Detection of Pharmaceuticals, Personal Care

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1 APCI-LC-MS/MS 进行水资源中医药品 个人护理品和农药的检测 简介 : 医药品 (PhACs) 个人护理品(PCPs) 内分泌干扰素(EDCs) 和杀虫剂对环境存在潜在的危害, 因此, 饮用水和地表水中有关该类物质的含量检测越来越受到全球的关注 而此类物质通过人体和动物尿液, 以及其他不合适的排放途径, 使其在地表水中广泛存在, 并进一步污染饮用水, 对人类的健康造成潜在的威胁 于是, 人们对水处理仪器设备提出了更高的要求 对加拿大和其他一些地方进行调查发现 : 前面所提到的这些有机废水污染物 (OWCs) 当前主要分布在污水处理厂 (STP) 附近 而且, 在安大略湖 魁北克这些污水处理厂的排放口附近, 也可以检测该类物质 然而, 此类物质是通过在地表水中广泛分布而污染饮用水还是仅仅分布在污水处理厂排污口附近几米范围以内, 目前还没有研究的很清楚 蒙特利尔大学化学学院和土木 地质 矿业工程学院共同承担了一项研究项目, 主要目标是 : 从蒙特利尔地区饮用水中检出医药品 (PhACs), 个人护理品 (PCPs), 内分泌干扰素 (EDCs) 并对之定量, 从而确定地表水是否是饮用水污染的主要源头 该研究对进一步决定采用哪种水处理方法 ( 如臭氧化技术和吸附工艺 ) 是非常关键的 该研究数据的建立是非常困难的, 原因有如下几点 :(1) 由于富集化合物具有化学多样性, 且数量之庞大 (2) 分析样品中被分析物的含量较低, 需要进行痕量分析 (3) 复杂的样品浓缩技术 针对以上问题, 研究工作者通常使用固相萃取的方法 (SPE) 进行样品浓缩, 同时可以去除本底 样品通过 SPE 提取之后, 可以使用几种不同的分析方法进行检测, 如 GC-MS/MS, 又或是最近报道的 LC-MS/MS 但是, 分析过程中仍然存在一个问题, 那就是有机化合物具有不同理化特性且具有较广的极性范围, 要使用一种方法同时对各种化合物进行样品浓缩 色谱分离和定性是非常困难的 但对环境监测过程来说, 能够一次从样品中对多种理化或是其他性质不同的污染物进行检测分析是非常有用的 然而, 截至目前, 研究工作者经常是将多种分析方法组建在一起进行多范围痕量物质的分析 但这样会大大增加分析的成本, 包括仪器设备 人力和时间的投入 研究目标 : 为了开发一种简单方法, 使用固相萃取 (SPE) 和 LC-MS/MS 可以一次实现分析样本中医药品 农药 个人护理品的痕量分析 进一步确定蒙特利尔地区水资源中的污染成份, 并了解水资源中各种污染物存在的量 材料方法 :

2 1 分析物的选择加拿大有机废水 (OWCs) 中普遍存在的一系列物质 ( 物质名称已经在图 1 中被详细列出 ) 2 样品收集在相同时间从 Mille Iles, des Prairies, and St-Laurent rivers 分别取水样, 收集的水样是未净化水, 是在水样处理之前收集的 所取得水样存放在四升玻璃瓶中, 置实验室储存备用 从采样地到实验室的运输过程及后续实验室存放都是在零度 所取的这些水样分布比较广泛, 既有污染废水, 又有下水道排出物 所有采取的水样为了长期保存, 需先经硫酸酸化, 然后 4 C 黑暗储存 样品分析前, 分别经 0.7 μm 玻璃纤维和 0.45 μm 纤维素膜过滤 (Millipore, MA, USA) 被分析物在样品采集 24 小时内被提取 3 样品的浓缩提取方法固相萃取 (SPE) 操作流程请见图 2 其中, 被分析物首先通过 200 mg C18 分析介质, 目标物质被吸附在介质上,3 ml 甲基叔丁基醚甲醇溶液 ( 甲基叔丁基醚 : 甲醇 = 90:10) 和 3 ml 甲醇进行洗脱, 目标洗脱液被收集在锥形离心管中, 氮气 (N2) 吹干 干粉溶解在 200 μl 90% 水溶液中 ( 含 0.1% 乙酸 5% 甲醇并添加内标 ) 4 LC-MS/MS 方法 HPLC 是 Thermo Scientific Surveyor HPLC 系统, 分离条件见表 1 被分析物的检查和定量是由 Thermo Scientific TSQ Quantum Ultra 三级四极杆质谱仪完成, 使用了选择反应监测 (SRM) 模式 ( 详细参数请见表 2) 在早期相关研究实验中, 人们是用两种 API 源 ( 大气压电离 ) 进行所有化合物的检测, 即电喷雾 (ESI) 和 APCI( 大气压化学电离 ) 虽然 ESI 源相对其他离子源对一些化合物表现出了稍高的强度 ( 如阿特拉津 ),APCI 离子源对类固醇有较高的灵敏度 在所有要求被检测的这些化合物中, 内分泌干扰素 (EDCs) 具有很低的检测极限 (1ng/L), 因此物质的检测方法要求更加严格 众所周知, 这些物质低浓度下都会对生物体产生影响 如果我们开发的这种方法最主要的要求是检测范围尽可能广, 那么推荐选择 APCI 离子源 以牺牲一些极易检测化合物的检测灵敏度来换取一些 ESI 离子源检测不到的化合物的检测灵敏度 而且, 众所周知, APCI 离子源相比 ESI 10 在许多情况下更不容易受到基质的干扰 最后, 一些研究结果也已经证实了 ESI-LC-MS/MS11 在水样品中各种有机污染物检测分析中受到了信号抑制 LC 进行被分析物的鉴定, 保留时间 仪器控制 数据获得都是由 Thermo Scientific Xcalibur 软件实现

3 个人护理品 激素 咖啡因 (CAF) MW:194.19,pKa=10.4 兴奋剂三氯二苯脲 (TCC) MW: 杀菌剂 医药品 雌激素酮 MW:270.4 雌激素雌激素三醇 MW:288.4 雌激素 立痛定 (CBZ) 雌二醇 MW:236.27,pKa=13.9 MW: 抗痉挛药物 雌激素 降固醇酸 孕酮 MW: MW: 降血脂药 萘普生 (NAPRO) 孕激素 17-α 炔雌醇 MW:230.26,pKa=4.15 MW: 止痛剂 二甲苯氧庚酸 (GEM) 合成雌激素 MW: 农药 抗固醇类药 水杨酸 阿特拉津 (ATRA) MW: MW: ,pKa =1.7, 阿司匹林代谢物 除草剂 三甲氧苄二氨嘧啶 (TRI) MW:290.30,pKa=7.12 抗感染药物 图 1 加拿大有机废水中普遍存在污染物的相关信息

4 表 1 HPLC 和 MS 相关分离条件 HPLC MS 色谱柱 : Thermo Scientific Hypersil GOLD mm,3µm 离子化模式 : APCI + APCI - 色谱柱温度 : 30 电流 : 3µA 4µA 流动相 A: 水 (0.1% 甲酸 ) 气化室温度 : 流动相 B: 甲醇 毛细管温度 : 进样体积 : 20 µl 外壳气压 : 40 arb 30 arb 流速 : 500 µl/min 辅助气压 : 20 arb 15 arb T=0, A=90%, B=10% 碰撞气压 : 1.5mTorr 1.5mTorr T=1, A=90%, B=10% CID 源 : -10V 15V 梯度 : T=15, A=1 %, B=99% T=16.5, A=1%, B=99% T=17, A=90%, B=10% T=22, A=90%, B=10% 表 2 APCI - 离子源进行各种物质分析时的 SRM 相关参数 被分析物 母离子 (m/z) 子离子 (m/z) 碰撞能量 (V) 管透镜电压 (V) 三甲氧苄二氨嘧啶 咖啡因 雌激素三醇 立痛定 阿特拉津 萘普生 α 炔雌醇 雌二醇 雌激素酮 孕酮 三氯二苯脲 二甲苯氧庚酸 水杨酸 降固醇酸

5 图 2 固相萃取 (SPE) 方法流程 结果讨论 : 所有的被分析物进行重复试验, 计算结果所得 : 相对偏差 (%RSD) 范围为 3%~ 11%, 结果是非常不错的 添加基质进行回收率试验, 结果表明, 本实验回收率为 72%~94%, 回收率较好 从以上结果可知, 该分析方法性能较好, 符合检测要求 ( 详情请见表 3) 在开发 LC-MS/MS 方法条件时, 本底效应是非常重要的, 它会影响到方法的重现性和精确性 通过比较 Milli-Q 水和地表水 (Mille Iles River) 添加基质 50 ng/l (n = 6) 时的回收率进行该方面影响的评价和证实 地表水样本中除了阿特拉津和三氯二苯脲 (TCC) 信号抑制有增强, 分别为 6% 和 2%, 其余被分析物的信号抑制变化范围为 1%~13%, 显示其本底效应是非常小的 ( 详情请见图 3) 地表水样本分析中, 添加基质的浓度范围从 LOD( 检测线 ) 以下到 100 ng/l 都有好的线性关系, 其相关系数都大于 0.99 地表水的方法检测限可达到 0.3~2 ng/l ( 详情请见表 3)

6 表 3 自来水中各种被分析物的保留时间 检测限 相对偏差 (RSD) 和回收率 被分析物 保留时间 (min) LOD * (ng/l) R2 ** *** 回收率 (%) RSD(%) 三甲氧苄二氨嘧啶 咖啡因 雌激素三醇 立痛定 阿特拉津 萘普生 α 炔雌醇 雌二醇 雌激素酮 孕酮 TCC 二甲苯氧庚酸 水杨酸 降固醇酸 注 : *LOD( 检测限 )Mille Iles River 地表水样的检测限 R2 ** 为河水样品中被分析物浓度范围 ng/l 标准曲线的方差 *** 回收率代表地表水中添加基质浓度为 50 ng/l,n = 6 时该方法总回收率 图 3 Milli-Q 水和地表水 (Mille Iles River)C18 色谱柱提取方法的平均回收率 ( 添加基质为 50ng/L,n=6)) 对所采取的各种地表水中一些相关被分析物进行了分析研究, 图 4 给出了 Mille Iles River 所取水样中各种被分析物代表性的 LC-MS/MS 色谱图 (SRM 模式 ) 图 5 是不同水样中被分析物的分析结果 从图 5 a b 两图可以看出, 不同地区所取水样中被分析物的含量是不同的 其中, 咖

7 啡因 阿特拉津 水杨酸 二甲苯氧庚酸检测到的最高含量分别为 ng/l ng/l ng/l 4-14 ng/l 立痛定被测定到的最低浓度为 3-5 ng/l, 其余降固醇酸 两种激素 ( 孕酮和雌二醇 ) 三甲氧苄二氨嘧啶 三氯二苯脲和其他一些被检测的激素都在痕量水平 总之, 加拿大和欧洲其他地区水样中大多数被分析物的含量和以上结果具有相似性 图 4 Mille Iles River 所取水样中各种被分析物代表性的 LC-MS/MS 色谱图 (SRM 模式,* 表示干扰峰 ) 结论 : 图 5 三种不同水样的分析结果 (a 代表最高平均浓度的被分析物,b 代表最低平均浓度的被分析物 ) 本研究成功开发了一种 APCI-LC-MS/MS 方法, 可以同时对地表水中几种不同类别的一系列物

8 质进行定量, 如医药品 农药 个人护理品 检测浓度可以在单位为 ng/l 较低的数值, 而且该 检测方法具有很好的精确性和准确性 结果发现, 在蒙特利尔地区所有水资源中都有医药品 个人护理品和内分泌干扰素的存在 而且, 被分析物的含量会因所取水样的来源不同而变化, 如污染废水和下水道排出物中所检测到的结果是不同的 参考文献 : 1. T. A. Ternes and A. Joss, Eds., Human Pharmaceuticals, Hormones and Fragrances: The Challenge of Micropollutants in Urban Water Management, IWA, 2006, p A. Kortenkamp, Env. Health Perspective, 2007, pp C. Hao, L. Lissemore, B. Nguyen, S. Kleywegt, P. Yang, K. Solomon, Anal. Bioanal. Chem., 2006, 384, C. D. Metcalfe, X-S Mia, W. Hua, R. Letcher, M. Servos, Pharmaceuticals in the Canadian Environment. In Pharmaceuticals in the Environment: Sources, Fate, Effects and Risks, second edition; K. Kummerer, Ed.; Springer- Verlag, 2004, F. Gagnè, C. Blaise, C. Andrè, Ecotoxicology and Environmental Safety 2006, 64, P. A. Segura, A. Garcia-Ac, A. Lajeunesse, D. Ghosh, C. Gagnon and S. Sauvè, J. Environ. Monitor., 2007, 9, R. A. Trenholm, B. J. Vanderford, J. C. Holady, D. J. Rexing and S. A. Snyder, Chemosphere, 2006, 65(11), C. Zwiener and F. H. Frimmel, Anal. Bioanal. Chem, 2004, 378, T. A. Ternes, Trends Anal. Chem., 2001, 20(8), S. Souverain, S. Rudaz, J-L. Venthey, J. Chrom. A, 2004, 1058,

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