Protein Labeling and Detection
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- 蜡沣淇 翦
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1 ECL plex Product Specialist 1/
2 Western Blot 2/
3 Western Blotting- PI 3/
4 Western Blotting Y /
5 1. SDS- (SDS-PAGE) SDS ( β- ) --SDS 5/
6 SDS-PAGE (Tris-HCL ph 6.8) glycine/chloride (Tris -HCL ph8.8) Tris-glycine ph /
7 2. : ( - ) 7/
8 + - l 8/
9 3. CyDye Y Y 1 Y Y Y Y 2 Y Y Y Y 9/
10 HPR AP 10 /
11 Chemiluminescence Fluorescence Chemifluorescence Radioactivity ( 35 S or 125 I) 11 /
12 4. 12 /
13 ECL ECL Plus ECL Advance ECL Plex 13 /
14 ECL HRP Peracid HRP Luminol + Proprietary Enhancer Hyperfilm ECL / CCD 14 /
15 ECL order information RPN 2125 ECL and ECL Plus blocking reagent for 2000cm 2 15 /
16 ECL vs. ECL 125 I DAB NBT/BCIP a b c d IgG Hybond TM ECL, : a), ECL, Hyperfilm TM ECL 15 b) 125I-anti-mouse (0.6μCi/ml), 18 hr c), DAB 20 min d), NBT/BCIP 20 min 19 /
17 ECL Plus -HRP ECL Plus ( 503nm) /CCD ( 430nm) 20 /
18 ECL plus order information RPN 2124 ECL Plus Western blotting Reagent Pack anti-mouse IgG horseradish peroxidase conjugate, 100 µl; anti-rabbit IgG horseradish peroxidase conjugate, 100 µl; ECL membrane blocking agent, 5 g. Sufficient for at least 10 mini-blots. RPN 2125 ECL and ECL Plus blocking reagent for 2000cm2 21 /
19 ECL Advance ECL Advance -HRP ECL Advance HRP Hyperfilm ECL / CCD 22 /
20 ECL Advance order information RPN 2135 ECL Advance Western Blotting Detection kit for 1000cm 2 23 /
21 Sensitivity Comparisons Using Optimised Antibody Concentrations: Nitrocellulose Membrane: Hybond ECL ECL Advance ECL Plus Pierce West Femto Primary 1:50,000 Secondary 1:200,000 Primary 1:5,000 Secondary 1:10,000 Primary 1:5,000 Secondary 1:100,000 PVDF Membrane: Hybond-P ECL Advance ECL Plus Pierce West Femto Primary 1:50,000 Secondary 1:200,000 Primary 1:5,000 Secondary 1:10,000 Primary 1:5,000 Secondary 1:100, /
22 ECL Western 25 /
23 ECL Plex Cy5 Cy5 Cy3 Cy3 CyDye = 1 = 2 26 /
24 Cy5 Cy3 27 /
25 ECL Plex with Cy3 and Cy5 : nm= Typhoon 9410 (nm) (nm). Cy BP 30 Cy BP /
26 ECL Plex: Typhoon CyDye 29 /
27 ECL Plex : ( ) 30 /
28 31 /
29 32 /
30 ECL ECL Plex, ECL Advance, ECL Plus, ECL ECL Plex 1:750 1:2500 Hybond-ECL (R 2 ) (pg) ECL Advance 1: : Hybond-ECL ECL Plus 1: : Hybond-ECL ECL 1:1500 1:10000 Hybond-ECL A model system was used to compare the four systems to each other with minimal variability ECL Plus Fluorescent 1: : Hybond-ECL /
31 ECL HRP ECL Advance ECL Plus ECL ECL Plex (pg ) * ~1 pg ~5 pg ~10 pg ~1 pg Up to 1/100,000 Up to 1/500,000 Up to 1/20,000 Up to 1/5,000 1/100-1/5000 Up to 1/200,000 Up to 1/15,000 1/1250-1/ hrs hrs 1-2 hrs Up to 3 months Yes Yes Yes (No) Hybond P or Hybond ECL Hybond P for ChemiLum Hybond ECL for ChemiFluor Hybond ECL Hybond ECL or LFP membrane Hyperfilm ECL / CCD Fluorescent Scanner / Hyperfilm ECL / CCD Hyperfilm ECL / CCD Fluorescent Scanner, &. *in model system 34 /
32 35 /
33 36 /
34 1. 2.Hybond 3.
35 Tank Transfer TE22, TE62 Semi-Wet Transfer minive blot module Semi-Dry Transfer (ECL Semi-Dry Blotters, TE70/77 PWR) 38 /
36 Tank Transfer TE22 TE62 39 /
37 Semi-Wet Transfer Mini-VE Blot Module 40 /
38 ECL Semi-Dry Blotters TE70/77 TE70/77 PWR TE 70: 14 x 16 cm TE 77: 21 x 26 cm 41 /
39 Features and Benefits 42 /
40 ECL Multiprobe and ECL Multiprobe XL Decaprobe Incubation Manifold OLD 43 /
41 Hybond ECL 100% ECL 44 /
42 Hybond-P PVDF-polyvinylidene difluoride ECL Plus (lumi.) ECL Advance 45 /
43 Hybond-LFP Low Fluorescent PVDF-polyvinylidene difluoride ECL Plex PVDF 46 / MetOH Water Transfer buffer
44 Molecular Weight Markers Rainbow Markers ECL DualVue RPN810 M r (Da) separation on a 12% SDSpolyacrylamide gel RPN756: RPN755: RPN800: MW Range High Low Full Range Size Range (kda) /
45 ECL Plex On Typhoon (12% gel) Cy5 Cy3 250 k 160 k 105 k 75 k 50 k 35 k 30 k 25 k 15 k 48 /
46 Questions ECL ECL Plus ECL Advance ECL Plex ECL plex 3 49 /
47 KTAclub7/index.html 50 /
材料與方法
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