Thermo-Scientific直接PCR宣传册

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棱韦
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1 Thermo Scientific 直接 PCR 无需核酸纯化即可直接进行 PCR 扩增

无需事先纯化 DNA 即可进行 PCR 扩增 Thermo Scientific 直接 PCR 方法可实现直接用未经纯化的样本进行 PCR 扩增, 为 DNA 扩增带来了前所未有的便捷无需任何纯化步骤, 只需微量的原始样本直接作为 PCR 反应的模板, 节省了大量时间和成本优点无需进行耗时且昂贵的 DNA 纯化只需极少量的样本材料提供预混液及预加上样染料的产品形式, 减少移液次数

2 无需事先纯化 DNA 即可进行 PCR 扩增 Thermo Scientific 直接 PCR 方法可实现直接用未经纯化的样本进行 PCR 扩增, 为 DNA 扩增带来了前所未有的便捷无需任何纯化步骤, 只需微量的原始样本直接作为 PCR 反应的模板, 节省了大量时间和成本优点无需进行耗时且昂贵的 DNA 纯化只需极少量的样本材料提供预混液及预加上样染料的产品形式, 减少移液次数 PCR 扩增时间短强劲的热启动 DNA 聚合酶, 确保获得高产量的特异性产物已针对多种样本类型进行过测试试剂盒组分完备包括对照品水和 DNA 分子量标准基于特殊设计的 Thermo Scientific Phusion 和 Phire DNA 聚合酶 Thermo Scienctific TM 直接 PCR 法基于独特的 Thermo Scienctific Phusion 和 Thermo Scienctific Phire DNA 聚合酶与其他 PCR 酶类相比, 这两种专门开发的 DNA 聚合酶具有卓越的性能 Phusion 和 Phire DNA 聚合酶扩增速度非常快速, 性能特别强劲, 能够耐受未纯化样本中存在的多种 PCR 抑制剂基于这些独特的性能, 即使在极具挑战性的条件下,Phusion 和 Phire DNA 聚合酶也能够可靠地进行 DNA 扩增 - 例如直接以生物样本为模板 Phusion DNA 聚合酶的卓越性能来自于融合技术具有校读功能的 DNA 聚合酶 ( 绿色 ) 与小分子量双链 DNA 结合蛋白 ( 紫色 ) 相融合, 得到了一种独特的 DNA 聚合酶, 这种酶能够以其它任何 DNA 聚合酶所无法比拟的准确度和速度来扩增 PCR 产物低保真度 Thermo Scientific Phire 热启动 II DNA 聚合酶也采用类似的融合技术, 使得该 PCR 酶具备扩增速度快性能强劲和对各种 PCR 抑制剂具有强抗干扰能力等优势两种简便的实验方案, 满足不同的实验需求直接实验方案 : 最短的手工操作时间从样本到 PCR 只需一步加入少量组织至直接 PCR 预混液 PCR 稀释和保存实验方案 : 用于多个 PCR 反应用于长扩增片段或难以扩增的片段用于样本保存加入少量组织至稀释缓冲液将上清加入至直接 PCR 预混液 PCR 2

从不同种属的植物材料中实现高效 PCR 扩增 Thermo Scientific Phire 植物直接 PCR 预混液 Thermo Scientific Phire 植物直接 PCR 预混液可以直接从植物样本中扩增 DNA 该预混液包含 Phire 热启动 II DNA 聚合酶,

储存在组织存储卡上的组织 : 玉米烟草种子 : 苹果胡萝卜南瓜真菌和苔藓 : 地钱蘑菇属细菌 : 革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌酵母 : 酿酒酵母裂殖酵母 Thermo Scientific 供应商 K 拟南芥西红柿烟草玉米葡萄树油菜籽 M + L S + L S + L

5 mm 的叶片小圆片 (L) 或小块压碎的种子 (S) 直接加入 50 μl 的 Phire 植物直接 PCR 预混液中根据供应商提供的说明, 同时使用供应商 K 的试剂盒扩增相同的样本 M:Thermo Scientific O GeneRuler Express DNA

3 从不同种属的植物材料中实现高效 PCR 扩增 Thermo Scientific Phire 植物直接 PCR 预混液 Thermo Scientific Phire 植物直接 PCR 预混液可以直接从植物样本中扩增 DNA 该预混液包含 Phire 热启动 II DNA 聚合酶, 可对含有植物来源抑制剂 ( 如多糖复合物和多酚复合物 ) 的样本进行 PCR 扩增其包括电泳示踪染料和一种密度试剂, 可实现 PCR 产物的直接凝胶上样, 从而简化了直接 PCR 实验流程实现对多种植物样本的强劲扩增检测材料示例叶子 : 拟南芥玉米水稻棉花烟草葡萄树储存在组织存储卡上的组织 : 玉米烟草种子 : 苹果胡萝卜南瓜真菌和苔藓 : 地钱蘑菇属细菌 : 革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌酵母 : 酿酒酵母裂殖酵母 Thermo Scientific 供应商 K 拟南芥西红柿烟草玉米葡萄树油菜籽 M + L S + L S + L S + L S + L S + L S M 图 1. 从不同植物的叶片和种子直接扩增 0.5 kb 的 DNA 片段将直径为 0.5 mm 的叶片小圆片 (L) 或小块压碎的种子 (S) 直接加入 50 μl 的 Phire 植物直接 PCR 预混液中根据供应商提供的说明, 同时使用供应商 K 的试剂盒扩增相同的样本 M:Thermo Scientific O GeneRuler Express DNA 分子量标准 +: 使用纯化的 DNA 作为模板的正对照 : 不含模板的负对照对于宽长度范围的扩增片段, 均可获得可靠的结果 M 0.5 kb 1.5 kb 5 kb M 图 2. 从干月桂树叶中扩增不同长度的 (0.5 kb, 1.5 kb 和 5.0 kb) 的 DNA 片段将直径为 0.5 mm 的小圆片叶片样品直接加入 Phire 植物直接 PCR 预混液中更多信息, 请登录 thermofisher.com/ directpcr 3

稀释和保存实验方案, 用于重复检测为了获得更大的灵活性,Phire 植物直接 PCR 预混液经过优化, 可用于直接扩增或用于稀释与保存样本的扩增使用稀释与保存方案, 同一份微量样本可以用于多个 PCR 反应, 甚至在一个月后也可以进行高准确性的重复实验 1 周 2 周 4 周 M D D&S 1 2 3 1 2 3 1 2 3 + M 图 3.

4 稀释和保存实验方案, 用于重复检测为了获得更大的灵活性,Phire 植物直接 PCR 预混液经过优化, 可用于直接扩增或用于稀释与保存样本的扩增使用稀释与保存方案, 同一份微量样本可以用于多个 PCR 反应, 甚至在一个月后也可以进行高准确性的重复实验 1 周 2 周 4 周 M D D&S M 图 3. 使用 Phire 植物直接 PCR 预混液, 采用直接实验方案 (D) 或稀释和保存实验方案 (D&S) 从烟草叶片扩增 1.5 kb 的 DNA 片段采用 D&S 实验方案, 将样本保存于稀释缓冲液中, 在不同的温度下保存 1 2 或 4 周 : (1) 20 C (2) 4 C 和 (3) 室温 +: 使用纯化的 DNA 作为模板的正对照 : 不含模板的负对照从样本到上样凝胶电泳的快速实验方案与许多其它的直接 PCR 产品不同,Phire 植物直接 PCR 预混液所提供的是真正的直接实验方案样本可以直接加入 PCR 反应混合物中, 无需预先孵育或提取步骤此外, 由于使用了高级的聚合酶, 循环扩增时间通常只有其它同类产品的一半该预混液包括电泳示踪染料和一种密度试剂, 进一步降低了成本和实验所需时间直接 PCR 反应产物可直接上样至凝胶, 无需添加上样染料实验方案的时间 ( 分钟 ) PCR 抽提 0 Thermo Scientific 供应商 K 供应商 S 图 4. Phire 植物直接 PCR 预混液更为节省时间试剂盒组分 F-160S F-160L 2X Phire 植物直接 PCR 预混液 ml ml 稀释缓冲液 5 ml ml 对照引物混合液 ( 各 25 μm) 40 μl 40 μl 无核酸酶的水 ml ml O GeneRuler Express DNA 分子量标准 100 次反应 (50 µg) 与其它更为耗时的先提取核酸, 然后进行 PCR 的实验方法相比, 直接 PCR 得到的结果相同甚至更好 4 加拿大温尼伯马尼托巴大学生物科学系, 首席研究员

针对多种动物和人体组织样本的直接 PCR 扩增 Thermo Scientific Phire 组织直接 PCR 预混液 Thermo Scientific Phire 组织直接 PCR 预混液可用于动物和人组织的直接 DNA 扩增该预混液包含 Phire 热启动 II DNA 聚合酶, 可在多种动物来源抑制剂存在情况下, 如胶原蛋白黑色素和真黑素 ( 头发皮肤 ) 或肌红蛋白 ( 肌肉

鳍秀丽隐杆线虫 : 全虫狗 : 毛发人体标本 : 口腔拭子指甲唾液牙齿皮肤活检毛发 FFPE 组织 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + M M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + M 图 5.

5 针对多种动物和人体组织样本的直接 PCR 扩增 Thermo Scientific Phire 组织直接 PCR 预混液 Thermo Scientific Phire 组织直接 PCR 预混液可用于动物和人组织的直接 DNA 扩增该预混液包含 Phire 热启动 II DNA 聚合酶, 可在多种动物来源抑制剂存在情况下, 如胶原蛋白黑色素和真黑素 ( 头发皮肤 ) 或肌红蛋白 ( 肌肉 ), 成功进行 PCR 扩增其包括电泳示踪染料和一种密度试剂, 可实现 PCR 产物的直接凝胶上样, 从而简化了直接 PCR 实验流程预混液还提供 Thermo Scientific DNARelease 添加剂, 能促进难扩增组织样本 DNA 的释放出色的扩增能力检测材料示例小鼠组织 : 耳朵尾巴毛发肝脾脑培养的小鼠细胞 : 成纤维细胞果蝇 : 翅膀全虫斑马鱼 : 鳍秀丽隐杆线虫 : 全虫狗 : 毛发人体标本 : 口腔拭子指甲唾液牙齿皮肤活检毛发 FFPE 组织 M M M M 图 5. 使用 Phire 组织直接 PCR 预混液对不同的人和动物组织样本进行 DNA 片段扩增小鼠 (1) 尾巴 (2) 耳朵和 (3) 毛发 ; 鸟 (4) 肌肉和 (5) 羽毛 ; 人 (6) 毛发 (7) 牙齿 (8) 指甲和 (9) 唾液 ;(10) 斑马鱼肌肉 ; 以及 (11) 果蝇 +: 阳性对照反应 : 无模板对照多重直接 PCR Phire 组织直接 PCR 预混液适用于多重 PCR 反应, 可以在一次反应中同时检测多个目标序列 M M 图 6. 使用 Phire 组织直接 PCR 预混液, 在 1 重至 5 重反应中, 从小鼠耳朵扩增不同长度的片段 (185 至 650 bp) 更多信息, 请登录 thermofisher.com/ directpcr 5

稀释和保存实验方案, 用于重复检测为了获得更大的灵活性,Phire 组织直接 PCR 预混液已经过优化, 适用于直接或稀释和保存实验方案采用稀释和保存实验方案, 一份微量样本可用于多次 PCR 反应, 并可以在以后重复进行实验从样本到上样凝胶电泳的快速实验方案使用 Phire 组织直接 PCR 预混液, 将样本直接加入 PCR 反应混合物中, 无需事先进行 DNA 纯化或抽提步骤由于

采用直接实验方案及稀释和保存实验方案, 使用 Phire 组织直接 PCR 预混液从小鼠耳朵组织中扩增 237bp DNA 片段将样本置于稀释缓冲液中 4 C 保存数周后, 对相同的片段进行扩增 (D) 直接实验方案,(D&S) 稀释和保存实验方案, 以及置于稀释缓冲液中保存 1 2 3 和 4 周后采用稀释和保存实验方案 +: 使用纯化的小鼠 DNA 作为模板的对照反应 : 无模板对照

6 稀释和保存实验方案, 用于重复检测为了获得更大的灵活性,Phire 组织直接 PCR 预混液已经过优化, 适用于直接或稀释和保存实验方案采用稀释和保存实验方案, 一份微量样本可用于多次 PCR 反应, 并可以在以后重复进行实验从样本到上样凝胶电泳的快速实验方案使用 Phire 组织直接 PCR 预混液, 将样本直接加入 PCR 反应混合物中, 无需事先进行 DNA 纯化或抽提步骤由于 Phire 热启动 II DNA 聚合酶的独有特性,PCR 扩增循环时间极短该预混液包括电泳示踪染料和一种密度试剂, 可实现 PCR 产物的直接凝胶上样, 降低了成本, 简化了实验流程 200 PCR 抽提 Extraction M D D&S M 图 7. 采用直接实验方案及稀释和保存实验方案, 使用 Phire 组织直接 PCR 预混液从小鼠耳朵组织中扩增 237bp DNA 片段将样本置于稀释缓冲液中 4 C 保存数周后, 对相同的片段进行扩增 (D) 直接实验方案,(D&S) 稀释和保存实验方案, 以及置于稀释缓冲液中保存和 4 周后采用稀释和保存实验方案 +: 使用纯化的小鼠 DNA 作为模板的对照反应 : 无模板对照实验方案所需时间 Protocol time (minutes) ( 分钟 ) Thermo Scientific 供应商 Vendor K Vendor 供应商 S Vendor 供应商 B 供应商 Vendor 0O 图 9. Phire 组织直接 PCR 预混液更为节省时间对于宽长度范围的扩增片段, 均可获得可靠的结果试剂盒组分 F-170S F-170L 2X Phire 组织直接 PCR 预混液 ml ml 稀释缓冲液 5 ml ml DNARelease 添加剂 µl 1.3 ml 通用对照引物混合液 40 μl 40 μl 无核酸酶的水 ml ml O GeneRuler Express DNA 分子量标准 100 次反应 (50 µg) M 237 bp 2 kb 7.5 kb M 图 8. 使用 Phire 组织直接 PCR 预混液直接从人唾液中扩增不同长度的扩增片段 (237 bp 2 kb 7.5 kb) M:Thermo Scientific ZipRuler Express DNA 分子量标准 2 使用直接 PCR 试剂盒, 无需提取并纯化 DNA, 可以节省半天时间, 用于处理多种不同品系时可以获得极佳的效果英国布里斯托尔, 线虫生物学研究, 研究员 6

针对一系列血液样本的高效扩增 Thermo Scientific Phusion 血液直接 PCR 预混液 Thermo Scientific Phusion 血液直接 PCR 预混液可以从全血中直接进行 DNA 扩增,PCR 反应中血液的浓度可达 40% 这是通过经特殊改造的 Thermo Scientific Phusion 热启动 II 高保真 DNA 聚合酶来实现的,

扩增试剂盒组分 F-175S F-175L 2X Phusion 血液直接 PCR 预混液 50 mm EDTA (ph 8.0) 50 mm MgCl 2 溶液 1 ml 5 1 ml 0.5 ml 0.5 ml 1.5 ml 1.5 ml M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 + M 图 10.

7 针对一系列血液样本的高效扩增 Thermo Scientific Phusion 血液直接 PCR 预混液 Thermo Scientific Phusion 血液直接 PCR 预混液可以从全血中直接进行 DNA 扩增,PCR 反应中血液的浓度可达 40% 这是通过经特殊改造的 Thermo Scientific Phusion 热启动 II 高保真 DNA 聚合酶来实现的, 该酶能够耐受存在于血液中的 PCR 抑制剂以及最广泛使用的血液防腐剂 ( 如肝素 EDTA 柠檬酸盐) 该预混液包括电泳示踪染料和一种密度试剂, 可实现 PCR 产物的直接凝胶上样, 从而简化了直接 PCR 实验流程检测材料示例全血 : 小鼠猪猫狗牛鸟人使用肝素柠檬酸盐 EDTA 保存的血液 Whatman 903 和 FTA 卡上保存的血液针对多种血液样本进行直接 PCR 扩增试剂盒组分 F-175S F-175L 2X Phusion 血液直接 PCR 预混液 50 mm EDTA (ph 8.0) 50 mm MgCl 2 溶液 1 ml 5 1 ml 0.5 ml 0.5 ml 1.5 ml 1.5 ml M M 图 10. 从人和动物血液样本中扩增 DNA 使用 (1) 肝素 (2) 柠檬酸盐 (3) EDTA 保存或 (4) 保存于组织存储卡上的人血 ;(5) 小鼠 ;(6) 猫 ;(7) 狗 ;(8) 牛 ;(9) 鸟 ;(10) 绵羊 ;(11) 马 ; 以及 (12) 鱼 +: 使用纯化的 DNA 作为模板的对照反应 : 无模板对照 100 % DMSO 0.5 ml 0.5 ml 通用对照引物混合液 40 μl 40 μl 无核酸酶的水 1.25 ml ml O GeneRuler Express DNA 分子量标准 100 次反应 (50 µg) 对于宽长度范围的扩增片段, 均可获得可靠的结果 Thermo Scientific 供应商 K 供应商 S M 237 bp 2 kb 7.5 kb 237 bp 2 kb 7.5 kb 237 bp 2 kb 7.5 kb M 图 11. 使用 Phusion 血液直接 PCR 预混液和其它供应商的试剂盒, 从人血 (EDTA 处理 ) 中直接扩增 237 bp 2 kb 和 7.5 kb 片段将血液直接加入反应中, 参照供应商的使用说明进行 PCR M:ZipRuler Express DNA 分子量标准 2 更多信息, 请登录 thermofisher.com/ directpcr 7

8 这是我在最短的时间内最少的工作量下见过的最清晰的基因分型结果英国伦敦大学学院, 儿童健康研究所, 研究助理订购信息产品规格货号直接实验方案稀释和保存实验方案直接 PCR 预混液 Phire 组织直接 PCR 预混液 100 x 50 µl rxns 250 x 20 µl rxns F-170S 500 x 50 µl rxns 1,250 x 20 µl rxns F-170L Phire 植物直接 PCR 预混液 100 x 50 µl rxns 250 x 20 µl rxns F-160S 500 x 50 µl rxns 1,250 x 20 µl rxns F-160L Phusion 血液直接 PCR 预混液 100 x 20 µl rxns NA F-175S 500 x 20 µl rxns NA F-175L 直接 PCR 试剂盒 Phire 动物组织直接 PCR 试剂盒 200 x 50 µl rxns 500 x 20 µl rxns F-140WH Phire 植物直接 PCR 试剂盒 200 x 50 µl rxns 500 x 20 µl rxns F-130WH Phusion 人源样本直接 PCR 试剂盒 200 x 20 µl rxns 200 x 20 µl rxns F-150BID Phusion 血液直接 PCR 试剂盒 100 x 20 µl rxns NA F-547S 500 x 20 µl rxns NA F-547L 如需了解更多信息, 请登录 thermofisher.com/directpcr 免费服务电话 : / 销售服务信箱 :sales.china@thermofisher.com 技术咨询信箱 :LifeScience-CNTS@thermofisher.com thermofisher.com 上海办事处电话 : 北京办事处电话 : 广州办事处电话 : 成都办事处电话 : For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified. COL

Phire Hot StartII DNA 聚合酶

Phire Hot StartII DNA 聚合酶重要提示 Phusion 人源样本直接 PCR 试剂盒产品货号 :F-150,200rxns x 20μl 变性温度为 98 C 退火温度与众多常规 DNA 聚合酶 ( 如 Taq DNA 聚合酶 ) 不同, 具体请参照 6.3 延伸时, 若扩增子片段 1kb, 则延伸时间设定为 15s 即可 ; 若