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盲都
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1 中国水产科学 2017 年 1 月, 24(1): Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: /SP.J 人工蓄养斧文蛤的生殖周期及早期发育 1, 邵艳卿 2 1,, 张炯明 2 1,, 方军 2 1,, 肖国强 2 1,, 滕爽爽 2 1, 2, 柴雪良 1. 浙江省海洋水产养殖研究所, 浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室, 浙江温州 ; 2. 中国水产科学研究院海洋贝类工程技术研究中心, 浙江温州摘要 : 为了探讨斧文蛤 (Meretrix lamarkii Deshayes) 的繁殖规律和胚胎发育过程, 自 2012 年 1 月至 2013 年 1 月, 每月采集样品, 采用组织学方法对浙南海区移养的斧文蛤性腺发育生殖周期和性成熟率周年变化进行了研究, 并结合室内人工育苗试验对其胚胎发育过程进行了显微观察结果表明, 该地区斧文蛤的性腺发育以 1 年为 1 个周期, 可分为增殖期生长期成熟期排放期和休止期 5 个时期, 雌雄性比约为 1 : 1, 性腺发育时间基本同步, 均始于 2 月, 随着水温的升高而发育, 大部分个体在 6 月至 7 月发育成熟, 7 月下旬至 8 月底是繁殖盛期, 可用阴干加流水刺激方法诱导其排放精卵, 受精卵在水温 29 盐度 28 ph 7.8~8.5 条件下, 经 16~20 h 孵化成 D 形幼虫, 壳长为 100~110 µm, 浮游幼虫经 5~6 d 培育进入匍匐幼虫期, 壳长约 200 µm, 最后发育变态为稚贝本研究为斧文蛤的人工繁育养殖开发以及种质资源保护提供了基础资料关键词 : 斧文蛤 ; 性腺发育 ; 繁殖周期 ; 胚胎发育中图分类号 : S968 文献标志码 : A 文章编号 : (2017) 斧文蛤 (Meretrix lamarkii Deshayes) 隶属双壳纲 (Bivalvia), 帘蛤科 (Veneridae), 文蛤属, 分布于中国台湾和广东以南至海南三亚沿海, 日本房总以南, 常埋栖于潮下带至水深 20 m 左右的砂质海底 [1] 斧文蛤成体个体大, 肉味鲜美, 营养丰富, 深受群众喜爱, 是我国东南沿海一带经济价值较高具有广阔养殖开发前景的贝类斧文蛤历来依靠采捕自然资源以满足国内市场的需求, 但是近些年来, 由于滥采乱捕加上无繁殖保护措施等因素影响, 其自然资源急剧减少并濒临枯竭, 然而市场需求却在不断增加因此, 开展斧文蛤野生资源的保护和人工增养殖工作已迫在眉睫目前关于斧文蛤人工育苗增养殖的研究报道国内外均十分匮乏, 仅有本课题组开展斧文蛤人工繁育试验的报道 [2], 本课题组虽已能成功培育出一定规模的人工苗种, 但苗种年产量还不稳定, 不能达到规模化繁育, 在斧文蛤增养殖过程中, 种苗紧缺问题还比较突出目前国内外对斧文蛤的研究主要集中在系统分类学 [3 5] 分子标记筛选与群体遗传 [6 7] [8] [9] 营养和受精生物学等方面, 而有关繁殖生物学方面的研究尚未见报道本研究利用组织学切片方法对浙南海区移养的斧文蛤性腺发育和生殖周期进行了周年研究, 并结合室内人工育苗试验对其胚胎发育过程进行了显微观察, 以期为斧文蛤的规模化人工繁育养殖开发及其种质资源保护提供基础资料 1 材料与方法 1.1 试验样品实验用亲贝于 2011 年 5 月初从浙江苍南县渔寮后槽海区 (N27 12, E ) 采集, 壳长 3.2~ 8.0 cm, 平均壳长 (5.1±1.0) cm, 湿重 5.7~33.5 g 样品鲜活运回后在浙江省海洋水产养殖研究所清江试验场进行人工蓄养收稿日期 : ; 修订日期 : 基金项目 : 国家海洋公益性行业科研专项子任务 ( ); 国家水产种质资源平台项目 (2015DKA30470); 温州市科技项目 (S ). 作者简介 : 邵艳卿 (1979 ), 女, 高级工程师, 从事海洋贝类种质资源与遗传育种. amshao@126.com 通信作者 : 柴雪良, 研究员, 研究方向为贝类遗传育种. cxl-5888@163.com

2 第 1 期邵艳卿等 : 人工蓄养斧文蛤的生殖周期及早期发育人工蓄养方法本试验于年在清江试验场进行选取无机械损伤的个体, 用砂滤海水冲洗干净, 均匀撒播于铺有 20 cm 厚细砂的水泥池 ( 长 4.0 m 宽 2.5 m 深 1.2 m) 中继续培育, 培养密度 1~ 2 kg/m 2, 培养用水为自然砂滤海水 ( 盐度为 15~30), 水温为自然水温 (7~30 ), 控制水位 80 cm, 日换水 80%, 微充气饵料以人工培养的单胞藻为主, 如金藻 (Isochrypis sp.) 角毛藻(Chaetocercs sp.) 扁藻 (Platymoas sp.) 小硅藻等, 每日 1~2 次不同季节, 根据单胞藻培育的难易程度, 投喂不同的饵料, 其中 11 4 月, 以小硅藻为主, 附以角毛藻扁藻等 ; 4 8 月, 以金藻为主, 附以角毛藻扁藻等 ; 8 11 月, 以角毛藻为主, 附以扁藻金藻等 1.3 组织学分析从 2012 年 1 月至 2013 年 1 月, 每月取样 1 次, 现场测水温, 每次采集样品 10~20 个, 其中 [10] 5 9 月每月各采样 2 次参考林志华等的方法对采集样品进行形态指标测量解剖观察并切取性腺组织, 用波恩氏液 (Bouin) 固定, 石蜡包埋, 切片 ( 厚 7 µm), 苏木精伊红 (HE) 染色, Olympus 光学显微镜观察拍照, 辨别雌雄性腺发育状况并分期 [11] 1.4 性成熟率 (R) 的计算同一个月份的斧文蛤样品, 个体之间的性腺发育和产卵程度并不完全相同, 故以 R 值 ( 性成熟率 ) 表示群体性腺的发育变化, 其公式为 : R = (n 1 I+n 2 II+n 3 II+n 4 IV+n 5 V)/N 式中, N 为观察总个数 ; n 1 ~n 5 代表各性腺发育期的个体数 ; I~V 为性腺发育各期, 规定 I=2/5, II=3/5, III=4/5, IV=5/5, V=1/5 1.5 胚胎发育观察取性腺发育成熟的亲贝人工催产受精试验在浙江清江基地室内水泥池中进行, 利用海洋贝 [12] 类幼虫常规培育方法进行室内培育, 保持孵化密度在 10 个 /ml 内, 连续充气, 连续取样镜检观察胚胎发育过程并拍照发育至 D 形幼虫后, 日换水量 100%, 适当投喂金藻, 每日镜检观察测量幼虫生长发育及变态情况并拍照 2 结果与分析 2.1 斧文蛤的繁殖方式及性比斧文蛤繁殖方式为卵生型, 体外受精, 雌雄异体, 在繁殖成熟季节, 性腺从消化腺外侧表面一直延伸至足基部, 雄性生殖腺呈乳白色, 雌性呈浅黄色在周年采集的 200 个斧文蛤样品中, 最大壳长 82.5 mm, 最小为 32.5 mm, 平均壳长 (51.41±10.20) mm; 雌性占 45.5%, 雄性占 43%, 不能辨别雌雄的个体主要出现在 12 月和 1 月, 占 11.5%, 未发现雌雄同体个体在本研究中, 雌雄性比约为 : 1, 两者在总数量上不存在显著差异 2.2 斧文蛤的性腺发育根据生殖细胞的发育规律以及处于不同发育期的生殖细胞在滤泡中所占的比例, 将斧文蛤的性腺发育划分为以下 5 个时期 : I 期 ( 增殖期 ): 性腺开始形成, 后期可隐约见一层很薄的性腺, 主要分布于消化腺的外侧表面切片显示, 雌性 : 滤泡大小不等, 形状不规则, 壁上有一层不连续的卵原细胞, 并在卵原细胞之间逐渐出现少量卵黄形成前期的初级卵母细胞, 此期滤泡腔基本还是一个空腔, 卵原细胞直径从约 10 µm 增至 20 µm, 核直径从 7 µm 增至 11 µm, 核仁明显, 一般位于核周缘, 直径从 3.0 µm 增至 3.5 µm( 图 1 a b) 雄性: 滤泡出现, 滤泡间分布大量结缔组织, 滤泡壁薄, 染色浅, 主要由不连续单层精原细胞和少数初级精母细胞组成, 至本期末, 滤泡壁增厚, 滤泡腔内出现次级精母细胞和部分网状组织 ( 图 2 a b) II 期 ( 生长期 ): 在内脏团表面能看见明显的性腺覆盖, 比上一期明显切片观察, 雌性 : 滤泡腔空隙逐渐缩小, 壁上基本已挤满生长中后期的卵母细胞, 多呈长梭形或倒梨形等不规则形状, 一端已明显凸向泡腔, 形成明显的卵柄 ; 到此期末, 在滤泡腔内开始出现部分成熟的卵母细胞, 此期较大的卵母细胞大小已达约 62.5 µm, 核直径约 30 µm, 核仁明显, 直径约 8 µm( 图 1 c d) 雄性 : 滤泡体积增大, 数目增多, 泡腔内空隙逐渐缩小, 生殖细胞沿滤泡壁排成数层, 滤泡内可

3 84 中国水产科学图1 第 24 卷斧文蛤卵巢不同时期的组织切片 a b. 增殖期; c d. 生长期; e f. 成熟期; g h. 排放期; i j. 休止期; FW: 滤泡壁; OG: 卵原细胞; OI: 生长初期卵母细胞; OM: 生长中期卵母细胞; OL: 生长后期卵母细胞; MO: 成熟卵细胞; RO: 残留卵子. Fig. 1 Histological section of different gonadal development stages in Meretrix lamarkii a b. Proliferating stage; c d. Growing stage; e f. Ripe stage; g h. Spawning stage; i j. Resting stage. FW: follicle wall; OG: oogonium; OI: oocyte in initial phase of growth; OM: oocyte in metaphase of growth; OL: oocyte in later phase of growth; MO: mature oocyte; RO: residual oocyte.

第1期邵艳卿等: 人工蓄养斧文蛤的生殖周期及早期发育 85 见从精原细胞至精子各个不同发育阶段的生殖细 80%, 卵细胞直径约为 80 µm, 核径约 42 µm, 核胞, 精子头部朝向滤泡壁, 尾部朝向滤泡腔, 且仁径约 11 µm(图 1 e f) 雄性: 滤泡内精细胞和染色加深(图 2 c d) 精子拥挤成簇, 密集呈辐射状排列, 着色很深, III 期(成熟期): 性腺外观肥满,

4 第1期邵艳卿等: 人工蓄养斧文蛤的生殖周期及早期发育 85 见从精原细胞至精子各个不同发育阶段的生殖细 80%, 卵细胞直径约为 80 µm, 核径约 42 µm, 核胞, 精子头部朝向滤泡壁, 尾部朝向滤泡腔, 且仁径约 11 µm(图 1 e f) 雄性: 滤泡内精细胞和染色加深(图 2 c d) 精子拥挤成簇, 密集呈辐射状排列, 着色很深, III 期(成熟期): 性腺外观肥满, 完全覆盖整个内脏团, 并延伸到足基部, 一般雌性性腺颜色泡腔内无空隙, 壁上新生的精原细胞形成减少(图 2 e f) 为浅黄色, 雄性为乳白色; 此时刺破性腺, 可见 IV 期(排放期): 性腺外观饱满度下降, 出现卵子或精液流出, 一遇水即可散开, 水中卵子呈褶皱; 性腺可再次饱满, 但已不如成熟期切片观明显颗粒状, 精液呈乳白浑浊切片观察, 雌性: 察, 雌性: 滤泡腔中仅残留少量卵, 而壁上尚有滤泡为全年最丰满时期, 滤泡腔扩张至最大状态, 较多卵原细胞及卵母细胞, 有些滤泡腔中尚有较腔内充满大量形状不规则的成熟卵, 以椭圆形居多成熟卵尚未排放; 有些滤泡壁薄, 因排放而破多, 泡壁变薄, 壁上还生长着部分以卵柄连接着裂(图 1 g h) 雄性: 滤泡内开始出现大小不等的的卵母细胞, 此期滤泡内成熟卵占总数的 70%~ 空腔, 不同滤泡中存留的精子数量差异较大, 有图2 斧文蛤精巢不同时期的组织切片 a b. 增殖期; c d. 生长期; e f. 成熟期; g h. 排放期; i j. 休止期; CT: 结缔组织; FW: 滤泡壁; SG: 精原细胞; PS: 初级精母细胞; SS: 次级精母细胞; SP: 精细胞; S: 精子; RS: 残留精子. Fig. 2 Histological section of different spermary development stages in Meretrix lamarkii a b. Proliferating stage; c d. Growing stage; e f. Maturing stage; g h. Spawning stage; i j. Resting stage. CT: connective tissue; FW: follicle wall; SG: spermatogonium; PS: primary spermatocyte; SS: secondary spermatocyte; SP: spermatid; S: sperm; RS: residual sperm.

86 中国水产科学第 24 卷些滤泡壁仍有较多精母细胞精细胞, 可再次发育成精子, 从而出现间歇排精现象 ( 图 2 g h) V 期 ( 休止期 ): 性腺饱满度进一步下降, 颜色黯淡切片观察发现 : 不同个体间滤泡差异较大, 本期初, 有些个体滤泡内还充满大量未排放的成熟精 ( 卵 ) 子, 有些个体滤泡壁上还有带卵柄的卵母细胞, 但都由于不能继续发育, 已经开始萎缩或破裂,

5 86 中国水产科学第 24 卷些滤泡壁仍有较多精母细胞精细胞, 可再次发育成精子, 从而出现间歇排精现象 ( 图 2 g h) V 期 ( 休止期 ): 性腺饱满度进一步下降, 颜色黯淡切片观察发现 : 不同个体间滤泡差异较大, 本期初, 有些个体滤泡内还充满大量未排放的成熟精 ( 卵 ) 子, 有些个体滤泡壁上还有带卵柄的卵母细胞, 但都由于不能继续发育, 已经开始萎缩或破裂, 处于被吸收状态, 切片着色较深 ( 图 1 i j); 到末期, 滤泡间结缔组织大量增生, 滤泡腔逐渐空虚缩小呈不规则状, 雄性滤泡内仍有较多杂乱分布的精子, 壁上零散分布少量的精原细胞 ( 图 2 i j) 2.3 斧文蛤的生殖周期根据近两年的人工繁育实践和性腺切片周年观察结果, 斧文蛤在浙江繁殖周期为 1 年, 在一个繁殖季节可多次产卵, 雌雄性腺发育基本同步斧文蛤的性腺发育始于 2 月, 2 月底有 62.5% 的个体处于增殖期 ( 图 3) 4 5 月主要为配子生长期, 5 月中旬有 90% 的个体处于生长期, 并有部分个体 (10%) 性腺开始发育成熟, 6 月初至 7 月底为成熟期, 性腺发育成熟的个体占 70%~80% 以上配子的排放始于 6 月下旬, 7 月下旬到 8 月底为配子集中排放期, 随着卵 ( 精 ) 子的排放, 从 9 月份开始进入休止期的斧文蛤个体数 Fig. 3 图 3 斧文蛤性腺发育时期的周年变化 Relative frequency of stages in the reproductive cycle of Meretrix lamarkii 量不断增加, 至翌年 1 月结束, 随后进入下一个繁殖周期图 4 显示了斧文蛤采样水温和性成熟率的周年变化 2 3 月, 水温 7.6~12.4, 此阶段群体的性成熟率 (R 值 ) 在 32.5%~37.5%, 斧文蛤性腺处于增殖期, 其后水温和性成熟率都逐渐增大 ; 4 月至 5 月底, 水温为 16.8~22.4, 斧文蛤的性腺迅速增长, 性成熟率为 54%~68%, 处于生长期 ; 从 6 月下旬开始, 性成熟率 R 值都在 80% 以上, 7 月底 8 月性成熟率 R 值为全年最高, 达到 90% 以上, 这段时间正是斧文蛤的繁殖盛期, 平均水温 28 以上 ; 进入 9 月中旬以后水温和 R 值都开始显著下降, 持续至翌年 1 月 Fig. 4 图 4 斧文蛤的性成熟率与水温的周年变化 Monthly variations in sexual maturation rate in Meretrix lamarkii and water temperature 2.4 胚胎及幼虫发育斧文蛤性腺成熟后, 可用阴干加流水的方法诱导其排放精卵, 受精卵在海水中呈球形, 为沉性卵 ( 图 5A) 在水温 26~30 盐度 25~30 ph 为 7.8~8.5 条件下胚胎可以正常发育精子入卵后启动卵子的成熟分裂, 在水温 29 盐度 28 条件下, 受精后 10~20 min, 形成第一极体 ( 图 5B); 受精后 40~50 min, 进行第一次卵裂, 将卵细胞分割成 2 个大小不等的卵裂球, 进入了二细胞期 ( 图 5C); 12 h 后发育到担轮幼虫期 ( 图 5G); 16~20 h 后, 面盘形成, 进入 D 型幼虫期 ( 图 5H), 平均壳长为 100~110 µm 进入 D 形幼虫期, 开始投喂金藻进行幼虫培育, 采用贝类幼虫常规培育方法 [12], 培育至第 3 天左右, 壳顶趋于明显, 进入壳顶幼虫期 ( 图 5I); 当幼虫长至壳长约 200 µm( 第 5~6 天 ) 时, 取样能

第 1 期邵艳卿等 : 人工蓄养斧文蛤的生殖周期及早期发育 87 观察到部分个体有足伸缩, 匍匐爬行, 开始进入附着变态阶段, 投附着基让其附着, 然后转入底栖生活 ( 图 5J) ( 表 1) 图 5 斧文蛤的胚胎及幼虫发育 A. 受精卵 ; B. 第一极体 ; C. 二细胞期 ; D. 四细胞期 ; E. 多细胞期 ; F. 囊胚期 ; G. 担轮幼虫期 ; H.

6 第 1 期邵艳卿等 : 人工蓄养斧文蛤的生殖周期及早期发育 87 观察到部分个体有足伸缩, 匍匐爬行, 开始进入附着变态阶段, 投附着基让其附着, 然后转入底栖生活 ( 图 5J) ( 表 1) 图 5 斧文蛤的胚胎及幼虫发育 A. 受精卵 ; B. 第一极体 ; C. 二细胞期 ; D. 四细胞期 ; E. 多细胞期 ; F. 囊胚期 ; G. 担轮幼虫期 ; H. D 型幼虫 ( 面盘幼虫 ); I. 壳顶幼虫 ; J. 匍匐幼虫. Fig. 5 Embryo and larvae development of Meretrix lamarkii A. Fertilized eggs; B. First polar body; C. 2 cells stage; D. 4 cells stage; E. Multi-cell stage; F. Blastula stage; G. Trochophore stage; H. D-sharp larvae (veliger larvae); I. Umbo larvae; J. Creeping larvae. 表 1 斧文蛤的胚胎及幼虫发育 Tab. 1 The development stages of embryo and larvae of Meretrix lamarkii 发育时期 developmental stage 受精 fertilization 第一极体 the first polar body 二细胞期 2 cells stage 四细胞期 4 cells stage 八细胞期 8 cells stage 十六细胞期 16 cells stage 多细胞期 multi-cells stage 囊胚期 blastula stage 担轮幼虫期 trochophore stage D 形幼虫期 D-shaped larvae stage 壳顶幼虫期 umbo-veliger stage 匍匐幼虫 creeping larvae 受精后时间 time after fertilization 20 min 50 min 1 h 30 min 1 h 50 min 2 h 10 min 2 h 30 min 3 h 20 min 12 h h 2 3 d 6 7 d 3 讨论 3.1 斧文蛤的繁殖期及其影响因子通过性腺切片周年观察发现, 浙江苍南海区移养的斧文蛤性腺发育具有明显的分期, 且一年 [13] 为一个繁殖周期, 这与庄启谦等所报道的帘蛤科的种类大多具有在一年内规律性的生殖周期, 呈现出一个或两个生殖峰期相一致 ; 海洋贝类的繁育周期受到许多外部和内部因素的共同影响, 国内外诸多学者的研究结果都表明, 温度是影响贝类繁殖活动的一个最重要的环境因素, 其既可直接影响贝类新陈代谢的速率, 也可间接影响贝类生存繁殖所需食物的丰度 [14 20] 斧文蛤属滤食性贝类, 亚热带热带分布种, 在浙江地区其性腺发育与水温变化密切相关研究表明, 斧文蛤性成熟率的周年变化与水温的周年变化相一致当水温由最低值 (7.6 ) 开始回升时, 配子开始发育, 性成熟率开始增大 ; 在养殖水域水温达 24.8 时, 斧文蛤性腺开始发育成熟 ; 当水温超过 26, 性成熟率增至最高, 即进入到繁殖盛期 ( 夏季 7 月下旬至 8 月 ) 相似的现象见于黄河三角洲的青蛤 (Cyclina sinensis) [19] 和山东魁蚶 (Scapharca broughtonii) [20] 此后, 10 月至翌年 1 月, 随着温度的急剧下降, 性腺开始进入休止阶段由此可见, 在浙江地区移养的斧文蛤繁殖盛期在 7 8 月, 水温为 26~30, 期间温度高, 阳光充足, 比较适合饵料单细胞藻类 ( 如金藻和角毛藻 ) 的培养, 斧文蛤属滤食性贝类, 以海水中浮游植物为食, 这就保证了其幼虫孵化的适宜温度和丰富的食物来源, 利于斧文蛤规模化人工育苗的顺利开展除水温外, 饵料盐度光照等因素对贝类的繁殖周期也会有一定的影响, 如在本研究中就发现, 人工蓄养斧文蛤的成熟性腺的丰满度和一致性明显好于自然海区的斧文蛤, 这可能跟饵料的丰富度有关, 饵料对斧文蛤生殖周期的具体影响有待于进一步研究探讨总之, 通过人工移养促熟, 可使斧文蛤成贝性腺发育成熟, 用于人工繁育, 这将促进斧文蛤的人工放流和养殖业的发展, 为人工繁殖提供稳定的成熟亲贝, 有利于扩大规模

7 88 中国水产科学第 24 卷本研究通过切片观察还发现, 不同个体间性腺发育差异较大, 在刚排放完成熟卵子的个体性腺切片上可观察到不同个体间或同一个体不同滤泡间都存在差异, 有的已排空开始逐渐退化, 有的在滤泡壁上还有较多卵母细胞, 像文蛤泥蚶等贝类一样, 在人工培养条件下经过一段时间的人工促熟可再次成熟, 但是成熟的卵 ( 精 ) 子质量已不如第一批因此, 在进行斧文蛤人工育苗时, 应抓住第一次成熟排放高峰另外, 在本研究所取样品中, 未发现斧文蛤性腺雌雄同体现象, 其性比接近 1 : 1, 在数量上不存在显著差异, 但在规格上却发现存在一定差异, 小规格斧文蛤 ( 壳长 30~40 mm) 以雄性居多, 而大规格 ( 壳长 60 mm 以上 ) 则是雌性多于雄性, 并且相比中间规格, 两者中部分个体的性腺发育相对较差笔者认为这可能跟斧文蛤的年龄有关 [21] Shin 等在调查韩国沿海缢蛏 (Sinonovacula constricta) 和等边浅蛤 (Gomphina veneriformis) 的性比时发现, 两种贝类小个体雄性占多数, 雌性则随着规格和年龄的增大而增加, 他们据此推测缢蛏和等边浅蛤可能是潜在的雄性先熟种类 ; Peharda 等对诺亚魁蛤 (Arca noae) 也有相似的报 [22] 道在本研究中发现, 斧文蛤的两性性腺发育基本同步, 只有个别雄性个体有性腺发育较早现象, 但其是否属于雄性先熟的贝类以及性比分布随年龄增长的变化规律等问题还有待于进一步深入研究 3.2 斧文蛤胚胎幼虫的发育特点在本研究中, 斧文蛤的胚胎和幼虫发育过程与常见的文蛤 (Meretrix meretrix) [12] 青蛤 [23] 皱肋文蛤 (Meretrix lyrata) [24] 和偏顶蛤 (Modiolus modiolus) [25] 等双壳贝类的早期发育相似, 但是在各期具体发育时间卵径和幼虫大小上还是有许多不同 ( 表 2) 斧文蛤卵径约 80 µm, 要比泥蚶 (Tegillarca granosa) [12] (60 µm) 卵径大, 比青蛤 (94~98 µm) 小, 与皱肋文蛤 (80 µm) 文蛤(60~ 90 µm) 菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum) [12] (74~78 µm) 相近同时, 研究发现, 斧文蛤从 D 形幼虫 (100~110 µm) 发育至早期稚贝 ( 约 200 µm) 时, 其壳长变化范围和浮游期时间与文蛤皱肋文蛤基本相一致, 这可能因为他们同属于文蛤属, 其早期胚胎和幼虫个体发育差异相对较小许多研究表明, 温度和盐度是影响海洋贝类胚胎幼虫生长的两个重要的环境因素 [23 28] 宁 [25] 军号等研究发现, 在 15~20 条件下, 偏顶蛤幼虫畸形率较低且能够较快发育, 并且高温组的长速较快, 但是一旦超过 25, 就会使幼虫活力明显下降, 畸形率死亡率升高, 最终导致败育 [26] 陈冲等报道在盐度低于 11.7 和高于 39.1 情况下, 文蛤胚胎发育受到制约, 只能发育至原肠期甚至 4~16 细胞期, 但是随着胚胎内器官逐步发育完善, 表现出对盐度耐受力逐渐增强的趋势以上相似的现象也在其他贝类如青蛤 [23] 泥蚶 [27] 栉孔扇 [28] 贝中有所报道, 温度盐度既影响胚胎和幼体的发育质量又影响其发育速度, 只要在适宜的温盐范围内, 其发育质量好发育速度快, 一旦超出其上下限值, 就会导致畸形率死亡率明显增大或者滞育在本研究中发现, 斧文蛤在水温 29 盐度 28 条件下胚胎幼虫可以正常发育, 但是其在较低盐度 ( 盐度 25) 时后期容易出现幼虫大批沉苗死亡情况, 与文蛤 ( 孵化期适盐范围 17.3~33.9; 浮游种类 species Tab. 2 表 2 几种双壳类幼虫特征的比较 Larvae characteristic comparison of several species of Bivalvia 卵径 /µm diameter of egg D 形幼虫 /µm D-shaped larva 浮游天数 /d days of floating period 匍匐幼虫 /µm creeping larvae 斧文蛤 Meretrix lamarckii ~80 100~110 5~6 200 文蛤 Meretrix meretrix [12] 皱肋文蛤 Meretrix lyrata [24] 青蛤 Cyclina sinensis [23] 泥蚶 Tegillarca granosa [12] 菲律宾蛤仔 Ruditapes philippinarum [12] ~ 偏顶蛤 Modiolus modiolus [25] ~

8 第 1 期邵艳卿等 : 人工蓄养斧文蛤的生殖周期及早期发育 89 幼体适盐范围 9.2~29.3) 相比较, 斧文蛤幼虫的耐低盐能力相对较差, 分析这可能跟其亲体所栖息的自然生态环境有关 [25] 斧文蛤各发育阶段的具体适温适盐范围还有待于进一步详细系统地研究参考文献 : [1] Zhang S P. Atlas of Marine Mollusks in China[M]. Beijing: China Ocean Press, [ 张素萍. 中国海洋贝类图鉴 [M]. 北京 : 海洋出版社, 2008.] [2] Zhang J M, Xiao G Q, Shao Y Q, et al. Meretrix lamarckii artificial breeding technology test[c]//chinese Animal Society, Chinese Society for Oceanology and Limnology. The Ninth Congress of the Shellfish and the Fifteenth Academic Conference Abstracts, 2011, 163: 138. [ 张炯明, 肖国强, 邵艳卿, 等. 斧文蛤 (Meretrix lamarckii) 人工繁育技术试验 [C]// 中国动物学会. 中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表大会暨第十五次学术讨论会会议摘要集, 2011, 163: 138.] [3] Pan B P, Wu Q, Zhang S P, et al. Molecular phylogeny of Meretrix (Mollusca: Bivalvia) based on 16S rrna genes and ITS1 sequences[j]. Oceanologia et Limnologia Sinica, 2006, 37(4): [ 潘宝平, 吴琪, 张素萍, 等. 文蛤属 (Meretrix)16S rrna 基因及 ITS1 序列的系统学分析 [J]. 海洋与湖沼, 2006, 37(4): ] [4] Chen A H, Li Z X, Feng G N. Phylogenetic relations of the genus Meretrix (Mollusca Veneridae) based on mitochondrial COI gene sequences[j]. Zool Res, 2009, 30(3): [5] Zhang S P, Wang H X, Xu F S. Taxonomic study on Meretrix (Bivalvia, Veneridae) from China seas[j]. Acta Zootaxonomica Sinica, 2012, 37(3): [ 张素萍, 王鸿霞, 徐凤山. 中国近海文蛤属 ( 双壳纲, 帘蛤科 ) 的系统分类研究 [J]. 动物分类学报, 2012, 37(3): ] [6] Liu B, Teng S S, Chai X L, et al. Characterization of 28 polymorphic SSR loci from Meretrix lamarkii Deshayes[J]. Conserv Genet Res, 2014, 6(1): [7] Teng S S, Fang J, Jin W H, et al. Analysis of genetic diversity in four different Meretrix lamarckii geographical populations using microsatellite markers[j]. Journal of Fishery Sciences of China, 2015, 22(3): [ 滕爽爽, 方军, 金文辉, 等. 4 个斧文蛤群体微卫星标记的遗传多样性分析 [J]. 中国水产科学, 2015, 22(3): ] [8] Yu H, Zhang J M, Zhang W, et al. Nutrition analysis and comparison of meats from Meretrix meretrix and Meretrix lamarkii[j]. Journal of Ningbo University: Natural Science & Engineering Edition, 2015, 28(4): [ 余海, 张炯明, 张问, 等. 短文蛤和斧文蛤肉的营养成分分析与比较 [J]. 宁波大学学报 : 理工版, 2015, 28(4): 7 10.] [9] Dong Y H, Lin Z H, Yao H H. Studies on ultrastructure of spermatoazoon and cytological change of nuclear behavior on fertilization in Meretrix larmarkii[j]. Journal of Fisheries of China, 2011, 35(3): [ 董迎辉, 林志华, 姚韩韩. 斧文蛤精子超微结构与受精过程的细胞学变化 [J]. 水产学报, 2011, 35(3): ] [10] Lin Z H, Shan L Z, Chai X L, et al. Study on the gonad development and reproductive cycle of Meretrix meretrix Linnaeus[J]. Journal of Fisheries of China, 2004, 28(5): [ 林志华, 单乐州, 柴雪良, 等. 文蛤的性腺发育和生殖周期 [J]. 水产学报, 2004, 28(5): ] [11] Zeng Z N, Li F X. The study on reproductive cycle of Cyclina sinensis[j]. Tropic Oceanology, 1991, 10(1): [ 曾志南, 李富雪. 青蛤的繁殖周期 [J]. 热带海洋, 1991, 10(1): ] [12] Wang R C, Wang Z P. Science of Marine Shellfish Culture[M]. Qingdao: Ocean University of China Press, [ 王如才, 王昭萍. 海水贝类养殖学 [M]. 青岛 : 中国海洋大学出版社, 2008.] [13] Zhuang Q Q. Fauna sinica, Mollusca, Bivalve, Veneridae[M]. Beijing: Science Press, [ 庄启谦. 中国动物志软体动物门双壳纲帘蛤科 [M]. 北京 : 科学出版社, 2001.] [14] Liao C Y, Xu Y F, Wang Y L. Reproductive cycle of the scallop Chlamys farreri (Jones et Etpreston) at Qingdao[J]. Journal of Fisheries of China, 1983, 7(1): [ 廖承义, 徐应馥, 王远隆. 栉孔扇贝的生殖周期 [J]. 水产学报, 1983, 7(1): 1 13.] [15] Li Q, Liu W G, Shirasu K, et al. Reproductive cycle and biochemical composition of the Zhe oyster Crassostrea plicatula Gmelin in an eastern coastal bay of China[J]. Aquaculture, 2006, 261: [16] Cao F J, Liu Y, Zhang C F, et al. Studies on the sex gonad development and reproductive cycle of Lutraria sieboldii[j]. Oceanologia et Limnologia Sinica, 2012, 43(5): [ 曹伏君, 刘永, 张春芳, 等. 施氏獭蛤 (Lutraria sieboldii) 性腺发育和生殖周期的研究 [J]. 海洋与湖沼, 2012, 43(5): ] [17] Serpil S, Aynur L. Gametogenic cycle and biochemical composition of the transplanted carpet shell clam Tapes decussatus, Linnaeus 1758 in Sufa (Homa) Lagoon, Izmir, Turkey[J]. Aquaculture, 2009, 293: [18] Ning J H, Chang Y Q, Song J, et al. Gonadal development and the reproductive cycle of Modiolus modiolus[j]. Journal of Fishery Sciences of China, 2015, 22(3): [ 宁军号, 常亚青, 宋坚, 等. 偏顶蛤的性腺发育和生殖周期 [J]. 中国水产科学, 2015, 22(3): ] [19] Ke Q Z, Li Q, Chen C J, et al. The reproductive biology of the venus clam, Cyclina sinensis Gmelin, from the Yellow River delta[j]. Periodical of Ocean University of China, 2010, 40(Suppl.): [ 柯巧珍, 李琪, 陈常杰, 等. 黄河三角洲青蛤的繁殖生物学研究 [J]. 中国海洋大学学报, 2010, 40( 增刊 ): ] [20] Ruan F T, Gao S, Li L, et al. Gonad development and biochemical composition in the ark shell Scapharca broughtonii from coast of Shandong Peninsula[J]. Journal of Fisheries of China, 2014, 38(1): [ 阮飞腾, 高森, 李莉, 等. 山东沿海魁蚶繁殖周期与生化成分的周年变化 [J]. 水产学报, 2014, 38(1): ] [21] Shin Y K, Park J J, Choi J S, et al. Indirect evidence on sex reversal of Sinonovacula constricta (Bivalvia: Euheterodonta) and Gomphina veneriformis (Bivalvia: Veneridae)[J]. Dev

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Microsoft Word 宁军号_new_.doc 2015 5, 22(3): 469 477 Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: 10.3724/SP.J.1118.2015.14423 1, 宁军号 2 1,, 常亚青 2 1,, 宋坚 2 1,, 胡盼 2 1, 2, 经晨晨 1., 116023; 2., 116023 摘要 :, 2013 10 2014 9, (Modiolus