第 3 期戴航等 : 苦槛蓝叶中的黄酮类化合物 267 [3] 分, 其中黄酮类化合物含量较多李显珍等报道了从苦槛蓝叶中分离得到的 6 个黄酮类化合物, 其中 (2R,3R)-3,5,7-trihydroxy-flavanone-3-acetate 对稻瘟菌 (Pyricularia sp.

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而财向
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1 热带亚热带植物学报 2013,21(3):266~272 Journal of Tropical and Subtropical Botany 苦槛蓝叶中的黄酮类化合物 * 戴航, 黄立兰, 郭育晖, 谷文祥 ( 华南农业大学理学院生物材料研究所, 广州 ) 摘要 : 为了解苦槛蓝 (Myoporum bontioides A. Gray) 的化学成分, 采用色谱分离技术从苦槛蓝叶片中分离得到 11 个黄酮类化合物通过波谱分析, 他们的结构分别鉴定为 : 桔皮素 (1) 甜橙素 (2) 5,4 - 二羟基 -6,7,8,3 - 四甲氧基黄酮 (3) 4,5,7,8- 四甲氧基黄酮 (4) 去甲基川陈皮素 (5) 5- 羟基 -6,7,3,4 - 四甲氧基黄酮 (6) 3,4,5,6,7,8- 六甲氧基黄酮 (7) 二氢山柰酚 (8) 木犀草素 (9) 3,4,5,7- 四羟基 -3- 甲氧基黄酮 (10) 和芹黄素 (11) 除化合物 9 之外, 其他化合物均为首次从苦槛蓝叶片中分离得到孢子萌发法测定结果表明, 化合物 1, 2, 8 和 9 对香蕉炭疽菌 (Colletotrichum musae) 具有较好的抑菌活性这为苦槛蓝叶片中有效成分的利用提供了理论依据关键词 : 苦槛蓝 ; 黄酮类化合物 ; 生物活性 doi: /j.issn Flavonoids from the Leaves of Myoporum bontioides DAI Hang, HU Lilan, GUO Yu-hui, GU Wen-xiang * (Institute of Biomaterial, College of Science, South China Agricultural University, Guangzhou , China) Abstract: In order to understand the chemical constituents extracted from Myoporum bontioides A. Gray, eleven flavonoid compounds were isolated from the leaves of M. bontioides by chromatographic separation methods. On the basis of spectral data, they were identified as tangeretin (1), sinensetin (2), 5,4 -dihydroxy- 6,7,8,3 -tetramethoxyflavone (3), 4,5,7,8-pentamethoxyflavone (4), 5-demethylnobiletin (5), 5-hydroxy- 6,7,3,4 -tetramethoxyflavone (6), nobiletin (7), dihydrokaempferol (8), luteolin (9), 3-methoxy-3,4,5,7- tetrahydroxyflavone (10), and apigenin (11). All these compounds were obtained from M. bontioides for the first time except compound 9. The compounds 1, 2, 8 and 9 had strong antifungal activity against Colletotrichum musae by using spore germination inhibition assay. So, these could provide a theoretical basis for utilizing the active ingredients in leaves of M. bontioides. Key words: Myoporum bontioides A. Gray; Flavonoids; Biological active 苦槛蓝 (Myoporum bontioides A. Gray) 是我国唯一的 1 种苦槛蓝属植物, 广泛分布于广东广西海南福建等沿海地区, 资源丰富 [1] 苦槛蓝不仅能抗风沙耐旱耐盐碱, 可用作海岸防护林, 而且具有良好的药用价值有研究结果表明, 苦槛蓝叶片可治疗头疼风湿病性病溃疡疱疹和肺结核等病症, 有的地方还把它作为强身健体的药物使用 [2] 苦槛蓝中含有多种不同结构类型的化学成收稿日期 : 接受日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金项目 ( ); 广东省科技计划项目 (2012B ); 华南农业大学 211 工程三期重点建设项目 (2009B ) 资助作者简介 : 戴航 (1988 ~ ), 女, 硕士研究生 daihang0811@163.com * 通讯作者 Corresponding author. wenxgu@scau.edu.cn.

2 第 3 期戴航等 : 苦槛蓝叶中的黄酮类化合物 267 [3] 分, 其中黄酮类化合物含量较多李显珍等报道了从苦槛蓝叶中分离得到的 6 个黄酮类化合物, 其中 (2R,3R)-3,5,7-trihydroxy-flavanone-3-acetate 对稻瘟菌 (Pyricularia sp.) 有强抑菌活性, 它的 EC 50 为 μg ml 1 [4] ; 何衍彪等报道, 从苦槛蓝叶中分离得到的 5,7- 二羟基二氢黄酮 5,7- 二羟基黄酮醇 3,4 - 二甲氧基 -5,7- 二羟基黄酮醇对小菜蛾 (Plutella xylostella) 具有一定的产卵忌避拒食作用本文报道从苦槛蓝叶片中分离得到的另外 11 个黄酮类化合物, 并检测他们对香蕉炭疽菌的抑菌活性, 为苦槛蓝资源的开发利用提供科学依据 1 材料和方法 1.1 材料苦槛蓝 (Myoporum bontioides A. Gray) 叶片采自广东省雷州半岛, 经华南农业大学林学院李秉滔教授鉴定香蕉炭疽菌 (Colletotrichum musae) 由华南农业大学园艺学院吴振先教授提供柱层析正相硅胶 (80 ~ 100 目 200 ~ 300 目 ) 为青岛谱科分离材料有限公司产品, 反相硅胶 RP-18 ODS-A (50 μm) 为日本 YMC Co. Ltd. 产品, 葡聚糖凝胶 LH-20 为瑞典 Amersham Biosciences 公司产品, 薄层色谱 (TLC) 用正相硅胶板为青岛海洋化工分厂产品反相硅胶板为德国默克公司生产, 显色方法为在荧光灯下波长 254 nm 和 365 nm 处观察荧光,10% 硫酸乙醇溶液和硫酸香草醛处理后加热显色及碘蒸气显色 1.2 仪器高效液相色谱 (HPLC) 分析与制备采用日本岛津公司 LC-6AD 型液相色谱仪 ; 核磁共振谱测定采用瑞士布鲁克公司 Bruker AVANCE 600 型核磁共振仪, 以四甲氧基硅烷为内标测定 ; 电喷雾质谱 (ESIMS) 测定采用美国应用生物系统公司 MDS SCIEX API 2000 LC/MS/MS 质谱仪 1.3 提取和分离取苦槛蓝叶粉末 12 kg, 用超临界二氧化碳在压力 15 MPa 温度 30 下提取 15 min, 得到超临界二氧化碳萃取物 g 提取物经正相硅胶柱层析, 以石油醚 - 丙酮 (100 : 1 50 : 1 25 : 1 10 : 1 5 : 1 和 2 : 1,V/V) 进行梯度洗脱, 得到 11 个组分 (A1 ~ A11) A9 部分 (2.12 g) 经正相硅胶柱色谱分离, 以石油醚 - 丙酮 (100 : 1 50 : 1 25 : 1 10 : 1 5 : 1 和 2 : 1,V/V) 进行梯度洗脱, 收集流分得 7 个亚组分 (D1 ~ D7) 亚组分 D1 经硅胶柱色谱分离, 以石油醚 - 丙酮 (100 : 1 50 : 1 25 : 1 10 : 1 5 : 1 和 2 : 1, V/V) 进行梯度洗脱得 3 个次亚组分 (D1-1 ~ D1-3) 次亚组分 D1-1 依次经 Sephadex LH-20 柱层析 ( 流动相 : 甲醇 ; 甲醇 - 氯仿 = 4 : 1) 以及硅胶柱色谱分离石油醚 - 丙酮 (100 : 1 50 : 1 25 : 1 10 : 1 5 : 1 和 2 : 1,V/V) 得到化合物 1 (70.0 mg); 次亚组分 D1-2 经 Sephadex LH-20 柱层析 ( 流动相 : 甲醇 - 氯仿 = 4 : 1) 和硅胶柱色谱分离 ( 流动相 : 氯仿 - 甲醇 = 32 : 1) 得到化合物 4 (3.5 mg); 次亚组分 D1-3 经 Sephadex LH-20 柱层析 ( 流动相 : 甲醇 ; 甲醇 - 氯仿 = 4 : 1) 和硅胶柱色谱分离 ( 流动相 : 氯仿 - 甲醇,40 : 1 ~ 20 : 1) 得化合物 5 (3.0 mg) 和化合物 3 (4.6 mg) A10 部分 (1.5 g) 经反相硅胶柱色谱分离, 以甲醇 - 水 (40% ~ 100%) 进行梯度洗脱, 收集流分得 3 个亚组分 (E1 ~ E3) 亚组分 E1 经 Sephadex LH-20 柱层析 ( 流动相 : 甲醇 - 氯仿 = 4 : 1) 得化合物 6 (5.0 mg); 亚组分 E2 依次经 Sephadex LH-20 柱层析 ( 流动相 : 甲醇 ; 甲醇 - 氯仿 = 4 : 1) 和硅胶柱色谱分离 ( 流动相 : 氯仿 - 甲醇,40 : 1 ~ 20 : 1) 得化合物 7 (4.0 mg), 亚组分 E3 经 Sephadex LH-20 柱层析 ( 流动相 : 甲醇 ; 甲醇 - 氯仿 = 4 : 1) 和 HPLC 制备色谱 ( 流动相 : 甲醇 - 水,45%; 流速 :10 ml min 1 ) 分离得到化合物 2 (17.0 mg) 取苦槛蓝叶干粉 6 kg, 室温下用 50% 乙醇 (3 BV) 冷浸提取, 每次浸泡 7 d, 过滤, 合并滤液, 减压蒸馏除去乙醇至无醇味, 滤去不溶物得水溶性部分水溶性部分依次用石油醚乙酸乙酯正丁醇各萃取 3 ~ 5 次, 分别合并萃取溶液, 前两部分分别减压蒸干, 于 4 冷冻保存正丁醇萃取部分于 MPa 减压蒸馏至无醇味, 用水溶解后上 AB-8 大孔吸附柱, 分别用不同比例的乙醇 / 水系统 (3 ~ 5 BV) 洗脱, 得到 4 个组分 (F1 ~ F4) F2 (18.4 g) 经中压正相硅胶柱层析 (200 ~ 300 目 ), 以氯仿 - 甲醇 (50 : 1 ~ 6 : 4) 梯度洗脱, 检测合并主点相

3 268 热带亚热带植物学报第 21 卷同的流分, 得到 F2-1 ~ F2-6 共 6 个亚组分 F2-2 (1.32 g) 经 ODS 反相硅胶柱层析 (50 µm), 以甲醇 - 水 (20 : 80 ~ 60 : 40) 梯度洗脱, 得到 F2-2-1 ~ F2-2-4, F2-2-3 (0.45 g) 经 Sephadex LH-20 柱层析 ( 流动相 : 甲醇 ), 得到化合物 8 (5.0 mg);f2-2-4 (0.67 g), 经 Sephadex LH-20 柱层析 ( 流动相 : 甲醇 ) 得到化合物 9 (6.0 mg) F4 (10.0 g) 经中压正相硅胶柱层析 (200 ~ 300 目 ), 以氯仿 - 甲醇 (95 : 5 ~ 60 : 40) 为淋洗剂梯度洗脱, 检测合并主点相同的流分, 得到 F4-1 ~ F4-6 共 6 个亚组分 F4-3 (3.5 g) 经正相硅胶柱层析 (200 ~ 300 目 ), 以氯仿 - 甲醇 (95 : 5 ~ 90 : 10) 梯度洗脱, 检测合并主点相同的流分, 得到 F4-3-1 ~ F4-3-3 共 3 个组分 F4-3-1 (1.35 g) 经 ODS 反相硅胶柱层析 (50 µm), 以甲醇 - 水 (30 : 70 ~ 60 : 40) 梯度洗脱, 合并 30% 甲醇 - 水洗脱的相同主点流分, 经 Sephadex LH-20 柱层析 ( 流动相 : 甲醇 ), 得到化合物 10 (6.0 mg) F4-3-4 (4.3 g) 经 ODS 反相硅胶柱层析 (50 µm), 合并主点过 Sephadex LH-20 柱层析 ( 流动相 : 甲醇 ), 得到化合物 11 (5.0 mg) 1.4 结构鉴定 5,6,7,8,4 - 五甲氧基黄酮 (1) 淡黄色针状晶体 ; 分子式为 C 20 H 20 O 7 ; 1 H NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ 7.90 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-2, 6 ), 7.04 (2H, d, J = 9 Hz, H-3, 5 ), 6.62 (1H, s H-3), 4.12 (3H, s, -OCH 3 ), 4.04 (3H, s, -OCH 3 ), 3.96 (3H 2, s, -OCH 3 ), 3.90 (3H, s, -OCH 3 ); 13 C NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ (C-4), (C-2), (C-4 ), (C-7), (C-9), (C-8), (C-5), (C-6), (C-2, 6 ), (C-1 ), (C-10), (C-3, 5 ), (C-3), 62.3 (-OCH 3 ), 62.0 (-OCH 3 ), 61.8 (-OCH 3 ), 61.7 (-OCH 3 ), 55.4 (-OCH 3 ); ESI-MS m/z: [M + H] +, [M + Na] + 以上数据与文献 [5] 报道数据基本一致, 确定为 5,6,7,8,4 - 五甲氧基黄酮, 即桔皮素甜橙素 (2) 淡黄色固体 ; 分子式为 C 20 H 20 O 7 ; 图 1 苦槛蓝中的黄酮类化合物 1 ~ 11 的结构 Fig. 1 Structures of flavonoids 1 11 from Myoporum bontioides

4 第 3 期戴航等 : 苦槛蓝叶中的黄酮类化合物 H NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ 7.51 (1H, dd, J = 1.8, 8.4 Hz, H-6 ), 7.32 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2 ), 6.97 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5 ), 6.81 (1H, s, H-8), 6.60 (1H, s, H-3), 4.00 (3H 2, s, -OCH 3 ), 3.98 (3H, s, -OCH 3 ), 3.96 (3H, s, -OCH 3 ), 3.93 (3H, s, -OCH 3 ); 13 C NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ (C-4), (C-2), (C-7), (C-5), (C-9), (C-4 ), (C-3 ), (C-6), (C-1 ), (C-6 ), (C-10), (C-5 ), (C-2 ), (C-3), 96.3 (C-8), 62.2 (-OCH 3 ), 61.5 (-OCH 3 ), 56.3 (-OCH 3 ), 56.1 (-OCH 3 ), 56.1 (-OCH 3 ); ESI-MS m/z: [M + H] +, [M + Na] +, [M + K] + 以上数据与文献 [5] 报道数据基本一致, 确定为 5,6,7,3,4 - 五甲氧基黄酮, 即甜橙素 5,4 - 二羟基 -6,7,8,3 - 四甲氧基黄酮 (3) 淡黄色固体 ; 分子式为 C 19 H 18 O 8 ; 1 H NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ 7.55 (1H, dd, J = 1.8, 7.8 Hz, H-6 ), 7.43 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2 ), 7.06 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5 ), 6.61 (1H, s, H-3), 4.13 (3H, s, -OCH 3 ), 4.02 (3H, s, -OCH 3 ), 3.99 (3H, s, -OCH 3 ), 3.97 (3H, s, -OCH 3 ); 13 C NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ (C-4), (C-2), (C-7), (C-5), (C-3 ), (C-4 ), (C-9), (C-6), (C-8), (C-1 ), (C-6 ), (C-2 ), (C-5 ), (C-10), (C-3), 62.1 (-OCH 3 ), 61.7 (-OCH 3 ), 61.1 (-OCH 3 ), 56.0 (-OCH 3 ); ESI-MS m/z: [M + H] +, [M + Na] +, [M + K] + 以上数据与文献 [6] 报道数据基本一致, 确定为 5,4 - 二羟基 -6,7,8,3 - 四甲氧基黄酮 4,5,7,8- 四甲氧基黄酮 (4) 淡黄色固体 ; 分子式为 C 19 H 18 O 6 ; 1 H NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ 7.90 (2H, d, J = 9 Hz, H-2, 6 ), 7.04 (2H, d, J = 9 Hz, H-3, 5 ), 6.63 (1H, s, H-3), 6.45 (1H, s, H-6), 4.02 (3H, s, -OCH 3 ), 4.00 (3H, s, -OCH 3 ), 3.97 (3H, s, -OCH 3 ), 3.90 (3H, s, -OCH 3 ); 13 C NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ (C-4), (C-2), (C-4 ), (C-7), (C-9), (C-5), (C-8), (C-2, 6 ), (C-1 ),114.5 (C-3, 5 ),109.0 (C-10), (C-3), 92.6 (C-6), 61.6 (-OCH 3 ), 56.6 (-OCH 3 ), 56.3 (-OCH 3 ), 55.4 (-OCH 3 ); ESI-MS m/z: [M + H] +, [M + Na] + 以上数据与文献[7] 报道数据基本一致, 确定为 4,5,7,8- 四甲氧基黄酮去甲基川陈皮素 (5) 黄色固体 ; 分子式 C 20 H 20 O 8 ; 1 H NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ (1H, s, 5-OH), 7.59 (1H, dd, J = 8.6, 2.0 Hz, H-6 ), 7.43 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2 ), 7.01 (1H, d, J = 8.6 Hz, H-5 ), 6.62 (1H, s, H-3), 4.12 (3H, s, -OCH 3 ), 3.99 (3H, s, -OCH 3 ), 3.98 (3H, s, -OCH 3 ), 3.96 (3H, s, -OCH 3 ); 13 C NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ (C-4), (C- 2), (C-7), (C-4 ), (C-3 ), (C- 9), (C-5), (C-6), (C-8), (C- 1 ), (C-6 ), (C-5 ), (C-2 ), (C- 10), (C-3), 62.0 (-OCH 3 ), 61.7 (-OCH 3 ), 61.1 (-OCH 3 ), 56.1 (-OCH 3 ), 56.0 (-OCH 3 ); ESI-MS m/z: [M + H] +, [M + Na] + 以上数据与文献 [5] 报道数据基本一致, 确定为 5- 羟基 -6,7,8,3,4 - 五甲氧基黄酮, 即去甲基川陈皮素 5- 羟基 -6,7,3,4 - 四甲氧基黄酮 (6) 黄色固体 ; 分子式 C 19 H 18 O 7 ; 1 H NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ 7.53 (1H, dd, J = 8.8,2.0 Hz, H-6 ),7.34 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-2 ), 6.98 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5 ), 6.60 (1H, s, H-8), 6.56 (1H, s, H-3), 3.99 (3H, s, -OCH 3 ), 3.98 (3H, s, -OCH 3 ), 3.97 (3H, s, -OCH 3 ), 3.93(3H, s, -OCH 3 ); 13 C NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ (C- 4), (C-2), (C-7), (C-9), (C- 4 ), (C-5), (C-3 ), (C-6), l23.9 (C-l ), (C-6 ), (C-5 ), (C-2 ), (C-10), (C-3), 90.6 (C-8), 60.9 (-OCH 3 ), 56.4 (-OCH 3 ), 56.2 (-OCH 3 ), 56.1 (-OCH 3 ); ESI-MS m/z: 359 [M + H] + 以上数据与文献[8] 报道数据基本一致, 因此确定为 5- 羟基 -6,7,3,4 - 四甲氧基黄酮 3,4,5,6,7,8- 六甲氧基黄酮 (7) 白色固体 ; 分子式为 C 21 H 22 O 8 ; 1 H NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ 7.55 (1H, dd, J = 8.5, 2.1 Hz, H-6 ), 7.39 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-2 ), 6.97 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-5 ), 6.59 (1H, s, H-3), 4.08 (3H, s, -OCH 3 ), 4.01 (3H, s, -OCH 3 ), 3.96 (3H, s, -OCH 3 ), 3.94 (3H, s, -OCH 3 ), 3.93 (3H 2, s, -OCH 3 ); 13 C NMR (CDCl 3, 600 MHz): δ (C-4), (C-2), (C-4 ), (C-7), (C-3 ), (C-9), (C-8), (C-5), (C-6), (C-1 ), (C-6 ), (C-10), (C-5 ), (C-2 ), (C-3), 62.2 (-OCH 3 ), 61.9 (-OCH 3 ), 61.7 (-OCH 3 ), 61.6 (-OCH 3 ), 56.0 (-OCH 3 ), 55.9 (-OCH 3 ); ESI-MS m/z: 403 [M + H] +, 425 [M +

5 270 热带亚热带植物学报第 21 卷 Na] + 以上数据与文献[5] 报道数据基本一致, 因此确定为 3,4,5,6,7,8- 六甲氧基黄酮二氢山柰酚 (8) 淡黄色粒状晶体 ; 分子式为 C 15 H 10 O 6 ; 1 H NMR (CD 3 OD, 600 MHz): δ (1H, s, -OH), 7.41 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2, 4 ), 6.91 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3, 5 ), 6.00 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 5.99 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 5.20 (1H, d, J = 11.6 Hz, H-2), 4.65 (1H, d, J = 11.6 Hz, H-3); 13 C NMR (CD 3 OD, 600 MHz): δ (C-4), (C- 7), (C-5), (C-9), (C-4 ), (C- 2 ), (C-1 ), (C-6 ), (C-3, 5 ), (C-10), 97.2 (C-6), 96.1 (C-8), 84.4 (C-2), 73.2 (C-3); ESI-MS m/z: 300 [M + Na] + 以上数据与文献[9] 报道的二氢山柰酚数据一致, 故确定为二氢山柰酚木犀草素 (9) 黄色针状晶体 ; 分子式为 C 15 H 10 O 6 ; 1 H NMR (CD 3 OD, 600 MHz): δ (1H, s, 5-OH), 7.41 (1H, dd, J = 2.4, 8.8 Hz, H-6 ), 7.39 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-2 ), 6.89 (1H, d, J = 4 Hz, H-5 ), 6.67 (1H, s, H-3), 6.44 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-8), 6.19 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-6); 13 C NMR (CD 3 OD, 600 MHz): δ (C-4), (C-7), (C- 2), (C-5), (C-9), (C-5), (C- 3 ), (C-1 ), (C-6 ), (C-5c), (C- 2 ), (C-10), (C-3), 98.9 (C-6), 93.7 (C-8); ESI-MS m/z: 285 [M H] 以上数据与文献 [10] 报道的数据一致, 确定为 3,4,5,7- 四羟基黄酮, 即木犀草素 3,4,5,7- 四羟基 -3- 甲氧基黄酮 (10) 黄色针状晶体 ; 分子式为 C 16 H 12 O 7 ; 1 H NMR (CD 3 OD, 600 MHz): δ 12.7 (1H, s, 5-OH), 7.54 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2 ), 7.44 (1H, dd, J = 2.4, 8.8 Hz, H-6 ), 6.90 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5 ), 6.41 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-8), 6.19 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-6), 3.77 (3H, s, 3-OCH 3 ); 13 C NMR (CD 3 OD, 600 MHz): δ (C-4), (C-7), (C-5), (C-9), (C-2), (C-4 ), (C-3 ), (C-3), (C-1 ), (C-6 ), (C-5 ), (C-2 ), (C-10), 98.6 (C-6), 93.9 (C-8), 59.7 (3-OCH 3 ); ESI-MS m/z: 315 [M H] 以上数据与文献[11] 报道的数据基本一致, 确定为 3,4,5,7- 四羟基 -3- 甲氧基黄酮芹黄素 (11) 白色无定型粉末 ; 分子式 C 15 H 10 O 5 ; 1 H NMR (CD 3 OD, 600 MHz): δ (1H, s, 5-OH), (1H, s, 7-OH), 7.92 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2,6 ), 6.92 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3,5 ), 6.77 (1H, s, H-3), 6.47 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-8), 6.18 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-6); 13 C NMR (CD 3 OD, 600 MHz): δ (C-4), (C-7), (C-2), (C- 9), (C-4 ), (C-5), (C-2 ), (C- 6 ), (C-1 ), (C-5 ), (C-3 ), (C- 10), (C-3), (C-6), 95.1 (C-8); ESI-MS m/z: [M H], [M H] 以上数据与文献 [12] 报道的数据基本一致, 确定为 4,5,7- 三羟基黄酮, 即芹黄素 1.5 抗菌活性测试 [13] 采用凹玻片孢子萌发法测定化合物对香蕉炭疽菌的抑制活性选用合适的溶剂将样品溶解, 用微量加样器吸取一定量的溶液吐温 -80 和配置好的孢子悬浮液混匀, 最终混合液中化合物的质量浓度分别为 µg ml µg ml µg ml µg ml 1 和 µg ml 1, 吸取 10 µl 混合液滴加到凹玻片上, 然后架放于带有浅层水的培养皿中, 于 28 加盖保湿培养每个处理设 4 个重复, 并设不加化合物的为空白对照培养 15 h 后于显微镜下观察孢子萌发情况, 孢子芽管长度大于孢子的短半径视为萌发计算萌发相对抑制率, 利用 SPSS 软件计算毒力回归方程以及 IC 50 值 [14] 如果在 µg ml 1 浓度时抑制率低于 50% 则不再测试其他浓度, 将化合物归为较弱活性 2 结果和讨论采用硅胶柱层析葡聚糖凝胶柱层析和 HPLC 等色谱分离手段, 分别从苦槛蓝叶片的超临界二氧化碳萃取部分和乙醇提取物正丁醇萃取分部, 分离得到 11 个化合物, 经波谱数据分析及与文献数据对比, 分别鉴定为 5,6,7,8,4 - 五甲氧基黄酮 (1), 甜橙素 (2),5,4 - 二羟基 -6,7,8,3 - 四甲氧基黄酮 (3), 4,5,7,8- 四甲氧基黄酮 (4),5- 羟基 -6,7,8,3,4 - 五甲氧基黄酮 (5),5- 羟基 -6,7,3,4 - 四甲氧基黄酮 (6), 3,4,5,6,7,8- 六甲氧基黄酮 (7), 二氢山柰酚 (8), 木犀草素 (9),3,4,5,7- 四羟基 -3- 甲氧基黄酮 (10), 芹黄素 (11) 除化合物 9 外, 其他均为首次从苦槛蓝

6 第 3 期戴航等 : 苦槛蓝叶中的黄酮类化合物 271 表 1 化合物对香蕉炭疽菌的相对抑制率 (%) Table 1 Antifungal activity (%) of compounds against Colletotrichum musae 化合物 Compound 浓度 Concentration (µg ml 1 ) 毒力回归方程 Toxicity regression equation IC 50 (µg ml 1 ) ± ± ± ± ± 0.95 Y = X ± ± ± ± ± 0.15 Y = X ± ± ± ± ± 0.00 Y = X ± ± ± ± ± ± 0.45 Y = X ± ± ± ± ± ± ± 0.31 Y = X ± ± ± ± ± 0.73 Y = X ± ± ± ± ± 0.48 Y = X ± ± ± ± ± 0.66 Y = X : 没有进行测试 -: Not test. 叶片中得到初步抗菌活性实验结果 ( 表 1) 表明, 这些化合物 4 6 和 7 的 IC 50 > µg ml 1, 化合物和 10 的 IC 50 值为 ~ µg ml 1, 而化合物和 11 的 IC 50 值均小于 µg ml 1, 这说明这些化合物均具有较为明显的抑菌活性活性测试结果表明, 低极性的黄酮类化合物的抗菌活性不强, 但有文献报道 5,6,7,8,4 - 五甲氧基黄酮 (1),5,4 - 二羟基 -6,7,8,3 - 四甲氧基黄酮 (3),4,5,7,8- 四甲氧基黄酮 (4),5- 羟基 -6,7,8,3,4 - 五甲氧基黄酮 (5),3,4,5,6,7,8- 六甲氧基黄酮 (7) 等在 8 位具有甲氧基结构的多甲氧基黄酮均具有较强的抗炎抗癌细胞活性 [15 16] ; 甜橙素 (2) 可明显抑制 AGS 胃癌细胞的增殖 [17] ; 二氢山柰酚 (8) 具有很好的抗缺氧活性 [18] 本研究结果为苦槛蓝叶中的化学成分增添了新的内容, 为苦槛蓝资源的开发利用提供了理论依据参考文献 [1] Bashari A A, Zhong G H, Hu M Y. Effects on the bioactivity of the extracts from Myoporum bontioides against imported cabbage worm (Pieris rapae) [J]. J S China Agri Univ (Nat Sci), 1999, 20(3): Bashari A A, 钟国华, 胡美英. 苦槛蓝抽提物对菜青虫生物活性的影响 [J]. 华南农业大学学报 : 自然科学版, 1999, 20(3): [2] Deng Y C, Yang Z, Yu Y Z, et al. Inhibitory activity against plant pathogenic fungi of extracts from Myoporum bontioides A. Gray and indentification of active ingredients [J]. Pest Manag Sci, 2008, 64(2): [3] Li X Z, Li C Y, Wu L X, et al. Chemical constituents from leaves of Myoporum bontioides [J]. Chin Trad Herb Drug, 2011, 42(11): 李显珍, 李春远, 吴伦秀, 等. 苦槛蓝叶化学成分研究 [J]. 中草药, 2011, 42(11): [4] He Y B, Gu W X, Pang X F. Bioactivity of several flavonoids against Plutella xylostella (L.) [J]. Chin J Trop Agri, 2003, 23(6): 19 25,63. 何衍彪, 谷文祥, 庞雄飞. 飞机草和苦槛蓝中的黄酮类提取物对小菜蛾的生物活性 [J]. 热带农业科学, 2003, 23(6): 19 25,63. [5] Nagase H, Omae N, Omori A, et al. Nobiletin and its related flavonoids with CRE-dependent transcription stimulating and neuritegenic activities [J]. Biochem Biophys Res Commun, 2005, 337(4): [6] Hamdan D, El-Readi M Z, Tahrani A, et al. Chemical composition and biological activity of Citrus jambhiri Lush [J]. Food Chem, 2011, 127(2): [7] Machida K, Osawa K. On the flavonoid constituents from the peels of Citrus hassaku Hort. ex Tanaka [J]. Chem Pharm Bull, 1989, 37(4): [8] Song F J, Gao J, Yang G Z, et al. Studies on the chemical constituents of Rabdosia rubescens Hemsl. in the western part of

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2001,30(1):1-4 Subtropical Plant Science 2015,44(3): 188~192. 三种植物生长调节剂对楝叶吴茱萸光合作用的影响董奇妤 1, 张亮 2, 张亨 3, 王婧 1, 陈红跃 (1. 华南农业大学林学与风景园林学院, 广东广州 510642;2. 广东省林业调查规划院,

第 3 期戴航等 : 苦槛蓝叶中的黄酮类化合物 267 [3] 分, 其中黄酮类化合物含量较多 李显珍等报道 了从苦槛蓝叶中分离得到的 6 个黄酮类化合物, 其 中 (2R,3R)-3,5,7-trihydroxy-flavanone-3-acetate 对稻 瘟菌 (Pyricularia sp.

第 3 期戴航等 : 苦槛蓝叶中的黄酮类化合物 267 [3] 分, 其中黄酮类化合物含量较多李显珍等报道了从苦槛蓝叶中分离得到的 6 个黄酮类化合物, 其中 (2R,3R)-3,5,7-trihydroxy-flavanone-3-acetate 对稻瘟菌 (Pyricularia sp.