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- 响监 霍
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1 为什么做氨基酸脱羧酶试验需要做对照管 无锡赛维商贸有限公司 氨基酸脱羧酶试验在微生物生化检测中是一项很重要的试验, 我们在做氨基酸脱羧酶试 验时, 不仅要接种试验管还同时要接种氨基酸脱羧酶对照管 因为氨基酸脱羧酶试验管中含有氨基酸和可以发酵的糖类 ( 葡萄糖 ) 某些细菌在酸性 厌氧环境, 且有氨基酸底物存在的情况下能诱导产生氨基酸脱羧酶, 使氨基酸脱羧产生尸胺, 导致培养基变紫, 而不产生氨基酸脱羧酶的细菌只能代谢葡萄糖产酸, 使培养基变黄 而氨基酸对照管中只含有可以发酵的糖类, 不含有氨基酸底物 所以细菌只能代谢葡萄 糖产酸, 使培养基变黄 氨基酸脱羧酶对照管的作用主要是判断待检菌是否生长, 且是否利 用葡萄糖 如果细菌本身不利用葡萄糖, 对照管都是紫色的情况下, 试验管紫色就无法判断是否细 菌产生了氨基酸脱羧酶, 使得培养基变紫 实验过程中如果我们遇到对照管紫色, 但有明显生长迹象的情况时, 说明待检菌可能不 发酵葡萄糖, 如假单胞菌, 这种菌在检验过程中是有可能出现的 遇到这种情况, 我们可以 结合三糖铁的结果, 并补做氧化酶试验, 以此排除假单胞菌属 假单胞菌的氧化酶试验为阳 性 神奈川实验 (Kanagawa phenomenon) 副溶血性弧菌有 845 个血清型, 主要通过十三种耐热的菌体抗原 ( 即 O 抗原 ) 鉴定, 而七种不耐热的包膜抗原 ( 即 K 抗原 ) 可以用来辅助鉴定 其致病力可用神奈川试验来区分 该菌能使人或兔的红细胞发生溶血, 在琼脂培养基上出现 β 溶血环, 称为 神奈川试验 阳性 神奈川试验阳性菌的感染能力强, 多数毒性菌株为神奈川试验阳性 (K+), 多数非毒性菌株为神奈川试验阴性 (Kˉ) 引起食物中毒的副溶血性弧菌 90% 神奈川试验阳性 洗涤血红细胞方法 : 取一定量的新鲜的 (24h 以内 ) 人或兔血加入到离心管中, 加入等量的无菌生理盐水, 4 离心 15min(4000 x g) 吸出上层液体, 再加入现在所剩液体量等量的无菌生理盐水, 再次离心洗涤 重复 3 次 第 3 次结束后, 加入无菌生理盐水, 使其恢复至最初的原体积 神奈川试验 : 将测试菌株接种 3% 氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂斜面,36 ±1 培养 18h~24h 用接种针挑取培养物点种表面干燥的我妻氏血琼脂平板 每个平板上可以点种几个菌 36 ±1 培养不超过 24h, 并立即观察 阳性结果为菌落周围呈半透明的 β- 溶血环
2 霉菌酵母菌检测培养基上常见菌的区分 检测食品中霉菌酵母菌常用培养基为孟加拉红和 PDA, 两种培养基均含有氯霉素, 能够 抑制大多数细菌, 但是有少数细菌比如假单胞类细菌等具有氯霉素耐受性 所以也有可能生 长 因为标准中采用的是倾注法接种, 并且根据菌落形态分别计数霉菌和酵母菌 下面详细 介绍一下不同菌的区分方法 细菌 : 由于细胞小, 形成的菌落较小, 较薄 较透明 且有 细腻感 可产生不同色 素, 菌落可呈现五颜六色且形态多样 细菌的菌落比较稀薄, 单细胞很小, 低倍 (10 倍 ) 显 微镜下看不清, 油镜下 (100 倍物镜 ) 才能看清轮廓, 看不到细胞内部结构 酵母菌 : 由于细胞较大且不能运动, 一般菌落比细菌大 厚且透明度差 产生色素较单 一, 通常乳白色, 少数为橙红色, 个别黑色 制作水浸片可观察形态 在载片上滴一滴蒸馏 水, 以无菌操作, 用接种环挑取少许酵母菌置于载片上蒸馏水中, 取一块盖片, 小心地将盖 玻片一端与菌液接触, 然后缓慢地将盖玻片放下 ; 这样可避免产生气泡 先用低倍镜观察, 再用高倍镜观察酵母细胞的形状 大小 构造等 酵母菌的菌落比较厚, 显微镜下是椭圆形 细胞, 有的大细胞上还带着较小的芽 ( 小细胞 ),40 倍物镜下可以看到细胞中的细胞器 霉菌 : 菌落形态较大, 质地疏松, 外观干燥, 不透明, 呈现蛛网状 绒毛状 棉絮状或 毡状 ; 菌落与培养基间的联系紧密, 不易挑起, 菌落正面与反面 边缘与中心的颜色和构造 常不一致 显微镜观察时, 由于霉菌菌丝较粗大, 孢子很容易飞出, 如果放在水中观察时容 易收缩变形, 所以在制标本时不用水, 而用乳酸 - 石炭酸溶液, 使细胞不致变形, 并有杀菌 作用 显微镜下 (40 倍物镜 ) 菌丝比较粗大, 而且有横隔, 能看到细胞内部结构,10 倍物镜 就能看清菌丝的轮廓 霉菌形态观察方法简介 1 染色原理: 霉菌为真核微生物, 菌丝较粗大, 在显微镜下观察时, 菌丝皆呈管状 一些较高等的霉菌丝状管道中皆有横隔, 由横隔状菌丝隔成许多细胞, 细胞易收缩变形, 且孢子很容易分散, 所以制标本时常用乳酸石炭酸棉兰染色液 该染色液使细胞不变形, 且有防腐杀菌作用, 不易干燥, 能够保持较长时间, 溶液本身呈蓝色, 有一定的染色效果 2 观察方法: ⑴ 直接制片观察法 : 在洁净载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉兰溶液, 用接种钩从菌落边
3 缘取少量带有孢子的菌丝于染色液中, 把菌丝挑散开, 然后盖上盖玻片, 注意不要产生气泡 置于显微镜下观察霉菌的形态 ⑵ 载玻片培养法 : 将霉菌载片培养物放入一定湿度的培养皿中, 并盖上一块盖玻片, 使 霉菌在一狭窄的空隙中生长, 便于显微镜下观察霉菌的特殊形态构造, 如曲霉的足细胞 分 生孢子 定囊等生长情况 ; 还可以在同一标本上观察到它们不同的生长阶段的生长 发育状 况 ⑶ 玻璃纸透析培养法 : 利用玻璃纸的半透膜特性及透光性, 将霉菌生长在覆盖于琼脂培 养基表面的玻璃纸上, 将长菌的玻璃纸取一小片, 贴放在载玻片上, 置于显微镜下观察 麦氏比浊法及麦氏比浊管配制 在临床微生物学检验中, 麦氏比浊法常用于细菌鉴定 药敏实验, 在配置菌液时大致可 判断菌液浓度的一种方法, 通常认为, 如将菌液浓度为 0.5 麦氏比浊管时, 相当于 CFU/ml, 由于方法本身就是一种估计的方法, 尽管细菌大小差异很大, 除了真菌孢 子, 细菌的差别不大, 对微生物结果不会有很大影响 但是, 标准比浊管的浓度, 是药敏实 验结果的影响因素之一 K-B 法药敏试验时接种物配制有两种方法, 第一种是肉汤增菌法 ( 对数生长法 ), 是用 接环挑取 3-5 个细菌菌落入肉汤增菌管中进行增菌 4-6 小时, 然后用生理盐水或肉汤对增菌管 中的培养物进行稀释校正使其浓度达到 0.5 麦氏比浊标准 ( 因为经过增菌培养其培养物浓度 一般都高于此标准 ) 第二种方法是直接菌落法 : 从孵育 小时的非选择性培养基上, 挑 取 3-5 菌落, 直接用肉汤或盐制成悬液作为接种, 然后将浊度调整至 0.5 麦氏比浊标准 此法 是检测苛养菌 ( 如嗜血杆菌 淋病奈瑟菌和链球菌 ) 和潜在的对甲氧西林耐药的葡萄球菌的 推荐方法, 也是微生物进行生化鉴定前常用的方法 0.5 麦氏比浊管配制方法 : (1)0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2. 2H2O) 0.5ml 0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml (2) 将二液混合, 按每管 4-6mL 将硫酸钡悬液分装于带悬盖的试管中, 试管尺寸应与 培养或稀释接种菌所用的试管一致 应密封并贮存于室温避光处 (3) 每次使用前, 应将浊度标准管置于旋转混匀器上剧烈振动, 目测其外观浊度应均 匀一致 若有大颗粒出现, 此标准管应更换 (4) 使用前核实其正确浓度, 每个月都应证实或更换 浊度标准的正确浓度应使用分 光光度计测定吸光度核实 该分光光度计光径为 1cm, 并配有合适的比色杯 0.5 号麦氏标准 管在 625nm 处的吸光度值应为
4 (5) 应用时, 可目测或使用比浊仪即可 用肉眼, 找张白纸, 打上平行直线, 然后看 ( 如图示, 利用光在不同浓度液体折射不同 ) 空调冷却水军团菌检测方法简介 随着空调的使用率的大大增加, 空调冷却水中的隐形杀手 -- 军团菌渐渐也被重视起来 由军团菌引起的军团菌病是非典型肺炎的重要组成部分, 是一种暴发流行或散发流行的严重呼吸道传染病, 世人第一次认识军团病是在 1976 年 7 月, 那时美国费城召开了第 56 届美国退伍军人年会, 与会者中有 182 人发生肺炎, 事后在病人肺组织中接种分离出一种致病菌, 这种病菌来自旅馆的空调系统, 以后医学界将这种病菌命名为嗜肺军团菌, 把因这种病菌引起的疾病称为军团病 军团菌简介 伯杰氏细菌分类手册 1994 年第 9 版中, 对军团菌 (Legionella) 作了如下说明 : 杆形菌, 宽度 0.3~0.9μm, 长度为 2~20μm 以上, 不形成内孢子或小囊, 无荚膜, 不产酸, 革兰氏染色阴性, 借一两根或以上直的或弯曲的极鞭毛和侧鞭毛可以运动, 偶尔可见无动力菌株 需氧, 生长时需 L- 半胱氨酸和铁盐 氧化酶阴性或弱阳性, 硝酸盐还原试验阴性, 尿素酶阴性, 液化明胶 细胞壁中有支链脂肪酸 可从有机化合物中摄取营养, 可利用氨基酸作为能量来源 不发酵碳水化合物, 亦不能使之氧化 可从地表水 泥土和热水及污染的湖水和河水中分离到本菌, 但从土壤和动物中分离尚不了解, 对人有致病性,DNA 的 G+Cmol% 含量为 39~43%(TmBd) 军团菌属有 41 个种,61 个血清型 侵肺军团菌 (Legionella pneumophila, LP) 有 15 个血清型, 是引起军团菌病的主要菌型 ( 占 80% 以上 ) 军团菌病是一种急性呼吸道传染病, 临床类型目前至少有肺炎型与庞蒂阿克热型 本病主要为呼吸道飞沫 ( 气溶胶 ) 传播 目前尚无证据表明感染者 病人或感染动物作为本病的传染源, 通常把传染本菌的水源 ( 天然水 人工管道水源 冷却塔 冷热管道系统水等 ) 作为传染源
5 一 细菌培养和鉴定 实验室检测方法 无锡赛维商贸有限公司 1. 样品处理 : 水样中的菌经过滤膜或离心浓缩, 为减少杂菌生长, 浓缩样品的一部分 经酸处理与热处理, 一部分不做处理, 将上述处理与未处理样品分别接种 GVPC 琼脂平板, 在 5%CO2,35~36 环境下培养 7 一 l0d 2. 初步鉴定 : 军团菌的菌落颜色多样, 通常呈白色 灰色 蓝色或紫色, 也能显深褐 色 灰绿色 深红色 军团菌在 GVPC 选择性平板上可形成直径 1~2mm 灰白色 圆形 表面光滑 边缘清楚整齐的菌落, 在紫外灯下, 有荧光, 为革兰氏阴性杆菌 在选择性平板 上挑选可疑菌落, 接种于 BCYE 琼脂平板和 BCYE-Cys 平板进行传代培养,36±1 培养至 少 2d, 凡在前者上生长而在后者上不生长的即为军团菌 3. 生化鉴定 : 常用的生化实验有糖发酵试验 淀粉水解试验 触酶试验 明胶液化试 验 内酰胺酶试验 硝酸盐还原试验 尿素酶试验 马尿酸盐水解试验等 二 分型鉴定 : 采用军团菌乳胶凝集试剂盒进行分型诊断, 我国常见的型别有 Lp1 Lp3 Lp5 Lp6 Lp9 等 三 PCR 法检测菌株特异系性基因 : 主要检测基因种类为军团菌属特异基因 5sRNA 16sRNA 和嗜肺军团菌种特异基因 Mip 基因 四 其他检测方法 : 常用的方法有放射免疫法 (R1A) 酶免疫法 (EIA) 直接荧光抗体法 (DFA) 免疫层析法 (ICA) 等多种方法 ; 此外, 核酸探针技术是近几年发展起来的一种快速诊断军团 菌病原体的方法, 根据军团菌的核酸序列合成一段寡核苷酸, 用同位素标记, 并与被检测核 酸分子杂交, 通过检测放射性信号, 确定军团菌感染 这种方法具有特异性高, 快速等优点 军团菌是一种水中的细菌, 不仅存在于自然界水中, 也存在于污染的水塔水 热水 矿 泉水中 随着我国人民生活水平的提高, 尤其是大型建筑物, 如宾馆 医院公共设施等中央 空调系统的使用日益普遍, 军团病爆发流行的危险性也日益增加, 因此了解和掌握空调冷却 水中军团菌的检测方法, 在预防和控制军团病的发生与流行中有十分重要的作用 军团菌的检验主要可以参考以下标准 : WS 公共场所集中空调通风系统卫生规范 ( 见卫通 号 ) ISO Water quality-detection and enumeration of Legionella ( 水质嗜肺军团菌的检测和计数 ) 菌种活化方法 首先确定所活化的菌株为 ATCC 菌株还是国产菌株, 如果是 ATCC 菌株则按照其说明书的方法进行, 说明书可在陆桥公司网站上下载 ; 如果是国产菌株, 可按以下方法进行活化 1 用浸过 75% 酒精的脱脂棉擦净菌种管壁 2 用锉刀或镊子敲下已开裂的菌种管的顶端 3 用无菌吸管吸取 0.3mL-0.4mL 适宜的液体培养基, 滴入菌种管内, 轻轻振荡, 使冻干菌体溶解成悬浮状液体 (1) 一般细菌建议使用胰蛋白胨大豆肉汤 (TSB) 脑心浸液肉汤(BHI) 等高营养的培养基 (2) 嗜盐性弧菌建议使用含 3%-3.5% 氯化钠的胰蛋白胨大豆肉汤
6 (3) 乳酸菌建议使用 MRS 肉汤 (4) 真菌建议使用真菌培养基 4 用无菌接种环取菌悬液划线接种于适宜培养基的平板或斜面上, 剩余的菌悬液倒入 液体培养基中 (1) 一般细菌建议使用胰蛋白胨大豆琼脂 (TSA) 平板计数琼脂 (PCA) 营养琼脂 (NA) 等培养基 固体等 (2) 嗜盐性弧菌建议使用含 3%-3.5% 氯化钠的胰蛋白胨大豆琼脂 3%-3.5% 氯化钠的半 (3) 乳酸菌建议使用 MRS 琼脂 (4) 真菌建议使用马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA) 孟加拉红培养基等 5 接种后的固体和液体培养基在菌株适宜的生长条件下培养 注 :1 分别接种固体和液体的目的是为了增加菌株活化的效率 2 冻干菌株生长延迟期较长, 需要连续活化两代才能使用 定量检测方法 ( 平板法 ) 注意事项 食品微生物学检验可分为定量检验和定性检验两类, 其中定量检验又以平板法和 MPN 法两种最为常见 本文以平板法为例, 简单介绍下定量检测中一些常见注意事项, 以供大家 在日常工作中参考 1 均质效果对试验结果的影响 均质过程是将样品与稀释液混匀的过程, 如果均质效 果不好就会使样品中的微生物不能充分混匀到稀释液中, 那么试验结果就不能体现样品的真 实情况 一般试验数值都小于真实值 目前国标推荐的均质方式是旋转刀均质器的均质杯法 和拍击式均质器的均质袋法 大家可以根据自己样品的实际情况进行选择 2 十倍梯度稀释对试验结果的影响 十倍梯度稀释对定量检测方法的影响是很大的, 因为它可以将试验误差成倍的放大 比如 10-1 到 10-2 稀释时, 如果只取了 0.98mL, 那么到 10-5 时, 误差就被放大了 1000 倍 所以在这步操作时一定注意取液量要准确, 并且每次稀释后, 要将稀释液混合均匀, 再进行下一步稀释 3 平板接种的注意事项 无论是涂布还是倾注接种, 都要让微生物分布均匀, 且尽量 靠近中间, 远离边缘, 因为菌落生长在边缘时, 不容易读取, 且易连成片 在涂布时, 要在 平板中间加入稀释液开始涂布, 尽量不要将液体涂布到边缘 在倾注时, 也要将稀释液加到 平板中间, 然后倾注培养基, 并轻轻旋转平板, 使之混合均匀
7 维生素检测过程中注意事项 无锡赛维商贸有限公司 1 器皿洁净度: 试验的使用器皿最好专用, 清洗时不要使用洗洁精 表面活性剂的残留会促进菌株的生长 如有样品残留, 煮沸清洗 试验中用到的玻璃器皿均应洁净无残留 可使用 0.05mol/L 的盐酸溶液浸泡 30-60min, 再用蒸馏水冲洗干净 最后接触到菌株的玻璃器皿要先用蒸馏水煮沸 30min, 去除油脂, 然后再用 0.05mol/L 的盐酸溶液浸泡 30-60min, 最后用蒸馏水冲洗干净 清洗后的器皿可放置于烘箱中烘干挥发残余的稀盐残留会抑制菌株的生长 2 标准液配制: (1) 标准储备液 : 为浓标液, 浓度计算要精确 放置于棕色试剂瓶中, 冰箱冷藏保存 保质期 :4 个月 标准储备液浓度较高, 不易混匀 溶解一定要完全, 可以提前配制, 摇匀放置几天后, 再摇匀定容 在使用之前也要充分摇匀 同时, 注意试剂的纯度进行换算 (2) 标准中间液 : 放置于棕色试剂瓶中, 冰箱冷藏保存 保质期 :1 个月 (3) 标准工作液 : 临用前配制, 使用时充分摇匀 3 培养基使用: 培养基中均不含有样品中需要检测的维生素 为了避免培养基颜色对吸光度的影响过大, 灭菌结束以后需及时从灭菌锅中取出 放置时间过长, 培养基颜色会加深 4 维生素检测过程: 为了降低误差, 可将培养基单独进行灭菌, 加有蒸馏水和标准溶液的试管单独灭菌 培养基灭菌后加入一定量的菌悬液, 混匀后再无菌定量分装于加有蒸馏水和标准溶液的试管中 ( 灭菌后的 ) 菌悬液的接种量可根据生长情况来适当加减 生化试验可疑菌纯化的目的 致病菌检测过程中, 生化试验或者初步筛选以后确证性试验以前, 一般要求将可疑菌菌落纯化与特定营养型平板上, 比如单增李斯特检验使用 TSA-YE 进行可疑菌纯化, 沙门氏菌和志贺氏菌检测使用营养琼脂进行纯化 可疑菌纯化的目有如下几点 : 一 : 根据纯化以后的平板上生长的菌落大小及形态, 可以判断挑取的可疑菌是不是单独的纯菌落, 有没有发生菌落叠加现象 二 : 生化试验一般项目较多, 选择性分离平板上的可疑菌一般都带有颜色, 无法制作菌悬液 生长较小的可疑单菌落无法满足接菌量要求, 而且不能保证每个项目接菌量相同 实
8 验结果会有差异 而纯化以后的平板上的所有菌落均来源于同一个单菌落, 有大量的菌供生 化试验使用 三 : 选择性分离平板一般都成分复杂, 并且有一定抑制性, 其中可能含有某些对个别生 化产生产生影响的物质 而用于纯化的平板都是营养型的, 不会对生化项目造成影响 单增李斯特氏菌溶血试验操作说明 溶血试验是单增李斯特氏菌检验中的重要鉴定试验, 包括普通的溶血试验 和协同溶血试验 由于溶血是区分单增李斯特氏菌和其他李斯特氏菌的重要指 标, 所以我们在此给大家列出一些注意事项, 以供大家在日常工作中参考 1 溶血试验 由于单增李斯特氏菌的溶血能力有限, 所以单增李斯特氏菌 的溶血试验不能用划线方式接菌, 而采用接种针刺种的方式接种 将羊血琼脂平 板底面划分为 个小格, 挑取纯培养的单个可疑菌落刺种到血平板上, 每格 刺种一个菌落, 并刺种阳性对照菌 ( 单增李斯特氏菌 ) 和阴性对照菌 ( 英诺克李 斯特氏菌 ), 穿刺时尽量接近底部, 但不要触到底面, 同时避免琼脂破裂 观察 结果时, 可将血平板对窗观察 单增李斯特氏菌是狭小溶血环, 一般只有菌落周 围 1mm 左右的透明溶血环, 所以一定要仔细观察 2 协同溶血试验 进行这个试验必须要有金黄色葡萄球菌和马红球菌的标 准菌株, 不然试验不能进行 在羊血琼脂上平行划线接种金葡和马红球菌, 两者 平行线保持一定距离, 挑取纯培养的单个可疑菌落垂直划线接种于平行线之间, 垂直线两端不要触及平行线 这里最重要的就是疑似菌和两个标准菌划线, 相近 但不相交 结果观察时, 单增李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌在金葡菌一侧有溶血 增强, 而伊氏李斯特氏菌在靠近马红球菌一侧有溶血增强 防止培养基成分挥发 (1) 氰化钾实验 : 生化实验滴加液体石蜡原因 氰化钾是剧毒药物, 使用时需加小心以免中毒 因此在做氰化钾实验时, 需在实验管和对 照管同时滴加液体石蜡, 滴加目的其一是为防止氰化钾挥发, 以免造成操作者中毒 ; 第二是 防止氰化钾挥发后, 致使药物浓度降低, 细菌生长, 出现假阳性 2 创造厌氧环境 (1) 氨基酸脱羧酶实验 :
9 进行氨基酸脱羧酶实验时, 在实验管和氨基酸对照管中滴加菌液后需分别向各管中滴加 2-3 滴液体石蜡, 进行液封 原因如下 : 某些菌在特定氨基酸存在情况下, 诱导产生相应氨 基酸脱羧酶, 使氨基酸脱羧, 产生一种碱性物质 尸胺, 而该物质在厌氧条件下可稳定存在, 使得培养基环境 ph 升高, 克服培养基本身的酸性环境以及葡萄糖代谢产生的酸, 从而使培 养基呈紫色 ; 而对照管中不含氨基酸, 菌株利用葡萄糖产酸, 培养基环境 ph 下降, 使得培 养基变黄 滴加液体石蜡主要目的是创造厌氧环境, 并防止酸挥发 (2) 葡萄糖利用 酚红葡萄糖利用 GB 中蜡样芽孢杆菌葡萄糖利用和 SN 中蜡样芽孢杆菌酚红葡萄糖 利用实验中, 为了测定厌氧环境下蜡样芽孢杆菌可以利用葡萄糖产酸, 因此为创造厌氧环境, 须在接菌后滴加液体石蜡进行液封 (3)O/F 实验 SN 中副溶血性弧菌检测, 对葡萄糖的发酵型和氧化型的代谢作用, 在实验 时向其中一只管滴加石蜡隔绝氧气, 另一只不滴加 ; 发酵型菌株在两只管中均发酵产酸 ; 而 氧化型只在未滴加石蜡的管中发酵产酸, 而在滴加石蜡的管中不生长或轻度生长, 从而区分 出发酵型和氧化型 CM304 冻干血浆用于金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验的操作说明 北京陆桥 CM304 冻干血浆, 用于金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验, 操作说明如下 : 1 在 Baird-Parker 平板上挑取可疑待测单菌落, 或将可疑菌接种营养琼脂平板上纯化, 转接至含 5mlBHI 液体培养基的试管中,36±1 培养 18-24h; 2 吸取 0.5ml 无菌水到 CM304 冻干血浆西林瓶中, 摇匀使之溶解均匀, 再加入上述新鲜 BHI 培养物 ml, 混合均匀后放置 36±1 培养 3 间隔每 0.5h 观察一次结果, 直至 6h 结束, 若出现凝固 ( 凝固体积大于原体积一半 ) 即待测菌血浆凝固酶为阳性, 否则为阴性 注意 : 测试时须同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的新鲜肉汤培养物作为 对照 ( 建议阳性菌株可选择金黄色葡萄球菌标准菌 ATCC6538, 阴性菌株可选择表皮葡萄球 菌或白色葡萄球菌标准菌 )
10 沙门氏菌检验中血清学试验常见问题 无锡赛维商贸有限公司 血清学鉴定是沙门氏菌检验中的重要鉴定方法, 包括菌体抗原 (O) 鉴定 鞭毛抗原 (H) 鉴定和 Vi 抗原鉴定 由于血清学试验涉及的内容很多, 所以我们在此给大家列出几个常见 问题, 以供大家在日常工作中参考 1 沙门氏菌判定时以生化试验结果为主还是血清学试验结果为主? 我们在判定时应该以生化试验结果为主, 在生化试验的基础上进行血清学判定 有的试 验人员会直接用多价血清进行试验, 不进行生化试验, 这是绝对不可取的 因为血清学的原 理是抗原抗体结合, 非沙门氏菌的微生物也有可能带有沙门的类似抗原的 所以我们做鉴定 的时候, 必须先进行生化试验, 在生化试验的基础上进行血清学鉴定 2 血清学试验要做到什么程度? 如果我们只需要鉴定某个菌株是否属于沙门氏菌, 那只需要做 O 多价和 H 多价血清就可 以了 如果需要鉴定某个菌株具体是什么沙门氏菌, 比如是否为鼠伤寒沙门氏菌或是否为肠 炎沙门氏菌, 那就需要进行血清学分型试验, 从多价血清一直做到 O 抗原和 H 抗原的单因子, 然后参照 GB 沙门氏菌检验标准中附录 B 的表格查找对应的沙门菌名 3 O 多价血清不凝集, 就一定是 O 抗原阴性么? 我们在做 O 多价血清时, 如果没有凝集并不能直接判定为阴性, 因为我们还要考虑 Vi 抗原的影响 Vi 抗原属于 K 抗原群, 是会阻隔 O 抗原和相应抗体的结合, 所以有 Vi 抗原存 在时,O 多价血清是不会凝集的 GB 沙门氏菌检验标准中提到已知具有 Vi 抗 原的菌型有 : 伤寒沙门氏菌 丙型副伤寒沙门氏菌和都柏林沙门氏菌 因此, 我们必须去除 Vi 抗原的影响 具体方法是将待检菌做成浓菌液, 放入 100 沸水中煮沸 分钟, 目的 是破坏 Vi 抗原, 然后再挑取菌液做 O 多价血清 如果还是不凝集, 才能判定为阴性 高压灭菌锅灭菌效果的监测方法 高压锅的灭菌效果关系到最终试验结果的成败, 因此, 实验室要定期对高压锅的灭菌效果进 行监测, 目前监测的方法主要有以下 3 种 : 1 化学指示卡 化学指示卡只能监测灭菌锅的灭菌温度, 并不能准确监测灭菌时间, 通过颜色变化来达 到监测效果 标识 优点是使用方便快捷, 缺点是不能准确监测灭菌时间 如果高压锅使用的频率较高, 建议每次都在需要灭菌的的材料外侧使用化学指示卡作为 2 留点温度计 留点温度计标化合格后方可用于验证试验 检测前, 需将温度计的水银柱甩至 40 以下 每次监测后留点温度计的温差应存 l 之间, 则说明灭菌器内的温度分布是均匀的 如果高压锅使用的频率较高, 建议每个月用留点温度计对高压锅灭菌效果进行监测 3 生物指示剂 生物指示剂是一类特殊的活微生物制品, 可用于确认灭菌设备的性能, 灭菌程序的验证, 生产过程灭菌效果的监控等 1) 按结构分可分为片状生物指示剂和自含式生物指示剂 ; 一般来说都是用的自含式的
11 多, 就是里面有菌片, 外面是密封的安瓿 2) 按培养时间可分为通用型生物指示剂和快速型生物指示剂 通用型生物指示剂根据芽孢复苏后指示菌种新陈代谢引起培养液 ph 值改变, 通过酸碱指示剂变色来进行判读, 时间一般在 24 或 48 小时以上 ; 而快速型生物指示剂根据芽孢复苏后的酶促反应, 通过荧光进行判读, 时间一般为 3-4 小时 同时国外正在研发更加快速的生物指示剂, 有望在 1 小时之内得出结果 生物指示剂也是 GB 消毒与灭菌效果的评价方法与标准 中推荐使用的压力蒸汽灭菌效果的监测方法 优点是能够准确监测灭菌温度和时间, 缺点是所需时间较长 建议每个季度用生物指示剂进行高压锅灭菌效果的监测 厌氧培养方法 2012 版食品安全国家标准颁布以后, 志贺氏菌的前增菌培养方法由原来的需氧培养变为厌氧培养 所以, 厌氧装置成为每个实验室的必需品 一般来说厌氧环境的营造有三种方法 一 : 厌氧培养箱占地面积大, 需要连接气瓶 可处理的样品量比较大 设备成本高, 消耗气体成本也比较高 二 : 厌氧工作站 : 占地面积大, 需要连接气瓶 可处理的样品量比较大 操作不太方便 设备成本高, 消耗气体成本也比较高 三 : 厌氧罐 厌氧盒和立式培养袋 : 操作方便, 节约空间, 可处理样品量较小 成本较低, 无需连接气瓶, 加厌氧产气袋即可! 客户可根据自己的检测样品量来选择厌氧产品 目前比较推崇的方法是直接使用厌氧罐 厌氧盒和立式培养袋 操作起来简单方便 现将使用方法总结如下 : 由于志贺氏菌前增菌是 225mL 每一份样品, 如果增菌液在三角瓶中再厌氧培养的话, 占用的空间太大, 用厌氧盒子和罐子不太现实 所以建议客户将增菌液转移到均质袋中, 将气体尽量排净, 松扎袋口, 排布好以后进行培养 这样每个 2.5L 的厌氧容器大约可以培养 4-5 个样品,7L 的厌氧容器大约可以培养 8-10 个样品 对于志贺氏菌检测量小的实验室来说, 完全可以满足要求 如果样品量大的话也可以买 10 个 / 包的立式厌氧培养袋, 价格便宜并且节约空间
12 灭菌后小倒管内留有气泡原因及解决办法 大肠菌群 大肠杆菌检测时, 所用培养基 LST BGLB EC 肉汤等这些需要用小倒管 ( 杜 氏管 ) 考察产气的培养基, 灭菌后, 偶尔会有小气泡留在小倒管内, 导致培养基不能使用 重复灭菌不仅费时, 更重要的是会破坏培养基的有效成分 为了避免这类问题的发生, 我公 司实验室根据实验经验, 做出以下几种可能原因分析 : 原因一 : 高温高压灭菌锅工作压力不够, 使气体不能完全排出 高压锅在灭菌过程中产生的最大压力不够, 不能将小倒管内的气体挤出, 导致灭菌后任 留有小气泡 此外, 高温高压灭菌锅若是温度上升缓慢或者达不到灭菌温度, 也会出现类似 现象 解决办法 : 使用检查灭菌效果的用品 - 压力蒸汽灭菌指示卡, 对高温高压灭菌锅的灭菌 情况进行监测 原因二 : 试管塞塞得太紧 在灭菌时, 试管塞塞得太紧 ( 有些硅胶塞与试管不配套 ) 会导致试管内压力与灭菌锅内 压力不一致 当灭菌锅升温升压时, 锅内压力会大于试管内压力, 试管内压力不够, 不能将 小倒管内气体排尽, 就留有气泡 ; 当灭菌锅降温降压时, 锅内压力小于管内压力, 可能会使 试管塞和培养基崩出, 培养基报废 解决办法 : 改用塑料帽 不锈钢管帽, 或者与试管相匹配的硅胶塞 原因三 : 小倒管口太小 小倒管在加热加压后, 一方面液体培养基要进入小倒管, 另一方面小倒管内部的空气要 被排出, 如果小倒管管口太小, 液体不容易进去, 里面的空气不容易被排出, 就会导致有小 气泡生成 解决办法 : 改用开口比较大的倒管 以上提供几种可能形成气泡的主要原因, 还有几点建议 : 1. 可以在高压锅压力降下来后, 温度不太高的时候将培养基从锅中拿出, 迅速放在冷水 中, 急冷, 注意要使冷水高度超过试管中液面高度 利用热胀冷缩的原理, 可以使小倒管中 气泡排出 2. 若使用非全自动高温高压灭菌锅 ( 此类锅一般需要在 100 手动关闭放气阀 ), 则不要 在锅刚达到 100 时就关闭放气阀, 可以让高压锅在 100 时多排一会儿热气, 这样有助于小 倒管中气体排出 此外, 尽量不要采用将灭菌后的试管颠倒或大角度倾斜的方式, 使小倒管内气体排出 此种方法可能会导致培养基通过试管口或试管塞受到污染, 或者导致试管内液体流出
13 菌落总数测定 稀释液中含有食物颗粒的食品 方法一 : 为避免这些颗粒与细菌菌落发生混淆, 可将相同稀释度的稀释液与 PCA 混合, 不培养, 放置于 4, 以便在计数时作为对照 方法二 :PCA 培养基灭菌冷却到 50, 加入 TTC(2,3,5 氯化三苯基四氮唑 ) 溶液, 使终浓度为 0.4, 培养后, 细菌菌落周围有红色晕圈, 食品颗粒无红色晕圈 可以很好的 区分菌落和食品颗粒 ( 一 ) 培养基不凝固 1 制备过程中过度加热 ; 2 低 ph 值造成培养基酸解 ; 3 称量不正确 ; 4 琼脂未完全溶解 ; 5 培养基成分未充分混匀 ( 二 )ph 值不正确 1 制备过程中过度加热 ; 2 水质不佳 ; 3 外部化学物质污染 ; 4 测定 ph 值时温度不正确 ; 5 ph 计未正确校准 ; 6 脱水培养基质量差. ( 三 ) 颜色异常 1 制备过程中过度加热 ; 2 水质不佳 ; 3 ph 不正确 ; 4 外来污染 ; 5 脱水培养基质量差 ( 四 ) 产生沉淀 1 制备过程中过度加热 ; 2 水质不佳 ; 3 脱水培养基质量差 ; 4 ph 值未正确控制 ; 培养基使用过程中常见问题及原因分析
14 5 原料中的杂质 ( 五 ) 培养基出现抑制 / 低的生长率 1 制备过程中过度加热; 2 脱水培养基质量差; 3 水质不佳; 4 使用成分不正确, 如 : 成分称量不准, 添加剂浓度不正确 ; 5 制备容器或水中的有毒残留物 ( 六 ) 选择性差 1 制备过程中过度加热; 2 脱水培养基质量差; 3 配方使用不对; 4 添加成分的加入不正确; 例 : 加入添加成分时培养基过热或添加浓度错误 ; 5 添加剂污染 ( 七 ) 污染 1 不适当的灭菌; 2 无菌操作技术存在问题; 3 添加剂污染 产气荚膜梭菌简介 生物学特征产气荚膜梭菌是人类气性坏疽的主要病原菌 1892 年, 美国病理学家 W.H. 韦尔奇等自一尸体分出本菌, 因而又称韦氏梭菌 菌体较大, 大小为 (0.9~1.3) (3.0~9.0) 微米, 无鞭毛, 有荚膜 芽孢椭圆形, 位于偏端 专性厌氧 菌落直径 2~5 毫米, 血琼脂平板上有溶血圈 糖发酵能力强, 产酸产气 本菌的特征之一是在牛乳培养基中呈暴烈发酵现象 DNA 中的 G+C 克分子含量为 24~27% 本菌广泛存在于土壤 人和动物的肠道以及动物和人类的粪便中, 会散发臭味, 常因深部创伤而感染 形态与染色为革兰阳菌粗短大杆菌, 大小 (1~1.5)μm (3~5)μm 两端钝圆, 单个或成双排列, 偶见链状 芽胞椭圆形, 位于菌体中央或次极端, 芽胞直径不大于菌体, 在一般培养时不易形成芽胞, 在无糖培养基中有利于形成芽胞 在机体内可产生明显的荚膜, 无鞭毛, 不能运动
15 培养特征本菌虽属厌氧性细菌, 但对厌氧程度的要求并不太严, 甚至在 EH= mv 的环境内也能生长 在普通培养基上能生长, 若加葡萄糖, 血液, 则生长更好 生长适宜温度为 37-47, 多认为 为最宜本菌生长和繁殖速度极快, 在适宜条件下增代时间仅 8min, 可利用高温快速培养法, 对本菌进行选择分离, 如在 45 下, 每培养 3-4 小时传种 1 次, 即可较易获得纯培养, 在深层葡萄糖琼脂中大量产气, 致使琼脂破碎 在庖肉培养基中培养数小时即可见到生长, 产生大量气体, 肉渣或肉块变为略带粉色, 但不被消化 在普通琼脂平板上培养 15 小时左右可见到菌落, 培养 24 小时菌落直径 2~4mm, 圆形 凸起 光滑 半透明 边缘整齐 无迁徙生长现象 在血平板上, 多数菌株有双层溶血环, 内环完全溶血, 是由于 θ 毒素的作用 ; 外环不完全溶血则是由 α 毒素所致 在牛奶培养基中能分解乳糖产酸, 是酪蛋白凝固, 同时产生大量气体, 将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状, 并将液面上的凡士林层向上推挤, 甚至冲开管口棉塞, 气势凶猛, 称为 汹涌发酵 (stormy fermentation), 是此菌的特征 生化特性所有型菌株均能发酵葡萄糖 麦芽糖 乳糖和蔗糖, 产酸产气 不发酵甘露醇或水杨苷 ; 液化明胶, 产生 H 2 S, 不能消化已凝固的蛋白质和血清, 吲哚阴性 主要代谢产物为乙酸和丁酸, 有时也形成丁醇 分型根据本菌产生外毒素种类之不同, 可将产气夹膜梭菌分成 A B C D E5 个毒素型 5 型中对人治病的主要是 A 型和 C 型,A 型最常见, 引起气性坏疽和胃肠炎型食物中毒 ;C 型能引起坏死性肠炎 致病条件致病条件与全国各地破伤风梭菌相似 产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素, 又有多种侵袭性酶, 并有荚膜, 构成其强大的侵袭力, 引起感染致病 毒素的毒性虽不如肉毒毒素和破伤风毒素强, 但种类多, 外毒素有 α β γ δ ε η θ ι κ λ μ ν 等 12 种, 和具有毒性作用的多种酶, 如卵磷脂酶 纤维蛋白酶 透明质酸酶 胶原酶和 DNA 酶等, 构成强大的侵袭力 根据细菌产生外毒素的种类差别, 可将产气荚膜梭菌分成 a b c d e 5 个型 对人致病的主要是 a 型, 引起气性坏疽和食物中毒 c 型则引起坏死性肠炎 在各种毒素和酶中, 以 α 毒素最为重要,α 毒素是一种卵磷脂酶, 能分解卵磷脂, 人和动物的细胞膜是磷脂和蛋白质的复合物, 可被卵磷脂酶所破坏, 故 α 毒素能损伤多种细胞的细胞膜, 引
16 起溶血 组织坏死, 血管内皮细胞损伤, 使血管通透性增高, 造成水肿 此外,θ 毒素有溶 血和破坏白血球的作用, 胶原酶能分解肌肉和皮下的胶原组织, 使组织崩解, 透明质酸酶能 分解细胞间质透明质酸, 有利于病变扩散 本菌能引起人类多种疾病, 其中最重要的是气性 坏疽 GB 食品微生物学检验四项新标准颁布 2012 年 7 月 17 日即将颁布 GB 四项新标准, 分别为 : GB 志贺氏菌检验 ; GB 产气荚膜梭菌检验 ; GB 双歧杆菌的鉴定 ; GB 大肠埃希氏菌计数 新标准从培养基配方和检验方法 计数方法角度均有变化, 我公司同时根据新颁布的国家标准即将推出相应新产品 GB 志贺氏菌检验产品名称新增产品应用原有产品应用 XLD 琼脂 麦康凯琼脂 志贺氏菌生化鉴定套装 CM908B CM219A S006A (15 项生化 ) 2012 版国标志贺氏菌选择性划线分离 2012 版国标志贺氏菌选择性划线分离 2012 版国标志贺氏菌初步生化 进一步生化及附加生化实验测试 CM219 CM908 CM908A S006 (12 项生化 ) 用于 GB FDA ISO 沙门氏菌和 GB2003 志贺氏菌选择分离 CM908 用于 GB 肠道致病菌选择分离 ; CM908A 用于 2010 药典大肠菌群 大肠杆菌 沙门菌选择性分离 2003 版国标志贺氏菌生化实验测试, 含 12 项生化, 其中葡萄糖半固体 氰化钾及氰化钾对照这两项新国标已去除
17 GB 产气荚膜梭菌检验 测试步骤 2003 版国标 2012 版国标 亚硫酸盐 - 多粘菌素 - 磺胺嘧啶琼脂 (SPS): CM140+P-118 用于 2003 版国标产气荚膜梭菌平板分离计数 平板计数 纯化增菌 生化实验 用于 2003 版国标产气荚膜梭菌平板分离计数 用于 2012 版国标 SN 产气荚膜梭菌平板分离计数 液体硫乙醇酸盐培养基 (FTG)CM801 液体硫乙醇酸盐培养基 (FT)CM801 名称改变 用于产气荚膜梭菌的培养 (GB SN); 也用于 2010 药典中药品 生物制品的无菌检验 ( 硫乙醇酸盐流体培养基 ) 卵黄琼脂培养基 : CM606+50% 卵黄液用于 GB 肉毒梭菌和 2003 版产气荚膜梭菌分离培养 ; 也用于 GB 酸性罐头的商业无菌检验 乳糖 - 明胶培养基 : M034 用于 2012 版国标产气荚膜梭菌生化实验 金黄色葡萄球菌简介 金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus ) 是人类的一种重要病原菌隶属于葡萄球菌属, 有嗜肉菌的别称, 是革兰氏阳性菌的代表, 可引起许多严重感染 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力, 对磺胺类药物敏感性低, 但对青霉素 红霉素等高度敏感 对碱性染料敏感, 十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长 而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量, 卫生部于 2011 年 11 月 24 日公布食品安全国家标准 速冻面米制品, 允许金葡菌限量存在 形态与染色革兰氏染色阳性球菌, 无芽胞 无鞭毛大多数无荚膜 培养特性金黄色葡萄球菌营养要求不高, 在普通培养基上生长良好, 需氧或兼性厌氧, 最适生长温度 37 C, 最适生长干燥环境下可存活数周 平板上菌落厚 有光泽 圆形凸起, 直径 μm 血平板菌落周围形成透明的溶血环 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性, 可在 10-15%NaCl 肉汤中生长 生化反应金黄色葡萄球菌可分解葡萄糖麦芽糖乳糖蔗糖, 产酸不产气 甲基红反应阳 性,VP 反应弱阳性 许多菌株可分解精氨酸, 水解尿素, 还原硝酸盐, 液化明胶
18 沙门氏菌简介 简介沙门氏菌属属肠杆菌科, 革兰氏阴性肠道杆菌 在 ANTIGENIC FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS (2007 9th edition) 中已公布了 2579 个血清型 按其抗原成分, 可分为甲 乙 丙 丁 戊等基本菌组 其中与人体疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌, 乙组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌, 丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌, 丁组的伤寒杆菌和肠炎杆菌等 除伤寒杆菌 副伤寒甲杆菌和副伤寒乙杆菌引起人类的疾病外, 大多数仅能引起家畜 鼠类和禽类等动物的疾病, 但有时也可通过食物污染而引起食物中毒 沙门氏菌菌体大小为 (0.6~0.9) (1~3) 微米, 无芽胞, 一般无荚膜, 除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外, 大多具有周身鞭毛 营养要求不高, 分离培养常采用肠道选择鉴别培养基 生化反应对本属菌的鉴别具有重要参考意义 不液化明胶, 不分解尿素, 不产生吲哚, 不发酵乳糖和蔗糖, 能发酵葡萄糖 甘露醇 麦芽糖和卫芽糖, 大多产酸产气, 少数只产酸不产气 VP 试验阴性, 有赖氨酸脱羧酶 DNA 的 G+C 含量为 50~53% 对热抵抗力不强, 在 60,15 分钟可被杀死 在水中存活 2~3 周 在 5% 的石炭酸中,5 分钟死亡 培养特性 1) 需氧及兼性厌氧菌 2) 在普通琼脂培养基上生长良好, 培养 24h 后, 形成中等大小 圆形 表面光滑 无色半透明 边缘整齐的菌落, 其菌落特征亦与大肠杆菌相似 ( 无粪臭味 ) 3) 鉴别培养基 ( 麦康凯 SS 伊红美蓝) 4) 三糖铁琼脂斜面 : 斜面为红色, 底部变黑并产气 生化特性 1) 发酵葡萄糖, 麦芽糖, 甘露醇和山梨醇产气 ; 2) 不发酵乳糖 蔗糖和侧金盏花醇 ; 3) 色氨酸反映阴性 V-P 反应阴性 ; 4) 不水解尿素和对苯丙氨酸不脱氨 伤寒沙门氏菌 鸡伤寒沙门氏菌及一部分鸡白痢沙门氏菌发酵糖不产气, 大多数鸡白痢沙门氏菌不发酵麦芽糖 ; 除鸡白痢沙门氏菌 猪伤寒沙门氏菌 甲型副伤寒沙门氏菌 伤寒沙门氏菌和仙台沙门氏菌等外, 均能利用枸橼酸盐 血清学特性沙门氏菌具有复杂的抗原结构, 一般沙门氏菌具有菌体 (O) 抗原 鞭毛 (H) 抗原和表面抗原 ( 荚膜或包膜抗原 ) 三种抗原 O 抗原存在于菌体细胞壁最外层, 化学成分为类脂 - 多糖 - 多肽复合物, 由多糖决定其特
19 异性 O 抗原耐热 醇和酸,100~121 加热 2.5h 用乙醇或盐酸处理而不失去抗原性, 因 此菌体抗原已经被公认为沙门氏菌血清型分型的基础 一种菌体有一种或多种不同的 O 抗原, 沙门氏菌的 O 抗原共有 65 种, 以阿拉伯数字 表示 主要抗原 :O 抗原为某一菌群特有而其他菌群不具有 如 : 等 次要抗原 :O 抗原为几个菌群共有 如 : 等 H 抗原存在于鞭毛之中, 为蛋白质, 由肽链中氨基酸的排列顺序及空间构型决定其特异 性 不耐热, 经加热和用乙醇及碱处理易变性 H 抗原常有两相的变异 第一相为特异相, 用小写英文字母表示, 如 :a b I e h 等 ; 第二相为非特异相, 用阿拉伯数字表示, 如 : 等, 但也有少数菌含有第一相中的抗原 e n x 等成分 Vi 抗原为 O 抗原表面的荚膜抗原 具有该抗原的细菌, 由于可阻止 O 抗原与抗体结合, 因此不被相应的 O 血清凝集 60 加热处理或石炭酸处理, 虽然该抗原不被灭活, 而已从 菌体表面脱落, 游离于液体中, 从而暴露出 O 抗原, 可被 O 血清凝集 要进行 O 凝集反 应, 必须先洗掉 Vi 抗原 方法 1 芽孢染色法简介 (1) 将培养 24 小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌, 作涂片 干燥 固定 (2) 滴加 3 5 滴孔雀绿染液于已固定的涂片上 (3) 用木夹夹住载玻片在火焰上加热, 使染液冒蒸汽但勿沸腾, 切忌使染液蒸干, 必要时 可添加少许染液 加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约 4 5min 这一步也可不加热, 改用 饱和的孔雀绿水溶液 ( 约 7.6%) 染 10min (4) 倾去染液, 待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止 (5) 用番红水溶液复染 1min, 水洗 (6) 待干燥后, 置油镜观察, 芽孢呈绿色, 菌体呈红色 方法 2 (1) 取二支洁净的小试管, 分别加入 0.2ml 无菌水, 再往一管中加入 1-2 环的蜡状芽孢杆菌 的菌苔, 另一管中加入 1-2 环的生孢梭菌的菌苔, 两管各自充分混合成浓厚的菌悬液 (2) 在菌悬液中分别加入 0.2ml 苯酚品红溶液, 充分混合后, 于沸水浴中加热 3-5min (3) 用接种环分别取上述混合液 2-3 环于两片载玻片上, 涂薄, 风干后, 将载玻片稍倾斜于 烧杯上, 用 95% 乙醇冲洗至无红色液流出 (4) 再用自来水冲洗, 滤纸吸干 (5) 取 1-2 环黑色素溶液于涂片处, 立即展开涂薄, 自然干燥后, 油镜观察, 在淡紫灰色背
20 景的衬托下, 菌体为白色, 菌体内的芽孢为红色 革兰氏染色法简介 革兰氏染色法一般包括初染 媒染 脱色 复染等四个步骤, 具体操作方法是 : 1) 固定 : 涂片固定 2) 初染 : 滴加结晶紫染液, 染 1min, 水洗 3) 媒染 : 滴加革兰氏碘液, 作用 1min, 水洗 4) 脱色 : 滴加 95% 乙醇脱色约 15-30s, 直至染色液被洗掉, 不要过分脱色, 水洗 5) 复染 : 滴加复染液, 复染 1min, 水洗 待干 镜检 菌种保藏方法简介 保藏原则用低温 干燥和隔绝空气等方法可以使微生物代谢能力降低 因此, 采用适宜的方法对菌种进行保藏, 可以确保菌种在一定时间内存货并不被污染 不产生变异, 是菌种保持原有的活性以及生理生化遗传特性 普通菌种保藏方法 (1) 传代培养保藏法 : 将菌种接种到适宜的培养基上, 培养后, 放置于 4 冰箱中保存, 并隔一段时间进行传代 根据菌种生长不同要求, 可分为斜面培养 穿刺培养和液体培养 (2) 液体石蜡保藏法 : 在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡, 一方面可以防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡, 另一方面可以阻止氧气进入, 从而适当延长保藏时间 但此方法对于某些可以同化烃类的微生物则不宜使用 (3) 真空冷冻干燥法 : 将菌种在极低温度 (-70 ) 下快速冷冻, 然后利用减压使其中水分升华, 达到干燥的目的 微生物培养物经过该方法处理后处于一种低温 干燥 缺氧的条件下, 因而代谢处于相对静止状态, 可以保存较长时间 除不产生孢子只产生菌丝体的丝状真菌不宜采用该方法外, 其他如病毒 细菌 放线菌 酵母菌 丝状真菌等都可以采用该方法, 且效果较好 一般真空冷冻干燥需加入保护剂, 如牛乳 血清 糖类 甘油 山梨醇 氨基酸类 明胶 蛋白胨等一种或多种物质 (4) 沙土管保藏法 : 将斜面上的新鲜培养物制成菌悬液或孢子悬液, 然后将悬液无菌注入
21 已灭好菌的砂土管中, 使细胞或孢子吸附在砂子载体上, 置于干燥器中干燥后加以保存 此 方法多用于能产生孢子的微生物如霉菌 放线菌的保藏, 可保存 2 年左右 (5) 液氮保存 : 将保存的菌种用保护剂制成菌悬液密封安瓿瓶内, 迅速冷冻后, 贮藏于 -150~ -196 的液氮超低温冰箱中 该方法有些菌种可保存长达 9 年以上 此方法除适于一般微生 物的保藏外, 对于一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体 衣原体 氢细菌 难以 形成孢子的霉菌 噬菌体及动物细胞均可长期保藏, 而性状不变异 培养基灭菌简介 灭菌是指采用物理 化学等方法将物体中所有微生物包括细菌芽孢全部杀死或除去的措施, 使其永久丧失生命活动的能力 常用的灭菌方法有 : 加热灭菌 过滤除菌 辐射及化学试剂灭菌等 1 加热灭菌 加热灭菌的原理是使菌体细胞中的蛋白质在较高的温度下发生不可逆转的变性, 使得蛋白质功能丧失, 继而使菌体细胞的生命代谢活动受阻而死亡 加热灭菌的方式有两种 : 干热灭菌 ; 湿热灭菌 干热灭菌 干热灭菌包括 : 火焰灼烧法 ; 干热空气灭菌法 火焰灼烧法 : 指将物质放置于火焰上灼烧, 使微生物等有机物质化为灰烬的灭菌方法 这种方法一般应用于灭菌环 接种针 镊子等小的且耐高温的器械 干热空气灭菌法 : 指将物质放置于干热灭菌箱等设备中, 利用热空气达到杀灭或消除热原物质的方法 有些物质不便于湿热灭菌的可以采用干热灭菌的方法, 如某些干粉物质 培养皿 吸管等 干热灭菌的条件要求是温度 , 2h-3h 采用生物指示剂是枯草芽孢杆菌黑色变种 湿热灭菌 湿热灭菌主要是通过煮沸或热蒸汽杀死微生物 在同一温度下, 湿热灭菌比干热灭菌能力更强, 其原因在于蒸汽穿透力大 ; 湿热蒸汽可以释放潜热 ; 在湿热条件下菌体蛋白质更易凝固变性 高压蒸汽灭菌是热力灭菌最有效, 应用最广的灭菌方法 单纯的加压不能灭菌, 加压使水的沸点上升, 提高了蒸汽的温度, 从而达到灭菌的目的 当蒸汽压力上升到 0.1MPa 时, 蒸汽温度可达 121 在此高温下, 连续 20min 可将微生物包括细 菌芽孢全部杀死
22 2 过滤除菌 无锡赛维商贸有限公司 过滤除菌是将带菌的液体或气体通过一个过滤装置, 把真菌 细菌等微生物截留在过滤介质上, 从而达到除菌的目的 有些物质如血清 维生素 糖类 蛋白质 某些毒素等由于不耐热, 用加热等方法处理易变质, 适宜采用此方法除去微生物, 其最大优点是不破坏化学成分 滤膜孔径大小是影响过滤除菌效果的主要因素 一般细菌采用 0.2μm 孔径的滤膜 ; 病毒和噬菌体过滤除菌采用 μm 孔径的滤膜 ; 球菌和杆菌采用 0.1-1μm 孔径的滤膜 3 辐射 辐射灭菌方法主要有非 ( 致 ) 电离辐射和 ( 致 ) 电离辐射两种 紫外线照射法 : 紫外线照射是非 ( 致 ) 电离辐射, 可引起微生物细胞 DNA 同一链上相邻的两个胸腺嘧啶形成二聚体, 减弱双链间的氢键作用, 引起双链结果扭曲变形, 阻碍碱基间的正常配对, 从而导致微生物的变异或死亡 ; 如果照射引起微生物细胞 DNA 在互补的双链间形成 TT 二聚体则会影响双链的解开, 影响 DNA 复制和转录, 从而致使细胞死亡 用于灭菌的紫外线其波长 λ 在 nm 由于大多数物质都有吸收紫外线的作用, 因此, 他仅适于物品表面的灭菌处理 ( 致 ) 电离辐射法 : 相对紫外线而言,( 致 ) 电离辐射具有较强穿透力, 并使物质发生电离, 他作用的目标也是 DNA, 使得 DNA 发生断裂 降解反应, 因此妨碍 DNA 的复制转录, 从而引起细胞死亡 常用的 ( 致 ) 电离辐射与 γ 射线, 高能 X 射线 高能电子射线等 4 化学试剂灭菌 化学试剂灭菌是用一些化学物质杀死微生物, 主要用于医疗或工业器械上 常用的化学试剂有环氧乙烷 甲醛 β- 丙酸内酯 戊二醛 过氧化氢等
目录 附录 A 实验室结果统计汇总和评价... 1 附录 A1 菌落总数项目结果汇总和统计评价... 1 附录 A2 大肠菌群项目结果汇总和统计评价... 5 附录 A3 粪大肠菌群项目结果汇总和统计评价... 9 附录 A4 大肠杆菌项目结果汇总和统计评价 附录 A5 沙门氏菌项目结果
中国检验检疫科学研究院测试评价中心 CNAS PT0026 ACAS-PT030 食品微生物学能力验证计划 中期报告 2014 年 10 月 13 日 本报告是中国检科院测试评价中心 (ACAS) 组织的 ACAS-PT030 食品微生物能力验证计划的中期报告 该中期报告供实验室参考, 结果以最终的结果报告单和技术报告为准 本能力验证计划中定量检测项目按照 ISO13528 标准, 采用稳健统计技术,
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG(
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
前 言 本标准代替 GB/T 食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌检验 本标准与 GB/T 相比, 主要变化如下 : 修改了标准的中文名称 ; 修改了样品制备过程 ; 修改了培养基与试剂 ; 修改了操作步骤 ; 修改了菌数计算部分 ; 增加了附录 A
中华人民共和国国家标准 GB 4789.13 2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验 2012-05-17 发布 2012-07-17 实施 中华人民共和国卫生部 发布 前 言 本标准代替 GB/T 4789.13 2003 食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌检验 本标准与 GB/T 4789.13 2003 相比, 主要变化如下 : 修改了标准的中文名称 ; 修改了样品制备过程
材料 方法
生物技术通报 陆敏 许黎明 吴宏宇 张继恩 李国栋 黄青山 溶葡萄球菌酶 是一种能高效裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶 已有研究表明其能够有效预防和去除奶牛乳腺中葡萄球菌的感染 但该酶在牛奶中的性质研究还缺少详细的研究数据 现对重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的一些性质进行研究 检测了加入溶葡萄球菌酶后牛奶性状的变化和重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的酶活的稳定性以及溶葡萄球菌酶在牛奶中的抑 杀菌活性 结果显示 重组溶葡萄球菌酶未改变牛奶的外观性状
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
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标题
中华人民共和国国家标准 GB 4789.8 2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验 2016-08-31 发布 2017-03-01 实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 前 言 本标准代替 GB/T4789.8 2008 食品卫生微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验 本标准与 GB/T4789.8 2008 相比, 主要变化如下 : 标准名称修改为 食品安全国家标准
前 言 本标准代替 GB/T 食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验 本标准与 GB/T 相比, 主要变化如下 : 修改了标准的中英文名称 ; 修改了范围 ; 修改了设备和材料 ; 修改了培养基和试剂 ; 修改了检验程序 ; 规范了样品制备过程 ; 修改
中华人民共和国国家标准 GB4789.7 xxxx 食品安全国家标准 食品微生物学检验副溶血性弧菌检验 ( 征求意见稿 ) xxxx-xx-xx 发布 中华人民共和国卫生部 xxxx-xx-xx 实施发布 前 言 本标准代替 GB/T 4789.7-2008 食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验 本标准与 GB/T 4789.7-2008 相比, 主要变化如下 : 修改了标准的中英文名称 ; 修改了范围
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中华人民共和国国家标准 食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验 National food safety standard Food microbiological examination:enterobacter sakazakii 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施 中华人民共和国卫生部 发布 前 言 本标准代替 GB/T 4789.40-2008 食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
刘陈立 邵宗泽 以柴油为惟一碳源 从胜利油田黄河码头和厦门储油码头两个海水样品中富集得到两组柴 油降解菌 共 株细菌 株真菌 它们对柴油都有降解能力 鉴定结果表明这 株细菌 中有 株摩加夫芽孢杆菌 株施氏假单胞菌 株腊样芽孢杆菌 株反硝化产碱杆菌 株阿氏葡萄球菌 株食烷菌和 株类似很小海旋菌的未知新菌 其中 对柴油的降解能力最强 已 报道的食烷菌属中其他种的同源性最高 为 表明它是该属中的一个新种
臧晓南 张学成 王高歌 刘金姐 张晓辉 刘 滨 对两种丝状蓝藻 钝顶节旋藻和盐泽螺旋藻 在基因工程中常用作选择试剂的 种抗生素 氯霉素 氨苄青霉素 红霉素 链霉素 卡那霉素 庆大霉素和新霉素 的敏感性作比较实验 结果表明 两种蓝藻对抗生素的敏感性既有共同的特点 也有 明显的差异 它们对红霉素 氯霉素和链霉素最敏感 致死浓度分别为 和 两种蓝藻对氨苄青霉素比较敏感 的氨苄青霉素即可抑制 和 的生长 但
武洪庆 田 黎 张久明 温占波 用 方法对黄杆菌属产红色素菌株 的培养基进行了优化 首先用部分重复因子实验对培养基组分蛋白胨 酵母粉 葡萄糖及 浓度对菌株产红色素的影 响进行评价 找出主要影响因子为葡萄糖和 浓度 两者均为正影响 其他组分对色素含量的 影响不显著 第二步用最陡爬坡路径逼近最大响应区域 最后用中心组合设计及响应面分析确定主 要影响因子的最佳浓度 菌株在优化培养基中培养较初始培养基色素含量提高
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GB doc
GB4789.4-2008 沙门氏菌标准 HB0109 HB4084 HB4085 HB4086-4 HB4093-1 HB4105 HB4090-2 HB7007-1 HB7007 GB010 营养琼脂 (NA) Nutrient Agar 缓冲蛋白胨水 (BPW) Buffered Peptone Water 亚硒酸盐胱氨酸增菌液 (SC) Selenite Cystine Broth 四硫磺酸盐煌绿增菌液基础
幻灯片 1
2015 版药典微生物限度检查 生物性能室梁泽鑫 360959131@163.com 主要内容 微生物限度检查法概述非无菌产品微生物限度检查 ( 微生物计数法 ) 非无菌产品微生物限度检查 ( 控制菌检查法 ) 15 版药典水标准 微生物限度检查法概述 适用范围 非规定灭菌制剂及其原料 辅料受微生物污染程度的方法 用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数 不适用于活菌制剂的检查环境要求 不低于
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GB 前 言 本标准代替 GB/T 食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数 本标准与 GB/T 相比, 主要变化如下 : 修改了标准的中文名称 ; 修改了培养基和试剂 ; 将 第二法大肠杆菌 VRBMUG 平板计数法 改为 大肠埃希氏菌平板计数法 ( 第二法
中华人民共和国国家标准 GB 4789.8 食品安全国家标准 食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数 57 发布 77 实施 中华人民共和国卫生部 发布 GB 4789.8 前 言 本标准代替 GB/T 4789.88 食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数 本标准与 GB/T 4789.88 相比, 主要变化如下 : 修改了标准的中文名称 ; 修改了培养基和试剂 ; 将 第二法大肠杆菌 VRBMUG 平板计数法
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
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材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
杨锐 方文雅 单媛媛 陈海敏 孙雪 叶央芳 为研究藻际微生物多样性与紫菜健康养殖的关系 从江苏南通 养殖 山东青岛 野生 浙江温州 养殖 三地的条斑紫菜叶状体和江苏东台条斑紫菜贝壳丝状体及其周围的海水样品中分离 了条斑紫菜外生细菌 根据菌落特征和菌体形态将获得的 株细菌分为 种表型 片段 分析结合序列测序比对结果表明 这些菌株与假交替单孢菌 嗜冷单胞菌 和芽孢杆菌 等 属相应菌株具有较高的同源性 通过对条斑紫菜外生细菌区系多样性分析得出
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试液进行计数方法适用性试验 若供试品污染的微生物数较多, 低稀释级供试液可能影响微生物回收结果, 因此, 应选择低微生物污染的样品或选择适宜稀释级的供试液进行方法适用性试验 (1) 试验组取上述制备好的供试液, 加入试验菌液, 混匀, 使每 1ml 供试液加菌量不大于 100cfu (2) 供试品对
中药饮片微生物限度检查法 中药饮片微生物限度检查法用于检查中药材及中药饮片的微生物污染程度 包括微生物计数和控制菌检查 微生物计数包括需氧菌总数 霉菌和酵母菌总数和耐热菌数检查 控制菌检查包括耐胆盐革兰阴性菌 大肠埃希菌 沙门菌的检查 中药饮片微生物限度检查的试验环境应符合微生物限度检查的要求 检验全过程必须严格遵守无菌操作, 防止再污染, 防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出 单向流空气区域
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实验二细菌培养与消毒灭菌 1 讨论课 : 细菌培养与消毒灭菌 2 示教 : 培养基与细菌生长状况 3 学生操作 : 1 细菌接种 - 平板分区划线法 ; ( 表皮葡萄球菌 大肠杆菌 ) 2 消毒灭菌效果初步检测 ; 3 正常菌群革兰染色 ; 第一部分 基本概念 一 消毒 (disinfection) 杀死致病微生物繁殖体 二 灭菌 (sterilization) 杀死所有微生物 三 清洁 (cleaning)
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实验二 球菌与杆菌 操作 实验内容 葡萄球菌凝固酶试验 抗生素的抗菌试验 示教 病原性球菌形态与染色性观察 病原性球菌培养特性观察 粪便肠道致病菌的分离和鉴定 示教片 生物因素 噬菌体 (Bacteriophage) : 是一类侵害细菌的病毒的总称 其噬菌作用具有专一性 抗生素 (Antibiotic): 是微生物的代谢产物或合成的类似物, 在体外能抑制微生物的生长和存活, 而对宿主不会产生严重的副作用
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
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云 南 农 业 大学 学报 菌病 害 标 本 种 分 别 选择 新 鲜 症 状 典 型的 标 本 又 或 直 接抱 子 振 落 法 进 行单 抱 分 离 箱 提 精选 小 麦 种 子 片 灭 菌 水 冲洗 两组 径 对 照 用 清水 粒 置入 倍 鉴定 先将 系列 浓 度 产 生 菌 的鉴 定 天
!! 云 南 农 业 大学 学报 菌病 害 标 本 种 分 别 选择 新 鲜 症 状 典 型的 标 本 又 或 直 接抱 子 振 落 法 进 行单 抱 分 离 箱 提 精选 小 麦 种 子 片 灭 菌 水 冲洗 两组 径 对 照 用 清水 粒 置入 倍 鉴定 先将 系列 浓 度 产 生 菌 的鉴 定 天 抱子 形状 定 件 观察 菌 的 生 长 色 泽 菌落 形 态 着生部位 然 后 用 黑暗 法
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目录 Aerobic Plate Count (APC) 菌落总数... 3 Alicyclobacillus spp 脂环酸芽孢杆菌... 3 Bacillus cereus 蜡样芽孢杆菌... 3 Campylobacter spp 弯曲杆菌... 4 Clostridium perfringe
FAPAS 食品微生物检测 (Fepas) 能力验证计划 Fepas 是 Fapas 旗下食品微生物检测的能力验证计划, 由英国政府环境食品和乡村事务部 (Defra) 的执行机构英国食品与环境研究员 (fera) 组织 经 UKAS (United Kingdom Accreditation Service) 认可, 由国际标准化组织向全球推荐 ( 如 ISO 导则 17043), 该计划包含了各种肉类
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 化妆品微生物检验方法第 6 部分 : 破伤风梭菌 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿犻犮狉狅犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊 犘犪狉狋 6: 犆犾狅狊狋狉犻犱犻狌犿狋犲狋犪狀犻 发布 2010
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 化妆品微生物检验方法第 6 部分 : 破伤风梭菌 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿犻犮狉狅犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊 犘犪狉狋 6: 犆犾狅狊狋狉犻犱犻狌犿狋犲狋犪狀犻 2010 01 10 发布 2010 07 16 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 化妆品微生物检验方法 第 6 部分
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煤 炭 学 报 仪器与药品 黏土矿物的提纯 黏土样品的制备 红外光谱 分析 射线衍射 分析 射线光电子能谱 分析
张明青 刘炯天 单爱琴 刘汉湖 为了深刻认识煤泥水中 同黏土矿物颗粒之间的相互作用 笔者用 溶液在不同 值条件下分别同高岭土和蒙脱土作用 测定黏土作用前后的 射线衍射 红外光谱和 射线光电子能谱 实验证实了在 溶液中 在黏土表面以静电形式吸附 在 溶液中 以 沉淀和静电形式吸附 此外 在 以上的溶液中还可能存在一 羟基络合吸附形式 提出了 沉淀吸附和一羟基络合吸附的吸附过程模式 黏土颗粒表面的 沉淀使颗粒间形成的非选择性
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卢全 章等 鳗鲡 肾病病原 菌 的研 究 期 鱼 放 人 水 族箱 中 饲 养 观 察 发 病情 况 生 化试 验 采用 和 常 规 方 法 药物 敏 感 试验 用 试 管稀释 方法 步 骤 和 结果 鳗鲡 肾病 症 状 病 鳗 症 状 主 要 表 现 在 鳗 鱼 前 腹 部 区 部 位 肿 大 严重 时 区 腹 部 皮 肤 软 化 溃 烂 穿 孔 脏 露 出 的 粘稠 状 液 体 肾脏 部 位和
前 言 本标准的附录 A 附录 B 均为规范性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位 : 中华人民共和国福建出入境检验检疫局 中国检验检疫科学研究院 本标准主要起草人 : 郑晶 黄晓蓉 赵贵明 翁国柱 吴芸芸 郑麟毅 陈彬 邵碧英 本标准系首次发布的出入境检验检疫标准 Ⅰ
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口食品中绿脓杆菌检测方法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犪犲狉狌犵犻狀狅狊犪犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 2008 07 17 发布 2009 02 01 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前 言 本标准的附录 A 附录 B 均为规范性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位
一、实验前要做好实验预习，进实验室只带必要的文具、讲义，并穿工作服。 二、实验室内应保持清洁、安静，实验时要认真严肃，禁止抽烟、饮食和开玩笑。 三、爱护实验器材，注意节约实验材料，实验室内任何物品不得带出室外。
医学微生物学 医学微生物学课程通过开设验证性 综合性和创新性实验, 使学生在掌握医学微生物学基本理论 基本知识及基本技能的基础上培养思考和解决问题的能力 实验内容以细菌为主, 主要开展 : 细菌形态学实验 细菌生理学实验 细菌致病性 化脓性细菌和肠道杆菌的分离与鉴定 其他微生物和病毒学实验等, 为配合 7 年制学生的教学新开展了 R 质粒的提取和检测 流感病毒的培养 ( 细胞培养 ) 和检测等项目
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Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : Buffer 标准 1 标准 2 样品 试剂 ( 荧光染色 ) 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 5000ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna
前 言 本标准代替 GB/T 食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验 本标准与 GB/T 相比, 主要变化如下 : 修改了标准名称 ; 修改了培养基和试剂 ; 修改了操作步骤中增菌部分和生化试验及附加生化试验部分 ; 修改了表 2; 修改了表 4 I
中华人民共和国国家标准 GB 4789.5 2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验志贺氏菌检验 2012-05-17 发布 2012-07-17 实施 中华人民共和国卫生部 发布 前 言 本标准代替 GB/T 4789.5-2003 食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验 本标准与 GB/T 4789.5-2003 相比, 主要变化如下 : 修改了标准名称 ; 修改了培养基和试剂 ; 修改了操作步骤中增菌部分和生化试验及附加生化试验部分
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中华人民共和国国家标准 GB 4789.10 2010 食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 National food safety standard Food microbiological examination: Staphylococcus aureus 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施 中华人民共和国卫生部 发布 前 言 本标准代替 GB/T 4789.10-2008
<4D F736F F D20C0AFD1F9D1BFE6DFB8CBBEFABCECD1E9B7BDB7A8D5F7C7F3D2E2BCFBB8E52E646F63>
ICS 备案号 : SN/T 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 进出口食品中蜡样芽孢杆菌检验方法 Method for detection of bacillus cereus in food for import and export ( 征求意见稿 ) - - 发布 - - 实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 前 言 本标准的修改参照了国际分析家学会 (AOAC INTERNATIONNAL)AOAC
附件1：理论课程撰写模板
河北大学课程教学大纲 课程编号 : 110110 课程名称 : 环境微生物学实验 学分学时 : 1.5 学分 51 学时 开课单位 : 撰稿人 : 审核人 : 化学与环境科学学院 刘微 马建薇 2015 年 5 月 20 日制 ( 修 ) 订 环境微生物学 实验教学大纲 课程编号 :110110 课程英文名称 :Experiment of Environmental Microbiology 学分
TAS - 990
TAS - 990 TAS -990 TAS -990 TAS -990 ＷＷＷ ＰＧＥＮＥＲＡＬ ＣＯＭ 优异的可扩展性 使您轻松应对多种分析需求 ＡＳＣ ９００ 原子吸收 火焰自动进样器 ＴＡＳ ９９０ 系列原子吸收分光光度计火 焰法检测专用自动进样附件主要功 能 自动清洗 校零 自动进样 ６０个样 品杯 ８ 个标样杯 ＡＳＣ ９００ 石墨炉 自动控温 自动进样器 冷却循环水装置 ＴＡＳ ９９０系列原子吸收分光光度计石
前 言 本标准代替 GB/T 食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验 本标准与 GB/T 相比, 主要修改如下 : 修改了标准的中英文名称 ; 增加了第二法蜡样芽胞杆菌 MPN 计数法 ; 将选择性分离培养基 (MYP) 培养条件由 37 培 12
中华人民共和国国家标准 GB 4789.14 xxxx 食品安全国家标准 食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验 ( 征求意见稿 ) xxxx-xx-xx 发布 中华人民共和国卫生部 xxxx-xx-xx 实施发布 前 言 本标准代替 GB/T 4789.14-2003 食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验 本标准与 GB/T 4789.14-2003 相比, 主要修改如下 : 修改了标准的中英文名称 ;
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Microsoft Word - 多肽水解氨基酸测定 doc
测试报告 样品信息 样品名称 多肽水解氨基酸测定 编号 W20140504-001 样品重量 \ 剂型 \ 收样日期 2014/05/04 测试期间 2014/05/04-05/08 样品描述 测试需求 测试成分 含测 参考标准 参考标准高效液相色谱法标样有 仪器信息 测试仪器高效液相色谱仪仪器型号安捷伦 1260 色谱条件 : 色谱柱 : 流动相 : 检测波长 : 月旭 Amino Acid,4.6
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º º º º º º º º º º º º º º º AS "Jaunpils Pienotava" 奶酪 "KURZEMES" "JAUNPILS ZELTA" 半硬质成熟奶酪 口感酸甜 呈半硬质 均匀浓稠 它是一种半硬质含脂肪的成熟型奶酪 带有香甜的奶油味和巴氏杀菌乳的芳香 干酪孔眼分布不规则 奶酪呈淡黄色 呈半硬质 均匀浓稠 干酪孔眼分布不规则 呈淡黄色 为公司独家生产的一种奶酪 固态脂肪含量
１０５ 化学消毒剂按其效力不同可 分为哪几类 １ 灭菌剂 能杀灭一切微生物使 其达到灭菌效果 ２ 高效消毒剂 杀灭一切细菌繁 殖体 包括分枝杆菌 病毒 真菌及其 孢子 并对细菌芽孢有显著杀灭作用 ３ 中 效 消 毒 剂 杀 灭 细 菌 繁 殖 体 真菌 病毒等除细菌芽孢以外的其 他微生物 ４ 低效消毒剂 只能杀灭细菌繁 殖体 亲脂病毒和某些真菌 １０６ 化学消毒剂的适用原则是什 么 １ 坚持合理使用的原则
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Microsoft Word _朱静鸿-二校 30
7 1 Vol. 7 No. 1 2016 1 Journal of Food Safety and Quality Jan., 2016 2013~2014 朱静鸿 *, 龚云伟, 李月婷, 武艳立 (, 130033) 摘要 : 目的 方法 2013 结果 2013~2014 11 433, 74, 17.09%, 42 21 9 2 2013 2014 (x 2 =0.09, P>0.05)
赵世嘏 高乃云 楚文海 微曝气工艺是在常规 基础上发展起来的 试验表明在紫外光强 投加量为 三氯乙酸 初始浓度约为 的情况下 后该工艺对 的去除达到 以上 工艺效果受 光强 投加量 初 始浓度和 的影响 其他条件一定时 随着 光强和 投加量的增大 去除率增加 然而 投加量超过 后 去除效果增加缓慢 对不同初始浓度 时去除率最 高 而后浓度增加 去除率下降 中性或弱酸性 条件下更有利于降解 消毒副产物
目录样品说明 :... 3 一 [ 计数 ]Drinking Water ENUMERATION TESTS 饮用水计数检测 [ 计数 ]Total Coliforms and E. Coli 总大肠菌群 & 大肠杆菌 [ 计数 ]Colony Counts 菌落计数..
![目录样品说明 :... 3 一 [ 计数 ]Drinking Water ENUMERATION TESTS 饮用水计数检测 [ 计数 ]Total Coliforms and E. Coli 总大肠菌群 & 大肠杆菌 [ 计数 ]Colony Counts 菌落计数..](/thumbs/93/111841200.jpg "目录样品说明 :... 3 一 [ 计数 ]Drinking Water ENUMERATION TESTS 饮用水计数检测 [ 计数 ]Total Coliforms and E. Coli 总大肠菌群 & 大肠杆菌 [ 计数 ]Colony Counts 菌落计数..")
FAPAS-Leap 水的微生物检测能力验证计划 LEAP 是 Fapas 旗下水与环境检测的能力验证计划, 由英国政府环境食品和乡村事务部 (Defra) 的执行机构英国食品与环境研究员 (fera) 组织 经 UKAS (United Kingdom Accreditation Service) 认可, 由国际标准化组织向全球推荐 ( 如 ISO 导则 17043), 该计划包含饮用水化学 微生物
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- * (( )) :-,,, ( ) ~ 与常规管中气 - 液两相流动不同, 水平管气 - 液两相变质量流动存在沿程管壁入流 在水平管单相变质量流动试验研究的基础上, 考虑了管壁入流对管壁摩阻系数的影响, 提出了孔缝 管管壁摩阻系数相关式 将气 - 液两相混合物看作均匀介质, 使水平管气 - 液两相变质量流的均相流模型的基本模型等同于单相变质量流的流动模型, 重点研究了气 - 液两相变质量流均相流模型中
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第15章 非发酵革兰阴性杆菌
第 15 章非发酵革兰阴性杆菌 第一节假单胞菌属 假单胞菌属 (Pseudomonas) 是一类革兰阴性的小杆菌, 无芽胞 有荚膜, 多数菌株有鞭毛 假单胞菌属分布广泛, 种类繁多, 目前已发现 200 余种, 与人类关系较大的有铜绿假单胞菌 (P. aeruginosa) 荧光假单胞菌 (P. fluorescens) 和鼻疽假单胞菌 (P. mallei) 等, 其中铜绿假单胞菌是主要的致病菌
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人类IL-15基因修饰瘤苗与T细胞过继法 联合应用对T739荷瘤小鼠的治疗作用
细菌学实习 -V (G + ) 化脓性球菌 实验材料 舒肤佳 夏士莲香皂 琼脂棒儿 无菌培养皿 金葡 表葡示教平皿 甲 乙 肺链示教平皿 血浆凝固酶试验材料 2 套 / 桌 1 块 / 人 1 块 / 人 1 套 / 桌 1 套 / 桌 1 套 / 桌 实验目的 掌握金葡 表葡 甲乙肺链在固体培基上的生长特性 观察细菌的 α β 溶血现象 掌握血浆凝固酶试验原理及常用检测方法 了解抗菌洗浴用品抑菌功效的常用检测方法
标题
中华人民共和国国家标准 GB 4789.10 2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 2016-12-23 发布 2017-06-23 实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局 发布 前 言 本标准代替 GB4789.10 2010 食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 SN/T0172 2010 进出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
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四 课程学时学分 教学要求及主要教学内容 ( 一 ) 课程学时分配一览表 章节主要内容总学时 讲授 学时分配 实践 第 1 章 绪论 第 2 章 食品中常见的微生物 第 3 章 微生物污染与控制 第 4 章 微生物引起食品腐败变质 第 5 章 食品变质
食品微生物与检测 课程教学大纲 一 课程说明 课程编码 4302248 课程类别专业主干课 修读学期第五学期学分 2 学时 32 课程英文名称 适用专业 先修课程 Food Microbiology and DeterminationTechnology 食品科学与工程 食品质量与安全 微生物学 A 二 课程的地位及作用 食品微生物与检测 课程是食品类本科专业学生开设的专业主干课, 也是食品科学与工程
兽医临床诊断学实验指导
兽 医 临 床 诊 断 学 实 验 指 导 河 北 科 技 师 范 学 院 动 物 科 学 系 临 床 兽 医 学 实 验 室 2009 年 2 月 目 录 学 生 实 验 守 则... 3 实 习 一 动 物 的 接 近 保 定 和 基 本 检 查 法...4 实 习 二 临 床 基 本 检 查 法 及 一 般 检 查...10 实 习 三 循 环 系 统 的 临 床 检 查...15 实 习 四
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 列入我国 的植物多酚黄酮抗氧剂 防治高血脂和心血管疾病
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 植物多酚黄酮抗氧化剂与人体健康 尤新 中国食品添加剂和配料生产应用工业协会 北京 主要综述了对植物多酚黄酮类物质的生物活性和安全性 其内容包括 茶多酚 甘草黄酮 竹叶黄酮 大豆异黄酮以及从各种鲜果提取物的功能成分 如葡萄提取物 杨梅提取物 橄榄提取 物 乌饭树果提取物等 介绍了植物多酚黄酮的国际市场信息及相关的研究机构和生产单位 多酚 黄酮 健康 食 品 与
大 学 化 学 第 卷 第 期 年 月 微 囊化技 术 在 生 物 医 学 中的 应 用 俞 耀 庭 陈 长 治 南 开 大学分 子 生物研 究 所 本 文 概 述 了微囊 固 定化技术基 本 应 用 原 理 摘要 的生 物 血液 相溶性 及 通透 性能 胞 在治 疗 肾 衰 肝 衰 及 清除 人体 内 中毒药物 般 性介 绍 微 囊 人 工 细 胞 的 一 般制 备方 法 各种 膜 材 料 对 人
遵义医学院微生物学实验教学大纲
遵义医学院微生物学教研室 医学微生物学 实验教学大纲 ( 供五年制本科临床 麻醉 口腔 美容 法医 影像专业使用 ) Ⅰ 前言 本大纲适用于临床医学 口腔 法医 麻醉 检验 美容和影像本科专业学生使用 医学 微生物学实验课的教学目标是使学生通过实验来验证和巩固已学习的理论知识, 并通过实验课的 基本技术的操作, 基本技能的掌握培养学生认真观察, 独立思考和辩证分析问题的能力, 建立严 格的科学作风,
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第一次征求意见稿
9207 灭菌用生物指示剂指导原则 ( 新增 ) 生物指示剂是一种对特定灭菌程序有确定及稳定的耐受性的特殊微生物制成品, 可用于灭菌设备的性能确认 特定物品的灭菌工艺研发及建立 产品灭菌程序的验证 生产过程灭菌效果的监控 灭菌程序的定期再验证 隔离器和无菌洁净室灭菌效果的验证评估等 生物指示剂的分类 生物指示剂主要有以下三种类型, 其特征需符合 医疗保健产品灭菌生物指示物 GB18281 的要求 (1)
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程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
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前 言 本标准代替 GB/T 食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验 本标准与 GB/T 相比, 主要变化如下 : 修改了标准的中文名称 ; 增加了第二法蜡样芽胞杆菌 MPN 计数法 ; 将选择性分离培养基 (MYP) 培养条件由 37 培养 12
中华人民共和国国家标准 GB 4789.14 2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验 2014-12-01 发布 2015-05-01 实施 前 言 本标准代替 GB/T 4789.14-2003 食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验 本标准与 GB/T 4789.14-2003 相比, 主要变化如下 : 修改了标准的中文名称 ; 增加了第二法蜡样芽胞杆菌 MPN 计数法 ;
图 对片剂累积释放度的影响
岳红坤 常明 游雅 邱树虹 王婧 乔宇 石家庄学院化工学院 河北石家庄 为筛选盐酸小檗碱胃漂浮片的处方并评价其漂浮和体外释放特性 根据辅料性质及制剂质量要求 通过单因素实验及正交试验确定影响盐酸小檗碱胃漂浮片性能的主要参数 确定了最优 处方 采用干粉直接压片制得盐酸小檗碱胃漂浮片 在人工胃液中考察其漂浮性能及溶出度 并用 紫外可见分光光度法检测其释药量 优选的处方为每片含 碳酸氢钠 羧甲基淀粉钠 聚乙二醇
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微生物学通报 Microbiology China 研究报告 NOV 20, 2010, 37(11): by Institute of Microbiology, CAS 茶多酚对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌机理 * 钱丽红陶妍
微生物学通报 Microbiology China tongbao@im.ac.cn 研究报告 NOV 20, 2010, 37(11): 1628 1633 2010 by Institute of Microbiology, CAS 茶多酚对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌机理 * 钱丽红陶妍 谢晶 ( 201306) 摘要 : 以革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性的铜绿假单胞菌为试验菌,
劳动保护与医疗保健 第 二 章 止标志共 ２３ 个 劳 动 安 全 技 术 ２２ ２ 警告标志 由于三角形引人注目 故用作 警告 标志 警告人们注意可能发生的多种危险 三角的背景使用黄色 三角图形和三角内的图像均用黑色描 绘 黄色是有警告含义的颜色 在对比色黑色的衬托下 绘成的 警告标志 就更引人注目 ３ 指令标志 在圆形内配上指令含义的颜色 蓝 色 并用白色绘制必须执行的图形符号 构成 指令标志
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中华人民共和国国家标准 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定 National food safety standard Food microbiological examination:aerobic plate count 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施 中华人民共和国卫生部 发布 前 言 本标准代替 GB/T 4789.2-2008 食品卫生微生物学检验菌落总数测定
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北 京 三 药 科 技 开 发 公 司 产 品 目 录 2015 年 03 月 01 日起有效 北京三药科技开发公司 中国食品药品检定研究院下属全资国有企业 起步于中国药品生物制品检定所培养基室, 国内最早从事微生物干粉培养基研发与生产的专业企业 依托中检院强大科研与技术实力, 不断创新 国内一流的生产 实验条件 最专业的药检微生物培养基 新产品专利 生产环境 实验室 地址 : 北京经济技术开发区建安街甲
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儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 耳鼻咽喉科学 ( 专业学位 ) 非定向 全国统考
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生上线考生名单 准考证号 报考专业 外语政治 业务 1 业务 2 总分 报考类别 考试方式 备注 103357000912484 72 72 242 0 386 非定向 全国统考 103357000912003 71 72 242 0 385 非定向 全国统考 103357000911503 77 73 234 0 384 非定向 全国统考 103357000911098
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期 周 凯等 欧 洲 鳗 鲡 红 头 病 病 原 的研 究 酒 精 棉 球 将 尾 部 反 复 擦 洗 消 毒 然 后 用 灭 菌 剪 刀 剪 断 尾 巴 将 血 液滴 加 在 营 养 琼 脂 或 琼脂 平板 上作 划线 分 离 在 获 得 纯 培 养 后 移 人 斜 面 保存备 用 培养 后 取 形 态 致 的 单 个 菌 落 进 步 划 线 纯化 人 工 感 染试 验 肌 注 感染是 将 斜 面