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娱缚宋
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1 2015 年 10 月 Vol.33 No.10 October 2015 Chinese Journal of Chromatography 1032 ~ 1039 研究论文 DOI: / SP.J 高效液相色谱串联质谱法同时测定银杏保健茶中的 16 种黄酮类功效成分蒋娅兰 1,2, 黄芳 3, 毋福海 2, 吴惠勤 3, 黄晓兰 3 3, 邓欣 (1. 广东药学院中药学院, 广东广州 ; 2. 广东药学院公共卫生学院, 广东广州 ; 3. 中国广州分析测试中心, 广东省分析测试技术公共实验室, 广东广州 ) 摘要 : 建立了银杏保健茶中 16 种黄酮类物质的液相色谱串联质谱 ( LC MS / MS) 测定方法 16 种黄酮成分分别为儿茶素牡荆素葛根素大豆苷元水飞蓟宾槲皮素木犀草素芹菜素柚皮素橙皮素二氢查尔酮山柰酚橙皮素异鼠李素黄芩素川陈皮素桔皮素实验优化了液相色谱条件和质谱参数采用 C 18 柱分离, 流动相为乙腈水 ( 含 0 1% 甲酸 ) 梯度洗脱, 流速 0 25 ml / min, 以电喷雾离子源正离子多反应监测 ( MRM) 模式进行 MS / MS 检测 16 种黄酮类物质在各自的线性范围内具有良好的线性关系, 相关系数大于 0 996, 低中高 3 个添加水平的平均回收率在 70 9% ~ 100 0% 之间, 相对标准偏差小于 10% 通过检测发现实际样品中 9 种黄酮物质含量较高, 分别是 : 山柰酚槲皮素橙皮素牡荆素木犀草素儿茶素芹菜素柚皮素异鼠李素, 占总量的 99 6%, 此 9 种物质可作为银杏保健茶的质量控制指标本法简便快速准确可靠, 可用于控制银杏保健茶的质量关键词 : 液相色谱串联质谱 ; 黄酮 ; 银杏保健茶中图分类号 :O658 文献标识码 :A 文章编号 : (2015) Simultaneous determination of 16 flavonoids in the ginkgo dietary supplement tea by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry JIANG Yalan 1,2, HUANG Fang 3, WU Fuhai 2, WU Huiqin 3, HUANG Xiaolan 3, DENG Xin 3 (1. College of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou , China; 2. School of Public Health, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou , China; 3. Guangdong Provincial Public Laboratory of Analysis and Testing Technology, China National Analytical Center (Guangzhou), Guangzhou , China) Abstract: A method for the determination of 16 functional components of ginkgo dietary sup plement tea such as catechin, vitexin, puerarin, isoflavoues aglycone, silymarin, quercetin, luteolin, apigenin, naringenin, hesperitin dihydrochalcone, kaempferol, hesperitin, isorhamne tin, baicalein, nobiletin and tangeretin by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry ( HPLC MS / MS) was proposed. The conditions of chromatography and mass spectrometry were optimized. The 16 flavonoids were separated on a C 18 chromatographic col umn with acetonitrile and water (additional 0 1% formic acid) as mobile phases under gradient elution at a flow rate of 0 25 ml / min. The determination was conducted by tandem mass spec trometry in positive ESI mode under multiple reaction monitoring ( MRM) mode. Good lineari ties for all the compounds, with correlation coefficients over 0 996, were acquired. The recov eries were in the range of 70 9% to 100 0% ( n = 6), while the relative standard deviations ( RSDs ) were less than 10%. The results showed that the nine flavonoids, which were kaempferol, quercetin, hesperitin, vitexin, luteolin, catechin, apigenin, naringenin and isorh amnetin, were higher in contents among the 16 flavonoids in real samples, and they constituted 通讯联系人.E mail:fuhaiwu@ 163.com. 基金项目 : 广东省科技成果转化启动项目 (2011A ). 收稿日期 :

2 第 10 期蒋娅兰, 等 : 高效液相色谱串联质谱法同时测定银杏保健茶中的 16 种黄酮类功效成分 1033 up to 99 6% of the total flavonoids. The contents of these nine flavonoids can be considered as the quality control index of the ginkgo dietary supplement tea. The method proved to be rapid, selective, sensitive and stable, and it can be applied to control the quality of the ginkgo dietary supplement tea. Key words: liquid chromatography tandem mass spectrometry ( LC MS / MS); flavonoids; gink go dietary supplement tea 银杏叶为银杏科植物银杏 ( Ginkgo biloba L.) 的干燥叶, 味甘苦涩, 性平, 归心肺经 ; 具有活血化瘀通络止痛敛肺平喘化浊降脂的功效用于瘀血阻络胸痹心痛中风偏瘫肺虚咳喘和高脂血症银杏保健茶是一种具有保健功能的茶叶, 采用红茶作基茶, 将银杏叶提取物采用科学方法调配至茶叶中, 在保证原茶叶的外观风味不变的情况下, 使茶叶的营养更加丰富, 能起到更好的保健作用, 具有改善记忆力清除氧自由基改善心脑循环延缓衰老的作用, 且质量稳定, 副作用小, 可长期食用银杏叶提取物的有效成分主要为黄酮类化合物 (flavonoids), 茶叶中也含有黄酮类化合物黄酮类化合物具有多方面的生物活性, 如儿茶素具有抗脂肪肝作用及抗癌和维生素 P 样作用 [1] ; 牡荆素具有活血化瘀理气通脉之功效, 还是防癌抗肿瘤的天然药物成分 ; 木犀草素和黄芩素具有抗菌降压和清热解毒的作用 ; 槲皮素山柰酚异鼠李素柚皮素橙皮素具有抗氧化抗炎症抗癌等生物活性 [2-5] 黄酮类化合物是自然界存在的一大类物质, 其种类多, 在植物体内大部分与不同的糖结合成苷, 因此使得其更加复杂多样, 不易测定, 建立合理的测定方法是分析工作中的难题目前常用黄酮类物质的测定方法有分光光度法 [6] 高效液相色谱法 (HPLC) [7,8] 液相色谱质谱联用法 [9,10] 分光光度法只能测定总黄酮的含量, 原理是通过颜色反应后比色定量, 实际测试过程中由于杂质干扰严重, 导致定量准确性差重现性低 ; 高效液相色谱法大多只对少数几种黄酮进行定量, 且分离度要求高 ; 有文献采用液相色谱质谱联用研究黄酮类物质, 但多数只着重于槲皮素山柰酚异鼠李素儿茶素等少数几种成分的定性鉴别或结构确证 [11] 本研究对常见的功效明确的 16 种黄酮及黄酮苷元 ( 见表 1), 建立了液相色谱串联质谱 ( LC MS / MS) 同时测定该类物质的方法, 目前未见报道通过测定发现银杏保健茶中含量较高的 9 种成分为山柰酚槲皮素橙皮素牡荆素木犀草素儿茶素芹菜素柚皮素异鼠李素, 选择这 9 种成分作为质控指标符合现代保健品及中成药多指标质量控制要求该方法快速准确抗干扰力强, 可用来监测保健茶的稳定性及控制银杏保健茶的质量 No. 表 1 16 种黄酮的分子式和相对分子质量 Table 1 Molecular formulae and relative molecular masses of the 16 flavonoids Component Molecular formula Relative molecular mass 1 catechin C 15 H 14 O puerarin C 21 H 20 O vitexin C 21 H 20 O isoflavoues aglycone C 15 H 10 O luteolin C 15 H 10 O quercetin C 15 H 10 O silymarin C 25 H 22 O apigenin C 15 H 10 O naringenin C 15 H 12 O hesperitin dihydrochalcone C 16 H 16 O kaempferol C 15 H 10 O hesperitin C 16 H 14 O isorhamnetin C 16 H 12 O baicalein C 15 H 10 O nobiletin C 21 H 22 O tangeretin C 20 H 20 O 实验部分 1.1 仪器与试剂 Agilent 1200 LC / 6410B MS 液相色谱 / 串联四极杆质谱联用仪 ( 美国 Agilent 公司 ); Sartorious BP2HD 电子天平 ( 美国 Sartorious 公司 );HWS12 型水浴锅 ( 上海一恒科技仪器有限公司 ) 对照品 : 儿茶素 ( 批号 , 纯度 97 2%) 葛根素 ( 批号 , 纯度 95 5%) 牡荆素 ( 批号 , 纯度 100%) 大豆苷元 ( 批号 , 纯度 95 0%) 木犀草素 ( 批号 , 纯度 100%) 槲皮素 ( 批号 , 纯度 100%) 水飞蓟宾 ( 批号 , 纯度 100%) 芹菜素 ( 批号 , 纯度 98%) 山柰酚 ( 批号 , 纯度 98 1%) 橙皮素 ( 批号 , 纯度 95 1%) 异鼠李素 ( 批号 , 纯度 99 0%) 黄芩素 ( 批号 , 纯度 97 8%) 均购自中国药品生物制品检定所 ; 川陈皮素 ( 纯度

3 1034 色谱第 33 卷 98%) 桔皮素( 纯度 98%) 和柚皮素 ( 纯度 100%) 橙皮素二氢查尔酮 ( 纯度 >95%) 购自金测分析技术 ( 天津 ) 有限公司 ; 银杏保健茶 ( 批号 : ) 购自广州悦榕医药科技有限公司 ; 乙腈为色谱纯 ( 德国 Mer ck 公司 ); 甲酸为 LC MS 级 ( 美国 Sigma 公司 ); 甲醇盐酸为分析纯 ( 广州化学试剂厂 ); 实验用水为二次蒸馏水 1.2 对照品溶液的配制分别取各对照品适量, 用甲醇溶解制成质量浓度约 500 mg / L 的对照品储备液, 置于冰箱 2-8 保存 (2 个月内使用 ), 临用时用甲醇将上述储备液稀释为 8 种不同浓度的混合对照品溶液 1.3 供试品溶液的制备实验参考了中国药典 2010 年版一部中银杏叶提取物项下总黄酮苷的测定方法取本品中粉约 0 1 g, 精密称定, 置于 50 ml 圆底烧瓶中, 精密加入甲醇 25% 盐酸溶液 (4 1, v / v) 混合溶液 10 ml, 摇匀,90 加热回流 60 min, 放冷, 过滤, 精密量取续滤液 4 ml 至 10 ml 容量瓶中并加甲醇至刻度, 摇匀, 过 0 20 μm 微孔滤膜, 滤液供 HPLC MS / MS 测定 1.4 测定方法色谱条件色谱柱 :Agilent Zorbax C 18 色谱柱 (100 mm 2 1 mm, 2 μm); 流动相 :A 为乙腈,B 为 0 1% (v / v, 下同 ) 甲酸水溶液 ; 梯度洗脱程序 :0 ~ 4 min, 15% A ~ 60% A; 4 ~ 6 min, 60% A ~ 80% A; 6 ~ 7 min, 80% A ~ 15% A; 7 ~ 12 min, 保持 15% A 流速为 0 25 ml / min; 采集时间为 12 min; 柱温为 30 ; 进样量为 2 μl 质谱条件电喷雾 (ESI) 离子源, 正离子电离模式 ; 干燥气 (N 2 ) 温度 350, 流量 10 L / min; 雾化气 (N 2 ) 压力 kpa; 电喷雾电压 V; 扫描方式为多反应监测 (MRM) 模式, 各成分的质谱分析参数见表 2 No. Table 2 Component 表 2 16 种黄酮成分的保留时间及质谱分析参数 Retention times and HPLC MS / MS parameters of the 16 flavonoids Retention time / min Parent ion (m / z) Daughter ion (m / z) Collision energy / V Fragmentor voltage / V 1 catechin puerarin vitexin isoflavoues aglycone luteolin quercetin silymarin apigenin naringenin hesperitin dihydrochalcone kaempferol hesperitin isorhamnetin baicalein nobiletin tangeretin Quantitative ion.

4 第 10 期蒋娅兰, 等 : 高效液相色谱串联质谱法同时测定银杏保健茶中的 16 种黄酮类功效成分标准曲线取对照品储备液适量, 用甲醇配制质量浓度分别为 mg / L 的系列混合对照品溶液 ( 现配现用 ), 上机测定以定量离子峰面积为纵坐标, 对照品溶液浓度为横坐标, 绘制标准曲线样品测定后以定量离子峰面积为指标, 标准曲线法定量 2 结果与讨论 2.1 分析方法的选择本研究曾试验采用分光光度法测定保健茶中的总黄酮 [12], 结果发现, 用芦丁作对照品时, 采用不同提取溶剂 (70% 乙醇 50% 乙醇 30% 乙醇 ) 提取聚酰胺柱净化, 得到的结果相差 5 倍之多分光光度法前处理过程长, 结果不稳定, 难以控制产品质量试验还参考中国药典 2010 年版一部中银杏叶提取物项下测定总黄酮醇 ( 包括槲皮素山柰酚和异鼠李素 ), 通过测定 3 种物质含量的和乘以系数 2 51 得到总黄酮醇, 该法只能测定这 3 种物质, 不能全面地反映保健茶的质量 ; 本法将样品水解后使不同结合态的黄酮苷转变成几种常见的苷元形式, 再用液相色谱质谱联用法测定, 能定量多种黄酮类物质, 覆盖面广比如测定水解液中的一种橙皮素, [13] 就代表原液中的橙皮苷新橙皮苷以及其他以橙皮素为苷元结合其他糖类的黄酮化合物, 具有典型的代表性 2.2 色谱条件的优化 16 种黄酮类化合物的结构相似, 需要选择合适的色谱柱将其分离, 尤其是其中 3 对同分异构体木犀草素和山柰酚 (m / z 287) 芹菜素和黄芩素 (m / z 271) 槲皮素和橙皮素 (m / z 303) 的分离, 试验分别试用了不同型号的色谱柱 :Thermo C 8 ( 150 mm 2 1 mm, 2 μm) Thermo C 18 (150 mm 2 1 mm, 2 μm) 和 Agilent Zorbax C 18 ( 100 mm 2 1 mm, 2 μm) 色谱柱, 结果 ( 见图 1) 显示 :Agilent Zorbax C 18 色谱柱对于各种物质的分离效果比较理想对比了 A B C 3 种流动相体系 (A: 乙腈 0 1% 甲酸水溶液 ; B: 乙腈 0 1% 甲酸水溶液 ( 含甲酸铵 10 mmol / L); C: 甲醇 0 1% 甲酸水溶液 ( 含甲酸铵 10 mmol / L)), 结果表明, 使用 A 体系时各物质灵敏度高检出限低, 检出限最低的川陈皮素和橘皮素能达到 0 1 μg / L; 使用 B 体系时异构体橙皮素和槲皮素不能分离 ; 使用 C 体系作流动相时槲皮素的检出限只能达到 0 1 mg / L; 综合以上各因素, 得到最佳色谱条件为 :Agilent Zorbax C 18 色谱柱, 乙腈 0 1% 甲图 1 3 种不同色谱柱分离的总离子流图 Fig. 1 TIC of three kinds of column a. Thermo C 8 (150 mm 2 1 mm, 2 μm); b. Thermo C 18 (150 mm 2 1 mm, 2 μm); c. Agilent Zorbax C 18 (100 mm 2 1 mm, 2 μm). 1. catechin; 2. puerarin; 3. vitexin; 4. isoflavoues aglycone; 5. luteolin; 6. quercetin; 7. silymarin; 8. apigenin; 9. naringe nin; 10. hesperitin dihydrochalcone; 11. kaempferol; 12. hes peritin; 13. isorhamnetin; 14. baicalein; 15. nobiletin; 16. tan geretin. 酸水溶液为流动相, 梯度洗脱在此条件下检测得到 16 种黄酮的 MRM 图如图 2 所示, 其中木犀草素以保留时间为 5 94 min 的峰进行定量 ; 槲皮素以保留时间为 6 02 min 的峰进行定量 ; 山柰酚以保留时间为 6 54 min 的峰进行定量混合对照品溶液的 16 种黄酮的总离子流色谱图以及样品溶液的 16 种黄酮的总离子流色谱图分别如图 3a 图 3b 所示, 由于 16 种黄酮中有 3 对同分异构体, 化学结构相似, 因此要达到很好的分离度较难 ; 另外, 由于这 3 对同分异构体的相对分子质量接近, 所以保留时间集中在 6 5 ~ 7 0 之间, 对于其中相同的定量离子根据不同的保留时间来区分, 如 : 木犀草素和山柰酚的定量碎片离子均为 m / z 287>153, 而木犀草素的保留时间为 5 94 min, 山柰酚的保留时间为 6 54 min, 从而加以区分 ( 图 3a 和图 3b 中峰 1 和峰 2 的保留时间稍有不同可能是因为本底基质效应或者本底响应值的差异导致的 )

5 1036 色谱第 33 卷图 2 16 种黄酮类化合物的 MRM 谱图 Fig. 2 MRM chromatograms of the 16 flavonoids 1. catechin; 2. puerarin; 3. vitexin; 4. isoflavoues aglycone; 5. luteolin (retention time, 5 94 min); 6. quercetin (retention time, 6 02 min); 7. silymarin; 8. apigenin; 9. naringenin; 10. hesperitin dihydrochalcone; 11. kaempferol(retention time, 6 54 min); 12. hesper itin; 13. isorhamnetin; 14. baicalein; 15. nobiletin; 16. tangeretin. 图 3 (a)16 种黄酮类化合物混合标准溶液及 (b) 样品溶液的总离子流色谱图 Fig. 3 TIC of (a) a mixed standard solution of the 16 flavonoids and (b) a sample solution 1. catechin; 2. puerarin; 3. vitexin; 4. isoflavoues aglycone; 5. luteolin; 6. quercetin; 7. silymarin; 8. apigenin; 9. naringenin; 10. hes peritin dihydrochalcone; 11. kaempferol; 12. hesperitin; 13. isorhamnetin; 14. baicalein; 15. nobiletin; 16. tangeretin.

6 第 10 期蒋娅兰, 等 : 高效液相色谱串联质谱法同时测定银杏保健茶中的 16 种黄酮类功效成分质谱条件的优化黄酮类化合物主要是基本母核为 2 苯基色原酮的一系列化合物, 母核上有 -OH, -OCH 3 等不同取代基, 而且结构中具有碱性氧原子, 因此选用 ESI + 作为离子化模式,16 种黄酮均易得到一个质子形成 [M+H] + 准分子离子峰, 作为母离子分别对母离子进行碰撞诱导解离, 以获得二次碎裂产生的子离子分别选择离子丰度高基线噪声低的两对离子对作为定性离子对, 选择其中离子丰度最高的离子对作定量离子对 ; 在此基础上逐个优化了对灵敏度影响较大的碰撞能量和源内碎裂电压, 使选定的子离子组成的特征离子的丰度和比例达到最佳最后得到优化后的参数见表样品前处理与基质效应的考察为了使测定的黄酮类物质覆盖面广, 前处理采用 2 mol / L 的盐酸水解, 可将多种结合态的黄酮转化成黄酮苷元后测定采用处理后加标法考察了基质效应 [14,15], 以加标后测出浓度对应加入浓度计算基质效应, 结果发现基质对部分黄酮成分有一定的抑制效应, 但基质抑制效应均 <10%, 可能是由于各物质达到充分分离以及样品是稀释了 250 倍之后检测, 所以基质对目标物质定量影响不大, 因此本方法可以不考虑基质效应对定量的影响 2.5 线性范围检出限和定量限将上述质量浓度为 mg / L 的 16 种混合对照品溶液分别在最优条件下测定, 得出 16 种物质浓度与峰面积的关系, 以 S / N = 3 确定方法的检出限, 以 S / N = 10 确定方法的定量限, 检出限定量限及线性回归方程等参数见表 3 Table 3 表 3 16 种黄酮类化合物的线性方程线性范围相关系数检出限和定量限 Linear regression equations, linear ranges, correlation coefficients, LODs and LOQs of the 16 flavonoids No. Component Regression equation Linear range / (mg / L) Correlation coefficient LOD / (mg / L) LOQ / (mg / L) 1 catechin y = 9168x puerarin y = x vitexin y = 17959x isoflavoues aglycone y = 79789x luteolin y = 31173x quercetin y = 10793x silymarin y = 8742x apigenin y = 60510x naringenin y = 14815x hesperitin dihydrochalcone y = 52225x kaempferol y = 7321x hesperitin y = 17330x isorhamnetin y = 16413x baicalein y = 24750x nobiletin y = x tangeretin y = x y: peak area; x: mass concentration, mg / L. 2.6 回收率精密度和稳定性取约 0 11 g 到 0 12 g 的银杏保健茶样品 ( 批号 :130411), 精密称定, 水解前分别添加 mg / L 3 种水平的标准溶液 1 ml, 每个浓度平行做 6 个样品, 按 1 3 节方法处理, 分别进行加标回收试验和精密度试验, 取 6 次测定的平均值,16 种黄酮成分在 3 种不同添加浓度下的回收率都在 70 9% ~ 100 0% 之间,RSD<10% ( 见表 4) 取对照品溶液在一日内的不同时间点 ( 共 6 个时间点, 间隔控制在 4 h) 测定和在不同日期 (3 天内的同一时间 ) 测定, 除了儿茶素只在 12 h 内稳定以外, 其他黄酮类成分的日内 RSD 均小于 5 0%, 日间 RSD 均小于 10%; 另取水解后的样品溶液在一日内的不同时间点 ( 共 6 个时间点, 间隔控制在 4 h) 测定,16 种黄酮类成分的 RSD 值均小于 10%, 满足定量分析要求 2.7 产品的质量控制采用该方法检测了 6 批保健茶产品银杏保健茶 ( 批号 : ), 检测数据见表 5 结果显示 6 批银杏保健茶的 16 种黄酮类成分的总含量均在 0 8% 左右, 山柰酚槲皮素橙皮素牡荆素木犀草素儿茶素芹菜素柚皮素异鼠李素 9 种主要成分均占 16 种黄酮成分的 99 5% 以上, 说明该 6 批银杏保健茶质量优良稳定性好

7 1038 色谱第 33 卷表 4 16 种黄酮成分的加标回收率及 RSD (n = 6) Table 4 Recoveries and RSDs of the 16 flavonoids (n = 6) No. Component Background / (μg / g) Added / μg Found / μg Average recovery / % RSD / % 1 catechin puerarin vitexin isoflavoues aglycone luteolin quercetin silymarin apigenin naringenin hesperitin dihydrochalcone kaempferol hesperitin isorhamnetin baicalein nobiletin tangeretin

8 第 10 期蒋娅兰, 等 : 高效液相色谱串联质谱法同时测定银杏保健茶中的 16 种黄酮类功效成分 1039 表 5 6 批样品的 16 种黄酮成分的含量 Table 5 Contents of the 16 flavonoids in six batches of samples No. Component Contents / (μg / g) catechin puerarin ND vitexin isoflavoues aglycone luteolin quercetin silymarin apigenin naringenin hesperitin dihydrochalcone kaempferol hesperitin isorhamnetin baicalein nobiletin tangeretin Sum / ( μg / g) Proportion of the major nine flavonoids / % ND: not detected. 3 结论本文建立了液相色谱串联质谱法同时测定银杏保健茶中儿茶素牡荆素葛根素大豆苷元水飞蓟宾槲皮素木犀草素芹菜素柚皮素橙皮素二氢查尔酮山柰酚橙皮素异鼠李素黄芩素川陈皮素桔皮素等 16 种黄酮类物质本法简便快速准确可靠, 可用来控制银杏保健茶的质量最终选择含量较高的山柰酚槲皮素橙皮素牡荆素木犀草素儿茶素芹菜素柚皮素异鼠李素 9 种成分作为质控指标, 建立银杏保健茶的质量控制标准, 符合现代中药复方多成分多指标质量控制的理念参考文献 : [1] Zhou B, Wang L, Li W, et al. Chinese Journal of Analytical Chemistry ( 周蓓, 王琳, 李伟, 等. 分析化学 ), 2008, 36 (4): 494 [2] Wohlmuth H, Savage K, Dowell A, et al. Phytomedicine, 2014, 21: 912 [3] Chen Z P, Sun J, Chen H X, et al. Fitoterapia, 2010, 81: 1045 [4] Chi Y M, Li Y, Zhang Y, et al. Chinese Journal of Chroma tography ( 池玉梅, 李瑶, 张瑜, 等. 色谱 ), 2013, 31 ( 9): 838 [5] Sun Y N, Li T, Ma C. Chinese Journal of Chromatography ( 孙亚男, 李彤, 马辰. 色谱 ), 2013, 31(5): 447 [6] Zheng H S, Li J P, Han W, et al. Chinese Traditional Patent Medicine ( 郑杭生, 李计萍, 韩炜, 等. 中成药 ), 2008, 30 (9): 1364 [7] Xiong D M, Deng Z Y, Liu R, et al. Food Science ( 熊冬梅, 邓泽元, 刘蓉, 等. 食品科学 ), 2009, 30(22): 256 [8] Zeng L, Zeng F J, Wang W, et al. Food Research and Devel opment ( 曾里, 曾凡骏, 王威, 等. 食品研究与开发 ), 2008, 29(6): 85 [9] He C M, Cheng Z H, Chen D F. Chinese Journal of Natural Medicines ( 何常明, 程志红, 陈道峰. 中国天然药物 ), 2013, 11(6): 690 [10] Liu M Y, Yao Z H, Zhang Y, et al. Journal of Instrumental Analysis ( 刘明艳, 姚志红, 张依, 等. 分析测试学报 ), 2011, 30(9): 1006 [11] Lin Z Y, Yang R F, Tang Y N. China Pharmacist ( 林志燕, 杨荣富, 唐跃年. 中国药师 ), 2014, 17(8): 1292 [12] Wang G Y. Detection Method of Health Food Ingredients. Beijing: China Light Industry Press ( 王光亚. 保健食品功效成分检测方法. 北京 : 中国轻工业出版社 ), 2002: 29 [13] Zhou D Y, Xu Q, Xue X Y, et al. Chinese Journal of Ana lytical Chemistry ( 周大勇, 徐青, 薛兴亚, 等. 分析化学 ), 2006, 34(9): 31 [14] Xiang P, Shen M, Zhuo X Y. Journal of Instrumental Analy sis ( 向平, 沈敏, 卓先义. 分析测试学报 ), 2009, 28( 6): 753 [15] Zhang Y, Yao Z H, Qin Z F, et al. Journal of Jinan Univer sity: Natural Science & Medicine Edition ( 张依, 姚志红, 秦子飞, 等. 暨南大学学报 : 自然科学与医学版 ), 2012, 33 (3): 305

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.