna 合成的第一选择, 被广泛采用并引用 同时,Thermo Scientific Maxima 反转录酶通过体外进化改造, 可以在更高的温度下 (50-60 ) 进行反转录反应, 可合成长达 20 kb 的全长 cdna, 并且具有很强的抗反应抑制剂能力 更多反转录产品信息请查阅本手册第 页 分子诊断 末端修复和修饰 片段化的核酸需要进一步的末端修复, 保证片段质量, 并添加接头, 适用于后续的模板制备和测序 该步骤将用到多 种类型的酶, 包括 DNA 聚合酶, 连接酶, 修饰酶等 现将部分推荐产品及其相关用途总结在下表中 用途产品货号 末端修复 加 A 加接头 Anza DNA End Repair Kit IVGN2504 Fast DNA End Repair Kit K0771 T4 DNA Polymerase T4 DNA Polymerase, 500 U EP0062 DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment DNA Polymerase I, 2500 U EP0042 T4 Polynucleotide Kinase T4 Polynucleotide Kinase (10 U/μL) EK0032 Exo-Klenow Fragment (cloned), DNA Polymerase I, 5 U/ L AM2008 Klenow Fragment1500U EP0052 T4 DNA Ligase Anza T4 DNA Ligase Master Mix IVGN2108 T4 DNA Ligase, 1000 U EL

47 磷酸酶 & 激酶 磷酸酶 / 激酶应用底物催化反应反应产物反应条件失活目录号 # 分子诊断 FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase T4 Polynucleotide Kinase (T4 PNK) DNA,RNA 和寡核苷酸去磷酸化处理 DNA 载体去磷酸化避免载体自连 测序前 PCR 产物的纯化 蛋白去磷酸化 连接前 PCR 产物的磷酸化处理 PCR 引物磷酸化 连接前, 寡核苷酸接头 DNA 或 RNA 的 5 - 磷酸化 核酸的 5 - 端标记 测序引物标记 DNA 和 RNA 分子量标准的标记 [ 32 P]- 后标记方法检测 DNA 修饰 切除 3 - 磷酸基团 5 - 和 3 - 磷酸化的 DNA/RNA, 寡核苷酸 ; dntps/ntps; 磷酸化的蛋白 ATP*,DNA/ RNA, 寡核苷酸,3 -NMP,3 - 磷酸化的 DNA/ RNA,3 -P- 寡核苷酸脱氧核糖核苷 3 - 单磷酸, 脱氧核糖核苷 3 - 双磷酸 释放磷酸基团 将 ATP* 的 γ- 磷酸转移到 DNA/ RNA 寡核苷酸 3 -NMP 的 5 -OH 基团上 ; 5 -P- 寡核苷酸 / 多聚核苷酸和 ATP 之间的磷酸基团交换 (ADP 存在时 ) 释放 3 - 磷酸基团 具有 5, 3 - 羟基末端的 DNA / RNA, 寡核苷酸, 脱氧核苷 / 核苷, 去磷酸化蛋白 5 - 磷酸化的 DNA /RNA 或 5 -P- 寡核苷酸,3, 5 -NDP,3 - 去磷酸化的 DNA / RNA 寡核苷酸, 脱氧核糖核苷酸 37, 10 分钟 37, 20 分钟 75, 5 分钟 分钟 ; 或者加入 EDTA EF0651 EF0652 EK0031 EK0032 FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase (FastAP 热敏碱性磷酸酶 ) 催化 DNA,RNA 和核苷酸的 5 - 和 3 - 磷酸基团 该酶也可从蛋白中除去磷酸基团 FastAP 是一种新型的碱性磷酸酶, 在赛默飞所有限制性内切酶缓冲液 PCR 和 RT 缓冲液中均有活性 分钟内可去磷酸化处理各种 DNA 末端 75 加热 5 分钟可使酶完全失活, 因此连接前无需除去碱性磷酸酶 % 残留的活性 孵育时间, 分钟 75 时,FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase 的热失活曲线 DNA 的去磷酸化混合物 37 孵育 30 分钟 (200 u/ml 磷酸酶 ) 后分成多个小份,75 加热, 不同时间点采用 p-npp 分析方法检测残留的酶活性 产品 规格 货号 FastAP Thermosensitive Alkaline 1000 units EF0651 Phosphatase (1 U/µL) FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase (1 U/µL) units EF0652 T4 Polynucleotide Kinase (T4 PNK) T4 Polynucleotide Kinase (T4 多聚核苷酸激酶,T4 PNK) 催化 ATP 的 γ- 磷酸基团转移到单链或双链 DNA RNA 寡核苷酸 3 - 单磷酸核苷的 5 -OH( 正向反应 ) 处 该催化反应是可逆的 当 ADP 存在时,T4 Polynucleotide Kinase 具有 5 - 磷酸酶活性, 催化 5 -P- 寡聚 -/ 多聚核苷酸和 ATP 末端 5 - 磷酸基团的交换 ( 置 换反应 ) 该酶还具有 3 - 磷酸酶活性 x10 6 dpm/pmol 5 - 末端 突出末端 DNA 不同类型 5 末端的 DNA 标记效率 正向反应选择缓冲液 A 置换反应选择缓冲液 B 平末端 DNA 5 - 缩进末端 DNA 产品 规格 货号 T4 Polynucleotide Kinase (10 U/µL) 500 units EK0031 T4 Polynucleotide Kinase (10 U/µL) 2500 units EK

48 DNA 聚合酶 聚合酶应用模板 phi29 DNA Polymerase 滚环扩增 多重置换扩增 全基因扩增 DNA 测序 蛋白质引物介导的 DNA 扩增 RNA 引物介导的 DNA 扩增 原位基因分型 重组克隆 危险 DNA 的无细胞克隆 缺口平移方法标记 DNA DNA Polymerase I cdna 第二链合成. Klenow Fragment Klenow Fragment, exo T4 DNA Polymerase T7 DNA Polymerase Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT) Bsm DNA Polymerase 5 - 突出末端补平使 DNA 平端化 随机引物法 DNA 标记 dsdna 5 - 突出末端补平标记 DNA 测序 合成寡核苷酸介导的 DNA 定点突变 cdna 第二链合成 随机引物法 DNA 标记 dsdna 5 - 突出末端补平标记 链置换扩增 DNA 测序 5 - 或 3 - 突出末端 DNA 平端化处理 PCR 产物 3 -da 突出末端平端化 DNA 标记 定点突变 连接依赖性克隆 PCR 产物 除去残留的基因组 DNA, 纯化共价闭环的 DNA 长片段模板引物延伸反应 DNA 3 - 末端标记 突变位点的延伸链 DNA 的 5 - 突出末端补平 cdna 第二链合成 原位检测凋亡相关的 DNA 片段 产生合成的同聚物和杂聚物 含有各种 3 -OH 末端的线性双链 DNA 的同聚物加尾 寡聚脱氧核糖核酸和 DNA 标记 5 -RACE. 凋亡的原位定位 滚环等温扩增 (LAMP) 全基因扩增 ( WGA). 分枝扩增 ( RAM ). 随机引物法 DNA 标记 dsdna 5 - 突出末端补平标记 3 5 外切核酸酶 5 3 外切核酸酶 链置换失活目录号 # DNA , 10min DNA , 10min DNA , 10min DNA ++ 75, 10min DNA , 10min EP0091 EP0092 EP0094 EP0041 EP0042 EP0051 EP0052 EP0054 EP0421 EP0422 EP0061 EP0062 DNA , 10min EP0081 ssdna dsdna ssrna dsrna NA 70, 10min EP0161 EP0162 DNA , 10 min EP0691 分子诊断 DNA Polymerase I DNA Polymerase I 是一种模板依赖性 DNA 聚合酶, 催化按 5 3 方向合成 DNA 此外, 该酶还具有 3 5 外切核酸酶活性 ( 校正 ) 5 3 外切核酸酶活性和核糖核酸酶 H 活性 特点 合成掺入修饰的核苷酸 在赛默飞所有限制性内切酶 PCR 和 RT 缓冲液中有活性 应用 在 DNase I 协同作用下的 DNA 缺口平移标记 在 RNase H 协同作用下合成第二链 cdna 产品 规格 货号 DNA Polymerase I (10 U/µL) 500 units EP0041 DNA Polymerase I (10 U/µL) 2500 units EP

49 分子诊断 50 phi29 DNA Polymerase phi29 DNA Polymerase 是一种高持续扩增能力的聚合酶 ( 最长达 70kb), 具有很强的链置换活性, 适合高效的等温 DNA 扩增 此外,phi29 DNA Polymerase 还具有单链 DNA(2) 或 RNA 偏好的 3 5 外切酶 ( 校正 ) 活性, 因此重点推荐使用 3 - 端修饰的引物 特点 在所有已知的聚合酶中, 具有最高的合成持续性和链置换活性 最长可合成 70 kb 长度的 DNA 片段 高准确性 DNA 合成 高产量扩增 DNA, 即使微量模板也能高效扩增 扩增产物可以直接用于下游应用, 如 PCR 限制性内切酶切 SNP 基因分型等 应用 滚环复制 (RCA): 定期制备 DNA 模板 多重置换扩增 (MDA) 全基因组非偏好性扩增 (WGA) : - DNA 扩增,SNP 和 STR 检测 ; - 从单细胞 致病生物或宏基组中无细胞扩增 DNA; - 从滤纸的血迹标本扩增 DNA 测序 DNA 模板制备 蛋白引物介导的 DNA 扩增 RNA 引物引导的 DNA 扩增 锁式探针原位基因型分析 重组克隆 无细胞克隆致死 DNA 产品 规格 货号 phi29 DNA Polymerase (10 U/µL) 1000 units EP0092 phi29 DNA Polymerase (10 U/µL) 5000 units EP0094 Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT) Terminal Deoxynucleotidyl Transferase ( 末端脱氧核苷转移 酶,TdT) 是一种模板非依赖型 DNA 聚合酶, 催化在寡核苷 酸 单链和双链 DNA 的 3 -OH 重复添加脱氧核糖核苷酸 TdT 反应需要含有至少 3 个核苷酸的寡核苷酸作为引物 特点 合成掺入修饰的核苷酸 ( 如荧光素 生物素 氨基标记的核苷酸 ) 应用 合成同聚物和杂聚物 线性双链 DNA 的 3 -OH 末端加尾 寡聚脱氧核苷酸和 DNA 标记 5 -RACE ( 快速扩增 cdna 末端 ) 产品 规格 货号 Terminal Deoxynucleotidyl Transferase 500 units EP0161 (20 U/µL) Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (20 U/µL) 2500 units EP0162 T7 DNA Polymerase T7 DNA Polymerase 是一种模板依赖型 DNA 聚合酶, 催化 5 3 方向的 DNA 合成 该 DNA 聚合酶具有高持续合成能力, 可持续合成长片段 DNA 该酶对单链和双链 DNA 有 3 5 外切核酸酶活性 特点 很强的 3 5 外切核酸酶活性, 大约是 Klenow Fragment 的 1000 倍 在赛默飞所有限制性内切酶缓冲液中有活性 应用 除去残留的基因组 DNA 长片段引物延伸反应 DNA 3 - 末端标记 定点突变中链的延伸 DNA 5 - 突出端补平 第二链 cdna 合成 产品规格货号 T7 DNA Polymerase (10 U/µL) 300 units EP0081 Klenow Fragment Klenow Fragment 是 DNA PolymeraseI ( 大肠杆菌 ) 的大片段 该酶具有 5 3 聚合酶活性和 3 5 外切核酸酶 ( 校正 ) 活性, 但是缺乏 DNA polymerase I 所具有的 5 3 外切核酸酶活性 特点 合成掺入修饰核苷酸 在赛默飞限制性内切酶 PCR RT 和 T4 DNA 连接酶缓冲液中有活性 应用 DNA 平端化,5 - 突出末端补平 随机引物 DNA 标记 补平方法标记 dsdna 5 - 突出末端 Sanger 方法测序 DNA 寡核苷酸介导的 DNA 定点突变 第二链 cdna 合成 产品规格货号 Klenow Fragment (10 U/µL) 300 units EP0051 Klenow Fragment (10 U/µL) 1500 units EP0052 Klenow Fragment, LC (2 U/µL) 300 units EP0054

50 片段纯化和回收 在二代测序的文库制备中, 还将用到一系列核酸片段纯化和回收的试剂 常用的方法有胶回收和磁珠纯化的方法 E-Gel 预制琼脂糖凝胶电泳系统以及相配套的 E-Gel 预制凝胶系列, 它是完全无缓冲液的电泳系统, 可用于 DNA 与 RNA 样品分析 使用 E-Gel Size select 系统, 无需切胶回收, 通过简单快速的步骤完成 DNA 的凝胶纯化 采用双排孔设计, 将样品加到上面一排孔中, 随着凝胶电泳的进行, 条带逐渐分开 当各条带进入底部一排孔后, 可将其收集起来 E-Gel ibase 电源系统具有反向电泳功能, 即使您感兴趣的条带已经穿过收集孔, 也可利用此功能回收此条带 分子诊断 设备 规格 货号 E-Gel ibase 电源系统 1 台 G6400CH E-Gel ibase 电源系统 E-Gel Safe Imager 实时透射仪 1 套 G6465CH E-Gel Safe Imager 实时透射仪 1 台 G6500 E-Gel sizeselect 起始套装,2% 1 套 G6612STCH E-Gel NGS 琼脂糖凝胶套装,0.8% 1 套 A25798STCH 其它回收和纯化产品 产品名称 货号 PureLink Quick Gel Extraction and PCR Purification Combo Kit K PureLink Quick Gel Extraction Kit K2100 GeneJET PCR Purification Kit K0701 GeneJET Gel Extraction Kit K0691 GeneJET NGS Cleanup Kit K0851 PCR 扩增 针对二代测序应用的特点, 用于测序模板扩增的 PCR 酶必须是具有高保真功能的 DNA 聚合酶 我们可以提供一系列的高保真 DNA 聚合酶可供选择, 如 : Invitrogen Platinum SuperFi DNA Polymerase Thermo Scientific Phusion High-Fidelity DNA Polymerase 详细信息请参考本手册第 19 页 51

51 样本和文库的定量和检验 Qubit TM 荧光定量 分子诊断 Qubit TM 荧光定量将易于使用的荧光计与高度灵敏的荧光定量分析试剂盒相结合 Qubit 荧光计体积小巧, 价格实惠, 可与 Qubit 分析试剂盒无缝配合, 用于常规 DNA RNA 和蛋白质定量 详细产品信息请参照本手册第 8 页 附录 : 订购信息 应用阶段 产品名称 货号 产品应用 样本稳定和提取样品稳定 RNALATER 100 ML AM7020 用于稳定和保护样品中的 RNA 以备以后处理 样品稳定 RNALATER 500 ML AM7021 用于稳定和保护样品中的 RNA 以备以后处理 总核酸抽提 RECOVERALL TOTAL NA ISO 40RXN. 2 PT AM1975 从 FFPE 样品中抽提总核酸 总核酸抽提 PURELINK VIRAL RNA/DNA KIT 50 RXN KIT 从样品中抽提病毒 RNA 和 DNA 总核酸抽提 GeneJET Viral DNA and RNA Purification Kit K0821 从样品中抽提病毒 RNA 和 DNA 总 RNA 抽提 PURELINK RNA MINI KIT 50 PREPS A 从样品中抽提总 RNA 总 RNA 抽提 TRIZOL REAGENT 100ML 从样品中抽提总 RNA 总 RNA 抽提 TRIZOL REAGENT 200ML 从样品中抽提总 RNA 总 RNA 抽提 CONCERT PLANT RNA REAGENT 100 ML 从植物样品 ( 甚至难于处理的样品, 如松柏组织和种子 ) 分离高产量高品质 RNA 总 RNA 抽提 TRIZOL LS REAGENT 100ML 从液体样品中抽提总 RNA 总 RNA 抽提 TRIZOL LS REAGENT 200ML 从液体样品中抽提总 RNA 总 RNA 抽提 MICROBENRICH 20 RXN (2 PTS) EACH AM1901 从混合样品中分离提取细菌 RNA 总 RNA 抽提 RIBOPURE - YEAST 1 KIT(2PARTS) EACH AM1926 从酵母样品中抽提高质量的 RNA 总 RNA 抽提 GeneJET RNA Purification Kit K0731 从样品中抽提总 RNA 总 RNA 抽提 GeneJET RNA Purification Kit K0732 从样品中抽提总 RNA 总 RNA 抽提 GeneJET Plant RNA Purification Kit K0801 从植物样品中抽提总 RNA 总 RNA 抽提 GeneJET Plant RNA Purification Kit K0802 从植物样品中抽提总 RNA 总 RNA 抽提 GeneJET Stabilized and Fresh Whole Blood RNA K0871 从血液样本中抽提总 RNA Kit 总 RNA 抽提 MagJET Plant RNA Kit K2771 磁珠法纯化植物 RNA 总 RNA 抽提 MagJET Plant RNA Kit K2772 磁珠法纯化植物 RNA 总 RNA 抽提 MagJET RNA Kit K2731 磁珠法纯化 RNA 总 RNA 抽提 MagJET RNA Kit K2732 磁珠法纯化 RNA 总 RNA 抽提 MagJET Whole Blood RNA Kit K2751 磁珠法纯化全血 RNA mrna 分离 DYNABEADS MRNA DIRECT KIT 2 X 5 ML 从总 RNA 中提取 mrna, 同时可以在 beads 上进行 RT 和 PCR mrna 分离 DYNABEADS MRNA DIRECT KIT KIT 从总 RNA 中提取 mrna, 同时可以在 beads 上进行 RT 和 PCR mrna 分离 DYNABEADS MRNA PURIFICATION KIT 从总 RNA 中纯化 mrna rrna 去除 RiboMinus Eukaryote System v2 A15026 RNA-seq 前, 去除 rrna ( 它占了 90-99% 的总 RNA) rrna 去除 Low Input RiboMinus Eukaryote System v2 A15027 RNA-seq 前, 去除 rrna ( 它占了 90-99% 的总 RNA) rrna 去除 RiboMinus Plant Kit for RNA-Seq A 植物 RNA-seq 前,rRNA 去除 rrna 去除 RiboMinus Transcriptome Isolation Kit, bacteria K 细菌 RNA-seq 前,rRNA 去除 rrna 去除 RiboMinus Transcriptome Isolation Kit, yeast K 酵母 RNA-seq 前,rRNA 去除 52

52 小 RNA 分离 MIRVANA(TM) MIRNA ISOLATION ISO AM1561 从组织和细胞中分离小 RNA, 用于 mirna 测序 DNA/RNA 富集 DB MYONE STREPTAVIDIN T1 10 ML 富集核酸 DNA/RNA 富集 DB MYONE STREPTAVIDIN C1 10 ML 富集核酸 DNA/RNA 富集 DB MYONE STREPTAVIDIN C1 2 ML 富集核酸 DNA/RNA 富集 DB MYONE STREPTAVIDIN T1 2 ML 富集核酸 DNA/RNA 富集 DYNABEADS M-280 STREPTAVIDIN 10 ML 11206D 富集核酸 DNA/RNA 富集 DYNABEADS M-280 STREPTAVIDIN 100 ML 富集核酸 DNA/RNA 富集 DYNABEADS M-280 STREPTAVIDIN 2 ML 11205D 富集核酸 DNA/RNA 富集 MagJET mrna Enrichment Kit, 10 preps K2811 mrna 富集 DNA/RNA 富集 MagJET mrna Enrichment Kit, 96 preps K2812 mrna 富集 RNA 片段化 RNA Fragmentation Reagents AM8740 把 RNA 片段打断成小片段 基因组 DNA 抽提 GeneJET Genomic DNA Purification Kit K0721 从样品中抽提基因组 DNA 分子诊断 基因组 DNA 抽提 GeneJET Genomic DNA Purification Kit K0722 从样品中抽提基因组 DNA 基因组 DNA 抽提 GeneJET Whole Blood Genomic DNA Purification K0781 抽提血液中的 DNA Mini Kit 基因组 DNA 抽提 GeneJET Whole Blood Genomic DNA Purification K0782 抽提血液中的 DNA Mini Kit 基因组 DNA 抽提 GeneJET Plant Genomic DNA Purification Kit K0791 从植物样品中抽提基因组 DNA 基因组 DNA 抽提 GeneJET Plant Genomic DNA Purification Kit K0792 从植物样品中抽提基因组 DNA 基因组 DNA 抽提 GeneJET FFPE DNA Purification Kit K0881 从 FFPE 组织中抽提 DNA 基因组 DNA 抽提 GeneJET FFPE DNA Purification Kit K0882 从 FFPE 组织中抽提 DNA 基因组 DNA 抽提 PURELINK GENOMIC DNA KIT (250) 250 RXN K 从样品中抽提基因组 DNA 基因组 DNA 抽提 CHARGESWITCH GDNA PLANT 96 PREPS CS18000 抽提植物中的基因组 DNA 基因组 DNA 抽提 Dynabeads SILANE viral NA 37011D 抽提血液中的 DNA( 例如产前诊断 ) 基因组 DNA 抽提 MagMAX DNA Multi-Sample Ultra Kit (500 preps) 基因组 DNA 抽提 MagMAX DNA Multi-Sample Ultra Kit (2500 preps) 基因组 DNA 抽提 基因组 DNA 抽提 MagMAX DNA Multi-Sample Ultra Kit (with extra PK and Beads) MagMAX DNA Multi-Sample Ultra Kit (with extra PK and Beads) A25597 A25598 A25919 A25920 磁珠法纯化基因组 DNA, 可用于 Ion Amplisec, 可用于高通量和自动化 磁珠法纯化基因组 DNA, 可用于 Ion Amplisec, 可用于高通量和自动化 磁珠法纯化基因组 DNA, 可用于 Ion Amplisec, 可用于高通量和自动化 磁珠法纯化基因组 DNA, 可用于 Ion Amplisec, 可用于高通量和自动化 基因组 DNA 抽提 Proteinase K (100mg/mL) A25561 磁珠法纯化基因组 DNA, 可用于自动化, 配套 组分 基因组 DNA 抽提 DNA Binding Beads for MagMAX DNA Multi- Sample Ultra Kit A25562 磁珠法纯化基因组 DNA, 可用于自动化, 配套组分 基因组 DNA 抽提 Wash Solution 1 Concentrate, AM8504 磁珠法纯化基因组 DNA, 可用于自动化, 配套 组分 基因组 DNA 抽提 Wash Solution 2 Concentrate AM8640 磁珠法纯化基因组 DNA, 可用于自动化, 配套 组分 基因组 DNA 抽提 MagJET Genomic DNA Kit K2721 磁珠法纯化基因组 DNA 基因组 DNA 抽提 MagJET Genomic DNA Kit K2722 磁珠法纯化基因组 DNA 基因组 DNA 抽提 MagJET Plant Genomic DNA Kit K2761 磁珠法纯化植物基因组 DNA 基因组 DNA 抽提 MagJET Plant Genomic DNA Kit K2762 磁珠法纯化植物基因组 DNA 基因组 DNA 抽提 MagJET Whole Blood Genomic DNA Kit K2741 磁珠法纯化全血基因组 DNA 基因组 DNA 抽提 MagJET Whole Blood Genomic DNA Kit K2742 磁珠法纯化全血基因组 DNA 配件 MAGNETIC STAND-96 1 STAND EACH AM10027 用于磁珠纯化的磁力架 配件 DYNAMAG-2 EACH 12321D 用于磁珠纯化的磁力架 通用试剂 DEPC-TREATED WATER AM9920 配制各种反应溶液 通用试剂 DEPC-TREATED WATER 配制各种反应溶液 53

53 通用试剂 NUCLEASE-FREE WATER AM9930 配制各种反应溶液 通用试剂 NUCLEASE-FREE WATER AM9932 配制各种反应溶液 分子诊断 通用试剂 NUCLEASE-FREE WATER 配制各种反应溶液 通用试剂 0.5 M EDTA, PH ML AM9261 配制核酸纯化用缓冲液 通用试剂 TRIS-HCL PH 7.5 1M 配制核酸纯化用缓冲液 通用试剂 LITHIUM CHLORIDE PPT SOLN. AM9480 配制核酸纯化用缓冲液 通用试剂 3M POTASSIUM ACETATE PH 5.5 AM9610 配制核酸纯化用缓冲液 通用试剂 3M SODIUM ACETATE PH ML AM9740 配制核酸纯化用缓冲液 通用试剂 GLYCOGEN 配制核酸片段化试剂 通用试剂 GLYCOGEN 5 X 1 ML AM9510 配制核酸片段化试剂 通用试剂 10X TBE BUFFER 4 X 1000 ML AM9865 配制核酸电泳缓冲液 通用试剂 25X TAE BUFFER 10 PAK AM9870 配制核酸电泳缓冲液 文库构建 片段回收 E-Gel NGS, 0.8% Agarose, 10-Pack A kb 长片段 DNA 条带回收,Size selection 片段回收 E-Gel NGS, 0.8% Agarose, Starter Kit A25798STCH 8-10 kb 长片段 DNA 条带回收 片段回收 E-GEL SIZESELECT STARTER KIT A25798STCH <1kb 短片段 DNA 条带回收 片段回收 E-Gel SizeSelect Agarose Gels, 2%,10-Pack G <1kb 短片段 DNA 条带回收 片段回收 GeneJET PCR Purification Kit K0701 PCR 片段纯化 片段回收 GeneJET PCR Purification Kit K0702 PCR 片段纯化 片段回收 GeneJET Gel Extraction Kit K0691 从凝胶中回收 DNA 片段 片段回收 GeneJET Gel Extraction Kit K0692 从凝胶中回收 DNA 片段 片段回收 GeneJET Gel Extraction and DNA Cleanup Micro Kit K0831 从 PCR 产物 酶反应混合物及凝胶中快速有效纯化 DNA 片段回收 GeneJET Gel Extraction and DNA Cleanup Micro Kit K0832 片段回收 GeneJET RNA Cleanup and Concentration Micro K0841 快速有效地纯化 RNA Kit 片段回收 GeneJET RNA Cleanup and Concentration Micro K0842 快速有效地纯化 RNA Kit 电泳通用试剂 Ultrapure agarose 1000,100g 分离 <1000bp 片段 电泳通用试剂 Ultrapure LMP agarose,100g 快速 DNA 凝胶回收 从 PCR 产物 酶反应混合物及凝胶中快速有效纯化 DNA 电泳通用试剂 TAE Buffer, 10X,4000mL TAE 电泳缓冲液,DNA 片段回收电泳胶制备 电泳通用试剂 TBE Buffer, 10X,1000 ml TBE 电泳缓冲液 电泳通用试剂 TrackIt 1kb plus DNA ladder,100apps DNA ladder 电泳通用试剂 SYBR safe gel stain in DMSO,400uL S33102 安全核酸染料 电泳通用试剂 EB,10mg/ml 核酸染料 末端修复 T4 DNA Polymerase 末端修复 末端修复 T4 DNA Polymerase, 500 U EP0062 末端修复 末端修复 T4 Polynucleotide Kinase (cloned) 10 U/μL, AM2310 末端修复 500rxn 末端修复 DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment ; 末端修复 x 500 units 末端修复 DNA Polymerase I, 2500 U EP0042 末端修复 末端修复 Exo-Klenow Fragment (cloned), DNA Polymerase AM2008 DNA 聚合酶用于末端修复 I, 5 U/μL, 750units 末端修复 Klenow Fragment,1500U EP0052 末端修复 A 碱基添加 T4 DNA Ligase; 4 x 500 units T4 连接酶用于 A 碱基添加 A 碱基添加 T4 DNA Ligase Buffer, 2 x 1 ml T4 连接酶反应 buffer, 用于 A 碱基添加 54

54 A 碱基添加 T4 DNA Ligase, 1000 U EL0011 T4 DNA 连接酶 A 碱基添加 T4 DNA Ligase HC, 5000 units EL0013 T4 DNA 连接酶, 高浓度 A 碱基添加 T4 DNA Ligase LC, 2 x 500 units EL0016 T4 DNA 连接酶, 低浓度 适配子连接 AmpErase Uracil N-Glycosylase (UNG), N 适配子链接 100units 反转录 Maxima H Minus Reverse Transcriptase (200 U/ EP0752 cdna 合成反转录酶 µl),10000 U 反转录 Maxima Reverse Transcriptase (200 U/µL), EP0742 cdna 合成反转录酶 10000U 反转录 Maxima H Minus First Strand cdna Synthesis Kit, K1652 第一链 cdna 合成试剂盒 100 x 20 µl rxns 反转录 Maxima H Minus First Strand cdna Synthesis Kit K1682 第一链 cdna 合成试剂盒 with dsdnase+, 100 rxn kit 反转录 Maxima First Strand cdna Synthesis Kit for K1642 第一链 cdna 合成试剂盒 RT-qPCR, 200 x 20 µl rxns 反转录 Maxima First Strand cdna Synthesis Kit for K1672 第一链 cdna 合成试剂盒 RT-qP- CR with dsdnase+, 200 rxn kit 反转录 SuperScript II Reverse Transcriptase cdna 合成反转录酶 10000u,50rxn, 200 U µl 反转录 SUPERSCRIPT III RT 4 x 10,000 units, 200rxn cdna 合成反转录酶 反转录 SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix, cdna 第一链合成 50rxn 反转录 DTT, 1M 1 ML P2325 cdna 合成反应试剂 反转录 RANDOM PRIMERS,1.5MM cdna 合成中的随机引物 9 A260 units, 3 μg/μl 反转录 RNaseOUT Recombinant Ribonuclease Inhibitor cdna 合成重组核酸酶抑制剂 5,000 units 反转录 RiboLock RNase Inhibitor, 4x2500 units EO0382 cdna 合成重组核酸酶抑制剂 反转录 Ribonuclease H 120units cdna 合成重组核酸酶抑制剂 反转录 RNase H, E.coli,, 5000units EN0202 cdna 合成重组核酸酶抑制剂 片段扩增 / 文库定量 片段扩增 / 文库定量 片段扩增 / 文库定量 片段扩增 / 文库定量 Platinum Pfx DNA Polymerase 250rxn PCR 富集 / 扩增 PLATINUM PFX DNA POLYMERASE 250rxn C PCR 高保真酶 (ICFC 产品 ) Phusion High-Fidelity DNA Polymerase F-530L PCR 高保真酶 Phusion Green High-Fidelity DNA polymerase F-534L PCR 高保真酶, 绿色缓冲液 片段纯化 PureLink PCR Purification Kit 250rxn K PCR 产物纯化 片段纯化 GeneJET PCR Purification Kit K0702 PCR 片段纯化 片段纯化 GeneJET NGS Cleanup Kit K0851 NGS 片段纯化 片段纯化 GeneJET NGS Cleanup Kit K0852 NGS 片段纯化 片段纯化 MagJET NGS Cleanup and Size Selection Kit, 1 K2821 NGS 片段纯化和分选 x96 preps 片段纯化 MagJET NGS Cleanup and Size Selection Kit, 4 K2822 NGS 片段纯化和分选 x96 preps 片段纯化 MagJET NGS Cleanup and Size Selection Kit, 10 K2823 NGS 片段纯化和分选 x96 preps 片段纯化 MagJET NGS Cleanup and Size Selection Kit, 10 K2828 NGS 片段纯化和分选 preps 通用试剂 dntp Mix 10 mm each, 0.2 ml R0191 PCR 反应用试剂 通用试剂 10 mm dntp Mix,100ul, 10 mm PCR 反应用试剂 样本文库定量 样本定量 Qubit 3 Quantitation Starter Kit Q33217 核酸 / 蛋白定量仪 分子诊断 55

55 样本定量 QUBIT DSDNA HS ASSAY KIT, KIT Q32854 dsdna 分析试剂盒 ( 高灵敏度 ) 样本定量 QUBIT DSDNA HS ASSAY KIT, KIT Q32851 dsdna 分析试剂盒 ( 高灵敏度 ) 分子诊断 样本定量 QUBIT DSDNA BR ASSAY KIT, KIT Q32853 dsdna 分析试剂盒 ( 宽范围 ) 样本定量 QUBIT DSDNA BR ASSAY KIT, KIT Q32850 dsdna 分析试剂盒 ( 宽范围 ) 样本定量 QUBIT RNA ASSAY KIT, KIT Q32855 RNA 分析试剂盒 ( 高灵敏度 ) 样本定量 QUBIT RNA ASSAY KIT, KIT Q32852 RNA 分析试剂盒 ( 高灵敏度 ) 样本定量 QUBIT RNA BR ASSAY KIT, KIT Q10211 RNA 分析试剂盒 ( 宽范围 ) 样本定量 QUBIT RNA BR ASSAY KIT, KIT Q10210 RNA 分析试剂盒 ( 宽范围 ) 样本定量 QUBIT SSDNA ASSAY KIT, KIT Q10212 ssdna 分析试剂盒 样本定量 QUANT-IT RNA ASSAY KIT, BROAD 1 KIT Q10213 Quant-It RNA 分析试剂盒 样本定量 QUBIT ASSAY TUBES *SET OF 500* 1 SET Q32856 样品管 56

56 免疫诊断 免疫诊断 免疫检测是应用免疫学技术测定标本的方法, 在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质 用途非常广泛, 它们可用于有关免疫疾病的诊断, 疗效评价及发病机制的研究 如对传染病 免疫增殖性疾病 免疫 缺损病 超敏反应 自身免疫病 移植排斥反应肿瘤的免疫学检测, 对诊断 治疗均有很大帮助 免疫标记技术是应 用最为广泛的一类免疫学检测技术, 相比经典的血清学检测手段, 其在检测的特异性 敏感性和快速性, 以及对抗 原 抗体的定量 定性 定位检测方面都有所提高 免疫标记技术以一些示踪分子标记特异性的抗原或抗体, 通过标 记物的增强放大效应来显示抗原抗体反应系统中抗原 抗体的性质与含量 常用的标记物质包括荧光素 酶 同位素 等 Thermo Fisher Scientific 拥有种类齐全的蛋白标记和修饰试剂, 包括生物素标记 酶标记 荧光标记和蛋白修饰试剂 在免疫检测试剂中, 有多种封闭液和检测底物可供选择, 其化学发光技术处于世界领先地位, 检测底物是许多著名的 化学发光诊断试剂盒生产厂商的原料来源 同时, 我们也提供优质的一抗 二抗 生物素结合蛋白等免疫检测探针和 丰富的预包被免疫检测平板, 满足研发和生产等不同需求 57

57 免疫诊断常规流程 免疫诊断 抗体和非特异性 1 表面捕获 2 3 偶联检测探针 4 结合 5 检测底物 免疫诊断包被体系 一抗 二抗, 用于包被或检测 不同偶联方法及产品 封闭产品, 避免非特异性结合 多种底物及染液 - 磁珠 - 乳胶微球 - 预包被多孔板 - 定制包被反应板服务 - 生物素结合蛋白 - 一抗 - 二抗 - CaptureSelect 亲和配体 - ELISA 产品 - 生物素结合蛋白偶联物 - 交联剂 - 封闭缓冲液 - 漂洗缓冲液 - 洗涤剂 - 蛋白稳定剂 - 化学发光底物 - 针对 AP 和 HRP 的显色底物 - 荧光底物 表面捕获 - 磁珠 乳胶微球 预包被多孔板 定制包被反应板服务 生物素结合蛋白 生物素标记试剂...68 抗体和检测探针 - 一抗...70 ABfinity 重组抗体 二抗...72 荧光和酶偶联的二抗...72 Superclonal 二抗 CaptureSelect 亲和配体 生物素结合蛋白偶联物...76 偶联 - 交联剂...80 非特异性结合 - 封闭缓冲液 漂洗缓冲液 去垢剂 蛋白稳定剂...86 检测底物 - 化学发光底物 针对 AP 和 HRP 的显色底物 荧光底物

58 1 表面捕获 Dynabeads 磁珠 Invitrogen Dynabeads 磁珠凭借诸多独特的优点已经广泛地应用于免疫诊断中 我们可提供一系列的磁珠产品可供选择, 包括不同的磁珠大小和表面化学物质 Dynabeads 磁珠大小 形状和表面的均一性使其可以发挥稳定的性能和进行快速的液相反应 这种温和的 基于反应管的方法不需要离心柱及离心操作 免疫诊断 特点 : 快速反应动力学 可重复性 一致的性噪比 化学及物理耐受性 低 CV 规格灵活 可理想应用于自动化 方便进行固相制备规模化 将 Invitrogen Dynabeads 环氧基磁珠和 Invitrogen DynaLight 底物结合使用获得极大的免疫检测灵活性 在样品处理过程中, 表面激活的 Dynabeads 环氧树脂磁珠采用磁珠分离技术 所有步骤都在同一反应管中进行, 且操作步骤很少 在检测中使用 DynaLight 底物之前, 磁性分离方便进行洗涤及目标材料的浓缩 DynaLight 底物可以使用发光或者闪光模式 闪光信号需要加入 Invitrogen DynaLight Trigger Solution 才能生成 磁性分离的直接和间接方法 在直接捕获中, 目标特异性配体与 Dynabeads 磁珠结合, 然后加入到样本中 对于一些应用, 可以重复使用磁珠, 从而减少花费 在间接捕获中, 配体首先与目标物质结合, 之后再加入磁珠 当目标物质的浓度较低 亲和性较弱或结合缓慢时, 间接捕获更为有利 59

59 Dynabeads 产品介绍 产品特点表面化学物质预结合主要应用 免疫诊断 Dynabeads M-450 (hydrophobic ) 4.5µm Dynabeads M-280 (hydrophobic) 2.8µm High magnetic content Ideal for viscous solutions High surface-to- volume ratio High loading of antibody Wide application range Epoxy (neural) Anti-CD45: White blood cells Anti-CD14: Monocytes Anti-Mouse IgG Tosylactivated (neutral) Streptavidin (from Tosylactivated) Anti-Mouse IgG Anti-Rabbit IgG Cell capture Cell diagnostics Immunodiagnostics Dynabeads M-270 (hydrophilic) 2.8µm Dynabeads MyOne (hydrophilic or hydrophobic) 1.1µm High surface-to- volume ratio Fast coupling, no need for blocking Low background Highest surface-to- volume ratio Fastest kinetics Slow sedimentation Carboxylic acid (negatively charged) Epoxy (neutral) Osylactivated Carboxylic acid Epoxy Silane Streptavidin (from Carboxylic acid) Protein A Protein G Oligo (dt) Streptavidin (from Tosylactivated and Carboxylic acid) Immunodiagnostics Immunoprecipitation Molecular diagnostics Immunodiagnostics Molecular diagnostics Cell diagnostics T he hydrophobicity is determined by the nature of the polymer that is used for coating the magnetized beads 亲和结合的 Dynabeads 产品 与链霉亲和素或二抗偶联的 Dynabeads 磁珠可与捕获抗体亲和结合, 方便制备非共价结合的抗体偶联磁珠 Invitrogen Dynabeads Streptavidin 广泛应用于捕获 分离和处理生物素化的分子 Invitrogen Dynabeads M-280 Streptavidin 和 Invitrogen Dynabeads MyOne Streptavidin T1 Beads. 疏水磁珠, 在结合链霉亲和素后用 BSA 封闭 在典型的三明治免疫检测中可获得强信号 Invitrogen Dynabeads M-270 Streptavidin 和 Invitrogen Dynabeads MyOne Streptavidin C1 Beads. 亲水性羧基磁珠, 未使用 BSA 封闭 小的亲水性分子 ( 染料 ) 或核酸与带负电的磁珠之间的非特异性结合很少 同时可提供与二抗 ( 抗鼠 ) 偶联的 Dynabeads 磁珠 共价结合的 Dynabeads 产品 表面化学物质的选择取决于实验的类型 缓冲液化学物质及抗体偶联磁珠制备的需求 Tosylactivated. 与蛋白的结合能力强 在绝大部分实验中可得到理想的结果 需要过夜偶联及封闭 Carboxylic acid. 快速偶联方案 不易产生聚合体 无需蛋白封闭 Epoxy. 经优化用于抗体和抗原的结合 适中的偶联时间, 推荐过夜洗涤 中性表面 可提供的用于亲和及共价结合的 Dynabeads 用于亲和结合的 Dynabeads 产品产品名称 Dynabeads MyOne Streptavidin T1 Dynabeads MyOne Streptavidin C1 Dynabeads M-280 Streptavidin Dynabeads M-270 Streptavidin 用于共价结合的 Dynabeads 产品产品名称 Dynabeads MyOne Epoxy Dynabeads M-270 Epoxy Dynabeads MyOne Tosylactivated Dynabeads M-280 Tosylactivated Dynabeads MyOne Carboxylic Acid Dynabeads M-270 Carboxylic Acid 浓度 10mg/mL 10mg/mL 10mg/mL 50mg/mL 浓度 Freeze dried Freeze dried 100mg/mL 100mg/mL 10mg/mL 100mg/mL Dynabeads M-270 Epoxy andmyone Epoxy Beads Invitrogen Dynabeads M-270 Epoxy (2.8µm) Beads 和 Invitrogen Dynabeads MyOne Epoxy (1.1µm) Beads, 经设计不会干扰样本基质和结合的蛋白 低干扰性确保结合抗体的高特异活性, 并且当进行将抗原结合到表面的免疫分析时具有极大优势 与磁珠结合抗体的高特异性使其具有高捕获效率, 同时性价比高, 因为分析所需的抗体较少 Dynabeads Epoxy Beads 因其具有高信噪比 宽广的动力学范围和结合抗体的高稳定性, 检测分析更为方便 该磁珠以冷冻干燥的形式提供, 且由于其亲水的磁珠表面, 可以更方便地分散于不同的缓冲液中 与其它 Dynabeads 产品一样, 其同样具有高质量和批间可重复性 60

60 无缝应用于免疫检测实验流程 Dynabeads 磁珠可以方便地应用于免疫检测实验流程 与辣根过氧化物酶 (HRP) 检测方法结合使用, Dynabeads 磁珠可以发挥优异的性能 免疫诊断 实验流程中的 HRP 相关产品 A B Dynabeads 磁珠在人类血清中的性能表现 (A) 实验方案的设计 (B) 精确性分析展现出变异系数作为 I-T-C 浓度的一个功能 实线为 M18-HRP 偶联物 ; 虚线为 M18-AP 偶联物 所有的 Dynabeads 磁珠与 HRP 结合使用均展现出了令人满意的背景 信号和低精确度 数据来源于手动操作的 96 孔平板分析 61

61 免疫检测实验流程中 HRP 相关产品的性能 Platform 产品性能备注 免疫诊断 HRP conjugation methods Substrates Blockers Dynabeads Magnetic Beads EZ-Link Maleimide Activated HRP ++ Similar performance for both kits, but EZ- Link Plus Activated EZ-Link Plus Activated Peroxidase +++ Peroxidase is a faster and easier method SuperSignal Femto Maximum Sensitivity Substrate +++ SuperSignal Pico Substrate ++ 1-Step Ultra TMB Substrate + TBST, BSA ++ StartingBlock T20, normal mouse serum +++ Dynabeads M-280 Tosylactivated +++ Dynabeads M-270 Epoxy +++ Dynabeads M-270 Carboxylic Acid +++ Dynabeads M-280 Streptavidin +++ SuperSignal Femto Maximum Sensitivity Substrate performs best Better performance of StartingBlock T20 in human serum High performance for all tested Dynabeads products in the HRPbased assay 更多关于 Dynabeads 磁珠的信息, 欢迎访问 thermofisher.com/dynabeads 乳胶微球 Invitrogen IDC 无表面活性剂微球 我们可提供一系列的 Invitrogen UltraClean 无表面活性剂微球 ( 乳胶微球 ) 可供选择用于科研及商业应用 乳胶微球通常是由聚苯乙烯制成的胶质颗粒 它们可以以不同包装规格和表面功能的标准产品形式提供, 或者按照您的要求进行定制 乳胶微球可以方便的用蛋白 ( 如抗体或链霉亲和素 ) 通过被动吸附或共价连接进行修饰 250nm 聚苯乙烯乳胶颗粒 乳胶微球应用领域 免疫检测和免疫诊断 流式细胞分析 显微分析 流体分析 细胞生物学 HTS 和 HCS Agglutination tests (lateral flow). Sandwich assays (ELISA). Particle capture. Contrast agents. Instrument calibration. Assay performance. Particle capture assays (multiplexing). Instrument calibration. Assay performance. Blood flow determination. Microfluids. Water flow. Air flow (flow of airborne particles). Tracing. Cell differentiation. Cell migration. Instrument calibration (excitation, emission, focus, etc.). 提供具有多种表面功能的乳胶微球 物理性质化学性质 大小 疏水或亲水 功能基团 类型 SO 4 强酸 COOH 弱酸 (NH 2) 2 强碱 NH 2 弱碱 CHO 醛基 CH 2Cl 氯甲基 ~20nm 到 15μm 大小范围, 与表面性质相关 凝集实验 抗体包被的微球通过抗原发生聚集 通过在平板上 (0.7-1 µm) 进行可视化检测, 再通过膜上 ( µm) 颜色标记的微球或者光密度 ( 浊度分析 ) 检测 (<0.15µm) 进行侧向层析检测分析, 62

62 UltraClean 高活性乳胶微球 Invitrogen UltraClean 高活性乳胶微球呈疏水性且无表面活性剂 通过共价连接一些带电荷基团 ( 硫酸根 羧基 脒 基 ), 这些微球呈稳定状态, 不易聚集 且 ~95% 的微球表面都可以被动吸附蛋白 Amidine 脒基 脒基化带正电的疏水微球特别适用于制备乳胶中间体 脒基乳胶微球在低 PH 或中性环境中使用, 我们可提供一系列不同大小和表面电荷密度 ( 每个带电基团 70 1,000Å2) 的产品 Carboxyl 羧基 我们可提供一系列不同大小 不同表面电荷密度 ( 每个带电基团 70 3,000Å2) 的羟基化带电荷疏水乳胶微球 这些微球可用于抗原或抗体的物理吸附, 或者用于组分与微球表面的共价结合 Carboxyl/Sulfate 羧基 / 硫酸根 这些疏水的聚苯乙烯乳胶微球拥有几乎等同数量的羧基和硫酸根基团, 所以总的有效电荷依赖于 PH 大小 这些微球 经设计用于一些实验应用, 在这些实验应用中, 羧基反应与硫酸根基团的电荷稳定性相得益彰 我们可以提供一系列带有不同比例的表面带电基团 不同大小的微球 Sulfate 硫酸根 这些乳胶微球因为硫酸根基团带电性而变得很稳定 因为生产条件和微球大小的不同, 硫酸根基团的表面电荷密度为从每 200Å2 微球表面一个基团到每 2000Å2 微球表面一个基团 硫酸根基团的 pka 值 <2; 从而这些微球在酸性介质中呈稳定状态, 可以用于生理性离子强度的介质中 硫酸根乳胶微球实验适用于微球大小分析仪器的校正, 同时适用于依靠抗原抗体物理吸附性的诊断检测系统 免疫诊断 UltraClean 强效乳胶微球 Invitrogen UltraClean Superactive 强效乳胶微球为亲水性, 且含有高密度的可与蛋白共价结合的功能基团 强效表层是一 个三维结构, 其增加了微球的胶体稳定性, 同时当与微球相互作用时为蛋白提供了一个 软着陆 位点 比起物理吸 附到表面, 此种方法几乎不会对蛋白结构造成扭曲 羧基化修饰的乳胶微球 羧基化修饰的乳胶微球 (Carboxylate-modified latex,cml) 是通过包含聚合物的羧酸经过共聚合生成的 结果形成了亲水且比较 柔软 的表层 CML 的电荷密度大概为每个带电基团 10Å2 到 100Å2 氯甲基乳胶微球 氯甲基乳胶微球 (Chloromethyl latex bead) 为在苯乙烯单体上吸附有高密度的氯甲基基团 这些表面功能基团在温和的水环境下直接与抗体 抗原或其它配体中的氨基基团反应, 通过一步反应生成稳定的共价连接产物 疏水微球通过带负电的硫酸根基团得到稳定 这种类型的微球可以应用于高 PH 或低 PH 的环境条件 醛基 / 硫酸根乳胶微球 (Aldehyde/Sulfate) 这些亲水的强效乳胶微球含有丰富的醛基, 这些醛基位于高分子颗粒的表面 标准的醛基密度约 50Å2/ 基团 这些高密度的醛基使得蛋白或其它物质可以轻松与乳胶微球结合 这种微球可以理想应用于诊断试剂盒生产中的多种应用 醛基 / 脒基乳胶微球 (Aldehyde/Amidine) 这种微球类似于醛基 / 硫酸根乳胶微球, 但其含有带正电的脒基功能基团, 从而提供了胶体稳定性 脂族胺乳胶微球 (Aliphatic amine) 脂族胺乳胶微球含有高密度的胺基, 可以用于与蛋白共价结合 位于间隔臂末端的胺基减少可原子空间, 从而提高了乳胶聚集反应的动力学特性 在低 PH 或中性 PH 条件下, 这些微球因带正电的胺基而具有很好的稳定性 不过请注意不要在高 PH 条件下使用该微球 特异性微球 (Specialty latexes) 我们还可以提供诸多的特异性乳胶微球和交联微球, 包括 NIST-traceable microspheres 了解关于乳胶微球的更多信息, 欢迎访问 thermofisher.com/latexbeads 63

63 预包被多孔板 免疫诊断 许多基于微孔板的实验最初步骤都包含将蛋白被动吸附至平板孔中的操作 在吸附过程中, 可能会由蛋白吸附方向的错误或变性而引发许多问题 蛋白被污染也可能会引起问题 Thermo Scientific TM 包被平板就是围绕这些问题而设计的 我们提供透明的, 黑色或白色聚苯乙烯塑料制成的 96 孔或 384 孔规格的包被平板, 可以灵活选择以获得实验结果 无论检测系统是显色反应 荧光标记物或是化学发光底物, 我们都能为您提供合适的平板 我们也为有特殊需求的客户提供定制包被服务 : 包被 96 或 384 孔平板, 玻片或其他需包被的表面 使用特定类型的平板或指定供应商提供的平板进行包被 不包含在此目录中的特殊表面化学物 Thermo Scientific TM 包被平板类型 包被配体蛋白 A 蛋白 G 或蛋白 A/G 蛋白 L 二抗链霉亲和素或中性亲和素生物素谷胱甘肽抗 GST 抗体金属螯合 (Ni 2+,Co 2+ ) 马来酸酐活化的马来酰亚胺 应用通过 Fc 区域结合抗体通过 kappa 轻链结合 Fab 抗体片段和单链抗体可变区基因片段结合抗体, 替代蛋白 A,G 或 L 结合生物素化蛋白, 肽链或核酸结合亲和素, 链霉亲和素或 Thermo Scientific TM 中性亲和素生物素结合蛋白结合重组表达的谷胱甘肽 S 转移酶 (GST) 标签蛋白结合重组表达的谷胱甘肽 S 转移酶 (GST) 标签蛋白结合重组表达的组氨酸标签蛋白共价结合含有氨基的大分子和小分子共价结合含有巯基的分子 中性亲和素和链霉亲和素包被平板 Thermo Scientific Pierce 链霉亲和素和中性亲和素包被平板是预包被的 即用型的包被平板, 用于结合生物素标记的抗 体或核酸探针 我们可提供标准结合力 高结合力及高灵敏度的不同形式 Pierce 中性亲和素和链霉亲和素包被平板比较 使用各产品类型中的黑色包被板和 Thermo Scientific QuantaBlu 荧光 过氧化物酶底物来测定检测范围, 高灵敏度 (HS) 高结合力 (HBC) 标准结合力 (SBC) 实验应用 检测低浓度的生物素标记分子 检测高浓度的生物素标记分子 常规 ELISA 筛选实验 生物素标记蛋白的最小分子量 >26kDa >8kDa >8kDa 中性亲和素平板检测范围 5 to 125ng/mL 15 to 2,500ng/mL 15 to 300ng/mL 链霉亲和素平板检测范围 5 to 300ng/mL 62 to 10,000ng/mL 31 to 1,250ng/mL Thermo Scientific 中性亲和素高结合能力 (HBC) 包被板 中性亲和素标准结合能力 (RBC) 包被板和其它供应商链霉亲和素包被板 (CHC) 之间的比较 反应板使用不同稀释度的生物素化 磷酸化肽段进行 孵育 漂洗后, 使用小鼠抗磷酸络氨酸抗体 (1:1000) 孵育, 之后使 用抗小鼠 FITC 偶联物 (1:667) 进行检测 S/N 代表性噪比 64 生物素标记磷酸化肽段 (pm/ 孔 )

64 Pierce 生物素包被平板 Thermo Scientific Pierce 生物素包被平板用于亲和素 链霉亲和素或其它生物素结合蛋白的免疫检测 这些包被平板为 预封闭形式, 可以减少非特异性结合 产品 规格 货号 生物素预包被板 Pierce Biotin Coated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates 蛋白 A G A/G 和 L 预包被板 Pierce Protein A Coated Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce Protein A Coated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce Protein A Coated Plates, Clear, 96-Well 5 plates Pierce Protein A Coated Plates, White, 96-Well 5 plates Pierce Protein A/G Coated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce Protein G Coated Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce Protein G Coated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce Protein G Coated Plates, White, 96-Well 5 plates Pierce Protein L Coated Plates, Clear, 96-Well 5 plates 抗 GST 预包被板 Pierce Anti-GST Coated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates 氨基和巯基结合平板 Pierce Maleic Anhydride Activated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce Maleic Anhydride Activated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 x 5 plates Pierce Maleic Anhydride Activated Plates, Clear, 96-Well 5 plates Pierce Maleic Anhydride Activated Plates, Clear, 96-Well 5 x 5 plates Pierce Maleic Anhydride Activated Plates, White, 96-Well 5 plates 谷胱甘肽 镍离子 铜离子预包被板 Pierce Copper Coated High Capacity Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce Copper Coated High Capacity Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce Copper Coated High Capacity Plates, Clear, 96-Well 5 plates Pierce Copper Coated High Capacity Plates, White, 96-Well 5 plates Pierce Glutathione Coated Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce Glutathione Coated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce Glutathione Coated Plates, White, 96-Well 5 plates Pierce Nickel Coated Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce Nickel Coated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce Nickel Coated Plates, Clear, 96-Well 5 plates Pierce Nickel Coated Plates, White, 96-Well 5 plates 抗体预包被板 Pierce Goat Anti-Mouse IgG Antibody Coated Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce Goat Anti-Mouse IgG Antibody Coated Plates, Clear, 96-Well 5 plates Pierce Goat Anti-Mouse IgG Antibody Coated Plates, White, 96-Well 5 plates Pierce Goat Anti-Rabbit IgG Antibody Coated Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce Goat Anti-Rabbit IgG Antibody Coated Plates, Clear, 96-Well 5 plates Pierce Goat Anti-Rabbit IgG Antibody Coated Plates, White, 96-Well 5 plates 中性亲和素和链霉亲和素预包被板 Pierce NeutrAvidin Coated High Capacity Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce NeutrAvidin Coated High Capacity Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce NeutrAvidin Coated High Capacity Plates, Clear, 96-Well 5 plates 免疫诊断 65

65 Pierce NeutrAvidin Coated High Capacity Plates, White, 96-Well 5 plates Pierce NeutrAvidin Coated High Sensitivity Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce NeutrAvidin Coated Plates, Black, 384-Well 5 plates 免疫诊断 Pierce NeutrAvidin Coated Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce NeutrAvidin Coated Plates, Clear, 384-Well 5 plates Pierce NeutrAvidin Coated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce NeutrAvidin Coated Plates, Clear, 96-Well 5 plates Pierce NeutrAvidin Coated Plates, White, 96-Well 5 plates Pierce NeutrAvidin Coated Plates, White, 96-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated High Capacity Plates, Black, 384-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated High Capacity Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated High Capacity Plates, Clear, 384-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated High Capacity Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce Streptavidin Coated High Capacity Plates, Clear, 96-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated High Capacity Plates, White, 384-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated High Capacity Plates, White, 96-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated High Sensitivity Plates, Black, 8-Well Strip 5 plates Pierce Streptavidin Coated High Sensitivity Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, Black, 384-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, Black, 96-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, Clear, 384-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, Clear, 8-Well Strip 5 x 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, Clear, 96-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, Clear, 96-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, Clear, 96-Well 5 x 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, White, 96-Well 5 plates Pierce Streptavidin Coated Plates, White, 96-Well 5 plates 定制包被反应板服务 我们已经开发了许多新的化学物和包被物以用于诸多的实验应用, 同时我们有能力每天处理 5000 个微孔板 结合我们的经验和专长, 只为您开发最合适的配体 反应板和封闭物组合产品, 以用于您的实验研究 我们可提供定制化的质量保证检测, 确保您接收到满足您需求的一致性产品 同时, 在任意批次 Thermo Scientific Pierce 定制包被平板进行运输之前, 我们还可以提供 5 个测试反应板 平板包被选项 选择任意平板 配体和缓冲液的组合 平板类型 (96 或 384 孔 ) 包被物 封闭缓冲液 透明 抗体 SuperBlock Blocker 白色 肽段 StartingBlock Blocker 黑色 重组蛋白 Protein-free Blocker 透明底, 黑色 金属螯合物 Purified casein 透明底, 白色 生物聚合酶 BSA 过滤板 自选配体 血清 自选平板 自选封闭液 定制微孔板包装选项 我们可为您的定制平板提供合适的包装 例如, 您的定制平板可包装用于大规模筛选应用 ( 如 25 板 / 包 ) 或用于包含于试剂盒中再销售 ( 如单独包装 ) 66

66 生物素结合蛋白 我们的生物素结合蛋白家族包括链霉亲和素 亲和素和中性亲和素蛋白 每种蛋白的每个分子可结合 4 个生物素, 且具 有高亲和性和特异性 这些蛋白可以理想应用于免疫检测中的固相修饰 链霉亲和素是最常用的 非糖基化蛋白, 而且非特异性结合极低 亲和素是一种带有多个阳离子的糖蛋白, 其等电点大约为 10 在一些实验中, 由于带正电荷残基和寡糖组分, 亲和素可能引起非特异性的背景 中性亲和素蛋白经处理去除了糖基, 并且等电点更低, 所以降低了非特异性背景 免疫诊断 生物素结合蛋白的比较 亲和素链霉亲和素中性亲和素 分子量 67K 53K 60K 生物素结合位点 等电点 (pi) 特异性 低 高 最高 生物素亲和力 (Kd) M M M 非特异性结合高低最低 产品规格货号 中性亲和素 NeutrAvidin Protein 链霉亲和素 Streptavidin Protein 亲和素 Pierce Avidin 10 mg mg mg mg mg mg mg mg mg

67 生物素标记试剂 免疫诊断 生物素标记 ( 生物素化 ) 是制备超高灵敏度和特异性的用于 ELISA 蛋白免疫印迹及其他分析系统的检测探针的一种最 常见 最有效的方法 Thermo Scientific TM EZ-Link 生物素试剂及试剂盒可以有效地标记不同蛋白 多肽及其他分子, 同时 可以根据特殊的用途对这些试剂的化学性质 ( 溶解性 臂长 可剪切与否 ) 进行优化 无论是最常用的明星产品 Sulfo- NHS-LC- 生物素或者其他专门的试剂或试剂盒, 每种 Thermo Scientific TM 产品均具有非常卓越的质量和可靠性并且附有详细 易懂的说明 可以使用以下的指南来选择适合您的生物素标记试剂或试剂盒 Thermo Scientific EZ-Link 生物素标记试剂和试剂盒选择指南 产品货号 名称 是否提供试剂盒 反应基团 是否溶于水 间隔臂长 是否可剪切 是否能够透膜 Sulfo-NHS-Biotin 是 伯胺 是 13-5Å 否 否 Sulfo-NHS-LC-Biotin 是 伯胺 是 22-4Å 否 否 Sulf0-NHS-LC-LC-Biotin 否 伯胺 是 30-5Å 否 否 NHS-PEG4-Biotin 是 伯胺 是 29-0Å 否 否 NHS-PEG12-Biotin 否 伯胺 是 56-0Å 否 否 NHS-Biotin 否 伯胺 否 13-5Å 否 是 NHS-LC-Biotin 否 伯胺 否 22-4Å 否 是 NHS-LC-LC-Biotin 否 伯胺 否 30-5Å 否 是 Sulfo-NHS-SS-Biotin 是 伯胺 是 24-3Å 否 否 NHS-SS-Biotin 否 伯胺 否 24-3Å 否 是 NHS-SS-PEG4-Biotin 否 伯胺 否 37-9Å 否 否 NHS-Chromogenic Biotin 是 伯胺 否 41-0Å 否 否 NHS-lminobiotin 否 伯胺 否 13-5Å 否 是 PFP-Biotin 否 胺类 /RNA/DNA 否 9-6 Å 否 是 TFP-PEG3-Biotin 否 伯胺 是 32-6Å 否 否 Maleimide-PEG2-Biotin 是 巯基 是 29-1 Å 否 否 Maleimide-PEG11-Biotin 否 巯基 是 59-1 Å 否 否 Biotin-BMCC 否 巯基 否 32-6Å 否 是 lodoacetyl-peg2-biotin 否 巯基 是 24-7Å 否 否 lodoacetyl-lc-biotin 否 巯基 否 27-1 Å 否 是 Biotin-HPDP 否 巯基 否 29-2Å 否 是 Pentylamine-Biotin 否 羧基 是 18-9Å 否 否 Amine-PEG2-Biotin 否 羧基 是 20-4Å 否 否 Amine-PEG3-Biotin 否 羧基 是 22-9Å 否 否 Biocytin Hydrazide 否 糖基 /RNA/DNA 是 19-7Å 否 否 Biotin Hydrazide 否 糖基 否 15-7Å 否 是 Biotirl-LC-Hydrazide 否 糖基 否 24-7Å 否 是 Biotin-PEG4-Hydrazide 否 糖基 是 31-3Å 否 否 TFPA-PEG3-Biotin 否 DNA / RNA / 蛋白 否 33-4Å 是 否 Photoactivatable Biotin 否 DNA / RNA / 蛋白 否 30-0Å 否 是 Biotin-LC-ASA 否 DNA / RNA / 蛋白 否 29-9Å 否 是 Psoralen-PEG3-Biotin 否 DNA / RNA / 蛋白 是 36-9Å 否 否 Sulfo-SBED 是 三功能性 微溶 N/Å 是 未检测 Mls-Atf-Biotin 否 三功能性 否 N/Å 是 未检测 Mts-Alf-LC-Biotin 否 三功能性 否 N,Å 是 未检测 Biotin 否 伯胺 微溶 13-5Å 否 是 Biocytin 否 胺类 / 羧基 是 20-1 Å 否 否 PEG5-Biotin Dimer 否 亲和素交联 是 43-4Å 否 否 还提供其他包装规格 ; 详见后续单独产品列表 试剂是否能够透过细胞膜是根据该试剂的疏水 / 亲水性质推测的 当与 EDC( 产品货号 22980,22981) 一起使用时 68

68 2 抗体和检测探针 我们广泛的 Invitrogen 抗体产品线包括特异性多克隆抗体 单克隆抗体和 ABfinity 重组抗体, 可以用于探测 染色 定位 纯化及检测几乎任何蛋白和翻译后修饰 另外, 还拥有与一系列荧光及酶标记的二抗, 包括用于高灵敏度检测的 Alexa Fluor 和 DyLight 荧光染料 我们提供多达 1000 种的 ELISA 产品, 从抗体对到针对多达 800 个靶点的精确 ELISA 试剂盒 我们同时也提供酶或荧光染液标记的链霉亲和素和生物素偶联物 超过 50,000 种产品 免疫诊断 单克隆抗体 : 小鼠 大鼠 兔 多克隆抗体 : 山羊 兔 用于流式和细胞成像的偶联物 剪切位点特异性抗体 用于翻译后修饰的抗体, 包括磷酸化 乙酰化 甲基化及其它 定制选项 Alexa Fluor 荧光染料 DyLight 荧光染料 Molecular Probes 荧光染料 Pacific Blue, Pacific Green 和 Pacific Orange 染料 phrodo Red, phrodo Green. 常用酶如辣根过氧化物酶 (HRP) 和碱性磷酸酶 (AP) 生物素 Invitrogen Qdot Nanocrystals 传统的荧光和标签 69

69 一抗 我们拥有成千上万种高特异性的科研使用 (RUO) 和体外诊断 (IVD) 用一抗, 主要用于临床和科研中 这些抗体经过 一系列的实验验证, 包括 Western blotting 免疫细胞化学 免疫组化 ELISA 浊度计 侧向层析检测和流式细胞检测 免疫诊断 我们的产品线包括一系列的抗体, 包括针对 CD 标志物 肿瘤标志物 免疫靶点 干细胞标志物 细胞信号靶点 细胞因子和趋化因子 细胞器和细胞结构靶点 细胞黏附分子 以及各种细胞通路中的关键靶点 特点 : 经过验证 广泛的验证确保特异且一致的抗体 性能强劲 可应用于多种应用, 包括免疫荧光 免疫组化和流式分析 选择范围广 众多特异性抗体可供选择 质量保证 绝大多数抗体都是按照 ISO 9001 和 GMP 的标准进行生产 方便的抗体查找工具 可使用我们的抗体查找工具 thermofisher.com/antibodies 查找适合您的一抗 使用 PDI 抗体的免疫荧光分析 使用 Anti-PDI 抗体 ( 货号 MA3-019) 对 PDI 进行免疫荧光分析, 图示为 NS-1 细胞的染色情况 使用 EGFR 抗体进行免疫组化 使用 Anti-EGFR 单克隆抗体 ( 货号 MA-13070) 对福尔马林固定 石蜡包埋的肺鳞癌细胞进行染色 使用 EGFR 抗体进行免疫荧光分析 免疫荧光分析结果显示使用抗 表皮生长因子受体 EGFR 单克隆抗体 ( 货号 MA ) 对 Hela 细胞 膜染色的结果 ( 绿色 右图 ), 左图为未使用一抗的阴性对照 了解更多一抗产品信息, 欢迎访问 : thermofisher.com/antibodies 70

70 ABfinity 重组抗体 Invitrogen ABfinity 重组抗体是兔单克隆抗体, 通过免疫动物 功能筛选 之后将免疫原特异性抗体基因克隆进入高水平哺乳动物表达载体 Invitrogen ABfinity 单克隆抗体类似于从血清中分离的兔单抗或者通过杂交瘤细胞得到的单抗, 但具有更高的特异性和灵敏性 因为 ABfinity 重组抗体来源于抗体重链和轻链的克隆 DNA 序列, 所以其不会受到细胞漂移及批间变化的影响, 因此可以达到最佳的特异性和强劲性能 特点 : ABfinity 单克隆抗体 具有鼠单克隆的特异性, 但在多种实验中具有更好的性能 Invitrogen ABfinity Oligoclonal 抗体 诸多单克隆抗体的集合, 其同时具有多克隆抗体的广适用性和灵敏度, 以及单克隆抗体的特异性 免疫诊断 ABfinity 单克隆抗体 单克隆抗体是特异性最高的一类抗体, 但由于所需生产过程的特殊性, 批间变化和细胞漂移是一直存在的问题 从而传统的单克隆抗体的性能会随着批次的变化而变化, 所以在处理珍贵样本前需要再次验证该批次 因为 ABfinity 重组单克隆抗体 ( 以及 ABfinity 寡克隆抗体 ) 来源于抗体重链和轻链的克隆 DNA 序列, 所以其不会受到细胞漂移和批间差的影响, 从而可以获得最佳的特异性和最佳性能 ABfinity 寡克隆抗体 多克隆抗体比单克隆抗体具有更高的灵敏度, 因为其可以识别多个抗原位点 但是通过免疫动物得到的多克隆抗体, 其批间一致性是需要考虑的问题 每次免疫可能得到不同的抗体表达谱, 因此批间的变化会非常大 ABfinity 重组寡克隆抗体由多种不同的重组单克隆抗体组成, 所以其同时具备多克隆抗体的灵敏度和单克隆抗体的特异性, 以及重组抗体才有的一致性 高特异性低灵敏度 高特异性高灵敏度 ABfinity 寡克隆抗体具有和多克隆抗体类似的功能, 可识别目标的多个表位, 因此当检测低丰度目标时, 其与单克隆抗体相比, 可获得更高的检测灵敏度 寡克隆抗体最大的优点是混合物中重链和轻链是已知的, 所以在每批次可以生产同样数量的重链和轻链, 避免了多克隆抗体生产中常出现的生物变量 小鼠单克隆 ABfinity 单克隆 ABfinity 寡克隆 特异性 兔多克隆 低特异性高灵敏度 传统单克隆抗体 多克隆抗体和 ABfinity 重组单克隆体 寡克隆抗 体之间特异性和灵敏度的比较 了解更多关于 ABfinity 重组抗体的信息, 请浏览 thermofisher.com/abfinity 使用 ABfinity 重组寡克隆抗体进行免疫细胞化学分析显示 metadherin 的细胞核定位 使用 Invitrogen Anti metadherin (C-term) ABfinity Recombinant Rabbit Oligoclonal Antibody (21HCLC) ( 货号 ) 对 U2OS 细胞染色, 接着使用 Alexa Fluor 488 羊抗兔二抗 ( 绿色 ) 及 Alexa Fluor 594 Wheat Germ Agglutinin 来标记膜上的复合糖 ( 红色 ), 使用 DAPI 来进行细胞核复染色 ( 蓝色 ) 71

71 二抗 免疫诊断 二抗用于目标抗原的间接检测 二抗具有诸多的明显优势, 如通过信号扩增而增强的灵敏度 标记和检测选项的灵活性 我们可以提供种类齐全的高品质标记和未标记二抗, 用于一系列实验 ( 如细胞成像和流式细胞检测 ) 中一抗的荧光 比色或化学发光检测 我们的 Alexa Fluor 和 DyLight 荧光标记二抗具备卓越的亮度和光稳定性 我们所有的二抗在多种实验中都适用于标示的种属 我们可提供一系列的高引用率科研抗体, 包括多种染料和酶的标记形式 : Alexa Fluor 和 DyLight 染料 传统染料, 如 FITC RPE 和 APC 生物素 酶标记物, 如 HRP 和 AP 荧光和酶标记二抗 荧光染料标记二抗是许多实验应用 ( 如荧光细胞成像 Western blotting 和免疫组化 ) 中鉴定蛋白的不可或缺的工具 使用荧光标记二抗的优点包括更明亮的信号 多重检测能力及方便使用 我们可提供一系列的荧光染料标记二抗以满足您的科研需求, 包括超过 60 种不同的荧光染料和染料混合物以及纳米晶, 针对不同的目标和宿主种类 另外, 我们还提供 HRP 和 AP 标记的抗体 特点 : 可提供与 Alexa Fluor 荧光染料, DyLight 荧光染料, Qdot Nanocrystals, 生物素, HRP, AP 等偶联的二抗 亲和纯化 部分抗体进行过交叉吸附处理, 以将交叉反应降至最低 可提供的二抗及标记形式 反应性 Alexa Fluor 荧光染料 DyLight 荧光染料其他荧光染料酶和生物素标记目标 Ig 类别 Anti-chicken Anti-goat Anti-mouse Anti-human Anti-rabbit Anti-rat 其它 Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 405 Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 532 Alexa Fluor 546 Alexa Fluor 568 Alexa Fluor 680 Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 750 DyLight 350 DyLight 405 DyLight 488 DyLight 550 DyLight 594 DyLight 633 DyLight 650 DyLight 680 DyLight 755 DyLight 800 DyLight 800 4X PEG FITC TRITC Rhodamine Texas Red Texas Red-X R-PE APC Qdot Probes Pacific Dyes 其它 HRP 标记 AP 标记生物素其它 IgG IgM IgA IgG2a IgG1 其它 查找更多关于我们一系列二抗及偶联物的信息, 请访问 thermofisher.com/secondary-antibody-selection 72

72 Superclonal 重组二抗 Thermo Scientific Superclonal 二抗代表了重组抗体技术的一大突破, 在多种应用中, 可精确且灵敏地检测小鼠 大鼠 兔和山羊一抗 通过独有的筛选和生产过程得到重组羊或兔二抗的混合物, 兼具单克隆抗体的高准确度, 以及多克隆抗体的高灵敏度 每种 Superclonal 二抗均经设计优化, 可在 ELISA Western blotting 及细胞成像中获得极佳的结果 特点 : 专为消除一抗检测过程中的交叉反应性而研发 重组单克隆抗体技术提升了一抗检测的准确度和灵敏度 可同时识别目标 lgg 分子的重链和轻链表位 (H+L) 经筛选和优化用于细胞成像 ELISA 和 Western blotting 实验 可以四种类型提供 : 羊抗鼠 (GAM) 羊抗兔(GAR) 兔抗鼠(RAM) 兔抗羊(RAG) 可提供无标记形式, 以及标记了生物素 辣根过氧化物酶 (HRP) 或 Alexa Fluor 488 至 790 荧光染料的抗体 免疫诊断 A 高交叉吸附羊抗鼠 IgG(H+L) 二抗,Alexa Fluor 488 标记 B Superclonal 羊抗鼠 IgG(H+L) 二抗,Alexa Fluor 488 标记 核干细胞因子 ( 绿色 ) 核干细胞因子 ( 绿色 ) 细胞核 ( 蓝色 ) 肌动蛋白 ( 红色 ) Superclonal 二抗可消除交叉反应性, 得到更低的实验背景 使用核干细胞因子一抗标记 Hela 细胞的核仁, 接着使用对应的 Alexa Fluor 488 染料偶联的二抗来检测 ( 绿色 ):(A) 高交叉吸附羊抗鼠 lgg(h+l) 二抗, 或者 (B) 羊抗鼠 lgg(h+l)superclonal 二抗 使用 DAPI 对核染色 ( 蓝色 ), 使用 Alexa Fluor 594 Phalloidin 对肌动蛋白微丝染色 ( 红色 ) 使用 Superclonal 二抗表现了更少的细胞质染色, 说明特异性增强 更多信息请访问 : thermofisher.com/superclonal 73

73 CaptureSelect 亲和配体 Thermo Scientific CaptureSelect 亲和配体是骆驼来源的单域 [V H H] 抗体片段, 具有相比于传统单克隆抗体的多种优点 免疫诊断 我们独有的 VHH 抗体片段技术可利用这些单域抗体的独特性, 得到具有与目的蛋白高度亲和结合能力的产品 这些小的 14kDa 大小的亲和配体作为多种生物制药纯化所需的解决方案, 已经证实在多种应用中可获得高产量和高纯度的目的蛋白 任何 VHH 片段都是基于哺乳动物免疫系统的灵活性和特异性, 使得配体可设计用于多个靶点, 同时具有高亲和性和特异性且背景极低 特定靶点专一性 高亲和力和小分子性的结合使得 VHH 抗体片段在诸多免疫检测应用中极为有用, 包括标准捕获 ELISA 和无标记分析, 如生物膜层反射光干涉技术 (BLI) 和表面等离子共振技术 (SPR) 特点 : 高特异性 高亲和性 高稳定性 方便生产, 无动物来源 (AOF). 低背景 批间差最小化 线性规模化 生产批量大 基于我们在单域抗体片段方面的拥有的广博经验, 我们建立了一套独特的筛选体系, 用于获得用于免疫诊断的特异性单链单克隆抗体片段 多年来我们已经开发出多种免疫文库, 可作为一个出发点 目前我们的 V H H 文库集合包括与人类细胞质蛋白 抗体 血液因子 细胞因子 酶和多种病毒相关的靶点 我们同时可以提供定制免疫和文库研发服务 V HH 抗体片段的优点 特点 V HH 优势 分子量 14 15kDa ( 单克隆抗体分子量的 1/10); 具备结合隐藏表位的能力 规模化 可通过酵母的生产过程进行极佳的规模化, 实现 g 至 kg 规模的批量生产 选择性 对于构象表位 ( 靶点异构体 ) 具有高选择性和亲和力 动物来源 配体的生产不含动物来源成分 灵活性 V HH 抗体片段可以轻松进行定向标记 ( 生物素 荧光素 酶 ) 并设计为多聚体结构 ( 双特异抗体 ) 干扰 V HH 抗体片段模拟了人 VH3 域 ; 不具有小鼠抗体常有的交叉反应问题 稳定性 对温度的稳定性好 ; 在运输和储存过程中不易受到极端条件影响 V HH 抗体片段和传统抗体的比较 兔多克隆 小鼠单克隆 ABfinity 抗体 V HH 片段 分子量 (kda) 特异性 基因工程修饰 + ++ 灵敏度 性能一致 ( 无细胞漂移 ) 批次间一致性 稳定性 动物来源 (AOF) No No Yes Yes 易于规模化

74 免疫诊断 单域抗体片段缺少轻链但具有和传统抗体一样的亲和性和特异性 背景信号 人血清样本 # 与传统鼠单克隆抗体相比,V HH 抗体片段背景明显降低 75

75 生物素结合蛋白偶联物酶标记链霉亲和素 / 亲和素偶联物 免疫诊断 高敏链霉亲和素, 辣根过氧化物酶标记 Thermo Scientific Pierce HRP 标记高敏链霉亲和素是我们独有的过氧化物酶标记的生物素结合蛋白, 具有信号放大功能和出色的储存稳定性 特点 : 高灵敏度 可检测低水平的目标而无背景, 获得高性噪比 价格实惠 在 Western blotting 和 ELISA 应用中使用更少的偶联物, 仍然能获得理想的结果 灵活 与典型的化学发光 荧光和显色过氧化物酶底物兼容 方便 即用型的稳定液体, 无需解冻和分装这种特殊的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素蛋白是为了满足目前免疫检测中科学家们更灵敏的检测要求 这种偶联物适合和化学发光 荧光或显色底物一起使用 这种高敏 HRP 偶联物以即用型的稳定溶液包装, 可在 4 C 储存至少一年 Pierce 辣根过氧化物酶标记的高敏链霉亲和素可以实现低背景的检测, 且具有高的性噪比 链霉亲和素, 多辣根过氧化物酶标记 Thermo Scientific Pierce Poly-HRP 标记链霉亲和素为与辣根过氧化物酶聚合物偶联的生物素结合蛋白, 可以实现信号放大, 通过 IHC 或其它方法检测生物素标记的抗体 在样本体积有限或目标分子较少的免疫检测中,Pierce Poly-HRP 标记链霉亲和素可提供最高的灵敏度和极低的背景 Poly-HRP 标记链霉亲和素经纯化去除了未偶联的链霉亲和素分子, 这些未偶联的分子通过与偶联的分子竞争结合位点, 会造成信号强度的降低 另外, 该偶联物不含可造成背景信号的 HRP 单体 特点 : 高灵敏度 可检测低丰度的目标 ( 皮克至飞克范围 ), 并具有高性噪比 功能强劲 一致性的生产和纯化可去除未偶联的分子, 将背景降至最低, 同时具有高灵敏度 灵活 与显色 荧光和化学发光底物兼容 多用途 可适用于 ELISA Western blotting 和 IHC 简单易用 可以直接用于免疫检测和其它检测分析中 方便 即用型稳定的液体形式, 储存于 4 C 价格实惠 与常规 HRP 偶联物相比, 每次分析仅需更少的偶联物 链霉亲和素, 辣根过氧化物酶标记 Thermo Scientific Pierce 辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素为高纯度产品, 与辣根过氧化物酶偶联用于基于底物的检测 在各种常规分析实验中, 如 Western blotting ELISA IHC 和荧光成像等,Pierce 辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素可以检测生物素标记的抗体或其它核酸探针 链霉亲和素, 碱性磷酸酶标记 Thermo Scientific Pierce 碱性磷酸酶标记的链霉亲和素与显色或荧光底物一起, 可以通过信号放大的方式用于检测生物素 76

76 高敏中性亲和素, 辣根过氧化物酶标记 Thermo Scientific Pierce 辣根过氧化物酶标记的高敏中性亲和素为特殊制备的过氧化物酶偶联的生物素结合蛋白, 具有类似于 Poly-HRP 标记物所具有的信号放大功能和杰出的储存稳定性 这种特殊生产的辣根过氧化物酶偶联的亲和素蛋白旨在满足科学家在 ELISA 和 Western blotting 中进行灵敏检测的需求 这种偶联物适合和化学发光 化学荧光及显色底物一起使用 每个高敏辣根过氧化物酶偶联物都以方便的稳定溶液形式提供, 可在 4 条件下储存至少一年 特点 : 中性亲和素蛋白 一种特殊的去糖基化亲和素, 在诸多实验应用中具有高特异性和低背景 高灵敏度 可检测低水平的目标而无背景影响 ; 具有高性噪比 实惠 在 Western blotting 和 ELISA 实验中使用更少的偶联物, 仍然能获得出色的结果 灵活 与标准的化学发光 荧光和显色过氧化物酶底物兼容 方便 即用型的稳定溶液形式, 无需等待溶解及分装 中性亲和素, 碱性磷酸酶标记 Thermo Scientific 碱性磷酸酶标记的中性亲和素蛋白一种特殊制备的亲和素, 其在与生物素结合过程中能有效降低背景 偶联的中性亲和素在 Western blot ELISA 和 IHC 等需要生物素结合探针的应用中具有出色的性能 中性亲和素蛋白具有高检测特异性及高性噪比 特点 : 近中性的等电点 pi = 6.3, 比天然亲和素更加接近中性 几乎无糖基化 与天然亲和素相比, 与凝集素结合的可能性更低 无 RYD 识别序列 不含链霉亲和素中那些已知的脱靶结合域 价格合理 比链霉亲和素成本更低 中性亲和素, 辣根过氧化物酶标记 Thermo Scientific Pierce 辣根过氧化物酶标记的中性亲和素是特殊制备的与过氧化物酶偶联的生物素结合亲和素, 可显著降低 Western blotting 和 ELISA 中的背景 中性亲和素蛋白是从鸡蛋清中纯化的去糖基化天然亲和素 通过一种独特的方法去除多余的糖类, 得到的蛋白具有更中性的等电点和更少的非特异性结合 中性亲和素蛋白具有高检测特异性和高性噪比的灵敏度 经纯化和偶联的中性亲和素蛋白在 Western blot ELISA 和 IHC 等需要生物素结合探针的实验中拥有出色的性能 亲和素, 辣根过氧化物酶标记 Thermo Scientific Pierce 辣根过氧化物酶偶联的亲和素主要用于基于生物素的检测应用中, 如 Western blotting 或使用合适酶底物的 ELISA 检测中 从鸡蛋清中纯化的亲和素是一种可有效结合生物素的糖蛋白 特点 : 天然亲和素 从鸡蛋清中纯化的糖蛋,67kDa, pi = 10. 可溶性 糖基化和等电点特性使得亲和素比链霉亲和素具有更大的可溶性 价格合理 比重组链霉亲和素成本更低 ABC 染色 在 IHC 中进行亲和素 - 生物素复合物 (ABC) 染色时, 更倾向于使用亲和素而非链霉亲和素 辣根过氧化物酶偶联 适用于基于膜和平板的分析 产品规格货号 酶标记链霉亲和素 Pierce Streptavidin, Horseradish Peroxidase Conjugated Pierce High Sensitivity Streptavidin-HRP 2 mg mg mg ml ml Pierce Streptavidin Poly-HRP 0.5 ml Streptavidin Protein, AP 1 mg mg 酶标记中性亲和素 NeutrAvidin Protein, HRP 2 mg Pierce High Sensitivity NeutrAvidin-HRP 0.5 ml ml NeutrAvidin Protein, AP 2 mg 酶标记亲和素 Avidin Protein, HRP 2 mg mg Avidin, AP conjugate 2 ml 免疫诊断 77

77 荧光链霉亲和素和亲和素偶联物 免疫诊断 Alexa Fluor 荧光标记链霉亲和素 亲和素和中性亲和素 我们可提供一系列的 Invitrogen Molecular Probes Alexa Fluor 荧光标记链霉亲和素 亲和素和中性亲和素 Alexa Fluor 染料及其偶联物包括极其明亮的偶联物 出色的光稳定性及一系列的发射光 Alexa Fluor 荧光标记链霉亲和素 链霉亲和素标记物 Ex (nm) Em (nm) Alexa Fluor 350 Streptavidin Alexa Fluor 405 Streptavidin Alexa Fluor 430 Streptavidin Alexa Fluor 488 Streptavidin Alexa Fluor 500 Streptavidin Alexa Fluor 514 Streptavidin Alexa Fluor 532 Streptavidin Alexa Fluor 555 Streptavidin Alexa Fluor 546 Streptavidin Alexa Fluor 568 Streptavidin Alexa Fluor 594 Streptavidin Alexa Fluor 610 Streptavidin Alexa Fluor 633 Streptavidin Alexa Fluor 635 Streptavidin Alexa Fluor 647 Streptavidin Alexa Fluor 660 Streptavidin Alexa Fluor 680 Streptavidin Alexa Fluor 700 Streptavidin Alexa Fluor 750 Streptavidin 中性亲和素和亲和素标记物 Alexa Fluor 350 NeutrAvidin Alexa Fluor 488 Avidin 荧光激发 (Ex) 和发射 (Em) 波长的近似最大值, 单位为 nm Alexa Fluor 藻胆蛋白标记链霉亲和素 Invitrogen Molecular Probes Alexa Fluor 藻胆蛋白标记链霉亲和素是荧光标记的链霉亲和素, 其含有经长波长 Alexa Fluor 染料标记的串联染料 R-PE (R-Phycoerythrin) 和 APC (Allophycocyanin) 这些串联的偶联物由一个供体 (phycobiliprotein R-PE 或 APC) 偶联到发射更长波长的荧光受体构成 通过荧光共振能量转移 (FRET) 过程, 在供体 R-PE 或 APC 吸收光形成受体染料荧光处形成一个级联能量转移 这个过程非常有效, 使得大部分能量转移到受体染料上 串联 Alexa Fluor 藻胆蛋白标记链霉亲和素 串联 R-PE 标记物 链霉亲和素标记物 Ex (nm) Em (nm) Alexa Fluor 610 R-PE Streptavidin 496, 546, 565 Alexa Fluor 647 R-PE Streptavidin 496, 546, 565 Alexa Fluor 680 R-PE Streptavidin 496, 546, 565 Alexa Fluor 750 R-PE Streptavidin 496, 546, APC 和串联 APC 标记物链霉亲和素标记物 Ex (nm) Em (nm) Allophycocyanin (APC) Streptavidin Alexa Fluor 680 APC Streptavidin Alexa Fluor 700 APC Streptavidin Alexa Fluor 750 APC Streptavidin 荧光激发 (Ex) 和发射 (Em) 波长的近似最大值, 单位为 nm 固定及透性化的牛肺动脉内皮细胞的骨架 78

78 DyLight 标记链霉亲和素 中性亲和素 Thermo Scientific Pierce DyLight 标记链霉亲和素和中性亲和素为 DyLight 荧光染料标记的生物素结合蛋白, 用于高性能的荧光分析和细胞成像实验 DyLight 荧光团及偶联物具有明亮的荧光 强烈的发射光和出色的光稳定性 DyLight 标记链霉亲和素和中性亲和素链霉亲和素标记物 Ex (nm) Em (nm) Pierce Streptavidin Protein, DyLight Conjugate Pierce Streptavidin Protein, DyLight Conjugate Pierce Streptavidin Protein, DyLight Conjugate Pierce Streptavidin Protein, DyLight Conjugate Pierce Streptavidin Protein, DyLight Conjugate Pierce Streptavidin Protein, DyLight Conjugate Pierce Streptavidin Protein, DyLight Conjugate Pierce Streptavidin Protein, DyLight Conjugate 中性亲和素标记物 Pierce NeutrAvidin Protein, DyLight Conjugate Pierce NeutrAvidin Protein, DyLight Conjugate Pierce NeutrAvidin Protein, DyLight Conjugate Pierce NeutrAvidin Protein, DyLight Conjugate Pierce NeutrAvidin Protein, DyLight Conjugate Pierce NeutrAvidin Protein, DyLight Conjugate Pierce NeutrAvidin Protein, DyLight Conjugate Pierce NeutrAvidin Protein, DyLight 680 Conjugate 激发和发射波长以纳米为单位 (±4nm). Qdot 标记链霉亲和素 Invitrogen Qdot 标记链霉亲和素将链霉亲和素的高特异性结合能力和 Qdot Nanocrystals 出色的光稳定性结合在一起 Qdot Nanocrystals 提供的大面积表面区域使得多个链霉亲和素分子可以同时偶联成单一的荧光团 这种方式带来的好处包括提高目标的亲和力 一些情况下的共结合能力及高效信号放大方法的使用 例如, 将生物素功能化产品和链霉亲和素标签结合, 可以在初步标记步骤后, 通过 夹心法 ( 链霉亲和素 / 生物素 / 链霉亲和素等 ) 实现信号地逐步增强 与 Qdot 标记链霉亲和素不同,Invitrogen Qdot ITK 标记链霉亲和素是将链霉亲和素共价结合到内部两性分子表层, 而无需使用聚乙二醇 (PEG) 连接 Qdot 标记链霉亲和素 链霉亲和素标记物 标记染料 Qdot 525 Streptavidin Conjugate Qdot 525 Qdot 525 ITK Streptavidin Conjugate Kit Qdot 525 Qdot 545 ITK Streptavidin Conjugate Kit Qdot 545 Qdot 565 Streptavidin Conjugate Qdot 565 Qdot 565 ITK Streptavidin Conjugate Kit Qdot 565 Qdot 585 Streptavidin Conjugate Qdot 585 Qdot 585 ITK Streptavidin Conjugate Kit Qdot 585 Qdot 605 Streptavidin Conjugate Qdot 605 Qdot 605 ITK Streptavidin Conjugate Kit Qdot 605 Qdot 625 Streptavidin Conjugate Qdot 625 Qdot 655 Streptavidin Conjugate Qdot 655 Qdot 655 ITK Streptavidin Conjugate Kit Qdot 655 Qdot 705 Streptavidin Conjugate Qdot 705 Qdot 705 ITK Streptavidin Conjugate Kit Qdot 705 Qdot 800 Streptavidin Conjugate Qdot 800 Qdot 800 ITK Streptavidin Conjugate Kit Qdot 800 免疫诊断 79

79 3 偶联 免疫诊断 交联剂 交联是以化学方法通过共价键连接两个或多个分子的过程 交联试剂中包含针对蛋白和其他分子特定官能团 ( 伯胺, 巯基等 ) 的反应性末端 交联试剂已被用于帮助测定近邻关系, 蛋白三维结构, 以及细胞膜上的分子缔合现象 它们对于固相化固定, 半抗原 - 载体蛋白的交联, 制备抗体 - 酶交联物 免疫毒素以及其他标记蛋白试剂也十分有用 其他的应用还包括核酸 药物以及固体表面的修饰 蛋白的构象变化与特定的相互作用相关, 可以通过在相互作用发生前后进行交联研究来分析 对于交联的成功, 比较具有不同臂长的交联剂, 可以提供发生相互作用分子之间的距离信息 通过研究哪些交联剂可以与某个蛋白的特定结构域发生有效的交联, 可以得出该蛋白的三级和四级结构信息 交联剂的应用简化了对于表面受体的研究 在受体与配体接触之前或之后, 通过受体与交联剂的衍生, 可能分离得到受体配体复合物 放射性碘标记交联剂的应用使通过放射自显影检测来鉴定某种特定的受体成为可能 如何选择交联剂交联剂的选择基于它们的化学反应性 ( 例如, 对于特定官能团的专一性 ) 以及其他与预期应用相关的因素, 包括 : 化学特异性 间隔臂长度 水溶性和细胞膜通透性 相同的或不同的反应基团 ( 同双功能与异双功能比较 ) 自发反应或光反应性基团 间隔臂是否可被剪切 包含可被放射性标记或其他方式标记的部分交联剂至少含有两个反应基团 交联的靶官能团包括伯胺, 巯基, 羰基, 碳水化合物以及羧酸类 ( 见表格 ) 也可以利用光反应性叠氮苯交联剂进行非选择性的偶联 请参考下页中的交联剂选择指南以选择与所需条件相匹配的试剂, 或浏览我们的网站, 使用交互式交联剂选择指南 活性交联剂基团与其官能团靶点 反应基团 官能团靶点 芳基叠氮化物 (Aryl Azide) 非选择性 ( 或伯氨 ) 碳化二亚胺 (Carbodiimide) 氨基 / 羧基 (-NH2/-COOH) 重氮甲烷 (Diazirine) 非选择性 酰肼 (Hydrazide) 醛 (-CHO)( 氧化的碳水化合物 ) 羟甲基膦 (Hydroxymethyl Phosphine) 氨基 (-NH2) 亚胺酸酯 (Imidoester) 氨基 (-NH2) 异氰酸酯 (Isocyanate) 羟基 ( 非水相 )(-OH) 马来酰亚胺 (Maleimide) 巯基 (-SH) 盐乙酸酯 ( 溴代或碘代 ) 巯基 (-SH) (Haloacefale(Bromo-or Iodo-)) N- 羟基琥珀酰亚胺酯 (NHS-ester) 氨基 (-NH2) 五氟代苯酯 (PFP-ester) 氨基 (-NH2) 补骨脂素 (Psoralen) DNA 和 RNA 吡啶基二硫化物 (Pyridyl Disulfide) 巯基 (-SH) 乙烯基砜 (Vinyl SulfoRe) 巯基, 氨基, 羟基 80

80 交联剂选择指南 同型双功能交联剂 ( 两个活性反应基团相同 ) 同型双功能交联剂 ( 两个活性反应基团不同 ) 免疫诊断 以下为两端具有相同活性反应基团的交联剂列表 根据其交联的化学基团及其化学成分对交联剂进行分类 每个单元格内的产品按照臂长递增顺序排列 以下为两端具有不同活性反应基团的交联剂列表 根据其交联的化学基团及其化学成分对交联剂进行分类 每个单元格内的产品按照臂长递增顺序排列 交联靶点反应基团, 特征交联剂产品 氨基 - 氨基 NHS 酯 DSG DSS BS3 TSAT ( 三功能基团 ) NHS 酯 PEG 间隔臂 NHS 酯 可裂解的二硫键 NHS 酯, 多种裂解方式 亚氨酸酯 亚氨酸酯, 可裂解的二硫键 其他 BS (PEG)5 BS (PEG)9 DSP DTSSP DST BSOCOES EGS Sulfo-EGS DMA DMP DMS DTBP DFDNB 巯基 - 巯基 马来酰亚胺 BMOE BMB BMH TMEA ( 三功能基团 ) 马来酰亚胺,PEG 间隔臂 马来酰亚胺, 可裂解 BM(PEG)2 BM(PEG)3 BMDB DTME 交联靶点反应基团, 特征交联剂产品 氨基 - 氨基 NHS 酯 / 马来酰亚胺 AMAS BMPS GMBS 和 Sulfo-GMBS MBS 和 Sulfo-MBS SMCC 和 Sulfo-SMCC EMCS 和 Sulfo-EMCS SMPB 和 Sulfo-SMPB SMPH LC-SMCC Sulfo-KMUS 氨基 - 无选择性 ( 光反应性 ) NHS 酯 / 马来酰亚胺, PEG 间隔臂 NHS 酯 / 吡啶二巯基, 可裂解 NHS 酯 / 卤代乙酰基 NHS 酯 / 芳香叠氮化合物 NHS 酯 / 双吖丙啶 NHS 酯 / 双吖丙啶, 可裂解 SM(PEG)2 SM(PEG)4 SM(PEG)6 SM(PEG)8 SM(PEG)12 SM(PEG)24 SPDP LC-SPDP 和 Sulfo-LC-SPDP SMPT PEG4-SPDP PEG12-SPDP SIA SBAP SIAB Sulfo-SIAB ANB-NOS Sulfo-SANPAH SDA 和 Sulfo-SDA LC-SDA 和 Sulfo-LC- SDA SDAD 和 Sulfo-SDAD 羧基 - 氨基 碳化二亚胺 DCC EDC 另见 :NHS 和 Sulfo-NHS 巯基 - 碳水化合物 马来酰亚胺 / 酰肼 吡啶二巯基 / 酰肼 BMPH EMCH MPBH KMUH PDPH 羟基 - 巯基异氰酸盐 / 马来酰亚胺 PMPI 氨基 -DNA NHS 酯 / 补骨酯素 SPB 81

81 4 非特异性结合 免疫诊断 我们可提供一系列的用于多种免疫检测过程的高质量缓冲液和试剂 我们的去垢剂经过一系列的处理, 使氧化物和羰基化合物的含量降至最低 封闭缓冲液 致力于减少非特异性结合,Thermo Scientific Pierce 封闭缓冲液可以用于多种蛋白检测体系中, 如 ELISA Western blotting 顺序测流设备和蛋白芯片 我们可以提供种类丰富的封闭缓冲液, 含各种不同的封闭剂和缓冲液配方 选择适合您实验的封闭缓冲液 产品 ELISA WB IHC 核酸检测 SuperBlock Blocking Buffers StartingBlock Blocking Buffers Blocker Casein Blocking Buffers Blocker BSA Blocking Buffers Blocker BLOTTO Blocking Buffer SEA BLOCK Blocking Buffer Pierce Protein-Free Blocking Buffers I-Block Protein- Based Blocking Reagent 适用于使用抗体或亲和素 / 生物素探针的 IHC( 封闭液不含血清和生物素 ) 82

82 Pierce Protein-Free Blocking Buffer Thermo Scientific Pierce Protein-Free Blocking Buffer 特点如下 : 不含蛋白的封闭试剂 最大程度减少甚至消除基于蛋白的封闭缓冲液的交叉反应性 实验兼容性好 在各种蛋白检测体系中均有效, 包括 Western blots ( 膜 ), ELISA ( 微孔板 ) 和芯片 ( 包被的载玻片 ). 方便使用链霉亲和素 绝对不含生物素 ; 无亲和素 - 生物素检测体系干扰 高性能 通过许多蛋白研究方法进行优化和验证, 具有高性噪比 ( 比如不会抑制特异性结合和信号, 却能消除非特异性结合和背景 ) 灵活 可在 PBS 和 TBS 中使用, 适合多种实验应用 SuperBlock Blocking Buffer Thermo Scientific SuperBlock Blocking Buffer 特点如下 : 快速 一般在 5-10 分钟内完成膜的封闭,2 分钟内完成 ELISA 平板的封闭 灵活 不含生物素, 可以用于链霉亲和素体系中 方便 在多种包装中 (100mL, 1L, 5L 和预混干粉包装 ) 提供经优化的 PBS 或 TBS 溶液 背景低 不含血清蛋白溶液可获得高的性噪比 稳定 在 4 C 储存一年 ; 可储存干的封闭板长达 12 个月 免疫诊断 StartingBlock Buffer Thermo Scientific StartingBlock Buffer 特点包括 : 与诸多检测体系兼容 Western blot ELISA 和使用抗体或亲和素 / 生物素探针 ( 封闭液不含血清和生物素 ) 的 IHC 封闭时间短 对于 NC 膜或 PVDF 膜只需 15 分钟, 对于聚苯乙烯微孔板封闭时间更快 剥离后再次孵育无需重新封闭 即使使用 Thermo Scientific Restore Stripping Buffer( 货号 21059) 剥离后印迹膜也能保持封闭状态 高性噪比 因不含生物素和血清蛋白, 所以可以得到很好的信噪比 (10:1 到 20:1) 方便的包装规格 在 PBS 和 TBS 中的即用型 1X 溶液, 含或不含 Tween -20 去垢剂 Blocker Casein Thermo Scientific Blocker Casein 特点包括 : 纯化的酪蛋白 单一蛋白封闭缓冲液, 与血清或牛奶溶液相比, 几乎不会和反应组分发生交叉反应 方便使用 1% 的 Hammersten 级别酪蛋白溶液可以即用 ; 也可根据需求进一步稀释 灵活 溶于 PBS 和 TBS 中, 适合多种实验应用 安全 稳定且不含硫汞撒 Blocker BSA Thermo Scientific Blocker BSA 特点包括 : 纯化的蛋白 10% 的高质量牛血清白蛋白 ; 经纯化的单一蛋白, 与血清或牛奶溶液相比, 几乎不会和反应组分发生交叉反应 方便 浓缩形式可以减少储存空间, 可以方便的进行稀释, 对于特定的应用可以达到最佳的封闭效果 使用简单 即溶的液体浓度, 无需像溶解粉末那样等待 SEA BLOCK Blocking Buffer Thermo Scientific SEA BLOCK Blocking Buffer 特点包括 : 非哺乳动物 来源于虹鳟和鲑鱼血清 使用非哺乳动物蛋白封闭试剂, 可将由非特异性作用引起的背景降至最低 方便 经过滤稳定储存于 PBS 中, 与大部分检测体系兼容 使用简单 可以以所提供的形式使用, 或者根据需要稀释多达 10 倍使用 灵活 可以用于多种实验应用中, 包括作为抗体稀释剂 83

83 免疫诊断 Blocker BLOTTO Blocking Buffer Thermo Scientific Blocker BLOTTO Blocking Buffer 特点包括 : 普遍 在多种蛋白研究中, 脱脂牛奶已经使用了很多 年, 但是在基于亲和素的研究技术中不推荐使用, 因为 其含有很多内源性生物素 方便 以即用型的 1X TBS 溶液提供 ; 可根据需要进行稀 释 使用简单 使用消泡剂和不含硫汞撒的防腐剂配制 灵活 可以用于多种实验应用中, 包括作为抗体稀释剂 Pierce Fast Blocking Buffer Thermo Scientific Pierce Fast Blocking Buffer 特定包括 : 快速 将常规 Western blot 时间减少至少 2 小时 简单 经优化的实验方案使得 Western blot 分析更为简单 低背景 可获得与传统 Western blotting 缓冲液一样的实验 结果 Pierce Clear Milk Blocking Buffer (10X) Thermo Scientific Pierce Clear Milk Blocking Buffer 特点包括 : 出色的稳定性 储存在 4 时, 可以保持稳定一年, 不 像一般自制的牛奶缓冲液 方便 浓缩形式减少了储存空间, 在一些特定应用中可 以很方便的进行稀释以获取最优的封闭效果 使用简单 即溶的液体溶液, 无需溶解粉末状的牛奶 普遍 在多种蛋白研究中, 脱脂牛奶已经使用了很多 年, 但是在基于亲和素的研究技术中不推荐使用, 因为 其含有很多内源性生物素 产品 规格 货号 Blocker BLOTTO in TBS 1 L Blocker BSA in PBS (10X) 200 ml Blocker BSA in TBS (10X) 125 ml Blocker Casein in PBS 1 L Blocker Casein in PBS 100 ml Blocker Casein in TBS 1 L Pierce Clear Milk Blocking Buffer (10X) 100 ml Pierce Fast Blocking Buffer 500 ml Pierce Fast Blocking Buffer 100 ml Blocker Casein in TBS 100 ml Pierce Protein-Free (PBS) Blocking Buffer 1 L Pierce Protein-Free (PBS) Blocking Buffer 100 ml Pierce Protein-Free (TBS) Blocking Buffer 1 L Pierce Protein-Free (TBS) Blocking Buffer 100 ml Pierce Protein-Free T20 (PBS) Blocking Buffer 1 L Pierce Protein-Free T20 (TBS) Blocking Buffer 1 L SEA BLOCK Blocking Buffer 500 ml SEA BLOCK Blocking Buffer 3 x 500mL 37527X3 StartingBlock (PBS) Blocking Buffer 1 L StartingBlock (PBS) Blocking Buffer 100 ml StartingBlock (TBS) Blocking Buffer 1 L StartingBlock (TBS) Blocking Buffer 100 ml StartingBlock T20 (PBS) Blocking Buffer 1 L StartingBlock T20 (TBS) Blocking Buffer 1 L SuperBlock (PBS) Blocking Buffer 1 L SuperBlock (PBS) Blocking Buffer 5 L SuperBlock (PBS) Blocking Buffer 100 ml SuperBlock (PBS) Blocking Buffer - Blotting 1 L SuperBlock (TBS) Blocking Buffer 1 L SuperBlock (TBS) Blocking Buffer 100 ml SuperBlock (TBS) Blocking Buffer - Blotting 1 L SuperBlock (TBS) Blocking Buffer Dry Blend 5 packs SuperBlock T20 (PBS) Blocking Buffer 1 L SuperBlock T20 (TBS) Blocking Buffer 1 L 了解更多关于封闭缓冲液的信息, 请浏览 thermofisher.com/blockingbuffers 84

84 漂洗缓冲液 BupH Pack 预混干粉缓冲液 Thermo Scientific BupH Packs 是预混合的 预测量的干粉混合物, 可以很方便的配制成常用缓冲液 ; 只需简单地将锡箔小包装倒入烧杯, 加入超纯水, 搅拌至溶解 这种预混包装避免了称量和调节所需时间 BupH Pack 预混干粉缓冲液可用于实验室多种应用 方便 只需将小包装溶于水中, 即可配置好缓冲液 节约时间, 减少麻烦 无需称重, 无需调节 PH, 无需储存单个组分, 无需配置和储存大量的储存液 保存期限长 以干粉包装储存可以无需担心储存液的长期稳定性 消除变量 我们的质量控制可以确保每一个预混包都能配制一致的缓冲液 Pierce 浓缩缓冲液 Thermo Scientific Pierce 浓缩缓冲液可以即时使用, 而无需使用超纯水稀释 这种缓冲液用于渗透 交联 酶分析 ELISA 免疫组织化学 蛋白平板包被 生物素化和其它应用 使用简单 无需拆小包装, 无需溶解粉末 增加准确性 可以避免粉末残留于小包装内 节约时间 20X 的浓度减少了花在溶解粉末上的时间 节省空间 以浓缩形式储存减少了储存工作液所需的空间 免疫诊断 BupH Pack 预混干粉缓冲液和 Pierce 浓缩缓冲液 BupH Packs 预混干粉缓冲液说明 应用 溶解后配方 磷酸盐缓冲液 (PBS) 需要无氨基缓冲液的交联和生物素标记 500mL 的 0.1M 磷酸钠 0.15M NaCl,pH 7.2 Modified Dulbecco's PBS 适用于 ELISA 蛋白质免疫印迹和其他免疫分析的漂洗缓冲液和抗体稀释液 500mL 的 8mM 磷酸钠 2mM 磷酸钾 0.14M NaCl 10mM 氯化钾,pH 7.4 Tris 盐缓冲液 适用于 ELISA 蛋白质免疫印迹和其他免疫分析的漂洗 500mL 的 25mM Tris 0.15M NaCl,pH 7.2 缓冲液和抗体稀释液 Pierce 浓缩缓冲液说明 应用 溶解后配方 Pierce 20X Modified Dulbecco's PBS 缓冲液 适用于 ELISA 蛋白质免疫印迹和其他免疫分析等应用的漂洗缓冲液和抗体稀释液 8mM 磷酸钠 2mM 磷酸钾 0.14M NaCl 100mM KCl,pH 7.4 Pierce 20X Modified Dulbecco's PBS Tween-20 缓冲液 适用于 ELISA 蛋白质免疫印迹和其他免疫分析的漂洗缓冲液, 以及适用于基于反应板的分析的封闭缓冲液 8mM 磷酸钠 2mM 磷酸钾 0.14M NaCl 100mM KCl 0.05% Tween-20,pH 7.4 Pierce 20X 磷酸盐缓冲液 其离子强度使其适用于需要无氨基缓冲液的交联和生 0.01M 磷酸钠 0.15M NaCl,pH 7.5 物素标记 Pierce 20X PBS Tween-20 缓冲液 适用于 ELISA 蛋白质免疫印迹和其他免疫分析的漂洗缓冲液, 以及适用于基于反应板的分析的封闭缓冲液 0.01M 磷酸钠 0.15M NaCl 0.05% Tween-20,pH 7.5 Pierce 20X TBS 缓冲液 适用于 ELISA 蛋白质免疫印迹和其他免疫分析等应用 25mM Tris 0.15M NaCl,pH 7.2 的漂洗缓冲液和抗体稀释液 Pierce 20X TBS Tween-20 缓冲液 适用于 ELISA 蛋白质免疫印迹和其他免疫分析的漂洗缓冲液, 也可作为反应板分析的封闭缓冲液 25mM Tris 0.15M NaCl 0.05% Tween-20,pH 7.5 产品规格货号 Pierce Fast Wash Buffer, 10X 1 L Wash Buffer (25X) 100 ml WB01 Wash Buffer (25X) 1 L WB02 BupH Phosphate Buffered Saline Packs 40 Packs BupH Tris Buffered Saline Packs 40 Packs BupH Tris Buffered Saline Packs 10 Packs PBS (Phosphate-Buffered Saline) Powder 12 x 1L PBS (Phosphate-Buffered Saline) Tablets 100 tablets PBS (Phosphate-Buffered Saline) (10X) ph ml AM9624 PBS (Phosphate-Buffered Saline) (10X) ph L AM9625 Pierce 20X PBS Tween-20 Buffer 500 ml Pierce 20X Phosphate Buffered Saline 500 ml Pierce 20X TBS Buffer 500 ml Pierce 20X TBS Tween-20 Buffer 500 ml TBS Buffer 1 pack R017R.0000 WesternBreeze Wash Solution (16X) 2 x 100 ml WB

85 免疫诊断 去垢剂 Pierce Surfact-Amps 去垢剂 Thermo Scientific Pierce Surfact-Amps 去垢剂是高度纯化的 精确稀释的 (10%) 产品, 可以理想地用于那些对去垢剂中污染物敏感的实验应用和分析中 我们对每批次产品都进行了检测, 确保我们的去垢剂中氧化剂和羰基化合物的含量 <1.0μeq/mL, 并且我们在氮气环境下包装, 避免储存过程中的氧化 精确 在超纯水中的精确 10% 浓度洗涤剂 使用方便 溶液形式方便分配和稀释 超纯 溶液中氧化剂和羰基化合物的含量少于 1.0μeq/mL 稳定 用惰性氮气包装于玻璃安瓿瓶或 HDPE 瓶 未加水的去垢剂非常粘滞,Surfact-Amps 10% 与此不同, 其非常容易吸取和精确分配 这种表面活性剂溶液经精确配制并包装于充满惰性气体的 HDPE 瓶中, 以保持稳定且减少氧化剂和分解产物的聚集 Surfact-Amps 去垢剂溶液经过多个步骤的纯化过程以去除有毒的污染物 这个纯化过程已经过 20 多年的优化, 同时使用提纯试剂 萃取 充分的漂洗和其它操作, 显著降低了氧化物和羰基化合物的含量水平, 这些物质可影响洗涤剂的性能和稳定性, 同时会造成背景效应 Pierce Surfact-Amps 去垢剂 非离子去垢剂 阴离子去垢剂 两性离子去垢剂 Triton X-100, 10% Sodium Dodecyl CHAPS Sulfate (Lauryl SDS) Triton X-114, 10% Sodium Dodecyl Sulfate (C 12 SDS) n-dodecyl- beta-dmaltoside NP-40, 10% Sodium Dodecyl Sulfate (Lauryl SDS) Brij -35, 30% Sodium Dodecyl Sulfate (Lauryl SDS), 20% Solution Brij-35, 10% Sodium Cholate Brij-58, 10% Sodium Deoxycholate Tween-20, 10% Tween-80, 10% Octyl-beta-Glucoside 1-S-Octyl-beta- thioglucopyranoside (OTG) 蛋白稳定剂 Guardian 过氧化物酶标记物稳定剂 / 稀释液 Thermo Scientific Guardian 过氧化物酶标记物稳定剂 / 稀释剂在稀释浓度下可保存 HRP 偶联抗体和其它蛋白的功能完整性和活性, 以便于长期储存 保存 HRP 的活性 室温下存放 6 个月 (1:1,000 稀释 ) 或 4 C 下存放 12 个月 HRP 活性没有明显的损失 方便 将即用型的 可维持酶活性的稀释液 (1:1,000 到 1:100,000) 存放于冰箱中, 无需分装, 无需冷冻 实验兼容性好 只需简单地加入所需的封闭液即可配制成理想的稀释液以用于您的基于 HRP 的 ELISA 体系, 或者将 HRP 偶联物以 1:1,000 储存于储存液中, 用于 Western blots, 在最后检测缓冲液中再稀释 价格实惠 比重新订购新的 HRP 偶联物便宜很多 使用 Guardian 过氧化物酶偶联物稳定剂 / 稀释剂, 一般 1mg/ ml 抗体或链霉亲和素过氧化物酶偶联物可以稀释 100,000 倍储存于 4 C 大部分 ELISA 和 blotting 实验所用 HRP 偶联物都需将 1mg/mL 稀释 1,000 倍进行储存 (1μg/mL) 灵敏检测体系, 如使用化学发光底物的实验, 经常需要稀释 100,000 倍 (10ng/ ml) Guardian 溶液使得我们可以提前准备好 1X 浓度的 HRP 偶联物工作液, 在 4 C 下储存 12 个月或常温下 6 个月 使用 Guardian 稳定剂 / 稀释剂,HRP 偶联物具有更好的稳定性 产品规格货号 Guardian Peroxidase Conjugate Stabilizer/ Diluent 200 ml L

86 5 检测底物 在所有酶学免疫测定系统中, 最后阶段的实验均是使用酶底物的检测步骤 酶标记的反应物可以使用化学显色 化学发光或化学荧光底物进行检测 化学显色底物一般最便宜, 而发光底物或荧光底物经常更灵敏 当进行 ELISA 实验时, 经常使用可溶底物并将之转化为可溶的终产物 ELISA 在聚苯乙烯平板中进行, 使用分光光度计 ( 对于冷光使用照度计, 对于荧光使用荧光计 ) 对信号的发生进行监控以确定酶的水平 当进行免疫印迹或免疫组化研究时, 使用可溶底物并将之转化为不可溶的终产物 当进行免疫印迹时, 抗原固定于硝化纤维素膜或 PVDF 膜上, 并且需要使用会产生沉淀的底物 免疫诊断 检测底物的比较 ELISA 特性 化学显色底物荧光底物化学发光底物 中 / 低灵敏度 通常不贵 许多底物可供使用 信号产生慢 酶催化快速 线性范围最宽, 检测范围低端的线性度较差 高灵敏度 通常很贵 很少底物可供使用 信号产生快 酶活性持久 线性范围最宽, 检测范围低端的线性度更好 最高灵敏度 通常很贵 很少底物可供使用 信号产生快 酶催化快速 线性范围最宽, 检测范围低端的线性度更好 检测仪器 分光光度计 荧光计 光度计推荐平板类型 透明 不透明 黑色 不透明 白色 可使用的酶系统 HRP AP β-gal HRP HRP 化学发光底物 我们提供多种化学发光底物用于免疫检测, 可以用于 HRP AP 或 beta-gal 检测系统中 Thermo Scientific SuperSignal ELISA Pico Chemiluminescent Substrate 在检测宽范围蛋白靶点含量方面具有出色的性能, 同时比入门级的显色底物具有更高的灵敏度 可快速生成信号, 并根据 HRP 的浓度稳定保持 5-30 分钟 Thermo Scientific SuperSignal ELISA Femto Maximum Sensitivity Substrate 是用于 ELISA 的最高灵敏度底物 经合理的优化后, 其最低检测限度比常规使用的显色底物低 1-10 个数量级 Invitrogen DynaLight Substrate with RapidGlow Enhancer 是我们最新的即用型化学发光底物 其经过优化在基于溶液的检测中可快速的获得结果 DynaLight Substrate with RapidGlow Enhancer 包括 1,2-dioxetane 化学发光底物和聚合物增强剂, 通过碱性磷酸酶标记可实现超灵敏的免疫检测 Applied Biosystems AMPPD, CSPD 和 CDP-Star Substrates 是化学发光 AP 底物, 可同样用于免疫检测中 我们提供很多含增强剂的即用型配方底物, 同时也可提供定制配方以满足您的特殊需求 Invitrogen Gal-Star Substrate 是化学发光 Beta-Gal 底物, 用于基于溶液的分析检测 通过使用增强剂, 如 Invitrogen Sapphire-II 和 Invitrogen Emerald-II Luminescence Enhancers, 其灵敏度可得到提高 87

87 SuperSignal ELISA Pico Chemiluminescent Substrate 免疫诊断 SuperSignal ELISA Pico 化学发光底物可生成强烈的光信号, 在基于光度仪的分析中表现出优异的性能 SuperSignal ELISA Pico 化学发光底物在 ELISA 或其它基于液体分析的酶检测和定量实验中具有高灵敏度 在试管或微孔板中进行的 ELISA 均通过检测相对光单位 (RLU) 来进行定量 特点 : 即时光信号 在室温或 37 C 下即刻产生强烈的光信号, 发射光为 425nm 高性噪比 背景极低 高灵敏度 在 ELISA 中可检测皮克级的蛋白 方便 常温运输且室温下储存 高稳定性 在 8 小时内工作液拥有一致的性能,24 小时活性仅下降 10% 灵活 可在黑色或白色反应板中读取信号 SuperSignal ELISA Femto Maximum Sensitivity Substrate SuperSignal ELISA Femto 高敏底物用于更高级别的蛋白检测, 对于化学发光 ELISA 应用的检测范围低端有更好的线性度 该底物在 ELISA 或其它基于液体的分析中具有更高的灵敏度, 用于酶检测和定量 在试管或微孔板中进行的 ELISA 均通过检测相对光单位 (RLU) 来进行定量 特点 : 即时光信号 在室温或 37 C 下即刻产生强烈的光信号, 发射光为 425nm 检测范围低端的线性度更好 轻松检测低丰度蛋白, 获得高信噪比的结果 高灵敏度 在 ELISA 中可检测飞克级别的目标蛋白 检测时间缩短 具有高灵敏度从而减少了孵育时间 稳定 室温下可储存 6 个月或者 4 C 下至少可储存 12 个月, 工作液稳定性可保持 6 小时 DynaLight Substrate with RapidGlow Enhancer DynaLight Substrate with RapidGlow Enhancer 是一种即用型的化学发光底物, 可在基于溶液的检测分析中快速获得结果 DynaLight Substrate with RapidGlow Enhancer 配方包括 1,2-dioxetane 化学发光底物和一种多聚增强剂, 可在 AP 标记的免疫中进行超敏免疫检测 DynaLight Substrate with RapidGlow Enhancer 可提供超高灵敏度 更宽的动态范围和快速读取, 有助减少进行免疫检测的时间 该底物经 AP 催化会发生强劲的化学发光反应, 可在 37 C 条件下两分钟内获得最大发射光并且保持数小时的稳定信号 当与 DynaLight Trigger Solution 结合使用时,DynaLight Substrate with RapidGlow Enhancer 可在数秒内得到最高的信号 DynaLight Trigger Solution 短短一秒内将信号强度提升 6 倍, 并且比其它化学发光技术具有更长的半衰期, 从而使得有足够的时间来收集数据 特点 : 检测飞克级的目的蛋白, 获得较好的低端线性度 灵敏 可检测阿摩尔级 (attomole) 的纯化 AP 酶 快速 比显色 荧光或其它化学发光物质具有更为快速的动力学特征和更高的信号水平 经过优化 可用于微孔板或磁珠形式的免疫检测 稳定 超过一年的信号稳定性 SuperSignal ELISA Femto 高敏底物使用优化的增强体系, 可满足高通量筛选应用和诊断分析的需求 SuperSignal ELISA Femto 高敏底物在一分钟内可生成可检测的光信号, 每次分析节约了至少 30 分钟 此特点让 SuperSignal ELISA Femto 高敏底物可理想应用于高通量分析 在基于微球的免疫分析中,30 下, 加入 DynaLight Trigger Solution 之前和之后的信号动力学分析 88

88 CDP-Star 底物 CDP-Star 适用于基于溶液的检测, 如免疫检测 核酸探针检测和直接酶法检测 CDP-Star 可在报告基因分析中进行胎盘碱性磷酸酶和分泌性碱性磷酸酶的检测, 也广泛应用于免疫分析平台, 如分析物鉴定 小分子和病毒核酸检测 达到最高光信号水平的时间通常在 30 分钟内, 之后辉光信号发射可持续若干小时 其他潜在应用包括巴氏杀菌检测 碱性或酸性磷酸酶标记物检测 ( 干细胞 肿瘤标记物 ) 和纯化蛋白磷酸酶活性的灵敏定量 CDP-Star with Sapphire-II 或 Emerald-II ( 辉光型底物配方 ) 和 DynaLight with RapidGlow Enhancer ( 闪光型和辉光型底物 ) 在初始的一分钟内即可达到高信号水平 (Dynalight 达到最高信号水平的速度快于 CDP-Star), 且与高 ph 溶液相兼容, 两者均适用于几种不同的读取模式 在具有 加入 - 读取 参数的仪器中,1,2-dioxetanes 可通过单组分试剂 ( 单独的底物 ) 或双组份试剂 ( 底物以及触发溶液, 如 DynaLight Trigger Solution) 的方式加入, 以实现加入底物后的若干秒至数分钟即获得读数 免疫诊断 在基于微球的免疫分析中,30 下,DynaLight /RapidGlow 和 CDP-Star / Emerald-II 配方的信号动力学分析 89

89 产品规格货号 免疫诊断 250 ml SuperSignal ELISA Pico Chemiluminescent Substrate 100 ml ml SuperSignal ELISA Femto Substrate 100 ml ml DynaLight Substrate with RapidGlow Enhancer 1 L ml T2141 CSPD Substrate (0.25 mm Ready-To-Use) 100 ml T ml T2143 CSPD Substrate (0.25 mm Ready-To-Use) with Nitro-Block Enhancer 100 ml T2217 CSPD Substrate (0.4 mm Ready-To-Use) with Emerald-II Enhancer, Size A 100 ml T2212 CSPD Substrate (0.4 mm Ready-To-Use) with Sapphire-II Enhancer, Size B 100 ml T ml T ml T ml T2041 CSPD Substrate (25 mm Concentrate) 5 ml T ml T ml T ml T ml T2145 CDP-Star Substrate (0.25 mm Ready-To-Use) 100 ml T ml T2147 CDP-Star Substrate (0.25 mm Ready-To-Use) with Nitro-Block-II Enhancer 100 ml T2218 CDP-Star Substrate (0.4 mm Ready-To-Use) with Emerald-II Enhancer, Size A 100 ml T2216 CDP-Star Substrate (0.4 mm Ready-To-Use) with Sapphire-II Enhancer, Size A 100 ml T ml T ml T ml T2306 CDP-Star Substrate (12.5 mm Concentrate) 10 ml T ml T ml T ml T

90 针对 AP 和 HRP 的显色底物 我们提供以下的显色底物, 以用于使用 AP 和 HRP 的免疫检测 PNPP (p-nitrophenyl phosphate, disodium salt) 在 ELISA 应用中作为检测碱性磷酸酶 (AP) 的底物而被广泛使用 PNPP 生成黄色水溶性的反应产物, 其吸收光在 405nm 处 PNPP 可以晶体粉末形式 5mg 片剂形式或即用型形式提供 ABTS (2,2 -Azinobis [3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid]-diammonium salt) 用于检测 HRP, 可得到一种绿色水溶性的反应产物 这种绿色产物具有两个主要的吸收峰,410nm 和 650nm 在 HRP 检测方面,ABTS 的灵敏度低于 OPD 和 TMB 生色反应相对较慢 ( 大约 20 分钟 ), 当 OPD 和 TMB 因为较高的灵敏度出现难以接受的背景时,ABTS 不失为一个较好的选择 ABTS 可以片剂或即用型形式提供 免疫诊断 OPD (o-phenylenediamine dihydrochloride) 用于检测 HRP, 可得到一种黄橙色的水溶性产物 反应产物具有最高 492nm 的吸收峰 OPD 以粉末或片剂形式提供, 将其溶解于稳定的过氧化氢底物缓冲液即可进行配制 TMB (3,3,5,5 -tetramethylbenzidine) 底物溶液当检测 HRP 时可形成蓝色产物 反应产物的主要吸收峰在 370nm 和 652nm 在加入硫酸或磷酸终止反应后, 产物会变为黄色, 最大吸收峰为 450nm TMB 灵敏度很高, 比起其它 HRP 底物会更快被氧化, 因此可以很快显色 Pierce 1-Step Ultra TMB ELISA 底物 Thermo Scientific Pierce 1-Step Ultra TMB ELISA 底物用于检测 HRP 活性, 生成蓝色产物 (A max =370nm 和 652nm), 当加入硫酸或磷酸终止反应时, 溶液变为黄色 (A max =450nm) 1-Step Ultra TMB 是最灵敏的显色底物 特点 : 灵敏 在所有 TMB 底物中灵敏度最高 (2pg 每孔 ) 性噪比最高 即用型 单一成分, 在溶液中不含 DMF 或 DMSO 稳定 保存期长达 3 年 有竞争力的价格 可提供现成的 1L 包装 安全 无致癌性 方便 无需额外试剂或过滤. TMB 是 ELISA 中最常使用的显色底物, 可以多种规格形式提供 1-Step TMB 底物为单一组分的底物, 使用前无需提前制备 不像其它商品化底物, 我们的产品不含 DMF 或 DMSO 1-Step Ultra TMB 在所有 TMB 底物中具有最高的灵敏度 1-Step Turbo TMB 的灵敏度类似于基于 OPD 的底物 1-Step Slow TMB 具有适中的灵敏度, 比 ABTS 灵敏度高, 但比 OPD 和 1-Step Turbo TMB 灵敏度低 1-Step Slow TMB 是进行动力学研究的最适底物 Pierce 1-Step NBT/BCIP 底物溶液 Thermo Scientific Pierce 1-Step NBT/BCIP 底物溶液是含硝基四氮唑蓝和 5- 溴 -4- 氯 -3 - 吲哚基 - 磷酸盐的溶液, 用于显色印迹和 IHC 染色 当与碱性磷酸酶发生反应,NBT ( 硝基四氮唑蓝 ) 和 BCIP (5- 溴 -4- 氯 -3 - 吲哚基 - 磷酸盐 ) 混合会产生明显的不可溶黑紫色沉淀 Pierce NBT 和 BCIP 可单独提供粉末形式, 或者两种规格的即用型溶液 ( 含或不含内源磷酸酶活性的左旋咪唑抑制剂 ) 特点 : AP 底物 可在固体介质上检测 AP 的活性, 包括硝酸纤维素膜 PVDF 膜及固定的组织样本 显色检测 观察结果无需特殊仪器 ; 紫黑色沉淀容易拍照 多种包装规格选择 可选择单独的 NBT 和 BCIP 粉末, 或者即用型的含或不含左旋咪唑抑制剂的溶液形式 Pierce NBT/BCIP 1-Step Solution 特点 : 最适用于免疫印迹 即用型的单一组分 灵敏度高且背景低, 实验批次间的差异减小 Pierce NBT/BCIP plus Suppressor 特点 : 适用于免疫组化 即用型的单一组分 含 1mM 左旋咪唑抑制内源性磷酸酶活性, 当小牛肠磷酸酶存在时, 产生明显的黑紫色沉淀 产品 规格 货号 250 ml Step Ultra TMB-ELISA Substrate Solution 1 L Step NBT/BCIP Substrate Solution 250 ml Step NBT/BCIP plus Suppressor Substrate Solution 100 ml

91 荧光底物 如下化学荧光底物可用于 HRP 相关的 ELISA 应用 免疫诊断 QuantaBlu 荧光底物有一个较大的线性检测范围, 低端线性度好, 用于检测 HRP 这种稳定的荧光反应产物其 E max /A max 为 420nm/325nm, 可以进行终止 非终止和动力学分析 Thermo Scientific QuantaRed 增强型化学荧光底物是最灵敏的荧光 ELISA 底物 荧光反应产物可保持 4 小时稳定, 当反应终止时, 其 E max /A max 为 585nm/570nm 红移反应产物试卤灵(resorufin) 使得可以在一个不受自发荧光干扰的波长下进行检测 Molecular Probes Amplex Red Reagent 是我们检测过氧化物酶最好的的荧光底物之一 因为 H 2 O 2 在许多酶反应中都会产生,Amplex Red reagent 使得研究者可以检测多种不同酶的活性 Molecular Probes Amplex UltraRed Reagent 提升了 Amplex Red reagent 的性能, 具有更明亮的荧光和增强的灵敏性 了解更多关于 ELISA 检测底物的信息, 请浏览 thermofisher.com/elisasubstrates 产品 规格 货号 QuantaBlu NS/K Fluorogenic Substrate Kit 280 ml QuantaBlu Fluorogenic Peroxidase Substrate Kit 550 ml QuantaRed Enhanced Chemifluorescent HRP Substrate Kit 110 ml Amplex Red Reagent 5 mg A12222 Amplex Red Reagent 10 x 10 mg A22177 Amplex UltraRed Reagent 5 x 1 mg A

92 分子克隆与抗体生产 分子克隆与抗体制备 抗体是在人和动物体内, 由于外来物质入侵刺激机体而在细胞中产生的免疫球蛋白 包括酶联免疫吸附实验在内的许多 免疫检测方法都离不开抗体, 是众多免疫诊断试剂盒的重要组成部分 无论是多克隆抗体还是单克隆抗体, 用于免疫 诊断的抗体生产流程均包括抗原制备 免疫动物和抗体纯化 Thermo Scientific TM Pierce 作为蛋白质化学 免疫学和层析技术等领域的领导者, 提供高品质的抗体生产和纯化所需的佐剂 载体蛋白 交联剂 纯化树脂及片段化试剂盒 ; 此外对于抗原样品的制备, 我们也提供蛋白抽提试剂 蛋白透析和脱盐装置 蛋白定量分析和电泳等一系列产品, 是抗体制备的最佳选择 93

93 分子克隆与抗体生产 分子克隆与抗体制备一般流程 小分子抗原 - 定制多肽合成 - 载体蛋白 - 交联剂 1 抗原制备 2 免疫动物 3 抗体纯化 4 抗体标记 5 抗体验证 重组蛋白 载体构建 蛋白表达和纯化 - FastDigest 快速限制性内切酶 - 连接酶 - 组氨酸标签蛋白的纯化 - GST 标签蛋白的纯化 - 佐剂 - 抗体结合蛋白 - 荧光标记 - 酶标记 - 生物素标记 - 电泳检测 -Western 检测 -ELISA 检测 抗原制备 - 小分子抗原...95 定制多肽合成...95 载体蛋白...95 交联剂 重组蛋白...96 分子克隆...96 限制性内切酶...97 连接酶...99 蛋白表达和纯化 组氨酸标签蛋白的纯化 GST 标签蛋白的纯化 免疫动物 - 佐剂 抗体标记 - 荧光标记 酶标记 抗体验证 - 电泳检测 预制凝胶蛋白电泳 蛋白分子量标准 Western 检测 分离 转印 检测 ELISA 检测 抗体纯化 - 抗体结合蛋白

94 1 抗原制备小分子抗原定制多肽合成 肽段合成充满挑战 赛默飞世尔科技拥有肽段合成的丰富经验和先进设备, 能满足您定制多肽合成的需求 经过成千上万次地成功合成定制多肽, 我们的合成队伍积累了无比丰富的合成经验 我们会基于您的定制需求调整我们的产品供应 从多肽设计开始, 到选择正确的修饰方式 合成规模 以及您实验所需的纯度, 我们的多肽合成科学家都将提供帮助, 以助您得到最佳的实验结果 载体蛋白 载体蛋白是任意用于与肽段或其他半抗原交联的蛋白, 这些肽段或半抗原不够大或不够复杂, 其本身不能诱导免疫应答和生产抗体 载体蛋白, 由于其大且复杂, 能够给予交联的半抗原以免疫原性, 因而可产生抗半抗原和载体 可合成含 6-40 个氨基酸的肽段 (<6 或 >75 个氨基酸的肽段也可能合成 ) 合成规模从 0.1 mg 1 mg 纯度可提供从粗样到 98% 的纯度 多种修饰和标记, 包括重肽 灵活的包装规格 可提供定制偶联服务, 如多肽蛋白偶联和复合抗原多肽 (MAPS) 上表位的抗体 很多蛋白都可以被用作载体, 可依据其免疫原性, 溶解度和能够完成与半抗原交联的实用的功能基团的可用度进行选择 最常用的两种载体是钥孔血蓝蛋白 (KLH) 和牛血清白蛋白 (BSA) 分子克隆与抗体生产 载体蛋白选择指南 KLH PEGylated KLH Blue Carrier BSA Cationized BSA Ovalbumin 来源 Mullosc, Megathura Crenulata Mullosc, Megathura Crenulata Mollusc,Conchelepas conhelepas Bovine Bovine Chicken 分子量大小 4.5 X x 10 6 Da 4.5 X x 10 6 Da 8.0 x 10 6 Da 6.7 x 10 4 Da 6.7 x 10 4 Da 4.5 x 10 4 Da 溶解度 50mg/mL 150mg/mL 200mg/mL > 10mg/mL > 10mg/mL > 10mg/mL 与巯基反应 提供马来酰亚胺活化的形式 提供马来酰亚胺活化的形式 提供马来酰亚胺活化的形式 提供马来酰亚胺活化的形式 提供马来酰亚胺活化的形式 提供马来酰亚胺活化的形式 与羧基 氨基末端反应 可以, 使用 EDC 不可以可以, 使用 EDC 可以, 使用 EDC 可以, 使用 EDC 可以, 使用 EDC 与伯胺反应 可以, 与戊二醛交联 可以, 与戊二醛交联 可以, 与戊二醛交 联 可以, 与戊二醛交联 可以, 与戊二醛交联 可以, 与戊二醛交联 常规应用生产抗体生产抗体生产抗体筛选抗体筛选抗体筛选抗体 海水养殖钥孔血蓝蛋白 Thermo Scientific TM Imject mcklh 是高度纯化和稳定的钥孔血蓝蛋白,KLH 会引起更强的免疫应答 KLH 含有上百个伯胺和羧基基团可以成为与戊二醛,N- 羟基琥珀酰亚胺酯和 EDC 等交联试剂交联的靶点 特点 在水相溶液中保持溶解性 引起更强的免疫应答 提供大量伯胺用于偶联半抗原 提供在 PBS 和 MES 缓冲液中的冻干粉或溶于水的亚基形式 产品 规格 货号 Imject mcklh (in MES Buffer) 2 mg Imject mcklh (in PBS) 5 x 20 mg Imject mcklh Subunits, High Purity Research Grade 20 mg 蓝载体免疫原蛋白 Thermo Scientific TM 蓝载体免疫原蛋白是一种从软体动物 Concholepas concholepas(cch) 中获得的新形式的血蓝蛋白 适合用于生产抗半抗原和肽段的抗体 蓝载体蛋白相对于 KLH 有更好的溶解度, 可取代需要 KLH 的应用 特点 提供无菌的溶液形式 可溶且稳定于 ph 的水缓冲液 高免疫原性血蓝蛋白, 与 KLH 相似 高纯度 : 最高规格生产工艺, 确保蛋白结构完整性产品规格货号 Imject Blue Carrier Protein 100 mg Imject Blue Carrier Protein 500 mg

95 分子克隆与抗体生产 重组蛋白分子克隆 表达重组蛋白, 需要将重组蛋白基因构建到表达载体中 在构建过程中, 需要经历获取目的基因片段 片段修饰 酶切 连接等步骤 赛默飞可提供整个克隆过程中所需要的所有试剂, 如反转录酶 高保真 DNA 聚合酶 修饰酶 限制性内切酶 连接酶等 Thermo Scientific TM 分子生物学工具 核酸纯化试剂盒和 PCR 耗材等产品可为克隆提供完全的解决方案 核酸纯化试剂盒可加速分离出高质量的 DNA, 以用于克隆中的每一步 拥有高性能的反转录酶 超高保真度 DNA 聚合酶 快速内切酶及多种修饰酶, 简化和加速您的实验 PCR 耗材可为每一个实验室提供一个完全的解决方案, 包括单管 联管 PCR 反应板 封口产品及储存板 Thermo Scientific TM 高质量的产品旨在助您加速完成克隆实验研究 分子克隆流程及工具 起始材料 DNA 片段制备 电泳 DNA 片段纯化 核酸分离试剂盒 : 限制性内切酶 DNA ladders PCR 产物纯化试剂盒 质粒 DNA 高保真 DNA 聚合酶 RNA ladders 凝胶回收试剂盒 基因组 DNA 核苷酸 上样缓冲液 总 RNA 反转录酶 PCR 耗材 热循环仪 电泳缓冲液 琼脂糖 重组克隆分析 转化 连接 DNA 末端修饰 限制性内切酶 IPTG PCR 产物克隆试剂盒 T4 DNA 聚合酶 PCR 酶和预混液 X-Gal DNA 快速连接试剂盒 Klenow 片段 核苷酸 T4 DNA 连接酶 T4 多聚核苷酸激酶 (PNK) PCR 耗材 热循环仪 不依赖连接酶克隆和表达系统 快速 DNA 末端修复试剂盒 碱性磷酸酶 96

96 1. 限制性内切酶 FastDigest 快速限制性内切酶 Thermo Scientific TM FastDigest 限制性内切酶是为快速 DNA 酶切专门研发的进阶版限制性内切酶 在 30 年的内切酶研究当中, 我们积累的限制性内切酶生产菌株库是业内最大的菌株库之一 大量可供选择的同裂酶和卓越的生产能力促使了这个包含 176 种 FastDigest 限制性内切酶的独特系统的诞生 所有 FastDigest 限制性内切酶在通用的 FastDigest 缓冲液和 FastDigest Green 绿色缓冲液中都具有 100% 活性, 并可在 5-15 分钟内迅速完成酶切 这就使得任意内切酶组合都能够在同一反应管中同时反应, 避免了分步酶切 此外,FastDigest Green 绿色缓冲液兼具上样缓冲液的功能, 可直接将反应物上样凝胶电泳, 操作更为便利 FastDigest 限制性内切酶可用于酶切质粒 基因组 DNA 病毒 DNA 以及 PCR 产物 酶切时间和实验方案已经过实验验证, 每种限制性内切酶及其作用的模板都有相应的酶切时间和实验方案推荐 特点 : 所有 FastDigest 限制性内切酶在通用缓冲液中都具有 100% 活性 5-15 分钟完全酶切 FastDigest 通用缓冲液与所有下游应用 100% 兼容 直接上样凝胶电泳 共有 176 种 FastDigest 内切酶可供选择应用 : 快速克隆分析 快速制备克隆用 DNA PCR 产物酶切 快速 RFLP 基因分型 难切割 DNA 片段的酶切 3-5 kb 10 bp FastDigest Green Reaction Buffer 分子克隆与抗体生产 旧标准 常规限制性内切酶 新标准 FastDigest 限制性内切酶 缓冲液系统多达 20 种 1 种通用缓冲液 双酶切或多酶切反应 受限于缓冲液是否兼容 酶切时间 1 小时至过夜 5 至 15 分钟 反应产物是否能直接凝胶上样否是 与下游应用的兼容性部分兼容 100% 兼容 不受限 所有 176 种酶在通用缓冲液中都具有 100% 活性 星号活性取决于酶的性质和反应条件孵育时间短, 不产生星号活性在合适的缓冲液中,1 单位酶 60 分钟切割在 FastDigest 缓冲液中,1μl FastDigest 酶 5 至活性定义 1μg Lambda DNA 15 分钟内切割 1μg 底物 DNA 超过 35 年的限制性内切酶研发经验 Fermentas 成立 发现第一个独特的限制性内切酶 CfrI 克隆第一个限制性内切酶 Eco47II 世界上首次人工合成酶 Eco57MI 和 Nb.Bpu10I 推出 FastDigest 产品线 推出 FastDigest 绿色缓冲液 被 Thermo Fisher Scientific 收购 我们的研发经验 176 种 FastDigest 快速内切酶 >3000 种限制性内切酶生产菌株 拥有 18 种独特的限制性内切酶 >40% 已知限制性内切酶的克隆 >30% 已知限制性内切酶的发现 97

97 分子克隆与抗体生产 货号 产品名称 规格 (rxn) FD0994 FastDigest AatII 50 FD1484 FastDigest AccI (XmiI) 50 FD0904 FastDigest Acc65I 100 FD1794 FastDigest AciI (SsiI) 20 FD0944 FastDigest AclI (Psp1406I) 20 FD0344 FastDigest AcuI (Eco57I) 20 FD0324 FastDigest AfeI (Eco47III) 20 FD0834 FastDigest AflII (BspTI) 150 FD1464 FastDigest AgeI (BshTI) 20 FD1954 FastDigest AjuI 20 FD1634 FastDigest AleI (OliI) 20 FD0014 FastDigest AluI 100 FD0024 FastDigest Alw21I 100 FD0034 FastDigest Alw26I 100 FD1394 FastDigest AlwNI (CaiI) 50 FD1414 FastDigest ApaI 300 FD0044 FastDigest ApaLI (Alw44I) 200 FD1894 FastDigest AscI (SgsI) 100 FD0914 FastDigest AseI (VspI) 200 FD2094 FastDigest AsiSI (SfaAI) 100 FD0384 FastDigest AvaI (Eco88I) 200 FD0314 FastDigest AvaII (Eco47I) 200 FD1564 FastDigest AvrII (XmaJI) 20 FD0054/5 FastDigest BamHI 800/2500 FD1004 FastDigest BanI (BshNI) 300 FD1014 FastDigest BbsI (BpiI) 20 FD2074 FastDigest BbvI (Lsp1109I) 100 FD0724 FastDigest BclI 300 FD1764 FastDigest BfaI (FspBI) 50 FD0074 FastDigest BglI 200 FD0083/4 FastDigest BglII 100/200 FD0094 FastDigest BlpI (Bpu1102I) 50 FD1444 FastDigest Bme1580I (BseSI) 50 FD2044 FastDigest BmtI (BspOI) 20 FD1314 FastDigest BplI 20 FD0464 FastDigest BpmI (GsuI) 20 FD1184 FastDigest Bpu10I 20 FD1974 FastDigest BsaAI (Ppu21I) 50 FD1714 FastDigest BsaBI (BseJI) 200 FD0474 FastDigest BsaHI (Hin1I) 100 FD1084 FastDigest BsaJI (BseDI) 20 FD0874 FastDigest BseGI 100 FD0884 FastDigest BseNI 100 FD1454 FastDigest BseXI 20 FD0924 FastDigest Bsh1236I 100 FD0894 FastDigest BsiEI (Bsh1285I) 100 FD0854 FastDigest BsiWI (Pfl23II) 50 FD1204 FastDigest BslI (BseLI) 100 FD0454 FastDigest BsmBI (Esp3I) 20 FD1814 FastDigest BsmFI (FaqI) 20 FD0124 FastDigest Bsp119I 200 FD0134 FastDigest Bsp120I 200 FD0654 FastDigest Bsp1286I (SduI) 50 FD0933/4 FastDigest Bsp1407I 50/100 FD1404 FastDigest BspCNI (BseMII) 20 FD1284 FastDigest BspHI (PagI) 50 FD1744 FastDigest BspMI (BveI) 50 FD1274 FastDigest BsrBI (MbiI) 100 货号产品名称规格 (rxn) FD1264 FastDigest BsrDI (BseMI) 20 FD0184 FastDigest BsrFI (Cfr10I) 50 FD2134 FastDigest BssHII (PteI) 20 FD1024 FastDigest BstXI 100 FD0704 FastDigest BstZ17I (Bst1107I) 100 FD0374 FastDigest Bsu36I (Eco81I) 50 FD0143/4 FastDigest ClaI (Bsu15I) 50/100 FD0214 FastDigest Csp6I 100 FD1884 FastDigest DdeI (HpyF3I) 50 FD1703/4 FastDigest DpnI 50/100 FD0224 FastDigest DraI 200 FD1234 FastDigest DraIII (AdeI) 50 FD1724 FastDigest DrdI (AasI) 25 FD0334 FastDigest EagI (Eco52I) 50 FD0244 FastDigest Eam1105I 100 FD0234 FastDigest EarI (Eam1104I) 50 FD0254 FastDigest Ecl136II 100 FD0293/4 FastDigest Eco31I 50/100 FD0394 FastDigest Eco91I 200 FD1304 FastDigest EcoNI (XagI) 100 FD0264 FastDigest EcoO109I 200 FD0274/5 FastDigest EcoRI 800/2500 FD0303/4 FastDigest EcoRV (Eco32I) 200/400 FD0443/4 FastDigest EheI 20/50 FD1644 FastDigest Fnu4HI (SatI)x 20 FD2144 FastDigest FokI 100 FD1224 FastDigest FspI (NsbI) 50 FD1664 FastDigest FspAI 20 FD2184 FastDigest HaeII (BfoI) 200 FD0154 FastDigest HaeIII (BsuRI) 400 FD1904 FastDigest HgaI (CseI) 20 FD1854 FastDigest HhaI 200 FD0494 FastDigest HincII 100 FD0504/5 FastDigest HindIII 800/2500 FD0804 FastDigest HinfI 400 FD0484 FastDigest HinP1I (Hin6I) 200 FD1034 FastDigest HpaI (KspAI) 50 FD0514 FastDigest HpaII 200 FD1574 FastDigest Hpy8I 20 FD1734 FastDigest HpyF10VI 20 FD0524 FastDigest KpnI 300 FD0534 FastDigest Kpn2I 100 FD2084 FastDigest MauBI 20 FD0814 FastDigest MboI 50 FD0824 FastDigest MboII 50 FD0753/4 FastDigest MfeI (MunI) 20/50 FD0564 FastDigest MluI 100 FD1374 FastDigest MlyI (SchI) 100 FD1074 FastDigest MnlI 50 FD2024 FastDigest MreI 20 FD1214 FastDigest MscI (MlsI) 50 FD2174 FastDigest MseI (SaqAI) 50 FD2004 FastDigest MslI (RseI) 20 FD0544 FastDigest MspI 400 FD1344 FastDigest MssI 100 FD0554 FastDigest MvaI 200 FD0964 FastDigest Mva1269I 50 FD1524 FastDigest NaeI (PdiI) 50 FD0064 FastDigest NciI (BcnI) 200 货号 产品名称 规格 (rxn) FD0573/4/5 FastDigest NcoI 20/100/300 FD0583/4/5 FastDigest NdeI 100/300/1000 FD0973/4 FastDigest NheI 50/100 FD1834 FastDigest NlaIII (Hin1II) 100 FD1154 FastDigest NlaIV (BspLI) 20 FD1514 FastDigest NmuCI 20 FD0593/4/6 FastDigest NotI 20/50/250 FD2154 FastDigest NruI (RruI) 100 FD0734 FastDigest NsiI (Mph1103I) 100 FD1474 FastDigest NspI (XceI) 50 FD2204 FastDigest PacI 25 FD1534 FastDigest PdmI 100 FD0714 FastDigest PflMI (Van91I) 100 FD1754 FastDigest PfoI 20 FD0364 FastDigest PmlI (Eco72I) 200 FD0764 FastDigest PpuMI (Psp5II) 50 FD1434 FastDigest PshAI (BoxI) 100 FD2064 FastDigest PsiI (AanI) 20 FD2224 FastDigest PspFI 20 FD0614/5 FastDigest PstI 800/2500 FD1554 FastDigest PsuI 150 FD1334 FastDigest PsyI 100 FD0624 FastDigest PvuI 20 FD0634 FastDigest PvuII 400 FD1124 FastDigest RsaI 100 FD0744 FastDigest RsrII (CpoI) 20 FD1133/4 FastDigest SacI 100/200 FD0644 FastDigest SalI 200 FD2164 FastDigest SanDI (KflI) 20 FD1934 FastDigest SapI (LguI) 20 FD0784 FastDigest Sau3AI (Bsp143I) 40 FD0194 FastDigest Sau96I (Cfr13I) 100 FD1194 FastDigest SbfI (SdaI) 20 FD0434 FastDigest ScaI 100 FD1424 FastDigest ScrFI (Bme1390I) 100 FD2114 FastDigest SexAI (CsiI) 50 FD2124 FastDigest SfaNI (BmsI) 20 FD1164 FastDigest SfcI (BfmI) 20 FD1824 FastDigest SfiI 150 FD0663/4 FastDigest SmaI 100/200 FD0404 FastDigest SnaBI (Eco105I) 50 FD1253/4 FastDigest SpeI (BcuI) 20/50 FD0604 FastDigest SphI (PaeI) 20 FD0774 FastDigest SspI 100 FD0424 FastDigest StuI (Eco147I) 100 FD0414 FastDigest StyI (Eco130I) 200 FD1244 FastDigest SwaI (SmiI) 200 FD1364 FastDigest TaaI 20 FD1144 FastDigest TaiI 50 FD0674 FastDigest TaqI 400 FD1294 FastDigest TatI 20 FD1654 FastDigest TauI 20 FD1784 FastDigest Tfil (PfeI) 50 FD0984 FastDigest Tru1I 50 FD1354 FastDigest Tsp509I (TasI) 100 FD2104 FastDigest TspRI (TscAI) 100 FD1383/4 FastDigest XapI 50/100 FD0684/5 FastDigest XbaI 300/750 FD0694/5 FastDigest XhoI 400/

98 2. 连接酶 Anza T4 DNA 连接酶预混液 Invitrogen Anza T4 DNA 连接酶预混液促进双链 DNA 的 5 - 磷酸基和 3 - 羟基的连接形成磷酸二酯键 其既可用于连接粘性末端, 也可用于平末端连接, 同时可用于修复双链 DNA 的缺口 室温下 15 分钟完成连接 该连接酶预混液既适用于粘性末端连接, 也适用于平末端连接 即用型的预混液形式, 更加方便, 减少移液次数 4 浓度可实现低浓度 DNA 片段的连接, 而无需进行浓缩产品规格货号 Anza T4 DNA Ligase Master Mix 50 reactions IVGN2104 Anza T4 DNA Ligase Master Mix 200 reactions IVGN2108 T4 RNA 连接酶 T4 RNA ligase 催化 ATP 依赖性分子内和分子间磷酸二酯键连接 (5 - 磷酸末端和 3 - 羟基末端 ), 底物分子为多聚核苷酸 寡核苷酸 ssrna 和 ssdna 分子间连接的最小连接底物是核苷 3, 5 - 二磷酸, 而分子内连接的最小底物是 8 个碱基的寡核苷酸 应用 用胞嘧啶 3,5 - 双 [α- 32 P] 磷酸标记 RNA 的 3 末端标记 RNA 与 RNA 分子间连接 合成寡核苷酸和寡脱氧核苷酸 trnas 的特异性修饰 5 RACE 中将寡核苷酸连接到 cdna 单链 位点特异性生成复合的 PCR 引物 产品规格货号 T4 RNA Ligase (10 U/µL) 1000 units EL0021 T4 DNA 连接酶 T4 DNA Ligase 催化双链 DNA 或 RNA 中相邻的 5 - 磷酸末端和 3 - 羟基末端形成磷酸二酯键 该酶还可以连接 DNA 的粘性和平末端 特点 快速 - 室温下, 粘性末端连接在 10 分钟内即可完成 该酶在限制性内切酶 PCR 和 RT 缓冲液中有活性 ( 添加 ATP 时 ) 配套提供 PEG 溶液, 提高平末端连接效率 应用 限制性内切酶切产生的 DNA 片段 PCR 产物的克隆 将双链寡核苷酸接头与双链 DNA 连接 定点突变 扩增片段长度多样性 (AFLP) 连接酶介导的 RNA 检测 双链 DNA RNA 或 DNA-RNA 杂交双链中缺刻的修复 线性 DNA 自我环化 相关产品规格货号 T4 DNA Ligase (5 U/µL) 1000 units EL0011 T4 DNA Ligase (5 U/µL) units EL0012 T4 DNA Ligase, HC (30 U/µL) 5000 untis EL0013 T4 DNA Ligase 200 units EL0014 T4 DNA Ligase, LC (1 U/µL) 2 x 500 units EL0016 分子克隆与抗体生产 99

99 分子克隆与抗体生产 蛋白表达和纯化 1. 组氨酸标签蛋白的纯化 多组氨酸标签是目前重组蛋白中最常用的标签 由于多组氨酸在多种条件下都可结合到镍 钴及铜等多种固定化的金属离子上, 因此对具有该标签的蛋白的处理非常简单 在琼脂糖介质上添加螯合基团来固定金属离子, 进而制备固定化的金属亲和层析色谱 (IMAC) 介质 在一些特殊的应用中也可以在聚苯乙烯板 纳米颗粒等表面包被金属离子以便结合组氨酸标签蛋白 此外, 我们还提供螯合金属镍的磁珠和磁性琼脂糖树脂, 磁性琼脂糖树脂兼具琼脂糖的高载量和磁珠的便捷性, 可使用磁力架进行分离纯化 HisPur 钴树脂及离心柱 Thermo Scientific TM HisPur 钴树脂是四配位的螯合树脂, 可在比镍树脂更低浓度的咪唑条件下释放结合的蛋白 可使用 HisPur 钴树脂获得无金属离子污染的高纯度蛋白 特点 高纯度 不需要对洗柱的咪唑浓度进行优化即可获得高纯度的蛋白 高特异性 钴比镍结合的污染物更少, 背景更低 无金属离子污染 在洗脱样品中无金属离子污染 通用 与细胞裂解试剂及多种缓冲液添加剂兼容 灵活 有大包装树脂, 也有离心柱和重力柱形式 产品 规格 货号 HisPur Cobalt Resin 10 ml HisPur Cobalt Resin 100 ml HisPur Cobalt Resin 500 ml HisPur Cobalt Spin Columns, 0.2 ml 25 columns HisPur Cobalt Spin Columns, 1mL 5 columns HisPur Cobalt Spin Columns, 3 ml 5 columns HisPur Cobalt Spin Plates 2 plates HisPur 色谱预装柱 Thermo Scientific TM HisPur 色谱预装柱是方便 可靠 即用型 的装有钴树脂的分离预装柱 HisPur 色谱预装柱可以连接到 ÄKTAx 及 BioLogic Systems 等自动化的 LC 设备上使用, 该预装 柱能进行再生, 重复使用 特点 高纯度 每毫升树脂可以得到 > 10mg 的纯的组氨酸标签蛋白 无金属离子污染 在洗脱的组氨酸标签样品中无金属离子污染 通用 天然或非变性条件下纯化蛋白 HisPur Ni-NTA 树脂 Thermo Scientific TM HisPur Ni-NTA 树脂是一种高容量, 高性能的固定化镍金属离子亲和树脂 介质由次氨基三乙酸 (NTA) 螯合部分衍生化并载有二阶镍离子 (Ni 2+ ) 的琼脂糖微球或磁珠或磁性琼脂糖组成, 具备非常出色的结合能力和性能 特点 高容量 1 毫升琼脂糖树脂可结合 60mg 的 6XHis 标签蛋白,1mg 磁珠和结合大于 40µg 带有 His 标签的绿色荧光蛋白,1ml 磁性琼脂糖可结合 70mg 的 6XHis 标签蛋白 多样性 在天然或变性条件纯化蛋白 兼容 可与 Thermo Scientific TM 细胞裂解试剂和各种缓冲液添加剂一起使用 灵活 提供散装树脂 离心柱 层析管和 96 孔过滤板等多种规格 经济性 同一批树脂至少可反复使用 5 次 产品 规格 货号 HisPur Ni-NTA Resin 10 ml HisPur Ni-NTA Resin 100 ml HisPur Ni-NTA Resin 500 ml HisPur Ni-NTA Spin Columns, 0.2 ml 25 columns HisPur Ni-NTA Spin Columns, 1 ml 5 columns HisPur Ni-NTA Spin Columns, 3 ml 5 columns HisPur Ni-NTA Chromatography 5 cartridges Cartridges, 1 ml HisPur Ni-NTA Chromatography 2 cartridges Cartridges, 5 ml HisPur Ni-NTA Spin Plates 2 plates HisPur Ni-NTA Magnetic Beads 2ml Pierce Ni-NTA Magnetic Agarose Beads 1ml 产品 规格 货号 HisPur Cobalt Chromatography Cartridges,1 ml 5 cartridges HisPur Cobalt Chromatography Cartridges,5 ml 2 cartridges

100 2.GST 标签蛋白的纯化 谷胱甘肽 S 转移酶 (GST) 是一个含有 211 个氨基酸的蛋白, 通常将该蛋白加入到重组蛋白的末端以便对该重组蛋白进行纯化或检测 具有组氨酸的非融合蛋白会产生非特异性结合, 这会阻碍组氨酸标签的亲和纯化 但 GST 标签则与之不同 由于 GST 对于其底物 - 谷胱甘肽具有极高的特异性, 所以可以获得更高的纯度 我们将谷胱甘肽这种三个氨基酸的多肽通过其中心的碳进行固定, 这保留了利于 GST 结合的一个非常重要的结构 在与生理条件相近的缓冲液中加入还原型谷胱甘肽, 即可从固定化的谷胱甘肽上完全地取代 ( 洗脱 ) 并回收 GST 融合蛋白 Pierce 谷胱甘肽树脂 Thermo Scientific TM Pierce 谷胱甘肽琼脂糖是一种高容量 高性能树脂, 可对细胞裂解液中 GST- 标签融合蛋白进行纯化 高质量的固相支持物由固定好的谷胱甘肽组成, 该谷胱甘肽以其核心巯基经 12- 原子间隔臂与交联的 6% 珠状琼脂糖固定 可满足不同规模, 柱型的 GST 标签蛋白纯化 Thermo Scientific TM Pierce 谷胱甘肽磁性琼脂糖兼具琼脂糖的高载量和磁珠的快速便捷性, 可使用磁力架纯化 GST 标签蛋白 特点 高得率和高纯度 - 每毫升树脂可连续纯化至少 10mg GST 标签蛋白, 纯度大于 90% 经济 - 树脂至少可重复使用 5 次, 而不降低树脂结合容量和纯化性能 灵活 - 有多种规格可供选择, 包括大容量树脂 离心柱 色谱柱 96 孔滤板和方便的 GST 纯化试剂盒 产品 规格 货号 Pierce Glutathione Agarose 10 ml Pierce Glutathione Agarose 100 ml Pierce Glutathione Agarose 500 ml 16102BID Pierce Glutathione Spin Columns, columns ml Pierce Glutathione Spin Columns, 1 ml 5 columns Pierce Glutathione Spin Columns, 3 ml 5 columns Pierce Glutathione Chromatography 5 cartridges Cartridges, 1 ml Pierce Glutathione Chromatography 2 cartridges Cartridges, 5 ml Pierce Glutathione Spin Plates 2 plates Pierce Glutathione Magnetic Agarose Beads 1ml 分子克隆与抗体生产 标签蛋白纯化产品选择指南 Target Ligand/Chemistry Thermo Scientific and Invitrogen products Binding capacity HisPur Ni-NTA Magnetic Beads 40 μg/mg bead Pierce Ni-NTA Magnetic Agarose Beads >70 mg/ml Ni-NTA(higher binding capacity) HisPur Ni-NTA Resin ~60 mg/ml His-tag protein HisPur Ni-NTASuperflow Agarose >60 mg/ml (dynamic) Cobalt(higher purify) HisPur Cobalt Resin 15 mg/ml HisPur Cobalt Superflow Agarose >30 mg/ml (dynamic) Pierce Glutathione Magnetic Agarose Beads >12 mg/ml GST fusion protein Glutathione Pierce Glutathione Agarose ~40 mg/ml Pierce Glutathione Superflow Agarose ~30 mg/ml (dynamic) 101

101 分子克隆与抗体生产 2 免疫动物佐剂 Thermo Scientific TM Imject 弗氏完全佐剂 (FCA), 弗氏不完全佐剂 ( FIA) 和明矾 (Alum) 是高质量, 即用型的佐剂成分, 用于抗体生产的免疫操作当中 佐剂是免疫应答的非特异性刺激物 当与抗原或免疫原混合时, 佐剂可以帮助注射物沉积和汇集, 从而帮助提高免疫应答 佐剂可以增强已经产生免疫性的化合物的免疫应答 ; 它们不会将免疫原性给予非致免疫的半抗原 为使预期的抗原具有更强的免疫原性, 需要将其偶联于载体蛋白或其它复杂的致免疫的分子 Thermo Scientific TM 弗氏不完全佐剂 (FIA) 产品特点 : 油包水的乳浊液, 不含有分支杆菌 增强加强注射的免疫应答 典型用于使用 FCA 进行初次注射之后的后续增强注射 明矾 (Alum) 产品特点 : 氢氧化铝和氢氧化镁的悬浊液 温和而有效的佐剂, 用于实质免疫原 即用型 : 可直接将抗原与 Imject 明矾混合并进行注射 过敏症和免疫原性检测是否具有致敏作用以及是否激发卵白 蛋白 (OVA) 组分所选择的佐剂 产品 规格 货号 弗氏完全佐剂 (Freund's Incomplete Adjuvant, FICA) 5 10 ml 明矾佐剂 (Alum Adjuvant) 50 ml

102 3 抗体纯化抗体结合蛋白 蛋白 A 蛋白 G 和蛋白 L 是细菌蛋白, 用于多种抗体类型的亲和纯化中 对于每种蛋白,Thermo Fisher Scientific 有五种结合能力的不同固体介质的产品, 以及多种包装 柱子和试剂盒规格可供选择 我们提供五种介质形式的抗体纯化产品 : 交联的球珠状琼脂糖,Thermo Scientific TM UltraLink 树脂,Dynabeads 磁珠, 磁性琼脂糖和 POROS 层析树脂 Thermo Scientific TM UltraLink Biosupport 交联的 6% 的球珠状琼脂糖通常简称为 琼脂糖 CL-6B, 与琼脂糖相比提供可能更高的装载 ( 结合能力 ) 以及在高压应用中更好的耐久性 我们提供的琼脂糖亲和树脂产品包括常规型和高容量 ( 加强型 ) 两种 加强型树脂共价附加 ( 固定化 ) 大约常规形式两倍的蛋白 磁性琼脂糖树脂为高度交联的琼脂糖微珠中嵌有磁性物质, 兼具琼脂糖的高载量和磁珠的快速 便捷, 可使用磁力架或者高通量磁力平台进行分离纯化 POROS 散装层析树脂用于研究单位和工业, 提供高分辨率的分离效果, 并具有很高的容量和强大的化学稳定性 CaptureSelect 相关产品可用于各种生物化合物分离, 包括抗体和抗体片段 重组和血浆蛋白质以及病毒颗粒 存储得当时, 这些介质可以再生和多次再利用 分子克隆与抗体生产 抗体结合蛋白选择指南 Target Ligand/Chemistry Thermo Scientific and Invitrogen products Binding capacity Negative selection Melon Gel >90% yield and >80% purity for most antibodies Dynabeads Protein A magnetic beads μg/mg bead Protein A Pierce Protein A Plus Agarose 34 mg/ml POROS MabCapture A Select Resin 37 mg/ml (dynamic) Dynabeads Protein G magnetic beads μg/mg bead IgG Protein G Pierce Protein G Agarose mg/ml POROS MabCapture G Select Resin 13 mg/ml (dynamic) Pierce Protein A/G Magnetic Beads μg/mg bead Protein A/G Pierce Protein A/G Magnetic Agarose Beads >40 mg/ml Pierce Protein A/G Agarose 7 mg/ml Pierce Protein A/G Plus Agarose 50 mg/ml 103

103 分子克隆与抗体生产 蛋白 A 树脂 Thermo Scientific TM 蛋白 A 树脂有效用于多种物种的血清和其他液体中 IgG 的亲和纯化 蛋白 A 尤其适用于兔的多克隆抗体纯化 我们的蛋白 A 琼脂糖和 Thermo Scientific TM UltraLink 树脂使用天然形式的蛋白 A, 用抗漏的化学物质进行固定, 提供高容量, 非特异性结合最少的亲和介质 当储存得当时, 这些琼脂糖和聚丙烯酰胺介质可以再生和多次再利用 有效且抗渗漏的固定化化学物用于高容量和纯度的抗体纯化 与广泛的抗体结合 - 尤其适于兔 IgG 的纯化 价格比蛋白 G 树脂便宜 琼脂糖树脂提供常规和高 ( 加强型 ) 结合容量形式 提供树脂浆体, 层析卡匣,Thermo Scientific TM NAb 离心柱和纯化试剂盒的形式 使用 Thermo Scientific TM 蛋白 A 琼脂糖和 IgG 结合及洗脱缓冲液系统从小鼠腹水液体中亲和色谱纯化小鼠 IgG 从 1ml 小鼠腹水液体中获得 5.5mg 小鼠 IgG 产品 规格 货号 Pierce Protein A Agarose 5 ml Pierce Protein A Agarose 25 ml Pierce Protein A Columns, 1 ml 5 columns Pierce Protein A UltraLink Resin 5 ml Pierce Protein A Plus Agarose 1 ml Pierce Protein A Chromatography Cartridges, 1 ml 2 cartridges Pierce Protein A Chromatography Cartridges, 5 ml 1 cartridge NAb Protein A Plus Spin Columns, 0.2 ml 10 columns NAb Protein A Plus Spin Columns, 1 ml 5 columns Pierce Protein A Plus UltraLink Resin 5 ml Pierce Protein A Spin Plate for IgG Screening 1 plate Dynabeads Protein A magnetic beads 1ml 10001D Dynabeads Protein A magnetic beads 5ml 10002D POROS MabCapture A Select Resin 5ml 重组蛋白 A 琼脂糖 Thermo Scientific TM 重组蛋白 A 琼脂糖使用了一种基因重组蛋白 A, 该蛋白 A 在非致病性的芽孢杆菌中重组产生 非必要的区域被去掉, 内含五个 IgG 结合位点, 分子量为 44.6kDa 重组蛋白 A 琼脂糖也可与 Thermo Scientific TM 结合与洗脱缓冲液兼容 产品 规格 货号 Pierce Recombinant Protein A Agarose 5 ml Pierce Recombinant Protein A Agarose 25 ml

104 蛋白 G 树脂 Thermo Scientific 蛋白 G 树脂尤其适用于从小鼠和最广谱的物种中纯化单克隆抗体, 以及从人 山羊和绵羊样品中纯化 IgG 亚类 我们的蛋白 G 琼脂糖 Dynabeads 磁珠和 POROS 层析树脂使用重组形式的蛋白 G, 使用抗漏的化学物质进行固定, 提供高容量, 非特异性结合最少的亲和介质 存储得当时, 这些介质可以再生和多次再利用 有效且抗渗漏的固定化化学物用于高容量和纯度的抗体纯化 与广泛的抗体结合 - 尤其适于兔 IgG 的纯化 提供常规和高结合容量形式 提供树脂浆体, 层析卡匣,Thermo Scientific TM NAb 离心柱和 纯化试剂盒的形式 产品 规格 货号 Pierce Protein G Agarose 2 ml Pierce Protein G Agarose 10 ml Pierce Protein G Chromatography 2 cartridges Cartridges, 1 ml NAb Protein G Spin Columns, 0.2 ml 10 columns NAb Protein G Spin Columns, 1 ml 5 columns Pierce Protein G UltraLink Resin 2 ml Pierce Protein G UltraLink Columns, 2 columns ml Pierce Protein G Spin Plate for IgG 1 plate Screening Pierce Protein G Plus UltraLink Resin 2 ml Dynabeads Protein G magnetic beads 1ml 10003D Dynabeads Protein A magnetic beads 5ml 10004D POROS MabCapture G Select Resin 5ml 分子克隆与抗体生产 Native Protein A Recombinant Protein A Recombinant Protein G Recombinant Protein A/G Recombinant Protein L 天然来源 Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Streptococcus N/A Peptostrepto- coccus magnus 生产来源 S. aureus E. coli E. coli E. coli E. coli 分子量 46,700 44,600 21,600 50,460 35,800 分子量 42kDa 45kDa 32kDa 40-45kDa 36kDa ( 电泳显示 ) 抗体结合位点 白蛋白结合位点 No No No No No 推荐 PH 值 抗体结合部位 Fc Fc Fc Fc VL-kappa 蛋白 A/G 树脂 Thermo Scientific TM 蛋白 A/G 树脂有效用于多种物种的血清和其他液体中 IgG 的亲和纯化 我们的蛋白 A/G 琼脂糖 Thermo Scientific TM UltraLink 树脂 磁性琼脂糖和 POROS 层析树脂使用重组的蛋白 A/G, 使用抗漏的化学物质进行固定, 提供高容量, 非特异性结合最少的亲和介质 当储存得当时, 这些介质可以再生和多次再利用 特点 : 与蛋白 A 或蛋白 G 球珠相比可结合更广泛的抗体 有效且抗渗漏的固定化化学物用于高容量和纯度的抗体纯化 提供常规和高 ( 加强型 ) 结合容量形式 提供树脂浆体, 层析卡匣,Thermo Scientific TM NAb 离心柱和纯化试剂盒的形式 产品 规格 货号 Pierce Protein A/G Agarose 3 ml Pierce Protein A/G Agarose 15 ml Pierce Protein A/G Chromatography 2 cartridges Cartridges, 1 ml Pierce Protein A/G Chromatography 1 cartridge Cartridges, 5 ml NAb Protein A/G Spin Columns, 0.2 ml 10 columns NAb Protein A/G Spin Columns, 1 ml 5 columns Pierce Protein A/G UltraLink Resin 2 ml Pierce Protein A/G Plus Agarose 2 ml Pierce Protein A/G Plus UltraLink Resin 2 ml Pierce Protein A/G Magnetic Agarose Beads 1ml Pierce Protein A/G Magnetic Agarose Beads 5ml POROS MabCapture A/G Select Resin 5ml

105 分子克隆与抗体生产 4 抗体标记 在免疫及其他蛋白研究方法中都会使用标记过的抗体和针对目标蛋白的特异的 可检测的探针等 在生物技术应用方面经常使用生物素 荧光 酶 放射性同位素等化学标记物为这些抗体或探针提供可检测的信号 最易获得的是标记过的二抗, 但是有些研究者或分析方法的发明者需要对一些不常见的 更加特异的探针进行标记 可以使用多种交联技术将这些标记物连接到抗体 链亲和素以及其他的特异性的探针上 我们乐于提供多种活化的试剂及试剂盒供您选择, 使用这些试剂和试剂盒能够标记几乎所有的蛋白或其他大分子 荧光标记 作为世界领先的基于荧光技术的领头开发者, 我们可以提供诸多荧光标签用于一抗 二抗 anti-dye 和 anti-hapten 抗体 链霉亲和素的标记, 包括特有的荧光标签如 Alexa Fluor DyLight Texas Red-X 和 Pacific Blue 染料 Alexa Fluor 染料 Alexa Fluor 染料可以生产极为明亮且耐光的偶联物 这些染料有不同的活性形式, 可以用于标记生物聚合物及衍生的低分子量小分子 所有 Alexa Fluor 染料可以以胺基反应性 succinimidyl ester 形式提供, 另外许多还可以以巯基 醛基和羧基反应性形式提供 特点 : 与所有常用的激发光源和仪器兼容 其偶联物能产生明亮且通常光稳定的荧光 具有很好的水溶性, 使得反应染料容易发生偶联, 且偶联物不易发生沉淀和聚集 其吸收和发射光谱对 PH 不敏感 分化良好的光谱, 可以选择进行多色检测及荧光共振能量转移 (FRET) 跨越近紫外区 可见区和近红外区 高量子产量和长荧光寿命 高 FRET 效率,Alexa Fluor 染料间 R0 值高达 84Å,Alexa Fluor 和一些非荧光猝灭子间的 R0 值高达 77Å Alexa Fluor 染料的参数 Alexa Fluor Dye Absorption max.(nm) Emission max. (nm) Emission color Extinction coeffcient Alexa Fluor Blue 19,000 Alexa Fluor Blue 34,000 Alexa Fluor Green/Yellow 16,000 Alexa Fluor Green 71,000 Alexa Fluor Yellow 81,000 Alexa Fluor Orange 104,000 Alexa Fluor Orange 150,000 Alexa Fluor Orange/Red 91,000 Alexa Fluor Red 73,000 Alexa Fluor Red 138,000 Alexa Fluor Far Red 239,000 Alexa Fluor Far Red 140,000 Alexa Fluor Near-IR 239,000 Alexa Fluor Near-IR 132,000 Alexa Fluor Near-IR 184,000 Alexa Fluor Near-IR 192,000 Alexa Fluor Near-IR 240,000 Alexa Fluor Near-IR 270,000 Typical emission color seen through the eyepiece of a conventional fluorescence microscope with appropriate filters. Extinction coefficient at lmax in cm-1m-1. Human vision is insensitive to light beyond ~650nm; it is not possible to directly view near-ir fluorescent dyes. 106

106 分子克隆与抗体生产 Alexa Fluor 染料的发射光谱 DyLigh 荧光染料 DyLight 荧光染料是一系列的高密度 光稳定的荧光标签, 用于标记抗体和其它分子探针 DyLight 染料在许多应用中都能得到优异的荧光结果, 同时能保持出色的光稳定性和宽 PH 值范围内的水溶性 DyLight Fluors 吸收光范围为 350nm 到 777nm, 覆盖整个可见光区和一些关键近红外光区和红外光区 DyLight 的吸收光和发射光特征符合常用荧光设备的输出 ( 激发 ) 和检测波长 特点 : 高比例激活的染料 (>80%) 高水溶性和出色的光稳定性 可提供氨基和巯基反应性形式, 以快速 高效地标记 lgg 和其它蛋白 可用于制备商品化的偶联物 ( 需要一些特殊的条件 ) 可提供 DyLight 染液与多种 lgg 链霉亲和素和中性亲和素蛋白预偶联的产品 DyLight 染液的发射光谱 Alexa Fluor 染料的参数 Emission color DyLight Dye Ex/Em ε Spectrally similar dyes Blue /432 15,000 AMCA, Alexa Fluor 350 Dye Blue /420 30,000 Alexa Fluor 405 and Cascade Blue Dyes Green /518 70,000 Alexa Fluor 488, fluorescein and FITC Dyes Yellow / ,000 Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 555, Cy 3 and TRITC Dyes Red /618 80,000 Alexa Fluor 594 and Texas Red Dyes Red / ,000 Alexa Fluor 633 Dye Red / ,000 Alexa Fluor 647 and Cy 5 Dyes Near-IR / ,000 Alexa Fluor 680 and Cy 5.5 Dyes Near-IR / ,000 Alexa Fluor 750 and Cy 7 Dyes Near-IR / ,000 IRDye 800 Dye Excitation and emission maxima in nanometers (±4nm). Molar extinction coefficient (M-1cm-1). 107

107 分子克隆与抗体生产 DyLight PEGylated 染料 Thermo Scientific DyLight PEGylated 染料是高性能 DyLight 染液的衍生产品, 可以用于标记抗体和其它蛋白 使用 DyLight PEGylated 染料制备的偶联物可以作为细胞成像或其它荧光检测的分子探针 DyLight PEGylated 染料包含两到四条非毒性聚乙二醇 (PEG) 分子链 PEG 链强化了荧光, 减少了偶联物的非特异性结合, 提高了染料和标记分子在水溶液中的溶解性, 增强了细胞渗透性, 同时提高了滞留效应, 尤其在肿瘤中 一些 PEGylated 染料 ( 如 DyLight 和 800 染料 ) 的近红外和远红外荧光特征使得其在生物学 化学和制药应用中非常有用 PEGylated DyLight NHS-ester 荧光染料的特点 DyLight PEGylated 胺基和巯基反应性具有优异的荧光特征 ( 如明亮度 光稳定性 PH 不敏感性和水溶性 ) 除此之外,DyLight PEGylated 染料的高荧光密度使其具有出色的灵敏度, 在大多数实验应用中需要更少的偶联物 特点 : 可溶性 PEGylated 染料和标记的分子在水溶液中的溶解度提高, 从而增强了细胞渗透性, 同时提高了滞留效应 高荧光密度 拥有比其它染料更明亮的荧光信号 高效的标记方法 已经很好定性的化学物质及优化的实验方案使得可以进行可靠的 高质量的标记 减少非特异性结合 DyLight Fluor Ex/Em ε MW (g/mol) Spectrally similar dyes DyLight 550-2xPEG 557/ ,000 1,127 Alexa Fluor 555, Cy3, DyLight 550, CF555 DyLight 650-4xPEG 656/ ,000 1,450 Alexa Fluor 647, Cy5, DyLight 650, CF647 DyLight 680-4xPEG 684/ ,000 1,754 Alexa Fluor 680, Cy5.5, DyLight 680, CF680, IR Dye 680 DyLight 755-4xPEG 757/ ,000 1,476 Alexa Fluor 750, DyLight 755, CF750 DyLight 800-4xPEG 784/ ,000 1,710 Alexa Fluor 790, Cy7, DyLight 800, CF790, IR Dye 800 Excitation and emission maxima in nanometers. Molar extinction coefficient (M -1 cm -1 ). PEGylated DyLight 马来酰亚胺荧光的特点 DyLight Fluor Ex/Em ε MW (g/mol) Spectrally similar dyes DyLight 550-2xPEG 557/ ,000 1,127 Alexa Fluor 555, Cy3, DyLight 550, CF555 DyLight 650-4xPEG 656/ ,000 1,450 Alexa Fluor 647, Cy5, DyLight 650, CF647 DyLight 680-4xPEG 684/ ,000 1,754 Alexa Fluor 680, Cy5.5, DyLight 680, CF680, IR Dye 680 DyLight 755-4xPEG 757/ ,000 1,476 Alexa Fluor 750, DyLight 755, CF750 DyLight 800-4xPEG 784/ ,000 1,710 Alexa Fluor 790, Cy7, DyLight 800, CF790, IR Dye 800 Excitation and emission maxima in nanometers. Molar extinction coefficient (M -1 cm -1 ). 108

108 酶标记 EZ-Link HRP 酶标记试剂盒及试剂 Thermo Scientific EZ-Link 预激活 HRP 可以简单地将几乎任何蛋白变为一种检测试剂 HRP 是免疫检测体系中最常使用的酶 这种酶可以催化底物发生反应形成颜色反应, 或者生成带颜色的沉淀, 或者产生化学激发光 ( 化学荧光 ) 该酶的偶联物为稳定的分析试剂, 可以在 -20 C 长时间储存 Pierce Maleimide Activated Horseradish Peroxidase Thermo Scientific Pierce 马来酰亚胺激活的辣根过氧化物酶用于制备 HRP 与蛋白 肽段或其它含巯基配体的偶联 特点 : 激活的 HRP 经马来酰亚胺修饰的 HRP 用于与巯基分子的偶联 巯基反应 马来酰亚胺基团与半胱氨酸残基侧链上的 -SH 基团发生偶联 高活性的 HRP 酶活性高于 240units/mg; 冻干 激活的酶可在 4 C 下保持稳定至少 12 个月以上 Pierce Plus Activated Peroxidase Thermo Scientific Pierce Plus Activated Peroxidase 是 HRP 的一种胺基活性形式, 其与抗体或其它蛋白的偶联效率高于 95% 特点 : 激活的 HRP 高碘酸盐处理的 乙醛激活的辣根过氧化物酶, 用于与抗体或其它蛋白伯胺进行偶联 稳定的偶联 当用 sodium cyanoborohydride 处理时, 与伯胺高效偶联形成共价酰胺键 (95%) 高活性的 HRP 酶活性在 120 到 200 units/mg; 冻干 激活的酶可在 4 C 下保持稳定至少 12 个月以上 方便的规格 每 1mg 激活的酶足够与 1mg lgg 反应, 生产 0.5mL 的偶联物 可定制 随着 HRP 嵌合程度及活性的不同, 摩尔比 反应缓冲液和 PH 以及其它偶联参数可随之变化 分子克隆与抗体生产 Pierce Horseradish Peroxidase Thermo Scientific Pierce 辣根过氧化物酶是纯化的 HRP 酶, 用于 ELISA Western blot 和免疫组化中的活性检测及与抗体的偶联 特点 : 纯化的形式 冻干无盐粉末 ; 可即时溶解和使用 高特异活性 活性一般高于 300units/mg 与 AP 相比 HRP (40kDa) 比碱性磷酸酶 (AP) 分子量小, 但比 AP 和 beta-gal 有更高的酶活性 诸多选择 可为 HRP 提供不同的底物溶液和分析技术 HRP 在分子生物学和蛋白研究中的主要应用是作为一种报告系统, 用于免疫检测及其它基于探针的分析, 如 ELISA Western blotting EMSA 和 Southern blotting 该酶通常与特异性二抗或链霉亲和素偶联, 其活性通过颜色生成 ( 或光生成 ) 底物进行检测 Pierce Alkaline Phosphatase 这种纯化的牛小肠碱性磷酸酶 (CIP) 保存于 Tris 缓冲液和 50% 甘油中 其可与特异性抗体或二抗偶联, 通过颜色生成 ( 或光生成 ) 底物进行检测 特点 : 纯化的形式 可以即时溶解用于偶联 浓缩形式 大概 20mg/mL 高特异活性 活性一般高于 1600 units/mg Tris-buffered 溶液 产品保存于 5mM Tris 5mM 氯化镁和 0.1mM 氯化锌 50% glycerol 中,pH ~

109 分子克隆与抗体生产 5 抗体验证电泳检测预制凝胶蛋白电泳 Bolt Bis-Tris Plus 凝胶系统 Bolt Bis-Tris Plus 凝胶在变性条件下实现较大分子量范围蛋白质的最佳分离效果 高容量的楔形孔设计使每孔的蛋白质上样量可达两倍, 多至 60μL Bolt 凝胶可提供较传统 Tris- 甘氨酸凝胶更理想的蛋白质免疫印迹结果 出众的条带品质和条带容量 更佳的蛋白质分辨率 - 优化的梯度胶形式, 分辨距离增加 10% 保持蛋白质的完整性 - 中性 ph 配方, 最大程度减少对蛋白质的修饰 极佳的批次间一致性 高上样容量 - 上样体积增加了 2 倍 NuPAGE SDS-PAGE 凝胶系统 NuPAGE 预制胶系统与 Bolt 系统类似, 模拟传统的 Laemmli 系统 (Tris- 甘氨酸 SDS-PAGE 凝胶 ) 的变性条件 NuPAGE 凝胶采用独特的缓冲液配方, 可在电泳过程中维持中性 ph 值, 最大程度避免了 Tris - 甘氨酸 SDS -PAGE 凝胶中经常出现的 微笑 及分离效果不理想的现象 NuPAGE 预制胶的超高性能更是为全球科学家广泛接受, 目前已有 3 万多篇文献引用 出众的蛋白条带分辨率和稳定性 更短的电泳时间,35-50 分钟 更长的产品保存期 - 最长达 16 个月 更高效的蛋白质转印 NuPAGE 小型胶的订购信息 每盒 Novex 小型胶包括 10 块凝胶 凝胶类型和浓度 1.0 mm 厚 1.5 mm 厚 10 孔 12 孔 15 孔 17 孔 2D 孔 10 孔 15 孔 Bis-Tris 10% NP0301BOX NP0302BOX NP0303BOX NP0306BOX NP0315BOX NP0316BOX Bis-Tris 4 12% NP0321BOX NP0322BOX NP0323BOX NP0329BOX NP0326BOX NP0335BOX NP0336BOX Bis-Tris 12% NP0341BOX NP0342BOX NP0343BOX NP0346BOX Tris- 乙酸 7% EA0355BOX EA03552BOX EA03555BOX EA0358BOX EA03585BOX Tris- 乙酸 3 8% EA0375BOX EA3752BOX EA03755BOX EA0376BOX EA0378BOX EA03785BOX Bolt Bis-Tris Plus 预制胶为 1.0mm 厚, 用于分离 kDa 大小的蛋白 ( 每盒 10 块凝胶 ) 凝胶浓度 10 孔 12 孔 15 孔 17 孔 8% BG00080BOX BG00082BOX BG00085BOX BG00087BOX 10% BG00100BOX BG00102BOX BG00105BOX BG00107BOX 12% BG00120BOX BG00122BOX BG00125BOX BG00127BOX 4 12% BG04120BOX BG04122BOX BG04125BOX BG04127BOX 相关产品 规格 货号 NuPAGE MOPS SDS 缓冲液试剂盒 ( 适用于中等至大分子量蛋白 ) 1 Kit NP0050 NuPAGE MES SDS 缓冲液试剂盒 ( 适用于小至中等分子量蛋白 ) 1 Kit NP0060 Bolt MOPS SDS 电泳缓冲液 (20X) 500 ml B0001 Bolt MES SDS 电泳缓冲液 (20X) 500 ml B

110 蛋白质分子量标准 我们可提供各种预染和非预染蛋白质分子量标准, 均为即用型, 简化了凝胶电泳和蛋白质免疫印迹过程中的蛋白质分析过程 预染蛋白质分子量标准推荐用于 : 近似指示蛋白质分子量 监视电泳过程 评估蛋白质免疫印迹过程中将蛋白质转印至印迹膜上的效率非预染蛋白质分子量标准推荐用于 : 在各种缓冲液系统中, 目标蛋白质分子量的精确测定 Spectra Multicolor Broad Range Protein Ladder kda ~260 ~140 ~100 ~70 ~50 ~40 ~35 ~25 ~15 ~10 Gel Blot 4-20% Tris-glycine SDS-PAGE Product #s 26623, Spectra Multicolor Low Range Protein Ladder kda Gel ~40 ~25 ~15 ~ Blot 18% SP Tris-tricine SDS-PAGE SP - Small Peptide SDS - polyacrylamide gel with higher crosslinking, C=5% Product # Spectra Multicolor High Range Protein Ladder kda Gel ~300 ~250 ~180 ~130 ~100 ~70 ~50 ~40 Blot 4-12% Tris-glycine SDS-PAGE Product # 分子克隆与抗体生产 我们提供品质卓越的蛋白质分子量标准 质优价廉的理 想选择 : 性能 锐利的蛋白质条带, 稳定的迁移模式, 分子量 测定更简便 方便 蛋白质分子量标准可直接上样, 无需加热 可靠 极佳的批次间一致性和可重复性 蛋白分子量标准分子量标准 产品 蛋白条带数目 分子量范围 低 PageRular 非预染低分子量蛋白质分子量标准 kda 非预染 宽 PageRular 蛋白质分子量标准 kda 高 NativeMark 非预染非变性蛋白质分子量标准 kda 低 PageRular 预染蛋白质分子量标准 kda 预染 宽 PageRular Plus 预染蛋白质分子量标准 kda 高 HiMark 预染高分子量蛋白质标准 kda 多色预染 宽 Spectra 多色宽分子量范围蛋白质分子量标准 kda 高 Spectra 多色高分子量蛋白质分子量标准 kda 蛋白质免疫印迹 MagicMark XP 免疫印迹蛋白分子量标准 kda PageRular 预染 NIR 蛋白质分子量标准 kda 其它 BenchMark 荧光蛋白分子量标准 kda 特殊应用 BenchMark His 标签蛋白质分子量标准 kda IEF3-10 蛋白质标准 pl 111

111 分子克隆与抗体生产 Western 检测 针对蛋白质免疫印迹工作流程的三个步骤, 我们可提供高性能的工具和技术, 使流程变得快速 简单 分离 Mini 型电泳槽可方便地进行电泳 : 通用型电泳槽可与 180 种凝胶兼容, 采用了 - 创新的并排式设计, 方便观察并且可加速上样操作 Bolt 和 NuPAGE Bis-Tris 凝胶在变性条件下可实现小分子量到中等分子量蛋白质的最佳分离 : 利用中性 PH 缓冲系统保护蛋白质的完整性 Thermo Scientific Pierce Power Stainer 可在聚丙型酰胺凝胶上实现快速的蛋白质考马斯亮蓝染色, 一般可在 6-11 分钟内完成 蛋白质分子量标准可以在染色凝胶和免疫印迹上可靠且成比例的显示条带强度, 适用于化学发光 荧光 显色和其它检测系统 转印 Mini 型湿转模块可在 Mini 型电泳槽中实现电泳后的无缝转印 : 所需的甲醇转膜缓冲液体积低于其它商用转印系统 Thermo Scientific Pierce Power Blotter 可用于 kda 蛋白质的快速半干转印, 只需 5-10 分钟即可将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移至硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上 iblot 2 干式转印系统内置电源, 仅需 7 分钟即可完成可重复且灵活的凝胶转印 : 与多种不同成分 不同规格的凝胶以及不同类型的印迹膜兼容 检测 Bind 系列全自动蛋白质免疫印迹处理系统用于蛋白质免疫印迹自动化处理 : 无需电源或电池 只需加入试剂, 利用顺序测流技术自动帮您完成 一抗和二抗用于实现可重复的蛋白质免疫印迹 :Life Technologies 和 Pierce 抗体已经过全面验证, 特异 灵敏 可靠且经济实惠 HRP 化学发光底物可提供极佳的蛋白质免疫印迹结果 :Thermo Scientific Pierce ECL,Pierce ECL Plus 和 SuperSignal 系列化学发光底物不仅信号强度高 持续时间长, 且背景低, 能够实现高灵敏度检测 ELISA 检测 针对抗体的 ELISA 检测, 赛默飞世尔可提供一系列的相关产品, 如封闭液 化学发光底物 化学显色底物 荧光底物 等 详细信息请参照本手册第二部分免疫检测 112