SUPELCO 的 DL 固相萃取仪, SUPELCO 的 3mL 的 ENVI-CarbSPETubes 和 ENVI-18SPETubes,Agilent 的 3mL 的 ODS-C18SPETubes; 隔膜真空泵 ( 天津市腾达过滤器件厂 ) ; 氮吹仪 ( 天津市恒奥科技发展有限公司 )

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教干
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1 SPE-HPLC 用于蔬菜中甲基对硫磷和对硫磷同时测定序 : 天津市恒奥科技发展有限公司注册于天津高新技术产业园区, 是集科工贸为一体的高新技术企业主要从事分析测试仪器及自动化仪表的研制开发生产及销售为了更好的方便客户, 与客户进行实验技术及仪器使用方面的经验交流, 特摘取专业文献供用户及广大分析工作者参考交流如客户对仪器有特殊的改进要求, 请与我公司客服部联系摘要 : 采用乙腈提取,ENVI-18 固相萃取, 丙酮洗脱, C18 高效液相色谱分离柱, 甲醇 - 水 ( 体积比 85:15) 流动相, 紫外检测波长 275nm, 建立了同时测定蔬菜中甲基对硫磷和对硫磷残留量的固相萃取 - 高效液相色谱法结果表明 : 测定甲基对硫磷和对硫磷农药残留量的线性范围为 mg/L, 相关系数 ~ , 检出限 0.025~ 0.031mg/L, 加标回收率 81.60% ~ 93.60%, 相对标准偏差 5.3% ~ 2.9% 甲基对硫磷和对硫磷均属高毒有机磷农药, 对人畜的毒性较大, 滥用和乱用均易导致人畜中毒国家自 2004 年 6 月 30 日开始禁止其在蔬菜中使用, 这就要求我们需要建立蔬菜中甲基对硫磷和对硫磷等农药残留的分析检测方法, 以加强监督管理由于气相色谱法能快速准确检测出大部分有机磷农药, 灵敏度高, 并且一次可以测定多种成分, 所以蔬菜中有机磷农药的测定多采用气相色谱法, 但它不适合于分析热不稳定和极性较强以及易于在气相色谱柱上发生吸附的有机磷农药较气相色谱而言, 高效液相色谱法 ( HPLC) 在这方面就有明显的优势, 几乎所有气相色谱法能够分析的有机磷农药,HPLC 也能够很好分析并且比气相色谱法易于实现 HPLC 吸收了普通液相层析和气相层析的优点, 并经过适当改进发展起来它既有普通液相层析的功能 ( 可在常温下分离制备水溶性物质 ), 又有气相色谱的特点 ( 即高压高速高分辨率和高灵敏度 ), 且重复性好, 进样量极少, 便于多次测量据美国公职分析化学师学会 ( AOAC) 报道, 在美国近半数的有机磷农药已建立高效液相色谱法, 研究报告也很多, 欧洲少数发达国家已将其作为一种常规分析方法国内将高效液相色谱法用于有机磷农药检测分析的研究报告还不多目前蔬菜样品预处理方法主要包括 : 固相萃取 (SPE) 超临界流体萃取 ( SFE) 固相微萃取 (SPM 功传统液 - 液 (L-L) 萃取快速溶剂萃取微萃取等在农药残留物分析中 SPE SFE SPME 和 L-L 萃取法较为常用固相萃取技术因其具有简化样品前处理过程减少溶剂用量提高分析效率和缩短分析时间等优点, 在蔬菜农药分析中的应用受到人们的重视但目前将 SPE 与 HPLC 联用对蔬菜进行农药残留检测分析的报道, 国内尚不多见笔者将 SPE 与 HPLC 联用技术用于蔬菜中农药残留检测, 取得了较好的结果, 方法具有耗时短检出限低, 灵敏度高准确度高精密度高和回收率高等优点, 可用于蔬菜中甲基对硫磷和对硫磷的同时测定 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 l) 仪器 Agilent1100 液相色谱仪 ( 美国 ) ;

2 SUPELCO 的 DL 固相萃取仪, SUPELCO 的 3mL 的 ENVI-CarbSPETubes 和 ENVI-18SPETubes,Agilent 的 3mL 的 ODS-C18SPETubes; 隔膜真空泵 ( 天津市腾达过滤器件厂 ) ; 氮吹仪 ( 天津市恒奥科技发展有限公司 ) ; 0.45μ m 微孔滤膜 ( 天津市腾达过滤器件厂 ) ; 旋转蒸发仪 ( 上海亚荣生化仪器厂 ) 2) 试剂甲基对硫磷和对硫磷标准样 ( l000mg/l), 农业部环境监测总站 ; 甲醇 (HPLC 专用 ), 天津市永大化学试剂开发中心 ; 丙酮乙腈乙酸乙醋氯化钠, 均为分析纯 3) 色谱操作条件色谱柱 : ZORBAXEclipseXDB- C184.6mm 150mm,5μ m; 柱温 :30 ; 流动相 : 甲醇 : 水 = 85:15(V/ v); 流速 :0.7ml/min; 检测波长 : 275nm; 进样量 : 20μ L; 进样方式 : 手动进样 1.2 操作步骤 l) 标准溶液的配置准确量取 1000mg/L 甲基对硫磷对硫磷的标准溶液各 100μ L 于 10mL 容量瓶, 以甲醇定容, 充分摇匀, 即制得含量均为 10.00mg/L 的标准混合样 2) 样品的前处理称取捣碎混匀后的西红柿 5.00g 于 100mL 烧杯中, 加入乙腈 30mL, 匀浆 2min 浆液过滤于 150mL 分液漏斗, 残渣再以 10mL 乙腈分次洗涤, 合并滤液向分液漏斗中加入 3~ 5g 氯化钠剧烈振摇 3min, 然后静置 1h, 分液将上层有机相转至茄型烧瓶, 在旋转蒸发器上以 40 蒸发至 1mL 以下, 将残液转移至带刻度的试管中, 并以少量丙酮多次清洗, 使合并后总量不超过 5mL 于氮吹仪上在 40 下吹至近干加丙酮 1mL 溶解残渣, 过 SPE 柱 ( 先以 5mL 石油醚和 5mL 丙酮依次预洗 ), 再以 1mL 的丙酮洗涤试管, 洗液过柱, 收集流出组分再将流出组分于氮吹仪上在 40 下吹至近干, 加甲醇 1mL 溶解残渣, 溶液以 0.45μ m 的微孔滤膜过滤, 待测 3) 仪器检测设置好液相色谱仪的工作参数, 待基线稳定后即可进样检测 4) 计算按峰面积进行定量计算

3 2 结果与讨论 2.1SPE 操作条件的选择 1)SPE 柱及洗脱剂的选择因甲基对硫磷和对硫磷 2 种农药的理化性质不尽相同, 为了得到 1 组对二者均有较高回收率的 SPE 柱和相应的洗脱剂, 以 2.00mg/L 混合标准溶液对 ENVI-Carb ENVI-18 和 ODS-C18 三种 SPE 柱及甲醇丙酮和乙酸乙醋 3 种洗脱剂进行正交试验从表 1 可知 : 采用 ENVI-Carb 时回收率较低这是因为 ENVI-Carb 柱对甲基对硫磷和对硫磷有比较强的吸附作用, 特别是以甲醇做洗脱剂时, 吸附作用更大 ; 采用 ENVI-18 和 ODS-C18 柱, 并以丙酮为洗脱剂, 甲基对硫磷和对硫磷的回收率均较高其中以 ENVI-18 柱更佳因此, 选取 ENVI-18 柱作为净化柱, 以丙酮为洗脱剂 2) 洗脱剂用量的选择为了尽量减少有机溶剂的用量, 也防止大量的杂质被洗脱出来, 对洗脱剂的用量进行了选择以 2.00mg/L 的标准样过 ENVI-18 柱, 丙酮为洗脱剂, 对甲基对硫磷和对硫磷分别做回收曲线, 结果表明 : 甲基对硫磷和对硫磷过 ENVI-18 柱, 以丙酮为洗脱剂, 洗脱剂的用量只需 3mL, 回收率即可达到 98% 以上 ; 随着洗脱剂用量的继续增加, 回收率无明显提高故在试验中洗脱剂的用量确定为 3mL 2.2 HPLC 操作条件的选择 1) 流动相的选择为了得到最佳的检测结果, 以 2.00mg/L 混合标准溶液进样, 并将流动相流速设为 0.7mL/min, 检测波长固定在 275nm, 对流动相中甲醇与水的不同比例进行了多组试验试验结果表明 : 甲基对硫磷和对硫磷的峰面积随甲醇比例 (V/ V) 的升高而增大, 并在 85% 处达到最大值 ( 如图 1A); 而二者的保留时间随流动相中甲醇含量的增高而缩短 ( 如图 1B) 因在甲醇含量为 85% 时甲基对硫磷和对硫磷保留时间间隔 1min 左右, 能较好分离, 且在此条件下两者的响应值最高, 峰形也比较好, 故确定流动相的组成为甲醇 : 水 =85:15( V/ V)

4 2) 流速的选择改变流速会影响保留时间峰底宽度峰面积和峰高等响应值 - 般来说流速增大保留时间会减短, 峰底宽度会变窄, 峰面积减小通过试验比较流速为 0.6mL/min 0.7mL/min 和 0.8mL/min 下的甲基对硫磷和对硫磷的谱图, 结果表明 : 3 个流速的分离度大致相等, 分别为和综合保留时间, 半峰宽和峰面积三因素, 最终确定流动相流速为 0.7mL/min 在上述优化的色谱条件下, 取 5.00mg/L 甲基对硫磷和对硫磷混合标准样进行检测, 得到标准溶液的色谱图 ( 图 2) 图 2 结果表明, 2 种农药的色谱分离效果良好 2.3 工作曲线及检出限用 10.00mg/L 的甲基对硫磷和对硫磷标准混合样配制 mg/L

的系列标准工作溶液, 进行进样检测, 绘制工作曲线, 并以 3 倍信噪比计算检出限结果见表 2 2.4 方法精密度在上述条件下, 以同一标准溶液连续进行 6 次重复测定, 按测定值进行计算, 得到甲基对硫磷的标准偏差 (S) 为 0.0084, 相对标准偏差 (RSD) 为 0.4% ; 对硫磷的标准偏差 (S) 为 0.0025, 相对标准偏差 (RSD) 为 0.

5 的系列标准工作溶液, 进行进样检测, 绘制工作曲线, 并以 3 倍信噪比计算检出限结果见表方法精密度在上述条件下, 以同一标准溶液连续进行 6 次重复测定, 按测定值进行计算, 得到甲基对硫磷的标准偏差 (S) 为 , 相对标准偏差 (RSD) 为 0.4% ; 对硫磷的标准偏差 (S) 为 , 相对标准偏差 (RSD) 为 0.14%, 表明仪器的精密度较好 2.5 加标回收试验取蔬菜样品, 分别添加不同浓度的甲基对硫磷和对硫磷的混合标准液, 按试验方法进行测定, 并计算回收率和相对标准偏差由表 3 可知, 本方法的加标回收率为 81.60% ~ 93.60%, 相对标准偏差为 5.3%~ 2.9%, 说明本法的准确度和精密度较高我公司用于此类分析的产品 : 1 HSE 固相萃取装置产地 : 天津恒奥科技技术参数 1. 向该装置提供的真空压力不应大于 0.1Mpa 2. 固相萃取柱与接头应安装配合好, 当发现系统总是达不到设定压力时, 请检查各接头是否拧紧, 气压盖密封垫是

否平整 3. 玻璃器件在操作过程中请一定放置平当 4. 系统配有 12 支硅橡胶塞, 当某一路不使用时, 可将其紧塞在主接头上, 以保证系统保持一定压力 5. 系统配有一个铸铁压环, 使用时, 请将其放在收集瓶上, 以保证操作平稳 6. 系统的负压力一般不应超过 -0.085Mpa 主要特点 : HSE-12D 1. 高回收率和高富集倍数 2. 操作简单快速易于实现自动化 3.

6 否平整 3. 玻璃器件在操作过程中请一定放置平当 4. 系统配有 12 支硅橡胶塞, 当某一路不使用时, 可将其紧塞在主接头上, 以保证系统保持一定压力 5. 系统配有一个铸铁压环, 使用时, 请将其放在收集瓶上, 以保证操作平稳 6. 系统的负压力一般不应超过 Mpa 主要特点 : HSE-12D 1. 高回收率和高富集倍数 2. 操作简单快速易于实现自动化 3. 防交叉污染防雾化真空槽设计 4. 密封性好一致性高 5. 无相分离操作, 易于收集分析物组合, 能处理小体积试样 6. 可配大容量采样器快速浓缩干燥装置可批处理样品 7. 除气室收集瓶使用特硬加厚玻璃外, 其他部件均采用四氟及不锈钢材料, 有较强的抗腐蚀性仪器介绍 HSE 固相萃取装置由气压室收集瓶和萃取柱连接部分组成结构简单实用, 操作方便该装置除气室收集瓶使用特硬加厚玻璃外, 其它部件均采用四氟及 316 不锈钢材料, 有较强的抗腐性 2 HGC 系列氮吹仪产地 : 天津恒奥科技技术参数 1. 样品数分为 : 12 孔 24 孔 36 孔 2. 温控精度 : ±1 3. 温度范围 : 室温温控方式 : 4 位数显 /PID 调节 / 过热保护 5. 电源 : 220V 50HZ 主要特点

7 1.HGC 系列氮吹仪, 样品位数多 ( 12 孔 24 孔 36 孔 ) 2. 方便灵巧的通气方式 3. 随意可调的高度, 适用各种场合要求 4. 该装置还可以作为普通的干式恒温器使用 5. 加热方式 : 采用新的 PTC 元件, 干式加热, 污染小仪器介绍该装置采用固相萃取前处理技术, 通过将氮气吹入加热样品, 使之含有的未知多类多种物质迅速得到分离净化, 及浓缩该方法具有省时, 操作方便, 增强分离效果的功能广泛用于制药, 医学测试农药残留检测领域中, 气相液相分析样品的制备和处理注 : 本文摘自华中农业大学学报作者 : 陶宏亮, 关燕萍, 苏晓峰, 柳训才, 韦明元, 李胜清, 陈浩公司名称 : 天津市恒奥科技发展有限公司通讯地址 : 天津华苑产业区鑫茂科技园 C2 座三层 C 单元电话 : 传真 : 邮编 : 联系人 : 焦丽琴, 郭泽强, 韩志军 hakj@tj.cnuninet.net 网址 :

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.