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莺贩易
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1 2010 年第 68 卷化学学报 Vol. 68, 2010 第 21 期, 2191~2198 ACTA CHIMICA SINICA No. 21, 2191~2198 研究论文具抗凝血作用的铁铜三元配合物与人血清白蛋白的相互作用宋玉民 * 刘哲王坤杰栾妮娜 ( 西北师范大学化学化工学院兰州 ) 摘要采用光度法研究了具抗凝血作用的过渡金属铁和铜的华法灵水杨酸三元配合物与人血清白蛋白的相互作用, 观察到铁铜三元配合物使人血清白蛋白荧光产生猝灭现象, 猝灭方式为静态猝灭, 并计算了配合物与人血清白蛋白的结合常数和结合位点数. 根据不同温度下的热力学函数, 确定了配合物与人血清白蛋白的作用力类型. 并且发现三元配合物的存在明显改变人血清白蛋白的构象. 并讨论了配合物使人血清白蛋白构象发生变化的可能原因. 关键词铁铜华法灵水杨酸三元配合物 ; 人血清白蛋白 ; 荧光光谱 ; 紫外吸收光谱 ; 圆二色谱 Interaction of the Ternary Complexes with Anticoagulant Property of Iron, Copper with Human Serum Albumin Song, Yumin* Liu, Zhe Wang, Kunjie Luan, Nina (College of Chemistry and Chemical Engineering, Northwest Normal University, Lanzhou ) Abstract The interaction between human serum albumin and transition metals iron complexes of warfarinanion salicylic acid ternary complexes with anti-cruor function has been studied by spectrophotometry. It was observed that transition complexes of iron and copper can reduce the fluorescence intensity of human serum albumin. The way of fluorescence quenching was static quenching, and then calculated the binding constant and binding sites. The style of action of human serum albumin with complexes was gained according to the thermodynamic functions at different temperatures. And found that iron and copper complexes have obviously changed the conformation of human serum albumin. The possible reason for which the complex makes serum albumin conformational changes is discussed. Keywords ternary complexes of iron, copper with warfarinanion and salicylic acid; human serum albumin; fluorescence; UV spectra; circular dichroism 随着新世纪的到来, 人类社会开始进入老龄化阶段, 而脑血栓是老年人的一种常见疾病, 这是因为老年人血液粘度高, 从而导致血液流速减慢, 这就非常容易使血液中的血小板胆固醇纤维蛋白等物质在血管壁上形成沉淀导致血栓. 故对抗凝血药物的研究早已是药物学家研究的重点领域. 具抗凝血作用的金属配合物的合成和功能性质研究也成为化学家关注的研究课题. 前期我们研究了一些过渡金属华法灵配合物过渡金属水杨酸配合物过渡金属华发灵水杨酸三元配合物稀土华发灵水杨酸三元配合物和稀土半胱氨酸枸橼酸钠三元配合物的抗凝血功效 [1~3]. 结果表明, 配合物的抗凝血效果均比配体好, 三元配合物的抗凝血效果比二元配合物的抗凝血效果好. 目前对于抗凝血配合物的抗凝血机理的探讨文献不多, 而为探讨抗凝血作用机理, 研究抗凝血配合物与血清蛋白相互作用的报道, 更为少见. 为了探讨配体和配合物抗凝血作用的机理, 提供一些对合成抗凝血效果好毒性低水溶性好的药物有参考意义的实验基础, 本文报道了对过渡金属铁和铜的华 * songym@nwnu.edu.cn Received December 11, 2009; revised April 3, 2010; accepted July 6, 甘肃省自然科学基金 (No. 0710JRZA108) 和甘肃省高分子材料重点实验室资助项目.

2 2192 化学学报 Vol. 68, 2010 法灵水杨酸三元配合物与人血清白蛋白 (HSA) 相互作用的研究. 因为人血清白蛋白大量存在于血浆中, 可以和很多物质如金属离子脂肪酸氨基酸代谢物胆红素酶激素等相结合, 然后进行存储和运输, 是人体中非常重要的载体蛋白, 它也是血栓形成的成分之一. 研究结果表明配合物对人血清白蛋白荧光产生猝灭现象, 猝灭方式为静态猝灭, 计算了配合物与人血清白蛋白的结合常数 K 和结合位点数 n. 并且发现金属配合物的存在可引起 HSA 的构象发生变化, 并对 HSA 在不同浓度的水杨酸金属配合物存在时构象发生变化的原因进行了讨论. 配合物的抗凝血作用是否通过改变 HSA 的构象来实现, 而不同构象的 HSA 在血液中的溶解沉降性能是否不同, 导致血栓形成的容易与否, 本课题组的研究结果对此类的问题的探讨有一定的启示. 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 LS-55 荧光分光光度计 ( 美国 PE 公司 ); Agilent-8453 紫外分光光度计 ( 美国 Agilent 公司 ); J-810 圆二色谱仪 ( 日本 Jasco 公司 ); TB-85 型恒温器 ( 日本岛津公司 ); phs-25 型酸度计 ( 上海第二分析仪器厂 ). 人血清白蛋白为国药集团化学试剂有限公司产品 ; 过渡金属铁铜与华法灵水杨酸三元配合物 ( 自制 ) [1,2] ; 实验用水为去离子三次蒸馏水 ; 配制 10 mmol L - 1 Tris-HCl 缓冲溶液, ph=7.37( 内含 50 mmol L -1 NaCl 的溶液维持离子强度 ); 其余试剂均为分析纯. 1.2 实验方法三元配合物与 HSA 作用的荧光光谱实验所需的 HSA 溶液用 Tris-HCl 缓冲溶液配制 (c HSA = mol L -1 ), 华法灵水杨酸与过渡金属铁铜三元配合物用三次蒸馏水溶解 (c Q = mol L -1 ), 移取 2 ml mol L -1 的 HSA 溶液于 1 cm 石英比色池中, 用微量进样器分别加入不同体积的三元配合物, 分别在 20, 27, 38 和 45 下反应 5 min 后, 以 λ ex =282 nm 为激发波长, 记录 300~500 nm 波长范围的荧光光谱. 并且测定 λ=15 nm 和 λ=60 nm 时的同步荧光光谱三元配合物与 HSA 作用的紫外吸收光谱向加有 2.5 ml 的 mol L -1 HSA 溶液的 1 cm 石英吸收池中滴加不同体积的相应三元配合物 (c Q = mol L -1 ) 溶液, 以 Tris-HCl 缓冲溶液为参比, 扫描紫外吸收光谱三元配合物与 HSA 作用的圆二色谱 (CD) 室温下, 在一系列 10 ml 比色管中, 加入 2.5 ml 的 HSA (c HSA = mol L -1 ) 溶液, 然后依次加入不同体积的三元配合物溶液, 定容后充分震荡摇匀测定三元配合物与 HSA 作用的圆二色谱 ; 以相应的 Tris-HCl 缓冲溶液为参比溶液, 样品池为 1 cm 石英吸收池. 2 结果与讨论 2.1 荧光光谱图 1A, 1B 分别为铁三元配合物 (FeL 2 L' 2H 2 O) 和铜三元配合物 (CuL 2 L' 2H 2 O) (L= 华法灵离子 ; L'= 水杨酸离子 ) 对 HSA 溶液荧光影响光谱图. 以激发波长 λ ex = 282 nm 分别激发 HSA 溶液和三元配合物溶液, HSA 在 λ em =345 nm 附近有很强的荧光发射峰, 而华法灵水杨酸过渡金属铁三元配合物在波长 λ em =388 nm 铜三元配合物在波长 λ em =410 nm 附近有荧光发射峰. 图 1 三元配合物在 27 时对 HSA 溶液荧光光谱的影响 Figure 1 Effect of ternary complexes on fluorescence spectra of HSA at 27 λ ex =282 nm; c HSA = mol L -1 ; A: FeL 2 L' 2H 2 O; from a to h curves c FeL2L 2H2O (10-6 mol L -1 ): 0, 0.5, 1.0, 3.0, 5.0, 7.5, 12.5, 25.0, respectively; B: CuL 2 L' 2H 2 O; from a to h curves c CuL2L 2H2O (10-6 mol L -1 ) : 0, 1.0, 3.0, 5.0, 7.5, 10.0, 17.5, 25.0, respectively

3 No. 21 宋玉民等 : 具抗凝血作用的铁铜三元配合物与人血清白蛋白的相互作用 2193 固定 HSA 的浓度, 依次加入相应的三元配合物溶液, 随着配合物浓度的增加, HSA 在 λ em =345 nm 附近的荧光发射峰强度有规律地减弱并且发射峰位置有一定的红移, 同时在 400 nm 左右处出现了游离的三元配合物的荧光峰 ( 铁配合物, 388 nm; 铜配合物, 410 nm), 且在 370 nm 左右处有一个等发射点. HSA 溶液荧光发射峰强度的降低和等发射点的出现说明三元配合物与 HSA 发生了作用. 由于 HSA 溶液在 345 nm 附近的发射峰是色氨酸残基所产生, 而色氨酸残基的最大发射波长与它所处的环境有关, 发射波长红移表明 HSA 中的色氨酸残基周围的疏水性有所降低 [4,5]. 2.2 荧光猝灭方式荧光猝灭过程通常分为动态猝灭和静态猝灭两类 [6,7]. 动态猝灭主要是依赖于分子的扩散, 温度越高, 扩散系数越大, 猝灭常数的改变与温度成正比. 而静态猝灭, 温度升高, 基态配合物的稳定性越差, 形成常数越小 [8]. 动态猝灭是猝灭剂和荧光物质的激发态分子之间的相互作用过程. 其作用过程遵循 Stern-Volmer 方程 : 其中 F 0 为未加入猝灭剂时的荧光强度 ; F 为加入猝灭剂后的荧光强度 ; K q (L mol -1 s -1 ) 为双分子猝灭过程的速率常数 ; K q τ 0 =K sv (L mol -1 ) 称为 Stern-Volmer 猝灭常数, c Q 为猝灭剂的浓度 ; τ 0 为没有猝灭剂存在时荧光分子的平均寿命, 生物大分子的平均寿命约为 10-8 s [9] ; 静态猝灭是猝灭剂和荧光物质分子相互作用生成不发光的基态化合物, 从而导致荧光物质荧光强度降低的过程. 其荧光强度与猝灭剂浓度之间的关系与公式 (1) 是相同的, 但其常数的物理意义是基态的形成常数 [10]. 根据 (1) 式, 以 F 0 /F-1 对所加入的三元配合物浓度 c Q 作图, 得到人血清白蛋白荧光的 Stern-Volmer 猝灭曲线 ( 图 2). 由图 2 可以看出, 三元配合物 -HAS 体系在不同温度下的 Stern-Volmer 曲线都为直线, 说明配合物对 HSA 的荧光猝灭主要存在一种方式, 动态猝灭或静态猝灭 [11]. 由 (1) 式求得猝灭速率常数见表 1, 各类猝灭剂对生物大分子的最大动态猝灭常数为 L mol -1 s -1[12], 然而反应中双分子猝灭常数 K q 远大于最大动态 F 0 /F=1+K q τ 0 c Q =1+K sv c Q (1) 图 2 三元配合物 -HSA 在不同温度下的 Stern-Volmer 曲线 Figure 2 The Stern-Volmer curves of ternary complexes-hsa at different temperatures A: FeL 2 L' 2H 2 O; B: CuL 2 L' 2H 2 O;, 20 ;, 27 ;, 38 ;, 45 表 1 三元配合物 -HSA 在不同温度的 Stern-Volmer 常数 Table 1 Stern-Volmer quenching constant of K sv at different temperatures T/K K sv /(L mol -1 ) K q /(L mol -1 s -1 ) R a FeL 2 L' 2H 2 O (±0.113) (±0.069) (±0.045) (±0.082) CuL 2 L' 2H 2 O (±0.353) (±0.141) (±0.104) (±0.082) a 相关系数 ; 括号中的数据为相对偏差值.

4 2194 化学学报 Vol. 68, 2010 猝灭常数, 且随着温度的升高, K q 值明显变小, 说明铁铜三元配合物对 HSA 的荧光猝灭过程不是动态猝灭而是该三元配合物和 HSA 之间生成了不发荧光的复合物而导致的静态猝灭 [13]. 2.3 用静态猝灭法分析配合物与 HSA 的相互作用在静态猝灭过程中, 荧光物质与猝灭剂分子间的结合常数可根据荧光强度与猝灭剂浓度的关系求出. 设蛋白质大分子有 n 个相同并且相互独立的结合位置. 则有 : F - F = + (2) F 0 lg lg K nlg c Q 其中 F 0 为未加入猝灭剂时的荧光强度 ; F 为加入猝灭剂后的荧光强度 ; K 为静态猝灭常数, c Q 为配合物的浓度. 相关数据代入式 (2), 得到 lg [F 0 /F-1] 与 lg c Q 的关系图 ( 图 3). 由图 3 求出在不同温度下的 FeL 2 L' 2H 2 O 和 CuL 2 L' 2H 2 O 与 HSA 的结合常数 K 以及结合位点数 n( 见表 2). 从表 2 中可以看出 : FeL 2 L' 2H 2 O 和 CuL 2 L' 2H 2 O 的结合常数 K 均比较大, 达到了 L mol -1, 表明配合物与 HSA 之间的结合力较强, 结合常数随温度的升高而减小, 进一步说明了配合物对 HSA 荧光猝灭为静态猝灭过程. 2.4 三元配合物与 HSA 之间的作用力类型有机小分子和蛋白质等生物大分子之间的结合力主要有氢键范德华力静电引力疏水作用力等. 由反应前后热力学参数焓变 H 和熵变 S 的相对变化, 可以判断小分子与蛋白质分子链之间的主要作用力类型 [14]. 假设在测定的温度范围内焓变的变化可以忽略, 则焓变 H 和熵变 S 以及 G 可以通过以下的热力学方程式求得 ( 见表 3): ln K 2 /K 1 = H(1/T 1-1/T 2 )/R G= H-T S G=-RTln K 图 3 lg[f 0 /F-1] 与 lg c Q 的关系图 Figure 3 Plot of lg[f 0 /F-1] versus lg c Q A: FeL 2 L' 2H 2 O-HSA system; B: CuL 2 L' 2H 2 O-HSA syetem;, 20 ;, 27 ;, 38 ;, 45 表 2 线性回归方程相关系数和结合位点数 Table 2 Regression equations and correlation conefficient R and the number of binding site n T/K Regression equation K/(L mol -1 ) R a n FeL 2 L' 2H 2 O 293 lg[f 0 /F-1]= lg c Q 4.508(±0.143) lg[f 0 /F-1]= lg c Q 3.498(±0.123) lg[f 0 /F-1]= lg c Q 1.568(±0.352) lg[f 0 /F-1]= lg c Q 4.581(±0.417) CuL 2 L' 2H 2 O 293 lg[f 0 /F-1]= lg c Q 7.674(±0.137) lg[f 0 /F-1]= lg c Q 7.951(±0.498) lg[f 0 /F-1]= lg c Q 6.915(±0.246) lg[f 0 /F-1]= lg c Q 6.471(±0.185) a 相关系数. 括号中的数据为相对偏差值.

5 No. 21 宋玉民等 : 具抗凝血作用的铁铜三元配合物与人血清白蛋白的相互作用 2195 表 3 热力学参数 Table 3 The thermodynamic parameters a T/K K/(L mol -1 ) H/(kJ mol -1 ) S/(J K -1 ) G/(kJ mol -1 ) FeL 2 L' 2H 2 O (±0.143) (±0.123) (±0.352) (±0.417) CuL 2 L' 2H 2 O (±0.137) (±0.498) (±0.246) (±0.185) a 括号中的数据为相对偏差值. [15] Mohammed 等根据大量的实验结果总结出判断生物大分子与小分子结合力性质的热力学规律, 即 : S >0 可能是疏水和静电作用力 : S<0 可能为氢键和范德华力 ; H>0, S>0 为典型的疏水作用力 ; H 0 或较小, S>0 为静电作用力 ; H<0, S<0 为氢键和范德华力. 从表 3 数据中可以看出 FeL 2 L' 2H 2 O-HSA 体系中 H<0, S<0, 说明铁的三元配合物与 HSA 之间主要作用力是氢键和范德华力, 而 CuL 2 L' 2H 2 O-HSA 体系中 H<0, S>0, 表明铜的三元配合物与 HSA 之间主要作用力为静电引力. 三元配合物与 HSA 反应的 H <0, 为放热反应, 升高温度不利于反应正向进行, 这与静态猝灭常数随温度的升高而减小相一致. 2.5 同步荧光光谱固定激发波长和发射波长的间距 λ, 同步扫描激发和发射单色器可以得到同步荧光光谱, 因其具有简化光谱窄化谱带和减少光谱重叠等优点, 而常被用于研究小分子对蛋白质构象的影响, 进而探讨蛋白质构象的变化 [11]. 蛋白质的荧光主要来自于色氨酸酪氨酸和苯丙氨酸所产生的荧光, 它们的荧光强度之比一般为由于苯丙氨酸的荧光强度太弱, 所以一般重点考察构象发生变化的是色氨酸还是酪氨酸. 在 λ =15 nm 与 λ=60 nm 时, HSA 的同步荧光分别显示酪氨酸残基和色氨酸残基的特征信息 [16]. 图 4 与图 5 分别是 FeL 2 L' 2H 2 O 和 CuL 2 L' 2H 2 O 与 HSA 相互作用的同步荧光光谱. 室温 27 下, 固定 HSA 的浓度, 逐渐增加配合物的浓度, 随着三元配合物浓度的增加, 在 HSA 的同步荧光光谱中, 酪氨酸残基的最大发射峰基本保持不变, 而色氨酸残基的最大发射波长都有一定的红移. 表明配合物的加入使 HSA 的构象发生变化, 色氨酸残基所处环境的疏水性降低. 配合物分子的结合部位可能处于 HSA 亚结构域中圆筒状的疏水腔内, 导致 HSA 内部的疏水结构有一定程度的瓦解 [17]. 2.6 紫外光谱华法灵水杨酸过渡金属铁三元配合物 (FeL 2 L' 2H 2 O) 和华法灵水杨酸过渡金属铜三元配合物 (CuL 2 L' 2H 2 O) 在 260~300 nm 范围内无吸收. 从图 6 可知, 随着三元配合物的加入, HSA 在 278 nm 处的吸收强度逐渐增强, 并且峰位略微的红移. 图 4 FeL 2 L' 2H 2 O 和 HSA 相互作用的同步荧光光谱 Figure 4 Synchronous fluorescence spectra of FeL 2 L' 2H 2 O-HSA T=27, ph=7.37. c HSA = mol L -1 ; FeL 2 L' 2H 2 O; from a to h curves c FeL2L 2H2O (10-6 mol L -1 ): 0, 0.5, 1.0, 3.0, 5.0, 7.5, 12.5, 25.0, respectively

6 2196 化学学报 Vol. 68, 2010 图 5 CuL 2 L' 2H 2 O 与 HSA 相互作用的同步荧光光谱 Figure 5 Synchronous fluorescence spectra of CuL 2 L' 2H 2 O-HSA T=27, ph=7.37, c HSA = mol L -1 ; CuL 2 L' 2H 2 O; from a to h curves c CuL2L 2H2O (10-6 mol L -1 ): 0, 1.0, 3.0, 5.0, 7.5, 10.0, 17.5, 25.0, respectively 图 6 三元配合物对 HSA 的紫外吸收光谱的影响 Figure 6 Effect of ternary complexes on the absorption spectra of HSA ph=7.37, c HSA = mol L -1 ; A: FeL 2 L' 2H 2 O; from a to h curves c FeL2L 2H2O (10-6 mol L -1 ): 0, 0.7, 1.7, 3.3, 5.0, 8.3, 11.7, 16.7, respectively; B: CuL 2 L' 2H 2 O; from a to i curves c CuL2L 2H2O (10-6 mol L -1 ) : 0, 0.7, 1.7, 3.3, 5.0, 8.3, 11.7, 16.7, 21.7, 26.7 respectively HSA 在 278 nm 处的吸收峰是其肽链上的色氨酸和酪氨酸的苯杂环 π-π * 跃迁引起的, 吸收强度随着配合物浓度的增加而加强, 说明以上两种配合物与 HSA 发生了作用, 诱导 HSA 分子链发生了类似降低 ph 值所出 [18] 现的蛋白质肽链伸展现象以致本来被包含在 HSA 内部的色氨酸和酪氨酸残基的芳杂环疏水基团裸露出来, 使吸收强度增加, 同时疏水基团之间的疏水作用减弱, 由于 HSA 与加入的三元配合物生成了新的共轭体系, 增加了新的 π-π * 跃迁, 使得吸收峰发生了红移. 2.7 HSA 的构象变化蛋白质的各种二级结构 (α- 螺旋 β- 折叠转角无规卷曲 ) 在远紫外圆二色谱 (178~250 nm) 区域存在特征峰 [19]. 如无规卷曲结构的特征峰为 195 nm 左右的一个负强峰 ( 这是由于负科顿效应 ); 而 β- 折叠的特征峰为 217 nm 处的一个负宽峰及 198 nm 处的一个正强峰 ( 这是由于正科顿效应 ); 对于 α- 螺旋则对应于 192 nm( 正 ) 209 nm( 负 ) 以及 222 nm( 负 ) 三个峰位置 [20]. HSA 是光学活性物质, 所以通过测量它的 CD 图谱, 可以了解它的构象, 当加入配合物之后, 可以通过观察其 CD 图谱的变化进一步了解其结构的变化. 图 7 所示, 随着配合物浓度的增加, HSA 分子典型的二级结构 α- 螺旋在 209 和 222 nm 处的负峰略微向低波数方向移动, 并且相应的振幅也显著地减弱. 表明配合物与 HSA 分子发生了相互作用, 从而使得 HSA 肽链伸展, 影响了 HSA 的二级结构, 导致了 α- 螺旋结构减少 [21]. 这个结果与配合物存在时 HSA 溶液的紫外光谱中的变化相一致. 通过计算可以得出图 7A 中的 α- 螺旋结构由 42.86% 降低到 20.00%; 图 7B 中的 α- 螺旋结构由 42.86% 降低到 22.86% [22,23].

7 No. 21 宋玉民等 : 具抗凝血作用的铁铜三元配合物与人血清白蛋白的相互作用 2197 图 7 配合物对 HSA 溶液的 CD 光谱的影响 Figure 7 The effect of complexes on the CD spectra of HSA solution c HSA = mol L -1 ; ph=7.37; A: FeL 2 L' 2H 2 O-HSA system; from a to f curves c FeL2L 2H2O (10-8 mol L -1 ) : 0, 0.5, 1.7, 3.3, 5.0, 6.7 respectively; B: CuL 2 L' 2H 2 O-HSA system; from a to e curves c CuL2L 2H2O (10-8 mol L -1 ): 0, 0.5, 1.7, 3.3, 5.0 respectively 3 结论通过荧光光谱分析得知, 抗凝血铁铜三元配合物 ( 结构如图 8 所示 ) 对于 HSA 的猝灭效应属于两者之间生成了不发荧光的复合物而导致静态猝灭, 并确定了它们的结合力类型, 铁的三元配合物与 HSA 之间主要作用力是氢键和范德华力, 铜的三元配合物与 HSA 之间主要作用力为静电引力. 分别计算了它们的静态猝灭常数 K 和结合位点数 n 的值. 通过 HSA 溶液的同步荧光光谱紫外吸收光谱和圆二色谱的变化可知, 金属三元配合物的加入, 影响了 HSA 的二级结构, 导致 α- 螺旋结构减少. 具抗凝血作用的 FeL 2 L' 2H 2 O 和 CuL 2 L' 2H 2 O 与 HSA 结合后, 改变了 HSA 的构象, 这对于研究血液中血清白蛋白的构象变化与血栓的形成有着一定的启示意义. 图 8 铁铜三元配合物结构 (n=0, 1) Figure 8 Structure of ternary complexes (n=0, 1) References 1 Dong, Y. L.; Luan, N. N.; Wang, H. Y.; Song, Y. M. Acta Chim. Sinica 2008, 66(12), 1497 (in Chinese). ( 董银龙, 栾尼娜, 王海燕, 宋玉民, 化学学报, 2008, 66(12), 1497.) 2 Song, Y. M.; Dong, Y. L.; Fu, Y. L.; Yao, K. L. Acta Chim. Sinica 2007, 65(8), 678 (in Chinese). ( 宋玉民, 董银龙, 付云龙, 姚卡玲, 化学学报, 2007, 65(8), 678.) 3 Wang, K. J.; Luan, N. N.; Song, Y. M. Acta Chim. Sinica 2009, 67(10), 1042 (in Chinese). ( 王坤杰, 栾尼娜, 宋玉民, 化学学报, 2009, 67(10), 1042.) 4 Zhao, Y.; Cao, Y.; Han, F. M.; Chen, Y. Spectrosc. Spectral Anal. 2008, 28(4), 904 (in Chinese). ( 赵妍, 曹燚, 韩凤梅, 陈勇, 光谱学与光谱分析, 2008, 28(4), 904.) 5 Yang, M. L.; Yang, P. J.; Song, Y. M. Chin. J. Inorg. chem. 2005, 21(4), 483 (in Chinese). ( 杨美玲, 杨培菊, 宋玉民, 无机化学学报, 2005, 21(4), 483.) 6 Yang, P.; Gao, F. Principles of Bioinorganic Chemistry, Science Press, Beijing, 2002, p. 329 (in Chinese). ( 杨频, 高飞, 生物无机化学原理, 科学出版社, 北京, 2002, p. 329.) 7 Zhong, W. Q.; Zhang, Q.; Yue, C.; Yan, Y.; Zhang, B. L.; Tang, W. X. Chin. J. Inorg. Chem. 1997, 13(3), 241 (in Chinese). ( 仲维清, 张琦, 岳晟, 颜远, 张保林, 唐雯霞, 无机化学学报, 1997, 13(3), 241.) 8 Lakowicz, J. R. Principles of Fluorometric Spectroscopy, Plenum Press, New York, 1983, p Cha, D. M.; Li, S. T.; Yang, Y. F.; Tu, C. Q.; Liang, H.; Shen, P. W. Spectrosc. Spectral Anal. 1999, 19(6), 788 (in Chinese). ( 查丹明, 李舒婷, 杨勇飞, 涂楚桥, 梁宏, 申泮文, 光谱学与光谱分析, 1999, 19(6), 788.) 10 Lu, Y.; Gao, S. H.; Wang, Y. L.; Wang, G. K.; Yan, C. L.; Chen, D. J. Chin. Sci. Bull. 2009, 54(14), 2071 (in Chinese).

8 2198 化学学报 Vol. 68, 2010 ( 卢雁, 高胜华, 王运来, 王公轲, 闫长岭, 陈得军, 科学通报, 2009, 54(14), 2071.) 11 Chen, G. Z.; Huang, X. Z.; Xu, J. G.; Zheng, Z. Z.; Wang, Z. B. Fluorescence Analysis, 2nd ed., Science Press, Beijing, 1990, p. 201 (in Chinese). ( 陈国珍, 黄贤智, 许金钩, 郑朱梓, 王尊本, 荧光分析法 ( 第二版 ), 科学出版社, 北京, 1990, p. 201.) 12 Xie, M. X.; Xu, X. Y.; Wang, Y. D.; Liu, Y. Acta Chim. Sinica 2005, 63(22), 2055 (in Chinese). ( 谢孟峡, 徐晓云, 王英典, 刘媛, 化学学报, 2005, 63(22), 2055.) 13 Lakowicz, J. R. Principles of Fluorescence Spectroscopy, 2nd edition, Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York, Ross, P. D.; Subamanian, S. Biochemistry 1981, 20(11), Mohammed, H. R.; Toru, M.; Tomoko, O.; Keishi, Y.; Masaki, O. Biochem. Pharmacol. 1993, 46(10), Miller, J. N. Proc. Anal. Div. Chem. Soc. 1979, 16, Zhang, X. W.; Zhao, F. L.; Li, K. A. Chem. J. Chin. Univ. 1999, 20(7), 1063 (in Chinese). ( 张晓威, 赵凤林, 李克安, 高等学校化学学报, 1999, 20(7), 1063.) 18 Li, X. J.; Wang, Z. Q.; Chen, J. Chin. J. Appl. Chem. 1998, 15(1), 5 (in Chinese). ( 李晓晶, 王志强, 陈继, 应用化学, 1998, 15(1), 5.) 19 Greenfield, N. Trends Anal. Chem. 1999, 18(4), Zong, X. H.; Zhou, P.; Shao, Z. H.; Wang, H. H.; Chunyu, L. J. Chin. Sci. Bull. 2005, 50(11), 1080 (in Chinese). ( 宗小红, 周平, 邵正中, 王洪海, 淳于利娟, 科学通报, 2005, 50(11), 1080.) 21 Shen, X. C.; Liang, H.; He, X. W.; Wang, X. S. Chin. J. Anal. Chem. 2004, 33(3), 388 (in Chinese). ( 沈星灿, 梁宏, 何锡文, 王新省, 分析化学, 2004, 33(3), 388.) 22 Yang, P.; Gao, F. Principles of Bioinorganic Chemistry, Science Press, Beijing, 2002, pp. 348~349 (in Chinese). ( 杨频, 高飞, 生物无机化学原理, 科学出版社, 北京, 2002, pp. 348~349.) 23 Milese, A. J.; Janes, R. W.; Brown, A. J. Synchrotron Radiat. 2008, (15), 420. (A Zhao, X.)

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Microsoft Word - a B.doc 2009 年第 67 卷化学学报 Vol. 67, 2009 第 17 期, 1967~1972 ACTA CHIMICA SINICA No. 17, 1967~1972 研究论文盐酸环丙沙星与胰蛋白酶相互作用的光谱和分子模拟研究王公轲闫长领卢秀敏陈得军卢雁 * ( 河南师范大学化学与环境科学学院新乡 453007) 摘要运用荧光光谱和紫外光谱, 结合分子模拟法研究了盐酸环丙沙星 (CPFX)