2028 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月黄素定量测定, 而本品由 8 味中药组成, 成分复杂, 质量控制手段和质控指标尚处在较简单的初级阶段, 已严重制约了本产品的市场拓展临床应用以及国际化进程,

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叔惠
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1 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月 2027 疏风解毒胶囊的系统质量标准提升研究张铁军 1, 朱月信 2, 刘素香 1, 田成旺 1, 许浚 1, 韩彦琪 1. 天津药物研究院, 天津安徽济人药业有限公司, 安徽亳州摘要 : 提出中药材和复方中药质量研究思路和模式, 应用该模式方法对疏风解毒胶囊原料药材和制剂进行了系统的质量标准提升研究对虎杖连翘板蓝根柴胡败酱草马鞭草芦根甘草 8 味药材的化学物质组进行辨识, 指认确定 184 个成分, 建立 8 个药材的指纹图谱 ; 通过化学物质组与抗炎药效相关性研究, 确定 10 个成分为疏风解毒胶囊的主要抗炎药效物质基础, 建立了疏风解毒胶囊的多指标成分定量测定方法和指纹图谱控制方法实现对疏风解毒胶囊质量标准的全面提升关键词 : 复方中药 ; 疏风解毒胶囊 ; 质量标准 ; 模式方法 ; 提升研究中图分类号 :R284;R285;R 文献标志码 :A 文章编号 : (2016) DOI: /j.issn Promotion on systematic quality standard of Shufeng Jiedu Capsule ZHANG Tie-jun 1, ZHU Yue-xin 2, LIU Su-xiang 1, TIAN Cheng-wang 1, XU Jun 1, HAN Yan-qi 1 1. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin , China 2. Anhui Jiren Pharmaceutical Co., Ltd., Bozhou , China Abstract: The idea and model of quality research on traditional Chinese medicinal materials and compound Chinese materia medica were established and this method was applied to systematical promoting the quality standard of raw herbal materials and preparation of Shufeng Jiedu Capsule (SJC). The chemical components from molygoni Cuspidati ohizoma et oadix, corsythiae cructus, fsatidis oadix, Bupleuri oadix, matriniae cum oadice eerba, serbenae eerba, mhragmitis ohizoma, and dlycyrrhizae oadix et ohizoma were identified and 184 compounds were determined. The fingerprints of the eight medicinal materials were established, 10 compounds were identified as the anti-inflammatory substance of SJC by studying the correlation between chemical components and their anti-inflammation effect. The methods of multi-component determination and fingerprint controlling have been established and the quality standard of SJC has been improved comprehensively. Key words: compound Chinese materia medica; Shufeng Jiedu Capsule; quality standard; pattern method; research on promotion 中药的质量评价和控制是对中药安全性有效性和质量均一性最有效的控制手段, 中药质量是对其有效性和安全性的反映和表征, 是中医临床用药和中成药有效性控制的重要依据近年来, 我国中医药学者对中药质量控制技术方法进行了大量的研究和探索, 从单指标成分定量测定到多指标成分定量测定等技术方法, 这些研究成果无疑对中药质量评价和质量控制水平的提高起到积极的促进作用但是, 目前质量控制方法还存在许多问题 :1 已有的研究思路和方法未能聚焦和体现中药自身的传统药物属性临床用药方式和作用特点 ;2 现行中药的控制指标和方法与临床安全性和有效性的关联性不强 ;3 目前, 多数中药质量标准仍采用单一成分的定量测定, 控制指标不能反映中药质量的完整性 ; 4 目前中药质量标准的制定未考虑药材形成过程及中成药生产过程中的复杂因素的影响, 尚未实现全程的质量控制, 不能对产品的安全性有效性及质量的一致性提供可靠的质量保障疏风解毒胶囊由虎杖连翘板蓝根柴胡败酱草马鞭草芦根甘草 8 味中药组成, 具有疏风清热解毒利咽的功效, 用于急性上呼吸道感染属风热症 [1-2], 症见发热恶风咽痛头痛鼻塞流浊涕咳嗽等目前, 疏风解毒胶囊现行质量标准仅规定柴胡连翘甘草薄层色谱鉴别和大收稿日期 : 作者简介 : 张铁军, 硕士生导师, 研究员 Tel: (022) zhangtj@tjipr.com

2 2028 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月黄素定量测定, 而本品由 8 味中药组成, 成分复杂, 质量控制手段和质控指标尚处在较简单的初级阶段, 已严重制约了本产品的市场拓展临床应用以及国际化进程, 为此, 有必要对其进行全面的质量标准提升研究 1 基于药材形成全过程的药材质量标准体系的建立中药原料药材大多为来源于自然界的动植物有机体, 与自然界存在千丝万缕的联系, 并遵循生物遗传和变异的基本规律在药材基原整个个体发育过程中, 形成其质量的基本内容, 因此, 药材质量是由其种质的遗传物质基础及其个体发育过程中的生态 ( 环境 ) 历程所决定的药材质量的表达具有多维性和多重性的特点, 既反映在形态和化学物质组群等方面, 又有药效和药性的两方面的基本内涵, 并且, 最终以方剂的形式在临床上体现 [3-5] 本文基于药材形成的全过程, 提出从药材基原的形态统计学分析分类鉴定 - 药材取样 - 有效部位确定的药效学研究 - 有效成分代谢及体内过程研究 - 药效物质基础研究及质量控制指标的确定 - 定量测定 - 指纹图谱研究 - 谱效关系研究 - 质量评价等质量分析的全过程的中药质量分析技术方法和系统的评价体系, 构建中药质量分析规范性研究技术, 最终提出科学规范适合推广应用的技术方法和系统的评价体系 ( 图 1) 传统药物学依据 - 本草考证种内变异 - 形态形状统计分析中药材基原品种的确定野生药材取样法 - 居群取样产地生境覆盖度药材野外取样药材分析样品实验室取样栽培药材取样方法 - 随机取样部位组织代表性均一性传统疗效的描述有效部位确定的药效学筛选模型和评价指标现代用药目的提取分离及结构确证肠内代谢跨膜转运肝脏代谢组织分布排泄方法学建立有效部位药效物质基础研究有效成分代谢及体内过程研究多指标成分的定量测定 LC-MS 分析及成分指认代谢产物确定代谢动力学样品测定指纹图谱的建立 - 分析条件和方法学研究指纹图谱研究相似度分析聚类分析主成分分析指纹峰指认谱效关系研究质量评价结论及质量标准建立图 1 中药材质量研究及质量标准建立技术体系 Fig. 1 Technical system of quality research and quality standard establishment for traditional Chinese medicinal materials 2 疏风解毒胶囊组成药材质量标准提升研究疏风解毒胶囊原料药材质量标准的提升研究, 首先, 对虎杖连翘板蓝根柴胡败酱草马鞭草芦根甘草 8 味药材进行化学成分研究, 通过液质指认分析, 确定了虎杖等药材中共 184 个化合物 ; 进一步建立了以上 8 味组成药材 HPLC 指纹图谱评价体系, 通过系统聚类分析和相似度评价系统建立各个药材对照指纹图谱共有模式, 对每个药材的 14 批样品采用指纹图谱的方法进行质量评价 ; 建立了马鞭草药材中戟马鞭草苷马鞭草苷毛蕊花糖苷 3 个成分的定量测定方法, 方法简便准确, 重复性好, 采用建立的方法对 14 批药材进行了测定 ; 并按照中国药典 2015 年版一部中虎杖连翘甘草柴胡板蓝根的定量测定方法, 测定了 70 批次 5 味药材对疏风解毒胶囊原料药材的质量标准进行了全面的提升

3 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月虎杖质量标准提升研究虎杖 molygoni Cuspidati ohizoma et oadix 为蓼科 (Polygonaceae) 蓼属 molygonum L. 植物虎杖 molygonum cuspidatum Sieb. et Zucc. 的干燥根茎和根对于虎杖的质量研究报道较多, 中国药典 2015 年版对虎杖药材的质量控制主要从性状和显微鉴别薄层色谱鉴别以及虎杖苷和大黄素的量进行了规定文献报道多采用 HPLC 法测定虎杖中虎杖苷白藜芦醇大黄素大黄素甲醚及总黄酮的量以及采用酚 - 硫酸比色法测定多糖的量来控制虎杖的质量亦有釆用 HPLC 指纹图谱的技术来评价虎杖药材质量的报道虎杖作为疏风解毒胶囊方中君药, 是制成疏风解毒胶囊的关键原料, 因此首先应对虎杖药材质量进行控制 (1) 通过化学对照品法及采用液质联用方式指认 13 个化合物, 分别为虎杖苷表儿茶素没食子酸酯 6 - 没食子酰基 - 白藜芦醇苷 2 - 没食子酰基 - 虎杖苷大黄素 -8-l- 葡萄糖苷新芒果苷白藜芦醇决明松 -8-l- 葡萄糖苷大黄素 -1-l- 葡萄糖苷决明松大黄素甲醚 -8- 葡萄糖苷大黄酸大黄素 (2) 根据中国药典 2015 年版虎杖项下的测定方法, 测定 14 批虎杖药材中虎杖苷大黄素的量表明各批次间虎杖苷大黄素的量差异较大 (3) 建立了虎杖 HPLC 法指纹图谱的质量评价方法, 通过对 14 批虎杖药材进行系统聚类分析和相似度评价, 建立虎杖药材指纹图谱的共有模式 14 批虎杖药材与对照指纹图谱间的相似度为 0.998~ 建立的虎杖药材指纹图谱方法稳定可靠重现性好, 可为虎杖药材的质量评价提供了依据 (4) 对指纹图谱中 11 个特征峰进行指认, 分别为虎杖苷表儿茶素没食子酸酯 6 - 没食子酰基 - 白藜芦醇苷大黄素 -8-l- 葡萄糖苷新芒果苷白藜芦醇决明松 -8-l- 葡萄糖苷决明松大黄素甲醚 -8- 葡萄糖苷大黄酸大黄素 2.2 连翘质量标准提升研究连翘 corsythiae cructus 为木犀科 (Oleaceae) 连翘属 corsythia Vahl 植物连翘 corsythia suspensa (Thunb.) Vahl 的干燥果实中国药典 2015 年版对连翘药材中连翘苷和连翘酯苷 A 的量进行了控制文献报道采用 HPLC 法测定连翘中连翘苷连翘酯苷 A 和芦丁的量, 采用比色法测定总黄酮的量亦有釆用 HPLC 指纹图谱技术来评价不同连翘药材的质量研究报道 (1) 通过化学对照品法及采用液质联用方式初步识别了 25 个化合物, 包括 12 个苯乙醇苷类成分 8 个木脂素类成分 5 个黄酮类化合物, 分别为 3,4-dihydroxyphenylethanoid glycoside 2-methoxy- 3,4,5-trihydroxyphenylethanoid glycoside 连翘酯苷 E p-coumaroyl-(6-l-caffeoyl)-glucoside 羟基连翘酯苷 A 羟基连翘酯苷 I 羟基连翘酯苷 H 连翘酯苷 J 连翘酯苷 I 连翘酯苷 A 芦丁连翘酯苷 H 连翘种苷 A 松脂素-4 - 葡萄糖苷松脂素 - 4-l-β-a- 葡萄糖苷表松脂素 -4 -l-β-a- 葡萄糖苷异连翘苷 isolariciresinol-6-l-β-glucoside 连翘苷羟基连翘脂素连翘脂素 4,6-dihydroxyquercetin 槲皮素 6-hydroxy-dihydroquercetin 4 -hydroxydihydroquercetin (2) 连翘为疏风解毒胶囊的重要组成原料, 对连翘的质量提升研究中选取连翘苷连翘酯苷 A 作为对连翘药材质量的评价指标根据中国药典 2015 年版连翘项下定量测定方法测定 14 批连翘药材中连翘苷连翘酯苷 A 的量 (3) 建立连翘 HPLC 指纹图谱质量评价方法和 HPLC 指纹图谱的共有模式, 采用连翘 HPLC 指纹图谱质量评价体系对 14 批连翘样品进行评价, 结果表明连翘质量存在差异, 批次个别质量较差建立的连翘药材指纹图谱方法稳定可靠重现性好, 可为连翘药材的质量评价提供依据 (4) 采用液质联用法对连翘指纹图谱中 10 个主要特征峰进行指认, 分别为 3,4-dihydroxyphenylethanoid glycoside 连翘酯苷 J 连翘苷芦丁 2-methoxy-3,4,5-trihydroxyphenylethanoid glycoside 连翘酯苷 A β- 羟基连翘酯苷 A β-coumaroyl-(6- l-caffeoyl)-glucoside β- 羟基连翘酯苷 I 松脂素- 4 -β- 葡萄糖苷 2.3 板蓝根质量标准提升研究板蓝根 fsatidis oadix 为十字花科 (Cruciferae) 菘蓝属 fsatis L. 植物菘蓝 fsatis indigotica Fort. 的干燥根中国药典 2015 年版对板蓝根药材中 (o,p)- 告依春的量进行了控制文献报道采用 HPLC 法测定了板蓝根中 (o,p)- 告依春靛玉红腺苷氨基酸等的量 (1) 通过化学对照品法及采用液质联用方式初步指认, 共检测出 23 个离子流峰, 分析识别了其中 20 个化合物, 包括 8 个氨基酸类成分 1 个生物碱

4 2030 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月类成分 1 个糖类成分 3 个木质素类成分 3 个黄酮类成分和 4 个小分子酚酸类成分, 分别为精氨酸胞苷苹果酸告伊春尿苷腺苷次黄嘌呤鸟苷苯丙氨酸鸟嘌呤衍生物 3,4- 二羟基苯乙醇苷 2,3,4- 三羟基 -5- 甲氧基苯乙醇苷葡萄糖醛酸柠檬酸苷落叶松树脂素 -4,4 - 二葡萄糖苷异荭草苷 -6 -l- 鼠李糖 -(1 2)- 葡萄糖苷异牡荆苷 -6 -l- 鼠李糖 -(1 2)- 葡萄糖苷板蓝根木脂苷 A 异金雀花素板蓝根木脂素 A (2) 根据中国药典 2015 年版板蓝根项下定量测定方法测定 14 批板蓝根药材中表告依春的量 (3) 建立了板蓝根 HPLC 指纹图谱的质量控制方法, 通过系统聚类分析和相似度评价系统建立板蓝根对照指纹图谱共有模式对 14 批板蓝根药材采用指纹图谱的方法进行质量评价, 结果表明收集的药材多数质量较好, 有个别质量较差的情况存在建立的板蓝根药材指纹图谱方法稳定可靠重现性好, 可为板蓝根药材的质量评价提供了依据 (4) 采用液质联用法对板蓝根指纹图谱中 5 个主要特征峰进行了指认, 分别为腺苷次黄嘌呤苯丙氨酸鸟嘌呤衍生物鸟苷 2.4 柴胡质量标准提升研究柴胡 Bupleuri oadix 为伞形科 (Umbelliferae) 柴胡属 Bupleurum L. 植物柴胡 Bupleurum chinense DC. 或狭叶柴胡 Bupleurum scorzonerifolium Willd. 的干燥根中国药典 2015 年版柴胡质量标准中规定了柴胡皂苷 a 和 d 的总量不得少于 0.30% 柴胡为疏风解毒胶囊中的重要组成药材之一, 为保证疏风解毒胶囊质量稳定均一性和安全有效性, 需要对柴胡的质量进行深入研究, 以保证成品质量 (1) 通过化学对照品法及其液质联用技术对指纹图谱的 24 个特征峰进行指认, 指认了 19 个峰, 分别是绿原酸芦丁异绿原酸 A 异绿原酸 B 7- 甲氧基异鼠李素草柴胡皂苷柴胡皂苷 A 柴胡皂苷 B 2,3 - 乙酰化柴胡皂苷 A 3 - 乙酰化柴胡皂苷 B2 丙二酰基柴胡皂苷 2 - 乙酰化柴胡皂苷柴胡皂苷 D 6 - 乙酰化柴胡皂苷 A 6 - 乙酰化柴胡皂苷 B2 丙二酰基柴胡皂苷 D 2,3 - 乙酰化柴胡皂苷 A 2,3 - 乙酰化柴胡皂苷 B2 5- 羟基 -7- 乙酰氧基黄酮 (2) 采用药典法测定 15 批次柴胡药材, 测定结果表明各批药材均符合药典规定, 但各批次间柴胡皂苷 a 柴胡皂苷 d 的量有所差异, 为产品的质量稳定均一和临床安全有效性带来影响, 需重视控制药材的质量 (3) 建立了柴胡 HPLC 指纹图谱的质量评价方法, 通过系统聚类分析和相似度评价系统建立柴胡对照指纹图谱共有模式对 15 批次柴胡药材采用指纹图谱的方法进行质量评价建立的柴胡药材指纹图谱方法稳定可靠重现性好, 可为柴胡药材的质量评价提供依据, 为疏风解毒胶囊质量控制提供了可靠的保证 2.5 马鞭草质量标准提升研究马鞭草 serbenae eerba 为马鞭草科 (Verbenaceae) 马鞭草树 serbena L. 植物马鞭草 serbena officinalis L. 的干燥地上部分中国药典 2015 年版对马鞭草药材中齐墩果酸和熊果酸的量进行了控制文献报道采用 HPLC 法测定马鞭草中马鞭草苷戟马鞭草苷毛蕊花糖苷熊果酸齐墩果酸木犀草素芹菜素和山柰酚等成分, 亦釆用 HPLC 指纹图谱的技术评价不同马鞭草药材的质量 (1) 利用液质联用技术, 对马鞭草的化学成分进行了分析鉴定, 共鉴定了 22 个色谱峰, 其中 5 个环烯醚萜类成分 7 个苯丙素类成分 9 个黄酮类化合物和 1 个小分子酸性成分, 分别为柠檬酸 5- 羟基 -8- 丙酰氧基马鞭草苷 6- 羟基马鞭草苷对香豆酰 -(6-l- 咖啡酸 )- 葡萄糖苷戟叶马鞭草苷 3,4- 二氢马鞭草苷马鞭草苷 β- 羟基马鞭草苷 β- 羟基异马鞭草苷木犀草素 -7-l- 二葡萄糖苷酸野黄芩素 -7-l- 二葡萄糖苷酸野黄芩素 -7-l-(2-l- 阿魏酸 )- 二葡萄糖苷酸槲皮素 -7-l- 葡萄糖苷酸芹糖基 -7-l- 二葡萄糖苷酸毛蕊花苷异毛蕊花苷野黄芩素 -7-l- 葡萄糖苷酸甲氧基毛蕊花苷槲皮苷芹糖基 -7-l- 葡萄糖苷酸 4 - 羟基次黄芩素 -7-l- 葡萄糖苷酸广防风苷 A (2) 建立了采用 HPLC 法测定马鞭草药材中戟马鞭草苷马鞭草苷毛蕊花糖苷 3 个成分的方法, 方法简便准确, 重复性好对 14 批马鞭草药材 3 个指标成分进行了定量测定, 结果表明各批次样品间戟马鞭草苷马鞭草苷毛蕊花糖苷量差异较大 (3) 建立了马鞭草 HPLC 指纹图谱的质量评价方法, 通过系统聚类分析和相似度评价系统建立马鞭草对照指纹图谱共有模式对 14 批马鞭草药材采用指纹图谱的方法进行质量评价, 结果表明收集的药材多数质量较好, 有个别质量较差的情况存在

5 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月 2031 建立的马鞭草药材指纹图谱方法稳定可靠重现性好, 可为马鞭草药材的质量评价提供了依据 (4) 采用对照品结合液质联用法对马鞭草指纹图谱中的主要特征峰进行指认指纹图谱中 5 个主要特征峰中的 4 个为柠檬酸戟马鞭草苷马鞭草苷毛蕊花糖苷 2.6 败酱草质量标准提升研究败酱草 matriniae cum oadice eerba 为败酱科 (Valerianaceae) 败酱属 matrinia Juss. 植物黄花败酱 matrinia pcabiossefolia Fisch. 的干燥全草中国药典 2015 年版未对其药材进行收录, 仅收载于湖南省中药材标准等中药材地方标准中, 检查项目仅规定了药材显微鉴别特征药材性状总灰分水分等, 很难全面合理地评价药材的质量, 相关质量标准的研究报道很少因此, 对败酱草药材进行质量控制研究具有重要意义 (1) 利用液质联用技术对败酱草的化学成分进行了分析鉴定, 共鉴定了 21 个色谱峰对应的化合物, 其中包括 4 个环烯醚萜类成分 2 个香豆素类成分 5 个黄酮苷类成分 6 个木脂素类成分和 4 个三萜类成分, 分别为二羟基败酱苷 patriscabrolside II methyl patriscabrolside II patridoid I 东莨菪亭葡萄糖苷二羟基东莨菪亭葡萄糖苷 3 - 羟基山柰素 -3-l- 鼠李糖基阿拉伯糖苷山柰素 -3-l- 鼠李糖基阿拉伯糖苷山柰素 - 3-l- 葡萄糖苷羟基双氢穗罗汉松树脂酚苷山柰素 -3-l- 鼠李糖苷 7- 甲基 - 山柰素 -3-l- 鼠李糖苷去甲基异落叶松树脂醇 -6- 鼠李糖苷 3-l-α-iarabinosyl-β-a-glucopynanosyl 28-xylosyl-28-oleanicaside ester 异落叶松树脂醇-6-l-β- 葡萄糖苷甲氧基异落叶松树脂醇 -6-l-β- 葡萄糖苷双氢乌索酸 / 齐墩果酸常春藤皂苷元乌索酸 / 齐墩果酸 (2) 建立了败酱草 HPLC 指纹图谱的质量控制方法, 通过系统聚类分析和相似度评价系统建立败酱草对照指纹图谱共有模式对 14 批败酱草药材采用指纹图谱的方法进行质量评价, 结果表明收集的药材多数质量较好, 有个别质量较差的情况存在建立的败酱草药材指纹图谱方法稳定可靠重现性好, 可为败酱草药材的质量评价提供了依据 (3) 采用建立的 HPLC 指纹图谱方法测定不同品种的败酱草, 特征峰有明显的差异, 结果表明本方法可以进行鉴别败酱草不同品种, 为疏风解毒胶囊质量的稳定均一性和疗效提供了保障 (4) 采用液质联用法对败酱草指纹图谱中的主要特征峰进行指认指纹图谱中 4 个主要特征峰为 methyl patriscabrolside II patridoid I 3 - 羟基山柰素 -3-l- 鼠李糖基阿拉伯糖苷 7- 甲基 - 山柰素 - 3-l- 鼠李糖苷 2.7 芦根质量标准提升研究芦根 mhragmitis ohizoma 为禾本科 (Gramineae) 芦苇属 mhragmites Adans. 植物芦苇 mhragmites communis Trin. 的新鲜或干燥根茎中国药典 2015 年版对芦根药材仅规定了药材显微鉴别特征药材性状总灰分水分等, 很难全面合理地评价药材的质量芦根为疏风解毒胶囊方中佐药, 现行的芦根标准不符合其要求由于对芦根药材化学成分及质量等的研究报道很少, 因此, 对芦根药材进行质量控制更具有重要意义通过研究建立符合疏风解毒胶囊质量控制的芦根 HPLC 指纹图谱的质量评价方法, 建立芦根 HPLC 指纹图谱共有模式, 为芦根药材的质量评价提供了依据对 14 批芦根药材进行相似度评价, 结果表明多数批次质量较好, 有个别质量较差的情况存在建立的芦根药材指纹图谱方法稳定可靠重现性好, 为原料芦根的真伪鉴别及相似性判别提供评价依据 2.8 甘草质量标准提升研究甘草 dlycyrrhizae oadix et ohizoma 为豆科 ( Leguminosae ) 甘草属 dlycyrrhiza L. 植物甘草 dlycyrrhiza uralensis Fisch. 胀果甘草 dlycyrrhiza inflata Bat. 或光果甘草 dlycyrrhiza glabra L. 的干燥根和根茎对于甘草的质量控制研究报道较多, 现行的甘草药材标准 ( 中国药典 2015 年版 ) 中对甘草苷和甘草酸的量进行定量, 有研究报道采用 HPLC 法同时测定甘草中甘草酸甘草苷异甘草素等多种成分的量以及采用 HPLC 及 HPCE 指纹图谱技术来评价不同甘草药材的质量的研究 (1) 通过化学对照品法及采用液质联用方式初步指认 40 种化合物, 包括 26 个黄酮类类成分 11 个三萜皂苷类成分 2 个香豆素类化合物和 1 个其他类化合物, 分别为芹糖基甘草素 -7,4 - 二葡糖苷夏佛塔苷甘草素 -4 - 芹糖基 -(1 2)- 葡萄糖苷甘草苷异甘草苷 5- 羟基甘草素 -6 - 乙酰基 - 葡萄糖苷酸芹糖基 - 甘草苷芹糖基 - 异甘草苷 7- 甲氧基黄酮 -4 - 葡萄糖苷新甘草黄苷新异甘草黄苷双氢甘草酸香豆素甘草素异甘草素二羟基甘草酸

2032 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月甘草皂苷 G 羟基甘草酸羟基甘草酸甘草酸甘草皂苷 B 乌拉尔甘草皂苷 B 甘草皂苷 H2 甘草皂苷甘草皂苷 J2 乌拉尔醇甘草宁 N 乌拉尔宁甘草黄酮醇异甘草黄酮醇甘草宁 I 甘草宁 M 甘草宁 G 6-prenylated 6- 异戊二烯基

建立 HPLC 指纹图谱共有模式, 为甘草药材的质量评价提供了依据对 14 批甘草进行相似度评价, 结果表明收集的药材多数质量较好, 有个别质量较差的情况存在建立的甘草药材指纹图谱方法稳定可靠重现性好, 为原料甘草的真伪鉴别及相似性判别提供评价依据 (4) 采用对照品结合液质联用法对虎杖指纹图谱中的主要特征峰进行了指认指纹图谱中 14 个主要特征峰代表的化合物为甘草 -4 - 芹糖基

6 2032 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月甘草皂苷 G 羟基甘草酸羟基甘草酸甘草酸甘草皂苷 B 乌拉尔甘草皂苷 B 甘草皂苷 H2 甘草皂苷甘草皂苷 J2 乌拉尔醇甘草宁 N 乌拉尔宁甘草黄酮醇异甘草黄酮醇甘草宁 I 甘草宁 M 甘草宁 G 6-prenylated 6- 异戊二烯基 -2,7- 二羟基 -5,4 - 二甲氧基黄酮 5- 甲氧基光果甘草酮甘草西定及其异构体二羟基甘草西定及其异构体甘草西定及其异构体双氢甘草西定及其异构体 (2) 依据中国药典 2015 年版甘草项下的定量测定方法, 测定了 14 批甘草药材甘草苷甘草酸的量结果表明 14 批次其中 2 批次甘草酸的量不符合药典规定, 其余各批均符合药典规定各批次间甘草苷甘草酸的量差异较大 (3) 建立 HPLC 指纹图谱共有模式, 为甘草药材的质量评价提供了依据对 14 批甘草进行相似度评价, 结果表明收集的药材多数质量较好, 有个别质量较差的情况存在建立的甘草药材指纹图谱方法稳定可靠重现性好, 为原料甘草的真伪鉴别及相似性判别提供评价依据 (4) 采用对照品结合液质联用法对虎杖指纹图谱中的主要特征峰进行了指认指纹图谱中 14 个主要特征峰代表的化合物为甘草 -4 - 芹糖基 -(1 2)- 葡萄糖苷甘草苷 5- 羟基甘草素 -6 - 乙酰基 - 葡萄糖苷酸芹糖基 - 甘草苷新甘草黄苷新异甘草黄苷甘草素甘草皂苷 G 甘草宁 N 乌拉尔宁异甘草黄酮醇甘草宁 I 甘草宁 M 甘草西定及其异构体 3 复方中药质量控制模式的建立中药质量控制及质量标准的根本目的是对中药的有效性安全性及质量的一致性进行有效的控制因此, 质量控制指标与其安全性有效性的关联度至关重要中药成分复杂, 各成分具有不同的生物活性, 各成分之间在疾病生命系统中表现复杂的关联规律, 体现多重药理功效特点, 这也是中药复方配伍原理和中药干预疾病的特色和优势的核心所在因此, 建立复方中药质量控制的科学模式, 首先要通过中药化学物质组与其生物效应表达相关性研究, 确定质量控制的核心指标, 进而以质量要素完整性表达的技术方法建立系统全面的质量控制体系复方中药质量研究模式见图 2 在对疏风解毒胶囊药效作用及作用机制研究药效物质基础研究血中移行成分研究网络药理学研究和有效成分体内代谢研究的基础上, 确定质量控制指标, 建立了多指标成分定量测定方法和指纹图谱方法, 对该药质量标准进行全面提升 4 疏风解毒胶囊质量标准提升研究 4.1 疏风解毒胶囊化学成分分析及药效物质基础的确定选用与疏风解毒胶囊功能主治相吻合的体外抗中成药药效物质基础作用机制研究 HPLC/Q-TOF-MS 快速制备分离化学物质组药理评价动物模型离体器官模型血清药物化学有效化学物质作用机制细胞模型有效化学物质 - 靶点 - 通路网络明确药效物质基础明确作用机制明确质量控制指标建立多维质量控制方法图 2 复方中药质量研究模式 Fig. 2 Quality research mode of compound Chinese materia medica

7 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月 2033 炎药理模型, 对疏风解毒胶囊指纹图谱与体外抗炎药效作用进行了有效成分分析及药效物质基础的研究, 结果表明其中 10 个色谱峰对应的化学成分对核因子 -κb(nf-κb) 表达有显著的抑制作用, 通过 HPLC-MS 进行指认, 确定了 10 个色谱峰对应的化学成分为连翘酯苷 E 戟叶马鞭草苷马鞭草苷连翘酯苷 A 毛蕊花糖苷异连翘酯苷 A 连翘苷 3- 羟基光甘草酚牡荆苷大黄素, 这为确定疏风解毒胶囊的药效物质基础和质量控制研究提供参考依据 4.2 疏风解毒胶囊多指标成分定量测定依据筛选鉴定疏风解毒胶囊中潜在的抗炎活性成分, 明确其抗炎药效物质基础主要有苯乙醇苷类 ( 连翘酯苷 E 连翘酯苷 A 异连翘酯苷 A 毛蕊花糖苷 ) 环烯醚萜苷类( 戟叶马鞭草苷马鞭草苷 ) 木脂素类 ( 连翘苷 ) 黄酮类(3- 羟基光甘草酚牡荆苷 ) 和蒽醌类 ( 大黄素 ) 化合物在此基础上建立了疏风解毒胶囊 HPLC 多指标成分定量测定方法, 在同一色谱条件下同时测定虎杖苷大黄素连翘酯苷 A 戟叶马鞭草苷马鞭草苷毛蕊花糖苷甘草酸 7 个有效成分, 该方法简便快捷重复性好可同时测定 7 种成分建立了基于有效性的疏风解毒胶囊定量控制标准, 以保证其有效性和稳定均一性对近年的 14 批疏风解毒胶囊中的 7 种成分进行了测定 4.3 疏风解毒胶囊指纹图谱研究建立了疏风解毒胶囊指纹图谱质量控制分析方法, 采用所建立的方法对 14 批疏风解毒胶囊样品进行了指纹图谱测定, 采用相似度聚类分析及主成分分析等数据处理方法对指纹图谱的模式识别研究, 确定 22 个共有峰, 以 21 号峰为参照物峰计算其相对保留时间和相对峰面积, 稳定性试验重现性试验和精密度试验 RSD 值均在 5% 以下 ; 该方法稳定可靠专属性强重现性好通过疏风解毒胶囊全方药材及相应的阴性样品指纹图谱进行对照研究, 对疏风解毒胶囊 HPLC 指纹图谱 22 个共有特征峰中的 20 个特征峰的来源进行了归属, 其中来自于虎杖 8 个连翘 6 个马鞭草 3 个败酱草 1 个甘草 2 个 ; 通过采用对照品及采用 HPLC-MS 法对色谱峰进行了指认, 分别为大黄酚大黄素 -8-O- 葡萄糖苷大黄酸连翘酯苷 E 戟马鞭草苷马鞭草苷虎杖苷甘草苷连翘酯苷 A 羟基化连翘酯苷 A 毛蕊花糖苷异连翘酯苷 A 白藜芦醇 3- 羟基光甘草酚牡荆苷 gancaonin G 异甘草苷甘草素芒柄花素 uralenol 大黄素芦荟大黄素综上所述, 本研究从质量要素完整性表达及质量控制全过程的角度, 通过化学成分研究药效物质基础及质控指标的确定多指标定量测定指纹图谱等质控手段和方法, 建立了从药材到成品的全过程的质量控制体系, 对疏风解毒胶囊质量标准进行了全面的提升参考文献 [1] 李文. 疏风解毒胶囊治疗小儿急性上呼吸道感染的疗效观察 [J]. 现代药物与临床, 2015, 30(9): [2] 胡蓉, 王丽华, 张珺珺, 等. 疏风解毒胶囊治疗急性咽炎风热证的临床观察 [J]. 药物评价研究, 2014, 37(5): [3] 张铁军, 王文燕. 物种概念及其在中药研究中的作用和意义 [J]. 世界科学与技术中药现代化, 2004, 6(3): 1-8. [4] 张铁军. 中药质量认识与质量评价 [J]. 中草药, 2011, 42(1): 1-9. [5] 肖小河, 王伽伯, 代春美, 等. 面向临床的中药标准化研究 [J]. 世界科学与技术中药现代化, 2010, 12(4):

2020 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月虽然疏风解毒胶囊为治疗急性上呼吸道感染的重要中药品种, 已有药效及临床研究证实其确有疗效, 但迄今为止, 其药效物质基础不清作用机制尚不明确, 因此, 有必要

2020 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月虽然疏风解毒胶囊为治疗急性上呼吸道感染的重要中药品种, 已有药效及临床研究证实其确有疗效, 但迄今为止, 其药效物质基础不清作用机制尚不明确, 因此, 有必要中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月 2019 疏风解毒专栏疏风解毒胶囊药效物质基础及作用机制研究张铁军 1, 朱月信 2, 刘岱琳 3, 白钢 4, 许浚 1, 韩彦琪 1, 刘素香 1. 天津药物研究院, 天津 300193 2. 安徽济人药业有限公司, 安徽亳州 236800 3. 中国人民武装警察部队后勤学院,

2028 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月 黄素定量测定, 而本品由 8 味中药组成, 成分复杂, 质量控制手段和质控指标尚处在较简单的初级阶段, 已严重制约了本产品的市场拓展 临床应用以及国际化进程,

2028 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 12 期 2016 年 6 月黄素定量测定, 而本品由 8 味中药组成, 成分复杂, 质量控制手段和质控指标尚处在较简单的初级阶段, 已严重制约了本产品的市场拓展临床应用以及国际化进程,