16期

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醒授徐
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1 中国农学通报 2013,29(16):63-68 Chinese Agricultural Science Bulletin 石斛属植物种质资源鉴定及指纹图谱应用研究进展李杰, 章金辉, 朱根发, 王再花 ( 广东省农业科学院花卉研究所 / 广东省园林花卉种质创新综合利用重点实验室, 广州 ) 摘要 : 为了鉴别石斛属植物不同种质, 区分石斛伪品劣品, 笔者综述了传统的形态学与显微鉴定细胞学孢粉学以及指纹图谱技术 ( 化学指纹图谱和 DNA 指纹图谱 ) 的特点, 及其在石斛属植物种质资源鉴定中的应用, 发现指纹图谱技术对石斛属植物的种源和道地性鉴定以及石斛类药材质量控制十分有效, 但指纹图谱标准和评价体系还存在不足, 今后还需在野生石斛资源的评价与合理利用指纹图谱与药理作用相关性遗传改良和基因克隆等方面开展深入研究关键词 : 石斛属 ; 种质资源鉴定 ; 指纹图谱 ; 应用中图分类号 :S 文献标志码 :A 论文编号 : Progress in Application of Germplasm Identification and Fingerprinting of Dendrobium Species Li Jie, Zhang Jinhui, Zhu Genfa, Wang Zaihua (Floricultural Research Institute of Guangdong Academy of Agricultural Sciences/ Guangdong Key Lab of Ornamental Plant Germplasm Innovation and Utilization, Guangzhou ) Abstract: In order to identify the germplasm sources, fake and inferior Dendrobium in the market, multiple methods have been applied in identification of Dendrobium germplasm. In the paper, characteristics and applications of the morphological, microstructure, cytological, palynological, chemical fingerprinting and DNA fingerprinting methods were reviewed. It was found that fingerprintings were effective for discrimination the germplasm and geo-herbalism of Dendrobium, and medicinal material quality control, while the criterions and evaluation system of fingerprintings should be further completed, and it was necessary to focus on the aspects of reasonable evaluation and utilization wild resources, combination of fingerprintings and pharmacological action, genetic improvement and gene cloning for the future research in Dendrobium. Key words: Dendrobium; germplasm identification; fingerprinting; application 0 引言石斛属 (Dendrobium) 植物众多, 全球约有 1500 种, 主要分布于亚洲太平洋岛屿和大洋洲等热带亚热带地区, 中国约有 76 种因花色绚丽花姿优雅, 气味芬芳等特点, 石斛被誉为四大观赏洋兰之一石斛还具药用价值, 中国和东南亚国家将其应用于临床与医药, 现代药理研究也证明石斛具有增强免疫力抗氧化 [1-3] 抗癌健胃护肝等作用由于石斛属植物产地各异, 用途多样, 同名异物和同物异名时有发生, 市场上一些非道地产区的石斛也以次充好地混入道地石斛一同售卖, 甚至兰科石豆兰属 (Bulbophyllum) 金石斛属 (Flickingeria) 和石仙桃属 (Pholidota) 的不少伪品也作石斛在市场上流通, 致使石斛成为种源最为混乱的 [4] 植物之一, 这十分不利于石斛类药材的质量安全临床应用以及石斛产业的健康发展对此, 多年来国内外学者从传统的形态学与显微鉴定细胞学孢粉学以基金项目 : 广东省自然科学基金 ( ); 广东省科技厅农业攻关项目春石斛杂交种多糖差异比较分析及药用开发 (2010B ) 第一作者简介 : 李杰, 男,1983 年出生, 湖南常德人, 助理研究员, 博士, 主要从事药用花卉栽培与育种研究 Tel: , goodlijie666@yahoo.com.cn 通讯作者 : 王再花, 女,1980 年出生, 湖南益阳人, 助理研究员, 在读博士, 主要从事药用花卉栽培与药理研究通信地址 : 广州市天河区五山路金颖东一街 1 号广东省农业科学院花卉研究所,Tel: , wangzaihua@163.com 收稿日期 : , 修回日期 :

2 64 中国农学通报及化学指纹图谱和 DNA 指纹图谱等方面开展了石斛鉴定研究, 笔者综述了上述方法在石斛属植物种质资源鉴定中的应用研究进展, 以期为石斛属植物的种源和道地性鉴定以及石斛类药材质量控制提供参考 1 传统的石斛种质鉴定方法 1.1 形态学与显微鉴定石斛属植物分类主要依据其形态学差异, 涉及性 [5] 状甚广, 便于直接观察和获取 Adams 等从系统分类的角度对澳大利亚地区石斛形态进行了研究 [6] Wang 等依据 28 个形态指标的欧氏距离聚类,31 种 [4] 石斛被分为 6 组, 其中 23 个种聚为 1 组白音通过形态鉴定 42 种药用石斛及其混淆品, 发现只有 21 种 [7] 能区分开李静对 40 个石斛兰品种的 72 个性状编码和聚类, 初步将其分为迷你小花石斛蝴蝶型石斛和羚羊型石斛 3 类可见, 部分石斛种和品种的形态差异小, 而茎粗叶面积等营养器官指标又易受环境 [8] [9] 影响沈颖还报道了福建湖南一带开紫红色花的石斛, 经分子标记证实其为铁皮石斛 (D. officinale), 但与中国植物志中铁皮石斛萼片和花瓣黄绿色的描述不一致随着育种技术的发展, 较多的石斛新品种以及种间杂交种陆续出现 [10-11], 形态学鉴定的难度也越来越大显微鉴定具有成本低, 操作简单的特点早期, 木村康一高桥真太郎和 Tsuneo 等国外学者开展了石斛 [12] 性状和显微鉴定工作 Mejstřík [13] [14] 郑艳等发现, 石斛根的解剖和显微结构存在种间差异 William 等 [15] [16] [17] Barbara 等 Morris 等则比较研究了石斛的营养器 [18] 官解剖结构丁小余等依据铁皮石斛茎结构差异, 将其分为可加工成优质枫斗的 F 型和相反的 H 型吕 [19] 洪飞等通过对多糖组织化学定位, 发现铁皮石斛组织内的多糖和淀粉粒明显多于铜皮石斛 (D. moniliforme) 和伪品小叶石仙桃 (P. chinensis) 可见, 显微鉴定作为一种传统的鉴定方法, 在一定程度上是有效的目前, 对石斛鉴定多侧重于显微特征的描述, 尚未量化每种石斛独特的显微特征, 但其仍不失为一种石斛鉴别的有效辅助手段 1.2 细胞学方法早在 20 世纪 90 年代, 细胞学方法就被应用于石斛 [20] [21] 种质鉴定中王立安和程式君等观察了国产石斛的多个种与杂交种, 认为石斛属染色体的基数为 x=19 [22] 或 20,Jones 等则认为石斛原生种的染色体大部分为 [23] 2n=38, 少数为 2n=40, 或 Meesawat 等通过核 DNA 含量和染色体观察, 认为 2n=76 为四倍体而栽 [7] 培品种中, 李静发现 12 个石斛兰品种, 仅 Copper King 的染色体数 2n=40, 其余均为 2n=76, 且核型主要 [24] 为 1B 型和 2B 型李小辉则比较了 21 种石斛属植物, 其结果与上述报道略有差异, 发现石斛染色体数 2n=22,28,34,36,38,40, 且核型以 2B 和 1B 型为主, 少数为 2A 和 3B 型石斛属植物染色体数目与核型相似性较大, 目前还不足以达到品种鉴定的目的随着染色体制片技术的成熟和染色体原位杂交等技术的发展应用, 细胞学方法可能会成为石斛种质鉴定的一个有效手段 1.3 孢粉学方法前人研究石斛属植物的孢粉学多将其放在兰科植物中, 以探讨植物进化与亲缘关系 Freudenstein [25] 观察了包括石斛属 D. aggregatum 在内的兰科 210 属植物的花粉囊后, 指出地生兰一般具有排列规则发育良好增厚的花粉囊内层, 而多数附生兰的花粉囊内层则与之相反 Arora [26] 通过研究 D. gibsonii 和 D. moschaium 2 个种后发现, 它们的四合花粉块之间存在着连接花粉粒的桥结构花粉粒微观构造方面, 王 [27] 立志等观察了安徽霍山产的 3 种石斛花粉粒大小和表面雕纹, 发现霍山石斛 (D. huoshanense) 的表面特征介于铜皮石斛和铁皮石斛之间孢粉学特征受植物基因型控制而不受外界条件影响, 而基于孢粉学特征建立花粉指纹档案, 对于石斛属植物种质鉴定无疑是有用的 2 化学指纹图谱分析方法化学指纹图谱是一种综合的可量化的鉴定手段, 提供了丰富的化学组分鉴别信息色谱法为其主流的分析方法, 尤其是气相色谱法 (GC) 和高效液相色谱法 (HPLC) 已成为公认的常规分析手段石斛作为一种名贵中药材, 富含多糖生物碱菲类联苄类等化学成分 [2 3], 而部分石斛品种还富含香气成分 [28], 化学指纹图谱的应用为其种质鉴定与内在质量控制提供了基础 2.1 GC 指纹图谱气相色谱是 20 世纪 60 年代发展起来的一种快速 [29] 分离检测技术黄小燕等建立了金钗石斛 (D. nobile) 生物碱的 GC 指纹图谱, 含 8 个指纹峰康联伟 [30] 等则利用固相微萃取 / 气相色谱 / 质谱联用技术分析了铁皮石斛挥发性成分, 鉴定了 14 种化合物王丽丽 [31] [32] 等和 Wang 等则采用裂解气相色谱 / 质谱法比较测定了不同产地的铁皮石斛, 晶帽石斛 (D. crystallinum) 和齿瓣石斛 (D. devonianum), 发现样品的指纹图谱具有相似性, 与系统聚类分析相结合则能区分不同种和 [28] 产地的样品随后, 张莹等利用气相色谱 / 质谱分析比较了 4 个石斛兰品种的香气成分, 发现石竹烯是品

3 李杰等 : 石斛属植物种质资源鉴定及指纹图谱应用研究进展 65 种 Green Lantern 和 Spider Lily 的特征香气成分该方法对允许的高温条件下可气化而不分解的物质均可定性定量分析, 尤其对挥发油和香气物质鉴定效果更好 2.2 HPLC 指纹图谱利用高效液相色谱构建石斛指纹图谱的报道较 [33] 多欧焕娇等建立了金钗石斛药材中的黄酮类和酚类成分的 HPLC 指纹图谱, 含 10 个共有指纹峰李维 [34] [35] 峰等何铁光等也先后报道了黄花石斛 (D. dixanthum) 和广西铁皮石斛的 HPLC 指纹图谱近年来, 一些学者将高效液相色谱与紫外光谱和质谱相结合, 弥补了单一方法的不足, 更提供了大量的化学成分 [36] 信息张尊建等采用 HPLC/UV 与 HPLC/MS 技术比较了 5 种石斛, 建立了各自的 HPLC/UV 指纹图谱王源园等 [37] 得到了分离较好的鼓槌石斛 (D. chrysotoxum)hplc/uv 指纹图谱, 并对 HPLC/MS 对部 [38] 分色谱峰进行了归属陈晓梅利用 HPLC/MS 比较了真菌诱导子处理的铁皮石斛原球茎与对照的差异, 发现真菌诱导子没有改变原球茎的化学背景, 但能提高其成分的含量可见,HPLC 以及 HPLC/UV/MS 指纹图谱技术已成为一种石斛种质鉴定和全面质量控制的有效手段之一 2.3 毛细管电泳指纹图谱毛细管电泳是 20 世纪 90 年代迅速发展起来的一项色谱技术, 非常适合水溶性或醇溶性成分的分离分析, 在多种药用植物的指纹图谱研究上都获得了较好 [39] [40] 的效果 Zha 等比较了 10 个不同产地的 69 份铁皮石斛样品, 建立了铁皮石斛的毛细管电泳指纹图谱, 其标准指纹图谱含 15 个特征指纹峰笔者利用毛细管电泳对铁皮石斛和大苞鞘石斛 (D. wardianum) 的茎多糖的单糖组分进行分析, 发现该法对单糖的分离效果也较好,2 种石斛的单糖组分差异较大 [41] [42] 此外, 有资料表明, 核磁共振氢谱红外光谱 [43] 也可用于构建石斛指纹图谱, 甚至 Xu 等和 Zha [44] 还分别利用糖类作图和糖类电泳的方法鉴定石斛的种与产地 3 DNA 指纹图谱分析方法 DNA 指纹图谱泛指一切具有某一种质特异性的谱带, 目前它是区分不同的种质资源, 鉴别不同种和品种的有力工具, 且不受组织部位发育时期和外界环境等因素的影响目前, 在石斛属植物上应用较多的主要有以下 5 种 3.1 RAPD 图谱 RAPD 技术是 Williams 和 Welsh 2 个研究小组在 1990 年发展起来的一种遗传标记, 具简单快速引物 [45] 无种属特异性 DNA 样品量少等特点朱胜男等利用 18 条 RAPD 引物就区分开 31 种石斛属植物肖鲲 [46] 等则报道了用 RAPD 技术构建石斛属内 7 种石斛和一种石仙桃属植物的 RAPD 指纹图谱而在种内, 包 [47] [48] 英华等和丁鸽等分别采用 RAPD 技术分析了不同产地的野生美花石斛 (D. loddigesii) 和铁皮石斛, 筛选的引物均能有效地鉴别各自不同的野生居群上述丰富的扩增多态性证明,RAPD 技术对石斛种质及其石斛伪品的鉴定是有效的 3.2 AFLP 图谱 AFLP 技术是 1993 年由荷兰科学家 Zabeau 和 Vos 发展起来, 它通过限制性内切酶片段的不同长度检测 DNA 多态性, 具有多态性高分辨率高方便可靠等优点 Zhu 和 Li [49] 利用 AFLP 技术分析了中国石斛的 37 个种和源于日本韩国的 63 个石斛杂交品种,8 对引物 [4] 共扩增出 1655 条多态性带白音利用筛选的 8 种 EcoR I 和 Mse I 选择性引物组合也将 41 种药用石斛及 [50] 其混淆品完全区别开 Li 等则利用 AFLP 标记技术分析了 12 个铁皮石斛居群, 发现居群内存在遗传分化, 而居群间遗传变异达 26.97% 这些结果证明, AFLP 标记可用于石斛原生种商业品种以及混淆品的指纹图谱研究, 而对石斛居群遗传多样性和居群结构研究同样有效 3.3 SSR 图谱 SSR 标记是一类由几个碱基组成的基序串联重复而成的 DNA 序列, 其长度一般在 100 bp 以内植物基因组中富含 (AT) n 的 SSR 基元, 不同遗传材料重复次数的可变性, 导致了 SSR 长度的高度变异性 SSR 多态性的信息量非常丰富, 重复性好, 在石斛属植物中也有 [51] 所应用 Yue 等以 42 个石斛杂交品种为材料开发了 14 个 SSR 多态性标记, 并将其用于石斛品种鉴定和石 [52] 斛新品种的保护 Gu 等首次报道了 12 对铁皮石斛 [53] SSR 标记, 随后谢明璐等开发了 60 对铁皮石斛的 SSR 引物, 其中 15 对引物鉴定出等位变异 92 个,Lu [54] [55] 等 Xu 等也报道了新的铁皮石斛 SSR 引物, 部分 [56] [57] 引物具有种间通用性, 而 Cai 等和郑基阳等则分别报道了霍山石斛与美花石斛的新 SSR 标记目前, 开发的 SSR 标记还是有限的, 虽然开发新的 SSR 标记需要知道重复序列两端的序列信息, 给该标记的利用带来了一定的困难, 然而一旦引物确知, 在石斛等植物上就显现出较高的应用价值 3.4 ISSR 图谱 ISSR 标记由加拿大蒙特利尔大学的 Zietkiewicz

4 66 中国农学通报等于 1994 年提出, 它的特点是无需知道任何靶标序列的 SSR 背景信息, 其引物可基于任何在微卫星位点发现的 SSR 重复单元该标记结合了 RAPD 和 SSR 技术 [6] 的优点, 耗资少, 遗传多态性高 Wang 等利用 17 条 ISSR 引物鉴定了 31 种药用石斛, 获得了 278 条多态性 [58] [59] 条带 Shen 等和杨立昌等利用该技术建立了铁皮石斛等种和居群的 ISSR 指纹图谱和鉴别条形码刘 [60] 明珍等利用 ISSR 标记技术检测了霍山产的几种石斛与其他产地的石斛, 发现它们在 ISSR 指纹图谱上存在着显著而稳定的差异, 呈现明显的药材道地性可见 ISSR 指纹图谱分析技术在石斛属植物鉴定研究中具有较大的应用价值 3.5 SRAP 图谱 SRAP 标记由美国加州大学的 Li 和 Quiros 于 2001 年提出, 它通过独特的引物设计对开放阅读框进行扩增, 是一种基于简单 PCR 的标记技术, 具有引物设计 [61] 简单且花费少多态性强共显性等特点 Cai 等和 [62] Ding 等采用该技术研究美花石斛和铁皮石斛的不同居群, 发现居群内和居群间均检测到较高的遗传分 [7] 化李静利用 SRAP 标记分析了 40 个石斛兰品种, 20 对引物共获得 295 条多态性条带, 发现石斛兰种质 [63] 的聚类与其遗传背景有很大的关系樊洪泓等利用 SRAP 和 RAPD 2 种分子标记技术对 9 份石斛种质进行比较研究, 结果发现 2 种方法的聚类结果存在差异, 而 SRAP 聚类结果与传统的基于形态特征建立的分类结果比较一致, 更好地体现了供试品种的地域特性与亲缘关系 4 指纹图谱的应用从上述分析可以看出,DNA 指纹图谱简单便捷, 它侧重于对石斛种源的鉴定, 对辨别石斛不同的种或品种以及石斛药材真伪等方面十分有效化学指纹图谱则侧重于对石斛品质的鉴定, 它作为石斛自身的化学条码, 所反映的化学成分信息既有种内的共性, 又因产地不同而具有道地性, 这为区分石斛药材的真伪与优劣, 实行石斛药材质量控制提供了强而有力的技术支持 DNA 指纹图谱也可用于检测种质纯度组培苗遗 [53] 传变异以及杂交子代分析谢明璐等利用开发的 SSR 标记成功地检测了铁皮石斛组培苗的品种纯度, [64] 剔除异品种郑勇平等利用 AFLP 分析, 为其春石斛杂交新品种提供了技术支持基于分子标记的遗传多样性分析, 也为石斛属植物的亲源关系和分类研究提供有力的证据, 对科学地构建核心种质, 发展不同类型和用途的石斛具有重要的科学价值 [65] 此外, 黄少 [66] [10] [11] 玲 Lu 等 Xue 等分别利用不同的分子标记构建了春石斛铁皮石斛细茎石斛 (D. moniliforme) 和重唇石斛 (D. hercoglossum) 的遗传图谱, 这为后续的遗传研究打下了基础 5 问题与展望石斛属植物资源丰富, 世界分布范围广, 中国秦岭淮河以南诸省区也均有分布, 但由于石斛生长繁殖慢生境遭破坏以及人为过度开采等原因, 野生石斛资源正逐渐减少指纹图谱技术虽存在一些不足 ( 如指纹图谱标准和评价体系不完善, 仅对部分化学成分定性而未量化, 化学信息与药理作用研究脱节等 ), 但在石斛种质资源鉴定和质量控制方面得到了广泛应用, 并在不断发展和完善在此基础上, 石斛属植物研究还应强化以下 4 个方面的工作 :(1) 加强野生石斛资源的评价与利用, 对于珍稀的种质资源应采取原地保存与异地保存相结合的方式 ;(2) 依据指纹图谱技术建立主要石斛类药材的质量标准, 深入研究有效成分的药理作用 ;(3) 通过育种和转基因手段, 遗传改良石斛的观赏性状, 提高药用成分含量, 缩短生长周期, 降低生产成本 ;(4) 利用分子生物学技术和代谢组学分析, 挖掘与石斛花色花香抗性或化学成分等重要性状相关的基因或紧密连锁的遗传标记, 应用于育种和生产参考文献 [1] 魏小勇, 方花. 石斛属药用植物分子生物学研究 [J]. 上海中医药大学学报,2005,19(1): [2] Ng T B, Liu J Y, Wong J H, et al. Review of research on Dendrobium, a prized folk medicine[j].appl Microbiol Biotechnol, 2012,93: [3] Hossain M M. Therapeutic orchids: traditional uses and recent advances-an overview[j].fitoterapia,2011,82: [4] 白音. 药用石斛鉴定方法的系统研究 [D]. 北京 : 北京中医药大学, 2007: [5] Adams P B, Burke J M, Lawson S D. Systematic analysis of Dendrobium Swartz section Dendrocoryne in the Australian region [J].Plant Syst Evol,2006,260: [6] Wang H Z, Feng S G, Lu J J, et al. Phylogenetic study and molecular identification of 31 Dendrobium species using inter-simple sequence repeat (ISSR) markers[j].scientia Horticulturae,2009,122: [7] 李静. 石斛兰种质资源鉴定评价 [D]. 海口 : 海南大学,2010:1-60. [8] 徐程, 詹忠根, 廖苏梅.8 种不同地域铁皮石斛农艺性状及多糖和纤维素分析 [J]. 浙江大学学报,2008,35(5): [9] 沈颖. 石斛类 ISSR 标记研究与 ITS 序列分析 [D]. 杭州 : 浙江大学, 2004:1-66. [10] Lu J J, Zhao H Y, Suo N N, et al. Genetic linkage maps of Dendrobium moniliforme and D. officinale based on EST-SSR,

5 李杰等 : 石斛属植物种质资源鉴定及指纹图谱应用研究进展 67 SRAP, ISSR and RAPD markers[j].scientia Horticulturae,2012,137: [11] Xue D W, Feng S G, Zhao H Y, et al. The linkage maps of Dendrobium species based on RAPD and SRAP markers[j].j. Genet. Genomics,2010,37: [12] 郑艳, 徐珞珊, 王峥涛. 石斛属植物的形态组织学研究 [J]. 安徽师范大学学报 : 自然科学版,2007,30(3): [13] Mejstřík V. The anatomy of roots and mycorrhizae of the orchid Dendrobium cunninghamii Lindl[J].Biologia Plantarum,1970,12(2): [14] 郑艳, 徐珞珊, 王峥涛.11 种药用石斛根的形态组织学研究 [J]. 中草药,2005,36(11): [15] William L S, Michael W M, Walter S J. Anatomy of the leaves in Dendrobium section Rhizobium (Orchidaceae)[J].Int J Pl Sci,1994, 155(6): [16] Barbara S C, William L S, Walter S J. Comparative leaf anatomy and systematics in Dendrobium, sections aporum and rhizobium (Orchidaceae)[J].Int J Pl Sci,1997,158(3): [17] Morris M W, WL S, WS J. Vegetative anatomy and systematics of subtribe Dendrobiinae (Orchidaceae) [J].Bot J Linn Soc,1996,120: [18] 丁小余, 徐璐珊, 王峥涛, 等. 铁皮石斛居群差异的研究 (Ⅰ)- 植物体形态结构的差异 [J]. 中草药,2001,32(9): [19] 吕洪飞, 郭卫东, 罗文姬, 等.2 种石斛属植物和小叶石仙桃多糖的组织化学定位 [J]. 中山大学学报 : 自然科学版,2007,46(3): [20] 王立安, 徐晋麟. 石斛属的染色体数 Ⅰ.10 种 [J]. 武汉植物学研究, 1989,7(2): [21] 程式君, 胡志衡, 李秀兰, 等. 国产石斛属染色体研究初报 [J]. 园艺学报,1985,12(2): [22] Jones W E, Kuehnle A R, Arumuganathan K. Nuclear DNA content of 26 orchid (Orchidaceae) genera with emphasis on Dendrobium [J].Annals of Botany,1998,82: [23] Meesawat U, Srisawat T, Eksomtramage L, et al. Nuclear DNA content of the pigeon orchid (Dendrobium crumenatum Sw.) with the analysis of flow cytometry[j].songklanakarin J Sci Technol, 2008,30(3): [24] 李小辉. 石斛属植物细胞学及其亲缘关系研究 [D]. 广州 : 华南师范大学,2009:1-71. [25] Freudenstein J V. A systematic study of endothecial thickenings in the Orchidaceae[J].American Journal of Botany,1991,78(6): [26] Arora S. Pollinia of the tropical orchids-a scanning electron microscope study[j].phytomorphology,1985,35: [27] 王立志, 王德群. 安徽霍山产 3 种石斛花粉粒在扫描电镜下的观察 [J]. 安徽中医学院学报,1989,8(1):53. [28] 张莹, 王雁, 李振坚, 等. 不同石斛兰香气成分的 GC-MS 分析 [J]. 广西植物,2011,31(3): [29] 黄小燕, 乙引. 金钗石斛生物碱组分 GC 指纹图谱的建立 [J]. 西南农业学报,2007(4): [30] 康联伟, 宋银, 张媛, 等. 铁皮石斛挥发油化学成分的 SPME-GC-MS 分析 [J]. 中华中医药杂志,2011,26(10): [31] 王丽丽, 王聪, 潘再法, 等. 铁皮石斛的裂解气相色谱指纹图谱及其系统聚类分析 [J]. 色谱,2008,26(5): [32] Wang L L, Wang C, Pan Z F, et al. Application of pyrolysis-gas chromatography and hierarchical cluster analysis to the discrimination of the Chinese traditional medicine Dendrobium candidum Wall. ex Lindl[J].Journal of Analytical and Applied Pyrolysis,2011,90: [33] 欧焕娇, 成金乐, 李先霞, 等. 金钗石斛中黄铜类和酚类成分 HPLC 指纹图谱研究 [J]. 中药材,2009(6): [34] 李维峰, 郭芬, 黄艳丽, 等. 黄花石斛 HPLC 指纹谱图研究 [J]. 热带农业工程,2011(5):1-4. [35] 何铁光, 卢声仙, 王爱勤, 等. 广西铁皮石斛 HPLC 指纹图谱研究 [J]. 天然产物研究与开发,2012(3):320, [36] 张尊建, 王源园, 李茜. 五种石斛的指纹图谱研究 [J]. 中国药科大学学报,2003,34(6): [37] 王源园, 张尊建, 李先霞, 等. 鼓槌石斛 HPLC/UV/MS 指纹图谱研究 [J]. 药物分析杂志,2006(5): [38] 陈晓梅, 肖盛元, 王春兰, 等. 真菌诱导子处理的铁皮石斛原球茎 HPLC-MS 指纹图谱分析 [J]. 中国药学杂志,2008(24): [39] 孙毓庆, 孙国祥, 金郁. 毛细管电泳指纹图谱及毛细管电泳 - 质谱联用在中药质量控制中的作用 [J]. 色谱,2008,26(2): [40] Zha X Q, Luo J P, Wei P. Identification and classification of Dendrobium candidum species by fingerprint technology with capillary electrophoresis[j].south African Journal of Botany,2009, 75: [41] 秦海林, 张建新, 王峥涛, 等. 环草石斛的 1 H-NMR 指纹图谱解析 [J]. 中国中药杂志,2002,27(12): [42] 沈宗根, 吕洪飞, 程存归.3 种石斛属植物和细叶石仙桃的红外光谱分析和鉴定 [J]. 西北植物学报,2008,28(1): [43] Xu J, Guan J, Chen X J, et al. Comparison of polysaccharides from different Dendrobium using saccharide mapping[j].journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2011,55: [44] Zha X Q, Pan L H, Luo J P, et al. Enzymatic fingerprints of polysaccharides of Dendrobium officinale and their application in identification of Dendrobium species[j].j Nat Med,2012,66: [45] 朱胜男, 周振华, 冯尚国, 等.31 种石斛属植物的 RAPD 遗传多样性分析 [J]. 杭州师范大学学报 : 自然科学版,2011,10(4): [46] 肖鲲, 葛晓军, 李小琼, 等. 石斛属植物的 RAPD 指纹图谱聚类分析 [J]. 遵义医学院学报,2008,31(5): [47] 包英华, 白音, 王文全, 等. 美花石斛种质资源的 RAPD 分子鉴定 [J]. 时珍国医国药,2007,18(5): [48] 丁鸽, 丁小余, 沈洁, 等. 铁皮石斛野生居群遗传多样性的 RAPD 分析与鉴别 [J]. 药学学报,2005,40(11): [49] Zhu G F, Li D M. Genetic relationships among native species and hybrid cultivars of Asian Dendrobium (Orchidaceae) using amplified fragment length polymorphism markers[j].hortscience, 2011,46(2): [50] Li X X, Ding X Y, Chu B H, et al. Genetic diversity analysis and conservation of the endangered Chinese endemic herb Dendrobium officinale Kimuraet Migo (Orchidaceae) based on AFLP[J]. Genetica,2008,133: [51] Yue H, Lam-chan L, Hong Y. Development of simple sequence

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不同基源石斛属植物不同来源商品石斛

不同基源石斛属植物不同来源商品石斛徐蓓杨莉陈崇崇王峥涛徐珞珊建立黄草类石斛的薄层色谱定性鉴别方法采用薄层色谱法考察不同基源石斛及商品药材中专属性成分联苄类化合物毛兰素石斛酚杓唇石斛素和三羟基甲氧基联苄的薄层色谱行为对石斛药材进行定性鉴别通过种不同基源的石斛及批商品石斛的薄层色谱鉴别证明此方法专属性强操作简单重复性好为石斛的鉴别提供了一种准确有效的新方法本方法可用于黄草类石斛的鉴别为中药石斛的质量标准研究提供科学依据