Novel RNA-based in situ hybridization for detection of Senecavirus A in pigs

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1 Back to the future Diagnostic considerations in a growth promoters-free industry 回到未来 不用生长促进剂的养殖业的兽医诊断 Fabio Vannucci ( 法比奥. 万努奇 )

2 Outline Overview 概要 History 历史 EU experiences 欧盟经验 o Disease incidence 发病率 USA scenario 美国情况 o Diagnostics 诊断 USA and EU: compare/contrast 美国和欧盟 : 对比 / 比较 Considerations for future scenarios 将来的注意事项

3 History Overview 历史 Use of antimicrobial growth promoter (AGP) 抗菌生长促进剂 (AGP) 的使用 - Late 1940s: Chickens fed with fermentation waste from tetracycline production as a source of vit B12 20 世纪 40 年代后期 : 鸡饲喂生产四环素发酵废弃物作为维生素 B12 的来源 - Better growth performance due to residual tetracycline: Animal protein factor 由于残留四环素 动物蛋白因子, 产生更好的生长成绩 - Early 1950 (Cunha et al, Luecke et al): 20 世纪 50 年代早期 o The effect of vitamin B12, animal protein factor and streptomycin on the growth of young pigs 维生素 B12 动物蛋白因子和链霉素对仔猪的生长产生影响

4 History Overview 历史 Use of antimicrobial growth promoter and antimicrobial resistance 使用抗菌促生产剂和耐药性 - Mid 1960 (UK): Multi-drug-resistant salmonella 60 年代 ( 英国 ): 多重耐药性沙门氏菌 - Sufficient sound basis for action 采取行动的充分可靠依据 - Recommendations for using on animal feed: 饲料中使用抗生素的建议 o Little or none application for therapeutic purposes in human or animals 在人和动物上少用或不用治疗用抗生素 o Not impair the efficacy of a prescribed therapeutic drugs through development of resistance 通过耐药性的形成, 但不破坏处方治疗药物的疗效 o Tylosin should be available only for therapeutic purposes 泰乐菌素应该只提供给治疗用 - Inaction (UK and other EU countries): tylosin, spiramycin, avoparcin 无行动 ( 英国和其他欧盟国家 ): 泰乐菌素 螺旋霉素 阿伏霉素... - Action (Sweden): consumers Federation of Swedish Farmers ban in 1986 行动 ( 瑞典 ): 消费者 瑞典农民联合会 1986 年禁止

5 Overview History 历史 Use of antimicrobial growth promoter and antimicrobial resistance 使用抗菌促生长剂和耐药性 - Vancomycin (glycopeptide antimicrobial): discovered early 1960s 万古霉素 ( 糖肽类抗生素 ): 发现 20 世纪 60 年代初 o 1980s: widely used in humans for treatment of resistant Gram positive bacteria 80 年代广泛应用用于治疗人的耐药革兰氏阳性菌 o 1993: Vancomycin resistant enterococci isolated from humans and animals (Bates et al 1993) 1993 年从人和动物分离出耐万古霉素肠球菌 Not been used in food animal 食品动物中没有使用 o Cross-resistance with Avoparcin: commonly used for growth promotion in food animal 与阿伏霉素有交叉耐药 : 常用于食品动物促生长 EU banned in 1997 欧盟 1997 明禁用 - AGP termination 动物生长促进剂 (AGP) 停用时间 Sweden 瑞典 : 1986 Norway 挪威 : 1995 Switzerland 瑞士 : 1999 Finland 芬兰 : 1999 Denmark 丹麦 : 2000 EU 欧盟 : 2006

6 European Overview experiences: disease incidence 欧洲经验 : 发病率 How to measure disease incidence (before/after AGP ban)? 如何测量发病率 (AGP 禁用前后 ) - Production data: mortality, ADG, Feed conversion 生产数据 : 死亡率 \ 平均日增重 \ 饲料转化 - Diagnostic data (lab accessions) 诊断数据 ( 实验室病例 ) o High specificity but questionable sensitivity 高特异性, 但敏感性有问题 o Confounders - emerging disease, surveillance, detection vs disease 混杂因素 - 新出现疾病, 监测, 检测 VS 疾病 - Indirect method for occurrence of disease 疾病发生的间接方法 o Antimicrobial usage ONLY for therapeutic or preventive purposes (assumption after AGP ban) 假设禁用 AGP 后, 抗生素仅用在治疗或预防上 o Recording antimicrobial usage for a given clinical syndrome 记录针对指定临床综合征使用的抗生素

7 平均日增亡率European Overview experiences: disease incidence 欧洲经验 : 发病率 How to measure disease incidence (before/after AGP ban)? 如何测量发病率 (AGP 禁用前后 ) - Production data: mortality, ADG, Feed conversion 生产数据 : 平均日增重, 平均日增重, 饲料转化率 Denmark 丹麦 断奶猪禁用促生长剂 重死时间 ( 年 )

8 European Overview experiences: disease incidence 欧洲经验 : 发病率 How to measure disease incidence (before/after AGP ban)? 如何测量发病率 (AGP 禁用前后 ) - Overall trends on antimicrobial consumption (therapeutic use) 抗生素使用 ( 治疗用 ) 的总体趋势 Sweden 瑞典 Norway 挪威

9 Overview European experiences: disease incidence 欧洲经验 : 发病率 How to measure disease incidence (before/after AGP ban)? 如何评估发病率 (AGP 禁用前后 ) - Overall trends on antimicrobial consumption (therapeutic use) 抗生素使用 ( 治疗用 ) 的总体趋势 Denmark 丹麦 Netherlands 荷兰

10 European Overview experiences: disease incidence 欧洲经验 : 发病率 How to measure disease incidence (before/after AGP ban)? 如何评估发病率 (AGP 禁用前后 ) - Age groups 年龄组 Sweden (1986) first 4 years after 瑞典 (1986 年 ) 禁用 AGP 后的头 4 年 o Increase post-weaning diarrhea (> 1.5% mortality) 增加断奶后腹泻 (>1.5% 死亡率 ) o 5-6 more days to reach 25 kg 达 25Kg 体重增加 5-6 天 o 1.5% feed efficiency in finishers 育肥阶段饲料转化率 1.5% 母猪和仔猪育肥猪 断奶仔猪总体, 校正后

11 Overview European experiences: disease incidence 欧洲经验 : 发病率 How to measure disease incidence (before/after AGP ban)? 如何评估发病率 (AGP 禁用前后 ) - Antimicrobial classes (Denmark) 抗生素分类 ( 丹麦 )

12 European Overview experiences: disease incidence 欧洲经验 : 发病率 How to measure disease incidence (before/after AGP ban)? 如何评估发病率 (AGP 禁用前后 ) - Antimicrobial classes (Netherlands) 抗生素分类 ( 荷兰 ) Switzerland 瑞士

13 European Overview experiences: disease incidence 欧洲经验 : 发病率 治疗比例 How to measure disease incidence (before/after AGP ban)? 如何评估发病率 (AGP 禁用前后 ) - Clinical signs, age group, # days and animals treated 临床症状 \ 年龄组, 动物治疗和天数 腹泻 消瘦 关节炎 肺炎 其他疾病 月 : 相对于不用 AGP

14 European Overview experience: disease incidence 欧洲经验 : 发病率 Enteric pathogens after AGP ban 禁用 AGP 后的肠道病原 o Significant increase in diarrhea (nursery) 保育腹泻明显增加 - Post-weaning diarrhea: β-hemolytic E. coli 断奶后腹泻 : β 溶血大肠杆菌 - Spirochetal colitis (Brachyspira pilosicoli) 螺旋体结肠炎 ( 多毛结肠短螺旋体 ) - Clinical ileitis (Lawsonia intracellularis) 临床回肠炎 ( 胞内罗松菌 ) g ADG 平均日增重 g ~ 7 additional days from weaning to 30Kg 断奶至 30K 多 7 天 Weber et al (2016), 24 th IPVS 上 Neonatal 亲生 Nursery 保育 Finishing 育肥 1 days 5 days 2 weeks 3 weeks 5 weeks 10 weeks 28 weeks Adult Escherichia coli 大肠杆菌 Brachyspiral colitis 螺旋体结肠炎 Lawsonia intracellularis 胞内罗松菌

15 USA Overview Scenario: Diagnostics 美国情况 : 诊断 Autolysis 自溶 Non-autolysis 非自溶

16 USA Overview Scenario: Diagnostics 美国情况 : 诊断 Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) 肠毒大肠杆菌 o Post-weaning diarrhea: β-hemolytic E. coli 断奶后腹泻 : β 溶血大肠杆菌 β- 溶血 o High morbidity and variable mortality 高发病率和死亡率差异大 o Virulence 毒力 - Fimbria (F18, F4) + Enterotoxins (LT, STa, STb, EAST1, Stx2e, AIDA) 纤毛 (F18,F4)+ 肠毒素 (LT, STa, STb, EAST1, Stx2e) - Stx2e: Sudden death (CNS signs may be present) 突然死亡 ( 中枢神经症状可能会出现 ) α- 溶血 γ- 溶血

17 Overview USA Scenario: Diagnostics 美国情况 : 诊断 Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) 肠毒大肠杆菌

18 USA Overview Scenario: Diagnostics 美国情况 : 诊断 UMN-VDL: Enterotoxigenic E. coli (n=2206) 明大 - 兽医诊断实验室 - 肠毒大肠杆菌 (2206 例 ) Others (F41, F5, F6) Neg F4.LT.STa.STb F4. STa.STb F4.LT F4 F18 F18.STX2e F18.LT F4.STb F4.STa Weber et al (2016), 24 th IPVS F18.STb

19 USA Overview Scenario: Diagnostics 美国情况 : 诊断 UMN-VDL: Antimicrobial susceptibility ( ) 抗生素敏感性 β-hemolytic E. coli β- 溶血大肠杆菌 Oxytetracycline 土霉素 Chlortetracycline 金霉素 Tiamulin 泰妙灵 Ampicillin 氨苄青霉素 Sulpha 磺胺 Florfenicol 氟苯尼考 Neomycin 新霉素 Gentamicin 庆大霉素 Trimethoprim/SulphaTMP/ 磺胺 Enrofloxacin 恩诺沙星

20 USA Overview Scenario: Diagnostics 美国情况 : 诊断 Brachyspiral colitis 短螺旋属结肠炎 Strongly 强 β- 溶血 β-hemolytic 种类主要宿主主要疾病 弱 β- 溶血 Weakly β-hemolytic B. suanatina Swine Swine dysentery-like B. hampsonii Swine Swine dysentery-like

21 USA Overview Scenario: Diagnostics 美国情况 : 诊断 UMN-VDL: B. pilosicoli isolation ( ) 多毛结肠短螺旋体的分离 9 8 Number of B. pilosicoli

22 Overview USA Scenario: Diagnostics 美国情况 : 诊断 UMN-VDL: Antimicrobial susceptibility ( ) 抗生素敏感性 卡巴氧沃尼妙林泰妙灵强力霉素林可霉素 泰乐菌素

23 USA Overview Scenario: Diagnostics 美国情况 : 诊断 Sweden: Antimicrobial susceptibility (AGP free scenario) 瑞典 : 抗生素敏感性 ( 无 AGP 情况 )

24 USA Overview Scenario: Diagnostics 美国情况 : 诊断 Proliferative enteropathy (ileitis): Lawsonia intracellularis 增生性肠炎 ( 回肠炎 ): 胞内罗松菌 o Endemically distributed worldwide 流行分布于全世界 o Classically affected growing-finishing pigs 常见于生长育肥猪爱影响 o Clinical presentation (Acute/Chronic/Subclinical) 临床表明 ( 急性 / 慢性 / 亚临床 ) Fecal PCR 粪便 PCR Weeks 周 Serology 血清学 Weeks 周

25 USA Overview Scenario: Diagnostics 美国情况 : 诊断 Proliferative enteropathy (ileitis): Lawsonia intracellularis 增生性肠炎 ( 回肠炎 ): 胞内罗松菌 o Clinical/subclinical PCR threshold to justify the treatment (?) 临床 / 亚临床 PCR 检测来证实处理 (?) - One Log 10 increase in LI load increases OR for a pig to have a low growth rate by 2 times Log 10 Lawsonia intracellularis bacteria/g feces 1.00E E E E E E E E E E E+00 UMN-VDL Ct value Ct 值

26 USA Overview Scenario: Diagnostics 美国情形 : 诊断 Ct value UMN-VDL: Lawsonia intracellularis PCR detection (n=3577) 42 明大 - 兽医诊断实验室 : 胞内罗松菌的 PCR 检测 (3577 例 ) /3/2013 4/21/ /7/2014 5/26/ /12/2015 6/29/ % 25% 41%

27 USA Overview Scenario: Diagnostics 美国情形 : 诊断 UMN-VDL: Antimicrobial susceptibility 抗生素敏感性

28 USA Overview and EU: compare/contrast 美国和欧洲 : 比较 / 对比 Increasing of enteric bacterial infection (not much respiratory) 肠道细菌感染增加 ( 呼吸道菌增加不多 ) o Porcine Respiratory Disease Complex (PRDC) 猪呼吸首综合征 - Success controlling primary triggers vaccination, elimination 成功控制的 主要手段 -- 免疫, 净化 o Porcine Enteric Disease Complex (PEDC) What the heck? 猪肠道疾病综合征 -- 到底怎么回事 - Enteric bacteria as primary cause 肠道细菌是主要的原因 - Synergism: Rotavirus Clostridium perfringens, E.coli (?) 协同 : 轮状病毒 - 产气荚膜梭菌, 大肠杆菌 (?) o Microbiome complexity 微生物的复杂性

29 USA Overview and EU: compare/contrast 美国和欧洲 : 比较 / 对比 Scale matters 规模方面 Systematic approach to measure disease incidence 系统方法评估发病率 Management/alternative strategies 管理 / 备选策略 Europe 欧洲 United States 美国 Weaning age 断奶日龄 days 21 days PRRS status 蓝耳状况 Neg (some countries) 阴 Pos 阳 Pig/farm density 猪 / 场密度 Low/variable 低 / 差异大 High 高 Lawsonia vaccine usage 罗松菌疫苗使用情况 Low 低 Widely used 使用广 Carbadox 卡巴氧 Banned 禁止 Widely used* 使用广 Zinc oxide 氧化锌 Partial restrictions 部分地 Widely used 使用广方限用

30 Outline Considerations for future scenarios 将来的注意要点 AGP ban (EU) 禁用 AGP( 欧盟 ) Enteric bacterial pathogens (diarrhea): When to act (?) 肠道细菌病原 ( 腹泻 ): 什么时候开始采取措施 (?) Lawsonia PCR positive: how much to justify treatment (?) and for how long (?) 罗松菌 PCR 阳性 : 多少 需要确认治疗 (?) 和治疗多久 (?) Beta-hemolytic E coli with virulence factor + diarrhea β- 溶血大肠杆菌带有毒力 因子引起腹泻 Followed by additional regulation Long term benefits 接着是更多的监管 长期受益 Denmark (Yellow card regulations) 丹麦 ( 黄牌规章制度 ) Germany (DART, German Antibiotic Resistance Strategy) 德国 (DART, 德国耐药性策略 ) Netherlands (Netherlands Veterinary Medicines Authority - SDa) 荷兰 ( 荷兰兽药管理局 -SDa)

31 Outline Considerations on future scenarios 将来的注意要点 Talking about additional regulation 谈论更多的监管...

32 Aknowledgements Acknowledgements 致谢 Dr. Peter Davies Dr. Connie Gebhart Dr. Julio Alvarez 2014 Regents of the University of Minnesota. All rights reserved. The University of Minnesota is an equal opportunity educator and employer. Fabio Vannucci

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